DE3042535C2 - Device for detecting fluorescence - Google Patents
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Description
Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur Feststellung von Fluoreszenz, wobei eine Probe auf der Oberifläche eines Trägers angeordnet ist, mit einer Einrichtung zur Erzeugung von Erregersignalen, mit einer Einrichtung zur Lenkung dieser Erregersignale unter einem spitzen Winkel zum Lot auf den Träger, und mit einer Einrichtung zur Messung der Größe der Fluoreszenz zur Probe, wobei die Meßeinrichtung in Lotrichtung angeordnet ist.The invention relates to a device for determining fluorescence, with a sample on the surface a carrier is arranged, with a device for generating excitation signals, with a device to direct these excitation signals at an acute angle to the perpendicular to the carrier, and with a Device for measuring the size of the fluorescence to the sample, the measuring device in the perpendicular direction is arranged.
Durch die DE-OS 26 28 158 ist eine derartige Vorrichtung bekannt. Zur Ausschaltung von Störgeräuschen ist dort eine Verzögerungsschaltung vorgesehen, mit welcher eine Zeitspanne für das Erfassen einer Fluoreszenzstrahlung vorgegeben wird, nachdem die Fluoreszenzstrahlung der Umgebungsbubstanzen im wesentlichen abgeklungen ist. Dabei wird die Ausstrahlung des Erregersignales nach dessen Abschalten beendet, während die induzierte Fluoreszenz noch eine sehr kurze Zeit aufrechterhalten bleibt. Diese Anordnung ist relativ aufwendig und gewährleistet keine zuverlässigen Ergebnisse.Such a device is known from DE-OS 26 28 158. To eliminate background noise a delay circuit is provided there with which a period of time for the detection of fluorescent radiation is specified after the fluorescence radiation of the surrounding substances essentially has subsided. The emission of the excitation signal is stopped after it has been switched off, while the induced fluorescence is maintained for a very short time. This arrangement is relatively complex and does not guarantee reliable results.
Aus der DE-OS 25 09 215 ist ein fluorometrisches System bekannt, bei welchem als Substrat beispielsweise Aluminium verwendet werden kann. Zur Vermeidung von Meßsignalverlusten sind dort faseroptische Kabel vorgesehen.From DE-OS 25 09 215 a fluorometric system is known in which as a substrate, for example Aluminum can be used. There are fiber optic cables to avoid loss of measurement signals intended.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Vorrichtung zu schaffen, bei welcher mit einfachen Mitteln eine wirkungsvolle Unterdrückung der Erregerstrahlung in bezug auf den Detektor erzielt werden kann.The invention is based on the object of creating a device in which with simple means an effective suppression of the excitation radiation with respect to the detector can be achieved.
Diese Aufgabe wurde erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß der Träger eine stark reflektierende metallische Oberfläche aufweist.This object was achieved according to the invention in that the carrier is a highly reflective metallic one Has surface.
Die Erregersignale sind unter einem Winkel auf die stark reflektierende metallische Oberfläche gerichtet. Da der Einfallswinkel gleich dem Reflexionswinkel ist und die Einrichtung zur Messung der Größe der Fluoreszenz der Probe senkrecht zu dem Träger und im Abstand zu diesem angeordnet ist, wird das Erregersignal nicht auf die Meßeinrichtung gestreut. Die Fluoreszenz, die in jeder Richtung ausstrahlen kann, gelangt zumindest zum größten Teil zu der Meßeinrichtung, beispielsweise einem Photonenzählsystem. Infolge der stark reflektierenden metallischen Oberfläche wird die Fluoreszenz, die direkt in eine Richtung entgegengesetzt zu dem Photonenzählsystem abgestrahlt wird, zurückreflektiert und tritt in das Photonenzählsystem ein. Es wird also die Fluoreszenz in dem Moment gemessen, in welchem sie induziert wird, so daß kein Intensitätsverlust auftreten kann. Zusätzliche, aufwendige und teure Schalteinrichtungen sind deshalb nicht erforderlich, um Störgeräusche auszuschalten. Mit Hilfe der stark reflektierenden Oberfläche des Trägers werden die Erregersignale und die induzierten Signale getrennt, so daß die Störungen um einen Faktor von mehreren Tausend reduziert werden.The excitation signals are directed at an angle onto the highly reflective metallic surface. Since the angle of incidence is equal to the angle of reflection and the means for measuring the magnitude of the fluorescence the sample is perpendicular to the carrier and at a distance from it, the excitation signal not scattered on the measuring device. The fluorescence, which can radiate in any direction, arrives at least for the most part to the measuring device, for example a photon counting system. As a result of highly reflective metallic surface will fluorescence, which is directly opposite in one direction radiated to the photon counting system, reflects back and enters the photon counting system. The fluorescence is thus measured at the moment in which it is induced, so that there is no loss of intensity can occur. Additional, complex and expensive switching devices are therefore not required, to switch off background noises. With the help of the highly reflective surface of the carrier, the excitation signals and the induced signals separated, so that the interference by a factor of several thousand be reduced.
Ausführungsbeispiele der Erfindung werden nachstehend unter Bezugnahme auf die Zeichnung näher erläutert. Es zeigtEmbodiments of the invention are explained in more detail below with reference to the drawing. It shows
ίο F i g. 1 einen Schnitt durch ein in der Vorrichtung verwendbares Präparat mit einem Träger mit einer in der monomolekularen Proteinschicht gebundenen zweiten Art biologischer Teilchen,ίο F i g. 1 shows a section through a usable in the device Preparation with a carrier with a second bound in the monomolecular protein layer Type of biological particle,
Fig.2 einen Schnitt durch ein Präparat mit an die zweiten biologischen Teilchen gebundenen dritten biologischen Teilchen,2 shows a section through a preparation with to the second biological particle bound third biological particle,
F i g. 3 eine Ansicht einer Ausführungsform der Vorrichtung zur Feststellung von Fluoreszenz, wobei sich
ein Photonenzählsystem in einem Abstand von dem Präparat befindet, damit die anregenden Teilchen von
der Metalloberfläche gegen das dunkle Gehäuse reflektiert werden, so daß alle darauf auftreffenden Photonen
absorbiert werden, während ein verstärktes induziertes Signal vom Präparat zum Photonenzählsystem gelangt,
Fig.4 einen Schnitt durch das Präparat von Fig. 2,
der eine vierte Art biologischer Teilchen an die zweite Art, die wiederum an die erste Art gebunden ist, gebunden
zeigt,
Fig.5 einen Schnitt durch das Präparat von Fig. 1,
das die dritte Art biologischer Teilchen an die erste Art gebunden zeigt.F i g. 3 is a view of an embodiment of the apparatus for detecting fluorescence, with a photon counting system at a distance from the specimen so that the stimulating particles are reflected from the metal surface against the dark housing so that all photons incident thereon are absorbed, while an amplified induced signal passes from the preparation to the photon counting system, FIG. 4 shows a section through the preparation of FIG. 2, which shows a fourth type of biological particle bound to the second type, which in turn is bound to the first type,
FIG. 5 shows a section through the preparation of FIG. 1, which shows the third type of biological particles bound to the first type.
Nachdem einige biologische Teilchen von Interesse (2. biologisches Teilchen) an die erste Schicht aus Protein gebunden sind, hat das Präparat den in F i g. 1 gezeigten Aufbau aus dem eigentlichen Träger 10, der Metalloberflächenschicht 11, den ersten biologischen Teilchen 12 und den zweiten biologischen Teilchen 13. Ein biologisches Teilchen, z. B. der Antikörper des zweiten biologischen Teilchens, wird mit einem fluoreszierenden Farbstoff verbunden. Ein Tropfen einer Lösung dieses fluoreszierenden Antikörpers (drittes biologisches Teilchen) wird auf das Präparat, das bereits das zweite biologische Teilchen aufweist, wie in F i g. 1 gezeigt, aufgebracht. Dann wird das Präparat so lange in einer Feuchtigkeitskammer gehalten, daß der fluoreszierende Antikörper mit dem zweiten biologischen Teilchen reagiert. Nach der Reaktion hat das Präparat den in F i g. 2 gezeigten Aufbau. Die Menge an gebundenem fluoreszierenden Antikörper 14 ist proportional der Menge an dem auf dem Präparat 30 anwesenden zweiten biologischen Teilchen. Das Präparat mit dem in F i g. 3 gezeigten Aufbau wird in ein geschlossenes Gehäuse mit einer Lichtquelle 31, die dem Induzieren einer Fluoreszenzemission von dem Präparat 30 dient, eingebracht. Das Photon von der Lichtquelle 31 wird nach Auftreffen auf dem Präparat 30, das einen Träger 10 mit einer reflektierenden metallischen Oberfläche hat, gegen die Wand des Gehäuses reflektiert und von ihr eingefangen, während das induzierte Signal von dem Photonenzählsystem 32, das der Messung der Quantität dieser Fluoreszenzemission dient, angezeigt wird. Da eine konstante Lichtquelle verwendet wird, ist das am Photonenzählsystem 32 angezeigte Signal proportional der Menge an fluoreszierendem Antikörper 14 auf dem Träger. Daher ist es mit der beschriebenen Vorrichtung nicht notwendig, daß die biologischen Teilchen, damit sie bestimmt werden können, eine Schicht bilden. Die zweiten biologischen Teilchen werden an die erste oder Protein-After some biological particle of interest (2nd biological particle) to the first layer of protein are bound, the preparation has the in F i g. 1 from the actual carrier 10, the metal surface layer 11, the first biological particle 12 and the second biological particle 13. A biological one Particles, e.g. B. the antibody of the second biological particle, is with a fluorescent Dye connected. A drop of a solution of this fluorescent antibody (third biological particle) is applied to the preparation which already has the second biological particle, as in FIG. 1 shown applied. Then the preparation is kept in a humidity chamber for so long that the fluorescent antibody reacts with the second biological particle. After the reaction, the preparation has the in FIG. 2 shown Construction. The amount of bound fluorescent antibody 14 is proportional to the amount of the second biological particle present on the preparation 30. The preparation with the in F i g. 3 shown Construction is in a closed housing with a light source 31 which is capable of inducing fluorescence emission of the preparation 30 is introduced. The photon from the light source 31 is upon impingement the preparation 30, which has a support 10 with a reflective metallic surface, against the wall of the housing and captured by it, while the induced signal is from the photon counting system 32, which is used to measure the quantity of this fluorescence emission, is displayed. Because a constant Light source is used, the signal displayed on photon counting system 32 is proportional to the amount of fluorescent antibody 14 on the carrier. It is therefore not necessary with the device described, that the biological particles form a layer so that they can be determined. The second biological Particles are sent to the first or protein
schicht gebunden. Da die zweiten biologischen Teilchen keine Schicht bilden müssen, müssen diese ersten biologischen Teilchen nicht die ganze Schicht einnehmen. Daher braucht die erste Schicht aus Protein nicht von hoher Reinheit zu sein. Für verschiedene fluoreszierende Farbstoffe werden zweckmäßig verschiedene Lichtquellen und verschiedene Photonenbestimmungsvorrichtungen verwendet. Die intensivste Lichtquelle ist der Laser. Es können aber auch Bogenlampen mit einer Wellenlängeoselektiereinrichtung oder Woliramlampen mit einer Wellenlängenselektiereinrichtung zum Auswählen einer günstigen Wellenlänge verwendet werden. Die stark reflektierende Oberfläche des Substrats lenkt die anregenden Photonen von dem Photonenzählsystem 32 ab, so daß das induzierte Signal nicht von anregenden Photonen gestört wird. Je stärker die Vermischung von induziertem Signal und anregenden Photonei« ist, desto größer ist die Störung. Je höher das Verhältnis Signal zu Störung ist, desto zuverlässiger sind die Testergebnisse. Unabhängig davon, was für eine Lichtquelle verwendet wird, ist für die Photonenbestimmungsvorrichtung eine Welienlängenselektiereinrichtung erforderlich, um die Fluoreszenzemissionen weiter zu selektieren, da sie mit einer geringen Menge an anregenden Photonen gemischt sein kann, obwohl wegen der Verwendung des reflektierenden Trägers das Verhältnis Signal zu Störung sehr groß ist. Die Wellenlängenselektiereinrichtung kann ein Monochromator oder ein Filter sein.layer bound. Since the second biological particles do not have to form a layer, these first biological Particles do not take up the whole shift. Therefore, the first layer of protein does not need from to be of high purity. Different light sources are expediently used for different fluorescent dyes and used various photon detection devices. The most intense light source is the laser. However, arc lamps with a wavelength selection device or Woliram lamps can also be used with a wavelength selector for selecting a favorable wavelength can be used. The highly reflective surface of the substrate is directing the stimulating photons from the photon counting system 32 so that the induced signal is not from stimulating Photons is disturbed. The stronger the mixing of induced signal and stimulating photon egg « is, the greater the disruption. The higher the signal-to-interference ratio, the more reliable they are Test results. Regardless of what light source is used, is for the photon determination device a wavelength selector is required to further the fluorescence emissions to be selected because it may be mixed with a small amount of stimulating photons, although due to the use of the reflective support means that the signal-to-interference ratio is very high. The wavelength selector can be a monochromator or a filter.
Die zu messende Menge an induziertem Signal kann durch Ändern der Menge an erregendem Signal manipuliert werden. Die anregenden Teilchen werden von dem Signalbestimmungssystem fortgelenkt, so daß das Signal verstärkt wird, ohne daß die Störung beträchtlich erhöht wird. In der beschriebenen Vorrichtung ergibt ein mit einer Metallschicht überzogenes Substrat ohne biologische Teilchen sehr wenige Störungsgeräuschzählungen. Das ist eine Verbesserung gegenüber den bekannten Vorrichtungen, die eine Emanation eines Signals von einer Quelle von konstantem Wert, der von der spezifischen Aktivität abhängt, verwenden. Auch wird die Emanation mit der Zeit geringer, manchmal bei sehr kurzer Halbwertszeit, und es ist daher schwieriger, damit zu arbeiten.The amount of induced signal to be measured can be manipulated by changing the amount of exciting signal will. The stimulating particles are deflected away from the signal determination system, so that the Signal is amplified without significantly increasing the interference. In the device described results a substrate coated with a metal layer with no biological particles very few interfering noise counts. This is an improvement over the known devices that emanate a signal from a source of constant value depending on the specific activity. Even the emanation decreases over time, sometimes with a very short half-life, and it is therefore more difficult to work with.
Bei Verwendung eines induzierten Signals kann der natürliche Hintergrund gemessen werden, indem man das anregende Signal dafür abschaltet, d. h. die Abscheidung eines biologischen Teilchens zur Bildung eines speziellen Musters ist nicht notwendig. Die Zählung außerhalb des Musters ist das, was unter dem natürlichen Hintergrund zu verstehen ist.When using an induced signal, the natural background can be measured by switches off the stimulating signal for this, d. H. the separation of a biological particle to form one special pattern is not necessary. The count outside the pattern is what is under the natural Background is to be understood.
Durch die Verwendung der Vorrichtung wird es möglich, eine Spurenmenge an dem dritten biologischen Teilchen auf der Metalloberfläche zu bestimmen, d. h., es hat sich gezeigt, daß das dritte biologische Teilchen, um bestimmt zu werden, keine Schicht bilden muß. Auch das zweite biologische Teilchen oder das erste biologische Teilchen müssen keine Schicht bilden. Als die erste Schicht wurden teilweise gereinigte erste biologische Teilchen (beispielsweise nach Fällung mit Ammoniumsulfat) verwendet. Die geringe Menge an zweiten biologischen Teilchen ragen ebenso wie die dritten biologischen Teilchen aus der Metalloberfläche heraus. Das ist gegenüber der Verwendung von Schichten ein Vorteil, weil die Teilchen von Interesse in die Lösung hineinragen und dadurch die spezifische Reaktion erleichtern und die nicht spezifische Bindung verringern. Sowohl die Zeit zur Durchführung eines solchen Tests als auch die Menge an nicht spezifischer Bindung wird stark verringert.By using the device it becomes possible to detect a trace amount of the third biological Determine particles on the metal surface, d. i.e., it has been shown that the third biological particle, need not form a layer to be determined. Also the second biological particle or the first biological particles do not have to form a layer. As the first layer were partially purified first biological Particles (for example after precipitation with ammonium sulfate) used. The small amount of second biological particles protrude from the metal surface just like the third biological particles. This is an advantage over using layers because the particles of interest are in the solution protrude and thereby facilitate the specific reaction and reduce the non-specific binding. Both the time to conduct such a test and the amount of non-specific binding will be greatly reduced.
Das wesentliche Merkmal der in Fig.3 gezeigten Vorrichtung ist der metallische Träger. Im Weg des anregenden Photons, das von der Lichtquelle 31 ausgeht und an der Wand des dunklen Gehäuses endet, darf sich nichts befinden als die stark reflektierende metallische Oberfläche und die biologischen Teilchen darauf. Wenn der Einfallswinkel gleich dem Reflexionswinkel ist undThe main feature of the one shown in Fig.3 The device is the metallic carrier. In the path of the stimulating photon emanating from the light source 31 and ends on the wall of the dark case, there must be nothing but the highly reflective metallic one Surface and the biological particles on it. if the angle of incidence is equal to the angle of reflection and
!0 das Signalbestimmungssystem senkrecht zu dem Substrat
und in einigem Abstand davon angeordnet ist, wird das anregende Teilchen nicht auf das Bestimmungssystem
zu gestreut. Auch kann die Form des Gehäuses so gewählt werden, daß sein Einfangvermögen erhöht
wird, so daß fast alle anregenden Teilchen, die gegen die entsprechend ausgebildete Falle reflektiert werden,
dort abgebremst werden und nicht zu dem Signalzählsystem gelangen. Das induzierte Signal, das von dem dritten
biologischen Teilchen ausgeht, nachdem das anregende Teilchen absorbiert ist, kann in jeder Richtung
ausstrahlen, und ein Teil davon, der von der Sammelöffnung des Photonenzählsystems abhängt, gelangt zu dem
Photonenzählsystem. Wegen der stark reflektierenden metallischen Oberfläche werden auch diejenigen induzierten
Photonen, die direkt in eine Richtung entgegengesetzt von dem Photonenzählsystem abgestrahlt werden,
zurückretlektiert und treten in das Photonenzählsystem ein.
Auch ein mit einem Metallüberzug versehenes Substrat, das noch eine dünne Schicht aus einem Gel aufweist,
ist ein gutes Substrat. Auch ist es nicht von entscheidender Bedeutung, daß die daran gebundenen Moleküle
Proteinmoleküle sind. Vielmehr kann die Vorrichtung auch für andere Moleküle oder dünne Gewebeschnitte
und andere Dinge, die durch Trocknen, chemische Umsetzung, Adhäsion, Bindung oder andere
Maßnahmen zur Bindung an ein solches stark reflektierendes Substrat gebracht sind, verwendet werden.
In der Vorrichtung kann auch für eine trockene Probe, wie im vorliegenden Fall, eine Lichtquelle sehr hoher
Intensität verwendet werden. Die stark reflektierende Metalloberfläche bewirkt, daß es zu einer nur sehr geringfügigen
Photonenabsorption (die in Wärme umgewandelt wird) kommt, so daß auch die Wahrscheinlichkeit
eines Ausbleichens oder einer Beschädigung der Probe sehr gering ist. Daher kann sogar ein Laser als
Lichtquelle verwendet werden.! 0 the signal determination system is arranged perpendicular to the substrate and some distance therefrom, the exciting particle is not scattered towards the determination system. The shape of the housing can also be chosen so that its trapping capacity is increased so that almost all stimulating particles that are reflected against the appropriately designed trap are slowed down there and do not reach the signal counting system. The induced signal emanating from the third biological particle after the stimulating particle is absorbed can radiate in any direction, and a part thereof, which depends on the collection opening of the photon counting system, arrives at the photon counting system. Because of the highly reflective metallic surface, those induced photons that are emitted directly in a direction opposite from the photon counting system are also reflected back and enter the photon counting system.
A substrate provided with a metal coating, which still has a thin layer of a gel, is also a good substrate. Nor is it of critical importance that the molecules attached to them are protein molecules. Rather, the device can also be used for other molecules or thin tissue sections and other things that are brought to such a highly reflective substrate by drying, chemical conversion, adhesion, bonding or other measures.
A light source of very high intensity can also be used in the device for a dry sample, as in the present case. The highly reflective metal surface means that there is only a very slight absorption of photons (which is converted into heat), so that the likelihood of bleaching or damage to the sample is very low. Therefore, even a laser can be used as a light source.
Es gibt verschiedene Wege zur Bindung der ersten biologischen Teilchen an das Substrat. Für ein mit einem Metallüberzug versehenes Substrat kann die erste Stufe in einem Eintauchen bestehen, und auch für die Bindung der zweiten biologischen Teilchen an die ersten biologischen Teilchen und für die Bindung der dritten biologischen Teilchen an die zweiten biologischen Teilchen (die ersten biologischen Teilchen in F i g. 5) kann in gleicher Weise vorgegangen werden. Um den Test zu beschleunigen, kann die Probe auf dem Träger getrocknet werden. Um die nichtspezifische Bindung zu senken, kann ein Eintrocknen der Lösung dadurch verhindert werden.There are several ways of attaching the first biological particles to the substrate. For one with one Metal-coated substrate can be the first stage of dipping, and also for bonding the second biological particle to the first biological particle and for binding the third biological Particles to the second biological particle (the first biological particle in Fig. 5) can be in the same Wise to be proceeded. To speed up the test, the sample can be dried on the carrier. In order to reduce the non-specific binding, this can prevent the solution from drying out.
daß man das Präparat in einer Feuchtigkeitskammer hält. Die Probe kann auch in ein kleines Rohr eingebracht werden, um den Kontakt mit dem Träger auf ein kleines Gebiet zu begrenzen; oder das Volumen der Lösung der Probe kann dadurch vergrößert werden, daß ein Becher verwendet wird. In jedem Fall ist es wesentlich, daß das fertige Präparat gewaschen wird. Da die Metalloberfläche die ersten biologischen Teilchen bindet, die ersten biologischen Teilchen die zwei-that the preparation is kept in a humidity chamber. The sample can also be placed in a small tube to limit contact with the wearer to a small area; or the volume of Solution of the sample can be increased by using a beaker. In any case it is essential that the finished preparation is washed. Because the metal surface is the first biological particles binds, the first biological particles the two-
ten biologischen Teilchen binden usw., wird durch Waschen die nicht spezifische Bindung, nicht jedoch die durch die spezifische Reaktion erfolgte Bindung gelöst. Bei Trägern aus Glas, Plastik oder vielen anderen Materialien erfolgt dagegen keine Bindung zwischen ersten biologischen Teilchen und Träger, und durch Waschen kann daher die durch die spezifische Reaktion erfolgte Bindung gelöst werden, während andererseits bei Unterlassung des Waschens die durch nicht spezifische Reaktion erfolgte Bindung an den Träger erhalten bleibt und daher eine quantitative Messung unmöglich wird.If the biological particles bind, etc., the non-specific binding, but not the the specific reaction released the binding. For supports made of glass, plastic or many other materials on the other hand, there is no binding between the first biological particles and the carrier, and by washing therefore, the binding made by the specific reaction can be broken, while on the other hand, failure to do so after washing, the binding to the carrier, which occurred by non-specific reaction, is preserved and hence quantitative measurement becomes impossible.
Außerdem sind solche Träger nicht stark reflektierend und ergeben daher keine gute Auflösung.In addition, such supports are not highly reflective and therefore do not give good resolution.
Um die quantitative Bestimmung bei einem Test zu verbessern und die Umsetzung klar erkennbar zu machen, werden zweckmäßig in einer Serie von Tests Träger mit gleicher Fläche und gleicher Menge an Lösung der Probe verwendet.In order to improve the quantitative determination in a test and to make the implementation clearly recognizable, It is advisable to use carriers with the same area and the same amount of solution in a series of tests of the sample used.
Die Absorptions- und Emissionsspektren der meisten fluoreszierenden Verbindungen, die zur Einfärbung von Protein verwendet werden, sind von Hansen PA (1964) (Publikation der University of Maryland, College Park, Maryland) zusammengestellt.The absorption and emission spectra of most fluorescent compounds used to color Protein used are from Hansen PA (1964) (University of Maryland, College Park publication, Maryland).
Die Peakwellenlänge des zu verwendenden Filters oder Monochromator wird zweckmäßig unter Verwendung dieser Angaben ausgewählt. Es wurde jedoch gefunden, daß die Verwendung eines Engbandinterferenzfilters mit einer Transmission außerhalb eines Durchlässigkeitsbereiches von 0,01% nicht genügt, um eine Spurenmenge an dritten biologischen Teilchen auf dem Träger zu bestimmen, weil das Störgeräusch des Instruments (zur Ablesung einer blanken Metalloberfläche) noch hoch ist.The peak wavelength of the filter or monochromator to be used is appropriately used this information is selected. It has been found, however, that the use of a narrow band interference filter with a transmission outside a transmission range of 0.01% is not sufficient to to determine a trace amount of third biological particles on the carrier, because the background noise of the Instrument (for reading a bare metal surface) is still high.
Bei Verwendung von zwei solchen Engbandfiltern als Gruppe als Filter sowohl für das anregende als auch für das induzierte Signal wird die Auflösung sehr gut und das Störgeräusch des Instruments nicht wahrnehmbar.When using two such narrow band filters as a group as a filter for both the exciting and for the induced signal, the resolution is very good and the background noise of the instrument is imperceptible.
Nach Hansen sind sowohl die Absorptions- als auch die Emissionsbande sehr breit und werden noch breiter, wenn eine Bindung an eine Metalloberfläche erfolgt ist. Die genaue Peakwellenlänge dieser EngbandinterferenzFilter ist nicht wesentlich. Es wurde jedoch gefunden, daß die Verwendung von zwei Filtern als Gruppe besser geeignet ist, um die gleiche Peakwellenlänge und Bandbreite zu haben.According to Hansen, both the absorption and emission bands are very broad and become even wider, when bonded to a metal surface. The exact peak wavelength of this narrow-band interference filter is not essential. However, it has been found that using two filters as a group is better suited to have the same peak wavelength and bandwidth.
Wenn als Lichtquelle ein Laser verwendet wird, muß kein Filter für das anregende Signal verwendet werden. Monochromatoren eignen sich ausgezeichnet zur Wahl des anregenden Signals, insbesondere wenn Lichtquellen hoher Intensität verwendet werden.If a laser is used as the light source, there is no need to use a filter for the exciting signal. Monochromators are excellent for choosing the stimulating signal, especially when light sources high intensity can be used.
Hierzu 2 Blatt ZeichnungenFor this purpose 2 sheets of drawings
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