DE2857298C2 - Means for the determination of peroxidatively active substances - Google Patents

Means for the determination of peroxidatively active substances

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Description

enthält, wobeicontains, where

R- und R3 gleich oder verschieden sein können und jeweils Wasserstoff, eine Alkyl- oder Alkoxygruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe bedeuten undR- and R3 can be the same or different and each hydrogen, an alkyl or alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms or a Mean aryl group and

π für die Zahl 1 oder 2 steht. π stands for the number 1 or 2.

2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet daß das Verdünnungsmittel Dimethylsulfoxid, Dimethylsulfon, Benzylsulfoxid, 4-Chlorphenylsulfon und/oder 4-Fluor-3-nitrophenylsuIfon ist2. Agent according to claim 1, characterized in that the diluent dimethyl sulfoxide, Dimethyl sulfone, benzyl sulfoxide, 4-chlorophenyl sulfone and / or 4-fluoro-3-nitrophenyl sulfone

3. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es zusätzlich N,N-Diraethylformamid enthält3. Composition according to claim 1 or 2, characterized in that there is also N, N-diraethylformamide contains

Die Erfindung bezieht sich auf Mittel für den qualitativen Nachweis und die halbquantitative Bestimmung von peroxidativ wirksamen Bestandteilen in einer Probe.The invention relates to means for qualitative detection and semi-quantitative determination of peroxidatively active components in a sample.

Es sind zur Zeit zahlreiche Verfahren zum Nachweis des Vorhandenseins von peroxidativ wirksamen Substanzen in Proben wie Urin, Fäkalsuspensionen und Magen- und Darminhalt bekannt. Hämoglobin und dessen Derivate sind typische derartige »peroxidativ wirksame« Substanzen, da sie sich ähnlich verhalten wie das Enzym Peroxidase. Derartige Substanzen werden auch als Pseudoperoxidasen bezeichnet. Peroxidativ wirksame Substanzen sind enzymartig, indem sie die Redoxreaktion zwischen Peroxiden und Benzidin, o-Tolidin, 33',5,5'-TetramethyIbenzidin, 2,7-Diaminofluoren oder ähnlichen Indikatorsubstanzen katalysieren und dadurch zu einer nachweisbaren Reaktion wie einer Farbänderung führen. Daher beruhen die meisten Verfahren zur Bestimmung des Vorhandenseins von okkultem Blut in Proben auf dieser Pseudoperoxidaseaktivität. There are currently numerous methods for detecting the presence of peroxidatively active substances known in samples such as urine, fecal suspensions, and stomach and intestinal contents. Hemoglobin and its derivatives are typical such "peroxidatively active" substances, since they behave similarly to the enzyme peroxidase. Such substances are also referred to as pseudoperoxidases. Peroxidative effective substances are enzyme-like in that they suppress the redox reaction between peroxides and benzidine, o-tolidine, 33 ', 5,5'-tetramethylbenzidine, 2,7-diaminofluorene or similar indicator substances and thereby lead to a detectable reaction such as lead to a color change. Hence, most of the methods rely on determining the presence of occult blood samples for this pseudoperoxidase activity.

Innerhalb der letzten Jahre sind verschiedene Verfahren entwickelt worden, die auf der enzymartigen Katalyse der peroxidativen Oxidation von farbbildenden Indikatoren beruhen. In erster Linie handelt es sich um Verfahren der Naßchemie und »dip and read«-Reagensstreifen. Ein Verfahren der zuerst genannten Art ist angegeben von Richard M. Henry, et al. Clinical Chemistry Principles and Techniques (Hagerstown, Maryland: Harper and Row, 1974), S. 1124-1125. Dieses Verfahren umfaßt die Anwendung von Eisessig (Puffer), Diphenylamin (Indikator) und Wasserstoffperoxid. Während derartige Naßverfahren sich für analytische ^Zwecke als geeignet erwiesen haben, besitzen sie offensichtliche Nachteile, von denen nicht der geringste die geringe Reagensstabilität und zu geringe Empfindlichkeit ist. Derartige Reagenslösungen zeigen eine so schnelle Abnahme der Stabilität (und damit Empfindlichkeit), daß nach einigen Tagen frische Reagenslösungen hergestellt werden müssen, was sowohl zeitraubend als auch unwirtschaftlich ist da teure Reagentien weggeworfen werden müssen.Various processes have been developed over the past few years based on the enzyme-like Catalysis of the peroxidative oxidation of color-forming indicators are based. First and foremost, it is about wet chemistry procedures and "dip and read" reagent strips. A procedure of the first mentioned type is reported by Richard M. Henry, et al. Clinical Chemistry Principles and Techniques (Hagerstown, Maryland: Harper and Row, 1974), pp. 1124-1125. This procedure involves the use of glacial acetic acid (Buffer), diphenylamine (indicator) and hydrogen peroxide. While such wet processes work for Having proven appropriate for analytical ^ purposes, they have obvious drawbacks, of which not the least is poor reagent stability and insufficient sensitivity. Such reagent solutions show such a rapid decrease in stability (and thus sensitivity) that fresh ones after a few days Reagent solutions must be prepared, which is both time consuming and uneconomical expensive reagents must be discarded.

Ein zweites Verfahren zur Bestimmung von peroxidativ wirksamen Substanzen und ein von klinischem und medizinischem Personal zur Zeit bevorzugtes Verfahren ist die Anwendung von sogenannten »dip and read«-Reagensstreifen. Typisch für ein derartiges Prüfmittel ist ein Reagensstreifen der Arnes Company Division of Miles Laboratories, Inc, der unter dem Namen Hemastix® im Handel ist. Dieser Reagensstreifen umfaßt im wesentlichen eine poröse Papiermatrix, die an einem Kunststoffstreifen oder Griff befestigt ist. Das Papier ist imprägniert mit einem gepufferten Gemisch aus einem organischen Hydroperoxid und o-Tolidin. Beim Eintauchen in eine Flüssigkeit, enthaltend Hämoglobin, Myoglobin, Erythrocyten und andere Pseudoperoxidasen, entwickelt sich in dem Papier eine blaue Farbe, deren Intensität der Konzentration an peroxidativ .wirksamer Substanz in der Probe proportional ist. So kann der Laborant durch Vergleich der in jo dem Reagensstreifen entstandenen Farbe mit einer Standard-Farbkarte halbquantitativ die Menge an unbekannter Substanz in der Probe bestimmen.A second method for the determination of peroxidatively active substances and one of clinical and The currently preferred method for medical personnel is the use of so-called »dip and read "reagent strips. Typical of such a test tool is an Arnes Company reagent strip Division of Miles Laboratories, Inc, trading under the name Hemastix®. This reagent strip essentially comprises a porous paper matrix attached to a plastic strip or handle. The paper is impregnated with a buffered mixture of an organic hydroperoxide and o-tolidine. When immersed in a liquid containing Hemoglobin, myoglobin, erythrocytes and others Pseudoperoxidases, a blue color develops in the paper, the intensity of which increases with the concentration peroxidatively .active substance in the sample is proportional. By comparing the in jo the reagent strip produced with a standard color card semi-quantitative the amount Determine unknown substance in the sample.

Die Vorteile von Reagensstreifen gegenüber Verfahren der Naßchemie sind zweifach: Die Streifen können leichter angewandt werden, da weder die Herstellung von Reagentien noch Apparate erforderlich sind und zweitens eine größere Stabilität der Reagentien erreicht wird, was zu einer größeren Genauigkeit Empfindlichkeit und Wirtschaftlichkeit führtThe advantages of reagent strips over wet chemistry methods are twofold: The strips can can be used more easily, since neither reagents nor apparatus are required and Second, greater reagent stability is achieved, resulting in greater accuracy sensitivity and profitability leads

Trotz der Vorteile der Streifen gegenüber Verfahren der Naßchemie können die Stabilität und Empfindlichkeit noch weiter verbessert werden. Während diese Eigenschaften bei den derzeit üblichen Teststreifen zur Bestimmung von Pseudoperoxidasen gegenüber denen der Naßchemie weitgehend verbessert sind, könnte ein großer Fortschritt erreicht werden, wenn derartige. Streifen noch lagerstabiler und noch empfindlicher gegenüber peroxidativ wirksamen Substanzen gemacht werden könnten. Es wurden intensive Arbeiten vorgenommen, um diese Ziele zu erreichen.Despite the advantages of the strips over wet chemistry methods, the stability and sensitivity can be further improved. While these properties are used in the test strips currently in use Determination of pseudoperoxidases over those of wet chemistry are largely improved, could be a great progress will be made if such. Strips even more stable in storage and even more sensitive against peroxidatively active substances could be made. Intensive work has been carried out to achieve these goals.

Zumindest drei Versuche, um das oben angegebene Ziel zu erreichen, sind bekannt Eine Veröffentlichung in Chemical Abstracts, Bd. 85, S. 186 (1976), beschreibt ein zweifaches Tauchverfahren zur Herstellung von Reagensstreifen, enthaltend o-Tolidin und Phenylisopropylhydroperoxid. Bei diesem Verfahren wird eine Lösung des Indikators (o-Tolidin ■ 2 HCl) und Polyvinylpyrrolidon in Äthanol hergestellt. Zu dieser Lösung wird eine kleine Menge oberflächenaktives Mittel und ausreichend Citratpuffer zugegeben, um einen pH-Wert von 3,7 zu erreichen. Mit Äthylcellulose imprägnierte Filterpapierstreifen werden in diese Lösung getaucht und getrocknet. Das so imprägnierte Filterpapier wird anschließend in eine zweite Lösung getaucht, enthaltend b5 1,4-Diazabicyclo-[2,2,2]-octan, Phenylisopropylhydrochlorid und Polyvinylpyrrolidon in einem Äthanol-Toluol-Gemisch. Der Zweck dieses Versuches bestand darin, die Kombination aus Peroxid und Indikator zuAt least three attempts to achieve the above goal are known. A publication in Chemical Abstracts, Vol. 85, p. 186 (1976), describes a double dip method for making reagent strips, containing o-tolidine and phenylisopropyl hydroperoxide. This procedure creates a solution of the indicator (o-tolidine ■ 2 HCl) and polyvinylpyrrolidone made in ethanol. A small amount of surfactant and sufficient citrate buffer added to maintain a pH of 3.7 to achieve. Filter paper strips impregnated with ethyl cellulose are immersed in this solution and dried. The filter paper impregnated in this way is then dipped into a second solution containing b5 1,4-diazabicyclo [2,2,2] octane, phenylisopropyl hydrochloride and polyvinylpyrrolidone in an ethanol-toluene mixture. The purpose of this experiment was to find the combination of peroxide and indicator

stabilisieren durch Anwendung des Bicyclooctanderivates und des Polyvinylpyrrolidone.stabilize by using the bicyclooctane derivative and polyvinylpyrrolidone.

Ein zweites derartiges Verfahren ist in der US-PS 38 53 471 beschrieben, wo die Anwendung von Phosphorsäure- oder Phosphonsäureamiden angegeben ist. wobei die Substituenten an den Amidogruppen hauptsächlich N-Morpholinreste sind.A second such method is described in US-PS 38 53 471, where the use of phosphoric acid or phosphonic acid amides is indicated. where the substituents on the amido groups are mainly N-morpholine residues.

Neben diesen Arbeiten ist aus der US-PS 32 52 762 bekannt das organische Hydroperoxid physikalisch in eine kolloide Substanz wie Gelatine einzukapseln, ι,, Wenn ein derartiger Teststreifen angewandt wird, löst die wäßrige Probe die Gelatinekapseln und setzt dadurch das Hydroperoxid für die weitere Umsetzung mit dem Indikator in Gegenwart einer peroxidativ wirksamen Substanz frei. ι -,In addition to this work, the organic hydroperoxide is known from US-PS 32 52 762 physically in To encapsulate a colloidal substance such as gelatin, ι ,, If such a test strip is used, dissolves the aqueous sample the gelatin capsules and thereby sets the hydroperoxide for the further reaction with the indicator in the presence of a peroxidatively active substance. ι -,

Jedes dieser Verfahren hat zum Ziel, die Reagentien zu stabilisieren, so daß die potentiell unverträglichen reaktionsfähigen Bestandteile (Hydroperoxid und Indikator) nicht vorzeitig zusammenkommen und dadurch die Teststreifen weniger empfindlich zu machen. Es ^11 kann jedoch gesagt werden, daß die bekannten Verfahren nicht darauf gerichtet waren, gleichzeitig die Stabilität und Empfindlichkeit zu erhöhen, sondern sie versuchten nur die bestehende Empfindlichkeit dadurch aufrechtzuerhalten, daß eine Zersetzung bzw. Zerstö- _>-, rung der Reagentien während der Lagerung vermieden wurde.The aim of each of these methods is to stabilize the reagents so that the potentially incompatible reactive components (hydroperoxide and indicator) do not come together prematurely and thereby make the test strips less sensitive. However ^ 11 can be said that the known methods were not aimed at the same time to increase the stability and sensitivity, but they tried only the existing sensitivity thereby maintain that decomposition or destruction _> - tion of the reagents during storage was avoided.

In der US-PS 32 36 850 ist die Stabilisierung von organischen Hydroperoxiden, die als Katalysatoren und Oxidationsmittel angewandt werden, offenbart Dort ist J(1 die Verwendung vrsn primären, sekundären oder tertiären Aminsalzen mit organischen Peroxiden angegeben. Diese Druckschrift bezieht sicn jedoch nicht auf Reagensstreifen.US Pat. No. 3,236,850 discloses the stabilization of organic hydroperoxides which are used as catalysts and oxidizing agents. There, J (1 specifies the use of primary, secondary or tertiary amine salts with organic peroxides Reagent strips.

Da keines der oben beschriebener! Verfahren die gewünschte Stabilität und Empfindlichkeit in einem Teststreifen zum Nachweis von peroxidativ wirksamen Substanzen erreicht wurde erfindungsgemäß ein anderer Weg beschriften. Durch das erfindungsgemäße Mittel zur Bestimmung von peroxidativ wirksamen Substanzen werden diese Ziele der erhöhten Stabilität und Empfindlichkeit vollkommen erreicht.Since none of the above! Procedure the Desired stability and sensitivity in a test strip for the detection of peroxidatively active substances According to the invention, a different way of labeling substances was achieved. By the invention These goals of increased stability become a means of determining peroxidatively active substances and sensitivity fully achieved.

Überraschenderweise hat sich jedoch noch ein anderer Vorteil ergeben, nämlich eine Herstellungsmethode des erfindungsgemäßen Prüfmittels, die wesentlieh einfacher ist als die in den oben angegebenen Druckschriften offenbarten Verfahren.Surprisingly, however, another advantage has emerged, namely a manufacturing method of the test equipment according to the invention, which is essentially simpler than that given above Processes disclosed in publications.

Die Erfindung betrifft ein Mittel zur Bestimmung von peroxidativ wirksamen Substanzen in einer Probe, enthaltend ein organisches Hydroperoxid und einen Indikator, der in Gegenwart des Hydroperoxids und einer peroxidativ wirksamen Substanz eine nachweisbare Reaktion ergibt das gekennzeichnet ist durch den Gehalt an einem Verdünnungsmittel der FormelThe invention relates to a means for determining peroxidatively active substances in a sample, containing an organic hydroperoxide and an indicator that is in the presence of the hydroperoxide and a peroxidatively active substance results in a detectable reaction that is characterized by the Content of a diluent of the formula

5555

M)M)

wobeiwhereby

Ri und R2 gleich oder verschieden sein können und jeweils Wasserstoff, eine Alkyl- oder Alkoxygruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe bedeuten undRi and R2 can be identical or different and each is hydrogen, an alkyl or alkoxy group with 1 to 6 carbon atoms or an aryl group and

η für die Zahl 1 oder 2 steht. η stands for the number 1 or 2.

Das erfindungsgemäße Mitte! kann in einer Trägarmatrix enthalten sein (Prüfvorrichtung).The middle according to the invention! can in a carrier matrix be included (test device).

Das für das erfindungsgemäße Mittel in Frage kommende organische Hydroperoxid kann aus vielen bekannten organischen Hydroperoxiden ausgewählt werden. Es muß jedoch imstande sein, mit einer peroxidativ wirksamen Substanz in Gegenwart eines Peroxid-empfindlichen Indikators unter Bildung einer nachweisbaren Reaktion wie einer Farbänderung oder Änderung der absorbierten oder reflektierten Lichtmenge zu reagieren.The organic hydroperoxide in question for the agent according to the invention can be selected from many known organic hydroperoxides can be selected. However, it must be able to work with one peroxidatively active substance in the presence of a peroxide-sensitive indicator with the formation of a detectable response such as a change in color or change in the amount of light absorbed or reflected to react.

Zu den Hydroperoxiden, die sich als geeignet erwiesen haben, gehören tertButylhydroperoxid, Cumolhydroperoxid, Diisopropylbenzolhydroperoxid, 2,5-Dimettylhexan-2^5-dihydroperoxid, Paramenthanhydroperoxid oder deren Gemische. Dabei ist Cumolhydroperoxid besonders geeignetHydroperoxides that have been found to be suitable include tert-butyl hydroperoxide, cumene hydroperoxide, Diisopropylbenzene hydroperoxide, 2,5-dimettylhexane-2 ^ 5-dihydroperoxide, Paramenthane hydroperoxide or mixtures thereof. Cumene hydroperoxide is particularly suitable here

Es gibt zahlreiche Indikatoren, die imstande shid, in Gegenwart eines Hydroperoxids und einer Pseudoperoxidasc eine nachweisbare Reaktion zu ergeben und die daher erfindungsgemäß angewandt werden können. Derartige Indikatoren sind z.B. die sogenannten »Benzidin-artigen« Verbindungen. Typische Beispiele hierfür sind Benzidin, o-To!idin, 33',5,5'-Tetramethylbenzidin, 2,7-Diaminofluoren oder deren Gemische in unterschiedlichen Mengenanteilen.There are numerous indicators that shid will be able to get in Presence of a hydroperoxide and a pseudoperoxidasc to give a detectable reaction and the can therefore be used according to the invention. Such indicators are, for example, the so-called "benzidine-like" compounds. Typical examples for this are benzidine, o-tolidine, 33 ', 5,5'-tetramethylbenzidine, 2,7-diaminofluorene or mixtures thereof in different proportions.

Bei einer bevorzugter:- Ausführungsform enthält das erfindungsgemäße Mittel Cumolhydroperoxid, o-ToIidin, ein Gemisch von Dimethylsulfon und Dimethylsulfoxid. In a preferred: - embodiment, the agent according to the invention contains cumene hydroperoxide, o-tolidine, a mixture of dimethyl sulfone and dimethyl sulfoxide.

Das Mittel wird typischerweise hergestellt durch Lösen oder Suspendieren von Anteilen jedes anzuwendenden Bestandteils in Wasser oder einem anderen geeigneten Suspensionsmedium oder Lösungsmittel. Derartige Lösungsmittel oder Suspensionsmedien umfassen Chloroform, Methanol, Ethanol, Methylenchlorid, Cyclohexan usw.The agent is typically made by dissolving or suspending proportions of each to be used Constituent in water or another suitable suspending medium or solvent. Such solvents or suspending media include chloroform, methanol, ethanol, methylene chloride, Cyclohexane etc.

Das Mittel in Form eines Teststreifens kann durch ein einfaches Eintauchverfahren hecgestt^t werden Ein Teil des Trägermatrixmaterials wird in die Lösung oder Suspension eingetaucht und anschließend getrocknet. So hergestellte Mittel zeigen einen geringen Verlust an Reaktionsfähigkeit selbst nach einer Lagerung unter harten Bedingungen wie bei ungefähr 60 bis 700C innerhalb von 1 bis 3 Tagen oder darüber. Zum Vergleich wurden Mittel ähnlich hergestellt, aber ohne Zusatz des Verdünnungsmittels. Wenn diese Streifen unter im wesentlichen identischen Bedingungen gelagert wurden, wurde ein drastischer Verlust an Reaktionsfähigkeit und Empfindlichkeit beobachtet.The agent in the form of a test strip can be hecgestt ^ t by a simple immersion process. A portion of the carrier matrix material is immersed in the solution or suspension and then dried. Agents produced in this way show a slight loss of reactivity even after storage under severe conditions such as at about 60 to 70 ° C. within 1 to 3 days or more. For comparison, agents were prepared similarly, but without the addition of the diluent. When these strips were stored under essentially identical conditions, a dramatic loss in reactivity and sensitivity was observed.

Die zur Herstellung der erfindungsgemäßen Mittel angewandte Trägermatrix kann vielerlei Formen annehmen. So lehrt die US-PS 38 46 247 die Anwendung von Filzen, porösen Keramikstreifen und Geweben oder Vliesstoffen aus Glasfasern. In der US-PS 35 52 938 ist die Anwendung von Holzstäben, Tuch, Schwammaterialien und tonartigen Substanzen offenbart Die Verwendung von Vliesstoffen aus synthetischen Harzen und Glasfasern als Trägermatrix ist in der GB-PS 13 69 139 angegeben, und die GB-PS 13 49 erwähnt die Anwendung von lichtdurchlässigen Wirkstoffen aus dünnen Fäden zum Bedecken einer darunterliegenden Papiermatrix, und Polyamidfäden sind in der FR-PS 21 79 397 angegeben. Trotzdem ist das nach dem Stand der Technik hauptsächlich als Trägermatrix angewandte Material, das auch erfindungsgemäß besonders geeignet ist, saugfähiges Papier wie Filterpapier. Es können also viele verschiedeneThe carrier matrix used to produce the agents according to the invention can take many forms accept. For example, US-PS 38 46 247 teaches the use of felts, porous ceramic strips and fabrics or nonwovens made of glass fibers. In US-PS 35 52 938 is the use of wooden sticks, cloth, Sponge materials and clay-like substances discloses the use of synthetic non-woven fabrics Resins and glass fibers as a carrier matrix are given in GB-PS 13 69 139, and GB-PS 13 49 mentions the use of translucent agents made of thin threads to cover a underlying paper matrix and polyamide threads are given in FR-PS 21 79 397. Still is the material used mainly as a carrier matrix according to the prior art, which is also according to the invention absorbent paper such as filter paper is particularly suitable. So there can be many different

Materialien als Trägermatrix angewandt werden, und die Matrix kann verschiedene physikalische Formen annehmen, die alle unter die Erfindung fallen.Materials are used as a carrier matrix, and the matrix can take various physical forms, all of which are within the scope of the invention.

Die Verdünnungsverbindungen, die zu der erhöhten Stabilität und Empfindlichkeit des erfindungsgemäßen Prüfmittels beitragen, haben die oben angegebene Struktur. Von den Verbindungen dieser allgemeinen Struktur haben sich Dimethylsulfoxid und/oder Dimethylsulfon, gegebenenfalls im Gemisch mit Ν,Ν-Dimethylformamid als besonders geeignet erwiesen. Andere Verdünnungsmittel, die sich als geeignet erwiesen haben, sind Benzylsulfoxid, 4-Chlorphenylsulfon undThe dilution compounds that lead to the increased stability and sensitivity of the invention Test equipment contribute, have the structure given above. From the links of this general Structure have dimethyl sulfoxide and / or dimethyl sulfone, optionally mixed with Ν, Ν-dimethylformamide proved to be particularly suitable. Other diluents found suitable are benzyl sulfoxide, 4-chlorophenyl sulfone and

Verbindungen ist, das Mengenverhältnis der einzelnen Verbindungen, das in dem Verdünnungsmittel angewandt wird, in weiten Grenzen variieren, und diese Grenzen können ebenfalls leicht im Labor bestimmt werden.Compounds is the quantitative ratio of each Compounds that are used in the diluent vary within wide limits, and these Limits can also be easily determined in the laboratory.

Die Erfindung wird durch die folgenden nicht einschränkenden Beispiele näher erläutert.The invention is illustrated in more detail by the following non-limiting examples.

Beispiel 1 Wirkung des VerdünnungsmittelsExample 1 Effect of the diluent

In ein 500-ml-Becherglas wurden die folgenden Bestandteile gegeben:In a 500 ml beaker were the following Components given:

Ri und R2 in der oben angegebenen Formel können jeweils eine substituierte oder nicht-substituierte Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeuten. Beispiele für derartige Alkylgruppen sind die Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, η-Butyl-, Isobutyl-, sek-Butyl-, n-Pentyl-, Isopentyl-, Neopentyl-, tert-Pentylgruppe und andere Isomere einschließlich derjenigen von Hexan. Diese Alkylgruppen sir.d auch beispielhaft für die Alkoxygruppen, die unter die Definition von Ri und R2 fallen.Ri and R2 in the formula given above can each represents a substituted or unsubstituted alkyl group with 1 to 6 carbon atoms. Examples of such alkyl groups are the methyl, Ethyl, propyl, isopropyl, η-butyl, isobutyl, sec-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, tert-pentyl and other isomers including those of hexane. These alkyl groups are also exemplary of the Alkoxy groups falling under the definition of Ri and R2 fall.

Wenn Ri und R2 Arylgruppen bedeuten, ist dieser Ausdruck ebenfalls in weiterem Sinne zu verstehen und umfaßt substituierte und nicht-substituierte Arylgruppen wie Phenyl-, Benzyl-, ToIyI-, Anilin- und Naphthylgruppen usw. Typische Gruppen, die als Substituenten an Ri und R2 auftreten können, sind Amini-, Nitro-, Amido-, Nitrilo-, Hydroxy-, Alkyloxy-, Phenyl-, Sulfonsäure-, Carbonsäuregruppen und Halogenatome.If Ri and R2 represent aryl groups, this is The term is also to be understood in a broader sense and includes substituted and unsubstituted aryl groups such as phenyl, benzyl, ToIyI, aniline and naphthyl groups, etc. Typical groups used as substituents at Ri and R2 are amino, nitro, Amido, nitrilo, hydroxy, alkyloxy, phenyl, sulfonic acid, carboxylic acid groups and halogen atoms.

Die Menge an Verdünnungsmittel, die bei den erfindungsgemäßen Mitteln angewandt werden kann, variiert in weiten Grenzen und kann leicht im Labor bestimmt werden. So kann die Menge an Verdünnungsmittel, wenn es eine Flüssigkeit wie Dimethylsulfoxid ist, von 10 bis 100%, bezogen auf das Volumen, das zu dem Mittel zugesetzt wird, variieren im Vergleich mit dem Volumen des Lösungs- oder Suspensionsmittels. Ein günstiger bereich liegt bei 25 bis 100%.The amount of diluent that can be used in the agents according to the invention, varies within wide limits and can easily be determined in the laboratory. So the amount of diluent, if it is a liquid such as dimethyl sulfoxide, from 10 to 100% based on the volume added to the Agent added will vary as compared to the volume of solvent or suspending agent. A the more favorable range is 25 to 100%.

Ähnlich kann, wenn das' Verdünnungsmittel ein Gemisch aus mehr als einer der oben angegebenenSimilarly, if the diluent is a mixture of more than one of the above

Chloroformchloroform 100 ml100 ml CumolhydroperoxidCumene hydroperoxide 4.0 g4.0 g o-ToIidino-tolidine 0,4 g0.4 g DimethylsulfoxidDimethyl sulfoxide 25,0 ml25.0 ml

Das entstehende Mittel, das nach Zusammengeben der oben angegebenen Bestandteile leicht gelb war. wurde in einen Erlenmeyer-Kolben gegeben, der mit einem Stopfen verschlossen und bei Raumtemperatur (183° C) über Nacht auf dem Labortisch stehengelassen wurde. Nach 1 Tag war das Mittel nur etwas dunkler geworden als bei der Herstellung.The resulting means, that after being put together of the above ingredients was pale yellow. was placed in an Erlenmeyer flask with sealed with a stopper and left to stand on the laboratory bench at room temperature (183 ° C) overnight became. After 1 day, the agent was only a little darker than when it was made.

Betspiel 2 (Vergleich)Bet game 2 (comparison)

Ein Mittel für Vergleichszwecke, d. h. zum Vergleich mit dem erfindungsgemäßen Mittel wurde nach dem Verfahren de.·; Beispiels 1 hergestellt mit der Ausnahme, daß anstelle von Dimethylsulfoxid 25 ml Chloroform zusätzlich verwendet wurden. Dieses Mittel ohne Dimethylsulfoxid wurde in einen Erlenmeyer-Kolben gegeben, mit einem Stopfen verschlossen und wie in Beispiel 1 auf dem Labortisch stehengelassen (d. h. bei 183°C, 1 Tag). Im Gegensatz zu dem Mittel des Beispiels 1 wurde das Vergleichsmittel dunkel und cahezu schwarz, was die bessere Stabilität des Mittels, das das Verdünnungsmittel enthält, zeigtA means for comparison purposes, i. H. for comparison with the agent according to the invention according to the method de. ·; Example 1 produced with the exception that instead of dimethyl sulfoxide, 25 ml of chloroform were additionally used. This means without Dimethyl sulfoxide was placed in an Erlenmeyer flask, sealed with a stopper, and prepared as in Example 1 allowed to stand on the bench (i.e. at 183 ° C, 1 day). In contrast to the mean of the In Example 1, the comparison agent was dark and almost black, which means the better stability of the agent, which contains the diluent shows

Claims (1)

Patentansprüche:Patent claims: 1. Mittel zur Bestimmung von peroxidativ wirksamen Substanzen in einer Probe, enthaltend ein organisches Hydroperoxid und einen Indikator, der in Gegenwart des Hydroperoxids und einer peroxidativ wirksamen Substanz eine nachweisbare Reaktion ergibt, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Verdünnungsmittel der allgemeinen Formel1. Means for determining peroxidatively active substances in a sample containing an organic hydroperoxide and an indicator that in the presence of the hydroperoxide and a peroxidatively active substance results in a detectable reaction, characterized in that that it is a diluent of the general formula
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