DE3904848A1 - Cell culture device - Google Patents

Cell culture device

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Matthias Spanka
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Abstract

The invention is based on the object of developing a low-cost culture vessel which can be used universally and under (almost) all laboratory conditions. This vessel is to be distinguished in that all requirements, from the testing stage of a cell culture to permanent culture, are or can be met by the culture vessel. The problem has been solved by the vessel outlined in the drawing, which makes it possible to handle very small to large culture volumes, to use the apparatus in virtually any laboratory without large initial expenditure being necessary, and to reach without difficulty the contents of the culture bottle through the specially arranged accesses at any time, and the material used is distinguished by low cost, robustness and optimal cleanability.

Description

Die Erfindung betrifft ein speziell konstruiertes Kulturgefäß, das insbesondere zur Kultivierung sogenannter Suspensionskulturen geeignet ist, nach dem Oberbegriff des Anspruchs (1) .The invention relates to a specially designed Culture vessel, in particular for cultivation so-called suspension cultures is suitable after the preamble of claim (1).

Für eine ganze Reihe von Fragestellungen sowohl im kommerziellen als auch im wissenschaftlichen Bereich ist es notwendig, Zellen jedweder Genese zu züchten, zu kultivieren u/o zu vermehren. Dieses kann sowohl, wie es bisher häufig geschieht, in sogenannten Petrischalen oder ähnlichen Gefäßen erfolgen, auf deren Boden die Zellen wachsen. Neueren Datums sind Kulturverfahren, bei denen Zellen einzeln in Suspension gehalten werden (dieses funktioniert z. B. gut mit Bakterien und Hefen) oder bei denen den Zellen die Gelegenheit gegeben wird, auf geeigneten Trägern anzuwachsen und diese als Matrix zu nutzen. Um Suspensionskulturen optimal realisieren zu können, ist es notwendig, geeignete Kulturgefäße einzusetzen.For a whole series of questions both in commercial as well as scientific it is necessary to grow cells of any genesis, to cultivate and / or multiply. This can be both as has been the case so far, in so-called Petri dishes or similar vessels are made on the bottom of which the cells grow. Are more recent Culture methods in which cells are separated individually Suspension (this works e.g. good with bacteria and yeast) or where the cells the opportunity is given on appropriate carriers to grow and use it as a matrix. Around To be able to optimally implement suspension cultures, it is necessary to use suitable culture vessels.

Ein geeignetes Trägermaterial sind z. B. Cytodex®- Kügelchen der Fa. Pharmacia, die den Zellen als Matrix dienen und insgesamt in einem geeigneten Kulturgefäß in der Schwebe (=Suspensionskultur) gehalten werden. Dieses geschieht durch möglichst sanftes Rühren des Inkubationsmediums. Hierbei werden die Zellen einerseits optimal mit Nährstoffen versorgt (da die Diffusion nicht gehindert wird und jede Zelle, unabhängig von der Position auf dem Trägerkügelchen, direkt vom Nährmedium erreicht werden kann) wie weiterhin auch verhindert wird, daß die Zellen absinken, ein Sediment bilden und sich damit gegenseitig z. B. der Nährstoffversorgung berauben. Eine konstante Temperatur innerhalb des Kulturgefäßes kann z. B. einmal dadurch erreicht werden, daß das Kulturgefäß in einem temperierten Brutschrank steht oder man kann das Gefäß in ein temperiertes Wasserbad stellen.A suitable carrier material are e.g. B. Cytodex®- Beads from Pharmacia, which the cells as a matrix serve and overall in a suitable culture vessel be kept in suspension (= suspension culture). This is done by gently stirring the Incubation medium. Here the cells on the one hand optimally supplied with nutrients (since the Diffusion is not hindered and every cell, regardless of the position on the carrier bead, can be reached directly from the nutrient medium) it also prevents the cells sink, form a sediment and with it  mutually z. B. deprive the nutrient supply. A constant temperature inside the culture vessel can e.g. B. can be achieved once by that Culture vessel stands in a tempered incubator or you can put the vessel in a tempered water bath put.

Für eine optimale Kultur solcher in Suspension befindlicher Zellen sind je nach Art der Zelle jeweils unterschiedliche Kulturbedingungen notwendig. Dieses betrifft nicht nur z. B. unterschiedliche Nährmedien, sondern insbesondere auch die Bedingungen (hier Rührgeschwindigkeit, Rührzeit und Rührpausen), unter oder mit denen die Zellen (seien sie einzeln oder auf Trägern festgewachsen) an-/wachsen, sich vermehren und leben.For an optimal culture of those in suspension cells are depending on the type of cell different cultural conditions necessary. This not only affects z. B. different nutrient media, but especially the conditions (here Stirring speed, stirring time and stirring breaks), below or with which the cells (be they single or open Carriers), grow, multiply and Life.

Diese "Rührbedingungen" können mit einem geeigneten Rührwerkzeug realisiert werden.These "stirring conditions" can be used with a suitable Stirring tool can be realized.

Daneben kommt es aber darauf an, die Zellen so in einem geeigneten Gefäß halten zu können, daß optimale Kulturbedingungen dem jeweiligen Stand der Entwicklung der Zellen angepaßt ist. Dieses betrifft z. B. die Nährstoffzufuhr, Abfuhr von Stoffwechselprodukten, ein geeignetes Verhältnis von Kulturmedium zu Zellzahl sowie ein geeigneter Quotient von Zellzahl zur Zahl der als Matrix eingesetzten Kügelchen.In addition, it is important to keep the cells in this way to hold a suitable vessel that optimal Culture conditions the respective state of the Development of the cells is adapted. This concerns e.g. B. the nutrient supply, removal of Metabolic products, a suitable ratio of Culture medium to cell number and a suitable quotient from cell number to the number of cells used as a matrix Globules.

Für die Kultur von Zellen auf Trägermaterialien sieht das Procedere i. A. wie folgt aus:Looks for the culture of cells on substrates the procedure i. A. as follows:

die interessierenden Zellen (resp. ein Aliquot einer wie auch immer gewonnenen Population) wird (meist enzymatisch) vereinzelt, so daß die Zellen als Suspension vorliegen. Diese (Ur-) Suspension wird dann mit den Trägermaterialien zusammengebracht und unter geeigneten Konzentrationsverhältnissen beginnen die Zellen auf den Trägern festzuwachsen. Damit eine optimale Mischung von Zellen und Trägern erreicht wird muß die Kulturlösung je nach Anforderungen der Zellen (was es im einzelnen auszutesten gilt!) gerührt und es muß auch Gelegenheit (=Rührpause) gegeben werden, daß sich Zellen und Träger absetzen können um aufeinander treffen und anwachsen zu können. Wenn die Zellen erst einmal angewachsen sind, sollen die Träger mit den Zellen dann kontinuierlich in der Schwebe gehalten werden, um, wie oben schon erwähnt, u. a. eine gute Versorgung der Zellen mit Nährstoffen zu gewährleisten. Auf den Trägern sitzend bleiben die Zellen am Leben, und/oder, was den häufigsten Fall darstellt, teilen und vermehren sich und bilden im Laufe der Zeit einen Zellrasen auf den Trägern.the cells of interest (or an aliquot of one however obtained population) (mostly enzymatically) isolated, so that the cells as Suspension. This (original) suspension is then brought together with the carrier materials and under suitable concentration ratios begin Cells to grow on the carriers. So that one  optimal mixture of cells and carriers achieved will the culture solution depending on the requirements of the Cells (what needs to be tested in detail!) Stirred and there must also be an opportunity (= stirring break) that cells and carriers can settle around to be able to meet and grow. If the Once the cells have grown, the carriers should with the cells then in suspension be held to, as mentioned above, u. a. a good supply of cells with nutrients too guarantee. They stay on the straps Cells alive, and / or what is the most common case represents, divide and multiply and form in Over time a cell lawn on the carriers.

Mit diesem Verfahren können weitaus größere Zellzahlen als mit den herkömmlichen Verfahren erzielt werden. Dieses bringt große Vorteile, wenn man sich die Stoffwechselprodukte der Zellen, z. B. synthetisierte Antikörper oder Pharmazeutika zunutze machen will. Ein weiterer Vorteil ist dann gegeben, wenn man darauf angewiesen ist, sehr viele Zellen in einem kleine Volumen an Nährmedium halten zu müssen, um die z. T. horrenden Kosten für Kulturmedien gering zu halten und/oder solcher Stoffwechselprodukte der untersuchten Zellen habhaft werden zu können, die nur in sehr geringen Mengen produziert werden und somit viele Zellen nötig sind, um auf analysierbare Mengen zu kommen. Dieses trifft auch sinngemäß auf molekularbiologische Untersuchungen zu, wo es z. B. sehr schwierig sein kann, die geringen Mengen an RNA zu erfassen, die nach Induktion von Steuerungsvorgängen im Zellkern gebildet werden. With this procedure, much larger cell numbers can be obtained than can be achieved with the conventional methods. This brings great advantages if you look at the Metabolic products of the cells, e.g. B. synthesized Wants to take advantage of antibodies or pharmaceuticals. A Another advantage is when you look at it is dependent on very many cells in a small one To have to hold volume of nutrient medium to the z. T. keep horrendous costs for cultural media low and / or such metabolic products of the examined To be able to get hold of cells that are only in very small quantities are produced and therefore many Cells are needed to target analyzable amounts come. This also applies analogously molecular biological studies on where it is e.g. B. The small amounts of RNA can be very difficult to detect that after induction of Control processes are formed in the cell nucleus.  

Insbesondere in der Anfangszeit einer Kultur ist es daher notwendig, neben unterschiedlichen "Rührmodi" unter möglichst automatisierten, reproduzierbaren und kontrollierten Bedingungen insbesondere den Anforderungen der Zellen an optimale Kulturbedingungen (z. B. hinsichtlich Nährstoffen, Sauerstoffversorgung Kontrolle der Temperatur, des pH etc., Verhältnis Zellzahl zu Volumen im Inkubationsmedium sowie Abfuhr von Stoffwechselprodukten) realisieren zu können, um dem jeweiligen Entwicklungsstand der Kultur gerecht zu werden.It is especially in the early days of a culture therefore necessary, in addition to different "stirring modes" under the most automated, reproducible and controlled conditions especially the Cell requirements for optimal culture conditions (e.g. regarding nutrients, oxygen supply Control of temperature, pH etc., ratio Cell number to volume in the incubation medium and removal of metabolic products) to be able to appropriate to the respective level of development of the culture will.

Stand der Technik:State of the art:

Es gibt eine ganze Reihe von Zellkulturgefäßen, insbesondere auch für sog. Suspensionskulturen (s. auch beigefügte Fotokopien). Die auf dem Markt befindlichen Geräte erfüllen z. T. Einzelfunktionen der oben beschriebenen Methode, sie ermöglichen das Rühren in Suspension, sind entweder auf einen Brutschrank oder ein sie umgebendes Wasserbad (s. Techne) angewiesen. Die Magnetrührer z. B. erlauben kreisende Rührbewegungen, Hin- und Herbewegung und das Einlegen von Pausen.There are a number of cell culture vessels especially for so-called suspension cultures (see also attached photocopies). The ones on the market located devices meet z. T. individual functions the method described above, they make it possible Stir in suspension, either on one Incubator or a surrounding water bath (see Techne) instructed. The magnetic stirrer z. B. allow circular stirring movements, back and forth movement and taking breaks.

Kritik des Standes der Technik:Critique of the state of the art:

Die bisher existierenden Geräte müssen für eine Kultur entweder in einem Brutschrank oder, sehr umständlich in einem Wasserbad gehalten werden. Insbesondere die Notwendigkeit, über einen Brutschrank zu verfügen, setzt sowohl genügend Laborplatz als auch eine Vorinvestition von mehreren 10 000 DM voraus, die sich für kleinere Fragestellungen oft nicht lohnen. In den existierenden Kulturgefäßen muß mit relativ großen Volumina an Medium gearbeitet werden (was sehr teuer werden kann) oder es müssen eine ganze Reihe von verschieden großen Kulturflaschen vorgehalten werden. Durch die Anbringung der Öffnungen ist nur bei steriler Umgebung (d. h. Laminar-air-flow=teuer) sehr umständlich ein Zugriff auf die Zellen möglich. Bei den existierenden Flaschenkonstruktionen ist eine leichte Trennung von Zellen und Medium, resp. die Entnahme eines Zellkonzentrates nur schwer möglich. Die existierenden Lösungen erlauben weder eine kontinuierliche Kultur von Zellen, noch ist es möglich, leicht und dauernd an Zellen oder resp. deren (Ausscheidungs-) Produkte heranzukommen.The existing devices have to be for a culture either in an incubator or, very cumbersome be kept in a water bath. especially the Need to have an incubator, sets enough laboratory space as well as one Advance investment of several 10,000 DM ahead, the  often not worthwhile for smaller questions. In the existing culture vessels must be relative large volumes of medium are being worked on (which is very can be expensive) or a whole bunch of different sized culture bottles are kept. By attaching the openings is only at sterile environment (i.e. laminar air flow = expensive) very cumbersome access to the cells possible. With the existing bottle designs there is one easy separation of cells and medium, respectively. the It is difficult to remove a cell concentrate. The existing solutions do not allow one continuous culture of cells, it still is possible, light and permanent on cells or resp. their To get (excretion) products.

Bisher ist es nicht möglich, eine Kultur ohne großen Aufwand (und teure Investitionen) unter "steady­ state - Bedingungen" durchzuführen, d. h. eine kontinuierliche Zu- und Abfuhr von Medium zu ermöglichen.So far it is not possible to have a culture without large Effort (and expensive investments) under "steady state conditions ", i.e. a continuous supply and discharge of medium enable.

Aufgabetask

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein preiswertes, universell einsetzbares und unter (fast) allen Laborbedingungen einsetzbares Kulturgefäß zu entwickeln. Dieses soll sich dadurch auszeichnen, daß vom Erprobungsstadium einer Zellkultur bis hin zur Dauerkultur das Kulturgefäß allen Erfordernissen gerecht wird/werden kann.The invention is based on the object inexpensive, universally applicable and under (almost) culture vessel that can be used in all laboratory conditions develop. This should be characterized in that from the testing stage of a cell culture to Permanent culture the culture vessel of all requirements will / can do justice.

Lösung des Problems:The solution of the problem:

Das entworfene Kulturgefäß zeichnet sich dadurch aus, daßThe designed culture vessel is characterized by that

  • - prinzipiell ist jede Größe realisierbar ist, da es z. B. aus Glas hergestellt werden kann- in principle, any size is feasible since it e.g. B. can be made of glass
  • - es jederzeit eine optische Kontrolle des Kultivierungsvorganges erlaubt- there is always a visual control of the Cultivation process allowed
  • - die "Gefäße" sowie die darin enthaltenen Bauteile (insbesondere die Aufhängung von Rührpaddeln, eine häufig gewählte Lösung, wie sie auch im Anwendungsbeispiel dargestellt ist) sind so aufgebaut, daß eine komplette, vollständige und kontrollierbare Reinigung aller Bauteile möglich ist- The "vessels" and the components they contain (especially the suspension of paddles, a frequently chosen solution, as also in Application example is shown) are structured so that a complete, complete and controllable Cleaning of all components is possible
  • - das Gefäß ist mit einem Temperiermantel versehen, der über Schläuche aus einem kommerziellen Temperierbad versorgt wird und so eine mögliche Kontaminationsquelle fern hält- the vessel is provided with a tempering jacket, of tubing from a commercial Tempering bath is supplied and thus a possible one Keeps the source of contamination away
  • - das Gefäß ist mit diversen Ein- und Ausläufen versehen, die sich dadurch auszeichnen, daß es durch die gewählte Anordnung (am seitlichen Rand des Inkubationsraumes und in senkrechter Anordung zum Oberteil des Gefäßes) man problemlos den tiefsten Punkt des Inkubationsgefäßes durch das Einbringen z. B. einer langen Kanüle erreichen kann, und die gewählte Möglichkeit, Durchstichsepten bei Bedarf einsetzen zu können, jederzeit und unter fast allen Bedingungen z. B. Medienzu- und -Abfuhr, Temperatur- und pH-Kon­ trolle, Begasung u/o Belüftung problemlos kontrolliert und verfolgt werden können - The vessel is with various inlets and outlets provided, which are characterized in that by the selected arrangement (on the side edge of the Incubation room and in a vertical arrangement to the Upper part of the vessel) one easily the deepest Point of the incubation vessel by introducing z. B. can reach a long cannula, and the chosen one Possibility to use puncture septa if necessary can, at any time and under almost all conditions e.g. B. media supply and discharge, temperature and pH con trolls, fumigation and / or ventilation easily controlled and can be tracked  
  • - über ein mit einer "Schikane" versehenen Steigrohr (erlaubt daneben z. B. die Kontrolle des Medienvolumens durch eine angebrachte Skala) ist es möglich, Medium u/o Zellprodukte (dis/)kontinuierlich abzupumpen, ohne daß die Zellen aus dem Gefäß entschwinden- via a riser pipe with a "chicane" (also allows, for example, control of the media volume by an attached scale) it is possible to medium u / o pumping out cell products (dis /) continuously, without the cells disappearing from the vessel
  • - durch die Konstruktion des Gefäßbodens ist es möglich, auch sehr geringe Medienvolumina einzusetzen, was insbesondere in der Erprobungsphase viel Geld und Zeit spart. Weiterhin konzentrieren sich die Zellen bei abgestelltem Rührer in der vorgeformten Rinne, so daß z. B. das Zellkonzentrat problemlos durch eine senkrecht darüber angebrachte Öffnung entnommen werden kann sowie unter laufendem Rührer durch einen am tiefsten Punkt des Kulturgefäßes rechtwinklig zur Seitenwand angebrachten Durchstichkanal problemlos ein Zellaliquot entnommen werden kann- by the construction of the bottom of the vessel it is possible to use even very small media volumes, which is a lot of money, especially in the trial phase Saves time. The cells continue to concentrate when the stirrer is switched off in the preformed channel, see above that z. B. the cell concentrate easily through a the opening made vertically above it can be carried out by a lowest point of the culture vessel perpendicular to the Side wall attached puncture channel easily Cell aliquot can be removed
  • - durch die Verwendung von Durchstichsepten kann gefahrlos auf dem normalen Labortisch mit einer sterilen Spritze ein Zellaliquot entnommen werden- by using piercing septa safely on the normal laboratory bench with one a cell aliquot can be taken from the sterile syringe
  • - durch entsprechend geschaltete Pumpen ist es möglich, konstant frisches Medium zuzuführen und Verbrauchtes abzusaugen, so daß es möglich wird, konstante Inkubationsbedingungen mit gleichmäßigem Gehalt an Substraten zu schaffen- It is through appropriately switched pumps possible to supply constantly fresh medium and To suck up used things so that it becomes possible constant incubation conditions with uniform To create content of substrates
  • - falls nicht CO2-unabhängige Puffermedien verwendet werden können, ist es möglich, den Flascheninnenraum z. B. mit einem CO2/Luft-Gemisch zu begasen- If not CO 2 independent buffer media can be used, it is possible to z. B. with a CO 2 / air mixture
Beschreibung eines AnwendungsbeispielsDescription of an application example

In der beigefügten Zeichnung ist ein Kulturgefäß schematisch dargestellt.In the attached drawing is a culture vessel shown schematically.

Erklärung der Bauteile:Explanation of the components:

A: Außenmantel des Temperiergefäßes
B: Wand des Kulturgefäßes
C: Rührpaddel in einer dem Boden des Kulturgefäßes angepaßten Form
D: hochgezogener Boden des Kulturgefäßes
E: Aufhängevorrichtung für die Rührpaddel, die den Anforderungen nach Anspruch 1 genügt
F: Deckel über der Aufhängevorrichtung
G: Deckel der hier als Beispiel dargestellten 4 Öffnungen, die sich am äußeren Rand des Gefäßes befinden und somit einen leichten Zugang zum Inhalt des Kulturgefäßes ermöglichen
H: Steigrohr mit Verschlußdeckel, Skala zum Abschätzen des Medienvolumens, auch geeignet zum kontinuierlichen Absaugen von Kulturflüssigkeit
I: Ein- und Auslaßstutzen für das Temperierwasser
K: am untersten Punkt des Gefäßes angebrachter "Stichkanal", durch den mittels z. B. einer Kanüle Bodensatz oder eine Probe aus dem untersten Teil des Kulturgefäßes entnommen werden kann A : Outer jacket of the temperature control vessel
B : Wall of the culture vessel
C : Paddle in a shape adapted to the bottom of the culture vessel
D : raised bottom of the culture vessel
E : suspension device for the paddle, which meets the requirements of claim 1
F : Lid over the hanger
G : Lid of the 4 openings shown here as an example, which are located on the outer edge of the vessel and thus allow easy access to the contents of the culture vessel
H : riser pipe with sealing cap, scale for estimating the media volume, also suitable for the continuous suction of culture fluid
I : Inlet and outlet connection for the tempering water
K : at the lowest point of the vessel attached "puncture channel" through which z. B. a cannula sediment or a sample can be taken from the lowest part of the culture vessel

Claims (3)

Kulturgefäß, insbesondere zur Kultivierung von Suspensionskulturen
  • (1) Gefäß zur Kultivierung von Zellen jedweder Genese sowohl im Labormaßstab als auch kommerziell,
Culture vessel, in particular for the cultivation of suspension cultures
  • (1) vessel for the cultivation of cells of any genesis both on a laboratory scale and commercially,
dadurch gekennzeichnet, daß es das Gefäß ermöglicht, allen Stadien nahezu jeder beliebigen Kultur vom Etablieren bis hin zur Dauerkultur gerecht zu werden. characterized in that the vessel enables all stages of almost any culture from establishment to permanent culture to be catered for. Das Kulturgefäß ist dadurch gekennzeichnet daß
  • (2) es temperierbar ist,
  • (3) es über variable viele Ein- und Auslaßöffnungen verfügt,
  • (4) es das Anbringen der unterschiedlichsten Kontrollelemente, wie z. B. Temperaturfühler, pH-Meter, Sauerstoffelektroden etc. erlaubt,
  • (5) je nach technischen Voraussetzungen die unterschiedlichsten Antriebseinheiten eingesetzt werden können,
  • (6) die Ein- und Auslaßöffnungen so angeordnet sind, daß problemlos unter fast allen Laborbedingungen der tiefste Punkt des Kulturgefäßes z. B. mit einer geeigneten Punktionskanüle erreicht werden kann,
  • (7) durch den Einsatz von entsprechend geschalteten Pumpen eine konstante Zufuhr von Kulturmedium sowie Abfuhr von Stoffwechselprodukten möglich ist, also eine kontinuierliche Kultur realisiert werden kann,
  • (8) durch (einen) entsprechend angebrachte(n) Durchstichkanal(kanäle), die rechtwinklig zum Boden des Kulturgefäßes angebracht sind, auch unter konstantem Rühren die Entnahme eines Zellaliquotes oder bei abgeschaltetem Rührer die Entnahme eines Zellkonzentrates möglich ist,
  • (9) durch die besondere Form des Bodens des Kulturgefäßes auch bei geringen Zellzahlen oder geringem Medieneinsatz ein gutes Trennen (durch Sedimentieren) der Zellen möglich ist und somit z. B. die Supernatante leicht abgenommen werden kann,
  • (10) Durchstichsepten eingesetzt werden können, die auch unter "Nicht-sterilen" Bedingungen (also z. B. unabhängig von Brutschrank und/oder Laminar-air­ flow (=sterile Werkbank) jederzeit den Zugriff auf den Inhalt des Kulturgefäßes erlauben (z. B. mit einer sterilen Kanüle und unter Einsatz eines vor die Einstichöffnung gehalteten Gasbrenners),
  • (11) alle Bauteile, insbesondere die häufig zum Einsatz kommende Aufhägevorrichtung von Rührpaddeln (wie im Anwendungsbeispiel auch dargestellt) so konstruiert sind, daß sie sicher und kontrollierbar gereinigt und auch sterilisiert werden können,
  • (12) grundsätzlich jedes Material für das Kulturgefäß in Frage kommt, sich aber geeignetes Glas besonders anbietet, da es neben der Preiswürdigkeit auch eine optische Kontrolle des Kulturvorganges erlaubt,
  • (13) durch ein entsprechend angebrachtes Steigrohr (u. U. mit einer Schikane) jederzeit und ggf. konstant Medium aus dem Kulturgefäß entfernt werden kann, ohne daß zugleich Zellen mit entschwinden.
The culture vessel is characterized in that
  • (2) it can be tempered,
  • (3) it has a variable number of inlet and outlet openings,
  • (4) it attaching a variety of control elements, such as. B. temperature sensors, pH meters, oxygen electrodes etc. allowed,
  • (5) depending on the technical requirements, a wide variety of drive units can be used,
  • (6) the inlet and outlet openings are arranged so that the lowest point of the culture vessel z. B. can be achieved with a suitable puncture cannula,
  • (7) a constant supply of culture medium and removal of metabolic products is possible through the use of correspondingly switched pumps, ie a continuous culture can be realized,
  • (8) through (a) appropriately attached puncture channel (s), which are attached at right angles to the bottom of the culture vessel, it is possible to remove a cell aliquot even with constant stirring or to remove a cell concentrate if the stirrer is switched off,
  • (9) due to the special shape of the bottom of the culture vessel, even with low cell numbers or low media use, a good separation (by sedimentation) of the cells is possible and thus z. B. the supernatant can be easily removed,
  • (10) Puncture septa can be used, which allow access to the contents of the culture vessel at any time even under "non-sterile" conditions (e.g. independent of the incubator and / or laminar air flow (= sterile workbench). B. with a sterile cannula and using a gas burner held in front of the injection opening),
  • (11) all components, in particular the frequently used lifting device for paddles (as also shown in the application example) are designed so that they can be cleaned and sterilized safely and controllably,
  • (12) In principle, any material for the culture vessel comes into question, but suitable glass is particularly suitable, since, in addition to the value for money, it also allows an optical control of the culture process,
  • (13) can be removed from the culture vessel at any time and, if necessary, constantly using an appropriately attached riser pipe (possibly with a chicane), without cells also disappearing.
DE3904848A 1989-02-17 1989-02-17 Cell culture device Withdrawn DE3904848A1 (en)

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