DE2736684A1

DE2736684A1 - Rheumatoid factor immuno-agglutination detection - using particles coupled with protein A and sensitised with antibody Fc-fragment

Info

Publication number: DE2736684A1
Application number: DE19772736684
Authority: DE
Inventors: Herman Dr Ainis; Charles F Dr Lange; Abraham S Dr Mark; George H Dr Scherr
Original assignee: Technical Research Affiliates Inc
Current assignee: Technical Research Affiliates Inc
Priority date: 1977-08-16
Filing date: 1977-08-16
Publication date: 1979-03-01

Abstract

In a new process for detecting a specified antigen possibly present in a biological specimen of animal origin, (a) the specimen is mixed with a suspension of a particle which is coupled with protein A and which is sensitised with an antibody specific for the antigen in such a way that the Fc fragment of the antibody is bound to the protein A coupled with the particle; and (b), in the presence of the specified antigen, an agglutination occurs. Suspensions of particles coupled with protein A and sensitised with antibodies as indicated above are new and claimed. Used for detection and quantitative determination (e.g. by serial dilution techniques) of biologically significant macromolecules, esp. rheumatoid factors, e.g. in the diagnosis of disease. The determination can readily be carried out by relatively unqualified personnel.

Description

Nachweis von Antigenen durch sensibilisierte mikrobische Teilchen.Detection of antigens by sensitized microbial particles.

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis und zur quantitativen Bestimmung von biologisch bedeutenden Macromolekülen und insbesondere ein Verfahren, bei dem Bakterien als spezifische Antikörper bindende Teilchen für einen derartigen Nachweis una eine derartige quantitative Bestimmung verwendet werden.The invention relates to a method for detection and quantitative Determination of biologically important macromolecules and in particular a method in the case of bacteria as specific antibody-binding particles for such Detection and such a quantitative determination can be used.

Die wichtigsten Merkmale aller immunologischen Reaktionen sind Spezifität und Empfindlichkeit. Empfindlichkeit bedeutet in diesem Zusammenhang, daß man in einer komplexen Mischung von Molekülen ein bestimmtes Molekül oder eine bestimmte Klasse von Molekülen nachweisen kann.Darüber hinaus kann man unter Ausnutzung der Empfindlichkeit der immunologischen Reaktion und in Abhängigkeit von der speziell verwendeten Arbeitsweise äußerst geringe Mengen an Macromolekülen bestimmen. So ist es beispielsweise möglich, zwischen den Isomeren einer Verbindung zu unterscheiden (K. Landsteiner und J. v.d, Scheer, J. Exp. Med., 50: 407,3929). Die Spezifität des immunologischen Verfahrens erlaubt sogar, zwischen in Ortho-Stellung oder Meta-Stellung am Benzolring substituierten Derivaten (W.C.The most important characteristics of all immunological reactions are specificity and sensitivity. Sensitivity in this context means that in a complex mixture of molecules a particular molecule or a particular one Class of molecules can be detected. In addition, one can take advantage of the Sensitivity of the immunological response and depending on the specific the method used to determine extremely small amounts of macromolecules. So for example, it is possible to distinguish between the isomers of a compound (K. Landsteiner and J. v.d, Scheer, J. Exp. Med., 50: 407, 3929). The specificity the immunological process even allows between in ortho position and meta position derivatives substituted on the benzene ring (W.C.

Boyd, Fundamentals of Immunology, Interscience Publ., Inc., N.Y., 1947, S. 102) als auch zwischen di- und trisubstituierten Benzolderivaten (W.C, Boyd, a.a.O., S.105) zu unterscheiden. Im Bereich der Macromoleküle ist es möglich, zwischen Proteinen verschiedener tierischer Spezies zu unterscheiden, wie es in der Labor- und Klinikimmunologie geschieht (W.C. Boyd, a.a.O., S. 120).Boyd, Fundamentals of Immunology, Interscience Publ., Inc., N.Y., 1947, P. 102) as well as between di- and trisubstituted benzene derivatives (W.C, Boyd, loc. cit., p.105). In the area of the macromolecules it is possible between Differentiate between proteins of different animal species, as is done in the laboratory and clinical immunology (W.C. Boyd, op. cit., p. 120).

Wenngleich die Mehrheit der Macromoleküle durch Variationen der Ausfällungsreaktion (G. Mancini, et al., 1965, Immunochemistry, 2:235) nachgewiesen wird, können auch Variationen der Agglutinationsreaktion (Ballonsreaktion) verwendet werden.Dazu eignen sich beispielsweise inerte Trägerteilchen wie Bentonit(J.Bozicevich, J.E.Although the majority of macromolecules are due to variations in the precipitation reaction (G. Mancini, et al., 1965, Immunochemistry, 2: 235) can also Variations of the agglutination reaction (balloon reaction) can be used For example, inert carrier particles such as bentonite (J.Bozicevich, J.E.

Tobie, E.H. Thomas, H.M. Hoyem und S.B. Ward, A rapid flocculation test for the diagnosis of Trthinosis, Publ. Hlth. Rep. (Wash.) 66:806-814), Polystyrol (J.M. Singer und C.M. Plotz, Am. J. Med., 1956, 21:888, 893) und verschiedene tierische rpte Blutkörperchen (G. Middlebrook und R.J. Dubos, Exper. Med., 1948, 88:521; E. Nater, Bactl. Rev., 1956, 20:166; S. V. Boyden, J. Exper. Med., 1951, 93:107; A.B. Stavitsky, J. Immunol., 1954, 72;360,368). Alle diese Reaktionen sind passive Agglutinationen, wobei das agglutinierende Teilchen einfach ein Träger der immunologisch reaktiven Mittel ist, die entweder durch Adsorption (A.B. Stavitsky, J. Immunology, 1954, a.a,O; J.M. Singer und C.M. Plotz, Armer, J, Med., a.a.O.) oder durch chemische Kupplung (T,L, Goodfriend ett al., 1964, Science 144:1344) auf den Träger aufgebracht worden sind. Das Trägerteilchen selbst ist dabei nicht an der immunologischen Reaktion beteiligt Präzipitinreaktionen, wie sie beispielsweise in Gelmedien durchgeführt werden, fordern gewöhnlich eine vielstündige Inkubation, bevor das Endergebnis erhalten werden kann, sind beschränkt auf vollständige Antigene und besitzen bei Verwendung in vielen diagnostischen Verfahren nicht die gewünschte Empfindlichkeit.Tobie, E.H. Thomas, H.M. Hoyem and S.B. Ward, A rapid flocculation test for the diagnosis of Trthinosis, Publ. Hlth. Rep. (Wash.) 66: 806-814), polystyrene (J.M. Singer and C.M. Plotz, Am. J. Med., 1956, 21: 888, 893) and various animal species rpte blood cells (G. Middlebrook and R.J. Dubos, Exper. Med., 1948, 88: 521; E. Nater, Bactl. Rev., 1956, 20: 166; S.V. Boyden, J. Exper. Med., 1951, 93: 107; AWAY. Stavitsky, J. Immunol., 1954, 72; 360, 368). All of these reactions are passive agglutinations, wherein the agglutinating particle is simply a carrier of the immunologically reactive Is an agent that can be obtained either by adsorption (A.B. Stavitsky, J. Immunology, 1954, a.a, O; J.M. Singer and C.M. Plotz, Armer, J, Med., Loc. Cit.) Or by chemical Coupling (T, L, Goodfriend et al., 1964, Science 144: 1344) applied to the carrier have been. The carrier particle itself is not involved in the immunological reaction involved precipitin reactions such as those carried out in gel media will, usually require a long incubation before obtaining the final result are limited to complete antigens and possess when used not the desired sensitivity in many diagnostic procedures.

Radioimmunologische Nachweisverfahren vermeiden zum Teil den Zeitfaktor und erreichen eine verbesserte Empfindlichkeit, weisen aber eine Reihe von technologischen Nachteilen auf, wie z.B. die Gefahren des Arbeitens mit radioaktiven Materialien und die zusätzlichen Kosten für die erforderlichen Instrumente und Geräte.Radioimmunological detection methods partly avoid the time factor and achieve improved sensitivity, but have a number of technological Disadvantages, such as the dangers of working with radioactive materials and the additional cost of the necessary instruments and equipment.

Das Binden von Immunoglobulin G von verschiedenen Tierarten einschl.The binding of immunoglobulin G from different animal species incl.

von Menschen mit Hilfe des Fc-Teils des Moleküls an Protein A enthaltende Stämme von Staphylococcus aureus ist bereits gezeigt worden (Sjoquist et. al,, Cold Spring Harbor Symp. quant. Biol., 32:577, 1967; A. Forsgren and J.Sjoquist, J. Immunol. 97:822, 1966; G. Kronvall und R.C. Williams jr., J. Immunology, 103:828, 1969; &. Kronvall und D. Trommel, Immunochemistry, l:124, 1970). Diese Bindung kann nicht als einfache Adsorption oder Absorption angesehenwerden, da prinzipiell gezeigt werden konnte, daß Immunoglobulin G diese Bindung beeinflußt und zwar offensichtlich nur durch den Fc-Teil des Immunoglobulin G-Moleküls.from humans using the Fc portion of the molecule to protein A containing Staphylococcus aureus has already been shown (Sjoquist et. Al ,, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 32: 577, 1967; A. Forsgren and J. Joquist, J. Immunol. 97: 822,1966; G. Kronvall and R.C. Williams Jr., J. Immunology, 103: 828, 1969; &. Kronvall and D. drum, Immunochemistry, 1: 124, 1970). This bond cannot can be regarded as simple adsorption or absorption, as shown in principle it could be shown that immunoglobulin G affects this binding and that obviously only through the Fc part of the immunoglobulin G molecule.

So konnte z,B. gezeigt werden, daß wenn Immunoglobulin G als ein Antikörper dem Polysaccharid eines bestimmten Typs von Pneumococcus ausgesetzt wurde, eine spezifisch gemischte Agglutination zwischen den durch den Antikörper sensibilisierten Staphylokokkenzellen und dem Pneumococcus resultierte (Gt Kronvall und R,C, Xilliams jr., a,a,O,), Entsprechend ist die Immunoglobulin G-Bindungskapazität für Protein A enthaltende Staphylokokken als Absorptionsmittel in fester Phase verwendet worden, um an Antikörper gebundene Antigene von freien Antigenen beim radioimmunologischen Nachweis von Alpha Fetoprotein (-S. Johnsson und G. Kronvall, J. Immunolog., 1.414-415 1972) und zusätzlich beim radioimmunologischen Nachweis von Hepatitis B Antigen und Antikörper (K.J. Figenschan und J.C.For example, demonstrated that when immunoglobulin G is used as an antibody has been exposed to the polysaccharide of a particular type of Pneumococcus, a specifically mixed agglutination between those sensitized by the antibody Staphylococcal cells and the Pneumococcus resulted (Gt Kronvall and R, C, Xilliams jr., a, a, O,), The immunoglobulin G-binding capacity is corresponding used for staphylococci containing protein A as a solid phase absorbent been to antigens bound to antibodies from free antigens in radioimmunological Detection of alpha fetoprotein (-S. Johnsson and G. Kronvall, J. Immunolog., 1.414-415 1972) and additionally in the radioimmunological detection of hepatitis B antigen and antibodies (K.J. Figenschan and J.C.

Ulstrup, Acta. path. microbiol. Scand. Section B, 82:422-428, 1974) zu trennen.Ulstrup, Acta. path. microbiol. Scand. Section B, 82: 422-428, 1974) to separate.

Auch die Anwesenheit eines Rheumatoidfaktors (RF) im menschlichen Serum ist gut nachgewiesen worden (J.B. Natvig et. al., Rheumatoid Arthritis (Ausgabe von W. Miiler) S. 343, Academic Press, London, 1971; J.B. Natvig und M.W. Turner, 1970, Nature (fond,) 225:855).Also the presence of a rheumatoid factor (RF) in the human Serum has been well established (J.B. Natvig et. Al., Rheumatoid Arthritis (Edition by W. Miiler) p. 343, Academic Press, London, 1971; J.B. Natvig and M.W. Gymnast, 1970 Nature (Fund,) 225: 855).

Dabei ist der RF aufgrund des Ansprechvermögens gegenüber einem Antikörper identifiziert worden. Dieses Ansprechvermögen findet sich in den meisten Fällen bei der Klasse der Immunoglobuline M und auch in einigen Fällen bei der Klasse der Immunoglobuline G, dann allerdings in allen Fällen mit einer Reaktivität gegenüber dem Fc-Teil des ImmunOgolbulin G-Moleküls, Es wurde nun gefunden, daß derartige Protein A enthaltende mikrobische Zellen aufgrund ihres Vermögens vorzugsweise Immunoglobulin G zu binden und auch aufgrund dessen, daß die Bindung durch den Fc-Teil des Immunogolobulin GzMoieküls ausgerichtet ist und somit den Fab-Teil für eine Antikörperaktivität freiläßt, als geeignetes Agglutinationstestsystem dienen können, um viele Antigene zu identifizieren und quantitativ zu bestimmen. Die einfache Adsorption von GamM-Globulinen an Latexteilchen beim Rheumatoidfaktortest, wie er z,Ztz üblich ist, stellt beispielsweise in keiner Weise sicher, daß nur Immunoglobulin G-Moleküle auf der Oberfläche adsorbiert werden, so daß die Möglichkeit, eine hohe Empfindlichkeit und Spezifität zu erzielen, erheblich eingeschränkt ist.The RF is due to its responsiveness to an antibody been identified. This responsiveness is found in most cases in the class of the immunoglobulins M and also in some cases in the class of Immunoglobulins G, but then in all cases with a reactivity to the Fc part of the ImmunOgolbulin G molecule, It has now been found that such Microbial cells containing protein A preferentially immunoglobulin because of their ability G to bind and also due to the fact that the binding through the Fc part of the immunogolobulin GzMoieküls is aligned and thus the Fab part for antibody activity releases, can serve as a suitable agglutination test system for many antigens to identify and quantify. The simple adsorption of GamM globulins on latex particles in the rheumatoid factor test, as is customary is, for example, in no way ensures that only immunoglobulin G molecules be adsorbed on the surface, so that the possibility of high sensitivity and to achieve specificity is severely limited.

Außerdem wurde gefunden, daß die Verwendung von Protein A enthaltenen mikrobischen Teilchen, die mit isolierten Fc-Fragmenten von Immunoglobulin G sensibilisiert sind, bevorzugt für ein spezifisches RR-Nachweisverfahren geeignet sind. Darüber hinaus ist durch die vorzugsweise Bindung von Protein A enthaltenen mikrobischen Teilchen an den Fc-Teil von Immunoglobulin G sichergestellt, daß im Gegensatz zu Latex- und anderen bisher verwendeten Agglutinationsnachweissystemen keine unspezifische Adsorption undoder Bindung von Molekülen erfolgt.It was also found that the use of protein A contained microbial particles sensitized with isolated Fc fragments of immunoglobulin G. are preferably suitable for a specific RR detection method. About that In addition, due to the preferably binding of protein A contained microbial Particles attached to the Fc part of immunoglobulin G ensured that in contrast to Latex and other previously used agglutination detection systems are not non-specific Adsorption and / or binding of molecules takes place.

Es wurde weiterhin gefunden, daß die Bindung von Immunoglobulin G-Antikörpern an Protein A enthaltene Teilchen fester ist und deshalb zu einer größeren Stabilität als mit Latex- oder Bentonitteilchen oder ähnlichen bisher verwendeten Teilchen führt, bei denen die Adsorption auf der Oberfläche schwach ist und außer bei sehr genau eingehaltenen ph-Werten und Ionenkonzentrationen des Puffers eine Trennung der durch derartige Teilchen sensibilisierten biologischen Produkte erfolgt, Außerdem verrringern sich der erforderliche Låbor-, Zeit- und Arbeitsaufwand zur Herstellung derartiger agglutinierbarer Zubereitungen für Diagnosetests, da die Protein A enthaltenden mikrobischen Teilchen vorzugsweise das Immunoglobulin G binden und deshalb das von einem Tier oder einem Menschen gewonnene, Antikörper enthaltende Serum zur Sensibilisierung verwendet werden kann, ohne daß ein arbeitsreicher und teures Laborverfahren zur Entfernung der Immunoglobuline aus dem Serum zur Konzentrierung derselben auf Latex- und anderen bisher verwendeten Teilchen erforderlich ist.It was also found that the binding of immunoglobulin G antibodies Particles contained in protein A are stronger and therefore more stable than with latex or bentonite particles or similar particles previously used results in which the adsorption on the surface is weak and except for very If the pH values and ion concentrations of the buffer are precisely observed, a separation is achieved the biological products sensitized by such particles takes place, In addition The required labor, time and effort are reduced to the Production of such agglutinatable preparations for diagnostic tests, since the Microbial particles containing protein A preferentially bind the immunoglobulin G. and therefore that containing antibodies obtained from an animal or human Serum for sensitization can be used without the need for a busy and expensive laboratory procedure to remove immunoglobulins from serum for concentration the same on latex and other previously used particles is required.

Der Erfindung liegt deshalb die Aufgabe zugrunde, ein schnelles, billiges und hochspezifisches Verfahren zum Nachweis und zur quantitativen Bestimmung von biologisch bedeutenden Molekülen, ein schnelles, billiges und spezifisches Verfahren zum Nachweis und zur quantitativen Bestimmung von RF in Testmaterialien biologischer Herkunft und ein durch Protein A enthaltende bakterielle Antikörper sensibilisiertes Agglutinationsverfahren zu liefern, das weniger zeitaufwendig aber genauso zuverlässig und empfindlich wie übliche Verfahren zum Nachweis und zur quantitativen Bestimmung von biologischenMakromolekülen ist, Zur Lösung dieser Aufgabe wird ein Verfahren zum Nachweis eines bestimmten, in einer biologischen Probe tierischer Herkunft vermuteten Antigens vorgeschlagen, daß dadurch gekennzeichnet ist, daß die das vermutete Antigen enthaltende Probe mit einer Suspension eines mit Protein A gekoppelten Teilchens vermischt wird, das so mit einem fÜr das vermutete Antigen spezifischen Antikörper sensibilisiert ist, daß der Fc-Teil des Antikörpers an das mit dem Teilchen gekoppelte Protein A gebunden ist, und bei Anwesenheit des vermuteten Antigens eine Agglutination eintritt. Gegenstand der Erfindung sind ferner Suspensionen, die dadurch gekennzeichnet sind, daß sie Protein A enthaltende Teilchen enthalten, die in der Weise mit einem Antikörper sensibilisiert sind, daß der Fc-Teil des Antikörpers an das mit den Teilchen gekoppelte Protein A gebunden ist.The invention is therefore based on the object of a fast, cheap and highly specific method for the detection and quantitative determination of biologically significant molecules, a fast, cheap and specific process for the detection and quantitative determination of RF in test materials biological Origin and a bacterial antibody sensitized by Protein A containing To deliver agglutination processes that are less time consuming but just as reliable and sensitive as usual methods for detection and quantitative determination of biological macromolecules. A method is used to solve this problem for the detection of a certain suspected animal origin in a biological sample Antigen proposed that is characterized in that the suspected antigen containing sample with a suspension of a particle coupled to protein A. is mixed, so with an antibody specific for the suspected antigen is sensitized that the Fc part of the antibody is linked to that with the particle coupled Protein A is bound, and agglutination in the presence of the suspected antigen entry. The invention also relates to suspensions, which are characterized are that they contain protein A-containing particles, which in the manner with a Antibodies are sensitized to the fact that the Fc part of the antibody is linked to the particle coupled protein A is bound.

Die Vorteile der Erfindung liegen ua. darin, daß der Nachweis und die quantitative Bestimmung von biologisch bedeutenden Makromolekülen leicht von verhältnismäßig unqualifiziertem Personal durchgeführt werden können und daß durch Verwendung von Zellwandfragmenten von Protein A enthaltenden Bakterien sich aus dem autolytischen oder exogenen Abbau und dem Aktivitätsverlust von ganzen Zellen ergebenden möglichen Komplikationen vorgebeugt wird Weitere Merkmale und Vorteile der Erfindung ergeben sich aus der folgenden Beschreibung und den Patentansprüchen, Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich zum genauen Nachweis und zur quantitativen Bestimmung von biologischen Makromolekülen, die eine Bedeutung bei der Diagnose von Krankheiten besitzen.Das erfindungsgemäße Verfahren erlaubt den Nachweis und die quantitative Bestimmung von biologisch wichtigen Molekülen durch Verwendung von Protein A enthaltenden Staphylokokken in einer direkten pessiven Agglutinationsreaktiont wobei die Protein A enthaltenden Staphylokokken über den PcTeil des spezifischen Antikörpermoleküis (Immunoglobulin G), das auf das zu bestimmende Makromolekill ausgerichtet ist, eine Bindung eingehen, Es wurde außerdem festgestellt, daß der Nachweis eines Makromoleküls, das identifiziert und quantiativ bestimmt werden soll, erheblich verbessert wird, indem die Staphylokokken mit gereinigten Antikörpern sensilibisiert werden, die man von einer Immunabsorptionssäule erhält. Bei derartigen Verfahren bestimmt man den Endpunkt der quantitativen Bestimmung des zu identifizierenden und quantitativ zu bestimmenden Makromoleküls, indem man eine Serie von aufeinanderfolgenden Verdünnungen des Testmaterials gemischt mit einem gleichgroßen Volumen der sensibilisierten Staphylokokken durchführt, Die letzte Verdünnung, die eine sichtbare Agglutination ergibt, multipliziert mit einem Nachweis oder Bestimmungsfaktorw der sensilibisierten Teilchen (die minimale Menge die däs Teilchen nachweisen kann) ergibt einen quantitativen Wert für die getestete Probe Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich auch zum Nachweis und zur halbquantitativen Bestimmung des Rheumatoidfaktors RF. Bei dieser Verfahrensweise werden die Protein A enthaltenden mikrobischen Zellen mit einem Fc-Fragment von menschlichem Immunoglobulin G sensilibisiert. Die halbquantitative Bestimmung wird durch aufeinanderfolgendes Verdünnen des Testmaterials erreicht, das jeweils mit einem gleichgroßen Volumen der Fc-sensibilisierten mikrobischen Zellen vermischt wird. Der Endpunkt oder Titer ist die höchste Verdünnung des Testserums, die eine sichtbare Agglutination der Teilchen ergibt Die Erfindung betrifft also mit Ilinnnunoglohulin kombinierte Protein A enthaltende mikrobische Zellen, die in einem neuen, empfindlichen immunologischen Nachweisverfahren eingesetzt werden, das in der Lage ist, Antigene nachzuweisen und quantitativ zu bestimmen, für die ein Antikörper entweder menschlicher oder tierischer Herkunft existiert. Außerdem sind die mit Immunoglobulin kombinierten Protein A enthaltenden mikrobischen Zellen auch zum Nachweis und zur quantitativen Bestimmung des Rheumatoidfaktors geeignet. The advantages of the invention include. in that the evidence and the quantitative determination of biologically important macromolecules easily of relatively unqualified personnel can be carried out and that by Use of cell wall fragments of bacteria containing protein A emerges the autolytic or exogenous degradation and loss of activity of whole cells resulting possible complications are prevented. Other features and advantages of the invention emerge from the following description and the claims, The method according to the invention is suitable for precise and quantitative detection Determination of biological macromolecules, which are of importance in diagnosis of diseases. The inventive method allows the detection and the quantitative determination of biologically important molecules through use of protein A-containing staphylococci in a direct pessive agglutination reaction wherein the protein A containing staphylococci via the Pc part of the specific Antibody molecule (immunoglobulin G) that targets the macromolecule to be determined aligned is to enter into a bond, It was also determined that the detection of a macromolecule that is identified and quantified is said to be greatly improved by having the staph with purified Antibodies are sensitized, which are obtained from an immunoabsorption column. Such methods determine the end point of the quantitative determination of the macromolecule to be identified and quantified by a series of successive dilutions of the test material mixed with carries out an equal volume of the sensitized staphylococci, the last Dilution that gives visible agglutination multiplied by a detection or determining factor w of the sensitized particles (the minimum amount the däs Can detect particles) gives a quantitative value for the sample tested The method according to the invention is also suitable for detection and semi-quantitative Determination of the rheumatoid factor RF. In this procedure, the protein A containing microbial cells with an Fc fragment of human immunoglobulin G sensitized. The semi-quantitative determination is made by successive Dilution of the test material is achieved, each with an equal volume the Fc-sensitized microbial cells is mixed. The end point or titer is the highest dilution of the test serum that has a visible agglutination of the Particle yields The invention thus relates to protein combined with ilinnunoglohulin A. containing microbial cells residing in a new, sensitive immunological Detection methods are used that is able to detect antigens and quantify for which an antibody is either human or animal origin exists. Also, those combined with immunoglobulin are Microbial cells containing protein A also for detection and quantitative Determination of the rheumatoid factor suitable.

Der Begriff Antigen, wie er oben verwendet wurde, soll alle biologischen Makromoleküle umfassen, unabhängig davon, ob sie natürlicher Herkunft oder synthetisiert sind, die mit einem bestimmten Antikörper reagieren Der Begriff Protein A enthaltende mikrobische Zelle, wie er oben verwendet worden istr umfaßt alle Protein A enthaltenden mikrobischen Zellen, sei es, daß sie als intakte Zellen, als Zellwandfragmente, als Zellmembranen oder irgendeine lösliche Substanz oder ein Derivat davon verwendet werden Die Bezeichnung mit Immunoglobulin kombinierte Protein A enthaltende mikrobische Zelle, wie sie oben verwendet worden ist, umfaßt alle ganzen Immunoglobulinmoleküler daraus abgeleitete Immunoglobulinteile oder ganze Immunoglobulinmoleküle enthaltende Seren.The term antigen, as used above, is intended to mean all biological Macromolecules include regardless of whether they are natural or synthesized that react with a specific antibody The term protein A containing microbial cell as used above includes all protein A containing microbial cells, be it that they are intact cells, as cell wall fragments, used as cell membranes or any soluble substance or derivative thereof The term microbial containing protein A combined with immunoglobulin Cell as used above includes all whole immunoglobulin molecules Immunoglobulin parts derived therefrom or containing whole immunoglobulin molecules Serums.

Der dem erfindungsgemäßen Verfahren zugrundeliegende Mechanismus wird im folgenden anhand der Zeichnungen erläutert werden In Fig, 1 ist als Beispiel ein rotes Blutkörperchen (RBC) mit daran angekoppeltem Protein A (PA) dargestellt. Ebensogut wie ein rotes Blutkörperchen eignet sich eine mikrobische Zelle. An das Protein A wird dann der Antikörper über sein Fc-Ende angekoppelt, so daß die Fab-"Arme" nach außen wegstehen, wie in Figq 2 dargestellt. Bei dieser Anordnung befinden sich die Fab-Teile des Antikörpers in der richtigen Position, um das spezifische Antigen (Ag) wie in Fig. 3 dargestellt einzufangen, Der Antikörper AB ist in Fig. 4 noch einmal vergrößert dargestellt, so daß seine Struktur besser erkennbar ist, Zum Vergleich ist in Fig. 5 ein zum Stand der Technik gehörendes Teilchen IP dargestellt, an das kein Protein A angekoppelt ist.The mechanism on which the method according to the invention is based is will be explained below with reference to the drawings In Fig. 1 is an example of a red blood cell (RBC) with a protein attached to it A (PA) shown. A microbial cell is just as suitable as a red blood cell Cell. The antibody is then coupled to protein A via its Fc end, so that the Fab "arms" protrude outwards, as shown in FIG. At this Arrangement, the Fab parts of the antibody are in the correct position, to capture the specific antigen (Ag) as shown in Figure 3, the antibody AB is shown enlarged again in Fig. 4, so that its structure is better can be seen. For comparison, FIG. 5 shows a state of the art Particle IP shown to which no protein A is coupled.

Die Folge davon ist, daß der Antikörper sich nicht mit Sicherheit der bevorzugten Orientierung anlagert, d.h., einige der Fc-Enden befinden sich in der bevorzugten Position und andere nicht, wie ebenfalls in Fig. 5 dargestellt. Schon nach dieser schematischen Darstellung ergibt sich, daß die erfindungsgemäß verwendeten Teilchen aufgrund der durchgehend optimalen Orientierung der Antikörper bessere Ergebnisse als die zum Stand der Technik gehörenden Teilchen ergeben müssen, Beispiel 1; Eine Kultur von Protein A enthaltenden S. aureus, Stamm G 128, wurde in 25o ml Todd Hewitt Brühe (in einem 1-Liter Erlenmeyer Kolben) eingeimpft und 9 Stunden lang bei einer Inkubationstemperatur von 350c auf einer schüttelvorrichtung geschüttelt.The consequence of this is that the antibody is not certain the preferred orientation, i.e. some of the Fc ends are in the preferred position and others not, as also shown in FIG. Even after this schematic representation it is evident that the invention used particles due to the consistently optimal orientation of the antibodies must give better results than the particles belonging to the state of the art, Example 1; A culture of S. aureus, strain G 128, containing protein A was obtained inoculated into 250 ml Todd Hewitt broth (in a 1 liter Erlenmeyer flask) and 9 hours at an incubation temperature of 350c on a shaker shaken.

Die so gewonnene Kultur wurde 45 Min. bei 50C mit 3.ooo U/min.The culture obtained in this way was 45 min. At 50C with 3000 rpm.

rotiert, wieder in einer Salzlösung suspendiert und auf eine Nummer 9 Ablesung eines MacFarland-Nephelometers eingestellt.rotated, resuspended in a saline solution and hit a number 9 MacFarland nephelometer reading set.

Die in der Salzlösung suspendierten Zellen wurden dann in einem Wasserbad mit einer Temperatur von 80°C unter ständigem Rühren 15 Min. lang erwärmt und anschließend sofort abgekühlt.The cells suspended in the saline solution were then placed in a water bath heated at a temperature of 80 ° C with constant stirring for 15 minutes and then cooled immediately.

Die so hergestellte Suspension von S. aureus wurde etwa 5 bis 7 mal durch Zentrifugieren gewaschen und unter Verwendung eines Phosphatpuffers (PBS) bei einem pH-Wert von 7,3 wieder suspendiert.The suspension of S. aureus so prepared was about 5 to 7 times washed by centrifugation and using a phosphate buffer (PBS) resuspended at pH 7.3.

lo mg der gewaschenen Zellsuspension wurden in 5 ml phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) mit einem pH-Wert von 7,4 suspendiert.lo mg of the washed cell suspension were in 5 ml of phosphate buffered Saline solution (PBS) suspended at pH 7.4.

Zu der Suspension wurden o,2 ml einer Fc-Fragmentzubereitung von menschlichem Immunoglobulin G angegeben, die nach dem von Adelmann et al. beschriebenen Verfahren hergestellt worden war (J.Exptl.To the suspension were o, 2 ml of an Fc fragment preparation of human Immunoglobulin G indicated, which according to the Adelmann et al. described procedure had been produced (J.Exptl.

Med., " 12;203 1260) Nach zehnminütigem Rühren bei Raumtemperatur wurde die Mischung mit 5.ooo U/min, in der Kälte zentrifugiert und die gebildete Pille wurde 3 mal mit PBS gewaschen und dann in 5 ml PBS suspendiert. Die so hergestellte Suspension kann als solche verwendet werden, oder mit wenigen Tropfen eines verdünnten Farbstoffs wie Safranin Versetzt werden, der als Farbmarkierung für die suspendierten Teilchen und außerdem als Sichthilfe bei der Bestimmung des Endergebnisses der Agglutinationsreaktion dient.Med., "12; 203 1260) After stirring for ten minutes at room temperature the mixture was centrifuged at 5,000 rpm, in the cold and the formed The pill was washed 3 times with PBS and then suspended in 5 ml of PBS. The one made in this way Suspension can be used as such, or diluted with a few drops of a Dye such as Safranin can be used as a color marker for the suspended Particles and also as a visual aid in determining the final result of the agglutination reaction serves.

Um zu zeigen, daß der Fc-Teil wirklich an die Protein A enthaltenden Mikrokokken angekoppelt war und dadurch die Möglichkeit zum Nachweis des Rheumatoidfaktors in Seren gegeben war, und um die erhöhte Spezifität einer derartigen Fc-sensilibisierten, Protein A enthaltenden Zellzubereitung für den Rheumatoidfaktor zu zeigen, wurden die folgenden Serenproben nach 5 Verfahren analysiert.To show that the Fc part is really attached to the protein A containing Micrococci was coupled and thereby the possibility of detecting the rheumatoid factor was given in sera, and the increased specificity of such an Fc-sensitized, Protein A containing cell preparation for rheumatoid factor the following sera samples analyzed by 5 methods.

Die "Behring"-Analyse wurde unter Verwendung des Rheumatoidfaktortestsatzes "Rapiltex" (Behring Diagnostics, Somerville, N.J.)durchgeführt.The "Behring" analysis was performed using the rheumatoid factor testing set "Rapiltex" (Behring Diagnostics, Somerville, N.J.).

Die als "Hyland"-Säule bezeichnete Säule wurde gemäß den Anweisungen eines Rheumatoidfaktornachweissatzes "RA-Test" (Hyland Div. Travenol Laboratories, Costa Mesa, Calif.) verwendet.The column, designated the "Hyland" column, was constructed according to the instructions a rheumatoid factor detection set "RA-Test" (Hyland Div. Travenol Laboratories, Costa Mesa, Calif.).

Die Fc-Bestimmungen repräsentieren das oben hergestellte Material und die Waaler-Rose-Titer repräsentieren Rheumatoidfaktoragglutinine bei denen der Zähler mittels eines menschlichen gamma-globuliniatex-sensilibisierten Antigens und der Nenner mittels eines gammaglobulin-sensibilisierten Antigens von Kaninchen bestimmt wurden.The Fc determinations represent the material prepared above and the Waaler-Rose titers represent rheumatoid factor agglutinins in those of Counter by means of a human gamma-globuliniatex-sensitized antigen and the denominator using a rabbit gamma globulin sensitized antigen were determined.

Falls bekannt ist die Diagnose des Patienten angegeben.If known, the patient's diagnosis is given.

Aus dieser Versuchsserie geht klar hervor, daß die erfindungsgemäße Zubereitung mit einem Fc gekoppelten, Protein A enthaltenden Teilchen sich gut zum Nachweis des Rheumatoidfaktors eignet. Außerdem geht aus der Versuchsserie hervor, daß in vielen Fällen, insbesondere wenn kein klares Diagnosebild für Rheumatoidarthritis existiert, die Agglutination beim erfindungsgemäßen Fc-Material häufiger nicht eintritt oder schwächer ist als bei den Hyland oder sogar den Behring-Reagenzien.From this series of tests it is clear that the inventive Preparation with an Fc-coupled particle containing Protein A works well Detection of the rheumatoid factor is suitable. In addition, the test series shows that in many cases, especially when there is no clear diagnostic picture for rheumatoid arthritis exists, the agglutination does not occur more frequently in the case of the Fc material according to the invention or is weaker than the Hyland or even the Behring reagents.

Waaler Probe Rose Code-Nr. Behring Fc Hyland Titer Diagnose 82-80 E - -82-80 F 82-80 G - -82-80 H ++++ ++++ ++++ 640/160 Arthritis 82-80 I ++++ + 82-80 J - - - Hyper gamma 82-80 K ++++ ++++ ++++ 1280/160 Arthritis 82-80 L ++++ ++ ++++ 640/320 82-80 M - - -82-80 N - - -82-80 0 ++++ ++++ ++++ 640/1280 82-80 P - - - 160/320 Arthritis 82-80 Q - - +t Prostate carcinoma 82-80 R - -82-80 S - -82-80 T - - - Carcinoma penis 82-80 U ++ +/- ++ 82-80 V - - + Hyper gamma, cirrhosis 82-80 W - - Hyper gamma, pleural affusion 82-80 X +/- - +++ Hyper gamma, cirrhosis 82-80 Y - - ++ Hyper gamma, alcoholic 82-80 Z ++++ ++++ ++++ 2560/640 Tina synamitis 82-80 AA - + + Hyper gamma 82-80 AB +/- - Hyper gamma, anemia hepatomy 82-80 AC + - ++ Hyper gamma, cirrhosis 82-80 AD - - - Hyper gamma, alsin 82-80 AE +++ + ++++ Hyper gamma, jaundice 82-80 AF - ++++ + Hyper gamma 82-81 A ++ + ++ Hyper gamma, cirrhosis 82-81 B - - - Gastro-intestinal bleeding 82-81 C - - - VDRL R-2 82-81 D - - + VDRL R-2 82-81 E - - - VDRL R-2 82-81 F - - - VDRL WR 82-81 G - - - VDRL R-2 82-81 H - - VDRL R-2 82-81 1 + - - VDRL WR 82-81 J - - VDRL WR 82-81 K - - - VDRL WR Probe Behring Fc Hyland Waaler- Diagnose Code-Nr. Rose Titer 82-81 L - - - VDRL WR 82-81 M - - - VDRL WR 82-81 N - + +t 82-81 0 - - + Carcinoma prostate 82-81 P - - ++ Carcinoma prostate 82-81 Q - - - VDRL WR 82-81 R - - - VDRL R-1 82-81 S - - +t+ VDRL R-2 82-81 T - - - VDRL WR 82-81 U - - - VDRL WR 82-81 V - - + Cirrhosis 82-81 W - - - VDRL WR 82-81 X - - - VDRL R-2 82-81 Y - - - VDRL R-2 82-81 Z - -82-81 AA - - - Obstructive jaundice 82-81 AB - - - VDRL WR 82-81 AC - - - Carcinoma Prostate 82-81 AD - - - VDRL R-2 82-81 AE + + ++ VDRL R-1 82-81 AF - - - VDRL R-1 82-81 AG - - ++ VDRL R-4 82-82 V - - - R/O collagen dis, 82-82 W -82-82 X - - - Hyper gamma 82-82 Y - - - BPH 82-82 Z ++++ ++++ ++++ 2560/2560 Arthritis 82-82 AA - - - Hyper gamma monocytopeni 82-82 AB -- - - Hyper gamma 82-82 AC - - - VDRL WR 82-82 AD - - - VDRL WR 82-82 AE - - - VDRL R-2 82-82 AF - - - VDRL R-1 82-82 A +++ + +++ -/60 82-82 B - - -82-82 C ++++ ++++ ++++ -/160 R.A. Waaler Probe Rose Code No. Behring Fc Hyland titer diagnosis 82-80 E - -82-80 F 82-80 G - -82-80 H ++++ ++++ ++++ 640/160 Arthritis 82-80 I ++++ + 82-80 J - - - Hyper gamma 82-80 K ++++ ++++ ++++ 1280/160 Arthritis 82-80 L ++++ ++ ++++ 640/320 82-80 M - - -82-80 N - - -82-80 0 ++++ ++++ ++++ 640/1280 82-80 P - - - 160/320 Arthritis 82-80 Q - - + t Prostate carcinoma 82-80 R - -82-80 S - -82-80 T - - - Carcinoma penis 82-80 U ++ +/- ++ 82-80 V - - + Hyper gamma, cirrhosis 82-80 W - - Hyper gamma, pleural affusion 82-80 X +/- - +++ Hyper gamma, cirrhosis 82-80 Y - - ++ Hyper gamma, alcoholic 82-80 Z ++++ ++++ ++++ 2560/640 Tina synamitis 82-80 AA - + + Hyper gamma 82-80 AB +/- - Hyper gamma, anemia hepatomy 82-80 AC + - ++ Hyper gamma, cirrhosis 82-80 AD - - - Hyper gamma, alsin 82-80 AE +++ + ++++ Hyper gamma, jaundice 82-80 AF - ++++ + Hyper gamma 82-81 A ++ + ++ Hyper gamma, cirrhosis 82-81 B - - - Gastrointestinal bleeding 82-81 C - - - VDRL R-2 82-81 D - - + VDRL R-2 82-81 E - - - VDRL R-2 82-81 F - - - VDRL WR 82-81 G - - - VDRL R-2 82-81 H - - VDRL R-2 82-81 1 + - - VDRL WR 82-81 J - - VDRL WR 82-81 K - - - VDRL WR Probe Behring Fc Hyland Waaler diagnosis code no. rose Titer 82-81 L - - - VDRL WR 82-81 M - - - VDRL WR 82-81 N - + + t 82-81 0 - - + Carcinoma prostate 82-81 P - - ++ Carcinoma prostate 82-81 Q - - - VDRL WR 82-81 R - - - VDRL R-1 82-81 S - - + t + VDRL R-2 82-81 T - - - VDRL WR 82-81 U - - - VDRL WR 82-81 V - - + Cirrhosis 82-81 W - - - VDRL WR 82-81 X - - - VDRL R-2 82-81 Y - - - VDRL R-2 82-81 Z - -82-81 AA - - - Obstructive jaundice 82-81 AB - - - VDRL WR 82-81 AC - - - Carcinoma Prostate 82-81 AD - - - VDRL R-2 82-81 AE + + ++ VDRL R-1 82-81 AF - - - VDRL R-1 82-81 AG - - ++ VDRL R-4 82-82 V - - - R / O collagen dis, 82-82 W -82-82 X - - - Hyper gamma 82-82 Y - - - BPH 82-82 Z ++++ ++++ ++++ 2560/2560 Arthritis 82-82 AA - - - Hyper gamma monocytopeni 82-82 AB - - - Hyper gamma 82-82 AC - - - VDRL WR 82-82 AD - - - VDRL WR 82-82 AE - - - VDRL R-2 82-82 AF - - - VDRL R-1 82-82 A +++ + +++ - / 60 82-82 B - - -82-82 C ++++ ++++ ++++ - / 160 R.A.

82-82 D ++++ ++++ ++++ -/160 R.A.82-82 D ++++ ++++ ++++ - / 160 R.A.

82-82 E ++++ ++++ ++++ R.A.82-82 E ++++ ++++ ++++ R.A.

82-82 F ++++ ++++ ++++ R.A.82-82 F ++++ ++++ ++++ R.A.

82-82 G ++++ ++++ ++++ -/640 R.A.82-82 G ++++ ++++ ++++ - / 640 R.A.

82-82 H ++++ ++++ ++++ -/320 R.A.82-82 H ++++ ++++ ++++ - / 320 R.A.

82-82 J - - -82-82 K - - -82-82 L ++++ ++++ ++++ -/512 R.A.82-82 J - - -82-82 K - - -82-82 L ++++ ++++ ++++ - / 512 R.A.

82-82 M ++++ ++++ ++++ -/160 R.A.82-82 M ++++ ++++ ++++ - / 160 R.A.

82-82 N - - c 82-82 P t + 82-82 Q +++ +++ +++ R.A.82-82 N - - c 82-82 P t + 82-82 Q +++ +++ +++ R.A.

82-82 R ++++ ++++ ++++ -/160 R.A.82-82 R ++++ ++++ ++++ - / 160 R.A.

Probe Waaler-Code-Nr, Behring Fc Hyland Rose Diagnose Titer 82-82 S ++++ ++++ ++++ -/320 R.A.Sample Waaler Code No, Behring Fc Hyland Rose Diagnosis Titer 82-82 S ++++ ++++ ++++ - / 320 R.A.

82-82 T +++ +++ +++ -/80 R.A.82-82 T +++ +++ +++ - / 80 R.A.

82-82 U ++++ ++++ ++++ R.A.82-82 U ++++ ++++ ++++ R.A.

82-83 B - - -82-83 C ++ ++ 82-83 D - -82-83 E - - + 82-83 F ++++ ++++ ++++ 1280/neg 82-83 G ++++ ++++ ++++ 82-83 H - - -82-83 I - - + Hyper gamma 82-83 J - + ++ 82-83 K - - -82-83 L - - + Hyper gamma, hepatitis 82-83 M - - - Hyper gamma 82-83 N - - + 82-83 0 - - - VDRL R-2 82-83 P - - - Hydrothorax RF (-82-83 Q - - - Carcinoma penis 82-83 R - - -82-83 S - - - Carcinoma prostate 82-83 T + ++ +++ Hyper gamma, liver failure 82-83 U + + ++ Hyper gamma, alcoh.liver 82-83 V - - t+ Hyper gamma, AVH 82-83 W ++ - + Hyper gamma 82-83 X - - - Hyper gamma, cirrhosis 82-83 Y - + ++ Hyper gamma, cirrhosis 82-83 Z - - - VDRL + 82-83 AA - - - Carcinoma penis 82-83 AB - - - Carcinoma prostate 82-83 AC - - +/-82-83 AD 71-43 T ++ ++ +++ 320/320 Cirrhosis 71-43 R +++ ++ ++++ 2560/2560 Rheum. Arthritis 71-43 F +++ +++ ++++ 1280/2560 AVH 71-43 E ++++ +++ ++++ 160/320 Alc. Liver dis.82-83 B - - -82-83 C ++ ++ 82-83 D - -82-83 E - - + 82-83 F ++++ ++++ ++++ 1280 / neg 82-83 G ++++ ++++ ++++ 82-83 H - - -82-83 I - - + Hyper gamma 82-83 J - + ++ 82-83 K - - -82-83 L - - + Hyper gamma, hepatitis 82-83 M - - - Hyper gamma 82-83 N - - + 82-83 0 - - - VDRL R-2 82-83 P - - - Hydrothorax RF (-82-83 Q - - - Carcinoma penis 82-83 R - - -82-83 S - - - Carcinoma prostate 82-83 T + ++ +++ Hyper gamma, liver failure 82-83 U + + ++ Hyper gamma, alcoh.liver 82-83 V - - t + Hyper gamma, AVH 82-83 W ++ - + Hyper gamma 82-83 X - - - Hyper gamma, cirrhosis 82-83 Y - + ++ Hyper gamma, cirrhosis 82-83 Z - - - VDRL + 82-83 AA - - - Carcinoma penis 82-83 AB - - - Carcinoma prostate 82-83 AC - - +/- 82-83 AD 71-43 T ++ ++ +++ 320/320 Cirrhosis 71-43 R +++ ++ ++++ 2560/2560 Rheum. Arthritis 71-43 F +++ +++ ++++ 1280/2560 AVH 71-43 E ++++ +++ ++++ 160/320 Alc. Liver dis.

71-43 D ++ ++ +++ 160/neg. Rheum. Arthritis 71-42 S ++++ ++++ ++++ 71-43 H + + ++ 80/neg. CRF 71-43 G - - -71-43 U - - - 80/neg. CVA 82-94 K ++ + +++ 640/neg. Arthritis 82-94 L - -82-94 N - + ++ 82-94 O +++ ++ +++ 640/40 82-94 P - + ++ 640/320 Cellulitis - + + +/- + ++ - - - Probe Waaler Code-Nr. Behring Fc Hyland Rose Diagnose Titer 82-94 T ++++ ++++ ++++ 320/neg.71-43 D ++ ++ +++ 160 / neg. Rheumatism. Arthritis 71-42 S ++++ ++++ ++++ 71-43 H + + ++ 80 / neg. CRF 71-43 G - - -71-43 U - - - 80 / neg. CVA 82-94 K ++ + +++ 640 / neg. Arthritis 82-94 L - -82-94 N - + ++ 82-94 O +++ ++ +++ 640/40 82-94 P - + ++ 640/320 cellulite - + + +/- + ++ - - - Sample Waaler code no. Behring Fc Hyland Rose Diagnosis Titer 82-94 T ++++ ++++ ++++ 320 / neg.

82-94 U +++ +++ .+++ 320/640 Cirrhosis 82-94 V +++ ++ +t+ 640/640 71-43 X + + ++ 1600/40 AVH 82-94 X ++ + ++ Arthritis (neg.) 71-43 Y ++ + +++ 320/320 Cirrhosis 82-94 Z ++ ++ ++ 71-43 M - + + 82-94 AB - - - Hyper gamma, acute hemature 71-44 A - + ++ 16o/neg. Bronchial asthma 82-94 AD - + ++ 82-94 A ++++ ++++ ++++ 82-94 AF - - -71-43 Q ++ + ++ 160/320 71-44 C + + ++ 320/80 82-94 AI +++ +++ +++ Anemia 71-43 P + + ++ 160/20 Alcoholism 71-44 B + + + 320/320 Cirrhosis 82-95 D +++ ++ +++ 1280/160 Arthritis 71-43 N t+ ++ ++ 80/neg. R/O, dermatomyasitis 82-95 F +++ +++ ++++ 640/1280 82-95 G - -82-95 H - - -71-44 P ++++ ++++ ++++ 640/640 Chronic hepatitis 71-44 N ++++ ++++ ++++ 1280/640 Hepatomegaly 71-44 M - + ++ 16o/neg. R/9 SLE 71-44 K + + ++ 640/320 AVH 71-44 Q + + ++ 640/640 82-95 A - - -82-95 N +/- - + 82-95 0 - - - Hypergamma abscess 82-95 P - - -82-95 0 - - - Carcinoma prostate 82-95 R - + + 160/20 82-95 S - - + 160/320 Arthritis 71-44 L ++ ++ +++ 320/neg. Alcoh. liver 71-44 J + + ++ 160/160 Pancreatitis 71-44 H + + ++ 320/320 71-44 G +t + +t 320/80 Cirrhosis 71-44 F ++ + +++ 2560/1280 Rheumatoid arthritis 71-44 D - + ++ 160/160 Alcoholism 71-44 E + + ++ 640/160 Gout 82-95 AA - - - Carcinoma prostate 82-95 AB - + ++ Hyper gamma 82-95 AC - - +/- Hyper gamma 82-95 AD - - - Carcinoma prostate 82-95 AE - - - Hyper gamma, alcoholic 82-95 AF - t ++ Hyper gamma, liver dis.82-94 U +++ +++. +++ 320/640 Cirrhosis 82-94 V +++ ++ + t + 640/640 71-43 X + + ++ 1600/40 AVH 82-94 X ++ + ++ Arthritis (neg.) 71-43 Y ++ + +++ 320/320 Cirrhosis 82-94 Z ++ ++ ++ 71-43 M - + + 82-94 AB - - - Hyper gamma, acute hemature 71-44 A - + ++ 16o / neg. Bronchial asthma 82-94 AD - + ++ 82-94 A ++++ ++++ ++++ 82-94 AF - - -71-43 Q ++ + ++ 160/320 71-44 C + + ++ 320/80 82-94 AI +++ +++ +++ Anemia 71-43 P + + ++ 160/20 Alcoholism 71-44 B + + + 320/320 Cirrhosis 82-95 D +++ ++ +++ 1280/160 Arthritis 71-43 N t + ++ ++ 80 / neg. R / O, dermatomyasitis 82-95 F +++ +++ ++++ 640/1280 82-95 G - -82-95 H - - -71-44 P ++++ ++++ ++++ 640/640 Chronic hepatitis 71-44 N ++++ ++++ ++++ 1280/640 Hepatomegaly 71-44 M - + ++ 16o / neg. R / 9 SLE 71-44 K + + ++ 640/320 AVH 71-44 Q + + ++ 640/640 82-95 A - - -82-95 N +/- - + 82-95 0 - - - Hypergamma abscess 82-95 P - - -82-95 0 - - - Carcinoma prostate 82-95 R - + + 160/20 82-95 S - - + 160/320 Arthritis 71-44 L ++ ++ +++ 320 / neg. Alcoh. liver 71-44 J + + ++ 160/160 pancreatitis 71-44 H + + ++ 320/320 71-44 G + t + + t 320/80 Cirrhosis 71-44 F ++ + +++ 2560/1280 Rheumatoid arthritis 71-44 D - + ++ 160/160 Alcoholism 71-44 E + + ++ 640/160 Gout 82-95 AA - - - Carcinoma prostate 82-95 AB - + ++ Hyper gamma 82-95 AC - - +/- Hyper gamma 82-95 AD - - - Carcinoma prostate 82-95 AE - - - Hyper gamma, alcoholic 82-95 AF - t ++ Hyper gamma, liver dis.

Bei 18 der untersuchten 189 Proben ergab der Hyland-Test eine Agglutination,während der Behring-Test und der Fc-Test absolut negativ waren. Diese 18 Proben verteilen sich auf die im folgenden aufgeführten Gruppen, die aufgrund der Waaler-Rose Titer der klinischen Bestimmung und dem völligen Ausbleiben einer Agglutination sowohl beim Behring- als auch Fc-Test eindeutig nicht rheumatoid waren: Carcinoma 3 VDRL positive 3 Cirrhosis 3 Pleural affusfon 1 Alcoholic 1 Hyper-gamma 3 Verschiedene 4 Beim Vergleich der Hyland-Ergebnisse mit den Behring-Ergebnissen stellt man fest, daß in 34,4 % oder bei 65 von den 189 untersuchten Proben der Hyland-Test immer eine stärkere Agglutination als der Behring-Test ergab. Beim Vergleich der Hyland-Ergebnisse mit den Fc-Ergebnissen ergibt sich, daß der Hyland-Test in 40,2 % oder bei 76 von den 189 untersuchten Proben eine stärkere Reaktion ergab. Diese Ergebnisse stimmen überein mit dem Bericht von MacSween und Mitarbeitern ( Jrnl of Clin Path., S. 368, Vol 27/1974), in dem gezeigt wurde, daß der Hyland RF-Test den geringsten Prozentsatz an Correlation mit negativen Waaler-Rose Seren ergab, d,h, mit anderen Worten, er ist der am wenigsten zuverlässige von allen untersuchten RF-Tests hinsichtlich von falschen positiven Ergebnissen mit negativen Waaler-Rose Seren Diese Ergebnisse beweisen die verbesserte Spezifität und die Behauptung (Ilter und Turner, Clin. exp. Immunol., 1973, 15:93-101), daß es der Fc-Teil ist, der spezifische mit dem Rheumatoidfaktor reagiert und daß deshalb die erfindungsgemäße Zubereitung eine erhöhte Spezifität aufweist und zu einer verringerten Anzahl falscher positiver Ergebnisse führt.In 18 of the 189 samples examined, the Hyland test showed agglutination while the Behring test and the Fc test were absolutely negative. Distribute these 18 samples on the groups listed below, based on the Waaler-Rose titer clinical determination and the complete absence of agglutination both in the Behring and Fc tests were clearly not rheumatoid: Carcinoma 3 VDRL positive 3 Cirrhosis 3 Pleural affusfon 1 Alcoholic 1 Hyper-gamma 3 Various 4 When comparing the Hyland results with the Behring results one finds that in 34.4% or in 65 of the 189 samples examined the Hyland test always showed greater agglutination than the Behring test. When comparing the Hyland results the Fc results show that the Hyland test performed in 40.2% or 76 out of gave a stronger response to the 189 samples examined. These results are correct in accordance with the report by MacSween et al (Journal of Clin Path., p. 368, Vol 27/1974) in which the Hyland RF test was shown to have the lowest percentage of correlation with negative Waaler-Rose sera, i.e., in other words, he is the least reliable of all examined RF tests with regard to false positive results with negative Waaler-Rose serums These Results prove the improved specificity and the claim (Ilter and Turner, Clin. exp. Immunol., 1973, 15: 93-101) that it is the Fc part that is specific with the rheumatoid factor reacts and that therefore the preparation according to the invention is a has increased specificity and a reduced number of false positives Results leads.

Bei der in diesem Beispiel verwendeten Fc-sensibilisierten Zellenzubereitung wurden intakte Zellen verwendet, aber es können auch Zellwandfragmente von Protein A enthaltenden Zellen in einer entsprechenden Weise verwendet werden.In the Fc-sensitized cell preparation used in this example Intact cells were used, but cell wall fragments of protein can also be used A containing cells can be used in a corresponding manner.

Beispiel 2; Die Zellenzubereitung von Protein A enthaltenden S. arueus Stämmen G-) bis wurde wie oben im Beispiel 1 beschrieben bis zum 5 bis 7maligen Waschen mit PBS 7,3 durchgeführt. Danach wurden die Zellen mechanisch z,B. mit einer Eperbach-Mikromühle zerrissen. Der Zusatz von 120 my Glasperlen erleichtert das Zerreißen der mikrobischen Zellen, Die Zellwandteilchen wurden von anderen Teilchen und löslichem Zellplasma durch differentielles Zentrifugieren getrennt und mittels wiederholten Zentrifugieren gründlich mit destilliertem Wasser gewaschen Das fertige Zellwandmaterial wurde dann gefriergetrocknet.Example 2; The cell preparation of S. arueus containing protein A. Strains G-) bis was as described above in Example 1 up to 5 to 7 times Washing done with PBS 7.3. Then the cells were mechanically z. B. with a Eperbach micromill torn up. The addition of 120 my glass beads makes this easier Rupturing the microbial cells, the cell wall particles were separated from other particles and soluble cytoplasm separated by differential centrifugation and by means of repeated centrifugation thoroughly washed with distilled water The finished Cell wall material was then freeze dried.

10 mg der gewaschenen Zellwandsuspension wurden in 5 ml phosphatgepufferter Salzlösung mit einem pH-Wert von 7,4 suspendiert. Zu dieser Suspension wurde die gleiche Menge an Fc-Fragmentzubereitung wie in Beispiel 1 gegeben Danach wurden dann die gleichen Testverfahren wie in Beispiel 1 beschrieben durchgeführt. Die Ergebnisse waren im wesentlichen die gleichen, was die Durchführbarkeit der Sensibilisierung von Zellwandfragmenten von Protein A enthaltenden Mikroorganismen mit den Fc-Fragmenten demonstriert, die dann in Gegenwart eines Rheumatoidfaktors agglutinieren, Beispiel 3; Aus Kulturen von Cryptococcus Neoformens wurde Polysaccharid wie von Bloomfield et al. (ProctSoc.Exptl. Biol, 2nd Med., 114;64-67,1963) beschrieben hergestellt.10 mg of the washed cell wall suspension were in 5 ml of phosphate buffered Suspended saline solution with a pH of 7.4. To this suspension the The same amount of Fc fragment preparation as in Example 1 was then given then the same test procedure as described in Example 1 carried out. The results were essentially the same in terms of feasibility the sensitization of cell wall fragments of protein A-containing microorganisms demonstrated with the Fc fragments, which are then in the presence of a rheumatoid factor agglutinate, Example 3; Cultures of Cryptococcus Neoformens became polysaccharide as reported by Bloomfield et al. (ProctSoc.Exptl. Biol, 2nd Med., 114; 64-67, 1963) manufactured.

Das Cryptococcus Polysaccharid ergab bei geeigneter Injektion in Kaninchen eine Antiserum, das mit dem Cryptococcus Polysaccharid reagierte. Das so immunisierte Kaninchenserum wurde zum Sensibilisieren sowohl von Latexteilchen als auch von Protein A enthaltenden Mikrokokkenzellen verwendet, um die Möglichkeit der Verwendung des letzteren Materials als ein sensibilisiertes Agglutinin zum Nachweis des Vorhandenseins von Cryptococcus Polysaccharid in klinischen Proben zu demonstrierent Eine Stammsuspension von 0,81 my Latexteilchen (Dow, Midland, Michigan) wurde durch Mischen von 2 ml einer obigen Lösung der 0,81 my Latexteilchen mit 28 ml Glycin-Saline-Pufferlösung (GBS) mit einem pH-Wert von 8,2 hergestellt, Zu o,5 ml der so hergestellten Latexstammsuspension wurde ein gleich großes Volumen Cryptococcus Antiserum von einem Kaninchen (Nr. 64179) gegeben, wobei das Serum unter Verwendung von GBS mit einem pH;-Wert von 8,2 im Verhältnis 1;1o verdünnt worden war. Eine entsprechende Zubereitung wurde unter Verwendung des gleichen Serums hergestellt, das in einem Verhältnis von 1:50 verdünnt worden war.The Cryptococcus polysaccharide gave when properly injected into rabbits an antiserum that reacted with the Cryptococcus polysaccharide. That immunized Rabbit serum was used to sensitize both latex particles and protein A containing micrococcus cells used to increase the possibility of using the the latter material as a sensitized agglutinin to demonstrate its presence of Cryptococcus polysaccharide in clinical specimens to demonstrate a stock suspension of 0.81 µm latex particles (Dow, Midland, Michigan) were made by mixing 2 ml an above solution of the 0.81 μm latex particles with 28 ml glycine saline buffer solution (GBS) with a pH of 8.2, to 0.5 ml of the latex stock suspension thus produced an equal volume of Cryptococcus antiserum was obtained from a rabbit (No. 64179), the serum using GBS with a pH; value of 8.2 had been diluted in the ratio 1: 1o. An appropriate preparation was made under Using the same serum made in one Ratio of 1:50 had been diluted.

Wie in Beispiel 1 beschrieben, wurde eine Suspension von Protein A enthaltenden Mikrokokken hergestellt Zu 0,5 ml dieser Zellensuspension wurde ein gleich großes Volumen des gleichen Serums (Kaninchen Nr. 64179) gegeben, das im Verhältnis 1:10 verdünnt worden war. Außerdem wurde eine weitere Zubereitung hergestellt, bei dem das Serum in einem Verhältnis von 1:50 verdünnt worden war, Alle diese Zubereitungen wurde gegenüber einer Serienverdünnung von Cryptococcus Polysaccharid Antigen (87-93F) getestet (bei Slide Agglutination), Die erhaltenen Reaktion sind in der folgenden Tabelle angegeben, wobei 4+ eine sehr starke Agglutination und +/- die schwächste nachweisbare Agglutination angeben; ein negativer Test ist mit (-) bezeichnet.As described in Example 1, a suspension of protein A containing micrococci produced. To 0.5 ml of this cell suspension was a the same volume of the same serum (rabbit no. 64179) given in the Ratio 1:10 had been diluted. In addition, another preparation was made, in which the serum was diluted 1:50, all of these preparations was compared to a serial dilution of Cryptococcus polysaccharide antigen (87-93F) tested (at slide agglutination), the response obtained are in the following Table indicated, with 4+ a very strong agglutination and +/- the weakest indicate detectable agglutination; a negative test is indicated by (-).

Vergleich GBS Antigen 11 1:2 1:4 1;8 1:16 BSA Dow latex- 1:1o - - +1- - - -1:5o w - - - - - -Protein A-Zellen 1;1o ++ t+ ++t ++ ++ + -1:50 t + + + + t -Aus der obigen Tabelle geht hervor, daß unter gleichen Bedingungen die Protein A enthaltenden Mikrokokkuszellen eine stärkere Agglutinationsreaktion ergeben. Diese verstärkte Agglutination ist auf die spezifische Adsorption der Immunoglobuline G aus dem Serum an den Protein A enthaltenden Teilchen zurückzuführen, wogegen die Latexteilchen zusätzlich zu den Immunoglobulinen viele andere Proteine aus dem Serum adsorbieren. Dies wird deutlich, wenn man das in diesem Beispiel verwendete Serum nimmt, die Gamma-Globuline ausfällt und die Sensibilisierung mit den Dow o,81my Latexteilchen wiederholt, Durch Verwendung der äquivalenten Menge an Gamma-Globulin als gesamtes Serum kann gezeigt werden, daß dadurch eine sehr viel stärkere Agglutination erzielt wird.Comparison GBS Antigen 11 1: 2 1: 4 1; 8 1:16 BSA Dow latex- 1: 1o - - + 1- - - -1: 5o w - - - - - -Protein A cells 1; 1o ++ t + ++ t ++ ++ + -1: 50 t + + + + t - From the table above it can be seen that, under the same conditions, the protein A containing micrococcus cells give a stronger agglutination reaction. These increased agglutination is due to the specific adsorption of immunoglobulins G can be traced back to the particles containing protein A from the serum, whereas the Latex particles in addition to the immunoglobulins many others Proteins adsorb from the serum. This becomes clear when you use that in this example Serum takes, the gamma globulins precipitate and sensitization with the Dow o, 81my Latex particles repeated, using the equivalent amount of gamma globulin as a whole serum it can be shown that this results in a much stronger agglutination is achieved.

Zum Nachweis von Cyptococcus Neoformens Polysaccharid in klinischen Materialen wird ein Testsatz unter Verwendung von Latex teilchen auf dem Markt angeboten (Industrial Biological Laboratories, Inc., Rockville, Maryland). Aus der dieses Produkt beschreibenden Literatur geht hervor, daß jeweils ein getrennter Kontrolltest durchgeführt werden muß, um sicherzustellen, daß keine falschen positiven Ergebnisse aufgrund der Anwesenheit eines Rheumatoidfaktors, der in einem hinsichtlich Cryptococcus Polysaccharid negativen Serum vorhanden sein kann, zu erhalten. Es wurde eindeutig gefunden, daß die Protein A enthaltenden Mikrokokkenzellen, die mit Cryptococcus Antiserum sensilibisiert worden sind, nicht mit bekannte Rheumatoidfaktoren enthaltenden Seren reagieren und dadurch den Vorteil besitzen, daß sie eine Verringerung oder sogar den völligen Ausschluß von möglichen falschen positiven Reaktionen sicherstellen.For the detection of Cyptococcus Neoformens polysaccharide in clinical Materials, a test kit using latex particles is offered on the market (Industrial Biological Laboratories, Inc., Rockville, Maryland). From the this The literature describing the product shows that each has a separate control test Must be done to ensure that there are no false positive results due to the presence of a rheumatoid factor related to Cryptococcus Polysaccharide negative serum may be present to obtain. It became clear found that the protein A-containing micrococcus cells associated with Cryptococcus Antiserum sensitized, not containing known rheumatoid factors Serums react and thereby have the advantage that they reduce or even ensure the complete exclusion of possible false positive reactions.

Das beschriebene erfindungsgemäße Verfahren kann auch zur Identifizierung und zur quantitativen Bestimmung von Immunoglobulinen herangezogen werden.The inventive method described can also be used for identification and used for the quantitative determination of immunoglobulins.

Beispiel 4; Eine Suspension von intakten Zellen wie in Beispiel 1 beschrieben, wurde einmal durch 1 Sniinütiges Zentrifugieren mit 2.500 Ulmin. bei 50°C gewaschen und dann wieder in Glycin-Saline-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 8f2 suspendiert. Eine Zubereitung von Anti-Human5chafimmunoglobulin A (Alpha-Ketten spezifisch) wurde wie üblicherweise in der Literatur beschrieben hergestellt.Example 4; A suspension of intact cells as in Example 1 was described once by centrifugation for 1 minute 2,500 Ulmin. washed at 50 ° C and then again in glycine saline buffer solution with a suspended at pH 8f2. A preparation of anti-human chafimmunoglobulin A (alpha chains specific) was described as usual in the literature manufactured.

3,9 ml der gewaschenen Zellensuspension wurden zu 0,1 ml des Anti-Human-Immunoglobulin A enthaltenden Schafserum gegeben und etwa 1 Stunde bei Raumtemperatur reagieren gelassen. Es wurde eine Serie von standartisierten Immunoglobulin A-Verdünnungen unter Verwendung von Glycin-Saline-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 8,2 hergestellt, so daß Lösungen mit Gehalten von 500 my Gramm/ml bis 8 my GrammZml erhalten wurden. Ein Tropfen der verschiedenen Verdünnungen der Standard-Immunoglobulin A-Zubereitung wurde auf einen Träger gegeben und mit einem Tropfen der Zellzubereitung, die mit Anti-Immunoglobulin A enthaltenden Schafserum sensibilisiert worden war, versetzt Der Träger wurde auf einer rotierenden Schüttelvorrichtung 5 Minuten lang mit etwa 120 Ulmin. rotiert. Nach dieser Zeit ergaben sich folgende Agglutinationsergebnisse: IgA-Standardlösungen Kontrolltest my GrammZml 500 250 125 68 34 17 8 (GBS,pH 8,2) Anti-IgA sensibilisierte Teilchen tt+ ttt ++t +++ + - -Aus der Tabelle geht hervor, daß ein scharfer Endpunkt bei 68 my GrammZml vorhanden ist, über den hinaus wenn überhaupt nur eine sehr geringe Agglutination stattfindet. Dies zeigt an, daß die Sensibilisierung der Teilchen so weit geht, daß ein Minimum von 68 my GrammZml an Immunoglobulin A nachweisbar ist. Die so sensibilisierte Zellzubereitung wurde dann zur Untersuchung von Seren von Patienten verwendet, bei denen die Immunoglobulin A-Werte durch Radial-Immunodiffusion bestimmt worden waren. Es wurden folgende Ergebnisse erhalten.3.9 ml of the washed cell suspension became 0.1 ml of the anti-human immunoglobulin A containing sheep serum and react for about 1 hour at room temperature calmly. A series of standardized immunoglobulin A dilutions was made made using glycine saline buffer solution with a pH of 8.2, so that solutions with contents of 500 my grams / ml to 8 my gramsZml were obtained. One drop of the various dilutions of the standard immunoglobulin A preparation was placed on a support and covered with a drop of the cell preparation that came with Sheep serum containing anti-immunoglobulin A was added The slide was on a rotating shaker for about 5 minutes 120 ulmin. rotates. After this time the following agglutination results were obtained: IgA standard solutions Control test my GrammZml 500 250 125 68 34 17 8 (GBS, pH 8.2) Anti-IgA sensitized particles tt + ttt ++ t +++ + - -The table shows that there is a sharp end point at 68 my gramZml beyond that if there is very little agglutination at all. This indicates that the Sensitization of the particles goes so far that a minimum of 68 my GrammZml of immunoglobulin A is detectable. The cell preparation sensitized in this way was then used to study sera from patients in whom the immunoglobulin A values were determined by radial immunodiffusion. The following results were obtained obtain.

Serum-Nummer Radial-Immunodiffusion Protein A-Teilchen 71-116A 274 265 71 6B 5,o Ao,o 71 6C 185 165 Um sicherzustellen, daß die sensibilisierten Zellen spezifisch für Immunoglobulin A waren, wurde der Serienverdünnungstest wiederholt, wobei Immunoglobulin G und Immunoglobulin M anstelle von Immunoglobulin A verwendet wurden. Es konnte keine Kreuzagglutination festgestellt werden. Serum Number Radial Immunodiffusion Protein A Particles 71-116A 274 265 71 6B 5, o Ao, o 71 6C 185 165 To ensure that the sensitized cells were specific for immunoglobulin A, the serial dilution test was repeated, using Immunoglobulin G and Immunoglobulin M instead of Immunoglobulin A. became. No cross agglutination could be found.

Aus den obigen Ergebnissen ergibt sich, daß die IgA-sensibilisierten Mikrokokkus-Teilchen spezifisch für Immunoglobulin A sind, da mit Immunoglobulin M oder Immunoglobulin G keine Reaktion erfolgte.From the above results it can be seen that the IgA sensitized Micrococcus particles are specific for immunoglobulin A because they are immunoglobulin M or immunoglobulin G no reaction occurred.

Darüber hinaus stimmen die quantitativen Ergebnisse innerhalb der experimentiellen Fehlergrenzen zufriedenstellend mit den durch Radial-Immunodiffusion erhaltenen Ergebnissen überein,In addition, the quantitative results are correct within the experimental margins of error are satisfactory with that obtained by radial immunodiffusion the results obtained,

Claims

Claims t1 method for the detection of a certain, in a biological sample of animal origin suspected antigen, characterized in that that the sample containing the suspected antigen with a suspension of one with protein A coupled particle is mixed with one for the suspected antigen specific antibody is sensitized that the Fc part of the antibody to the Protein A coupled to the particle is bound and in the presence of the suspected Antigen agglutination occurs. 2. The method according to claim 1, characterized in that that the detection takes place quantitatively by using known serial dilutions of the das suspected antigen containing sample with a standard amount of that with the specific Antibody sensitized suspension are brought together.

3 * method according to claim 1, characterized in that as an antibody Immunoglobulin G is used, 4. The method according to claim 1, characterized characterized in that a microbial cell from the group staphylococcus is used as the particle and micrococcus is used.

5. The method according to claim 2, characterized in that as particles a microbial cell from the staphylococcus and micrococcus group is used.

6. The method according to claim 3, characterized in that as particles a microbial cell from the staphylococcus and micrococcus group is used.

7. The method according to claim 4, characterized in that the antibody Immunoglobulin G is used.

8. The method according to claim 7, characterized in that the immunoglobulin G-Fc is specific for rheumatoid factors.

9. The method according to claim 1 to 8, characterized in that the Detection takes place quantitatively by known serial dilutions of the sample with a Standard amount of the Fc-sensitized suspension is brought together and that as biological sample a serum is used.

lo. Suspension, characterized in that it contains protein A. Contains particles sensitized with an antibody in such a way that the Fc part of the antibody to the with protein coupled to the particles A is bound.

11. Suspension according to claim 10, characterized in that the antibody Immunoglobulin G is.

12. Suspension according to claim 11, characterized in that the immunoglobulin G-Fc is specific for rheumatoid factors.

13. Suspension according to claim 12, characterized in that the particles are fragmented and belong to the staphylococcus and micrococcus group.

14, method for the detection of a particular suspected in a serum Antigen, characterized in that the serum containing the suspected antigen is mixed with a suspension of a protein A-coupled particle that so with an immunoglobulin G antibody specific for the suspected antigen it is sensitized that the Fc part of the antibody is linked to that coupled to the particle Protein A is bound that agglutination occurs in the presence of the suspected antigen occurs and that the detection is carried out quantitatively by known serial dilutions the serum sample with a standard amount of that sensitized with the specific antibody Suspension are brought together 15, the method according to claim 14, characterized in, that the immunoglobulin G-Fc is specific for rheumatoid factors.

16. Process for the preparation of antibodies sensitized microbial particles, characterized in that a suspension of protein A containing microorganisms is produced to prevent these organisms a loss of activity due to cell breakdown and the fragmented Organisms with a specific Fc fraction of immunoglobulin so sensitized that the immunoglobulin is coupled to protein A with its Fc end.

17. The method according to claim 16, characterized in that the Fc is specific to rheumatoid factors.

18. The method according to claim 16, characterized in that microorganisms from the group of staphylococcus and micrococcus can be used.

19. The method according to claim 17, characterized in that microorganisms from the group of staphylococcus and micrococcus can be used.

20. Process for the production of sensitized by antibodies, Particles containing Protein A that are useful for both identification and quantitative determination of a suspected antigen by. Agglutination suitable, thereby characterized in that a suspension of the particles is prepared and these particles to achieve an agglutination endpoint for minimal antigen concentrations in a predetermined amount with a specific Fc fraction of immunoglobulin be sensitized, being the Fc end of the immunoglobulin the protein A is bound.

21. The method according to claim 20, characterized in that the Fc is specific to rheumatoid factors.

22. The method according to claim 20, characterized in that microorganisms from the group of staphylococcus and micrococcus can be used.

23, method according to claim 21, characterized in that microorganisms from the group of staphylococcus and micrococcus can be used.