DE3828784C1

DE3828784C1 -

Info

Publication number: DE3828784C1
Application number: DE19883828784
Authority: DE
Inventors: Michael Dr. 3000 Hannover De Kloss; Juergen Dr. 3150 Peine De Klaar
Original assignee: Pharma Biotechnologie Hannover 3000 Hannover De GmbH
Current assignee: Pharma Biotechnologie Hannover 3000 Hannover De GmbH
Priority date: 1988-08-25
Filing date: 1988-08-25
Publication date: 1989-12-07
Also published as: WO1990002194A1

Abstract

In a process for separating soluble constituents of cells from suspended cell fragments or suspended cells, which release the soluble constituents of cells, the constituents are selectively adsorbed onto a solid carrier and then dissolved out of the carrier. The solid carrier is added without prior separation of the cells or cell fragments. The carrier has either a) a particle size at least 5 times greater than that of the cells or cell fragments or b) a density which differs from that of the cells or cell fragments by at least 0.2 g/l. The cells or cell fragments are separated from the carrier in case a) by filtration through a filter medium permeable to the cells or cell fragments but not to the carrier, and in case b) by flotation or sedimentation of the carrier and settling or decantation of the suspension of cells or cell fragments. In both cases a) and b), the carrier is repeatedly suspended with fresh solvent or a suitable washing medium and repeatedly separated until at least 99 % of the cells or cell fragments are removed from the mixture.

Description

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Abtren nung von löslichen Zellinhaltsstoffen aus suspendierten Zelltrümmern oder aus suspendierten Zellen, welche die löslichen Zellinhaltsstoffe nach außen abgeben, durch selektive Adsorption der Zellinhaltsstoffe an einem festen Träger und anschließende Ablösung der Zellin haltsstoffe von dem Träger.The invention relates to a method for separation of soluble cell contents from suspended Cell debris or from suspended cells, which the releasing soluble cell contents to the outside through selective adsorption of the cell contents on one solid support and subsequent detachment of the cellin substances from the carrier.

Es ist üblich, derartige Abtrennverfahren in zwei auf einanderfolgenden Verfahrensschritten durchzuführen, indem zunächst die suspendierten Zellen oder Zelltrümmer durch Zentrifugieren oder Filtrieren abgetrennt werden, woraufhin dann aus der flüssigen Phase, gegebenenfalls nach Aufkonzentrierung, die gewünschten löslichen Zell inhaltsstoffe durch selektive Adsorption an einen fe sten Träger abgetrennt werden. Diese Abtrennung erfolgt entweder im Batch-Verfahren oder durch Säulenchroma tographie.It is common to have such separation methods in two successive process steps by first the suspended cells or cell debris separated by centrifugation or filtration, whereupon from the liquid phase, if appropriate after concentration, the desired soluble cell ingredients by selective adsorption on a fe most carriers are separated. This separation takes place either in a batch process or by column chromatography tography.

Die selektive Adsorption der Zellinhaltsstoffe an einen festen Träger erfolgt in zunehmendem Maße durch Träger, die für Affinitätschromatographien geeignet sind. Da derartige Träger jedoch relativ teuer sind, wurde oft mals eine Adsorption an einen unspezifischen Träger vorgeschaltet. Es wurde dann nur die Fraktion der Affi nitätschromatographie unterworfen, die zuvor durch den unspezifischen Träger aus der Suspension abgetrennt wurde.The selective adsorption of the cell contents onto one solid carriers are increasingly carried out by carriers, which are suitable for affinity chromatography. There however, such carriers have been relatively expensive sometimes an adsorption on a non-specific carrier upstream. It then only became the Affi faction subject to chromatography which was previously performed by the unspecific carrier separated from the suspension has been.

Die Erfindung hat sich die Aufgabe gestellt, die be kannten Verfahren zur Abtrennung von löslichen Zell inhaltsstoffen aus suspendierten Zelltrümmern oder aus suspendierten Zellen, welche lösliche Zellinhaltsstoffe nach außen abgeben, zu vereinfachen, zu beschleunigen, effizient zu gestalten und dabei den Verbrauch an Chro matographiematerial und Lösungsmitteln zu vermindern.The invention has set itself the task of be known methods for the separation of soluble cells ingredients from suspended cell debris or from suspended cells, which are soluble cell constituents deliver to the outside, simplify, accelerate, to make it efficient while consuming chro reduce matographic material and solvents.

Diese Aufgabe kann bei dem eingangs genannten Verfahren überraschend einfach dadurch gelöst werden, daß der feste Träger ohne vorherige Abtrennung der Zellen oder Zelltrümmer zugesetzt wird, wobei ein Träger verwendet wird, der entwederThis object can be achieved in a surprisingly simple manner in the method mentioned at the beginning be that the solid support without prior separation the cells or cell debris is added, with a Carrier is used either

a) particle sizes larger by at least a factor of 5 has than the cells or cell debris or
b) a difference of at least 0.2 g / l has specific gravity than the cells or Cell debris,

woraufhin die Zellen oder Zelltrümmer von dem Träger abgetrennt werden
im Fall a):
durch Filtration über ein Filtermedium, welches zwar die Zellen oder Zelltrümmer durchläßt, nicht jedoch den Träger,
oder im Fall b):
durch Flotation oder Sedimentation des Trägers und Ablas sen oder Dekantieren der Suspension der Zellen oder Zelltrümmer,
woraufhin in beiden Fällen a) und b) der Träger mehr fach mit frischem Lösungsmittel oder einem geeigneten Waschmedium erneut suspendiert und erneut abgetrennt wird, bis mindestens 99% der Zellen oder Zelltrümmer aus dem Gemisch entfernt sind.whereupon the cells or cell debris are separated from the support
in case a):
by filtration through a filter medium which does let the cells or cell debris through, but not the carrier,
or in case b):
by flotation or sedimentation of the carrier and draining or decanting the suspension of the cells or cell debris,
whereupon in both cases a) and b) the carrier is resuspended several times with fresh solvent or a suitable washing medium and separated again until at least 99% of the cells or cell debris have been removed from the mixture.

Besonders einfach und effizient kann das erfindungs gemäße Verfahren dadurch abgeändert werden, daß der Träger die Merkmale a) und b) aufweist und die Abtren nung des Trägers von Zellen oder Zelltrümmern durch eine Kombination von Filtration einerseits und Ablassen bzw. Dekantieren andererseits erfolgt.Invention can be particularly simple and efficient appropriate procedures are modified in that the Carrier has the features a) and b) and the Abtren the carrier of cells or cell debris a combination of filtration on the one hand and draining or decanting on the other hand.

Als Träger für das erfindungsgemäße Verfahren können prinzipiell alle Träger verwendet werden, die ausrei chend selektiv die gewünschten, gelösten Zellinhalts stoffe adsorbieren können. Ein besonderer Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens ist, daß auch unmittelbar mit Trägern gearbeitet werden kann, die für Affinität schromatographie geeignet sind.Can as a carrier for the inventive method in principle all carriers are used that are sufficient selectively the desired, dissolved cell content can adsorb substances. A particular advantage of the The inventive method is that immediately can be worked with carriers that have affinity chromatography are suitable.

Um lösliche Zellinhaltsstoffe aus Mikroorganismen zu gewinnen, ist es meist nötig, die Zellen zu zertrümmern und aus dieser Suspension von Zelltrümmern die gewünsch ten Zellinhaltsstoffe abzutrennen. Dieses Verfahren wird insbesondere bei Bakterien wie Escherichia coli angewendet, wenn es sich bei den löslichen Zellinhalts stoffen um Peptide handelt, die von diesem Mikroorga nismus nicht nach außen abgegeben werden. Zu den Zel len, welche lösliche Zellinhaltsstoffe, insbesondere Peptide nach außen abgeben, zählen beispielsweise He fen.To get soluble cell contents from microorganisms win, it is usually necessary to smash the cells and the desired from this suspension of cell debris to separate cell contents. This method is particularly common in bacteria such as Escherichia coli applied when it is in the soluble cell contents substances are peptides produced by this microorganism nism can not be given to the outside world. To the cell len, which soluble cell contents, in particular Peptides that release to the outside include He, for example fen.

Zu den erfindungsgemäß abtrennbaren löslichen Zellin haltsstoffen gehören aber nicht nur Peptide, sondern auch andere lösliche Zellinhaltsstoffe mit mittlerem bis höherem Molekulargewicht wie Antibiotika, Steroide, Prostaglandine, Antikörper, Lectine etc. Wesentlich ist, daß diese Zellinhaltsstoffe löslich sind, wobei als Lösungsmittel nicht nur Wasser und wäßrige Medien, sondern auch organische Lösungsmittel in Frage kommen. To the soluble cellin which can be separated according to the invention Ingredients do not just belong to peptides, however also other soluble cell contents with medium up to higher molecular weight such as antibiotics, steroids, Prostaglandins, Antibodies, Lectins etc. Essential is that these cell contents are soluble, whereby not only water and aqueous media as solvents, but also organic solvents come into question.

Als feste Träger kommen prinzipiell alle Träger in Fra ge, die zur selektiven Adsorption von löslichen Zell inhaltsstoffen geeignet sind. Sofern die Abtrennung der Zellen oder Zelltrümmer nur durch Filtration gemäß Fall a) erfolgen soll, muß nur dafür gesorgt werden, daß die Träger um mindestens den Faktor 5 größere Teilchen größen aufweisen als die Zellen oder Zelltrümmer, und Filtermedien verwendet werden, welche zwar die Zellen oder Zelltrümmer durchlassen, nicht jedoch den Träger. Es kommen somit hierfür auch die Träger aus organischen Polymeren, vernetzten Dextranen, Cellulose, Cellulose derivaten, Stärkederivaten etc. in Frage.In principle, all carriers come into Fra as fixed carriers ge, for the selective adsorption of soluble cells ingredients are suitable. Provided the separation of the Cells or debris only by filtration according to the case a) is to take place, it must only be ensured that the Particles larger by at least a factor of 5 have sizes than the cells or cell debris, and Filter media are used, which are the cells or allow cellular debris to pass through, but not the wearer. This also means that the carriers are made of organic materials Polymers, cross-linked dextrans, cellulose, cellulose derivatives, starch derivatives etc. in question.

Um auch von der Abtrennung durch Flotation oder Sedi mentation des Trägers und Ablassen oder Dekantieren der Suspension der Zellen oder Zelltrümmer Gebrauch machen zu können, ist es jedoch notwendig, daß der Träger ein um mindestens um den Wert 0,2 g/l abweichendes spezi fisches Gewicht aufweist als die Zellen oder Zelltrüm mer. Derartige Abweichungen des spezifischen Gewichtes des Trägers erzielt man entweder durch Verwendung von ganz oder teilweise geschlossenporigen Schäumen oder durch Träger auf Basis von anorganischen Materialien wie Gläsern, Silicaten, Aluminaten oder Polymerisation mit eingelagerten, spezifisch schweren Füllstoffen, die auch das spezifische Gewicht der Teilchen entsprechend erhöhen. Ein Material, das sowohl das Merkmal a) als auch das Merkmal b) aufweist, ist beispielsweise Glas, wobei dieses insbesondere in Form von porösem Glasgrieß zur Anwendung kommen kann. Glasgrieß wird im Handel angeboten. Seine Ober fläche kann gewünschtenfalls so modifiziert werden, daß es selektiv nur noch bestimmte Stoffe oder Stoffgruppen adsorbiert. Seine Oberfläche kann auch durch Auftragen von hochselektiven Gruppen für die Affinitätschromato graphie verwendet werden. To also from separation by flotation or sedi mentation of the wearer and draining or decanting the Use suspension of cells or cell debris To be able to, however, it is necessary that the carrier by speci deviating by at least 0.2 g / l fish weight than the cells or cell debris mer. Such deviations in the specific weight of the carrier is achieved either by using fully or partially closed-cell foams or thanks to carriers based on inorganic materials such as glasses, silicates, aluminates or polymerization with stored, specifically heavy fillers that also the specific weight of the particles accordingly increase. A material that has both the characteristic a) and also has the feature b) is, for example, glass, this in particular in the form of porous semolina can be used. Semolina is offered in stores. His waiter if desired, the surface can be modified so that selectively only certain substances or groups of substances adsorbed. Its surface can also be applied of highly selective groups for affinity chromatography graphic can be used.

Als Filtermedien, die zwar die Zellen oder Zelltrümmer, nicht jedoch die Träger durchlassen, können handelsüb liche Fritten oder Siebe, insbesondere Glasfritten ver wendet werden. Um ein Verstopfen dieser Glasfritten durch Zellen oder Zelltrümmer zu vermeiden, muß die Porenweite der Fritten ausreichend groß gewählt werden. Um unerwünschte Verluste an Träger oder ein Verstopfen der Poren durch den Träger zu vermeiden, muß die Teil chengröße der Träger mindestens um den Faktor 5 größer sein, vorzugsweise wird ein Träger verwendet, der um den Faktor 10 bis 100 größer ist als die Zellen bzw. Zelltrümmer.As filter media that, although the cells or cell debris, however, the carriers cannot let through, as is customary in the trade Liche frits or sieves, especially glass frits be applied. To clog these glass frits to avoid by cells or cell debris, the The pore size of the frits should be sufficiently large. To avoid undesirable loss to carrier or clogging To avoid the pores through the carrier, the part must size of the carrier is at least 5 times larger preferably a carrier is used which is around is 10 to 100 times larger than the cells or Cell debris.

Um von der Methode der Flotation oder Sedimentation des Trägers gemäß b) Gebrauch machen zu können, muß das spezifische Gewicht des Trägers ausreichend von dem spezifischen Gewicht der Zellen oder Zelltrümmer ab weichen. Eine Abweichung um den Wert von 0,2 g/l reicht aus, insbesondere wenn der Träger Teilchengrößen auf weist, die mindestens gleich groß, vorzugsweise jedoch deutlich größer sind als die der Zellen oder Zelltrüm mer, da bekanntlich die Geschwindigkeit der Flotation oder Sedimentation auch von der Teilchengröße der Trä ger abhängt.To change from the method of flotation or sedimentation of the To be able to make use of the carrier according to b), specific weight of the carrier sufficient of that specific weight of the cells or cell debris give way. A deviation of 0.2 g / l is sufficient out, especially if the carrier has particle sizes has at least the same size, but preferably are significantly larger than that of the cells or cell debris mer, since we know the speed of the flotation or sedimentation also from the particle size of the Trä depends.

Die Flotation oder Sedimentation des Trägers kann zwar prinzipiell auch durch Zentrifugieren beschleunigt wer den. Es ist jedoch relativ schwierig, Zentrifugen so zu steuern und zu überwachen, daß die eine Festkörperkom ponente abgeschieden wird und die andere in der Suspen sion verbleibt.The flotation or sedimentation of the carrier can in principle also accelerated by centrifugation the. However, it is relatively difficult to use centrifuges like this control and monitor that a solid state com component is deposited and the other in the Suspen sion remains.

Ein besonderer Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht auch darin, daß auf die Abtrennung mit Zentri fugen völlig verzichtet werden kann und die sonst übliche zweistufige Abtrennung in zwei getrennten Appa raturen erfindungsgemäß in einem Schritt und in einer Apparatur durchgeführt werden kann. Während es bisher stets üblich war, die suspendierten Zelltrümmer oder suspendierten Zellen abzutrennen, ehe man einen festen Träger zur Adsorption der Zellinhaltsstoffe zugab, wer den erfindungsgemäß Suspensionen erzeugt, die sowohl die Zelltrümmer oder Zellen einerseits und den festen Träger andererseits enthalten, um dann diese gemischten Suspensionen in der Weise wieder aufzutrennen, daß die festen Träger von den suspendierten Zelltrümmern oder suspendierten Zellen wieder abgetrennt werden. Eine derartige Auftrennung ist verfahrenstechnisch schwieri ger als die zweimalige aufeinanderfolgende Abtrennung von Zelltrümmern oder Zellen aus einer Suspension ei nerseits und einem festen Träger andererseits.A particular advantage of the method according to the invention also consists in the fact that the centri joints can be completely dispensed with and the otherwise Usual two-stage separation in two separate appa according to the invention in one step and in one Equipment can be carried out. While it was so far was always usual, the suspended cell debris or separate suspended cells before getting a fixed one Carrier for adsorption of cell contents added who the suspensions according to the invention produced, both the cell debris or cells on the one hand and the solid Carriers on the other hand included, then mixed these Separate suspensions in such a way that the solid carrier from the suspended cell debris or suspended cells are separated again. A such separation is technically difficult longer than the two consecutive separations of cell debris or cells from a suspension on the one hand and a solid support on the other.

Überraschenderweise führt das erfindungsgemäße Verfah ren jedoch zu einer Reihe von nicht vorhersehbaren Vor teilen, so daß es durchaus sinnvoll und wirtschaftlich ist, von den an sich ungewöhnlichen Verfahrensmaßnahmen Gebrauch zu machen. Außer der bereits erwähnten Einspa rung einer zweiten Verfahrensstufe und einer hierfür notwendigen zweiten Apparatur, führt das erfindungsge mäße Verfahren nämlich zu geringeren Verlusten und da mit höheren Ausbeuten an löslichen Zellinhaltsstoffen. Weiterhin wird erfindungsgemäß weniger Lösungsmittel oder Waschmedium benötigt als nach dem Stand der Tech nik. Bereits durch mehrmaliges Suspendieren mit nahezu gleichgroßen Mengen an frischem Lösungsmittel oder ge eignetem Waschmedium wird ein so großer Anteil an suspendierten Zelltrümmern oder suspendierten Zellen aus dem Gemisch entfernt, daß mehr als 99% aus dem Gemisch entfernt sind. Gewünschtenfalls kann durch Wie derholung des Suspendierens und erneutes Abtrennen die Abtrennung der Zellen oder Zelltrümmer soweit voran getrieben werden, daß 99,99% entfernt werden. Derar tige geringfügige Verunreinigungen des Trägers mit den daran selektiv adsorbierten löslichen Zellinhaltsstof fen stören bei der weiteren Aufarbeitung nicht, zumal die hochgereinigten löslichen Zellinhaltsstoffe sowieso im allgemeinen einer Sterilfiltration unterzogen wer den.Surprisingly, the method according to the invention performs However, there are a number of unforeseeable issues share, so that it makes perfect sense and is economical is, of the unusual procedural measures per se To make use of. Except for the already mentioned savings a second stage of the process and one for this necessary second equipment, leads the fiction moderate procedures namely to lower losses and there with higher yields of soluble cell contents. Furthermore, less solvent is used according to the invention or washing medium as required by the state of the art nik. Already by repeated suspension with almost equal amounts of fresh solvent or ge such a large proportion of suitable washing medium suspended cell debris or suspended cells removed from the mixture that more than 99% from the Mixture are removed. If desired, you can use How repetition of suspension and detachment Separation of the cells or cell debris as far ahead driven that 99.99% are removed. Derar minor contamination of the carrier with the soluble cell matter selectively adsorbed thereon fen do not interfere with the further processing, especially the highly purified soluble cell contents anyway generally subjected to sterile filtration the.

Besonders rasch und effizient arbeitet das erfindungs gemäße Verfahren, wenn der Träger die Merkmale a) und b) aufweist und daher die Abtrennung des Trägers von den Zellen oder Zelltrümmern durch Kombination von Fil tration einerseits und Ablassen bzw. Dekantieren ande rerseits folgen kann. Hierbei hat sich insbesondere bewährt, zunächst von der Flotation oder Sedimentation des Trägers Gebrauch zu machen und dann die restlichen Zellen oder Zelltrümmer durch Filtration zu entfernen. Dabei können beide Trennmethoden in derselben Apparatur durchgeführt werden, die obendrein einfach und preis wert ist, da sie im Prinzip nur aus einem Gefäß be steht, das einen Frittenboden und einen Dekantierstut zen bzw. Ablaßhahn aufweist.The invention works particularly quickly and efficiently appropriate procedures if the carrier has the characteristics a) and b) and therefore the separation of the carrier from the cells or cell debris by combining Fil tration on the one hand and draining or decanting on the other on the other hand can follow. Here, in particular proven, initially from flotation or sedimentation of the wearer and then the rest Remove cells or debris by filtration. Both separation methods can be used in the same apparatus be carried out on top of that simple and affordable is worth it, since in principle it can only be from one vessel stands that a frit bottom and a decanting Zen or drain cock.

Sofern lösliche Zellinhaltsstoffe aus suspendierten Zellen gewonnen werden, welche die löslichen Zellin haltsstoffe nach außen abgeben, ist es sogar möglich, die suspendierten Zellen in den Fermenter zurückzulei ten und erneut für die Produktion einzusetzen.If soluble cell contents from suspended Cells are obtained which are the soluble cells release contents to the outside, it is even possible to return the suspended cells to the fermenter and used again for production.

In den nachfolgenden Beispielen ist das erfindungsge mäße Verfahren näher erläutert. In the examples below, this is fiction appropriate procedures explained in more detail.

example 1

Verwendet wurde eine Hefezellsuspension, die durch gen technologische Veränderungen der Hefe in der Lage war, ein humanes Peptid zu synthetisieren und zu exprimie ren. Die etwa 40%-ige Hefesuspension wurde im Anschluß an die Fermentation ohne weiteren Zwischenschritt homo genisiert und in einem gerührten, gekühlten Behälter mit Glasgrieß vermischt, wobei das Peptid bis zur Sät tigungsgrenze an den Glasgrieß gebunden wurde. Die Suspension wurde dann über eine Fritte mit einer Poren weite von 0,1 mm abgezogen. Die Teilchengröße des Glas grießes war größer als 500 µm im Durchmesser. Der Glas grieß wurde daher von der Fritte zurückgehalten, wäh rend die Hefezellen durch die Fritte hindurchtreten konnten. Der Glasgrieß wurde mehrfach mit seinem eige nen Volumen an Waschmedium von den verbleibenden Hefe resten gereinigt und anschließend bis zur vollständigen Klärung des Ablaufs im Durchlaufverfahren gewaschen. Eine Untersuchung ergab folgenden Verlauf der Abtren nung: 100 g Glasgrieß wurden mit 500 ml und 40%-iger Hefesuspension vermischt. Demzufolge waren 200 g Hefe zellen zu entfernen. Nach Abziehen der Suspension be fanden sich im Ablauf bereits 140 g Hefe. Beim Glas grieß verblieben somit 60 g Hefe. Nach dem ersten Wa schen mit 100 ml Waschlösung fanden sich im Ablauf 40 g Hefe. Im Glasgrieß befanden sich somit noch 20 g Hefe. Nach dem zweiten Waschen mit 100 ml Waschlösung fanden sich im Ablauf 15 g Hefe, so daß am Glasgrieß noch 5 g Hefe verblieben. Bereits nach der sechsten Waschung fanden sich sowohl im Ablauf wie am Glasgrieß weniger als 0,5 g Hefe. Danach wurde mit 500 ml im Durchfluß gewaschen. Im Ablauf fanden sich noch 0,098 g Hefe. Am Glasgrieß fanden sich 0,002 g Hefe. Das Peptid wurde von dem Glasgrieß mit einem geeigneten Lösungsmittel eluiert, wobei bereits eine 3,75-fache Anreicherung gegenüber der Suspension festgestellt wurde. Die Aus beute war ca. 10% höher als bei zweistufiger Auftren nung.A yeast cell suspension was used, which by gen technological changes the yeast was able to synthesize and express a human peptide ren. The approximately 40% yeast suspension was subsequently to the fermentation without further intermediate step homo genized and in a stirred, cooled container mixed with semolina, the peptide to the seed limit on the semolina. The Suspension was then over a frit with a pore deducted width of 0.1 mm. The particle size of the glass semolina was larger than 500 µm in diameter. The glass semolina was therefore held back by the frit, wah the yeast cells pass through the frit could. The semolina was made several times with its own volume of washing medium from the remaining yeast Remnants cleaned and then until complete Clarification of the process washed in a continuous process. An examination showed the following course of the deduction Solution: 100 g of semolina were mixed with 500 ml and 40% Yeast suspension mixed. As a result, 200 g was yeast remove cells. After removing the suspension 140 g of yeast were already found in the drain. With the glass semolina thus remained 60 g of yeast. After the first wa with 100 ml of washing solution, 40 g were found in the outlet Yeast. There was thus still 20 g of yeast in the semolina. After the second wash with 100 ml wash solution found 15 g of yeast in the drain, so that 5 g Yeast remained. After the sixth wash less were found both in the drain and on the semolina than 0.5 g of yeast. It was then flowed through with 500 ml washed. 0.098 g of yeast were found in the drain. At the Semolina found 0.002 g of yeast. The peptide was the semolina with a suitable solvent eluted, with a 3.75-fold enrichment compared to the suspension. The out loot was about 10% higher than with two-stage appearances nung.

Example 2

1000 ml eines 10%-igen Zellhomogenates wurden mit 100 ml Glasgrieß verrührt, wobei diese Menge ausreich te, das zu gewinnende Produkt zu adsorbieren. Die Ver mischung des Zellhomogenates mit dem Glasgrieß erfolgte in einem Wirbelbett. Im nächsten Schritt wurde der Glas grieß sedimentieren gelassen. Überstehende Hefesuspen sion wurde aus dem Wirbelbettreaktor mittels einer De kantieröffnung, die oberhalb des Glasgrießbettes ange bracht war, dekantiert und dann wieder auf das Ausgangs volumen aufgefüllt. Nach kurzer Verwirbelung wurde der Glasgrieß wiederum sedimentieren gelassen und der Über stand erneut dekantiert. Dieser Vorgang wurde dreimal wiederholt. Im Anschluß daran wurde der Glasgrieß, wie im Beispiel 1 beschrieben, über eine Glasfritte bis zur restlosen Entfernung der Zelltrümmer im Durchlauf ge waschen. Bei diesem kombinierten Verfahren konnten die Zelltrümmer mit 30 bis 50% geringerem Waschvolumen vom Glasgrieß entfernt werden. Die Ablösung des Produktes vom Glasgrieß erfolgte wie im Beispiel 1.1000 ml of a 10% cell homogenate were mixed with Mix 100 ml of semolina, this amount is sufficient to adsorb the product to be recovered. The Ver the cell homogenate was mixed with the semolina in a fluidized bed. The next step was the glass semolina left sedimented. Protruding yeast suspensions sion was from the fluidized bed reactor by means of a De canting opening, which is above the semolina bed was brought, decanted and then back to the exit volume filled. After a short vortex, the Glass semolina again let sediment and the over was decanted again. This was done three times repeated. Afterwards the semolina, like described in Example 1, over a glass frit to complete removal of cell debris in one go to wash. In this combined process, the Cell debris with 30 to 50% less washing volume from Glass semolina can be removed. The replacement of the product The semolina was made as in Example 1.

Claims

1. A process for the separation of soluble Zellinhaltsstof fen from suspended cell debris or from suspended cells which give the soluble cell contents to the outside by selective adsorption of the cell contents in a solid support and subsequent detachment of the cell contents from the support, characterized in that the solid Carrier is added without prior separation of the cells or cell debris using a carrier which is either

a) has at least a factor of 5 larger particle sizes than the cells or cell debris or
b) has a specific weight that differs by at least 0.2 g / l than the cells or cell debris,

whereupon the cells or cell debris are separated from the support
in case a):
by filtration through a filter medium which does let the cells or cell debris through, but not the carrier,
or in case b):
by flotation or sedimentation of the carrier and from or decanting the suspension of the cells or cell debris,
whereupon in both cases a) and b) the carrier is resuspended several times with fresh solvent or a suitable washing medium and separated again until at least 99% of the cells or cell debris have been removed from the mixture.

2. Modification of the method according to claim 1, characterized characterized in that the carrier has the features a) and b) has and the separation of the carrier from the cells or cell debris through a combination of filtration on the one hand and draining or decanting on the other he follows.

3. The method according to any one of claims 1 or 2, characterized characterized in that such carriers are used, which are suitable for affinity chromatography.