DE3430320A1 - Process for the preparation of immunoglobulin preparations with reduced complement activity - Google Patents
Process for the preparation of immunoglobulin preparations with reduced complement activityInfo
- Publication number
- DE3430320A1 DE3430320A1 DE19843430320 DE3430320A DE3430320A1 DE 3430320 A1 DE3430320 A1 DE 3430320A1 DE 19843430320 DE19843430320 DE 19843430320 DE 3430320 A DE3430320 A DE 3430320A DE 3430320 A1 DE3430320 A1 DE 3430320A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- immunoglobulin
- solution
- concentration
- polyethylene glycol
- peg
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von The invention relates to a method for producing
Immunglobulin-Präparaten mit verminderter Komplementaktivität (antigenunabhängiger Komplemantaktivierung) zur intravenösen Anwendung. Immunoglobulin preparations with reduced complement activity (more antigen-independent Complementary activation) for intravenous use.
Immunglobulin-Präparate werden durch verschiedene Aufarbeitungsverfahren aus dem Serum isoliert, wobei meist Neutralsalze oder Äthanol nach Cohn et al., J. Am. Chem. Soc., Bd. Immunoglobulin supplements are processed through various work-up procedures isolated from the serum, mostly neutral salts or ethanol according to Cohn et al., J. Am. Chem. Soc., Vol.
68 (1946), 459, zur Ausfällung verwendet werden. Ausgangsmaterial ist immer ein Pool aus dem Plasma von mindestens 1000 gesunden, freiwilligen Spendern. Diese sogenannten Standard-Immunglobuline führen bei intravenöser Anwendung zu schwerwiegenden Nebenreaktionen. Es sind zahlreiche Verfahren zur Herstellung intravenös applizierbarer Immunglobuline bekannt. Einige Präparate zur intravenösen Anwendung sind bereits auf dem Markt. Beispiel weise wurde Immunglobulin mit Pepsin oder Plasmin behandelt, wobei der Komplement-bindende und Nebenreaktionen verursachende Fc-Teil des Moleküls soweit abgespalten wurde, bis die sogenannte antikomplementäre Aktivität bzw. Komplementaktivität praktisch beseitigt war. Damit ging jedoch die natürliche Halbwertszeit von etwa 3 Wochen verloren. Eine weitere Methode besteht in der chemischen Modifizierung der Disulfid-Bindungen des Immunglobulins z.B. durch Sulfonierung oder reduktive Alkylierung, um die Komplementaktivierung zu vermindern.68 (1946), 459, can be used for the precipitation. Source material is always a pool from the plasma of at least 1000 healthy, voluntary donors. These so-called standard immunoglobulins lead to serious ones when administered intravenously Side reactions. There are numerous methods of preparation that can be administered intravenously Known immunoglobulins. Some preparations for intravenous use are already available on the market. For example, immunoglobulin was treated with pepsin or plasmin, being the complement-binding and side-reaction causing Fc part of the molecule was split off until the so-called anti-complementary activity or complement activity was practically eliminated. However, this decreased the natural half-life of about 3 weeks lost. Another method is chemical modification of the disulfide bonds of the immunoglobulin e.g. by sulfonation or reductive Alkylation to reduce complement activation.
Ferner sind Verfahren zur Herstellung von aggregatarmen bzw. Furthermore, processes for the production of low-aggregate or
aggregat freien Immunglobulin-Präparaten durch Fraktionierung mittels wasserlöslicher Polymere, insbesondere Polyäthylenglykole, bekannt. So ist beispielsweise in der US-PS 4 124 576 ein Verfahren zur Herstellung von intravenös applizierbarem Gammaglobulin mit niedriger antikomplementärer Aktivität beschrieben, bei dem die Cohn-Fraktion II mit Wasser niedriger Ionenstärke, das Albumin und 2 % Polyäthylenglykol (PEG) enthält, extrahiert wird. Sodann wird die PEG-Konzentration auf 4 % (Gew./Vol.) erhöht, und Verunreinigungen werden abgetrennt. Sodann wird Äthanol bis zu einer Konzentration von 4 bis 12 % zugegeben, wobei weitere Verunreinigungen ausgefällt werden. Danach wird das Gammaglobulin durch Zugabe von PEG bis zu einer Konzentration von 10 bis 12 % (Gew./Vol.) oder durch Zugabe von Äthanol bis zu einer Konzentration von 20 bis 30 (Vol./Vol.) bei einem pH-Wert von 7 bis 8,2 ausgefällt. Das gesamte Verfahren wird bei einer Temperatur von etwa O bis -6°C durchgerührt. aggregate-free immunoglobulin preparations by fractionation using water-soluble polymers, in particular polyethylene glycols, are known. So is for example in US Pat. No. 4,124,576 a process for the preparation of intravenously administrable Gamma globulin with low anti-complementary activity described, in which the Cohn fraction II with water of low ionic strength, the albumin and 2 % Polyethylene glycol (PEG) is extracted. Then the PEG concentration increased to 4% (w / v) and impurities are separated. Then will Ethanol added to a concentration of 4 to 12%, with further impurities be precipitated. After that, the gamma globulin is by adding PEG up to one Concentration from 10 to 12% (w / v) or by adding ethanol up to one Concentration of 20 to 30 (v / v) precipitated at a pH of 7 to 8.2. The entire process is carried out at a temperature of about 0 to -6 ° C.
Aus der JA-AS 12 001/1980 ist ein Verfahren zur Herstellung von intravenös applizierbaren Gammaglobulin bekannt, bei dem eine 1- bis 30Die Lösung von Hydroxyäthylstärke mit einem pH-Wert von 3,5 bis 8,o, insbesondere 6,5 bis 6,9, mit einer Lösung von Gammaglobulin und einer 10%'eigen PEG-Lösung versetzt wird, die entstandene Fällung von aggregiertem Gammaglobulin abgetrennt und der Überstand mit einer 20%igen PEG-Lösung versetzt wird. Ferner sind Verfahren zur Reinigung verschiedener Plasmaproteine bekannt (Vox Sang., Bd. 31 (1976), 141, und Folia Haematologica, Bd. 107'(1976), 938),bei denen mit PEG gereinigtes Immunglobulin oder eine-Lösung der Cohn-Fraktion II zur Abtrennung von aggregierten Immunglobulinen mit 6 bis 10 % Hydroxyäthylstärke und 0,5 bis 2,5 % Bentonit versetzt wird.From JA-AS 12 001/1980 a method for the preparation of intravenous Applicable gamma globulin is known in which a 1 to 30Die solution of hydroxyethyl starch with a pH of 3.5 to 8, o, in particular 6.5 to 6.9, with a solution of Gamma globulin and a 10% own PEG solution is added to the resulting precipitate separated from aggregated gamma globulin and the supernatant with a 20% PEG solution is moved. There are also methods for purifying various plasma proteins known (Vox Sang., Vol. 31 (1976), 141, and Folia Haematologica, Vol. 107 '(1976), 938), in which immunoglobulin purified with PEG or a solution of the Cohn fraction II for the separation of aggregated immunoglobulins with 6 to 10% hydroxyethyl starch and 0.5 to 2.5% bentonite is added.
Aus der JA-OS 47 628/1980 ist ein Verfahren zur Herstellung von intravenös applizierbarem Gammaglobulin bekannt, bei dem 60 bis 90 g/Liter PEG zu einer Lösung von Immunglobulin gegeben werden. Die entstandene Fällung wird abgetrennt und die PEG-Konzentration wird auf 70 bis 100 g/Liter eingestellt.From JA-OS 47 628/1980 is a method for the preparation of intravenous gamma globulin that can be administered is known in which 60 to 90 g / liter PEG becomes a solution of immunoglobulin. The resulting precipitation is separated and the PEG concentration is adjusted to 70 to 100 g / liter.
Es wird das gewünschte Gammaglobulin als Fällung erhalten.The desired gamma globulin is obtained as a precipitate.
Als der JA-AS 38 932/1980 ist ein Verfahren zur Reinigung von Immunglobulin bekannt, bei dem aggregierte Immunglobuline in Gegenwart von 4 bis 4,8 ffi eines Polyalkylenglykols mit einem Molekulargewicht von 6000 bie einem pH-Wert von 4 bis 5 abgetrennt werden.As the JA-AS 38 932/1980 is a method for cleaning Immunoglobulin known in which aggregated immunoglobulins in the presence of 4 to 4.8 ffi one Polyalkylene glycol with a molecular weight of 6000 at a pH of 4 to 5 are separated.
Schließlich ist aus der JA-OS 206 625/1982 ein Verfahren zur Herstellung von Immunglobulin G bekannt, das keine antikomplementäre Aktivität besitzt, bei dem eine Lösung der Cohn-Fraktion II mit 1 bis 3 ß eines Polyäthylenglykol-Polypropylenglykol-Blockcopolymers versetzt und unlösliche Substanzen mittels Aktivkohle als -Filtrierhilfe abfiltriert werden.Finally, from the JA-OS 206 625/1982 a method for production known from immunoglobulin G, which has no anti-complementary activity which is a solution of the Cohn fraction II with 1 to 3 β of a polyethylene glycol-polypropylene glycol block copolymer and insoluble substances are filtered off using activated charcoal as a filter aid will.
Erfindungsgemäß wurden die Bedingungen untersucht, bei denen aggregierte Immunglobuline aus einem Immunglobulin-laterial, z. B der Cohn-Fraktion II, mit PEG 4000 abgetrennt'werden. PEG 4000 entspricht Macrogol 4000 des Japanischen Arzneibuches.According to the invention, the conditions were examined under which aggregated Immunoglobulins from an immunoglobulin material, e.g. B of the Cohn Group II, with PEG 4000 are separated. PEG 4000 corresponds to Macrogol 4000 of the Japanese Pharmacopoeia.
Dabei wurde folgendes festgestellt:- Bei der Abtrennung von aggregierten Immunglobulinen aus, rohem Immunglobulin mit PEG 4000 ist die Zusammensetzung und der pH-Wert des Lösungsmittels von entscheidender Bedeutung. Die Gegenwart von Aminoessigsäure (Glykokoll)ermöglicht die selektive Ausfällung der aggregierten Immunglobuline. Auf diese Weise wird reines Immunglobulin erhalten, das intravenös gegeben werden kann.The following was found: - When separating aggregated Immunoglobulins from, raw immunoglobulin with PEG 4000 is the composition and the pH of the solvent is critically important. The presence of aminoacetic acid (Glycocolla) enables the selective precipitation of the aggregated immunoglobulins. In this way pure immunoglobulin is obtained, which is given intravenously can.
Durch anschließende Behandlung mit einem Anionenaustauscher wird die antikomplementäre Aktivität des Immunglobulins noch weiter vermindert. Zur Abtrennung von PEG aus dem gereinigten Immunglobulin wird das erhaltene Immunglobulin entweder durch Äthanol-Fällung in der Kälte ausgefällt oder es wird mit einem Kationenaustauscher- behandelt. Der beladene Kationenaustauscher wird danach gründlich gewaschen. Sodann' wird das adsorbierte Immunglobulin mit einer Lösung hoher Salzkonzentration, z. B. einer konzentrierten -Kochsalzlösung, eluiert. Man erhält ein hochreines Immunglobulin zur intravenösen Gabe mit extrem niedriger antikomplementärer Aktivität.By subsequent treatment with an anion exchanger, the anti-complementary activity of the immunoglobulin is further reduced. For separation of PEG from the purified immunoglobulin, the immunoglobulin obtained is either precipitated by ethanol precipitation in the cold or it is with a cation exchanger treated. The loaded cation exchanger is then washed thoroughly. Then ' the adsorbed immunoglobulin is treated with a solution of high salt concentration, e.g. B. a concentrated saline solution, eluted. A highly pure immunoglobulin is obtained for intravenous administration with extremely low anti-complementary activity.
Die Erfingung betrifft somit den in den.Patentansprüchen ge- kennzeichneten Gegenstand. Vorzugsweise wird als rohes Bmwnglobulin die Cohn-Fraktion Is, d h. Standard-Bmwnglobulin -, eingesetzt.The invention thus relates to the patent claims marked Object. The Cohn fraction Is, ie. Standard Bmwnglobulin -, used.
Das erfindungsgemäße Verfahren wird nachstehend noch näher erläutert.The method according to the invention is explained in more detail below.
Eine Immunglobulinpaste oder ein lyophylisiertes Immunglobulin-Präparat, z. B. die Cohn-Fraktion II, wird in einer Kochsalzlösung gelöst, die Aminoessigsäure enthält. Die Proteinkonzentration wird auf einen Wert von 3,0 bis 5,0 % (Gew./Vol.) und der pH-Wert auf 6,0 bis 7,0 eingestellt. Sodann wird die erhaltene Lösung mit PEG 4000 auf eine Konzentration von 6,0 bis 7,0 % (Gew./Vol.) eingestellt.An immunoglobulin paste or a lyophilized immunoglobulin preparation, z. B. the Cohn fraction II, the aminoacetic acid is dissolved in a saline solution contains. The protein concentration is set to a value of 3.0 to 5.0% (w / v) and the pH adjusted to 6.0 to 7.0. Then the solution obtained is with PEG 4000 adjusted to a concentration of 6.0 to 7.0% (w / v).
Die entstandene Fällung von aggregierten Immunglobulinen wird abgeschleudert.The resulting precipitation of aggregated immunoglobulins is thrown off.
Die Konzentrationen an Aminoessigsäure(G.lykokoll> und Natriumchlorid betragen vorzugsweise 0,5 bis'2,0 % (Gew./Vol.) bzw.The concentrations of aminoacetic acid (G.lykocoll> and sodium chloride are preferably 0.5 to 2.0% (w / v) or
0,5 bis 1,5 ffi (Gew./Vol.). Aminoessigsäure-Konzentrationen außerhalb des angegebenen Bereichs ergeben unbefriedigende Ergebnisse bei der fraktionierenden Fällung.0.5 to 1.5 ffi (w / v). Aminoacetic acid concentrations outside of the specified range give unsatisfactory results for fractionating Precipitation.
Danach wird der pH-Wert des überstandes auf 7,0 bis 8,o -eingestellt und PEG 4000 wird bis zu einer Konzentration von 10,0 bis 15,0 % (Gew. Jol.) zugegeben. Die entstandene Fällung, die hauptsächlich aus monomerem Immunglobulin besteht, wird abgeschleudert.The pH of the supernatant is then adjusted to 7.0 to 8.0 and PEG 4000 is added to a concentration of 10.0 to 15.0% (wt. Jol.). The resulting precipitate, which consists mainly of monomeric immunoglobulin, is thrown off.
Die erhaltene Fällung wird in Q,9Xiger Kochsalzlösung gelöst, die einen Stabilisator für die Gefriertrocknung enthält, z.B. 2,5 ffi (Gew./Vol.) Glucose. Die erhaltene Lösung wird filtriert, sterilisiert und gefriergetrocknet. Es wird ein Immunglobulin-Trockenpräparat erhalten.The precipitate obtained is dissolved in 9% sodium chloride solution which contains a stabilizer for freeze drying, e.g. 2.5 ffi (w / v) glucose. The resulting solution is filtered, sterilized and freeze-dried. It will receive a dry immunoglobulin preparation.
Das erhaltene Immunglobulin-Präparat hat eine niedrige antikomplementäre Aktivität (Komplementaktivität) und kann intravenös gegeben werden. Das Präparat kann weiter gereinigt werden. Zu diesem Zweck wird die Fällung z.B. in einer 0,03 bis 0,07 molaren Kochsalzlösung oder in einer 0,03 bis 0,06 molaren Kochsalzlösung gelöst, die 0,01 molar Phosphatpuffer enthält, und die Proteinkonzentration wird auf 5,0 bis 10,0 ffi (Gew./Vol.) und der pH-Wert auf 7,0 bis 7,5 eingestellt. Sodann wird die erhaltene Lösung auf eine mit einem Anionenaustauscher gefüllte Säule aufgesetzt. Der Anionenaustauscher wurde vorher mit der gleichen Lösung äquilibriert. Als'Anionenaustauscher kann z.B. DEAE Sephadex A-50, DEAE Sepharose CL-6B, QAE Sephadex A-50, DEA Cellulofine AH oder Spherosil DEA verwendet werden. Durch diese Behandlung wird ein Immunglobulin-Präparat mit noch niedrigerer RomplementakNtivität erhalten.The immunoglobulin preparation obtained has a low level of anti-complementary Activity (complement activity) and can given intravenously. The preparation can be cleaned further. For this purpose the precipitation is e.g. in a 0.03 to 0.07 molar saline solution or in a 0.03 to 0.06 molar Dissolved saline solution containing 0.01 molar phosphate buffer and the protein concentration is adjusted to 5.0 to 10.0 ffi (w / v) and the pH to 7.0 to 7.5. The solution obtained is then filled with an anion exchanger Pillar put on. The anion exchanger was previously equilibrated with the same solution. DEAE Sephadex A-50, DEAE Sepharose CL-6B, QAE Sephadex A-50, DEA Cellulofine AH or Spherosil DEA can be used. Through this treatment an immunoglobulin preparation with even lower complement activity is obtained.
In Japan wird die antikomplementäre Aktivität als befriedigend angesehen, wenn nicht mehr als 20 CH50 Komplement verbraucht werden beim Vermischen der gleichen Mengen einer 50 mg/ml Lösung von Immunglobulin und einer 100 CH50/ml Lösung von Komplement und einstündiges Stehen des Gemisches bei 370C. Der Mindestwert des biologischen Produkts beträgt nicht mehr als 0,4 CH50/mg Protein. Dementsprechend soll ein Immunglobulin-Präparat zur intravenösen Applikation eine antikomplementäre Aktivität von nicht mehr als 0,4 CH50/mg Protein aufweisen.In Japan, the anti-complementary activity is considered satisfactory, if not more than 20 CH50 complement are consumed when mixing the same Quantities of a 50 mg / ml solution of immunoglobulin and a 100 CH50 / ml solution of Complement and stand the mixture at 370C for 1 hour. The minimum value of the biological Product does not exceed 0.4 CH50 / mg protein. Accordingly, an immunoglobulin preparation should for intravenous administration an anti-complementary activity of not more than Have 0.4 CH50 / mg protein.
Der PEG-Gehalt des Präparats kann herabgesetzt werden, wenn man eine auf die vorstehend beschriebene Weise erhaltene Lösung von Immunglobulin, d.h. eine durch Auflösen der PEG-Fällung oder durch Behandlung mit dem Anionenaustauscher erhaltene Lösung bei niedriger Temperatur mit Äthanol auf 25 W nach der Methode von Cohn eingestellt und die erhaltene Fällung abschleudert.The PEG content of the preparation can be reduced if you have a solution of immunoglobulin obtained in the manner described above, i.e. a by dissolving the PEG precipitate or by treatment with the anion exchanger obtained solution at low temperature with ethanol to 25 W according to the method set by Cohn and the precipitate obtained is thrown off.
Der PEG-Gehalt kann auch dadurch vermindert werden, daß man das Immunglobulin in einer 0,03 bis 0,07 molaren Lösung von Natriumchlorid oder einer einen Phosphatpuffer enthaltenden Natriumchloridlösung löst, die erhaltene Lösung bei einem pH-Wert von 5,0 bis 6,o mit einem Kationenaustauscher behandelt, wie CM-Sephadex C-50, CM Sepharose CL-6B, SP Sephadex C-50, CM-Cellulofine oder Spherosil C , um das Immunglobulin am Kationenaustauscher zu adsorbieren. Danach wird die Austauschersäule zur Abtrennung des PEG gewaschen und sodann das Dmxnglobulin mit einer Lösung hoher Salzkonzentration, z.B. einer 0,15 molaren Kochsalzlösung, bei einem pH-Wert von 7,0 bis 7,5 eluiert.The PEG content can also be reduced by having the immunoglobulin in a 0.03 to 0.07 molar solution of Sodium chloride or one a sodium chloride solution containing phosphate buffer dissolves the resulting solution Treated with a cation exchanger at a pH value of 5.0 to 6, such as CM-Sephadex C-50, CM Sepharose CL-6B, SP Sephadex C-50, CM-Cellulofine or Spherosil C, um to adsorb the immunoglobulin on the cation exchanger. Then the exchange column washed to separate the PEG and then the Dmxnglobulin with a solution higher Salt concentration, e.g. a 0.15 molar saline solution, at a pH of 7.0 to 7.5 eluted.
In den Beispielen wird das erfindungsgemäße verfahren weiter erläutert.The method according to the invention is explained further in the examples.
PEG bedeutet Polyäthylenglykol 4000.PEG means polyethylene glycol 4000.
Beispiel 1 300 g einer durch Fraktionierung mit kaltem Äthanol nach Cohn erhaltenen Immunglobulinpaste Fraktion II werden in einer 0,5eigen Lösung von Aminoessigsäure gelöst, die 0,9 ffi Natriumchlorid enthält. Der pH-Wert der erhaltenen Lösung wird mit 0,5n Salzsäure auf 6,o eingestellt. Sodann wird die Lösung auf 1000 ml verdünnt. Die Proteinkonzentration beträgt 3,8 % und die antikomplementäre Aktivität 1000 Einheiten pro mg. Example 1 300 g of one after fractionation with cold ethanol Cohn obtained immunoglobulin paste fraction II are in a 0.5% solution of Dissolved aminoacetic acid, which contains 0.9 ffi sodium chloride. The pH of the obtained Solution is adjusted to 6.0 with 0.5N hydrochloric acid. Then the solution becomes 1000 ml diluted. The protein concentration is 3.8% and the anti-complementary activity 1000 units per mg.
Die erhaltene Lösung wird tropfenweise und unter langsamem Rühren mit 177 ml einer eigen PEG-Lösung versetzt (PEG 6,0 f). Die entstandene Fällung wird abzentrifugiert. Danach wird der pH-Wert des Überstandes mit 0,5n Natronlauge auf 7,5 eingestellt. Hierauf werden 260 ml einer eigen PEG-Lösung zugegeben (PEG 12 ) und die entstandene Fällung wird abzentrifugiert, Die erhaltene Fällung enthält keine aggregierten Immunglobuline und zeigt eine antikomplementäre Aktivität von 0,3 Einheiten pro mg nach dem Auflösen in einer 2,5eigen Glucoselösung, die 0,9 ß Natriumchlorid enthält. Die erhaltene Lösung wird filtriert, sterilisiert und gefriergetrocknet. Es wird ein Trockenpräparat erhalten, das nach dem Auflösen in einem geeigneten Lösungsmittel intra- venös appliziert werden kann.The resulting solution is added dropwise and with slow stirring mixed with 177 ml of a proprietary PEG solution (PEG 6.0 f). The resulting precipitation is centrifuged off. Then the pH of the supernatant is adjusted with 0.5N sodium hydroxide solution set to 7.5. Then 260 ml of a proprietary PEG solution are added (PEG 12) and the resulting precipitate is centrifuged off. The precipitate obtained contains does not have aggregated immunoglobulins and shows anti-complementary activity of 0.3 units per mg after dissolving in a 2.5% glucose solution which is 0.9 ß contains sodium chloride. The resulting solution is filtered, sterilized and freeze dried. A dry preparation is obtained which, after dissolving in a suitable solvent intra- can be administered venously.
Beispiel 2 100 g der Immunglobulin-Cohn-Fraktion II als getrocknetes Pulver werden in einer 1%igen Lösung von Aminoessigsäure gelöst, die 0,9 ß Natriumchlorid enthält. Danach wird der pH-Wert der erhaltenen Lösung mit 0,5n Salzsäure auf 6,5 eingestellt und die Lösung auf 1000 ml verdünnt. Die Proteinkonzentration beträgt 3,9 ffi und die antikomplementäre Aktivität 8 Einheiten pro mg. Example 2 100 g of the immunoglobulin Cohn fraction II as dried Powders are dissolved in a 1% solution of aminoacetic acid containing 0.9 ß sodium chloride contains. The pH of the solution obtained is then adjusted to 6.5 with 0.5N hydrochloric acid set and the solution diluted to 1000 ml. The protein concentration is 3.9 ffi and the anti-complementary activity 8 units per mg.
Hierauf wird die Lösung unter langsamem Rühren mit 194 ml einer 40eigen PEG-Lösung versetzt (PEG 6,5 %). Die entstandene Fällung wird abzentrifugiert. $er pH-Wert des Überstandes wird mit 0,5n Natronlauge auf 7,5 eingestellt. Danach werden 250 ml einer 40%igen PEG-Lösung zugegeben (PEG-13 ), und die erhaltene Fällung wird abzentrifugiert.The solution is then self-contained with 194 ml of a 40 while stirring slowly PEG solution added (PEG 6.5%). The resulting precipitate is centrifuged off. $ er The pH of the supernatant is adjusted to 7.5 with 0.5N sodium hydroxide solution. After that will be 250 ml of a 40% PEG solution are added (PEG-13), and the resulting precipitate is centrifuged off.
Das erhaltene Sediment wird in 200 ml einer 0,5%igen Lösung von Glykokoll gelöst, die O,5 % Natriumchlorid enthält. Die erhaltene Lösung hat einen pH-Wert von 7,2 und eine antikomplementäre Aktivität von 0,3 Einheiten pro mg. Sie wird auf eine DEAE-Sephadex A-fO Säule (Durchmesser 5 cm, Länge 15 cm) aufgesetzt, die mit der gleichen Lösung vorher äquilibriert worden war. Nach dem Passieren durch die Säule wird die Lösung auf eine Proteinkonzentration von 5 , eine Glucosekonzentration von 2,5 % und eine Natriumchlorid-Konzentration von 0,9 ffi eingestellt. Die antikomplementäre Aktiv tät beträgt 0,2 Einheiten pro mg. Die Lösung wird filtriert, sterilisiert und gefriergetrocknet. Es wird ein Trockenpräparat erhalten, das nach dem Lösen in einem geeigneten Lösung mittel intravenös appliziert werden kann.The sediment obtained is in 200 ml of a 0.5% solution of glycocolla dissolved, which contains 0.5% sodium chloride. The solution obtained has a pH value of 7.2 and an anti-complementary activity of 0.3 units per mg. she will placed on a DEAE-Sephadex A-fO column (diameter 5 cm, length 15 cm), the previously equilibrated with the same solution. After passing through the column will bring the solution to a protein concentration of 5, a glucose concentration of 2.5% and a sodium chloride concentration of 0.9 ffi. The anti-complementary Activity is 0.2 units per mg. The solution is filtered, sterilized and freeze-dried. A dry preparation is obtained, which after dissolving can be administered intravenously in a suitable solution.
Beispiel 3 Eine auf die gleiche Weise wie in Beispiel 2 erhaltene Immunglobulin-Lösung wird mit 0,9%iger Natriumchloridlösung auf 600 ml eingestellt und abgekühlt. Sodann werden tropfenweise 530 ml 53,3eines wäßriges Äthanol nach der Methode von Cohn zugegeben (Äthanol-Konzentration 25 %). Die entstandene Fällung wird abzentrifugiert. Das Sediment wird in einer wäßrigen Lösung gelöst. Die Endkonzentration dieser Lösung an Glucose beträgt 2,5 %> an Natriumchlorid 0,9 ß und an Protein 5,0 %. Die erhaltene Lösung hat eine antikomplementäre Aktivität von 9 Einheiten pro ml. Example 3 One obtained in the same manner as in Example 2 Immunoglobulin solution is made with 0.9% sodium chloride solution on 600 ml set and cooled. Then 530 ml of 53.3 of an aqueous solution are added dropwise Ethanol added according to the Cohn method (ethanol concentration 25%). The resulting Precipitation is centrifuged off. The sediment is dissolved in an aqueous solution. The final glucose concentration in this solution is 2.5% sodium chloride 0.9 ß and of protein 5.0%. The solution obtained has anti-complementary activity of 9 units per ml.
Die erhaltene Lösung wird filtriert, sterilisiert und gefriergetrocknet. Es wird ein Trockenpräparat verhalten, das nach dem Auflösen in einem geeigneten Lösungsmittel intravenös appliziert werden kann.The resulting solution is filtered, sterilized and freeze-dried. It will behave a dry preparation, which after dissolving in a suitable Solvent can be administered intravenously.
Eine auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 erhaltene Immunglobulin-Lösung wird auf die vorstehend beschriebene Weise behandelt. Die erhaltene Lösung hat eine antikomplementäre Aktivität von 14 Einheiten pro ml.An immunoglobulin solution obtained in the same manner as in Example 1 is treated in the manner described above. The solution obtained has a anti-complementary activity of 14 units per ml.
Beispiel 4 Eine auf die gleiche Weise wie in Beispiel 2 erhaltene Immunglobulin-Lösung wird auf eine Natriumchlorid-Konzentration von 0,25 ffi und eine Glykokoll-Konzentration von 0,25 ß eingestellt. Der pH-Wert wird auf 5,5 eingestellt. Sodann wird die Lösung auf eine mit CM-Sepharose CL-6B gefüllte Säule mit einem Durchmesser von 5,0 cm und einer Länge von 15 cm aufgesetzt. Die Säule ist vorher mit der gleichen Lösung äquilibriert worden. Das Immunglobulin wird an der Füllung adsorbiert. Anschließend wird die Säule mit der zur Aquilibrierung verwendeten Lösung gründlich gewaschen. Danach wird das adsorbierte Immunglobulin mit einer 2,5eigen Lösung von Glucose mit 0,9 % Natriumchlorid und einem pH-Wert von 7,0 eluiert. Example 4 One obtained in the same manner as in Example 2 Immunoglobulin solution is brought to a sodium chloride concentration of 0.25 ffi and set a glycocolla concentration of 0.25 ß. The pH is adjusted to 5.5. The solution is then applied to a column filled with CM-Sepharose CL-6B with a Attached with a diameter of 5.0 cm and a length of 15 cm. The pillar is before equilibrated with the same solution. The immunoglobulin is attached to the filling adsorbed. The column is then filled with the solution used for equilibration washed thoroughly. The adsorbed immunoglobulin is then self-contained with a 2.5 Solution of glucose eluted with 0.9% sodium chloride and pH 7.0.
Das Eluat wird auf eine Proteinkonzentration von 5 ffi eingestellt. Es zeigt eine antikomplementäre Aktivität von 8 Ein- heiten. Die Lösung wird filtriert, sterilisiert und gefriergetrocknet. Es wird ein Trockenpräparat erhalten, das nach dem Auflösen in einem geeigneten Lösungsmittel intravenös gegeben werden kann.The eluate is adjusted to a protein concentration of 5 ffi. It shows an anti-complementary activity of 8 in- units. the Solution is filtered, sterilized and freeze-dried. It becomes a dry preparation obtained intravenously after dissolving in a suitable solvent can be.
Eine auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 hergestellte Immunglobulin-Lösung wird auf die vorstehend beschriebene Weise behandelt. Die erhaltene Lösung. zeigt eine antikomplementäre Aktivität von 13 Einheiten pro ml.An immunoglobulin solution prepared in the same manner as in Example 1 is treated in the manner described above. The solution obtained. shows an anti-complementary activity of 13 units per ml.
Claims (4)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14968883A JPS6042336A (en) | 1983-08-18 | 1983-08-18 | Production of immunoglobulin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE3430320A1 true DE3430320A1 (en) | 1985-03-28 |
Family
ID=15480636
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19843430320 Withdrawn DE3430320A1 (en) | 1983-08-18 | 1984-08-17 | Process for the preparation of immunoglobulin preparations with reduced complement activity |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6042336A (en) |
| DE (1) | DE3430320A1 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3641115A1 (en) * | 1986-12-02 | 1988-06-16 | Lentia Gmbh | METHOD FOR PRODUCING AN INTRAVENOUS APPLICABLE AND STABLE IN LIQUID FORM IMMUNOGLOBULINS |
| US5525519A (en) * | 1992-01-07 | 1996-06-11 | Middlesex Sciences, Inc. | Method for isolating biomolecules from a biological sample with linear polymers |
| US7138120B2 (en) | 1998-06-09 | 2006-11-21 | Statens Serum Institut | Process for producing immunoglobulins for intravenous administration and other immunoglobulin products |
| US8715652B2 (en) | 2003-11-18 | 2014-05-06 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparations having increased stability |
| US9241897B2 (en) | 2010-02-04 | 2016-01-26 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparation |
| US9422364B2 (en) | 2010-02-26 | 2016-08-23 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparation and storage system for an immunoglobulin preparation |
| US9631007B2 (en) | 2005-05-25 | 2017-04-25 | Hoffmann-La-Roche Inc. | Method for the purification of antibodies |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3825429C2 (en) * | 1988-07-27 | 1994-02-10 | Biotest Pharma Gmbh | Method for producing an intravenously administrable polyclonal immunoglobulin preparation with a high IgM content |
| US6441144B1 (en) * | 1999-05-20 | 2002-08-27 | Alpha Therapeutic Corporation | Method for repairing dual virally inactivated immune globulin for intravenous administration |
| JP2005320248A (en) * | 2002-04-22 | 2005-11-17 | Mitsubishi Pharma Corp | Method for producing immunoglobulin preparation |
-
1983
- 1983-08-18 JP JP14968883A patent/JPS6042336A/en active Granted
-
1984
- 1984-08-17 DE DE19843430320 patent/DE3430320A1/en not_active Withdrawn
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3641115A1 (en) * | 1986-12-02 | 1988-06-16 | Lentia Gmbh | METHOD FOR PRODUCING AN INTRAVENOUS APPLICABLE AND STABLE IN LIQUID FORM IMMUNOGLOBULINS |
| US4880913A (en) * | 1986-12-02 | 1989-11-14 | Schwab & Co. Ges.M.B.H. | Process for the preparation of an immunoglobulin which can be administered intravenously and is stable in liquid form |
| US5525519A (en) * | 1992-01-07 | 1996-06-11 | Middlesex Sciences, Inc. | Method for isolating biomolecules from a biological sample with linear polymers |
| US5599719A (en) * | 1992-01-07 | 1997-02-04 | Middlesex Sciences, Inc. | Method for isolating biomolecules from a biological sample with linear polymers |
| US7138120B2 (en) | 1998-06-09 | 2006-11-21 | Statens Serum Institut | Process for producing immunoglobulins for intravenous administration and other immunoglobulin products |
| US8906368B2 (en) | 2003-11-18 | 2014-12-09 | Zlb Behring Ag | Immunoglobulin preparations having increased stability |
| US8715652B2 (en) | 2003-11-18 | 2014-05-06 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparations having increased stability |
| US9631007B2 (en) | 2005-05-25 | 2017-04-25 | Hoffmann-La-Roche Inc. | Method for the purification of antibodies |
| NO345362B1 (en) * | 2005-05-25 | 2020-12-28 | Hoffmann La Roche | Method for purification of antibodies |
| US11034754B2 (en) | 2005-05-25 | 2021-06-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method for the purification of antibodies |
| US9241897B2 (en) | 2010-02-04 | 2016-01-26 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparation |
| US10137197B2 (en) | 2010-02-04 | 2018-11-27 | Csl Behring Ag | Process for preparing an immunoglobulin preparation |
| US9422364B2 (en) | 2010-02-26 | 2016-08-23 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparation and storage system for an immunoglobulin preparation |
| US10434176B2 (en) | 2010-02-26 | 2019-10-08 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparation and storage system for an immunoglobulin preparation |
| US11419936B2 (en) | 2010-02-26 | 2022-08-23 | Csl Behring Ag | Immunoglobulin preparation and storage system for an immunoglobulin preparation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0582367B2 (en) | 1993-11-18 |
| JPS6042336A (en) | 1985-03-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0447585B1 (en) | Process for manufacturing an intravenously tolerant immunoglobulin-G preparation | |
| DE68922358T2 (en) | Chromatographic separation of plasma proteins, in particular factor VIII, Willebrand factor, fibronectin and fibrinogen. | |
| DE2801123C2 (en) | Process for the production of a serum protein preparation which can be administered intravenously | |
| EP0352500B1 (en) | Method for the production of a polyclonal immunoglobulin-based intravenous preparation with a high IgM content . | |
| EP0013901B1 (en) | Process of preparation of an intravenous immunoglobulin solution, containing concentrated igm | |
| DE2936047C2 (en) | ||
| DE3927111C3 (en) | Process for the preparation of unmodified intravenous IgM and / or IgA-containing immunoglobulin preparations | |
| EP0122909A1 (en) | Fraction containing immunoglobulin-G | |
| DE69326227T2 (en) | Process for the isolation of highly enriched factors IX, X and II from prothrombin complex or human plasma | |
| DE2459291A1 (en) | PROCESS FOR THE SIMULTANEOUS MANUFACTURING OF THREE THERAPEUTICALLY USABLE PRODUCTS FROM ONE BASE MATERIAL | |
| DE3641115A1 (en) | METHOD FOR PRODUCING AN INTRAVENOUS APPLICABLE AND STABLE IN LIQUID FORM IMMUNOGLOBULINS | |
| DE3786832T2 (en) | Process for the preparation of immunoglobulin preparations for intravenous injection. | |
| DE3430320A1 (en) | Process for the preparation of immunoglobulin preparations with reduced complement activity | |
| EP0111777B1 (en) | Plasma protein solution with a clotting activity, process for its preparation and its use in the treatment of disorders of the hemostatic system | |
| DE2127159A1 (en) | Process for fractionation of plasma proteins | |
| EP0085747B2 (en) | Intravenously administrable human immunoglobuline and process for its preparation | |
| DE3686390T2 (en) | METHOD FOR THE PRODUCTION OF ANTIHAEMOPHIL FACTOR (AHF) BY REFRIGERATION AND FOR IMPROVING THE SOLUBILITY OF THE PRODUCED AHF PRODUCT. | |
| DE2742150C2 (en) | ||
| DE2658334C3 (en) | Process for the preparation of immunoglobulin preparations with reduced complement activity and a medicament containing them | |
| EP0123029B1 (en) | Process for the production of a solution of igg-immunoglobulin free of secondary effect for intravenous application | |
| EP0120835B1 (en) | Process for the inactivation of incompatibility inducing substances | |
| CH630643A5 (en) | Process for concentrating a placenta-specific glycoprotein. | |
| CH628813A5 (en) | Process for obtaining immunoglobulin | |
| DE3001187C2 (en) | ||
| DE1940130C2 (en) | Process for the purification of insulin, insulin purified by this process and its use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8128 | New person/name/address of the agent |
Representative=s name: VOSSIUS, V., DIPL.-CHEM. DR.RER.NAT. TAUCHNER, P., |
|
| 8141 | Disposal/no request for examination |