DE2529604A1 - CONDENSATION PRODUCTS - Google Patents

CONDENSATION PRODUCTS

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DE2529604A1
DE2529604A1 DE19752529604 DE2529604A DE2529604A1 DE 2529604 A1 DE2529604 A1 DE 2529604A1 DE 19752529604 DE19752529604 DE 19752529604 DE 2529604 A DE2529604 A DE 2529604A DE 2529604 A1 DE2529604 A1 DE 2529604A1
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Regula Boeniger
Victor Dr Krasnobajew
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L Givaudan and Co SA
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Description

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L. Givaudan & Cie Societe Anonyme, Vernier-Geneve (Schweiz)L. Givaudan & Cie Societe Anonyme, Vernier-Geneve (Switzerland)

KondensationsprodukteCondensation products

Gegenstand des deutßcben Patentgesuches No. P 2407840.8 ist die Herstellung eines neuen, durch Umsetzung von 1,3-Phenylendiamin mit Glutardialdehyd erhältlichen Kondensationsharzes, das sich durch grosse Bindungskapazität für Proteine auszeichnet.Subject of the German patent application no. P 2407840.8 is the production of a new condensation resin, obtainable by reacting 1,3-phenylenediamine with glutaraldehyde, which is characterized by a large binding capacity for proteins.

Es wurde nun gefunden, dass sich eine Reihe weiterer strukturell verwandter Amine mit demselben oder mit strukturell ähnlichen Dialdehyden oder auch mit Acrolein in gleicher Weise zu Kondensationsharzen umsetzen lassen, die sich ebenfalls in hervorragender Weise zu demselben Zweck, also zur Fixierung bzw. Unlö'slichmachung von Proteinen eignen.It has now been found that a number of further structurally related amines with the same or with structurally Similar dialdehydes or with acrolein can be reacted in the same way to form condensation resins, which can also be used excellently suited for the same purpose, i.e. for fixing or making proteins insoluble.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind neue, durch Kondensation von carbocyclischen aromatischen Polyaminen mit aliphatischen Dialdehyden oder Acrolein erhaltene poly-The present invention relates to new, by condensation of carbocyclic aromatic polyamines with aliphatic dialdehydes or acrolein obtained poly-

509885/1129 TÄ-/L5.5.1975509885/1129 TÄ- / L5.5.1975

mere Produkte mit der Ausnahme des 1,3-Phenylendiamin-Glutardialdehyd-Kondensationsproduktes. mere products with the exception of the 1,3-phenylenediamine-glutaraldehyde condensation product.

Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung dieser Polyamin-Aldehyd-Harze, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man ein carbooyclisches aromatisches Polyamin mit einem aliphatischen Dialdehyd oder Acrolein zu einem zur Fixierung bzw. Unlb'slichmachung von Proteinen geeigneten Kondensationsprodukt umsetzt (wobei die Herstellung des 1,3-Phenylendiamin—Glutardialdehyd-Kondensationsproduktes ausgeschlossen sein soll), sowie die Verwendung der erhaltenen Harze zur Fixierung bzw, Unlöslichmachung von Proteinen, ein Verfahren zur Fixierung von Proteinen an diese Harze und schliesslich die an solche Harze fixierten Proteine.The invention also relates to a process for the preparation of these polyamine-aldehyde resins, which is characterized is that you can combine a carbonyl aromatic polyamine with an aliphatic dialdehyde or acrolein to form a Fixing or rendering proteins suitable Reacts condensation product (whereby the production of 1,3-phenylenediamine-glutaraldehyde condensation product should be excluded), as well as the use of the resins obtained to fix or insolubilize proteins Process for fixing proteins to these resins and finally the proteins fixed to such resins.

Beispiele von carbocyclischen aromatischen Polyaminen sind Diamine oder Triamine, z.B. einkernige Verbindungen wie Phenylendiamine, z.B. p-Phenylendiamln, Phenylendiamine wie 2,4,6-Triaminophenol, 2,4,6,-Triaminotoluol, etc., mehrkernige Verbindungen wie Biphenyldiamine, z.B. Benzidin, oder mehrkernige Verbindungen mit aliphatischen Brücken, z.B. Diaminodipheny!alkane, z.B. Diaminodipheny!methane.Examples of carbocyclic aromatic polyamines are diamines or triamines, e.g., mononuclear compounds such as Phenylenediamines, e.g. p-phenylenediamines, phenylenediamines such as 2,4,6-triaminophenol, 2,4,6-triaminotoluene, etc., polynuclear Compounds such as biphenyldiamines, e.g. benzidine, or polynuclear compounds with aliphatic bridges, e.g. diaminodipheny! Alkanes, e.g. Diaminodipheny! methane.

Ausser Aminogruppen können die aromatischen Kerne auch noch andere Substituenten, wie nieder-Alkylreste, z.B. Methyl, Aethyl, nieder-Alkoxyreste, wie Methoxy, Aethoxy, etc., Hydroxy-, Halogen-, Carboxy-, Mercapto-, nieder-Alkylthio- oder SuIfony!gruppen aufweisen.In addition to amino groups, the aromatic nuclei can also have other substituents, such as lower-alkyl radicals, e.g. methyl, Ethyl, lower alkoxy radicals, such as methoxy, ethoxy, etc., Hydroxy, halogen, carboxy, mercapto, lower-alkylthio or sulfony groups.

Schliesslich können bei der Herstellung der erfindungsgemässen Kondensationsprodukte auch Gemische verschiedener Amine eingesetzt werden.Finally, in the production of the inventive Condensation products, mixtures of different amines can also be used.

5.Q98 8 5/ 1 1295.Q98 8 5/1 129

Bevorzugte Aminokomponenten sind Benzidin und 2,4,6-Triaminotoluol. Preferred amino components are benzidine and 2,4,6-triaminotoluene.

Beispiele von aliphatischen Dialdehyden sind G-lutardialdehyd, Bernsteinsäuredialdehyd, Glyoxal, etc. Bevorzugt •wird Glutardialdehyd verwendet.Examples of aliphatic dialdehydes are G-lutaraldehyde, Succinic acid dialdehyde, glyoxal, etc. Glutaraldehyde is preferably used.

Ob sich die nach dem erfindungsgemässen Verfahren jeweils erhaltenen Produkte zur Fixierung bzw. Unlöslichmachung von Enzymen eignen, kann experimentell auf einfache Art festgestellt werden, indem das erhaltene Produkt mit einem Enzym, vorzugsweise Amyloglucosidase, behandelt wird und die Aktivität des fixierten Enzyms gemessen wird* Die Eignung ist gegeben, wenn diese Aktivität mindestens 50 bis 100 Einheiten pro Gramm Trägermaterial beträgt.Whether the according to the inventive method in each case obtained products for the fixation or insolubilization of Enzymes can be determined experimentally in a simple manner by combining the product obtained with an enzyme, preferably amyloglucosidase, and the Activity of the fixed enzyme is measured * The suitability is given if this activity is at least 50 to 100 units per gram of carrier material.

Zu diesem Zweck kann folgende "Versuchsanordnung benutzt werden:The following "experimental set-up" can be used for this purpose will:

1 g des Trägermaterials wird in eine Chromatographiesäule (1,5 x 15 cm) gefüllt. Eine Lösung von 1 g Amyloglucosidase (50 Einheiten/mg) in 100 ml 16 mMol Acetatpuffer (pH 4,8) wird bei Zimmertemperatur und mit einer Durchflussrate von 20 ml pro Stunde über die Säule gegeben. Das fixierte Enzym soll , wie gesagt, eine Aktivität von mindestens 50 bis1 g of the support material is placed in a chromatography column (1.5 × 15 cm). A solution of 1 g of amyloglucosidase (50 units / mg) in 100 ml of 16 mmol acetate buffer (pH 4.8) is added at room temperature and at a flow rate of 20 ml per hour passed through the column. As stated, the fixed enzyme should have an activity of at least 50 to

100 Einheiten/g Trägermaterial aufweisen.100 units / g of carrier material.

Die Aktivität wird anhand der aus löslicher Stärke freigesetzten Glucose nachZulkoski gemessen. Die freigesetzte Glucose wird mittels des Glueoseoxidase/Peroxidase-tests enzymatisch bestimmt (Bergmeyer, Methoden der enzymatischen Analyse, I, (1970) 416). 1 Einheit = diejenige Enzymmenge, dieThe activity is measured based on the Glucose released from soluble starch according to Zulkoski. The released Glucose is determined enzymatically using the glucose oxidase / peroxidase test (Bergmeyer, methods of enzymatic Analysis, I, (1970) 416). 1 unit = the amount of enzyme that

1 pMol Glucose/Min bei einer Reaktionstemperatur von 600C bei pH 4,8 aus löslicher Stärke freisetzt.1 pmol glucose / min releases at a reaction temperature of 60 0 C at pH 4.8 from soluble starch.

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Andererseits ist die Eignung gegeben, wenn das Trägermaterial mindestens 10 mg eines Proteins (z.B. Rinderserum-Albumin) per Gramm Träger fixiert. Die fixierte Proteinmenge kann dadurch bestimmt werden, dass man das träger-fixierte Protein mit 6 N HCl hydrolysiert und anschliessend die Menge der freien Aminosäuren mit Hilfe irgend einer gängigen Analysenmethode für Aminosäuren bestimmt.On the other hand, it is suitable if the carrier material contains at least 10 mg of a protein (e.g. bovine serum albumin) fixed per gram of carrier. The fixed amount of protein can be determined by looking at the carrier-fixed protein hydrolyzed with 6 N HCl and then the amount of free amino acids determined with the help of any common analysis method for amino acids.

Als Proteine, die an die erfindungsgemässen Kondensationsprodukte gebunden werden können, kommem Polypeptide, Antigene, Antikörper, Proteininhibitoren oder insbesondere Enzyme in Betracht. Die Enzyme können pflanzlichen, tierischen oder mikrobiellen Ursprungs sein. Es kommen in Betracht Hydrolasen (Peptidasen, Proteinasen, Desaminasen, Carbohydrasen, Esterasen, Nucleasen), lyasen bzw. Desmolasen (Hydrolyasen, Decarboxylasen, Aldolasen), Transferasen, Isomerasen, Oxidoreduktasen und Ligasen. Beispiele von Enzymen, von denen erfindungsgemäss "unlösliche Enzympräparate hergestellt werden können, sind Alkoholdehydrogenase, Naringinase, Hesperidinase, ß-Glucosidase, α-Amyläse, Invertase, Amyloglucosidase, Urease, Trypsin, Ficin, Papain, Bromelin, Subtilopeptidase.Rennin, G-lucoseisomerase, Glucoseoxidase, Peroxidase, Katalse, Acyläse und Cytochrome, Ribonucleasen Phosphodiesterase, AdenyIdeaminase, etc.As proteins that are linked to the condensation products according to the invention Can be bound, come polypeptides, antigens, antibodies, protein inhibitors or especially enzymes in Consideration. The enzymes can be of vegetable, animal or microbial origin. Hydrolases (peptidases, Proteinases, deaminases, carbohydrases, esterases, nucleases), lyases or desmolases (hydrolyases, decarboxylases, aldolases), transferases, isomerases, oxidoreductases and Ligases. Examples of enzymes, of which according to the invention "insoluble Enzyme preparations that can be made are alcohol dehydrogenase, naringinase, hesperidinase, ß-glucosidase, α-amylase, invertase, amyloglucosidase, urease, trypsin, ficin, Papain, bromelin, subtilopeptidase, rennine, G-lucose isomerase, Glucose oxidase, peroxidase, catalysis, acylase and cytochrome, Ribonucleases Phosphodiesterase, AdenyIdeaminase, etc.

Das molare Verhältnis der beiden Kondensationspartner Polyamin- und Aldehyd liegt__zweckmässigerweisor-r zwischen 1:1 und 1:10, wobei ein Verhältnis von etwa 1:3 bevorzugt ist.The molar ratio of the two condensation partners polyamine and aldehyde liegt__zweckmässigerweiso r - r is between 1: 1 and 1:10, with a ratio of about 1: is preferable. 3

• Die Umsetzung kann in an sich bekannter V/eise, beispielsweise in wässriger Lösung, vorzugsweise unter Zusatz einer Säure, z.B. einer Mineralsäure, wie Salzsäure durchgeführt werden. In einer besonderen Ausführungsform wird in Gegenwart eines inerten, feinkörnigen, vorzugsweise anorganischen, insbesondere• The implementation can be done in a manner known per se, for example in aqueous solution, preferably with the addition of an acid, for example a mineral acid such as hydrochloric acid. In a particular embodiment is in the presence of an inert, fine-grained, preferably inorganic, in particular

&09885/1129& 09885/1129

silikathaltigen Hilfsmittels gearbeitet. Beispiele solcher Hilfsmittel sind Silicagel, Bimsstein, Diatomeenerde (Kieselgur), Bentonit, Wollastonit, poröses Glas, aber auch Metalloxide, wie Aluminiumoxid oder Hydroxylapatit. Bevorzugt wird Silicagel verwendet, beispielsweise mit einer Partikelgrösse von 0,05-0,2 mm (70 - 325 mesh) oder Bimsstein, beispielsweise mit einer Partikelgrösse von 0,05 - 10 mm. Durch die Anwesenheit eines solchen Hilfsmittels wird eine homogene Partikelbildung bei der Kondensation erreicht, was wiederum eine bessere Sedimentation zur Folge hat. Die Kondensation in Gegenwart eines Hilfsmittels wird zweckmässig so durchgeführt, dass man die Partikel zunächst mit einer der beiden Komponenten in Berührung bringt und dann die zweite Komponente unter gleichzeitigem oder anschliessendem leichten Ansäuern zusetzt.silicate-containing auxiliary worked. Examples of such Aids are silica gel, pumice stone, diatomaceous earth (kieselguhr), bentonite, wollastonite, porous glass, but also metal oxides, such as aluminum oxide or hydroxyapatite. Silica gel is preferably used, for example with a particle size of 0.05-0.2 mm (70-325 mesh) or pumice stone, for example with a particle size of 0.05 - 10 mm. The presence of such an aid becomes a homogeneous one Particle formation achieved during condensation, which in turn results in better sedimentation. The condensation in the presence of an auxiliary, it is expedient to carry out such that the particles are first treated with one of the two Brings components into contact and then the second component with simultaneous or subsequent slight acidification clogs.

Die erfindungsgemässe Kondensation kann in homogener Phase oder vorzugsweise in einem Zweiphasensystem unter Zusatz einer Säure, z.B. einer Mineralsäure, wie Schwefelsäure, Phosphorsäure, vorzugsweise aber Salzsäure, oder einer organischen Säure, z.B. einer Carbonsäure wie Essigsäure, unter kräftigem Rühren oder Schütteln vorgenommen werden. Die Verwendung eines Zweiphasensystems fördert die Bildung von sphärischen, weitgehend homogenen, leicht filtrierbaren und gut sedimentierenden Partikeln,die als Trägermaterial besonders gut geeignet sind.The inventive condensation can be homogeneous Phase or preferably in a two-phase system with the addition of an acid, e.g. a mineral acid such as sulfuric acid, phosphoric acid, but preferably hydrochloric acid, or an organic acid, e.g. a carboxylic acid such as acetic acid, under vigorous Stirring or shaking can be made. The use of a two-phase system encourages the formation of spherical, largely homogeneous, easily filterable and easily sedimenting particles, which are particularly suitable as carrier material.

Als zweite Phase eignen sich inerte, mit Wasser nicht mischbare organische Lösungsmittel, wie Dichlormethan, Chloroform, Tetrachlorkohlenstoff, Benzol, Toluol, Aethylacetat, Dioxan, Schwefelkohlenstoff. Als bevorzugtes organisches lösungsmittel kann Chloroform verwendet werden. Doch ist auch Aceton zu diesem Zweck geeignet.Inert, water-immiscible organic solvents such as dichloromethane, chloroform, Carbon tetrachloride, benzene, toluene, ethyl acetate, dioxane, carbon disulfide. As a preferred organic solvent, chloroform can be used. But acetone is also suitable for this purpose.

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Der Temperaturbereich ist nicht kritisch. Die erfindungsgemässe Kondensation kann z.B. zwischen O0C und 500C, vorzugsweise Raumtemperatur, d.h. zwischen ungefähr 18° und 220C durchgeführt werden.The temperature range is not critical. The inventive condensation can be 0 C and 50 0 C, preferably room temperature, ie between about 18 ° and 22 0 C are performed, for example between O.

Each dem erfindungsgemässen Verfahren erhält man ein bereits sehr aktives Trägermaterial, das jedoch durch Diazotierung noch weiter aktiviert werden kann. Die Diazotierung kann in an sich bekannter V/eise durch Behandlung des Kondensationsproduktes mit Nitrit und Säure erfolgen.Each the inventive method one obtains a already very active carrier material, which, however, can be further activated by diazotization. The diazotization can be done in a manner known per se by treating the condensation product done with nitrite and acid.

Zur Fixierung des Proteins an das Trägermaterial behandelt man letzteres mit einer wässrigen, vorzugsweise gepufferten lösung des Proteins (1-50 mg/ml) bei einer Temperatur von etwa 0-300C, vorzugsweise 40C bis Zimmertemperatur, was durch Rühren oder Schütteln geschehen kann. Auf Grund der hohen Aktivität des erfindungsgemässen Trägermaterials kann die Fixierung von Proteinen vorteilhaft auch durch einfache Filtration der Proteinlösung durch eine Trägerschicht, vorzugsweise eine mit Träger gefüllte Säule, wie es z.B. in der Säulenchromatographie üblich ist, erfolgen. So kann man beispielsweise Kulturfiltrate von Mikroorganismen, die Proteine bzw. Enzyme enthalten, direct über eine Trägersäule laufen lassen, wobei die Proteine bzw. Enzyme selektiv fixiert werden. Zweckmässig wäscht man noch mit etwas Pufferlösung und 1 M SCl-Lösung nach, um nicht fixierte Proteine zu entfernen.To fix the protein to the support material by treating the latter with an aqueous, preferably buffered solution of the protein (1-50 mg / ml) at a temperature of about 0-30 0 C, preferably 4 0 C to room temperature, by stirring or shaking can happen. Due to the high activity of the carrier material according to the invention, the fixation of proteins can advantageously also be carried out by simple filtration of the protein solution through a carrier layer, preferably a column filled with carrier, as is customary, for example, in column chromatography. For example, culture filtrates of microorganisms which contain proteins or enzymes can be run directly over a support column, the proteins or enzymes being selectively fixed. It is advisable to wash with a little buffer solution and 1 M SCl solution in order to remove unfixed proteins.

Die an den erfindungsgemässen Träger fixierten Proteine sind im allgemeinen sehr stabil und es werden bei Enzymen sehr hohe spezifische Aktivitäten (Einheit/g) erreicht. Man kann Beladungen von beispielsweise 1:3-10 Gewichtsteilen Protein/ Träger erreichen.The proteins fixed to the carrier according to the invention are generally very stable and they become very high in the case of enzymes high specific activities (unit / g) achieved. One can Loads of, for example, 1: 3-10 parts by weight protein / Reach porters.

Die erfindungsgemässen trägergebundenen Proteine, insbe-S09885/1129 The carrier-bound proteins according to the invention, in particular S09885 / 1129

sondere die Enzyme, können in an sich bekannter Weise verwendet werden, beispielsweise zu analytischen oder präparativen Zwecken oder in der Lebensmitteltechnologie, beispielsweise zur Herstellung von Glucose aus Stärke (siehe z.B. Scientific American 22JL, (Uo. 3) 26-33 (1971), Angew. Chemie 84, (8) 319-368 (1972), Chemiker Zeitung £6, (11), 595-602 (1972), C & EN, (I5.2.71), 86-87). Bei diesem grosstechnisch wichtigen Verfahren kann auf die erfindungsgemäss erhältlichen Kondensationsprodukte fixierte Amyloglucosidase zur Herstellung von Glucose aus dem "Glucose-Sirup" (vorhydrolysierte Stärke) dienen. Die Kondensationsprodukte können hierauf beispielsweise auf Säulen gebracht werden (Pestbettverfahren). Eine weitere Anwendung ergibt sich beim enzymatischen Abbau von Lactose in Milchprodukten mittels Lactasen (z.B. "Süssen" von Molke).The enzymes in particular can be used in a manner known per se be, for example for analytical or preparative purposes or in food technology, for example for Production of glucose from starch (see e.g. Scientific American 22JL, (Uo. 3) 26-33 (1971), Angew. Chemie 84, (8) 319-368 (1972), Chemiker Zeitung £ 6, (11), 595-602 (1972), C & EN, (I5.2.71), 86-87). In this industrially important process, the condensation products obtainable according to the invention can be used fixed amyloglucosidase for the production of glucose from the "glucose syrup" (pre-hydrolyzed starch) to serve. The condensation products can then, for example, be placed on columns (plague bed process). Another It is used in the enzymatic breakdown of lactose in dairy products by means of lactases (e.g. the "sweetness" of whey).

Die folgenden Beispiele illustrieren die Erfindung. Die Mengenangaben des erhaltenen bzw. eingesetzten Trägers sind auf Trockengewicht bezogen.The following examples illustrate the invention. The quantities of the carrier obtained or used are based on dry weight.

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Beispiel 1example 1

Zu einer Lösung bzw. Suspension von 5 g des Polyamins in 200 ml Chloroform werden unter kräftigem Rühren zunächst 20 g Aldehyd (80 ml einer 25$igen Lösung in Wasser) und nach weiteren 5 Minuten 20 ml 7 N Salzsäure portionenweise zugesetzt. Das Reaktionsgemisch erstarrt. Es wird mit 300 ml Wasser versetzt und 5 Minuten geschüttelt, bis es wieder fliessfähig wird. Man lässt die polymeren Körnchen unter gelegentlichem Rühren 1 Stunde stehen. Nach Absaugen des Reaktionsgemisches über einen Büchner-Trichter werden die polymeren Partikel mit 200 ml Aceton (3 x), hierauf mit 0,1 N NaOH gewaschen. Restliches Chloroform wird durch Waschen mit etwas Aceton entfernt. Die so erhaltenen Trägerpartikel sind sphärisch, homogen und gut filtrierbar; sie werden in Wasser oder in verdünnter Natronlauge aufbewahrt. Sie können , gegebenenfalls nach Diazotieren, zur Enzymfixierung eingesetzt werden.To a solution or suspension of 5 g of the polyamine First 20 g of aldehyde (80 ml of a 25% solution in water) are added to 200 ml of chloroform while stirring vigorously. and after a further 5 minutes, 20 ml of 7N hydrochloric acid were added in portions. The reaction mixture solidifies. It will 300 ml of water are added and the mixture is shaken for 5 minutes until it becomes fluid again. Leave the polymeric granules stand for 1 hour, stirring occasionally. After suctioning off the reaction mixture through a Buchner funnel the polymeric particles were washed with 200 ml of acetone (3 ×), then with 0.1 N NaOH. Remaining chloroform is through Wash away with a little acetone. The carrier particles obtained in this way are spherical, homogeneous and easily filterable; she are stored in water or in dilute sodium hydroxide solution. You can, if appropriate after diazotization, for enzyme fixation can be used.

Beispiel 2Example 2

1 g Trägermaterial wird in eine Chromatographiesäule (1,5 x 15 om) gefüllt und mit der bei der folgenden Enzymfixierung verwendeten Pufferlösung gewaschen. Die gepufferte Enzymlösung (1-100 mg Protein) ml Puffer wird mit einer Durchflussrate von 20 ml/h durch die Säule gegeben.1 g of support material is placed in a chromatography column (1.5 x 15 om) and filled with the one in the following enzyme fixation used buffer solution washed. The buffered enzyme solution (1-100 mg protein) ml of buffer is mixed with a Flow rate of 20 ml / h given through the column.

Die Kopplungskapazität ist erschöpft, wenn im Eluat Protein nachgewiesen werden kann, was beispielsweise durch Messung der Absorption bei 280 πιμ festgestellt werden kann. Das nicht fixierte Enzym wird durch Waschen der Säule mit 1 M KCl und der Pufferlösung entfernt. Es folgt Aktivitätsbestimmung eines Aliquots des Materials mit dem jeweiligen Substrat unter den gegebenen Reaktionsbedingungen, Nach Be-The coupling capacity is exhausted when protein can be detected in the eluate, for example by Measurement of the absorption at 280 πιμ can be determined. The unfixed enzyme is removed by washing the column with 1 M KCl and the buffer solution. The activity of an aliquot of the material with the respective is determined Substrate under the given reaction conditions, after loading

509885/1129509885/1129

Stimmung der Aktivität wird ein Aliquot des Enzympräparates mit Wasser gewaschen, getrocknet und das Trockenmaterial ermittelt. Auf diese Weise kann die Anzahl Einheiten Enzymaktivität/g Träger bestimmt werden.The mood of the activity becomes an aliquot of the enzyme preparation washed with water, dried and the dry material determined. In this way, the number of units of enzyme activity / g Carrier to be determined.

In der folgenden Tabelle I sind die gemäss Beispiel 1 hergestellten Kondensationsprodukte und ihre entsprechenden , gemäss Beispiel 2 bestimmten , Aktivitäten zusammengestellt.In the following table I are those according to example 1 produced condensation products and their corresponding, determined according to Example 2, compiled activities.

509885/1129509885/1129

Tabelle ITable I.

Kondensationsprodukt Polyamin · Aldehyd Condensation product polyamine · aldehyde

Aktivität des fixiertenActivity of the pinned

Enzyms, (Amyloglueosidase-Enzyme, (amyloglueosidase-

aktivität)activity)

Einheiten/g TrägermaterialUnits / g carrier material

fixierte Enzym-fixed enzyme

mengelot

(mg pro g Träger) * (mg per g carrier) *

1,4-Phenylendlamin1,4-phenylenedlamine GlutardialdehydGlutaraldehyde 800 ' /800 '/ .2,4» 6-Triaminphenol.2,4 »6-triamine phenol IlIl 800800 2,4,6-Triaminotoluol2,4,6-triaminotoluene ItIt 14001400 ■2,4-Diaminotoluol■ 2,4-diaminotoluene ItIt 700700 2,4-Diamino-anis ο12,4-diamino-anise ο1 ItIt 40004000 3-Amino~4-chlor-anilin3-amino ~ 4-chloro-aniline ηη 820820 3-Methylmercaptoanilin3-methyl mercaptoaniline titi 500500

Benzidin 4,4'-Diaminodipheny!methan 4,4'-DiaminodiphenylsulfonBenzidine 4,4'-diaminodiphenymethane 4,4'-diaminodiphenyl sulfone

Benzidinj1,3-Phenylendiamin = 1:3 1,3-Phenylendiamin 1,3-Phenylendiamin 1,3-PhenylendiaminBenzidine 1,3-phenylenediamine = 1: 3 1,3-phenylenediamine 1,3-phenylenediamine 1,3-phenylenediamine

GlyoxalGlyoxal

Succindialdehyd AcroleinSuccindialdehyde acrolein

(Gluooseoxidase)(Glucose oxidase)

ca. 50-200approx. 50-200

* Analoge Resultate ergeben sich für Katalase, ^-Galactosidase, Subtilopeptidase, Naringinase, «:- Amy läse* Analogous results are obtained for catalase, ^ -galactosidase, subtilopeptidase, naringinase, ": - Amy läse

Claims (5)

PatentansprücheClaims l/ Verfahren zur Herstellung von polymeren Kondensationsprodukten, dadurch gekennzeichnet, dass man ein carbocyclisches aromatisches Polyamin mit einem aliphatischen Dialdehyd oder Acrolein zu einem zur Fixierung "bzw. Unlöslichmachung von Proteinen geeigneten Kondensationsprodukt umsetzt,mit Ausnahme der Herstellung des 1,3-Phenylendiamin-Glutardialdehyd-Kondensationsproduktes ·l / Process for the preparation of polymeric condensation products, characterized in that a carbocyclic aromatic polyamine with an aliphatic dialdehyde or acrolein to fix "or insolubilize Proteins converts suitable condensation product, with the exception of Preparation of the 1,3-phenylenediamine-glutaraldehyde condensation product · 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man als carbocyclisches aromatisches Polyamin ein Diamin verwendet.2. The method according to claim 1, characterized in that one is used as a carbocyclic aromatic polyamine Diamine used. 3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass man als Dialdehyd Glutardialdehyd verwendet.3. The method according to claim 1 and 2, characterized in that the dialdehyde used is glutaraldehyde. 4» Verfahren nach den Ansprüchen 1-3» dadurch gekennzeichnet dass man Benzidin mit Glutardialdehyd versetzt.4 »method according to claims 1-3» characterized that benzidine is mixed with glutaraldehyde. 5· Verfahren nach den Ansprüchen 1-3» dadurch gekennzeichnet dass man 2,4,6-Triaminotoluol mit Glutardialdehyd versetzt.5. Process according to claims 1-3 »characterized in that 2,4,6-triaminotoluene is mixed with glutaraldehyde. 6. Verfahren gemäss den Ansprüchen 1-5, dadurch gekennzeichnet, dass 1 Mol Polyamin mit 1-10 Molen Aldehyd umgesetzt wird. 6. Process according to claims 1-5, characterized in that 1 mole of polyamine is reacted with 1-10 moles of aldehyde. •7. Verfahren gemäss den Ansprüchen 1-6, dadurch gekennzeichnet, dass die Kondensation in Gegenwart eines feinkörnigen, festen inerten Hilfsmittels stattfindet.• 7. Process according to claims 1-6, characterized in that that the condensation takes place in the presence of a fine-grained, solid inert auxiliary. 50988b/112950988b / 1129 8. Verfahren gemäss Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass das Hilfsmittel ein Silikat oder ein silikathaltiges Material ist·.8. The method according to claim 7, characterized in that the auxiliary agent is a silicate or a silicate-containing one Material is ·. 9. Verfahren gemäss Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass Silicagel als Hilfsmittel verwendet wird.9. The method according to claim 8, characterized in that silica gel is used as an aid. 10* Verfahren gemäss den Ansprüchen 1-9, dadurch gekennzeichnet, dass die Kondensation in einem Zweiphasensystem durchgeführt wird.10 * Method according to claims 1-9, thereby characterized in that the condensation is carried out in a two-phase system. 11. Verfahren gemäss Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Zweiphasensystem aus einer wässrigen und einer organischen, mit Wasser nicht mischbaren Phase besteht.11. The method according to claim 10, characterized in that that the two-phase system consists of an aqueous and an organic, water-immiscible phase. 12. Verfahren gemäss Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass die organische, mit Wasser nicht mischbare Phase Chloroform ist.12. The method according to claim 11, characterized in that the organic, water-immiscible Phase is chloroform. 13. Verfahren gemäss den Ansprüchen 1-12, dadurch gekennzeichnet, dass man das erhaltene Kondensationsprodukt diazotiert.13. The method according to claims 1-12, characterized in that the condensation product obtained diazotized. 14. Verfahren zur Fixierung bzw. Unlöslichmachung von Proteinen, dadurch gekennzeichnet, dass man diese an ein gemäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältliches Kondensationsprodukt "bindet.14. Process for fixing or rendering insoluble Proteins, characterized in that they are transferred to a condensation product obtainable according to the process of claims 1-13 "binds. 15. Verfahren zur Fixierung bzw. Unlöslichmachung von Enzymen, dadurch gekennzeichnet, dass man diese an ein gemäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältliches Kondensat ionsprodukt bindet.15. A method for fixing or insolubilizing enzymes, characterized in that they are attached to a condensate obtainable according to the process of claims 1-13 ionic product binds. 98 85/11?998 85/11? 9 16. Verfahren zur Fixierung bzw. Unlö'slichnaohung von Enzymen, dadurch gekennzeichnet, dass man diese unter Verwendung der Säulentechnik an ein gemäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältliches Kondensationsprodukt cir.det.16. Process for fixing or approximating insolubility Enzymes, characterized in that they are transferred using the column technique to a according to the method of Claims 1-13 obtainable condensation product cir.det. 17. Verwendung der genäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältlichen Kondensationsprodukte zur Fixierung bzw. Unlösliclimachung von Proteinen,17. Use of the genäss the method of claims 1-13 available condensation products for fixation or Insolubility of proteins, 18. Verwendung der genäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältlichen Kondensationsprodukte zur Fixierung bzw, Unlösliehcaehung von Enzymen.18. Use of the genäss the method of claims 1-13 available condensation products for fixation or, respectively, insolubility of enzymes. 19. Verwendung der gemäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältlichen Kondensationsprodukte zur Fixierung bzw, Unl'dslichEachung von Enzymen mittels Säulsntechnik.19. Use of the according to the method of claims 1-13 available condensation products for fixation or Unl'dslichEachment of enzymes by means of column technology. 20. Die gemäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältlichen Kondensationsprodukte.20. Those obtainable according to the method of claims 1-13 Condensation products. 21. An ein geaäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältliches Kondensationsprodukt gebundenes Protein.21. Protein bound to a condensation product obtainable according to the method of claims 1-13. 22. An ein gemäss den Verfahren der Ansprüche 1-13 erhältliches Kondensationsprodukt gebundenes Enzym.22. An obtainable according to the method of claims 1-13 Enzyme bound condensation product. 5 09885/11295 09885/1129
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