DE261516C

DE261516C -

Info

Publication number: DE261516C
Application number: DENDAT261516D
Authority: DE

Description

KAISERLICHESIMPERIAL

PATENTAMT.PATENT OFFICE.

PATENTSCHRIFTPATENT LETTERING

KLASSE 30 h. GRUPPECLASS 30 h. GROUP

Patentiert im Deutschen Reiche vom 19. August 1911 ab.Patented in the German Empire on August 19, 1911.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung eines Präparats, mit Hilfe dessen bei Menschen und Tieren aktive Immunität gegen Trypanosomen erzielt wird.The invention relates to a method for producing a preparation with the aid whose active immunity against trypanosomes is achieved in humans and animals.

Es ■ hat nicht an Versuchen gefehlt, Antigene zum Zwecke der Immunisierung aus Trypanosomen zu gewinnen. So haben Laveran und Mesnil sowie M. Mayer ein Verfahren ausgearbeitet, das im wesentlichen darin besteht, daß trypanosomenhaltiges Blut nichtgerinnbar gemacht und dann mitsamt den Trypanosomen einer Zentrifugierung zum Zwecke der Trennung der Blutflüssigkeit von den Blutkörperchen unterworfen wird. Ähnlieh verfuhren auch Lange und Schilling. Unter mikroskopischer Kontrolle wird dabei weiterhin die obere Flüssigkeitsschicht abgehebert und darauf ¹Z₄ Stunde zentrifugiert. Die Trypanosomen setzen sich dann als feste Masse ab, worauf in Kochsalzlösung ihre weitere Reinigung von Serumresten folgt. Die auf diese Weise gewonnenen Trypanosomen, • die über Schwefelsäure oder bei 37 ° getrocknet oder einer Autolyse unterworfen wurden, zeigten keine schützenden Eigenschaften (vgl. hierzu die zusammenfassende Darstellung von E. P. Pick im Handbuch der Technik und Methodik der Immunitätsforschung von Kraus und Levaditi (1908, Bd. 1, S. 455 Abs. 1 bis 3).There has been no lack of attempts to obtain antigens from trypanosomes for the purpose of immunization. Laveran and Mesnil and M. Mayer have worked out a method which essentially consists in making blood containing trypanosomes non-coagulable and then, together with the trypanosomes, subjected to centrifugation for the purpose of separating the blood fluid from the blood cells. Lange and Schilling proceeded in a similar way. Under microscopic control, the upper liquid layer is siphoned off and then ^{centrifuged for 1} Z ₄ hours. The trypanosomes then settle as a solid mass, which is followed by further cleaning of serum residues in saline. The trypanosomes obtained in this way, • which were dried over sulfuric acid or at 37 ° or subjected to autolysis, showed no protective properties (cf. the summary of EP Pick in the handbook of technology and methodology of immunity research by Kraus and Levaditi (1908 , Vol. 1, p. 455 paragraphs 1 to 3).

Zu denselben negativen Resultaten gelangte man auch mit trypanosomenhaltigem, getrocknetem Rattenblut (Uhlenhuht, Manteuffel). Alle bisher genannten und angewandtenThe same negative results were obtained with dried trypanosomes Rat blood (Uhlenhuht, Manteuffel). All mentioned and applied so far

Verfahren haben also zu befriedigenden Ergebnissen nicht geführt.Processes have therefore not led to satisfactory results.

Es ist nun gefunden worden, daß die Ergebnislosigkeit dieser Versuche nicht sowohl in dem Mangel der Trypanosomen an immunisierender Wirkung überhaupt ihren Grund hat, sondern lediglich darauf zurückzuführen ist, daß es bisher nicht gelungen ist, die Trypanosomen in ein für den gedachten Zweck geeignetes Präparat überzuführen. Es hat sich ergeben, daß die Trypanosomen immunisierend nur dann wirken, wenn sie in genügender Anzahl in den tierischen Organismus eingeführt werden, also in dem Präparat in solcher Konzentration enthalten sind, daß in einer geringen Menge der als Träger dienenden Flüssigkeit eine sehr große Anzahl von Trypanosomen dem zu immunisierenden Körper einverleibt werden kann.It has now been found that the ineffectiveness of these attempts is not both is due to the lack of immunizing effect of the trypanosomes, it can only be traced back to the fact that so far it has not been possible to find the trypanosomes to be converted into a preparation suitable for the intended purpose. The trypanosomes have been found to be immunizing only work when they are introduced into the animal organism in sufficient numbers are, so contained in the preparation in such a concentration that in one a very large number of trypanosomes can be incorporated into the body to be immunized.

Es wurde weiter ein Verfahren gefunden, die trypanosomenhaltige Blutflüssigkeit von den roten Blutkörperchen völlig zu befreien, und zwar unter Verwendung agglutinierender Antisera. Hierdurch gelingt die vollständige Entfernung der Erythrocyten, was dadurch ermöglicht wird, daß die roten Blutkörperchen sich unter der Einwirkung des agglutinierenden Serums sehr schnell und fest zusammenballen und zu Boden sinken. Wird nun die überstehende Flüssigkeit, die neben den Trypanosomen noch agglutinierte Blutkörperchen enthält, zentrifugiert, so werden die roten Blutkörperchen viel schneller als die TrypanosomenIt has also been found a method that trypanosome-containing blood fluid from to completely rid the red blood cells using agglutinating Antisera. This succeeds in the complete removal of the erythrocytes, which is what allows the red blood cells to grow under the action of the agglutinating Serums clump together very quickly and tightly and sink to the bottom. Will now be the protruding Liquid that contains agglutinated blood cells in addition to the trypanosomes, centrifuged, the red blood cells become much faster than the trypanosomes

zu Boden gerissen. Sie bleiben dort in einem festen Klumpen zusammengeballt liegen, über , den die Trypanosomen sich in einer weißen j Schicht absetzen, die sich leicht abheben läßt. Weiter wurde gefunden, daß sich eine immunisätorische Veränderung des auf diese Weise erhaltenen Präparats dadurch vermeiden läßt, daß man nicht bei 37° oder über Schwefelsäure, sondern bei gewöhnlicher Temperatur in bewegter Luft rasch trocknet. Eine Infektion mit Luftkeimen beim Trocknen im bewegten Luftstrom tritt nicht ein. Der Erfolg ist darauf zurückzuführen, daß die Trocknung schnell vor sich geht, so daß eine Schädigung der für die aktive Immunisierung wertvollen Stoffe nicht eintreten kann.knocked to the ground. They stay there in a tight lump, over, The trypanosomes are deposited in a white layer that can be easily lifted off. It was also found that there is an immunization change in the on this The preparation obtained in this way can be avoided by not working at 37 ° or above sulfuric acid, but dries quickly in moving air at normal temperature. An infection with air germs when drying in a moving air stream does not occur. The success is due to the fact that the drying goes on quickly, so that damage to those valuable for active immunization Substances cannot enter.

Nach der Erfindung wird also wie folgt verfahren: According to the invention, the procedure is as follows:

Ratten, die mit Trypanosomen infiziert sind, werden auf dem Höhepunkt der Infektion verblutet. Das Blut wird in der Mischung eines agglutinierenden Serums mit Natriumcitratlösung aufgefangen. Unter Natriumcitratlösung ist eine Lösung von 10 Prozent Natriumcitrat in physiologischer Kochsalzlösung zu verstehen. Das Natriumeitrat hat bekanntlich den Zweck, die Gerinnung zu verhindern. Agglutinierende Antisera bewirken das Zusammenballen der roten Blutkörperchen, die dadurch schnell zu Boden sinken. Als solche agglutinierenden Sera kommen in Betracht normale Sera, z. B. Pferdeserum oder künstliche, durch Injektion von defibriniertem Rattenblut gewonnene, hochwertige Immunsera, die in einer ihrer Wertigkeit entsprechenden Koordinierung mit Kochsalzlösung verwendet werden. Hat sich der größte Teil der roten Blutkörperchen abgesetzt, so wird die überstehende Flüssigkeit abgegossen und zentrifugiert. Durch das Zentrifugieren werden die . noch vorhandenen, roten Blutkörperchen zu Boden gerissen; über ihnen setzt sich eine zweite Schicht ab, die aus Trypanosomen besteht. ' Die über diesen stehende Flüssigkeit wird nun entfernt und die Trypanosomenschicht abgelöst. Nachdem die Trypanosomen in Kochsalzlösung aufgeschwemmt und gewaschen worden sind, werden sie im Luftstrom etwa bei Zimmertemperatur getrocknet und zu Pulver zerrieben. Man erhält auf diese Weise ein von fremden organischen Stoffen, im besonderen von roten Blutkörperchen völlig freies, konservierbares und dosierbares Pulver, in dem sich die für die aktive Immunisierung gegen Trypanosomen in Betracht kommenden Stoffe unbeeinträchtigt vorfinden. Dieses Pulver wird im Gebrauchsfalle in Kochsalzlösung aufgeschwemmt, eine Stunde im Schüttelappärat geschüttelt, um eine Aufschließung der Trypanosomenkörper zu bewirken. Das so erhaltene Präparat hat den Vorteil, daß es insofern nicht giftig ist, als bei seiner Injektion schädliche Nebenerscheinungen nicht zutage treten. Durch die Vaccinierung wird aktive Immunität gegen nachfolgende Infektion erreicht und Serum erzeugt, durch das Immunität passiv auf andere Organismen übertragen werden kann.Rats infected with trypanosomes will bleed to death at the peak of the infection. The blood is in the mixture of an agglutinating serum with sodium citrate solution caught. Under sodium citrate solution is a 10 percent solution of sodium citrate to be understood in physiological saline solution. As is well known, the sodium citrate has the purpose of preventing clotting. Agglutinating antisera cause the clumping together the red blood cells, which quickly sink to the ground as a result. Such agglutinating sera come into consideration normal sera, e.g. B. horse serum or artificial, by injection of defibrinated rat blood Obtained, high-quality immune sera, which are coordinated according to their value be used with saline. If most of the red blood cells have settled, the protruding one becomes Liquid poured off and centrifuged. Centrifugation removes the. remaining red blood cells Cracked ground; A second layer consisting of trypanosomes is deposited above them. 'The liquid above this is now removed and the trypanosome layer replaced. After the trypanosomes are floated in saline and washed have been, they are dried and closed in an air stream at around room temperature Powder grinded. In this way one obtains one of foreign organic substances, in particular Conservable powder completely free of red blood cells, which can be dosed and used for active immunization find substances suitable for trypanosomes unaffected. This powder is suspended in saline solution in case of use, one hour in the shaker shaken to cause the trypanosome bodies to break down. The thus obtained The preparation has the advantage that it is not toxic insofar as it is when injected harmful side effects do not come to light. Vaccination becomes active Immunity to subsequent infection is achieved and serum is generated through which immunity can be passively transferred to other organisms.

Im einzelnen stellt sich das vorliegende Verfahren wie folgt dar: Trypanosomenhaltiges Rattenblut wird aufgefangen in einer Mischung, z. B. von 0,1 ecm rattenblutagglutinierendem Kaninchen-Immunserum, 8 ecm Kochsalzlösung und 2 ecm ioprozentiger Natriumcitratlösung. Bei Verwendung von agglutinierenden Normalsera nimmt man z. B. 8 ecm Pferdeserum und 2 ecm ioprozentige Natriumcitratlösung. Das Gesamtvolumen der Flüssigkeit vermehrt sich durch das Blut der Ratte um 3 bis 5 ecm. Aus 30 Ratten läßt sich etwa ι g Trockensubstanz gewinnen. Zur Immunisierung einer Maus von 15 bis 20 g Körpergewicht bedarf es einer Menge von 0,1 g, zur Immunisierung eines Kaninchens von 1500 bis 2000 g mindestens 0,15 g Trockensubstanz.The present process is detailed as follows: Contains trypanosomes Rat blood is collected in a mixture, e.g. B. of 0.1 ecm rat blood agglutinating Rabbit immune serum, 8 ecm saline solution and 2 ecm 10% sodium citrate solution. When using agglutinating normal sera one takes z. B. 8 ecm horse serum and 2 ecm io percent sodium citrate solution. The blood of the rat increases the total volume of the liquid by 3 to 5 ecm. From 30 rats you can get about ι g of dry matter gain. For the immunization of a mouse weighing 15 to 20 g an amount of 0.1 g is required to immunize a rabbit of 1500 up to 2000 g at least 0.15 g dry matter.

Die immunisierende Wirkung des Präparats wurde an über 100 Mäusen sowie an einer Anzahl Ratten, Meerschweinchen und Kaninchen erprobt.The immunizing effect of the preparation was tested on over 100 mice and on one Number of rats, guinea pigs and rabbits tested.

Selbstverständlich läßt sich das beschriebene Verfahren außer auf Trypanosomen auch auf andere Parasiten protozoischer Natur, die in der Blutflüssigkeit leben, anwenden, z. B. die verschiedenen Arten der Spirochaeten.Of course, the method described can also be applied to trypanosomes as well use other parasites of protozoan nature living in the blood fluid, e.g. B. the different types of spirochetes.

Claims

Patent claim:

Process for the production of a precisely dosed permanent preparation for immunization against infection by trypanosomes and other parasites of protozoan nature, characterized in that the blood of such infected animals in a mixture of an agglutinating antiserum and 10 percent sodium citrate solution brings the fluid over the clumped blood cells poured off and centrifuged, the resulting upper layer of trypanosomes and the like lifts off, washed with saline solution and dry in agitated air at room temperature, whereupon the dry preparation is ground to a fine powder and possibly disintegrates in the usual way by shaking with saline solution.