DE3309849A1 - Microbiological process for the preparation of an anthracycline antibiotic, the antibiotic obtained in this process, and a pharmaceutical composition - Google Patents

Microbiological process for the preparation of an anthracycline antibiotic, the antibiotic obtained in this process, and a pharmaceutical composition

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Abstract

The cultivation of microorganisms such as Streptomyces peucetius var. carneus, var. carminatus and var. caesius (strain ATCC 29050, 21354, 31502 and 27952) is described, wherein the cultivation is carried out with the addition of sodium barbiturate under aerobic conditions in an aqueous culture medium which contains sources of assimilable carbon, assimilable nitrogen and mineral salts. This results in an anthracycline antibiotic which contains daunorubicin in its molecule and which is called FCE 21424. Hydrogenolysis of FCE 21424 yields 7-deoxydaunomycinone.

Description

BES CHREIBDNG DESCRIPTION

Die Erfindung betrifft ein Anthracyclin-Antibiotikum, welches Daunorubicin in seinem Molekül enthält, ein biosynthetisches Verfahren zu seiner Herstellung und eine es enthaltende Zubereitung. Das Anthracyclin-Antibiotikum, welches im folgenden als FCE 21424 bezeichnet wird, ist als Antitumormittel nützlich, wie es bei Versuchstieren nachgewiesen wurde, und es ist weiterhin gegenüber grampositiven und gramnegativen Bakterien wirksam.The invention relates to an anthracycline antibiotic, which daunorubicin contains in its molecule a biosynthetic process for its manufacture and a preparation containing it. The anthracycline antibiotic, which is described below referred to as FCE 21424, is useful as an anti-tumor agent, as it is in experimental animals has been demonstrated, and it continues to be versus gram-positive and gram-negative Bacteria effective.

Die chemischen und physikalischen Eigenschaften von FCE 21424 unterscheiden sich von allen bis heute beschriebenen Anthracyclin-Antibiotika.The chemical and physical properties of FCE 21424 differ from all anthracycline antibiotics described to date.

Die Erfindung betrifft ein biosynthetisches Verfahren für die Herstellung von FCE 21424. Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man Natriumbarbiturat während der Fermentation von Mikroorganismen, wie Streptomyces peucetius, Stamm ATCC 29050, und seine Mutanten, s. peucetius var. carneus, Stamm ATCC 21354, S. peucetius var. carminatus, Stamm ATCC 31502, und S. peucetius var. caesius, Stamm ATCC 27952, unter aeroben Bedingungen in einem wäßrigen Kulturmedium, das assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen und Mineralsalze enthält, zugibt.The invention relates to a biosynthetic method for production von FCE 21424. The method is characterized in that sodium barbiturate during fermentation of microorganisms such as Streptomyces peucetius, strain ATCC 29050, and its mutants, see peucetius var. Carneus, strain ATCC 21354, p. peucetius var. carminatus, strain ATCC 31502, and S. peucetius var. caesius, strain ATCC 27952, under aerobic conditions in an aqueous culture medium, the assimilable Contains carbon and nitrogen sources and mineral salts.

Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Gewinnung von FCE 21424 aus den Fermentationsbrühen, die Konzentration aus roher Lösung und seine Reinigung. Die Erfindung betrifft weiterhin das neue Anthracyclin-Antibiotikum FCE 21424 in Form eines rohen Konzentrats, welches man bei dem biosynthetischen Verfahren erhält, in reiner Form, wie man es aus dem rohen Konzentrat isoliert, und in Form von pharmazeutischen Zubereitungen, in denen es mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger vermischt vorliegt.The invention also relates to a method for obtaining FCE 21424 from the fermentation broths, the concentration from crude solution and its Cleaning. The invention also relates to the new anthracycline antibiotic FCE 21424 in the form of a raw concentrate, which is used in the biosynthetic process obtained in pure form, as isolated from the raw concentrate, and in form of pharmaceutical preparations in which there is a pharmaceutically acceptable Diluent or carrier is mixed.

ermentationsverfahren l)ie Ilcrstcllung erfolgt nach üblic+en, gut bekannten Verfahren und besteht darin, daß man den Mikroorganismus in einem zuvor sterilisierten flüssigen Kulturmedium bei aeroben Bedingungen bei einer Temperatur im Bereich von 250C bis 37 0C (vorzugsweise bei 28 0C) während einer Zeit, die von 3 bis 7 Tagen variiert (bevorzugt 5 Tagen), und bei einem pH-Wert, der zu Beginn im Bereich von 6,5 bis 7,0 und gegen Ende des Fermentationsverfahrens im Bereich von 6,6 bis 8,0 liegt, züchtet.Ermentation procedure l) The preparation takes place according to the usual, good known method and consists in the fact that the microorganism in a previously sterilized liquid culture medium under aerobic conditions at one temperature in the range of 250C to 37 0C (preferably at 28 0C) for a time which is from 3 to 7 days varies (preferably 5 days), and at a pH that is at the beginning in the range of 6.5 to 7.0 and towards the end of the fermentation process in the range is from 6.6 to 8.0, breeds.

Das Kulturmedium enthält eine Kohlenstoff- und eine Stickstoffquelle sowie Mineralsalze.The culture medium contains a carbon and a nitrogen source as well as mineral salts.

Die Kohlenstoffquelle kann beispielsweise Stärke, Dextrin, Glucose, Glycerin, Mannit, Maltose, Meisquellflüssigkeit, Schlempe bzw. Nebenprodukte der Branntweinherstellung, Sojabohnenöl oder Sojabohnenmehl sein. Die Stickstoffquelle kann außer den oben erwähnten komplexen Substanzen, die Stickstoff enthalten, beispielsweise trockene Hefe, Fleischpepton oder Casein sein. Gute Ergebnisse werden sogar dann erhalten, wenn man Ammoniumsalze, wie Ammoniumnitrat, Ammoniumsulfate, DiarmTloniumr?hosphate verwendet. Die Mineralsalze, die für die Herstellung nützlich sind, können entsprechend dem verwendeten Medium variieren. In einem Medium, das komplexe Substanzen, wie verschiedene Mehle und Fermentationsrückstände, enthält, ist es nützlich, wenn man Calciumcarbonat und Natrium- oder Kaliumphosphate hinzugibt. Zu Medien, die Glucose oder Ammoniumsalze enthalten, müssen höhere Gehalte an Mineralsalzen, wie Kalium-, Natrium- oder Calciumsalzen, und zusätzlich Spurenelemente, wie Eisen-, Zink-, Kupfer-, Magnesium- und Mangansalze, zugegeben werden. Die Zugabe von Barbitursäure als Natriumsalz ist zwingend erforderlich.The carbon source can, for example, starch, dextrin, glucose, Glycerine, mannitol, maltose, corn swelling liquid, stillage or by-products of the Be brandy, soybean oil, or soybean meal. The nitrogen source can in addition to the above-mentioned complex substances containing nitrogen, for example be dry yeast, meat peptone, or casein. Good results will be achieved even then obtained when using ammonium salts, such as ammonium nitrate, ammonium sulfate, diarmtlonium rhosphate used. The mineral salts that are useful for the preparation can accordingly vary depending on the medium used. In a medium that contains complex substances, such as various flours and fermentation residues, it is useful when one Calcium carbonate and sodium or potassium phosphates are added. To media containing glucose or ammonium salts must contain higher levels of mineral salts, such as potassium, Sodium or calcium salts, and additional trace elements such as iron, zinc, copper, Magnesium and manganese salts, can be added. The addition of barbituric acid as the sodium salt is absolutely necessary.

Die Fermentation kann in Erlenmeyer-Kolben oder in Labor-oder Industriefermentationsvorrichtungen verschiedener Kapazitäten durchgeführt werden.The fermentation can take place in Erlenmeyer flasks or in laboratory or industrial fermentation devices different capacities.

Analytische Verfahren Werden Proben der Fermentationsbrühen und rohe Gemische der Dünnschichtchromatographie (TLC) unter Verwendung eines Gemisches aus Chloroform:Methanol:Toluol 7:3:3 (ausgedrückt durch das Volumen) als Eluierungsmittel unterworfen, so stellt man fest, daß FCE 21424 bei einem mittleren Rf-Wert von 0,55 zusammen mit anderen anthracyclinartigen Bestandteilen mit unterschiedlichen Rf-Werten auftritt.Analytical procedures will take samples of the fermentation broths and raw Mixtures of thin layer chromatography (TLC) using a mixture of Chloroform: methanol: toluene 7: 3: 3 (in terms of volume) as the eluent subjected, it is found that FCE 21424 with an average Rf value of 0.55 along with other anthracycline-like ingredients with different Rf values occurs.

Eine quantitative Bestimmung der gesamten anthracyclinartigen Bestandteile, die in den Fermentationsbrühen vorhanden sind, kann auf folgende Weise erfolgen.A quantitative determination of the total anthracycline-like constituents, present in the fermentation broths can be done in the following manner.

Zu einer Probe der Brühe, deren pH-Wert auf 7,6 eingestellt ist, gibt man zwei Volumen einer 9:1 (ausgedrückt durch das Volumen) Chloroform:Methanol-Mischung, und dann wird das entstehende Gemisch während 1 Minute bei Raumtemperatur beschallt. In einer Probe des organischen Extrakts, die mit Methanol verdünnt ist, wird der Gesamtgehalt an anthracyclinartigen Bestandteilen spektrophotometrisch bei 495 nm bestimmt.To a sample of the broth, the pH of which is adjusted to 7.6, add add two volumes of a 9: 1 (expressed by volume) chloroform: methanol mixture, and then the resulting mixture is sonicated for 1 minute at room temperature. In a sample of the organic extract that is diluted with methanol, the Total content of anthracycline-like components spectrophotometrically at 495 nm certainly.

Wird eine Probe des gleichen organischen Extrakts einer TLC-Analyse unterworfen, wobei man das oben erwähnte Eluierungssystem anwendet, kann eine spektrophotometrische Bestimmung von FCE 21424 bei 496 nm durchgeführt werden, indem man die entsprechende rotgefärbte Zone abkratzt und sie mit einem 4:1 (ausgedrückt durch das Volumen) Chloroform:Methanol-Gemisch eluiert.Take a sample of the same organic extract for a TLC analysis subjected using the above-mentioned elution system, a spectrophotometric Determination of FCE 21424 at 496 nm can be carried out by using the appropriate scratch off the red-colored zone and remove it with a 4: 1 (expressed by the volume) Chloroform: methanol mixture eluted.

Isolierungsverfahren Nachdem die Fermentation beendigt ist, ist FCE 21424 hauptsächlich in den Mycelia vorhanden, welche aus den Fermentationsflüssigkeiten durch Filtration bei pH 7,5 mit Hilfe von Kieselgur abgetrennt werden.Isolation Procedure After fermentation is finished, it is FCE 21424 mainly present in the mycelia, which come from the fermentation fluids be separated off by filtration at pH 7.5 with the aid of kieselguhr.

Der Myceliakuchen wird mit einem Gemisch aus einem mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, wie Aceton, Dioxan, Methanol und anderen niedrigen Alkoholen, extrahiert. Bevorzugt wird Aceton verwendet. Die Myceliaextrakte werden gesammelt und bei verringertem Druck konzentriert. Das wäßrige Konzentrat wird bei pH 7,5 mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel, wie Chlorofrom, Dichlormethan oder Ethylacetat, extrahiert. Bevorzugt wird Chloroform verwendet. Die organischen Extrakte werden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und bei verringertem Druck konzentriert. Rohes FCE 21424 wird durch Zugabe des fünffachen Volumens an n-Hexan ausgefällt.The mycelia cake is made with a mixture of one miscible with water organic solvents such as acetone, dioxane, methanol and other lower alcohols, extracted. Acetone is preferably used. The mycelia extracts are collected and concentrated at reduced pressure. The aqueous concentrate is at pH 7.5 with a water-immiscible organic solvent such as chlorofrom, Dichloromethane or ethyl acetate, extracted. Chloroform is preferably used. The organic extracts are dried over anhydrous sodium sulfate and treated with concentrated under reduced pressure. Crude FCE 21424 is made by adding five times Volume of n-hexane precipitated.

Reinigungsverfahren Die Reinigung von FCE 21424 kann unter Verwendung von Silicagel durch trockene Säulenchromatographie erfolgen. Eine Lösung des rohen roten, purpurgefärbten Pulvers, welches FCE 21424 enthält, in einem 7:3:3 (ausgedrückt durch das Volumen) Chloroform:Methanol:Toluol-Gemisch wird der Silicagel-trockenen-Säulenchromatographie unter Verwendung des oben erwähnten Gemisches als Eluierungsmittel unterworfen.Methods for cleaning up FCE 21424 can be cleaned using of silica gel by dry column chromatography. A solution of the raw red, purple colored powder containing FCE 21424 in a 7: 3: 3 (expressed by volume) chloroform: methanol: toluene mixture is silica gel dry column chromatography using the above-mentioned mixture as an eluent.

Aus den ausgewählten Fraktionen, die durch Siiicagel-TLC geprüft werden, erhält man nach der Konzentration im Vakuum auf ein geringes Volumen unter Präzipitation mit n-Hexan und Kristallisation aus Ethylacetat reines FCE 21424.From the selected fractions, which are checked by Siiicagel-TLC, obtained after concentration in vacuo to a small volume with precipitation pure FCE 21424 with n-hexane and crystallization from ethyl acetate.

Chemische und physikalische Eigenschaften FCE 21424, welches als feine rote kristalline Nadeln erhalten wird, ist löslich in Aceton, Dioxan, N,N-Dimethylformamid und N,N-Dimethylsulfoxid, etwas löslich in Chloroform, Dichlormethan, Ethylacetat und niedrigeren Alkoholen, aber kaum löslich oder unlöslich in Diethylether, n-Hexan, Petrolether und Wasser. FCE 21424 besitzt die folgenden physikalisch-chemischen Eigenschaften.Chemical and physical properties FCE 21424, which is classified as fine red crystalline needles obtained are soluble in acetone, dioxane, N, N-dimethylformamide and N, N-dimethyl sulfoxide, somewhat soluble in chloroform, dichloromethane, ethyl acetate and lower alcohols, but hardly soluble or insoluble in diethyl ether, n-hexane, Petroleum ether and water. FCE 21424 has the following physicochemical Properties.

Schmelzpunkt: 205 bis 2080C (unter Zersetzung) Spezifische Drehung: [α]D 23° + 240° (c = 0,1, CH3OH) W- und VIS-Absorptionsspek trum: ?r MeOH 236, 255, 293, 480, max 496, 534 nm (E1%m = 350, 395, 67, 148, 150, 107) IR-Spektrum (kBr): Peaks bei den folgenden Frequenzen: 3420, 2970, 2930, 1710, 1570, 1445, 1410, 1370, 1280, 1235, 1210, 1150, 1115, 1080, 1060, 1030, 985, 815, 790, 775, 760, -1 690, 610, 525 und 460 cm 13C-NMR-Spektrum (CDCl3:CD30D, Verhältnis 1,3:0,2) bei 20,0 MHz: zeigt die Anwesenheit von 38 C-Atomen an, deren chemische Verschiebung, ausgedrückt als 6-Werte (ppm), bezogen auf Tetramethylsilan, wie folgt sind: 16,3; 20,6; 23,0; 24,2; 29,1; 32,0; 34,8; 43,6; 49,6; 56,2; 59,7; 63,8; 64,7; 70,2; 74,2; 75,0 (2C); 76,6; 99,7; 106,9; 110,6 (2C); 118,1; 119,3; 120,5; 134,1; 135,0; 135,2 (2C); 151,5; 154,6; 154,7; 160,6; 165,2; 166,7; 186,3; 186,5; 212,9.Melting point: 205 to 2080C (with decomposition) Specific rotation: [α] D 23 ° + 240 ° (c = 0.1, CH3OH) W and VIS absorption spectrum:? r MeOH 236, 255, 293, 480, max 496, 534 nm (E1% m = 350, 395, 67, 148, 150, 107) IR spectrum (kBr): peaks at the following frequencies: 3420, 2970, 2930, 1710, 1570, 1445, 1410, 1370, 1280, 1235, 1210, 1150, 1115, 1080, 1060, 1030, 985, 815, 790, 775, 760, -1 690, 610, 525 and 460 cm 13C-NMR spectrum (CDCl3: CD30D, ratio 1.3: 0.2) at 20.0 MHz: indicates the presence of 38 carbon atoms, their chemical shift, expressed as 6 values (ppm) based on tetramethylsilane are as follows: 16.3; 20.6; 23.0; 24.2; 29.1; 32.0; 34.8; 43.6; 49.6; 56.2; 59.7; 63.8; 64.7; 70.2; 74.2; 75.0 (2C); 76.6; 99.7; 106.9; 110.6 (2C); 118.1; 119.3; 120.5; 134.1; 135.0; 135.2 (2C); 151.5; 154.6; 154.7; 160.6; 165.2; 166.7; 186.3; 186.5; 212.9.

Elementaranalyse: (g) C = 54,67 + 0,5; H = 5,44 + 0,1; N = 5,03 + 0,08 Molekularformel: C38H43-45N3O16.17.3H2O, bezogen auf die Elementaranalyse und das 13C-NMR-Spektrum.Elemental analysis: (g) C = 54.67 + 0.5; H = 5.44 + 0.1; N = 5.03 + 0.08 Molecular formula: C38H43-45N3O16.17.3H2O, based on the elemental analysis and the 13C-NMR spectrum.

Festlegung der der Partialstrukttir: lSine milde Säurehydrolyse von I('L': 21424 vorgibt Daunorubicin, welches durch direkten Vergleich (TLC, IR, UV, NMR, blisch-Schmelzpunkt) mit einer authentischen Probe identifiziert wird, was nahelegt, daß FCE 21424 einen zusätzlichen, an Daunorubicin gebundenen Molekülteil aufweist.Establishing the the partial structure: lSine mild acid hydrolysis of I ('L': 21424 specifies daunorubicin, which is determined by direct comparison (TLC, IR, UV, NMR, blisch melting point) with an authentic sample is identified what suggests that FCE 21424 has an additional part of the molecule bound to daunorubicin having.

Die Hydrogenolyse von FCE 21424 in Methanol mit Pd/BaS04 ergibt 7-Deoxydaunomycinon, welches durch direkten Vergleich mit einer authentischen Probe nachgewiesen wurde, und einen Daunosamin enthaltenden Molekülteil.The hydrogenolysis of FCE 21424 in methanol with Pd / BaS04 gives 7-deoxydaunomycinone, which was proven by direct comparison with an authentic sample, and a moiety containing daunosamine.

All diese Ergebnisse legen den Schluß nahe, daß das Antibiotikum FCE 21424 in seinem Molekül Daunorubicin (I), gebunden an einen Molekülteil (C11H16-18H2O7-8), der Barbitursäure enthält, aufweist.All of these results suggest that the antibiotic FCE 21424 in its molecule daunorubicin (I) bound to a part of the molecule (C11H16-18H2O7-8), which contains barbituric acid.

Biologische Aktivität a) Antibakterielle Aktivität Die in vitro minimale Hemmkonzentration (MIC) von FCE 21424 und Daunorubicin werden für einige Mikroorganismen bestimmt, wobei man das übliche Reagenzglas-Verdünnungsverfahren anwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle I aufgeführt.Biological activity a) Antibacterial activity The minimum in vitro Inhibitory Concentrations (MIC) of FCE 21424 and Daunorubicin are used for some microorganisms determined using the standard test tube dilution procedure. The results are listed in Table I.

Tabelle I MIC in ug/ml Testorganismus FCE 21424 Daunorubicin Staphylococcus aureus 209P Staphylococcus aureus 153 12,5 12,5 Sarcina lutea ATOC 9341 1,56 3,12 Streptococcus agalactiae 100 - 100 Mycobacterium phlei 6,25 3,12 Tabelle 1 (Fortsetzung) Escherichia coli B | 12,5 6,25 Pasteurella multicida 25 25 b) Die Verbindung wurde im Vergleich mit Daunorubicin -(DNR) bei der Klonungswirkung von Hela-Zellen in vitro geprüft.Table I. MIC in µg / ml Test organism FCE 21424 daunorubicin Staphylococcus aureus 209P Staphylococcus aureus 153 12.5 12.5 Sarcina lutea ATOC 9341 1.56 3.12 Streptococcus agalactiae 100-100 Mycobacterium phlei 6.25 3.12 Table 1 (continued) Escherichia coli B | 12.5 6.25 Pasteurella multicida 25 25 b) The compound was tested in vitro in comparison with daunorubicin - (DNR) in the cloning activity of Hela cells.

Die in Tabelle II angegebenen Werte zeigen, daß FCE 21424 100mal cytotoxischer ist als DNR.The values given in Table II show that FCE 21424 is 100 times more cytotoxic is as DNR.

Die Verbindung wurde ebenfalls in vitro gegenüber P 388/R-(resistent gegenüber Daunorubicin und Doxorubicin) und P 388/5-Zellen (empfindlich) aus as ci tischen Mäuseleukämiezellen, die in Suspensionskulturen vorhanden waren, geprüft.The compound was also shown to be resistant to P 388 / R- (in vitro to daunorubicin and doxorubicin) and P 388/5 cells (sensitive) from as ci table mouse leukemia cells, which were present in suspension cultures, examined.

Cytotoxische Tests wurden durchgeführt, indem man die Zellen verschiedenen Konzentrationen an Arzneimitteln während 48 Stunden aussetzte. Gegen Ende der Einwirkungszeit wurde die Cytotoxizität durch Zellzählung und Trypanblau-Exklusion bestimmt. Der ID50-Wert wurde berechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle III angegeben und zeigen, daß FCE 21424 sowohl bei P 388/S- als auch bei P 388/R-Zellen aktiver ist als DNR.Cytotoxic tests were performed by looking at the cells differently Exposed drug concentrations for 48 hours. Towards the end of the exposure time the cytotoxicity was determined by cell counting and trypan blue exclusion. Of the ID50 value was calculated. The results are given in Table III and show that FCE 21424 is more active than DNR in both P 388 / S and P 388 / R cells.

Die Verbindung wurde weiterhin in vivo gegenüber empfindlicher und resistenter P-388-Leukämie geprüft. P-388-Leukämiezellen, die gegenüber DX (Doxorubicin) und DNR resistent sind, werden durch Reihenübertragung in Mäuse, die mit DX i.p.The compound continued to be more sensitive to and in vivo P-388 resistant leukemia tested. P-388 leukemia cells opposed to DX (doxorubicin) and DNR resistant are determined by serial transmission into mice injected with DX i.p.

behandelt werden, gezüchtet. Zu Versuchs zwecken werden BDF1 -Mäusen i.p.106 (empfindliche Linie) oder 104 (resistente Linie) Leukämiezellen ip. injiziert und einen Tag nach der Tumorinokulation ip. behandelt. Die Verbindungen werden in 10%dem Tween 80 gelöst.treated, bred. For experimental purposes, BDF1 mice i.p. 106 (sensitive line) or 104 (resistant line) leukemia cells ip. injected and ip one day after tumor inoculation. treated. The connections are made in 10% of the Tween 80 dissolved.

Bei sensitiver P-388-Leukämie ist FCE 21424 unyefä]ir 9'nah potenter als DNR (Tabelle IV).In sensitive P-388 leukemia, FCE 21424 is unyearly more potent as DNR (Table IV).

Gegenüber P-388/DX-resistenter Leukämie besitzt FCE 21424 eine beinerkenswerte Antitumoraktivität (T/C % = 182) bei MxTD (niaximal tolerierter Dosis) von 0,33 mg/kg, während DX bei 10 mg/kg inaktiv ist (Tabelle V).Compared to P-388 / DX-resistant leukemia, FCE 21424 has a notable one Antitumor activity (T / C% = 182) at MxTD (niaximally tolerated dose) of 0.33 mg / kg, while DX is inactive at 10 mg / kg (Table V).

FCE 21424 wurde weiterhin auf Gross-Leukämie, iv. injiziert, untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengestellt.FCE 21424 was still diagnosed for gross leukemia, iv. injected, examined. The results are shown in Table VI.

Wurde die Verbindung einen Tag nach der Tumorinokulation iv. verabreicht, so zeigte sich, daß die zu untersuchende Verbindung ungefähr 30mal potenter ist als DNR.If the compound was given iv one day after tumor inoculation. administered, it was found that the compound to be investigated is about 30 times more potent as DNR.

Zusammengefaßt zeigen die Ergebnisse, daß FCE 21424 eine Verbindung mit hochinteressanten biologischen Eigenschaften ist. Im Vergleich zu DNR ist sie ungefähr 100mal potenter in vitro.Taken together, the results show that FCE 21424 is a compound with extremely interesting biological properties. Compared to DNR, it is about 100 times more potent in vitro.

In In-vitro-Versuchen gegenüber P 388/S und Gross-Leukämie ist die Verbindung potenter als DNR und zeigt eine gute Åktivität gegenüber P 388/DX-resistenter Leukämie.In in vitro tests against P 388 / S and Gross Leukemia, the Compound more potent than DNR and shows good activity against P 388 / DX-resistant Leukemia.

Tabelle II Einfluß auf die Klonungswirksamkeit von Helazellen bei der Behandlung während 24 Stunden. Table II Influence on the cloning efficiency of Hela cells of treatment for 24 hours.

Verbindung Dosis a ID ng/ml ngy DNR 12,5 47 r"11 6,2 76 3,1 99 FCE 21424 1 0 0,33 0 0,11 46 A 0,1 0,03 100 a) keine Kolonien; % der nichtbehandelten Kontrollen Tabelle III In-vitro-Wirkung auf sensitive und DX-resistente P-388-Leukämiezellen a ID50 (ng/ml) Verbindung -------- ----------- Rb P 388/S P 388/R DNR 9,5; 5,8 750; 950 78,9; 163 FCE 21424 0,003; 0,02 0,045; 2 150 ; 100 a) Werte von zwei Versuchen b) Verhältnis zwischen ID50 bei P 388/R und ID50 bei P 388/S Tabelle IV In-vivo-Wirkung von FCE 21424 auf sensitive P-388-Leukamiezellen a Dosis T/Cb toxische Todes-Verbindung (mg/kg) (%) fälle c DNR 2,9 175 0/10 4,4 180 0/10 6,6 165 3/10 FCE 21424 0,06 140 0/10 0,12 145 0/10 0,25 145 0/10 0,5 160 0/10 1 30 9/10 b) mittlere Uberlebenszeit, % gegenüber den nichtbehandelten Vergleichs tieren Behandlung ip. einen Tag nach der Tumorinokulation (106 Zellen/Maus) c) Bewertung auf der Basis der Autopsieelqebnlsse bei der toten Maus Tabelle V In-vivo-Wirkung von FCE 21424 bei DX-resistenten P-388- Leulämiezellen Vcrbindurlg Dosis T/Cb toxische Todes-(mg/kg) (%) fälle c DX 10 91 3/10 FCE 21424 0,33 182 1/6 0,5 58 6/6 0,75 29 6/6 a) Behandlung ip. einen Tag nach der Tumorinokulation (104 Zellen/Maus) b,c)siehe Tabelle IV Tabelle VI Antitumorakt:ivität von FCE 21424 gegenüber Gross-Leukämie a Verbindung Dosis T/Cb toxische Todes-(mg/kg) (%) fälle c DNR 10 175 0/8 15 216 0/8 22,5 183 1/7 FCE 21424 0,53 150 0/9 0,8 116 1/10 1,2 108 3/10 a) Behandlung iv. eie Tag nach der iv. Tumorinokulation b,c) siehe Tabelle IV Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.Compound dose a ID ng / ml ngy DNR 12.5 47 r "11 6.2 76 3.1 99 FCE 21424 1 0 0.33 0 0.11 46 A 0.1 0.03 100 a) no colonies; % of untreated Controls Table III In vitro effects on sensitive and DX-resistant P-388 Leukemia Cells a ID50 (ng / ml) Compound -------- ----------- Rb P 388 / S P 388 / R DNR 9.5; 5.8 750; 950 78.9; 163 FCE 21424 0.003; 0.02 0.045; 2 150; 100 a) Values from two experiments b) Ratio between ID50 for P 388 / R and ID50 for P 388 / S Table IV In vivo effect of FCE 21424 on P-388 sensitive leukemia cells a dose T / Cb toxic death compound (mg / kg) (%) cases c DNR 2.9 175 0/10 4.4 180 0/10 6.6 165 3/10 FCE 21424 0.06 140 0/10 0.12 145 0/10 0.25 145 0/10 0.5 160 0/10 1 30 9/10 b) mean survival time,% compared to the untreated comparison animals treatment ip. one day after tumor inoculation (106 cells / mouse) c) evaluation based on the autopsy results in the dead mouse Tabel V In Vivo Effect of FCE 21424 on DX-Resistant P-388 Leulemia Cells Vcrbindurlg Dose T / Cb toxic deaths (mg / kg) (%) cases c DX 10 91 3/10 FCE 21424 0.33 182 1/6 0.5 58 6/6 0.75 29 6/6 a) Treatment ip. one day after tumor inoculation (104 Cells / mouse) b, c) see Table IV Table VI Antitumor activity of FCE 21424 against Gross leukemia a compound dose T / Cb toxic deaths (mg / kg) (%) cases c DNR 10 175 0/8 15 216 0/8 22.5 183 1/7 FCE 21424 0.53 150 0/9 0.8 116 1/10 1.2 108 3/10 a) treatment iv. the day after iv. Tumor inoculation b, c) see Table IV Die the following examples illustrate the invention.

Beispiel 1 Eine Kultur von Streptomyces peucetius, Stamm ATCC 29050, wird 14 Tage lang bei 280C auf Agarschrägplatten mit dem folgenden Erhaltungsmedium (Medium SA) gezüchtet. Example 1 A culture of Streptomyces peucetius, strain ATCC 29050, is kept for 14 days at 280C on agar slides with the following maintenance medium (Medium SA).

Glucose, 3%; trockene Brauereihefe, 1,2%; NaCl, O,lt KH2P04, 0,05%; CaC03, 0,1%; MgS04, 0,005%; FeS04 7H20, 0,0005; ZnSO4 7H20, 0s005%; CUSO4-5H2O 0,0005; Agar, 2%; Wasser bis zu 100 ml; pH 6,7; die Sterilisation erfolgt durch Erhitzen in einem Autoklaven bei 115°C während 20 Minuten. Die Sporen der so erhaltenen Kultur werden gesammelt und in 3 ml sterilem destilliertem Wasser suspendiert. Die so erhaltene Suspension wird zur Inokulation in 60 ml des folgenden flüssigen Wachstumsmediums in 300-ml-Erlenmeyer-Kolben verwendet: trockene Brauereihefe 0,3%; Pepton- 0,5%; Ca(NO3)2-4H2O 0,05%; Leitungswasser bis zu 100 ml; Sterilisation durch Erhitzen in einem Autoklaven bei 1200C während 20 Minuten. Der pH-Wert dieses Mediums beträgt nach der Sterilisation zwischen 6,8 und 7,0. Die inokulierten Kolben werden 2 Tage bei einer Temperatur von 28°C auf einer Rotationsschüttelvorrichtung, die mit 250 rpm läuft und einen Kreis von 7 cm Durchmesser beschreibt, geschüttelt. 1,5 ml der wie oben beschrieben gezüchteten Kultur werden zum Inokulieren von 50 ml des folgenden Produktionsmediums, welches sich in einem 300-ml-Erlenmeyer-Kolben befindet, verwendet: Glucose 6%; trockene Brauereihefe 3%; NaCl 0,2%; KH2PO4 0,1%; CaCO3 0,2%;, MgSO4 0,01%; FeS04 7H20 0,001%; ZnS04-7H20 0,001%; CuS0, 5H20 0,001%; Leitungswasser bis zu 100 ml, pH 6,7; die Sterilisation erfolgt durch Erhitzen in einem Autoklaven bei 1150C während 20 Minuten.Glucose, 3%; dry brewer's yeast, 1.2%; NaCl, O, lt KH2PO4, 0.05%; CaCO 3, 0.1%; MgSO 4, 0.005%; FeS04 7H20, 0.0005; ZnSO4 7H20, 0s005%; CUSO4-5H2O 0.0005; Agar, 2%; Water up to 100 ml; pH 6.7; the sterilization is carried out by heating in an autoclave at 115 ° C for 20 minutes. The spores of the culture thus obtained are collected and suspended in 3 ml of sterile distilled water. The thus obtained Suspension is for inoculation in 60 ml of the following liquid growth medium used in 300 ml Erlenmeyer flasks: dry brewer's yeast 0.3%; Peptone- 0.5%; Ca (NO3) 2-4H2O 0.05%; Tap water up to 100 ml; Sterilization by heating in an autoclave at 1200C for 20 minutes. The pH of this medium is after sterilization between 6.8 and 7.0. The inoculated flasks are 2 days at a temperature of 28 ° C on a rotary shaker equipped with 250 rpm runs and describes a circle with a diameter of 7 cm, shaken. 1.5 ml of the culture grown as described above are used to inoculate 50 ml of the following Production medium, which is located in a 300 ml Erlenmeyer flask, is used: Glucose 6%; dry brewer's yeast 3%; NaCl 0.2%; KH2PO4 0.1%; CaCO3 0.2%;, MgSO4 0.01%; FeS04 7H20 0.001%; ZnS04-7H20 0.001%; CuS0.5H20 0.001%; Tap water up to 100 ml, pH 6.7; the sterilization is carried out by heating in an autoclave at 1150C for 20 minutes.

Die Kolben werden bei 28°C während 7 Tagen bf?i dcrl gleichen Bedingungen wie für die Impfphase beschrSeben inkubiert.The flasks are kept at 28 ° C for 7 days under the same conditions Incubated as described for the vaccination phase.

48 @@@nden nach nah der Fermentation wird eine @@ige Natrium-@@@ @@@@ suspension sl)nsiorl in dest:i Wasser zu jeder KolbLil zu zu einer Endkonzentration von 4 g/l zugegeben.48 @@@ nden after the fermentation is close, a @@ ige sodium - @@@ @@@@ suspension sl) nsiorl in distilled: i water to each KolbLil to a final concentration of 4 g / l added.

Die maximale Konzentration an aktiver Verbindung wird zwischen dem 6. und 7. Tag der Fermentation bei einer Produktion von 20 mcg/ml erreicht.The maximum concentration of active compound is between the 6th and 7th day of fermentation reached with a production of 20 mcg / ml.

B e i s p i e l 2 Das in Beispiel 1 beschriebene Fermentationsverfahren wird wiederholt, ausgenommen, daß die Natriumbarbituratzugabe erst nach 72stündiger Fermentation erfolgt. EXAMPLE 2 The fermentation process described in Example 1 is repeated, except that the addition of sodium barbiturate only takes 72 hours Fermentation takes place.

Die maximale Konzentration an aktiver Verbindung wird zwischen dem 6. und 7. Tag der Fermentation bei einer Produktion von 30 mcg/ml erreicht.The maximum concentration of active compound is between the 6th and 7th day of fermentation reached with a production of 30 mcg / ml.

Beispiel 3 Das in Beispiel 1 beschriebene Fermentationsverfahren wird wiederholt, ausgenommen, daß der verwendete Mikroorganismus durch Streptomyces peucetius, var. carneus, Stamm ATCC 21354 ersetzt wurde. Example 3 The fermentation process described in Example 1 is repeated except that the microorganism used is caused by Streptomyces peucetius, var. carneus, strain ATCC 21354 was replaced.

Die maximale Konzentration an aktiver Verbindung wurde zwischen dem 6. und 7. Tag der Fermentation bei einer Produktion von 20 mcg/ml erreicht.The maximum concentration of active compound was between the 6th and 7th day of fermentation reached with a production of 20 mcg / ml.

B e i s p i e 1 4 Das in Beispiel 1 beschriebene Fermentationsverfahren wird wiederholt, ausgenommen, daß der verwendete Mikroorganismus durch Strept:omyces peucetius var caesius, Stamm ATCC 27952 ersetzt wurde. B e i s p i e 1 4 The fermentation process described in Example 1 is repeated except that the microorganism used is caused by Strept: omyces peucetius var caesius, strain ATCC 27952 was replaced.

Die maximale Konzentration an aktiver Verbindung wird zwischen dem 6. und 7. Tag der Fermentation bei einer Produktion von 30 mcg/ml erreicht.The maximum concentration of active compound is between the 6th and 7th day of fermentation reached with a production of 30 mcg / ml.

Beispiel 5 Die Kultur des Streptomyces peucetius, var. caesius, Stamm ATCC 27952 wurde wie in Beispiel 1 beschrieben erhalten. Example 5 The culture of Streptomyces peucetius, var. Caesius, strain ATCC 27952 was obtained as described in Example 1.

Die Sporen von drei Schrägkulturen wurden gesammelt und in 10 ml sterilem destilliertem Wasser gesammelt. Die so erhaltene Suspension wurde zum Inokulieren von 500 ml Impfmedium, wie es in Beispiel 1 beschrieben wurde, das sich in einem 2-l-RundkoLben mit Ablenkblechen befand, verwendet. Der Kolben wurde 48 Stunden auf einer Rotationsschüttelvorrichtung, die mit 120 rpm betrieben wurde und einen Kreis mit einem Durchmesser von 70 mm beschreibt, bei einer Temperatur von 28°C inkubiert. Das gesamte Impfmaterial wird zum Inokulieren von 50 1 Produktionsmedium, wie es in Beispiel 1 beschrieben wurde, welches sich in einer 80-l-Fermentationsvorrichtung aus rostfreiem Stahl befand, verwendet. Es wurde mittels Wasserdampf bei 1200C während 30 Minuten sterilisiert. Gegen Ende einer 72stündigen Fermentation wurde Natriumbarbiturat bis zu einer Endkonzentration von 4 g/l zugegeben. Die Fermentation erfolgte bei 28 0C unter Rühren mit 230 rpm und Belüften mit einem Luftstrom von 0,7 1/1 des Mediums/Minute.The spores from three slants were collected and placed in 10 ml sterile distilled water collected. The suspension thus obtained was used for inoculation of 500 ml of inoculation medium, as described in Example 1, which is in a 2 liter round flask with baffles was used. The flask was 48 hours on a rotary shaker operated at 120 rpm and a Describes a circle with a diameter of 70 mm, at a temperature of 28 ° C incubated. The entire inoculation material is used for the inoculation of 50 1 production medium, as described in Example 1, which is in an 80-liter fermentation device stainless steel was used. It was by means of steam at 1200C during Sterilized for 30 minutes. Towards the end of a 72 hour fermentation, sodium barbiturate became added up to a final concentration of 4 g / l. The fermentation took place at 28 ° C. with stirring at 230 rpm and aeration with an air flow of 0.7 1/1 des Medium / minute.

Die maximale Konzentration an aktiver Verbindung wurde zwischen dem 6. und 7. Fermentationstag bei einer Produktion von 30 mcg/ml erreicht.The maximum concentration of active compound was between the 6th and 7th day of fermentation reached with a production of 30 mcg / ml.

Beispiel 6 Die gesamte Flüssigkeit (4 1) von einer Fermentation, erhalten gemäß Beispiel 1, wurde bei pH 7,5 unter Verwendung von 3% Kieselgur als Filterhilfe filtriert. Der feuchte Filterkuchen wurde mit etwa 4 1 Aceton extrahiert. Nach der Filtration erfolgten zwei zusätzliche Extraktionen mit Aceton (mit 3 bzw. 2 1), um eine vollständige Gewinnung der roten Pigmente sicherzustellen. Die vereinigten Acetonextrakte wurden bei verringertem Druck konzentriert, und das Konzentrat (1 1) wurde bei pH 7,5 mit Chloroform dreimal extrahiert. Die organischen Extrakte (3 1) wurden vereinigt, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und bei terringertem Druck auf ein Volumen von etwa 50 ml konzentriert. Example 6 All of the liquid (4 1) from one fermentation, obtained according to example 1, was at pH 7.5 using from 3% kieselguhr filtered as a filter aid. The moist filter cake was with about 4 1 acetone extracted. Two additional extractions were made after filtration with acetone (with 3 or 2 1) to ensure complete recovery of the red pigments. The combined acetone extracts were concentrated under reduced pressure, and that Concentrate (11) was extracted three times at pH 7.5 with chloroform. The organic Extracts (3 1) were combined, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to a volume of about 50 ml.

Durch Zugabe von 200 ml n-Hexan wurde das Antibiotikum FCE 21424 in roher Form als braunes purpurgefärbtes Pulver (0,1 g) erhalten.The antibiotic FCE 21424 in raw form as a brown purple colored powder (0.1 g).

Beispiel 7 Eine Lösung des rohen Antibiotikums FCE 21424 (0,1 g), erhalten gemäß Beispiel 6, in einem 7:3:3 (ausgedrückt durch das Volumen) Chloroform:Aceton:Toluol-Gemisch wurde an einer Silicagelsäule unter Verwendung des oben erwähnten Gemisches als Eluierungsmittel chromatographiert. Die ausgewählten Fraktionen, die durch TLC festgestellt werden, werden bei verringertem Druck auf ein geringes Volumen konzentriert. Die Zugabe des fünffachen Volumens an n-Hexan ergibt reines Antibiotikum FCE 21424 (0,05 g), das nach der Kristallisation aus Ethylacetat in Form feiner roter Nadeln erhalten wurde. Fp.: 205 - 208°C (unter Zersetzung) Beispiel 8 Eine Lösung des Antibiotikums FCE 21424 (0,1 g) in Dioxan (2 ml) und 0,1N wäßriger Essigsäure (2 ml) wird während 2 Stunden bei 85 0C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird mit Wasser (10 ml) verdünnt, und sein pH-Wert wird auf 8,5 eingestellt. Es wird mit Chloroform extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Er wird bei verringertem Druck auf ein geringes Volumen konzentriert. Bei der Zugabe von methanolischer Salzsäure erhält man eine rote kristalline Verbindung (0,05 g), Fp. 186 - 188°C (unter Zersetzung), welche als Daunorublcin HCl durch Vergleich mit einer authentischen Probe identifiziert wird. Example 7 A solution of the crude antibiotic FCE 21424 (0.1 g), obtained according to Example 6, in a 7: 3: 3 (expressed by volume) chloroform: acetone: toluene mixture was on a silica gel column using the above-mentioned mixture as Eluent chromatographed. The selected fractions as determined by TLC are concentrated to a small volume at reduced pressure. the Adding five times the volume of n-hexane results in pure antibiotic FCE 21424 (0.05 g) obtained after crystallization from ethyl acetate in the form of fine red needles became. Mp .: 205-208 ° C (with decomposition) Example 8 A solution of the antibiotic FCE 21424 (0.1 g) in dioxane (2 ml) and 0.1N aqueous acetic acid (2 ml) is during Heated at 85 ° C. for 2 hours. The reaction mixture is diluted with water (10 ml), and its pH is adjusted to 8.5. It is extracted with chloroform. Of the The extract is washed with water and over anhydrous sodium sulfate dried. It is concentrated in a small volume at reduced pressure. At the encore a red crystalline compound (0.05 g) is obtained from methanolic hydrochloric acid, Mp. 186-188 ° C (with decomposition), which as Daunorublcin HCl by comparison is identified with an authentic sample.

Beispiel 9 Eine Lösung des Antibiotikums FCE 21424 (0,1 g) in Dioxan (10 ml) wird in Anwesenheit von 5% Palladium auf Bariumsulfat (0,5 g) während 1 Stunde bei Raumtemperatur hydriert. Example 9 A solution of the antibiotic FCE 21424 (0.1 g) in dioxane (10 ml) in the presence of 5% palladium on barium sulfate (0.5 g) during 1 Hydrogenated hour at room temperature.

Das Reaktionsgemisch wird filtriert, mit Wasser (5 ml) verdünnt und mit Chloroform extrahiert. Die Konzentration des Chloroformextrakts ergibt eine rote kristalline Verbindung (0,03 g), Fp. 228 - 230°C, welche als 7-Deoxydaunomycinon nach Vergleich mit einer authentischen Probe identifiziert wurde Zu der fast farblosen wäßrigen Phase gibt man 2 N wäßrige Essigsäure (2 ml), und das Gemisch wird 2 Stunden lang bei 85°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird gefriergetrocknet, und der Rückstand wird mit wasserfreiem Methanol extrahiert.The reaction mixture is filtered, diluted with water (5 ml) and extracted with chloroform. The concentration of the chloroform extract gives a red crystalline compound (0.03 g), m.p. 228-230 ° C, which is known as 7-deoxydaunomycinone after comparison with an authentic sample, it was identified as being almost colorless aqueous phase is added 2N aqueous acetic acid (2 ml) and the mixture is allowed to stand for 2 hours heated for a long time at 85 ° C. The reaction mixture is freeze-dried, and the residue is extracted with anhydrous methanol.

Der Extrakt wird auf ein geringes Volumen konzentriert, mit Aceton verdünnt und bei 0°C über Nacht gehalten, wobei man eine kristalline Verbindung (0,015 g) erhält, Fp. 1660C (unter Zersetzung), welche als Daunosamin HCl durch direkten Vergleich mit einer authentischen Probe identifiziert wird.The extract is concentrated to a small volume with acetone diluted and kept at 0 ° C overnight, giving a crystalline compound (0.015 g) obtained, m.p. 1660C (with decomposition), which as daunosamine HCl by direct comparison with an authentic sample is identified.

Claims (7)

Mikrobiologisches Verfahren für die Herstellung eines Anthracyclin-Antibiotikums, das bei diesem Verfahren erhaltene Antibiotikum und eine pharmazeutische Zubereitung PATENTANSPRUCHE 1. Mikrobiologisches Verfahren für die Herstellung eines neuen Anthracyclin-Antibiotikums, welches im folgenden als FCE 21424 bezeichnet wird, dadurch g e k e n n -z e i c h n e t , daß man während der Züchtung bei aeroben Bedingungen in einem wäßrigen Kulturmedium, welches eine assimilierbare Kohlenstoffquelle, eine assimilierbare Sticks toffquel le und Mineralsalze enthält, verschiedene Mikroorganismen, wie Streptomyces peucetius, Stamm ATCC 29050 und seine Mutanten, Streptomyces peucetius var. carneus, Stamm ATCC 21354, Streptomyces peucetius var. carminatus, Stamm ATCC 31502 und Streptomyces peucetius var. caesius, Stamm ATCC 27951, Natriumbarbitat zugibt. Microbiological process for the production of an anthracycline antibiotic, the antibiotic obtained in this process and a pharmaceutical preparation PATENT CLAIMS 1. Microbiological process for the production of a new anthracycline antibiotic, which is referred to below as FCE 21424, thereby g e k e n n -z e i c That means that during cultivation under aerobic conditions in an aqueous Culture medium, which is an assimilable carbon source, an assimilable Sticks toffquel le and mineral salts contains various microorganisms, such as Streptomyces peucetius, strain ATCC 29050 and its mutants, Streptomyces peucetius var. carneus, ATCC 21354 strain, Streptomyces peucetius var. Carminatus, ATCC 31502 strain and Streptomyces peucetius var. caesius, strain ATCC 27951, adding sodium barbitate. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch g e k e n n -z e i c h n e t , daß es bei einer Temperatur von 250C bis @7°C während einer Zeit von 3 bis 7 Tagen und bei einem pH-:^Jlrt, df zu B2/\3illn 6,5 bis 7,0 und genen Ende der Fermentati@@ ,6 bis 8 beträgt, durchgeführt wird.2. The method according to claim 1, characterized in that g e k e n n -z e i c h n e t that it is at a temperature of 250C to @ 7 ° C for a time from 3 to 7 days and at a pH -: ^ Jlrt, df to B2 / \ 3illn 6.5 to 7.0 and genen End of Fermentati @@, 6 to 8 is carried out. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch g e -k e n n z e i c h n e t , daß man FCE 21424 aus der Fermentationsmasse, dem abgetrennten Mycelium oder der filtrierten Kulturbrühe isoliert.3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that g e -k e n n z e i c Not that you can get FCE 21424 from the fermentation mass, the separated mycelium or isolated from the filtered culture broth. 4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch g e k e n n z e i c h n e t , daß man FCE 21424 durch Silicagel-Chromatographie reinigt.4. The method according to any one of the preceding claims, characterized g e no indication that one purifies FCE 21424 by silica gel chromatography. 5. Anthracyclin-Antibiotikum FCE 21424, dadurch g e -k e n n z e i c h n e t , daß es durch das Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche erhalten worden ist.5. Anthracycline antibiotic FCE 21424, thereby g e -k e n n z e i c h n e t that it is obtained by the method according to any one of the preceding claims has been. 6. Anthracyclin-Antibiotikum FCE 21424, dadurch g e -k e n n z e i c h n e t , daß es in seinem Molekül Daunorubicin enthält.6. Anthracycline antibiotic FCE 21424, thereby g e -k e n n z e i c h n e t that it contains daunorubicin in its molecule. 7. Pharmazeutische Zubereitung, dadurch g e k e n n -z e i c h n e t , daß sie das Antibiotikum, nämlich die Substanz FCE 21424, der Ansprüche 5 und 6 zusammen im Gemisch mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger enthält.7. Pharmaceutical preparation, thereby g e k e n n n -z e i c h n e t that they are the antibiotic, namely the substance FCE 21424, of claims 5 and 6 together in admixture with a pharmaceutically acceptable diluent or Includes carrier.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2006111561A1 (en) * 2005-04-21 2006-10-26 Dsm Ip Assets B.V. Improved microbial production of anthracyclins

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