DE3405371A1

DE3405371A1 - Process for the preparation of trehalose esters

Info

Publication number: DE3405371A1
Application number: DE19843405371
Authority: DE
Inventors: Hans-Jürgen Dr. 2848 Vechta Hofmann; Siegmund Dr. 3300 Braunschweig Lang; Walter Dr. 3500 Kassel Lindörfer; Egbert Dr. 2350 Neumünster Ristau; Kai-Udo Dr. 2847 Barnstorf Sewe; Fritz Prof. Dr. 3300 Braunschweig Wagner
Original assignee: Wintershall AG
Current assignee: Wintershall AG
Priority date: 1982-12-27
Filing date: 1984-02-15
Publication date: 1985-09-05
Also published as: DE3405371C2

Abstract

Trehalose esters are obtained in high yields using a moist biomass, which has been cultivated and separated from the substrate by conventional processes, in a sodium chloride solution which contains as sole nutrient an oxidisable hydrocarbon substrate and is aerated.

Description

"Verfahren zur Herstellung von Trehaloseester""Process for the preparation of trehalose ester"

Zusatz zu DE-PS 32 48 167 (DE-Patentanmeldung P 32 48 167.5-42) Trehaloselipide sind als grenzfächenaktive Glykolipide bekannt, die mittels Mikroorganismen erhalten werden können. Wachsende Kulturen von Mikroorganismen der Gattungen Athrobacter, Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia und Rhoducoccus bilden auf der Basis von Kohlenwasserstoffen Trehaloselipide. Ein entsprechendes Verfahren ist beispielsweise in der DE-PS 28 05 823 beschrieben. Addition to DE-PS 32 48 167 (DE patent application P 32 48 167.5-42) Trehalose lipids are known as interface-active glycolipids, which are obtained by means of microorganisms can be. Growing cultures of microorganisms of the genera Athrobacter, Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia and Rhoducoccus form on the basis of Hydrocarbons trehalose lipids. A corresponding method is, for example in DE-PS 28 05 823 described.

Auch wachsende Kulturen von Rhodococcus erythropolis bilden in Gegenwart von Kohlenwasserstoffen, insbesondere n-Paraffinen, Trehalose-6,6'-dicorynomycolate, Trehalose-6-monocorynomycolate und Trehalose-6,6'-diacylate, wie Kretschmer et al in Appl. Environ. Microbiol. 44, (1982), Seiten 864 bis 870 beschreiben.Also growing cultures of Rhodococcus erythropolis are forming in the presence of hydrocarbons, especially n-paraffins, trehalose-6,6'-dicorynomycolate, Trehalose-6-monocorynomycolate and trehalose-6,6'-diacylate, such as Kretschmer et al in Appl. Environ. Microbiol. 44, (1982), pages 864 to 870.

Neben diesen nichtionogenen Mono- bzw. Diestern der Trehalose werden nach der Veröffentlichung von Batrakov et al in Chem. Phys. Lipides 29, (1981), Seiten 241 bis 266 zusätzlich 2,2',3,6-Tetraester der Trehalose von wachsenden Kulturen des Mycobakterium paraffinicum aus n-Paraffinen gebildet.In addition to these nonionic mono- or diesters of trehalose after the publication by Batrakov et al in Chem. Phys. Lipides 29, (1981), Pages 241 to 266 additionally 2,2 ', 3,6-tetraesters of trehalose from growing cultures of the Mycobacterium paraffinicum formed from n-paraffins.

Die DE-PS .......... (DE-Patentanmeldung P 32 48 167.5-42) schlägt ein Verfahren vor, nach dem wachsende Kulturen von Rhodococcus erythropolis DSM 43 215 bzw. Athrobacter spec. M 301 (DSM 2567) oder Corynebacterium spec. M 302 (DSM 2568) in Gegenwart von Kohlenwasserstoffen Trehalose-6,6'-dicorynomycolate und anionische Trehalose-2,2',3,4-tetraester produzieren, wobei eine Gesamtkonzentration an Trehaloseestern von etwa 5 g/l in der Kultursuspension erreicht werden kann. Unter Züchtungsbedingungen, die das Wachstum der Mikroorganismen einschränken, kann die erreichbare Gesamtkonzentration an Trehaloselipiden auf 10,8 g/l Kultursuspension gesteigert werden.DE-PS .......... (DE patent application P 32 48 167.5-42) suggests a process before, after growing cultures of Rhodococcus erythropolis DSM 43 215 or Athrobacter spec. M 301 (DSM 2567) or Corynebacterium spec. M 302 (DSM 2568) in the presence of hydrocarbons trehalose-6,6'-dicorynomycolate and anionic trehalose-2,2 ', 3,4-tetraester produce, being a total concentration of trehalose esters of about 5 g / l can be achieved in the culture suspension. Under breeding conditions that restrict the growth of the microorganisms the achievable total concentration of trehalose lipids to 10.8 g / l culture suspension can be increased.

Hieraus ergab sich die Aufgabe, Möglichkeiten für eine weitere Steigerung der Ausbeute an Trehaloselipiden, und zwar bezogen sowohl auf die eingesetzte Zellmasse als auch auf das eingesetzte Kohlenwasserstoffsubstrat, zu suchen.This gave rise to the task of finding ways to increase it further the yield of trehalose lipids, both based on the cell mass used as well as the hydrocarbon substrate used.

In Abänderung des Verfahrens zur Herstellung von Trehaloseestern, in denen verschiedene organische Säuren esterartig mit einem Trehalosemolekül verknüpft sind, mittels Trehaloseester produzierenden und n- Alkan verwertenden Mikroorganismen in einem Kohlenwasserstoffe enthaltenden, wäßrigen Medium mit einem bestimmten pH-Wert bei einer Temperatur von unter 50°C und anschließender Isolierung der Trehaloseester aus der Kultursuspension nach DE-PS ............. (DE-Patentanmeldung P 32 48 167.5-42), wurde gefunden, daß diese Ausbeutesteigerung erreicht werden kann, wenn eine Zellfeuchtmasse, die in an sich bekannter Weise durch Züchten erhalten und vom Substrat abgetrennt ist, in einer wäßrigen Natriumchloridlösung mit von 0,1 bis 3,5 Gew,- NaCl-Gehalt suspendiert und dieser Suspension n-Paraffin zugesetzt wird, worauf dieses Gemisch bei einer Temperatur von 10 bis 45 0C unter Konstanthaltung eines pH-Wertes von 3 bis 8 unter Durchlüftung bewegt wird, bis das n-Paraffin verbraucht ist.Modifying the process for the production of trehalose esters, in which various organic acids are linked with a trehalose molecule in an ester-like manner are microorganisms that produce trehalose ester and utilize n-alkane in an aqueous medium containing hydrocarbons with a certain pH value at a temperature below 50 ° C and subsequent isolation of the trehalose ester from the culture suspension according to DE-PS ............. (DE patent application P 32 48 167.5-42), it has been found that this increase in yield can be achieved if a wet cell mass, obtained in a manner known per se by growing and separated from the substrate is, in an aqueous sodium chloride solution with from 0.1 to 3.5 wt, - NaCl content suspended and n-paraffin is added to this suspension, whereupon this mixture at a temperature of 10 to 45 0C while maintaining a constant pH of 3 to 8 is agitated with aeration until the normal paraffin is used up.

Für die Durchführung des Verfahrens der Erfindung werden sogenannte ruhende Zellmassen eingesetzt, die durch ein gebräuchliches Züchtungsverfahren in einer die erforderlichen Nährstoffe und ein Kohlenwasserstoffsubstrat enthaltenden Nährlösung durch Beimpfen mit Submerskulturen von Trehaloseester produzierenden und n-Alkane verwertenden Mikroorganismen erhalten werden. Geeignete Trehaloseester produzierende und n-Alkane verwertende Mikroorganismen sind beispielsweise Rhodococcus erythropolis DSM 43 215, Athrobacter spec. DSM 2567 oder Corynebacterium DSM 2568. Die von der flüssigen Phase der Züchtung suspension abgetrennten Zellfeuchtmassen werden zur Durchführung des Verfahrens der Erfindung in einer verdünnten, wäßrigen Natriumchloridlösung suspendiert, die von 0,l bis 3,5 Gew-°Ó NaCl gelöst enthält und vorher durch etwa einstündiges Erhitzen auf eine Temperatur von über 1000C sterilisiert worden ist. Dieser Suspension wird nach Abkühlung auf eine Temperatur von etwa 30°C als einziger Nährstoff ein steriles oxidierbares Kohlenwasserstoffsubstrat, vorzugsweise n-Paraffin S, das 89 Gew.-°Ó Paraffine mit 14 C-Atomen und 9 Gew.-°Ó Paraffin mit 15 C-Atomen enthält, zugesetzt. In dieser Suspension wird eine Temperatur von etwa 30 0C und über eine Regeleinrichtung ein pH-Wert von 3 bis 8 aufrechterhalten.For the implementation of the method of the invention are so-called dormant cell masses are used, which are cultivated in one containing the necessary nutrients and a hydrocarbon substrate Nutrient solution by inoculating with submerged cultures of trehalose ester-producing and microorganisms utilizing n-alkanes are obtained. Suitable trehalose esters Microorganisms that produce and use n-alkanes are, for example, Rhodococcus erythropolis DSM 43 215, Athrobacter spec. DSM 2567 or Corynebacterium DSM 2568. That of the liquid phase of the cultivation suspension detached Cell wet masses are used to carry out the method of the invention in a dilute, Suspended aqueous sodium chloride solution, which dissolved from 0.1 to 3.5% by weight of NaCl contains and beforehand by heating to a temperature of over for about one hour 1000C has been sterilized. This suspension is after cooling to a temperature at about 30 ° C the only nutrient is a sterile oxidizable hydrocarbon substrate, preferably n-paraffin S, the 89% by weight paraffins with 14 carbon atoms and 9% by weight Contains paraffin with 15 carbon atoms. This suspension has a temperature of about 30 ° C and a pH value of 3 to 8 via a control device.

Als Mittel zur Einstellung des pH-Wertes haben sich sterile Alkalihydroxidlösungen, wie beispielsweise eine 10 Gew.-°Ó NaOH enthaltende Natriumhydroxidlösung, bewährt. Gleichzeitig wird in die Suspension, die mit etwa 2 000 Upm gerührt wird, mit einer Belüftungsrate von etwa 3 700 NL/h bei einem Reaktorinnendruck von vorzugsweise 202 bis 203 KPa mit Luft begast. Diese Bedingungen werden aufrecht erhalten, bis das eingesetzte Kohlenwasserstoffsubstrat verbraucht ist. As a means of adjusting the pH value, sterile alkali hydroxide solutions have proven to be such as a sodium hydroxide solution containing 10% by weight NaOH, for example. At the same time is in the suspension, which is stirred at about 2,000 rpm, with a Aeration rate of about 3700 NL / h with an internal reactor pressure of preferably 202 to 203 KPa gassed with air. These conditions are maintained until the hydrocarbon substrate used has been used up.

Danach kann der pH-Wert der Zellsuspension mit der verdünnten Lösung einer starken Mineralsäure auf etwa 2 abgesenkt werden. Es hat sich bewährt, zu diesem Zweck 10 Gew.-°Ó HC1 enthaltende wäßrige Chlorwasserstoffsäure einzusetzen. Anschließend können aus der Suspension die gewünschten Trehaloseester, beispielsweise durch erschöpfende Extraktion mit geeigneten Lösungsmitteln in an sich bekannter Weise gewonnen werden. Als Extraktionsmittel hat sich Äthylacetat bewährt.After that, the pH of the cell suspension can be adjusted with the diluted solution a strong mineral acid can be lowered to about 2. It has been proven, too for this purpose, use aqueous hydrochloric acid containing 10% by weight HC1. The desired trehalose ester, for example by exhaustive extraction with suitable solvents in a known manner Way to be won. Ethyl acetate has proven itself as an extraction agent.

Erfindungsgemäß kann von der Suspension nach Verbrauch des Kohlenwasserstoffsubstrats aber auch zunächst die Zellmasse, beispielsweise durch Zentrifugieren, abgetrennt und als Zellfeuchtmasse erneut für die Durchführung des Verfahrens der Erfindung eingesetzt werden.According to the invention, from the suspension after the hydrocarbon substrate has been consumed but also initially the cell mass is separated off, for example by centrifugation and again as the wet cell mass for performing the method of the invention can be used.

Es besteht hierbei auch die Möglichkeit, diese Zellfeuchtmasse bei einer Temperatur von etwa -25 0C längere Zeit zu lagern, bevor sie erneut für das Verfahren der Erfindung zum Einsatz kommt.There is also the possibility of using this cell moisture content at a temperature of about -25 0C for a longer period of time before being used again for the Method of the invention is used.

Aus der nach Abtrennung der Zellmasse hinterbleibenden flüssigen Phase werden die Trehaloseester in an sich bekannter Weise mit geeigneten Lösungsmitteln, wie beispielsweise Äthylacetat, erschöpfend extrahiert, nachdem der pH-Wert der flüssigen Phase auf etwa 2 abgesenkt worden ist. Aus den, vorzugsweise unter Vakuum, eingeengten Extrakten können die Trehaloseester in an sich bekannter Weise getrennt isoliert werden.From the liquid phase that remains after the cell mass has been separated off are the trehalose esters in a known manner with suitable solvents, such as ethyl acetate, exhaustively extracted after the pH of the liquid phase has been lowered to about 2. From the, preferably under vacuum, concentrated extracts, the trehalose esters can be separated in a manner known per se to be isolated.

Nach dem Verfahren der Erfindung werden im Vergleich mit dem Verfahren gemäß DE-PS .......... (DE-Patentanmeldung P 32 48 167.5-42) die Ausbeuten an Trehaloseestern, bezogen auf die Zelltrockenmasse, auf über das Dreifache und - bezogen auf verwertbares Substrat - auf über das 1,8-fache gesteigert. Außerdem bietet das Verfahren der Erfindung die Möglichkeit, die ruhenden Zellmassen wiederholt zur Herstellung von Trehaloseestern einzusetzen und dadurch die auf die Zelltrockenmasse bezogene Ausbeute an Trehaloseestern noch weiter zu steigern.According to the method of the invention are compared with the method according to DE-PS .......... (DE patent application P 32 48 167.5-42) the yields of trehalose esters, based on the dry cell mass, over three times and - based on usable Substrate - increased to over 1.8 times. In addition, the method of Invention the possibility of repeatedly producing dormant cell masses Use trehalose esters and thereby the yield based on the dry cell mass to increase even further in trehalose esters.

Beispiel 1 Züchtung von Rhodococcus erythropolis DSM 43 215 Ein 100 1 Bioreaktor mit mechanischen Rührorganen wird mit 70 1 Nährsalzlösung folgender Zusammensetzung gefüllt: Hefeextrakt 700,0 g Zitronensäure x 1 H20 86,8 g (NH4) 2504 1.050,0 g KH2P°4 35,0 g Na2HPO4 x 2H 20 35,0 g 85 gew.-°Oige H3P04 70,0 g CaCl2 x 2H20 3,5 g FeCl3 x 6H20 1,4 g FeSO4 x 7H20 14,0 g MgSO4 x 7H20 77,0 g Leitungswasser 70 1.Example 1 Cultivation of Rhodococcus erythropolis DSM 43 215 Ein 100 1 bioreactor with mechanical stirrers is filled with 70 1 nutrient salt solution as follows Composition filled: yeast extract 700.0 g citric acid x 1 H20 86.8 g (NH4) 2504 1,050.0 g KH2P ° 4 35.0 g Na2HPO4 x 2H 20 35.0 g 85% by weight H3P04 70.0 g CaCl2 x 2H20 3.5 g FeCl3 x 6H20 1.4 g FeSO4 x 7H20 14.0 g MgSO4 x 7H20 77.0 g tap water 70 1.

Diese Nährsalzlösung wird durch Zusatz von 50 gew.-%iger NaOH auf pH 5,0 eingestellt und bei einer Temperatur von 121°C 60 Minuten lang sterilisiert. Nach Abkühlung auf eine Temperatur von 30 0C werden 700 g steriles n-Paraffin S (89 % C14, 9 % C15) zugesetzt, der pH-Wert mit 10 gew.-°Óiger NaOH-Lösung auf 5.8 einqestellt und mit 4,5 Liter einer 24 Stunden alten Submerskultur von Rhodococcus erythropolis DSM 43 215 beimpft. Während der Züchtung wird die Submerskultur automatisch mit einer pH-Regelstation durch Titration mit 10 gew-°Óiger NaOH-Lösung konstant auf einem pH-Wert von 5.8 und auf einer Temperatur von 30 0C gehalten, mit einer Umdrehungszahl von 2000 Upm gerührt und mit einer Belüftungsrate von 3700 Nl/Std. bei 202,6 KPa Reaktorinnendruck mit Luft begast. Nach 23 Std. ist das n-Paraffin S verbraucht, danach wird die Zellmasse aus der Kultursuspension in bekannter Weise durch Zentrifugation abgetrennt. Es werden 2,80 kg Zellfeuchtmasse erhalten und diese bei -25 0C gelagert.This nutrient salt solution is made up by adding 50% strength by weight NaOH Adjusted to pH 5.0 and sterilized at a temperature of 121 ° C for 60 minutes. After cooling to a temperature of 30 ° C., 700 g of sterile n-paraffin S are added (89% C14, 9% C15) added, the pH value to 5.8 with 10% by weight NaOH solution and with 4.5 liters of a 24 hour old submerged culture of Rhodococcus erythropolis DSM 43 215 inoculated. During the cultivation, the submerged culture becomes automatic constant with a pH control station by titration with 10 wt% NaOH solution kept at a pH of 5.8 and at a temperature of 30 0C, with a Stirred rotation speed of 2000 rpm and with an aeration rate of 3700 Nl / h. gassed with air at 202.6 KPa internal reactor pressure. After 23 hours it is normal paraffin S consumed, then the cell mass is removed from the culture suspension in a known manner separated by centrifugation. 2.80 kg of wet cell mass are obtained and these stored at -25 0C.

Beispiel 2 Bildung von Trehaloseestern mit ruhenden Zellen 1,4 kg der nach Beispiel 1 gewonnenen Zellfeuchtmasse werden in dem in Beispiel 1 beschriebenen Bioreaktor in 30 Liter 0,9 gew-°Óiger NaCl-Lösung suspendiert, mit 1,8 kg n-Paraffin S (89 SÓ C14, 9 9 C15) versetzt und bei einer Temperatur von 21 C, einer Umdrehungszahl von 2000 Upm und einer Belüftungsrate von 3700 NL/Std.Example 2 Formation of trehalose esters with resting cells 1.4 kg of the wet cell mass obtained according to Example 1 are described in Example 1 Bioreactor suspended in 30 liters of 0.9% by weight NaCl solution, with 1.8 kg of normal paraffin S (89 SÓ C14, 9 9 C15) offset and at a temperature of 21 C, one speed of 2000 rpm and a ventilation rate of 3700 NL / hour.

bei 202,6 KPa Reaktorinnendruck begast. Während der Reaktion wird die ruhende Zellsuspension automatisch mit einer pH-Regelstation durch Titration mit einer 10 gew-°Óigen NaOH-Lösung bei pH 5.8 konstant gehalten.gassed at 202.6 KPa internal reactor pressure. During the reaction will the resting cell suspension automatically with a pH control station by titration kept constant at pH 5.8 with a 10% strength by weight NaOH solution.

Nach einer ReaktiQnszeit von 30 Stunden ist das n-Paraffin S verbraucht und danach wird die Zellsuspension mit 10 gew-°Óiger HC1 auf pH 2.0 eingestellt. Die angesäuerte Zellsuspension wird schließlich in bekannter Weise erschöpfend mit Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte werden im Vakuum konzentriert.After a reaction time of 30 hours, the normal paraffin S is used up and then the cell suspension is adjusted to pH 2.0 with 10% strength by weight HC1. The acidified cell suspension is finally exhausted in a known manner Ethyl acetate extracted. The combined organic extracts are concentrated in vacuo.

Aus dem organischen Rohextrakt werden 84 g Trehalose-6,6'-dicorynomycolate = 8 % - bezogen auf Gesamttrehaloselipid - und 966 g Trehalose-2,2' ,3,4-tetraester = 92 % - bezogen auf Gesamttrehaloselipid - isoliert.84 g of trehalose-6,6'-dicorynomycolate are obtained from the organic raw extract = 8% - based on total trehalose lipid - and 966 g trehalose-2,2 ', 3,4-tetraester = 92% - based on total trehalose lipid - isolated.

Beispiel 3 Bildung von Trehaloseestern unter wiederholtem Einsatz ruhender Zellen 1,4 kg der nach Beispiel 1 gewonnenen Zellfeuchtmasse werden in dem in Beispiel 1 beschriebenen Bioreaktor in 30 Liter 0,9 gew-°Óiger NaCl-Lösung suspendiert, mit 1,0 kg n-Paraffin S (89 °Ó C14, 9 °Ó C15) versetzt und wie in Beispiel 2 beschrieben, inkubiert. Nach 120 Stunden ist das n-Paraffin S verbraucht. Die Zellsuspension wird abzentrifugiert, es werden 1,28 kg Zellfeuchtmasse zurückgewonnen. Der wäßrige Überstand wird nach Ansäuerung auf pH 2 wie in Beispiel 2 erschöpfend extrahiert.Example 3 Formation of trehalose esters with repeated use resting cells 1.4 kg of the wet cell mass obtained according to Example 1 are in the bioreactor described in Example 1 in 30 liters of 0.9 wt% NaCl solution suspended, mixed with 1.0 kg n-paraffin S (89 ° Ó C14, 9 ° Ó C15) and as in example 2 described, incubated. The normal paraffin S is used up after 120 hours. the Cell suspension is centrifuged off, 1.28 kg of wet cell mass are recovered. The aqueous supernatant becomes exhaustive after acidification to pH 2 as in Example 2 extracted.

Der organische Rohextrakt enthält 68 g Trehalose-6,6'-dicorynomycolate = 10 °Ó - bezogen auf Gesamttrehaloselipid -und 612 g Trehalose-2,2',3,4-tetraester = 90 % - bezogen auf Gesamttrehaloselipid.The raw organic extract contains 68 g trehalose-6,6'-dicorynomycolate = 10 ° Ó - based on total trehalose lipid - and 612 g trehalose-2,2 ', 3,4-tetraester = 90% - based on total trehalose lipid.

Die zurückgewonnene Zellfeuchtmasse (1,28 kg) wird erneut in 30 Liter 0,9 gew-°Óiger NaCl-Lösung suspendiert, mit 0,8 kg n-Paraffin S (89 S C14, 9 % C15) versetzt und wie in Beispiel 2 beschrieben, inkubiert und extrahiert.The recovered wet cell mass (1.28 kg) is again in 30 liters 0.9% by weight NaCl solution suspended, with 0.8 kg n-paraffin S (89 S C14, 9% C15) added and as described in Example 2, incubated and extracted.

Der organische Rohextrakt enthält 24,75 Trehalose-6,6'-dicorynomycolat = 5 % - bezogen auf Gesamttrehaloselipide - und 470,25 g Trehalose-2,2',3,4-tetraester.The crude organic extract contains 24.75 trehalose-6,6'-dicorynomycolate = 5% - based on total trehalose lipids - and 470.25 g trehalose-2,2 ', 3,4-tetraester.

Tabelle Vergleich der Ausbeuten an Trehaloseestern gemäß Verfahren nach der DE-PS .....Table comparison of the yields of trehalose esters according to the method according to DE-PS .....

(DE-Patentanmeldung P 32 48 167.5-42) und gemäß dem Verfahren der Erfindung Konzentration1 Ausbeute²) Ausbeute³) (g / Liter) (g/g BTM) (9/9 C-Substrat) Gemäß DE-PS ....(DE patent application P 32 48 167.5-42) and according to the method of Invention Concentration1 Yield²) Yield³) (g / liter) (g / g BTM) (9/9 C-substrate) According to DE-PS ....

(P 32 48 167.5-42) Beispiel 4 4,95 0,53 0,15 5 5 7,81 0,84 0,28 6 6 10,48 1,13 0,35 10 10,80 1,16 0,31 Gemäß der Erfindung Beispiel 2 35,0 3,76 0,58 3 3 39,2 4,20 0,65 1)9 Gesamttrehaloseester pro Liter Zellsuspension 2)g Gesamttrehaloseester pro g Zelltrockenmasse 3)g Gesamttrehaloseester pro g n-Paraffin(P 32 48 167.5-42) Example 4 4.95 0.53 0.15 5 5 7.81 0.84 0.28 6 6 10.48 1.13 0.35 10 10.80 1.16 0.31 According to the invention Example 2 35.0 3.76 0.58 3 3 39.2 4.20 0.65 1) 9 total trehalose esters per liter of cell suspension 2) g total trehalose ester per g dry cell mass 3) g total trehalose ester per g n-paraffin

Claims

Claims 1., a process for the production of trehalose esters, in which various organic acids are linked with a trehalose molecule in an ester-like manner are microorganisms that produce trehalose ester and utilize n-alkane in an aqueous medium containing hydrocarbons with a certain pH value at a temperature below 50 ° C and subsequent isolation of the trehalose ester from the culture suspension according to DE-PS ............. (DE patent application P 32 48 167.5-42), characterized in that a Zel, lfeuchtmasse, which in a known manner obtained by culturing and separated from the substrate in an aqueous sodium chloride solution suspended with from 0.1 to 3.5 wt .- ° Ó NaCl ~ content and this suspension n-paraffin is added, whereupon this mixture is taken at a temperature of 10 to 45 ° C Maintaining a constant pH of 3 to 8 with aeration is moved until the n-paraffin has been used up and the suspension then has a pH of 1 to 5 is adjusted by means of a strong mineral acid.

2. The method according to claim 1, characterized in that the trehalose ester by exhaustive extraction of the suspension adjusted to a pH of 1 to 5 isolated therefrom and then separated from the extractant.

3. The method according to claim 1, characterized in that from the the suspension adjusted to a pH value of 3 to 8 first the liquid phase separated from the cell mass and the liquid phase after lowering the pH value subjected to exhaustive extraction to 1 to 5 with a strong mineral acid is while the cell mass is returned to the beginning of the procedure and in the Sodium chloride solution is suspended.