DE4344211A1 - Method for increasing the activity of hydrolytic enzymes - Google Patents
Method for increasing the activity of hydrolytic enzymesInfo
- Publication number
- DE4344211A1 DE4344211A1 DE19934344211 DE4344211A DE4344211A1 DE 4344211 A1 DE4344211 A1 DE 4344211A1 DE 19934344211 DE19934344211 DE 19934344211 DE 4344211 A DE4344211 A DE 4344211A DE 4344211 A1 DE4344211 A1 DE 4344211A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- enzyme
- activity
- organic solvents
- lipase
- hydrolytic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
Description
Die vorliegende Erfindung beschreibt ein Verfahren zur Erhöhung der Aktivität von hydrolytischen Enzymen in organischen Lösungs mitteln.The present invention describes a method for increasing the activity of hydrolytic enzymes in organic solution convey.
Enzymkatalysierte Reaktionen in organischen Lösungsmitteln haben sich in den letzten Jahren zu einer Standardmethode der organi schen Synthese entwickelt (K. Faber, Biotransformations in Organic Chemistry, Springer Verlag, 1992). Verglichen mit den Reaktionen in wäßrigen Lösung bietet der Einsatz organischer Lösungsmittel einige Vorteile wie erhöhte Enzymstabilität, verän derte Enzymselektivität, gute Substratlöslichkeit, leichte Ab trennbarkeit des unlöslichen Enzyms oder Verschiebung von Reak tionsgleichgewichten.Have enzyme-catalyzed reactions in organic solvents has become a standard method of organization in recent years developed synthesis (K. Faber, Biotransformations in Organic Chemistry, Springer Verlag, 1992). Compared with the Reactions in aqueous solution offers the use of organic Solvent some advantages such as increased enzyme stability, verän derte enzyme selectivity, good substrate solubility, slight Ab separability of the insoluble enzyme or shift of reac tion equilibria.
Ein bedeutender Nachteil beim Einsatz von Enzymen in organischen Lösungsmitteln ist, daß das Enzym eine um Größenordnungen gerin gere Aktivität als in wäßriger Umgebung aufweist.A major disadvantage in the use of enzymes in organic Solvents is that the enzyme is one order of magnitude has more activity than in aqueous environment.
Monot et al. (Appl. Mirobiol. Biotechnol. 39, 483, 1993) berich ten, daß sich die Aktivität einer Lipase in organischen Lösungs mitteln steigern läßt, wenn man zu einer Lösung der Lipase in Wasser das entsprechende Substrats zusetzt und die Lösung an schließend gefriertrocknet.Monot et al. (Appl. Mirobiol, Biotechnol., 39, 483, 1993) that the activity of a lipase in organic solution means to increase, if one to a solution of lipase in Water adds the appropriate substrate and the solution then freeze-dried.
Dabulis und Klibanov (Biotechnology and Bioengineering 41,566-571, 1993) beschreiben die Erhöhung der Aktivität von Enzymen in organischen Lösungsmitteln durch Zusatz sogenannter Lyoprotectanten zur Lösung des Enzyms in Wasser vor der Gefrier trocknung. Als Lyoprotectanten werden N-Actetyl-phenylalaninamid, Sorbitol, Zucker sowie Polyethylenglykol genannt.Dabulis and Klibanov (Biotechnology and Bioengineering 41, 565-571, 1993) describe the increase in the activity of Enzymes in organic solvents by addition of so-called Lyoprotectants to dissolve the enzyme in water before freezing drying. As lycoprotectants are N-acetyl-phenylalaninamide, Sorbitol, called sugar and polyethylene glycol.
Akita et al. (Chem. Pharm. Bull. 41, 12-20, 1993 sowie dort zitierte ältere Arbeiten) beschreiben die Herstellung, Struktur und Verwendung von Phospholipid-Lipase Aggregaten. Das Phospholi pid-Lipase Aggregat wird hergestellt durch Zusatz eines Phospho lipids zu einer Lipaselösung in Wasser und anschließende Aufar beitung einschließlich Lyophilisation. Sowohl bei einer enantio selektiven Hydrolyse eines Esters als auch bei der enantioselek tiven Acylierung eines Alkohols ist die durch Phospholipid-Lipase Aggregate katalysierte Reaktion maximal um den Faktor 2 schneller gegenüber der durch unbehandelte Lipase katalysierten Reaktion. Akita et al. (Chem. Pharm. Bull. 41, 12-20, 1993 and there cited older works) describe the preparation, structure and use of phospholipid-lipase aggregates. The phospholi pid-lipase aggregate is prepared by adding a phospho lipids to a lipase solution in water and subsequent Aufar processing including lyophilization. Both at an enantio selective hydrolysis of an ester as well as in the enantioselek Active acylation of an alcohol is by phospholipid lipase Aggregates catalyzed reaction a maximum of a factor of 2 faster towards the reaction catalyzed by untreated lipase.
Da diese Reaktionen mit einem Enzym- zu Substratgewichtsverhält nis von 1 : 1 (Reaktionszeit 3 Tage bei 33°C) durchgeführt werden, sind sie für einen Prozeß im technischen Maßstab völlig ungeeig net.Because these reactions behave with an enzyme to substrate weight 1: 1 (reaction time 3 days at 33 ° C), they are completely unsuitable for a process on an industrial scale net.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, ein Verfahren zur Erhöhung der Aktivität von hydrolytischen Enzymen in organischen Lösungsmitteln bereitzustellen.Object of the present invention was to provide a method for Increasing the activity of hydrolytic enzymes in organic To provide solvents.
Demgemäß wurde gefunden, daß sich die Aktivität von hydrolyti schen Enzymen in organischen Lösungsmitteln dadurch steigern läßt, daß das in wäßrigem Medium gelöste hydrolytische Enzym mit einer oberflächenaktiven Substanz, die nicht aus einem Phospholi pid besteht, vermischt wird, die erhaltene Mischung anschließend entwässert wird und das so erhaltene Enzypräparat als Katalysa tor in organischen Lösungsmitteln eingesetzt wird.Accordingly, it has been found that the activity of hydrolyti thereby increasing enzymes in organic solvents allows that dissolved in aqueous medium hydrolytic enzyme with a surfactant that is not a phospholipid pid is mixed, the resulting mixture then is dehydrated and the resulting Enzypräparat as cata- is used in organic solvents.
Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich für alle hydrolyti schen Enzyme (Hydrolasen), insbesondere für Proteasen und Esterasen (Lipasen). Besonders geeignet sind bakterielle Lipasen, beispielsweise solche aus Pseudomonaden.The inventive method is suitable for all hydrolyti enzymes (hydrolases), in particular for proteases and Esterases (lipases). Particularly suitable are bacterial lipases, for example, those from pseudomonads.
Als oberflächenaktive Substanz können für das erfindungsgemäße Verfahren solche Verbindungen eingesetzt werden, die in einer Flüssigkeit gelöst oder dispergiert, an einer Grenzfläche bevor zugt adsorbiert werden. Solche Moleküle besitzen wenigstens eine Gruppe mit Affinität zu Substanzen starker Polarität - wodurch im allgemeinen die Löslichkeit in Wasser verursacht wird - und eine weitere Gruppe mit geringerer Affinität zu Wasser.As surface-active substance for the inventive Process such compounds are used in a Liquid dissolved or dispersed, at an interface before be adsorbed to. Such molecules have at least one Group with affinity for substances of strong polarity - which causes im Generally the solubility in water is caused - and one another group with less affinity for water.
Solche oberflächenaktiven Substanzen sind dem Fachmann auch unter der Bezeichnung Tenside bekannt und sind beispielsweise in DIN 53900 definiert.Such surface-active substances are also known to the person skilled in the art the name surfactants known and are for example in DIN 53900 defined.
Geeignete oberflächenaktive Substanzen sind anionische Tenside wie Alkyl- oder Alkylarylcarboxylate, -sulfonate, insbesondere Alkylbenzolsulfonate, -sulfate, insbesondere Ethersulfate und Fettalkohol(ether)sulfate, kationische Tenside wie geradkettige oder cyclische Ammoniumverbindungen, nichtionische Tenside wie Polyether, insbesondere Alkylphenolpolyglykolether, Produkte der Ethoxylierung von Fettsäuren, Fettaminen, Fettsäureamiden und Fettalkoholen, ferner Aminoxide und Fettsäureester von Poly alkoholen, ampholytische Tenside, die als Zwitterionen anionen aktive und kationenaktive hydrophile Gruppen in sich vereinigen. Suitable surface-active substances are anionic surfactants such as alkyl or alkylaryl carboxylates, sulfonates, in particular Alkylbenzenesulfonates, sulfates, especially ether sulfates and Fatty alcohol (ether) sulfate, cationic surfactants such as straight chain or cyclic ammonium compounds, nonionic surfactants such as Polyethers, especially alkylphenol polyglycol ethers, products of Ethoxylation of fatty acids, fatty amines, fatty acid amides and Fatty alcohols, furthermore amine oxides and fatty acid esters of poly alcohols, ampholytic surfactants, which are called zwitterions anions combining active and cationic hydrophilic groups.
Auch Mischungen der oben genannten Verbindungen sind als ober flächenaktive Substanz gemäß der vorliegenden Erfindung geeignet.Mixtures of the above compounds are as upper surfactant suitable according to the present invention.
Als oberflächenaktive Substanz besonders geeignet sind freie Fettsäuren oder Salze der Fettsäuren, insbesondere Alkalimetall salze.As surface-active substance are particularly suitable free Fatty acids or salts of the fatty acids, in particular alkali metal salts.
Gut geeignete oberflächenaktive Substanzen sind Fettsäuren mit einer Kettenlänge von etwa 10 bis 30 Kohlenstoffatomen (C10-C30). Die Fettsäuren können gesättigt oder auch ein- oder mehrfach un gesättigt sein. Geeignet sind sowohl geradkettige als auch ver zweigte Fettsäuren. Die in natürlichen Fetten vorkommenden Fett säuren beispielsweise Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, Ölsäure, Linolsäure, Linolensäure, Arachidonsäure sind für das erfindungsgemäße Verfahren als oberflächenaktive Substanz mit gu tem Erfolg einsetzbar.Well suitable surface-active substances are fatty acids with a chain length of about 10 to 30 carbon atoms (C10-C30). The fatty acids can be saturated or singly or multiply be saturated. Suitable are both straight-chain and ver branched fatty acids. The fat found in natural fats acids, for example myristic acid, palmitic acid, stearic acid, Oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, arachidonic acid are for the process according to the invention as a surface-active substance with gu success.
Besonders geeignet sind die Natrium- oder Kaliumsalze solcher Fettsäuren, da sie sich in der wäßrigen Enzymlösung lösen lassen und somit eine innige Durchmischung mit dem Enzym leicht durch führbar ist.Particularly suitable are the sodium or potassium salts such Fatty acids, since they can be dissolved in the aqueous enzyme solution and thus an intimate thorough mixing with the enzyme easily is feasible.
Weitere geeignete oberflächenaktive Substanzen sind Fettsäurede rivate, insbesondere Ester aus Fettsäuren und Alkylalkoholen, be vorzugt aus Alkoholen mit einer Kettenlänge von ein bis vier Kohlenstoffatomen.Other suitable surface-active substances are fatty acids derivatives, in particular esters of fatty acids and alkyl alcohols, be preferably from alcohols with a chain length of one to four Carbon atoms.
Für das erfindungsgemäße Verfahren können als oberflächenaktive Substanz auch Mischungen von mehreren Fettsäuren bzw. deren Salze, wie sie beispielsweise bei der Hydrolyse natürlicher Fette oder Öle anfallen, eingesetzt werden.For the inventive method can be used as a surface-active Substance also mixtures of several fatty acids or their Salts, as for example in the hydrolysis of natural fats or oils are incurred.
Die zugesetzte Menge an oberflächenaktiver Substanz kann in wei ten Bereichen variiert werden. Bevorzugt ist eine Menge von 10 - 200 Gew.% oberflächenaktiver Substanz bezogen auf Enzymmenge. Bei niedriger Zugabe ist die Enzymaktivierung proportional zur zuge gebenen Menge an oberflächenaktiver Substanz. Die Enzymaktivie rung erreicht bei etwa 100-200 Gew.% ihren Maximalwert. Eine Menge von mehr als 200 Gew.% hat in der Regel keinen darüber hin ausgehenden Effekt auf die Enzymaktivierung.The added amount of surface-active substance can in white areas are varied. Preferred is a quantity of 10 - 200% by weight of surface-active substance, based on the amount of enzyme. at low addition enzyme activation is proportional to the added amount of surface-active substance. The enzyme activity tion reaches its maximum value at about 100-200% by weight. A Amount of more than 200 wt% usually has no over outgoing effect on enzyme activation.
Für das erfindungsgemäße Verfahren wird das hydrolytische Enzym in einem wäßrigen Medium, in der Regel in einem wäßrigen Puffer gelöst. Zu dieser Lösung wird die oberflächenaktive Substanz zu gegeben. Löst sich die oberflächenaktive Substanz ebenfalls in dem wäßrigen Medium, so genügt für die Mischung des Enzyms mit der oberflächenaktiven Substanz Rühren der homogenen Lösung.For the process according to the invention, the hydrolytic enzyme in an aqueous medium, usually in an aqueous buffer solved. To this solution, the surfactant is added given. Dissolves the surfactant also in the aqueous medium, so it is sufficient for the mixture of the enzyme of the surfactant Stirring the homogeneous solution.
Die Temperatur bei dieser Reaktion ist in der Regel Raumtempera tur. Je nach thermischer Stabilität des Enzyms sind jedoch auch höhere bzw. niedrigere Reaktionstemperaturen angezeigt.The temperature in this reaction is usually room temperature door. However, depending on the thermal stability of the enzyme as well higher or lower reaction temperatures are displayed.
Falls sich die oberflächenaktive Substanz nicht in dem wäßrigen Medium lösen läßt, ist eine starke Durchmischung bis zur Emul sionsbildung vorteilhaft. Dies läßt sich beispielsweise durch starkes Schütteln, Schlagen, Rühren, turbulentes Mischen, Homoge nisation oder Schwingungserzeugung erreichen. Hierfür gut geei gnet ist die Verwendung eines Dispergiergeräts, z. B. Ultra-Tur rax.If the surfactant is not in the aqueous Medium dissolve is a strong mixing to emul formation of an advantage. This can be, for example, by strong shaking, whipping, stirring, turbulent mixing, homogenous achieve nisation or vibration generation. Good for that gnet is the use of a dispersing, z. B. Ultra-Tur rax.
Nach dem Mischen des hydrolytischen Enzyms mit der oberflächen aktiven Substanz wird die entstandene Mischung entwässert. Dies läßt sich mit allen dem Fachmann geläufigen Methoden durch führen. Gut geeignet ist hierfür die Sprühtrocknung und die Ge friertrocknung. Bei hydrolytischen Enzymen, die leicht thermisch inaktiviert werden, empfiehlt sich die Gefriertrocknung als scho nende Entwässerungsmethode.After mixing the hydrolytic enzyme with the surfaces active substance, the resulting mixture is dehydrated. This can be achieved by all methods familiar to the person skilled in the art to lead. Well suited for this is spray drying and Ge freeze drying. For hydrolytic enzymes that are slightly thermal be inactivated, the freeze-drying is recommended as scho final dewatering method.
Die vom wäßrigen Medium befreite Mischung aus Enzym und ober flächenaktiver Substanz, die in der Regel als trockenes Pulver vorliegt, ist anschließend als Katalysator in organischen Lösungsmitteln einsatzfähig.The freed from the aqueous medium mixture of enzyme and upper surfactant, usually as a dry powder is present, then as a catalyst in organic Solvents ready for use.
Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich auch zur Verwendung bei immobilisierten Enzymen.The method according to the invention is also suitable for use in immobilized enzymes.
Die mit diesem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Enzyme lassen sich auch hervorragend rezyklisieren.The enzymes produced by this method according to the invention can also be recycled excellently.
Nachdem die enzymkatalysierte Reaktion beendet ist, lassen sich die Enzyme leicht, z. B. durch Filtration, aus dem organischen Lösungsmittel isolieren. Aus den so isolierten Enzyme können mit Hilfe des erfindungsgemäßen Verfahrens wieder hochaktive Katalysatoren hergestellt werden.After the enzyme-catalyzed reaction is complete, can be the enzymes are light, e.g. B. by filtration, from the organic Isolate solvent. From the thus isolated enzymes can with Help the method of the invention again highly active Catalysts are produced.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind Mittel, enthaltend ein hydrolytisches Enzym und ein oder mehrere Fettsäurederivate, die nach dem oben beschriebenen Verfahren erhältlich sind. Another object of the invention are agents containing a hydrolytic enzyme and one or more fatty acid derivatives which are obtainable by the method described above.
Die erfindungsgemäßen Mittel eignen sich hervorragend als Katalysatoren für chemische Synthesen in organischen Lösungs mitteln wie Veresterungen, Umesterungen, Amidierungen, Hydrolyse von Carbonsäurederivaten und ähnliche Reaktionen.The compositions according to the invention are outstandingly suitable Catalysts for chemical syntheses in organic solvents such as esterification, transesterification, amidation, hydrolysis of carboxylic acid derivatives and similar reactions.
Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Veranschaulichung der Erfindung.The following examples serve to further illustrate the Invention.
Lipase-katalysierte Acylierung eines Alkohols mit VinylpropionatLipase-catalyzed acylation of an alcohol with vinyl propionate
10 mMol (1,57 g) Chlorhydrin (1) und 10 mMol (1,086 ml) Vinyl propionat wurden in 30 ml Methyl-tert.-butylether (MTBE) gelöst. Durch Zusatz der Enzympräparation wurde die Reaktion gestartet. Der Fortschritt der Reaktion wurde per GC ermittelt.10 mmol (1.57 g) of chlorohydrin (1) and 10 mmol (1.086 ml) of vinyl Propionate were dissolved in 30 ml of methyl tert-butyl ether (MTBE). By addition of the enzyme preparation, the reaction was started. The progress of the reaction was determined by GC.
50 mg Lipase wurden in 5 ml Wasser gelöst und mit der entspre chenden Fettsäure (Tab. 1) versetzt. Anschließend wurde intensiv durchmischt, eingefroren und über Nacht lyophilisiert.50 mg lipase were dissolved in 5 ml of water and with the corre sponding fatty acid (Table 1). Then it became intense mixed, frozen and lyophilized overnight.
Als Lipasen wurden die kommerziell erhältliche Amano P® Lipase (Aktivität 100 U/mg) oder eine Lipase aus Pseudomonas spec. DSM 6535 verwendet (hergestellt und gereinigt wie in WO 93/00924 be schrieben, Enzymgehalt ca. 60%, Aktivität 2000 U/mg).As lipases were the commercially available Amano P® lipase (Activity 100 U / mg) or a lipase from Pseudomonas spec. DSM 6535 used (prepared and purified as in WO 93/00924 be enzyme content about 60%, activity 2000 U / mg).
Die Ergebnisse der Umsetzungen sind in Tab. 1 aufgeführt. The results of the reactions are listed in Tab.
Verwendung einer weiter aufgereinigten Lipase aus Pseudomonas spec. DSM 6535 (Enzymgehalt ca. 90%, Aktivität 3000 U/mg) zur en zymatischen Katalyse.Use of a further purified lipase from Pseudomonas spec. DSM 6535 (enzyme content about 90%, activity 3000 U / mg) for en enzymatic catalysis.
Die in Beispiel 1 beschriebene Reaktion wurde mit folgenden Ver
änderungen ausgeführt:
30 mMol (1)
30 mMol (2)
30 ml MTBE (Lösungsmittel).The reaction described in Example 1 was carried out with the following changes:
30 mmol (1)
30 mmol (2)
30 ml MTBE (solvent).
50 mg Lipase wurden in 5 ml Wasser gelöst und mit der entspre chenden oberflächenaktiven Substanz (Tab. 2) versetzt. Anschlie ßend wurde intensiv durchmischt, eingefroren und über Nacht lyophilisiert. 50 mg lipase were dissolved in 5 ml of water and with the corre sponding the surface active substance (Table 2). subsequently, ßend was intensively mixed, frozen and overnight lyophilized.
Die Ergebnisse der Umsetzungen sind in Tab. 2 aufgeführt.The results of the reactions are listed in Tab. 2.
Als Testreaktion zur Bestimmung der Aktivierung des hydrolyti
schen Enzyms wurde folgende Reaktion gewählt:
50 mMol Benzylalkohol (3)
50 mMol Vinylpropionat (4)
50 ml MTBE.
As a test reaction for determining the activation of the hydrolytic enzyme, the following reaction was selected:
50 mmol benzyl alcohol (3)
50 mmol vinyl propionate (4)
50 ml MTBE.
Durch Zusatz von 10 bzw. 100 mg Lipase wurde die Reaktion gestar tet. Der Umsatzverlauf wurde per GC ermittelt. Aus der Anfangs reaktionsgeschwindigkeit (Umsatz < 10% bei Enzymsättigung) wurde die Aktivität der Enzympräparation ermittelt. Als Einheit 1U wird 1µMol gebildeter Ester pro Minute definiert.By addition of 10 or 100 mg lipase, the reaction was gestar tet. The sales trend was determined by GC. From the beginning reaction rate (conversion <10% at enzyme saturation) was determines the activity of the enzyme preparation. As a unit becomes 1U 1μmol educated ester per minute defined.
Die mit dem erfindungsgemäßen Verfahren aktivierten Enzyme weisen eine Aktivität im Bereich von 50 bis 100 U/mg auf und sind somit um den Faktor 87 bis 500 aktiver als die unbehandelten Enzyme.The activated by the method according to the invention enzymes have an activity in the range of 50 to 100 U / mg and are thus by a factor of 87 to 500 more active than the untreated enzymes.
Claims (7)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19934344211 DE4344211A1 (en) | 1993-12-23 | 1993-12-23 | Method for increasing the activity of hydrolytic enzymes |
| PCT/EP1994/004108 WO1995017504A1 (en) | 1993-12-23 | 1994-12-10 | Process for enhancing the activity of hydrolytic enzymes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19934344211 DE4344211A1 (en) | 1993-12-23 | 1993-12-23 | Method for increasing the activity of hydrolytic enzymes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE4344211A1 true DE4344211A1 (en) | 1995-06-29 |
Family
ID=6506037
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19934344211 Withdrawn DE4344211A1 (en) | 1993-12-23 | 1993-12-23 | Method for increasing the activity of hydrolytic enzymes |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE4344211A1 (en) |
| WO (1) | WO1995017504A1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997020041A1 (en) * | 1995-11-27 | 1997-06-05 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Method for solubilizing proteins in organic solvents |
| WO1997044445A1 (en) * | 1996-05-24 | 1997-11-27 | Altus Biologics Inc. | Cross-linked protein crystal formulations and their use as catalysts in organic solvents |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19931847A1 (en) | 1999-07-09 | 2001-01-11 | Basf Ag | Immobilized lipase |
| NL1017258C2 (en) * | 2001-02-01 | 2002-08-02 | Univ Delft Tech | Process for making cross-linked enzyme aggregates. |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH066058B2 (en) * | 1985-12-07 | 1994-01-26 | 不二製油株式会社 | Enzyme preparation method |
| US4849357A (en) * | 1986-10-08 | 1989-07-18 | Miles Inc. | Method for the preparation of a hydrophobic enzyme-containing composition and the composition produced thereby |
| JPH03280880A (en) * | 1990-03-30 | 1991-12-11 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Non-aqueous highly active enzyme |
-
1993
- 1993-12-23 DE DE19934344211 patent/DE4344211A1/en not_active Withdrawn
-
1994
- 1994-12-10 WO PCT/EP1994/004108 patent/WO1995017504A1/en active Application Filing
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997020041A1 (en) * | 1995-11-27 | 1997-06-05 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Method for solubilizing proteins in organic solvents |
| US5756331A (en) * | 1995-11-27 | 1998-05-26 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | Method for solubilizing proteins in organic solvents |
| WO1997044445A1 (en) * | 1996-05-24 | 1997-11-27 | Altus Biologics Inc. | Cross-linked protein crystal formulations and their use as catalysts in organic solvents |
| US6042824A (en) * | 1996-05-24 | 2000-03-28 | Altus Biologics, Inc. | Methods using cross linked protein crystal formulations as catalysts in organic solvents |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1995017504A1 (en) | 1995-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2412374C3 (en) | Process for the preparation of a surface-active product by transesterification of sucrose with a triglyceride | |
| EP0561999B1 (en) | Process for the production of partial glyceride sulphates | |
| DE69531538T2 (en) | METHOD FOR PRODUCING AN IMMOBILIZED ENZYME PREPARATION AND THEIR USE | |
| DE2546716C3 (en) | Process for the manufacture of a surface-active product | |
| DE3710064A1 (en) | METHOD FOR THE PRODUCTION OF QUATERNAUS ESTERAMINES AND THEIR USE | |
| CH644493A5 (en) | METHOD FOR PRODUCING A COCOA BUTTER REPLACEMENT. | |
| DE60221199T2 (en) | Monoglycerides containing conjugated fatty acids and process for their preparation | |
| EP2876103A1 (en) | Semi-crystalline glucamide compounds and method for their manufacture | |
| DE1277237B (en) | Process for the production of surface-active substances from alcohols, fatty acid esters and alkylene oxides | |
| DE2905295A1 (en) | METHOD FOR MANUFACTURING A GLYCOLIPIDESTER | |
| DE3545056C2 (en) | ||
| EP0965645B1 (en) | Partial polyol fatty acid esters | |
| DE2905252C2 (en) | ||
| DE4344211A1 (en) | Method for increasing the activity of hydrolytic enzymes | |
| US5094840A (en) | Foamable dentifrice composition | |
| EP0889023B1 (en) | Process for the preparation of mixtures of sorbitolmonoesters, sorbitoldiesters and partial glycerides | |
| EP0671973B1 (en) | Surface active compounds produced from regenerative starting materials | |
| DE3501983A1 (en) | METHOD FOR PRODUCING CLEANING AND BLENDER COMPOSITIONS | |
| EP0924301B1 (en) | Enzymatic preparation of regioselective fatty acid esters of ascorbic acid | |
| DE1301816B (en) | Process for the production of surface-active products | |
| DE2820035A1 (en) | DELICATE DETERGENTS | |
| DE19515883A1 (en) | Process for the preparation of highly concentrated flowable aqueous solutions of betaines | |
| WO2004083350A1 (en) | Purified low sulfur-containing fat acid alkyl ester and method for the production thereof | |
| JPH0710233B2 (en) | Immobilized enzyme and method for producing the same | |
| DE4222374A1 (en) | New 1,3-di:glyceride cpds. - and drug conjugates derived from them |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8130 | Withdrawal |