DE256116C

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KAISERLICHESIMPERIAL

PATENTAMT.PATENT OFFICE.

PATENTSCHRIFTPATENT LETTERING

- JVI256116 -KLASSE Mp. GRUPPE - GROUP CLASS Mp - JVI256116.

Patentiert im Deutschen Reiche vom 4. April 1912 ab.Patented in the German Empire on April 4, 1912.

Ackermann (Zeitschrift für physiologische Chemie Bd. 65 [1910], S. 504, und Bd. 69 [1910], S. 273) hat die Fäulnisprodukte von Aminosäuren einer eingehenden Untersuchung unterzogen. Dabei ergab sich, daß verschiedene dieser Säuren, z. B. Glutaminsäure, Histidin, Lysin, bei der Fäulnis im wesentlichen Kohlensäure abspalten, denn es bilden sich dabei die entsprechenden Amine: y-Aminobutter-Ackermann (Zeitschrift für Physiologische Chemie Vol. 65 [1910], p. 504, and Vol. 69 [1910], P. 273) has subjected the putrefaction products of amino acids to an in-depth investigation. It was found that various of these acids, e.g. B. glutamic acid, histidine, Lysine, essentially split off carbonic acid during putrefaction, because it is formed in the process the corresponding amines: y-amino butter

to säure, ß-Imidazoläthylamin bzw. Pentamethylendiamin. Die Fäulnis leitete Ackermann mit faulender Pankreas bei Gegenwart von Traubenzucker, Pepton, Magnesiumsulfat, Natriumsulfat und einem Überschuß von CaI-ciumcarbonat ein. Diese Methode weist den Nachteil auf, daß neben dem gewünschten Fäulnisprodukt sich noch eine Reihe anderer Stoffe vorfinden, welche die Isolierung der betreffenden Base aus dem Fäulnisgemisch erschweren. Auch scheint die wahllose Anwen-" dung von Fäulniserregern die Ausbeute zu beeinträchtigen, indem wahrscheinlich andere in der faulenden Pankreas sich vorfindende Mikroorganismen einen Abbau in abweichender Richtung bewirken, oder die entstandenen Amine weiter zersetzen. Eine Stütze für diese Annahme liegt in dem Umstand, daß Ackermann bei der Fäulnis von Histidin nicht über eine Ausbeute von etwa 50 Prozent an ß-Imidazolyläthylamin hinauskommt. Dieser Übelstand läßt sich, wie im Patent 252872 gezeigt ist, dadurch zum größten Teil beheben, daß besondere Fäulnisgemische verwendet werden und der Fäulnisprozeß auf 4 bis 6 Tage abgekürzt wird.to acid, ß-imidazolethylamine or pentamethylenediamine. The putrefaction caused Ackermann with putrefying pancreas in the presence of Dextrose, peptone, magnesium sulfate, sodium sulfate and an excess of calcium carbonate a. This method has the disadvantage that in addition to the desired putrefaction product, there are a number of others Find substances that make it difficult to isolate the base in question from the putrefaction mixture. The indiscriminate use of putrefactive agents also seems to increase the yield affect by likely others found in the rotting pancreas Microorganisms cause degradation in a different direction, or the resulting Further decompose amines. Support for this assumption lies in the fact that Ackermann was involved in the putrefaction of histidine does not exceed a yield of about 50 percent of ß-imidazolylethylamine. This As shown in patent 252872, the problem can be largely remedied by that special putrefaction mixtures are used and the putrefaction process is shortened to 4 to 6 days.

Es wurde nun gefunden, daß die Abspaltung von Kohlensäure aus dem Histidin noch sicherer durchgeführt werden kann, wenn man eine Reinkultur der kohlensäureabspaltenden Mikroorganismen zur Fäulnis verwendet. Auf diese Weise gelingt es, die Reaktion auf der gewünschten Stufe anzuhalten.It has now been found that the splitting off of carbonic acid from the histidine is still possible Safer can be done if you have a pure culture of the aerosolizing Microorganisms used to putrefaction. In this way it is possible to get the reaction on the desired level.

Durch systematische Züchtung von Reinkulturen auf verschiedenen Nährböden (Agar, Endoagar, Glycerinagar) gelingt es, aus dem nach Ackermann oder aus dem im Patent 252872 erwähnten Fäulnisgemisch einen coccenähnlichen Bacillus zu isolieren, der imstande ist, Histidin unter Ausschluß jedes anderen Fäulniserregers derart abzubauen, daß sich das therapeutisch wertvolle ß-lmidazolyläthylamin als wesentliches Abbauprodukt bildet.Systematic cultivation of pure cultures on different culture media (agar, Endoagar, glycerine agar) succeeds from the Ackermann or from the patent 252872 mentioned putrefaction mixture to isolate a cocci-like Bacillus, which is capable is to break down histidine with the exclusion of any other putrefactive pathogen in such a way that the therapeutically valuable ß-imidazolylethylamine forms as an essential degradation product.

Zur Gewinnung des Bakteriums wird kernreiches Drüsengewebe (Pankreas oder Thymus) bei 37° der Fäulnis überlassen. Von der dabei sich üppig entwickelnden gemischten Bakterienflora wird auf die schwach alkalische Lösung der mit etwas steriler Bouillon oder Pepton versetzten Histidinlösung übergeimpft. Hierbei entwickeln sich vorzugsweise kurze Stäbchen neben coccenartigen Gebilden. Beim weiteren Überimpfen auf Agar-Agar, Glycerinagar, Milchzuckeragar sowie auf peptonhaltige Histidinlösungen entwickelt sich ausschließlich ein coccenartiges Stäbchen, das bisweilen in der Art von Diplococcen oder Streptococcen Kolonien bildet. (Gramsche Färbung negativ). Das Bakterium wächst spärlich auf Histidinlösungen allein, üppig in schwach alkalischen Lösungen des Histidins,Nuclear-rich glandular tissue (pancreas or thymus) is used to obtain the bacterium left to rot at 37 °. From the abundantly developing mixed bacterial flora is inoculated onto the weakly alkaline solution of the histidine solution mixed with some sterile broth or peptone. Here, preferably short rods develop next to cocci-like structures. At the further inoculation on agar agar, glycerin agar, milk sugar agar and peptone-containing Histidine solutions develop exclusively a cocci-like rod, which is sometimes in the manner of Diplococci or Streptococci forms colonies. (Gram's staining negative). The bacterium grows sparingly on histidine solutions alone, abundantly in weakly alkaline solutions of histidine,

Claims

which are mixed with a little sterile broth or with nucleic acid.

A guinea pig injected with a culture intraperitoneally died after 12 hours.

The use of this pure culture for the putrefaction of histidine is discussed below Example will be explained:

100 parts of histidine chlorohydrate are dissolved in ίο distilled water and this solution then sterilized. Then a part of the sterile broth is added and the usual vaccination is used Way by transferring a pure culture of the carbonic acid-splitting ones as shown above Microorganisms by means of an annealed platinum loop. 1 to 2 eyelets are sufficient, to initiate the putrefaction. After keeping the mixture for 24 hours at the incubation temperature has left to stand, you can chemically as well as pharmacologically ß-imidazolylethylamine prove.

The deposition of the ß-Imidazolyläthylamins from the putrefaction mixture, which this amine Already contains almost pure, is expediently done by precipitation as poorly soluble Salt (picrate) or according to the method of patent 252874 by extraction with chloroform. Depending on the duration of the putrefaction, a yield of completely pure β-imidazolylethylamine of 80 to 20 percent is obtained of the histidine converted by the bacterium.

The pharmacological detection of ß-imidazolylethylamine is carried out by means of Magnus (Pflüger's archive for physiology, vol. 102 [1904], cf. also Chem. Zentralbl. 1905, L, p. 1722) cited method on surviving small intestine.

Ρλ τ ε ν τ - A N S ρ R υ c η:

Process for the preparation of ß-imidazolylethylamine from histidine, characterized in that that one can histidine with pure cultures of carbonic acid-splitting bacteria subject to putrefaction with or without the addition of small amounts of suitable nutrients.