DE2623074A1

DE2623074A1 - PEPTIDE PREPARATIONS WITH EXTENDED EFFECT

Info

Publication number: DE2623074A1
Application number: DE19762623074
Authority: DE
Inventors: Leo Dr Geller; Rene Dr Maier; Werner Dr Rittel
Original assignee: Ciba Geigy AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1975-05-26
Filing date: 1976-05-22
Publication date: 1976-12-09
Also published as: FR2312260B1; NZ180945A; IE43770B1; JPS51144721A; HK15982A; AU507537B2; AU1425276A; BE842189A; NL7605559A; ZA763096B; IL49653A; GB1548984A; IE43770L; FR2312260A1; IL49653A0; CA1098444A; MY8200284A

Description

ClBA GEIGY AG, Basel, Schweiz Vw £ Lj/Ά"""" \3 L- Ü vJ3 SClBA GEIGY AG, Basel, Switzerland Vw £ Lj / Ά """" \ 3 L- Ü vJ3 S

Case 4-9910/+Case 4-9910 / +

DeutschlandGermany

Peptidpräparate mit verlängerter Wirkung.Peptide preparations with a prolonged effect.

Bisher wurden Calcitonine pharmakologisch in Form von Lösungen, gegebenenfalls zur Verlängerung der Wirkung in Gegenwart von Gelatine, angewendet. Es wurde nun gefunden, dass es vorteilhafter ist, Calcitonine, in Form von Suspensionen der schwerlöslichen freien Base in einer Flüssigkeit anzuwenden. Die Base kann in wässerigem Medium oder in OeI suspendiert sein. Die Suspensionen können intramuskulär oder subcutan verabreicht werden.So far, calcitonins have been pharmacologically in the form of solutions, possibly to prolong the effect in the presence of gelatin. It has now been found that it is more advantageous to use calcitonins in Use the form of suspensions of the sparingly soluble free base in a liquid. The base can be in aqueous Medium or be suspended in OeI. The suspensions can be administered intramuscularly or subcutaneously.

Die vorliegende Erfindung betrifft somit Calcitonin-Präparate mit verlängerter Wirkung, welche dadurch gekennzeichnet sind, dass sie ein Calcitonin mit hypocalcämischer Wirkung, welches einen isοelektrischen Punkt im Bereich von pH ca. 5 bis 9 hat, in Form einer Suspension der schwerlöslichen freien Base in einer Flüssigkeit, enthalten und Verfahren zu ihrer Herstellung in an sich bekannter Weise. The present invention thus relates to calcitonin preparations with a prolonged effect, which are characterized in that they contain a calcitonin with hypocalcemic effect, which has an isoelectric point in the range of pH about 5 to 9, in the form of a suspension of the sparingly soluble free base in a Liquid, contain and process for their preparation in a manner known per se.

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Die erfindungsgemässen Suspensionen haben eine wesentlich verlängerte Wirkung. So wurde festgestellt, dass im Rattentest 1 mg/kg menschliches Calcitonin (Calcitonin M) als freie Base eine hypocalcämische Wirkung von ca. 40 Stunden Dauer aufweist, während Calcitonin M als Salz, z.B. als Acetat, in Wasser gelöst eine Wirkung von 8 Stunden zeigt; in Gegenwart von Gelatine (16%) ist die Wirkungsdauer von 1 mg/kg Calcitonin M (als Hydrochlorid) ca. 12 Stunden.The suspensions according to the invention have a significantly prolonged effect. So it was found that In the rat test 1 mg / kg human calcitonin (calcitonin M) as a free base has a hypocalcemic effect of approx. 40 Has a duration of hours, while calcitonin M as a salt, e.g. as acetate, dissolved in water shows an effect of 8 hours; in the presence of gelatin (16%) the duration of action of 1 mg / kg calcitonin M (as hydrochloride) is approx. 12 hours.

Die Präparate werden in an sich bekannter Weise hergestellt, z.B. so, dass man die Calcitonin-Base, gegebenenfalls bereits in konzentrierter wässeriger Suspension bzw. Aufschlämmung im isoelektrischen Bereich in wässerigen isotonischen Lösungen suspendiert. Die Oel-Suspensionen werden z.B. durch Suspendieren der wasserfreien Base in gewünschten öligen Medium erhalten.The preparations are produced in a manner known per se, e.g. in such a way that the calcitonin base, if necessary already in concentrated aqueous suspension or slurry in the isoelectric range in aqueous isotonic solutions suspended. The oil suspensions are, for example, by suspending the anhydrous base in desired oily medium obtained.

Der Ausdruck isοelektrischer "Bereich" wird verwendet, da bei den vorliegenden Verbindungen der isoelektrische Punkt nicht scharf definiert ist, sondern sich über einen grösseren pH-Bereich erstreckt, vgl. Kortüm, Lehrbuch der Elektrochemie, Verlag Chemie, Weinheim, 1966, S. 336. Unter isoelektrischem Bereich verstehen wir den pH-Bereich von pi + ca-1 pH-Einheit.The term isoelectric "area" is used since in the present compounds the isoelectric point is not sharply defined, but extends over a larger one Extends the pH range, see Kortüm, Textbook of Electrochemistry, Verlag Chemie, Weinheim, 1966, p. 336. Under isoelectric Range we understand the pH range from pi + ca-1 pH unit.

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■· 3 -■ · 3 -

Als ein Calcitonin mit einem isoelektrischen Punkt im Bereich von ca. pH 5 bis 9 ist in erster Linie zu nennen das Calcitonin M oder eines seiner Derivate, sodann irgend eines der verschiedenen Analoge. Solche CalcitonineBeing a calcitonin with an isoelectric point in the range of about pH 5 to 9 is primarily to be used name the calcitonin M or one of its derivatives, then any of the various analogues. Such calcitonins

• sind z.B. in den belgischen Patenten Nr. 737,890, Nr. 740,256, Nr. 757,786 und in der deutschen Offenlegungsschrift Nr. 2 413 106 beschrieben. Analoge sind vor allem diejenigen,• are e.g. in Belgian patents no. 737,890, No. 740,256, No. 757,786 and in German Offenlegungsschrift No. 2,413,106. Analogous are mainly those

die statt Methionin eine α-Niederalkyl-a-amino-essigsäure, besonders eine solche, worin Niederalkyl 2-4 Kohlenstoffatome aufweist, insbesondere Valin, ferner Norvalin, Leucin, Isoleucin, Norleucin oder a-Aminobuttersäure enthalten. Weitere bevorzugte Austauschaminosäuren, die auch neben den genannten Austauschaminosäuren in 8-Stellung vorhanden sein können, sind L-Lysin ,L-Leucin , L-Leucin , L-Leucin ,which instead of methionine is an α-lower alkyl-a-amino-acetic acid, especially one in which lower alkyl has 2-4 carbon atoms has, in particular valine, also norvaline, leucine, isoleucine, norleucine or α-aminobutyric acid. Other preferred exchange amino acids, which are also in addition to the be present in the 8-position mentioned exchange amino acids are L-lysine, L-leucine, L-leucine, L-leucine,

22 26 97 ■22 26 97 ■

L-Tyrosin , L-Asparagin und L-Threonin . DerivateL-tyrosine, L-asparagine and L-threonine. Derivatives

1 η 1 η

sind vor allem entsprechende Desamino -Peptide sowie N- -Acylderivate.are above all corresponding desamino peptides and N- Acyl derivatives.

Acylgruppen für die Acylierung der N^a-Aminogruppe sind die Reste von Carbonsäuren wie" aliphatischen, aromatischen, araliphatischen, heterocyclischen und heterocyclyl-aliphatischen Carbonsäuren, insbesondere von niederen ein- oder zweiwertigen Alkan- oder Alkensäuren, vor allein Niederalkansäuren mit 1-4 "'Kohlenstoffatomen, wie Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure,Acyl groups for the acylation of the N ^a -amino group are the residues of carboxylic acids such as "aliphatic, aromatic, araliphatic, heterocyclic and heterocyclyl-aliphatic carboxylic acids, in particular of lower mono- or divalent alkanoic or alkenoic acids, especially lower alkanoic acids with 1-4"' Carbon atoms, such as formic acid, acetic acid, propionic acid,

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Buttersäuren, ferner Acrylsäure, Bernsteinsäure, von alicyclischen Carbonsäuren wie Cycloalky!carbonsäuren wie unsubstituierter und substituierter Benzoesäure oder Phthalsäure, von un substituierten und Aryl-substituierten Aryl-niederalkyl- oder alkeny!-carbonsäuren wie Phenylessigsäure, von unsubstituierten oder substituierten ein- oder zweiwertigen 5- bis 6-gliedrigen heterocyclischen Säuren mit Stickstoff, Schwefel und/oder Sauerstoff als Heteroatomen, wie Pyridincarbonsäuren, ■Thiophencarbonsäuren, oder von Heterocyclyl-niederalkansäuren wie Pyridylessigsäure, Imidazolylessigsäure, worin die Substituenten der "Ringe z!b." Halogenatome, Nitrogruppen,' Niederalkyl·Butyric acids, also acrylic acid, succinic acid, of alicyclic carboxylic acids such as cycloalkyl! Carboxylic acids such as unsubstituted and substituted benzoic acid or phthalic acid, of unsubstituted and aryl-substituted aryl-lower alkyl or alkeny-carboxylic acids such as phenylacetic acid, of unsubstituted or substituted mono- or dihydric 5 - Up to 6-membered heterocyclic acids with nitrogen, sulfur and / or oxygen as heteroatoms, such as pyridinecarboxylic acids, ■ thiophenecarboxylic acids, or of heterocyclyl- lower alkanoic acids such as pyridyl acetic acid, imidazolylacetic acid, in which the substituents of the "rings z! b." Halogen atoms, nitro groups, lower alkyl

oder Niederalkoxygruppen oder Niedercarbalkoxygruppen sind. Weiter sind als Acylreste vor allem Acylreste von Aminosäuren, besonders von α-Aminosäuren, wie z.B. Glycyl; L-Leucyl, L-Pyroglutamyl zu nennen, ferner Acylreste, die sich von Kohlensäure oder Thiokohlensäure bzw. ihren Estern oder Amiden ableiten, z.B. Niederalkyloxycarbonylgruppen wie Aethoxycarbonyl, tert.-Butyloxycarbonyl, ferner unsubstituiertes und wie oben angegeben substituiertes Benzyloxycarbonyl, Carbamoyl und Thiocarbamoyl sowie N-substituiertes Carbamoyl und Thiocarbamoyl, z.B. N-Niederalkylcarbamoyl, N-Phenylcarbamoyl, N-Phenyl-thiocarbamoyl.or lower alkoxy groups or lower carbalkoxy groups. Further acyl radicals are above all acyl radicals of amino acids, especially of α-amino acids, such as, for example, glycyl; L-leucyl, L-pyroglutamyl, and acyl radicals derived from carbonic acid or thiocarbonic acid or their esters or amides, for example lower alkyloxycarbonyl groups such as ethoxycarbonyl, tert-butyloxycarbonyl, and also unsubstituted and substituted benzyloxycarbonyl, as indicated above, and carbamoyl and thiocarbamoyl N-substituted carbamoyl and thiocarbamoyl, for example N-lower alkylcarbamoyl, N-phenylcarbamoyl, N-phenyl-thiocarbamoyl.

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." ~ Das menschliche Calcitonin weist einen isoelektrischer Bereich von pH 7-8 auf. Die Veränderung des isoelektrischen Bereiches bei Ersatz einzelner Aminosäuren durch andere kann experimentell, z.B. elektrophoretisch, bestimmt werden oder berec'r net werden. Der isoelektrische Punkt der Peptide kann beispielsweise nach J. Greenstein and M. Winitz·"Chemistry of the Amino Acids", Vol. 1, Ed. John Wiley & Sons, Inc., New York, London, 1961, S. 482 ff. berechnet werden.. "~ The human calcitonin has an isoelectric Range from pH 7-8. The change in the isoelectric range If individual amino acids are replaced by others, it can be determined experimentally, e.g. electrophoretically, or calculated net. The isoelectric point of the peptides can, for example, according to J. Greenstein and M. Winitz · "Chemistry of the Amino Acids ", Vol. 1, Ed. John Wiley & Sons, Inc., New York, London, 1961, p. 482 ff.

Die Herstellung der Calcitonin-Base kann vorteilhaft nach dem Verfahren der deutschen Offenlegungsschrift 2 457 470 erfolgen, d.h. man kann z.B. aus einem Salz des Peptids mit einer Säure oder mit einer Base durch Zugabe einer Base bzw. einer Säure die freie Base (die in der genannten Offenlegungsschrift auch als das "innere Salz" des Peptids definiert wird) fällen. Anstelle von Basen oder Säuren kann man die Base auch mit ^Ionenaustauschern oder mit Puffern bzw. Salzmischungen, wie Phosphaten, Citraten oder GIykokoll, fällen. Man kann z.B. die Calcitonin-Base aus einer Lösung eines Salzes des Calcitonins mit einer Säure, z.B. mit Essigsäure, durch Zugabe von Natronlauge oder Ammoniak bis zur Einstellung des pH, welches dem isoelektrischen Bereich entspricht, fällen. Das pH steigt während des Ausfällens des Peptids um ca. eine pH-Einheit und bleibt dann aber konstant.The preparation of the calcitonin base can be advantageous according to the procedure of the German Offenlegungsschrift 2 457 470 take place, i.e. one can, for example, from a salt of the peptide with an acid or with a base by adding a base or an acid, the free base (which is also defined as the "inner salt" of the peptide in the above-mentioned patent application) felling. Instead of bases or acids, the base can also be used with ^ ion exchangers or with buffers or salt mixtures, such as phosphates, citrates or glycolic acid. One can e.g. calcitonin base from a solution of a salt of calcitonin with an acid, for example with acetic acid Addition of caustic soda or ammonia until the pH is adjusted, which corresponds to the isoelectric range, felling. The pH rises by about one pH unit during the precipitation of the peptide and then remains constant.

Zur Herstellung der Präparate gemäss der vorliegenden Erfindung kann man die nach diesen Methoden hergestellten SuspensionenFor the production of the preparations according to the present invention one can use the suspensions produced by these methods

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ORIGINAL INSPEGTEO609850/0956
ORIGINAL INSPEGTEO

der Peptid-Base als solche verwenden, indem man sie z.B. mit einem weiteren Suspensionsmittel, z.B. einem wässerigen Suspensionsmittel, wie eines der genannten Puffer oder Salzmischungen verdünnt und direkt in die gewünschte Form, z.B. von Ampullen, bringt. Eine bevorzugte Methode zur Herstellung der Präparate in Form von Ampullen oder Vials besteht darin, dass man die konzentrierte Suspension,, welche die z.B. aus einer entsprechenden Salzlösung gefällte Peptid-Base enthält, gegebenenfalls nach weiterer Verdünnung durch Zugabe eines weiteren Suspensionsmittels, in einer geeigneten Lyophilisationsanlage einfriert und lyophilisiert und das Trockenlyophilisat im gewünschten Suspensionsmittel resuspendiert und sodann in Ampullen oder Vials abfüllt. Die Lyophilisation wird vorzugsv/eise direkt in den Ampullen bzw. Vials vorgenommen und die Rekonstitution der gewünschten Suspension in denselben vorgenommen. Man kann die zur Bereitung der Präparate nötige Suspension auch so herstellen, dass man ein Salz der Calcitonin-Base, deren isoelektrischer Punkt im Bereich von pH ca. 5-9 liegt, mit einem Puffer vom genannten pH vermischt oder eine Säure oder Base bis zu diesem pH zufügt und die erhaltene Suspension als solche verwendet. Schliesslich können die Präparate so hergestellt werden, dass man die nach den erwähnten Methoden ausgefällte reine Base von der wässrigen Phase nach an sich bekannten Methoden, wie z.B. in der genannten deutschen Offenlegungsschriftof the peptide base as such, e.g. by using a further suspending agent, for example an aqueous suspending agent such as one of the buffers mentioned or Salt mixtures diluted and brought directly into the desired shape, e.g. from ampoules. A preferred method of making of the preparations in the form of ampoules or vials consists in that the concentrated suspension, which e.g. Contains peptide base precipitated from an appropriate salt solution, optionally after further dilution Addition of another suspending agent, in a suitable one The lyophilization system freezes and lyophilizes and the dry lyophilizate in the desired suspension medium resuspended and then filled into ampoules or vials. Lyophilization is preferably carried out directly in the ampoules or vials and the reconstitution of the desired Suspension made in the same. The suspension required for the preparation of the preparations can also be prepared in such a way that that one has a salt of the calcitonin base, its isoelectric Point in the range of pH approx. 5-9, mixed with a buffer of the pH mentioned or an acid or base up to this pH is added and the suspension obtained is used as such. After all, the preparations can be made in this way that the pure base precipitated by the methods mentioned can be removed from the aqueous phase according to known methods Methods, such as in the aforementioned German Offenlegungsschrift

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beschrieben, abtrennt und sie nachträglich in der gewünschten Flüssigkeit suspendiert.described, separates and subsequently in the desired Liquid suspended.

Die Partikelgrösse und der Agglomerationsgrad der nach den beschriebenen Methoden herstellbaren Suspensionen hängt von den gewählten Konzentrationen der Ausgangslb'sungen, der Temperatur,den Fällungsbedingungen der Peptid-Basen, wie z.B. Rührgeschwindigkeit, und der Natur des verwendeten Fällungsmittels ab. Man kann durch Einhaltung gewisser Bedingungen, wie sie z.B. in den illustrativen Beispielen wiedergegeben sind, gut aufschüttelbare Suspensionen mit der vorteilhaften Partikelgrösse von ca. 1 bis 100 μ, insbesondere von 10-50 μ, herstellen.The particle size and the degree of agglomeration of the suspensions which can be prepared by the methods described depends on the selected concentrations of the starting solutions, the temperature, the precipitation conditions of the peptide bases, such as stirring speed, and the nature of the precipitant used. One can by adhering to certain Conditions, such as those given in the illustrative examples, include suspensions that can be easily shaken up the advantageous particle size of approx. 1 to 100 μ, in particular 10-50 μ, produce.

Die wässerigen Suspensionen können viskositätserho'hende Stoffe wie Natriuni-Carboxymethylcellulose, Carboxymethylcellulose, Dextran, Polyvinylpyrrolidon, Gelatine und dgl. enthalten. Wenn erwünscht, können die Suspensionen durch die für Injektionsmittel üblichen Netzmittel stabilisiert oder mit geeigneten Kon^ servierungsmitteln versetzt werden.The aqueous suspensions can increase viscosity Substances such as sodium carboxymethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, Dextran, polyvinylpyrrolidone, gelatin and the like. Contain. If desired, the suspensions can be carried out by those for injectables usual wetting agents stabilized or with suitable Kon ^ serving items are added.

Suspensionen in OeI enthalten als ölige Komponente die für Injektionszwecke gebräuchlichen vegetabilen, synthetischen oder halbsynthetischen OeIe. Als solche sind insbesondere flüssige Fettsäureester zu nennen, die als Säurekomponente eine langkettige Fettsäure mit 8-22, besonders 12-22 Kohlenstoffatomen, wie z.B. Laurinsäure, Tridecylsäure, Myristinsäure, Pentadecylsäure, Palmitin- ^vsäure, Margarinsäure, Stearinsäure, Arachinsäure, Bellen-Suspensions in oil contain the vegetable, synthetic or semi-synthetic oils commonly used for injection purposes as oily components. As such may be mentioned especially liquid fatty acid ester, the acid ^v as the acid component a long-chained fatty acid having 8-22, especially 12-22 carbon atoms, for example lauric acid, tridecylic acid, myristic acid, pentadecylic acid, palmitic acid, margaric acid, stearic acid, arachidic acid, Bellen-

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säure oder entsprechende ungesättigte Säuren wie z.B. Oelsäure, Elaidinsäure, Erucasäure, Brasidinsäure oder Linolsäure enthalten. Die Alkoholkomponente hat maximal 6 Kohlenstoffatome und ist ein ein- oder mehrwertiger, z.B. ein-, zwei- oder dreiwertiger Alkohol, z.B. Methanol, Aetha- nol, Propanol, Butanol oder Pentanol oder deren Isomere, vor allem aber Glycol oder Glyzerin. Als Fettsäureester sind daher beispielsweise zu nennen: Aethyloleat, Isopropylrnyristat, Isopropylpalmitat, "Labrafil M 2735"· (Polyoxyäthylenglyzerintrioleat der Firma Gattefosse, Paris), "Miglyol 812" (Triglyzerid gesättigter Fettsäuren der Kettenlänge Cg bis C.2 ^der Firma Chemische Werke Witten/Ruhr, Deutschland), besonders aber vegetabile OeIe wie Baumwollsaatöl, Mandelöl, Olivenöl, Ricinusöl, Sesamöl, Sojabohnen-Öl, vor allem Erdnussöl.acid or corresponding unsaturated acids such as oleic acid, elaidic acid, erucic acid, brasidic acid or linoleic acid. The alcohol component has a maximum of 6 carbon atoms and is a monohydric or polyhydric, eg monohydric, dihydric or trihydric alcohol, eg methanol, ethanol, propanol, butanol or pentanol or their isomers, but above all glycol or glycerine. As fatty acid ester are therefore to be mentioned, for example: ethyl oleate, Isopropylrnyristat, isopropyl palmitate, "Labrafil M 2735" · (Polyoxyäthylenglyzerintrioleat Gattefosse, Paris), "Miglyol 812" (triglyceride of saturated fatty acids of chain length Cg to C 2 ^of Chemische Werke Witten / Ruhr, Germany), but especially vegetable oils such as cottonseed oil, almond oil, olive oil, castor oil, sesame oil, soybean oil, especially peanut oil.

Die Suspensionen enthalten 0,1 bis 5 mg/ml der Calcitonin-Base. Das normalerweise verabreichte Injektionsvolumen beträgt 1 bis 2 ml ein bis sieben mal pro Woche und enthält vorzugsweise 0,2 bis 2.mg Calcitonin-Base,The suspensions contain 0.1 to 5 mg / ml of the calcitonin base. The injection volume normally administered is 1 to 2 ml one to seven times a week and preferably contains 0.2 to 2 mg of calcitonin base,

insbesondere Calcitonin M-Base.especially calcitonin M base.

Die Herstellung der Injektionspräparate erfolgt in üblicher Weise unter antimikrobiellen Bedingungen, ebenso das Abfüllen in Ampullen oder Vials sowie das Vejschliessen der Behälter.The injection preparations are manufactured in the usual way under antimicrobial conditions, likewise the filling into ampoules or vials as well as the sealing of the container.

Rnflfi 5 Cl/0956Rnflfi 5 Cl / 0956

Die vorliegende Erfindung betrifft auch eine Methode zur Behandlung pathologischer Zustände am Menschen, bei denen die Verabreichung eines Calcitonins, insbesondere des Calcitonins M, indiziert ist, wie z.B. hypercalcämischen Zuständen, Knochenerkrankungen, welche durch ein· erhöhte Umsatzrate charakterisiert sind, wie z.B. Morbus Paget, oder bei Osteoporose. Die Methode ist dadurch gekennzeichnet, dass man das Calcitonin intramuskulär oder sub-cutan in Form eines der Präparate mit verlängerter Wirkung gemass der vorliegenden Erfindung verabreicht. Für die Dosierungen, z.B. bei der Behandlung mit Calcitonin M, kommen z.B. die oben angegebenen Daten in Betracht. Vorzugsweise werden die oben oder in den illustrativen Beispielen beschriebenen Präparate verwendet.The present invention also relates to a method for the treatment of pathological conditions in humans, in which the administration of a calcitonin, in particular of calcitonin M, such as hypercalcemic Conditions, bone diseases, which are characterized by an increased turnover rate, such as Paget's disease, or with osteoporosis. The method is characterized in that the calcitonin is intramuscularly or subcutaneously administered in the form of one of the prolonged-action preparations according to the present invention. For the dosages, e.g. in the case of treatment with calcitonin M, e.g. the data given above come into consideration. Preferably be the preparations described above or in the illustrative examples were used.

Die nachstehenden Beispiele dienen zur Illustration der Erfindung. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.The following examples serve to illustrate the invention. The temperatures are in degrees Celsius specified.

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^ AQ~ Beispiel 1 ^ AQ ~ Example 1

Herstellung von wässrigen Injektionssuspensionen mit Calcitonin-BasePreparation of aqueous suspensions for injection with Calcitonin base

Aus einer essigsauren 5%igen CALCITONIN M Lösung wird bei Raumtemperatur bis 65°C, vorzugsweise bei 4O°C, durch Zugabe von IN-NaOH über eine Zeitdauer von 15-30 Min. bis zu einem pH-Wert von 7,7 die Calcitonin-Base unter Stickstoffbegasung ausgefällt. Anschliessend wird innerhalb von 1-3 Min. auf Raumtemperatur abgekühlt, wobei der pH-Wert auf ca. 8,2 ansteigt. A 5% CALCITONIN M solution in acetic acid becomes Room temperature to 65 ° C, preferably at 40 ° C, by adding of IN-NaOH over a period of 15-30 min. up to a pH value of 7.7 the calcitonin base under nitrogen gas failed. It is then cooled to room temperature within 1-3 minutes, the pH rising to approx. 8.2.

Die so hergestelltekonzentrierte Suspension der Calcitonin-Base (10 mg pro 0,2 ml) wird unter Rühren mit NaH₂PO₄, Na^HPO, und NaCl und dest. Wasser in solchen Proportionen versetzt, dass eine Suspension der ZusammensetzungThe concentrated suspension of the calcitonin base prepared in this way (10 mg per 0.2 ml) is stirred with NaH ₂ PO ₄ , Na ^ HPO, and NaCl and dist. Water added in such proportions that a suspension of the composition

Calcitonin M (Base) (100%) 0,2 %Calcitonin M (base) (100%) 0.2%

NaH₂PO₄. 2Η_£0 0,4 %NaH ₂ PO ₄ . 2Η _£ 0 0.4 %

Na₂HPO₄. 12 H₂O 0,14 %Na ₂ HPO ₄ . 12 H ₂ O 0.14 %

NaCl 0,49 %NaCl 0.49%

entsteht.arises.

Die so hergestellte Injektionssuspension weist ein pH von 7,0 auf, ist gut aufschüttelbar und hat eine Partikelgrösse vonThe injection suspension prepared in this way has a pH of 7.0 on, is easy to shake up and has a particle size of

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i und lose Agglomerate von 25-50 p.. Mit ihr werden Ampullen der Zusammensetzungi and loose agglomerates from 25-50 p .. With it become ampoules of the composition

Calcitonin M (Base) (100%) 2,0 mgCalcitonin M (base) (100%) 2.0 mg

NaH₂PO .2H₂O 4,0 mgNaH ₂ PO .2H ₂ O 4.0 mg

Na₂HPO₄.12 H₂O 14,5 mgNa ₂ HPO ₄ .12 H ₂ O 14.5 mg

NaCl 4,9 mgNaCl 4.9 mg

dest.Wasser ad 1,0 ml abgefüllt.distilled water filled to 1.0 ml.

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1 °1 °

Calcitonin M wird wie in Beispiel 1 aus der essigsauren Lösung mit NaOH gefällt und die Suspension unter Rühren mit Glykokoll, NaCl, NaOH und dest. Wasser in solchen Mengen vermischt, dass eine Suspension der ZusammensetzungCalcitonin M is precipitated from the acetic acid solution with NaOH as in Example 1 and the suspension is stirred with glycocoll, NaCl, NaOH and dist. Water mixed in such amounts that a suspension of the composition

Calcitonin M (Base) (100%) 0,1%Calcitonin M (base) (100%) 0.1%

Glykokoll 0,5%Glycocolla 0.5%

NaCl 0,7%NaCl 0.7%

NaOH bis pH 7.3NaOH up to pH 7.3

entsteht,arises,

mit welcher Ampullen zu 1,0 mg Calcitonin M entsprechend der Zusammensetzungwith which ampoules of 1.0 mg calcitonin M according to the composition

Calcitonin M (Base) (100%) 1,0 mgCalcitonin M (base) (100%) 1.0 mg

Glykokoll · 5,0 mgGlycocolla x 5.0 mg

NaCl 7,0 mg NaOH bis 7,3NaCl 7.0 mg NaOH to 7.3

dest. Wasser ad 1,0 mlleast. Water to 1.0 ml

abgefüllt werden.be bottled.

Partikelgrösse und Struktur sind wie in Beispiel 1; sind wie jene Suspensionspräparate gut aufschüttelbar.Particle size and structure are as in Example 1; are like those suspension preparations, easy to shake up.

ο c η / η Qο c η / η Q

Example 3

Herstellung von wässrigen Iniektionssuspensionen mit Calcitonln-M-BasePreparation of aqueous injection suspensions with Calcitonln-M-Base

Die Calcitonin M - Base, die als konzentrierte Suspension aus einer essigsauren Lösung gemä'ss den Angaben in Beispiel 1 gefällt worden ist, (z.B. 100 mg/2 ml), wird in einer geeigneten Lyophilisationsanlage eingefroren und lyophilisiert.The calcitonin M base, which is produced as a concentrated suspension from an acetic acid solution according to the information in Example 1 has been precipitated, (e.g. 100 mg / 2 ml), is frozen and lyophilized in a suitable lyophilization system.

Das Trockenlyophilisat wird in geeigneten Suspensionsmitteln, z.B, denen der Beispiele 1 und 2,unter RUhren resuspendiert und z.B. in Ampullen der in den Beispielen 1 und 2 angegebenen Zusammensetzung abgefüllt.The dry lyophilizate is in suitable suspending agents, e.g. those of Examples 1 and 2, resuspended with stirring and e.g. filled in ampoules of the composition given in Examples 1 and 2.

Die so hergestellten Injektionssuspensionen sind gut aufschüttelbar und haben eine Partikelgrösse von 10-50 ία.The injection suspensions produced in this way are easy to shake up and have a particle size of 10-50 ία.

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Example 4

Ein Trockenlyophilisat von Calcitonin M-Base, wie in Beispiel 3 hergestellt und beschrieben, wird in einer 5/! igen Mannit-Lösung unter Rühren resuspendiert und in Ampullen der ZusammensetzungA dry lyophilizate of calcitonin M base, as in Example 3 prepared and described is in a 5 /! igen mannitol solution with stirring and resuspended in Ampoules of the composition

Calcitonin M (Base)(100%) 1,0 mgCalcitonin M (base) (100%) 1.0 mg

Mannit pyrogenfrei 50,0 mgMannitol Pyrogen Free 50.0 mg

dest. Wasser ad 1,0 mlleast. Water to 1.0 ml

abgefüllt. Die so hergestellte Suspension hat ein pH von 8,2, ist gut aufschüttelbar und hat eine Partikelgrösse von 10-50 u.bottled. The suspension produced in this way has a pH of 8.2, is easy to shake up and has a particle size from 10-50 u.

Example 5

Es werden Ampullen mit Calcitonin-M-Base ähnlich wie in Beispiel 4 hergestellt, die jedoch auch L-Methionin enthalten und die ZusammensetzungAmpoules with calcitonin M base are produced in a manner similar to that in Example 4, but also with L-methionine included and the composition

Calcitonin M(Base) (100%) 1,0 mgCalcitonin M (base) (100%) 1.0 mg

L-Methionin · 1,0 mgL-methionine x 1.0 mg

Mannit pyrogenfrei 50,0 mgMannitol Pyrogen Free 50.0 mg

NaOH bis pH 7,5-8,0NaOH to pH 7.5-8.0

dest. Wasser ad 1,0 mlleast. Water to 1.0 ml

aufweisen.exhibit.

609850/0956·609850/0956

Diese Suspension hat die gleiche Partikelgrösse wie im Falle von Beispiel 4 und ist ebenfalls gut aufschüttelbar.This suspension has the same particle size as in the case of Example 4 and is also easy to shake up.

Example 6

75 mg Calcitonin M-Acetat (auf Base berechnet) werden in 3 ml Wasser gelöst. Zu der Lösung gibt man 0,3 ml 1%-iges Ammoniak bis 7,4, rührt, bis sich der Niederschlag gebildet hat und fügt dann 12 ml Wasser oder Phosphatpuffer hinzu. Die Suspension enthält 5 mg/ml Calcitonin M als Base.75 mg calcitonin M acetate (calculated on base) dissolved in 3 ml of water. 0.3 ml of 1% strength ammonia up to 7.4 is added to the solution, and the mixture is stirred until the precipitate forms and then add 12 ml of water or phosphate buffer. The suspension contains 5 mg / ml calcitonin M as Base.

Calciton-M (Base)(100%) NaCl dest. Wasser adCalciton-M (base) (100%) NaCl dist. Water ad

Beispielexample 77th OO ,2, 2 mgmg )%))%) 00 ,9, 9 mgmg 11 ,0, 0 mlml Beispielexample 88th

Manufacture of dry vials with calcitonin M base.

.2,0 ml einer nach den Angaben von Beispiel 1 * hergestellten konzentrierten Suspension von Calcitonin-M, die 100 mg reine Base enthalten, werden, unter Rühren, mit 50 ml einer wässrigen Lösung enthaltend 5% Mannit und 0,2% Methionin versetzt, und mit 50 ml dest. Wasser verdünnt. Je 1 ml dieser Lösung werden in 2 ml Vials.2.0 ml of a concentrated suspension of calcitonin-M prepared according to the information in Example 1 *, which contain 100 mg of pure base are, with stirring, with 50 ml of an aqueous solution containing 5% mannitol and 0.2% methionine are added, and 50 ml of dist. Water diluted. 1 ml each of this solution are in 2 ml vials

nrn / r> C\ C C nrn / r> C \ CC

abgefüllt und dieselben in einer geeigneten Lyophilisationsanlage eingefroren und lyophilisiert.bottled and the same frozen and lyophilized in a suitable lyophilization system.

Das Trockenlyophilisat in den Vials kann durch Zugabe eines wässrigen Lösungsmittels, z.B. 1 ml dest. Wassers, als Injektionssuspension rekonstituiert werden. Es werden Injektionssuspensionen mit einer Partikelgrösse von < 10 u und losen Aggglomeraten von 25-50 μ erhalten. Sie weisen die ZusammensetzungThe dry lyophilizate in the vials can be distilled by adding an aqueous solvent, for example 1 ml. Water, to be reconstituted as a suspension for injection. Injection suspensions with a particle size of <10 μ and loose agglomerates of 25-50 μ are obtained. You assign the composition

Calcitonin M (Base)(100%) 1,0 mgCalcitonin M (base) (100%) 1.0 mg

L-Methionin 1,0 mgL-methionine 1.0 mg

Mannit pyrogenfrei 25,0 mgMannitol Pyrogen Free 25.0 mg

60985 Q/095 6'60985 Q / 095 6 '

Claims

2623Ü74

Patent claims:

(l). Calcitonin preparations with prolonged action, characterized in that they contain a calcitonin with hypocalcärnisches action, which has an isoelectric point in the range of pH approx. 5 to 9, in the form of a suspension of the sparingly soluble free base in a liquid.

2. Calcitonin preparations according to claim 1, characterized in that they contain the free base in an aqueous Medium contained in suspension.

3. Calcitonin preparations according to claim 1, characterized in that they contain the free base in an oily one Medium contained in suspension.

4. calcitonin preparations according to one or more of claims 1-3, characterized in that they are used as Calcitonin base contain the human calcitonin (calcitonin M). "..-" ■ ·

5. calcitonin preparations according to one or more of claims 1 to 3, characterized in that they contain a derivative or an analog of calcitonin M as calcitonin base.

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6. calcitonin preparations according to one or more of claims 1-2 and 4-5, characterized in that they the free base in an aqueous isotonic solution with a pH within the isoelectric range suspended included.

7. calcitonin preparations according to any one of claims 1-2 and 4-6, characterized in that they contain a buffer or contain a buffer mixture.

8. calcitonin preparations according to any one of the preceding claims, characterized in that they contain 0.1 to 5 mg / ml the calcitonin base.

9. calcitonin preparations according to any one of the preceding claims, characterized in that they contain 0.2-2 mg of base contained in 1-2 ml suspended.

10. Calcitonin preparations according to one of the preceding claims, characterized in that they have a particle size between 1 μ and 100 μ .

11. Calcitonin preparations according to one of the preceding claims in the form of injection solutions in ampoules or Vials for intramuscular or subcutaneous use.

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12. Calcitonin preparations according to any one of claims 6-11, characterized in that it contains calcitonin M.

13. Calcitonin preparations as described in the examples.

14. Process for the manufacture of calcitonin preparations for intramuscular or subcutaneous use, characterized in that in a manner known per se Prepares suspensions which contain a calcitonin with a hypocalcMmischer effect, which has an isoelectric point in the pH range from approx. 5 to 9, as a sparingly soluble free base.

15. The method according to claim 14, characterized in that one of a salt of calcitonin with a Acid or base that is difficult to dissolve precipitated by adjusting the pH of the solution to the isoelectric range Peptide base used as a starting material.

16. The method according to claim 15, characterized in that the base obtained in suspension is used directly as such or after mixing with another suspending agent used for the production of the preparations.

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17. The method according to claim 15, characterized in that the base obtained in suspension is separated off and bringing them together separately with the desired suspending agent.

18. The method according to claim 15, characterized in that one obtained from the precipitation of the peptide base The suspension is subjected to freeze-drying or lyophilization and the dry lyophilizate for production of the desired preparations used.

19. Process for the production of calcitonin preparations as described in the examples.

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