DE2512396A1

DE2512396A1 - METHOD FOR CLEANING UP THE ANTIBIOTIC SUBSTANCE FR-1923

Info

Publication number: DE2512396A1
Application number: DE19752512396
Authority: DE
Inventors: Kazuyoshi Jomon; Tadaaki Komori; Masaru Kurita; Isami Nakatani; Masahiro Tsuji
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1974-03-28
Filing date: 1975-03-21
Publication date: 1975-10-02
Also published as: FR2265400B1; AU7958275A; NL7503718A; FR2265400A1; GB1441897A; CA1046052A; ES436092A1; AU500312B2

Description

Anmelder: Fujisawa Pharmaceutical Co.,Ltd.Applicant: Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd.

ITo. 3, _4-chome, Doshomachi, . Higashi-ku,ITo. 3, _4-chome, Doshomachi,. Higashi-ku,

Osaka/JapanOsaka / Japan

49 820 - Dr. T49 820 - Dr. T

Verfahren zur Reinigung der antibiotisch wirksamenProcess for cleaning the antibiotic effective

Substanz FR-1923Substance FR-1923

Die Erfindung betrifft ein neues Verfahren zur Reinigung der antibiotisch wirksamen Substanz FR-1923; sie betrifft insbesondere ein neues Verfahren zur Reinigung der antibiotisch wirksamen Substanz FR-1923 unter Verwendung eines makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes.The invention relates to a new method for purifying the antibiotic substance FR-1923; it concerns in particular, a new method of purifying the antibiotic substance FR-1923 using a macroporous, non-ionic adsorption resin.

Bei der antibiotisch wirksamen Substanz FR-1923 handelt es sich um ein bekanntes Antibiotikum, das aus der Fermentationsbrühe eines Stammes des Genus Streptomyces isoliert werden kann (vgl. z. B. die deutsche Offenlegungsschrift 2 242 699). Aus der genannten Literaturstelle sind bereits Verfahren zum Isolieren der antibiotisch wirksamen Substanz FR-1923 aus einer Fermentationsbrühe und zur Reinigung derselben unter Verwendung von Aktivkohle, eines Anionenaustauscherharzes und von DEAE-Sephadex (Handelsbezeichnung für ein Produkt der Firma Pharmacia Co.) bekannt. Diese bekannten VerfahrenThe antibiotic substance FR-1923 acts It is a well-known antibiotic that is obtained from the fermentation broth of a strain of the genus Streptomyces can be isolated (cf. e.g. German Offenlegungsschrift 2 242 699). From the cited reference are already processes for isolating the antibiotic substance FR-1923 from a fermentation broth and for purifying the same using activated carbon, an anion exchange resin and the like DEAE-Sephadex (trade name for a product from Pharmacia Co.) known. These known methods

haben bisher jedoch nicht zu zufriedenstellenden Ergebnissen in bezug auf die großtechnische Herstellung der Substanz FR-1923 geführt, weil sie verhältnismäßig viele Stufen zum Isolieren und Reinigen der Substanz FR-1923 umfassen, so daß die Gesamtausbeute an dem gewünschten Antibiotikum verhältnismäßig schlecht ist.However, so far have not been satisfactory in terms of the large-scale production of the Substance FR-1923 listed because they are relatively many Steps to isolate and purify the substance FR-1923 include so that the overall yield of the desired Antibiotic is relatively bad.

Nach umfangreichen Untersuchungen hat die Anmelderin nun ein neues Verfahren zur Reinigung der antibiotisch wirksamen Substanz FR-1923 als eine Stufe in dem Gesamtgewinnung sverfahren gefunden, mit dessen Hilfe die Substanz FR-1923 in höherer Ausbeute als nach den bekannten Verfahren erhalten werden kann. Dieses neue Verfahren ist einfacher und bequemer in der praktischen Durchführung und bei der Anwendung in großtechnischem Maßstabe wirtschaftlicher als die bekannten Verfahren, weil das dabei verbrauchte Harz für die Wiederverwendung regeneriert werden kann.After extensive investigations, the applicant now has a new method for cleaning the antibiotically effective Substance FR-1923 found as a step in the overall recovery process by which the substance FR-1923 in higher yield than can be obtained by the known processes. This new procedure is easier and more convenient to carry out in practice and more economical to use on an industrial scale than the known methods, because the resin used is regenerated for reuse can be.

Ziel der vorliegenden Erfindung ist es dahe^ ein neues Verfahren zum Reinigen der antibiotisch wirksamen Substanz FR-1923 unter Verwendung eines makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes anzugeben. Ziel der Erfindung ist es insbesondere,ein neues Verfahren zur Reinigung der Substanz FR-1923 anzugeben, bei dem die Substanz FR-1923 in höherer Ausbeute als bei den bekannten Verfahren erhalten wird. Ziel der Erfindung ist es ferner_s ein einfacheres, bequemeres bzw. zweckmäßigeres und wirtschaftlicheres Verfahren zur Reinigung der antibiotisch wirksamen Substanz FR-1923 anzugeben.The aim of the present invention is therefore to provide a new method for cleaning the antibiotic substance FR-1923 using a macroporous, non-ionic adsorption resin. The aim of the invention is in particular to provide a new method for purifying the substance FR-1923, in which the substance FR-1923 is obtained in a higher yield than in the known methods. The aim of the invention, it is _s to provide a simpler, more convenient and more convenient and economical process for the purification of the antibiotic substance FR-1923rd

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Gegenstand der Erfindung ist ein neues Verfahren zur Reinigung der antibiotisch wirksamen Substanz FR-1923, bei dem ein makroporöses, nicht-ionisbhes Adsorptionsharz verwendet wird und das die folgenden Alternativen umfaßt:The invention relates to a new method for purifying the antibiotic substance FR-1923, which uses a macroporous, non-ionic adsorbent resin and has the following alternatives includes:

Bei einer bevorzugten Ausführungsform wird eine die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltende wässrige Lösung mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz in Berührung gebracht, danach wird die adsorbierte Substanz FR-1923 beispielsweise mit einem hydrophilen Lösungsmittelsystem eluiert {diese Variante wird nachfolgend als Methode A bezeichnet).In a preferred embodiment, one becomes the substance FR-1923 together with impurities containing aqueous solution with a macroporous, non-ionic Adsorption resin brought into contact, then the adsorbed substance FR-1923 is for example with a hydrophilic solvent system eluted {this variant hereinafter referred to as method A).

bei einer anderen bevorzugten Ausführung&rm wird eine die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltende wässrige Lösung mit einem mit der Substanz FR-1923 gesättigten makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz in Berührung gebracht, wobei die Verunreinigungen adsorbiert werden, und die Substanz FR-1923 wird aus der durchlaufenden Lösung gewonnen (diese Ausführungsform wird nachfolgend als Methode B bezeichnet).in another preferred embodiment & rm a substance FR-1923 together containing impurity aqueous solution is contacted with a with the substance FR-1923 saturated macroporous non-ionic adsorption resin in contact, wherein the impurities are adsorbed, and the substance FR-1923 is obtained from the solution passing through (this embodiment is hereinafter referred to as method B).

Die vorstehend beschriebenen bevorzugten Ausführungsformen werden nachfolgend näher erläutert.The preferred embodiments described above are explained in more detail below.

Methode AMethod a

Bei der Methode A (Ausführungsform A) der Erfindung handelt es sich um.ein Verfahren zur Reinigung der SubstanzMethod A (embodiment A) of the invention is it is a method of cleaning the substance

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FR-1923, bei dem eine die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltende wässrige Lösung mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz in Berührung gebracht und anschließend die adsorbierte Substanz FR-1923 beispielsweise mit einem hydrophilen Lösungsmittelsystem eluiert wird.FR-1923, in which one the substance FR-1923 together with Aqueous solution containing impurities in contact with a macroporous, non-ionic adsorption resin brought and then the adsorbed substance FR-1923, for example with a hydrophilic solvent system is eluted.

Bei dem erfindungsgemäß verwendeten makroporösen, nichtionischen Adsorptionsharz handelt es sich beispielsweise um ein vernetztes Harz mit einer aromatischen Grundstruktur. Zu bevorzugten Harzen gehören mit Divinylbenzol vernetzte Styrolpolymerisate. Beispiele für solche Harze sind Amberlite XAD-I, XAD-2, XAD-4, XAD-7 und XAD-8 (Handelsbezeichnungen für Produkte der Firma Rohm & Haas Co.), Diaion HP 10, HP 20, HP 30, HP 40 und HP 50 (Handelsbezeichnungen für Produkte der Firma Mitsubishi Kasei Co., Ltd) und Hitachigel Nr. 3010 (Handelsbezeichnung für ein Produkt der Firma Nissei Sangyo Co., Ltd.).The macroporous, nonionic adsorption resin used according to the invention is, for example a cross-linked resin with an aromatic basic structure. Preferred resins include divinylbenzene crosslinked Styrene polymers. Examples of such resins are Amberlite XAD-I, XAD-2, XAD-4, XAD-7 and XAD-8 (trade names for products from Rohm & Haas Co.), Diaion HP 10, HP 20, HP 30, HP 40 and HP 50 (trade names for Mitsubishi Kasei Co., Ltd products) and Hitachigel No. 3010 (trade name for a Product of Nissei Sangyo Co., Ltd.).

Das Verfahren zur Reinigung der Substanz FR-1923 unter Verwendung eines makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes nach der Methode A der Erfindung ist auf jede beliebige wässrige Lösung anwendbar, welche die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthält. Beispiele für solche Lösungen sind das Filtrat einer Kulturbrühe, die durch Züchten von die Substanz FR-1923 bildenden Mikroorganismen in einem Nährmedium hergestellt worden ist, und eine vorher extrahierte Kulturlösung sowie eine wässrige Lösung, die ein die Substanz FR-1923 enthaltendes rohes Feststoffmaterial enthält (z. B. ein die SubstanzThe procedure for purifying the substance FR-1923 under Use of a macroporous, non-ionic adsorption resin according to method A of the invention is applicable to any aqueous solution containing the substance Contains FR-1923 along with impurities. Examples for such solutions are the filtrate of a culture broth obtained by culturing microorganisms producing substance FR-1923 has been prepared in a nutrient medium, and a previously extracted culture solution and an aqueous one Solution containing a raw solid material containing substance FR-1923 (e.g. a substance

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FR-1923 enthaltendes rohes Pulver oder rohe Kristalle, welche die Substanz FR-1923 enthalten), das aus einem Filtrat der Kulturbrühe au^konventioneile Weise zuerst isoliert und bis zu einem gewissen Grade gereinigt wird, beispielsweise durch Behandlung des Filtrats mit einem geeigneten Extraktionslösungsmittel und/oder durch Adsorption an Aktivkohle.Raw powder or raw crystals containing FR-1923, which contain the substance FR-1923), which is first obtained in a conventional manner from a filtrate of the culture broth is isolated and purified to some extent, for example by treating the filtrate with a suitable extraction solvent and / or by adsorption on activated carbon.

Bei Verwendung eines Kulturfiltrats ist es vorteilhaft, eine gegebenenfalls vorher extrahierte Kulturlösung zu verwenden, die auf übliche Weise, vorzugsweise unter Verwendung einer ein Harzbett enthaltenden Säule, mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz in Berührung gebracht wird.When using a culture filtrate, it is advantageous to to use an optionally previously extracted culture solution, which in the usual way, preferably under Use of a column containing a resin bed, with a macroporous, non-ionic adsorption resin in Is brought into contact.

Die Behandlung der die Substanz FR-1923 in Mischung mit Verunreinigungen enthaltenden wässrigen Lösung mit dem nicht-ionischen Adsorptionsharz wird zweckmäßig bei einem pH-Wert von 2 bis 7, vorzugsweise von 4 bis 6, durchgeführt. Die gewünschten sauren pH-Werte können durch Verwendung irgendeiner gewünschten Säure, beispielsweise einer organischen Säure, wie Oxalsäure, oder vorzugsweise einer Mineralsäure, wie Chlorwasserstoffsäure, Phosphorsäure oder Schwefelsäure, erzielt werden.Treatment of the substance FR-1923 mixed with An aqueous solution containing impurities with the nonionic adsorption resin is useful in a pH from 2 to 7, preferably from 4 to 6, carried out. The desired acidic pH levels can be achieved by using any desired acid, for example an organic acid such as oxalic acid, or preferably a mineral acid such as hydrochloric acid, phosphoric acid or sulfuric acid.

Außerdem wird die Behandlung der die Substanz FR-1923 in Mischung mit Verunreinigungen enthaltenden wässrigen Lösung mit dem nicht-ionischen Adsorptionsharz zweckmäßig dann durchgeführt, wenn es sich bei den Verunreinigungen um ein anorganisches Salz, ζ. B. Natriumchlorid, Natrium-It will also treat the substance FR-1923 in a mixture with impurities containing aqueous solution with the nonionic adsorption resin expedient carried out if the impurity is an inorganic salt, ζ. B. Sodium Chloride, Sodium

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- 6 biphosphat oder Dinatriumorthophosphat, handelt.- 6 biphosphate or disodium orthophosphate.

Bei dieser Methode wird die die Substanz FR-1923 in Mischung mit Verunreinigungen enthaltende wässrige Lösung mit dem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz auf übliche Weise in Berührung gebracht, um die Substanz FR-1923 daran zu adsorbieren, beispielsweise durch diskontinuierliche (ansatzweise durchgeführte) oder Säulenbehandlung, wonach die adsorbierte Substanz FR-1923 beispielsweise unter Verwendung eines hydrophilen Lösungsmittelsystems aus dem Harz eluiert wird.In this method, the aqueous solution containing the substance FR-1923 mixed with impurities Solution brought into contact with the macroporous, non-ionic adsorption resin in the usual way in order to obtain the To adsorb substance FR-1923 on it, for example by discontinuous (batchwise) or Column treatment, after which the adsorbed substance FR-1923, for example, using a hydrophilic solvent system is eluted from the resin.

Beispiele für hydrophile Lösungsmittelsysteme, die zum Eluieren der Substanz FR-1923 aus dem Harz verwendet werden können, sind ein niederes Dialkylketon (z. B. Aceton und Methyläthylketon) und ein niederes Alkanol(z. B. Methanol, Äthanol, n-Propanol, iso-Propanol, n-Butanol und Isobutanol). Es können auch Gemische aus dem niederen, oben genannten Dialkylketon und dem niederen Alkanol verwendet werden. Außerdem können Mischungen aus Wasser oder einem niederen Alkylester einer niederen Alkansäure, z. B. Methylacetat, Äthylacetat und Butylacetat, und dem oben angegebenen niederen Alkanol oder niederen Dialkylketon verwendet werden. Außerdem können ein großes Volumen Wasser und eine wässrige alkalische Lösung (mit einem pH-Wert von vorzugsweise 8 bis 13) verwendet werden.Examples of hydrophilic solvent systems used to elute substance FR-1923 from the resin are a lower dialkyl ketone (e.g. acetone and methyl ethyl ketone) and a lower alkanol (e.g. Methanol, ethanol, n-propanol, iso-propanol, n-butanol and isobutanol). It is also possible to use mixtures of the lower dialkyl ketone mentioned above and the lower alkanol will. In addition, mixtures of water or a lower alkyl ester of a lower alkanoic acid, e.g. B. methyl acetate, ethyl acetate and butyl acetate, and the lower alkanol or lower dialkyl ketone indicated above be used. In addition, a large volume of water and an aqueous alkaline solution (with a pH of preferably 8 to 13) can be used.

Das dabei erhaltene Eluat wird auf übliche Weise, beispielsweise durch Einengen, durch pH-Wert-Einstellung, Lyophilisieren und Umkristallisieren,weiter-verarbeitet,The eluate obtained in this way is in the usual way, for example by concentration, by pH adjustment, lyophilization and recrystallization, further-processed,

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wobei man die kristalline Substanz FR-1923 erhält, die häufig für die Verwendung als Arzneimittel genügend rein ist.obtaining the crystalline substance FR-1923 which is often sufficiently pure for use as a medicinal product.

Methode BMethod B.

Bei der Methode B (Ausführungsform B) der Erfindung handelt es sich um ein Verfahren zur Reinigung der Substanz FR-1923, bei dem eine die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltende wässrige Lösung mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz, das vorher mit der Substanz FR-1923 gesättigt worden ist, in Berührung gebracht wird, so daß die Verunreinigungen daran adsorbiert werden, bei dem die Substanz FR-1923 aus der durchlaufenden Lösung gewonnen wird.Method B (embodiment B) of the invention is a method for purifying the substance FR-1923, in which an aqueous solution containing the substance FR-1923 together with impurities with a macroporous, non-ionic adsorption resin previously saturated with substance FR-1923 is brought so that the impurities are adsorbed thereon, in which the substance FR-1923 from the passing solution is obtained.

Diese Methode beruht auf der Tatsache, daß das Adsorptionsvermögen eines makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes gegenüber der Substanz FR-1923 geringer ist als gegenüber spezifischen Verunreinigungen, wie färbenden Materialien, die aus der Fermentationsbrühe stammen, und dem Isomeren der Substanz FR-1923. Durch Ausnutzung der unterschiedlichen Affinität des makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes gegenüber der Substanz FR-1923 und den spezifischen Verunreinigungen werden die spezifischen Verunreinigungen von dem Harz, das mit der Substanz FR-1923 gesättigt ist, aus einer die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltenden wässrigen Lösung selektiv adsorbiert und die Substanz FR-1923 wird aus der durchgelaufenen Lösung gewonnen.This method is based on the fact that the adsorption capacity of a macroporous, nonionic adsorption resin against the substance FR-1923 is lower than to specific impurities such as coloring materials originating from the fermentation broth, and the isomer of substance FR-1923. By taking advantage of the different affinity of the macroporous, non-ionic Adsorption resin against the substance FR-1923 and the specific impurities become the specific Impurities from the resin saturated with the substance FR-1923 from one of the substance FR-1923 is selectively adsorbed together with impurities-containing aqueous solution and the substance FR-1923 becomes obtained from the solution that has passed through.

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Das Adsorptionsvermögen eines makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes gegenüber der Substanz FR-1923 variiert mit dem Zustand der die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltenden wässrigen Lösung und der Art des verwendeten makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes. Nachfolgend sind einige beispielhafte Werte für das Adsorptionsvermögen eines makroporösen, nicht=· ionischen Adsorptionsharzes gegenüber der Substanz FR-1923 angegeben. Die nachfolgend angegebenen Daten wurden in der Weise erhalten, daß man eine 0,2 M Phosphatpufferlösung (pH 4), welche die Substanz FR-1923 enthielt, mit dem Harz in Berührung brachte.The adsorption capacity of a macroporous, non-ionic adsorption resin towards the substance FR-1923 varies with the state of the aqueous solution containing the substance FR-1923 together with impurities and the type of macroporous used, non-ionic Adsorption resin. Below are some exemplary values for the adsorption capacity of a macroporous, not = ionic adsorption resin against the substance FR-1923 indicated. The data given below was taken from obtained by adding a 0.2 M phosphate buffer solution (pH 4) which contained the substance FR-1923, brought into contact with the resin.

Beispiele für Werte des Adsorptionsvermögens gegenüber _ «....der_Substanz_FR-1923__Examples of values of the adsorption capacity for _ «.... der_Substanz_FR-1923__

etwa 10 g/l t Diaion HP 20
etwa 18 g/l t Amberlite XAD-4about 10 g / l t Diaion HP 20
about 18 g / l t of Amberlite XAD-4

Das mit der Substanz FR-1923 gesättigte makroporöse, nicht-ionische Adsorptionsharz wird hergestellt, in-dem man eine die Substanz FR-1923 enthaltende wässrige Lösung mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz in Berührung bringt, wobei die Lösung vorzugsweise neutral oder schwach alkalisch ist.The macroporous, non-ionic adsorption resin saturated with the substance FR-1923 is produced in the an aqueous solution containing the substance FR-1923 with a macroporous, non-ionic adsorption resin brings into contact, wherein the solution is preferably neutral or weakly alkaline.

Beispiel« für makroporöse, nicht-ionische Adsorptionsharze, die bei dieser Methode verwendet werden können, sind die gleichen, wie sie oben in bezug auf die Methode A angegeben worden sind.Example «of macroporous, non-ionic adsorption resins that can be used in this method, are the same as given above with respect to Method A.

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Das Verfahren zur Reinigung der Substanz FR-1923 unter Verwendung eines makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes nach der Methode B der Erfindung ist ebenso wie die vorstehend beschriebene Methode A auf jede beliebige wässrige Lösung anwendbar, welche die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthält; geeignete Beispiele sind die gleichen wie sie oben in Verbindung mit der Methode A angegeben worden sind. Die Methode B liefert jedoch bessere Ergebnisse insbesondere dann, wenn in der wässrigen Lösung als Verunreinigungen färbende Materialien oder das Isomere der Substanz FR-1923 enthalten sind.The procedure for purifying the substance FR-1923 under Use of a macroporous, non-ionic adsorption resin according to method B of the invention is also possible like method A described above, applicable to any aqueous solution containing the substance FR-1923 contains along with impurities; suitable examples are the same as those in connection above with method A. Method B, however, gives better results, especially if if in the aqueous solution as impurities coloring materials or the isomer of the substance FR-1923 are included.

Wenn eine die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltende wässrige Lösung mit dem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz, das mit der Substanz FR-1923 gesättigt worden ist, in Berührung gebracht wird, kann die Substanz FR-1923 nicht mehr an dem Harz adsorbiert werden und daher werden die Verunreinigungen selektiv daran adsorbiert.If an aqueous solution containing the substance FR-1923 together with impurities is mixed with the macroporous, non-ionic adsorbent resin associated with the substance FR-1923 has been saturated, is brought into contact, the substance FR-1923 can no longer be adsorbed on the resin and therefore the impurities are selectively adsorbed thereon.

Das Volumen des bei dieser Methode des erfindungsgemäßen Verfahrens verwendeten makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharzes variiert mit dem Gehalt der die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltenden wässrigen Lösung an Substanz FR-1923 und mit der Art des verwendeten Harzes und es kann im allgemeinen 1 H auf 100 bis 500 g der Substanz FR-1923 in der wässrigen Lösung betragen.The volume of the macroporous, non-ionic adsorption resin used in this method of the process according to the invention varies with the content of substance FR-1923 in the aqueous solution containing substance FR-1923 together with impurities and with the type of resin used and it can generally be 1 H per 100 to 500 g of the substance FR-1923 in the aqueous solution.

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- ίο -- ίο -

Die Substanz FR-1923 wird aus der durchgelaufenen Lösung gewonnen, die erhalten wird, wenn man eine die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltende wässrige Lösung mit einem in der Substanz FR-1923 gesättigten raakroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz in Berührung bringt. Die Gewinnung kann auf übliche Weise, beispielsweise durch pH-Wert-Einstellung, durch Behandlung mit Aktivkohle, durch Einengen, durch Lyophilisieren und Umkristallisieren erfolgen, wobei man die Substanz FR-1923 in kristalliner Form erhält, die häufig für die Verwendung als Arzneimittel ausreichend rein ist.The substance FR-1923 is obtained from the solution that has passed through obtained by using an aqueous solution containing the substance FR-1923 together with impurities Solution in contact with a macroporous, non-ionic adsorption resin which is saturated in substance FR-1923 brings. Can be obtained in the usual way, for example by adjusting the pH, by treatment with Activated charcoal can be carried out by concentration, lyophilization and recrystallization, whereby the substance FR-1923 in crystalline form, which is often sufficiently pure for use as a medicinal product.

Außerdem wird eine die Substanz FR-1923 zusammen mit Verunreinigungen enthaltende wässrige Lösung mit einem mit der Substanz FR-1923 gesättigten makroporösen, nichtionischen Adsorptionsharz in Berührung gebracht, wobei die Verunreinigungen adsorbiert werden, anschließend wird die Säule mit einem geringen Volumen Wasser gewaschen, wobei man die in den Hohlräumen zwischen dem Harz in der Säule verbleibende Substanz FR-1923 erhält.In addition, an aqueous solution containing the substance FR-1923 together with impurities with a brought into contact with the substance FR-1923 saturated macroporous, nonionic adsorption resin, wherein the impurities are adsorbed, then the column is washed with a small volume of water, whereby FR-1923 substance remaining in the voids between the resin in the column is obtained.

Das verbrauchte Harz kann auf übliche Weise, beispielweise durch Waschen des Harzes mit einer verhältnismäßig stark alkalischen wässrigen Lösung oder einer alkalischen wässrigen-alkoholischen Lösung,regeneriert werden.The used resin can be removed in the usual way, for example by washing the resin with a relatively strong alkaline aqueous solution or an alkaline aqueous-alcoholic Solution, to be regenerated.

Die Methode B ist der Methode A überlegen und in ihrer Durchführung im großtechnischen Maßstäbe bequemer und .wirtschaftlicher, insbesondere in bezug auf die folgenden Punkte:Method B is superior to method A and is more convenient to carry out on an industrial scale . more economical, in particular with regard to the following points:

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- li -- li -

Bei der Methode B ist es nicht erforderlich, die Substanz FR-1923 aus dem Harz zu eluieren_>und das Volumen des für die Reinigung bei der Methode B verwendeten Harzes beträgt weniger als 10 % im Vergleich zu dem bei der Methode A verwendeten Volumen, obgleich dLe Ausbeute und die Reinheit der Substanz FR-1923 bei beiden Methoden praktisch gleich sind.In method B it is not necessary to elute substance FR-1923 from the resin _> and the volume of the resin used for purification in method B is less than 10% compared to the volume used in method A, although The yield and purity of the substance FR-1923 are practically the same for both methods.

Die nachfolgend beschriebenen Tests erläutern den Vergleich zwischen der Anwendung der Mähöde A und der Methode B in dem erfindungsgemäßen Verfahren zur Reinigung der Substanz FR-1923.The tests described below illustrate the comparison between the application of Mähöde A and method B in the Process according to the invention for purifying the substance FR-1923.

Die Vergleichstests wurden unter Verwendung der gleichen rohen Kristalle der Substanz FR-1923 und unter Verwendung des gleichen Harzes in dem gleichen Volumen bei beiden Methoden durchgeführt, wobei jedoch das Volumen der Rohkristalle der Substanz FR-1923 bei der Methode A innerhalb des Adsorptionsvermögens des Harzes für die Substanz FR-1923 lag, während das Volumen der rohen Kristalle der Substanz FR-1923, das bei der Methode B angewendet wurde, etwa das 20-fache des bei der Methode A angewendeten betrug. The comparative tests were carried out using the same raw crystals of substance FR-1923 and using of the same resin in the same volume in both methods, but with the same volume as the raw crystals of substance FR-1923 in method A within the adsorption capacity of the resin for the substance FR-1923 was, while the volume of the raw crystals of substance FR-1923 used in method B was about 20 times that used in Method A.

Testtest

I. Adsorptionsvermögen von Diaion HP 20 gegenüber der Substanz FR-1923I. Adsorption capacity of Diaion HP 20 towards substance FR-1923

1,4 g des Natriumsalzes der Substanz FR-1923 (Reinheit1.4 g of the sodium salt of the substance FR-1923 (purity

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95 %) wurden in 1 £ einer 0,2 M Phosphatpufferlösung (pH 4,0) gelöst. Die Lösung wurde mit 5n Chlorwasserstoff säure unter Rühren auf pH 4,0 eingestellt. Die Lösung (Konzentration der Substanz FR-1923: 1310 r/ml) wurde durch eine mit 100 ml Diaion HP 20 gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 30 mm, Füllhöhe des Harzes: 160 mm) mit einer Geschwindigkeit von SV=I CSV¹¹= Abkürzung für "Raumgeschwindigkeit") laufen gelassen. Die durchgelaufene Lösung wurde in Portionen zu 100 ml gesammelt. Der Gehalt an Substanz FR-1923 in der durchgelaufenen Lösung wurde durch biologische Prüfung unter Verwendung von Pseudomonas aeruginosa bestimmt. Das Adsorptionsvermögen von Diaion HP 20 gegenüber der Substanz FR-1923 wurde zu dem Zeitpunkt errechnet, als die Konzentration der Substanz FR-1923 in der durchgelaufenen Lösung den gleichen Wert erreicht hatte wie in der Ausgangslösung (1310 r/ml) wobei ein Wert von 10,4 g/l gefunden wurde.95%) were dissolved in 1 l of a 0.2 M phosphate buffer solution (pH 4.0). The solution was adjusted to pH 4.0 with 5N hydrochloric acid with stirring. The solution (concentration of the substance FR-1923: 1310 r / ml) was passed through a column filled with 100 ml of Diaion HP 20 (internal diameter of the column: 30 mm, filling height of the resin: 160 mm) at a rate of SV = I CSV ¹¹ = Abbreviation for "space velocity"). The passed solution was collected in 100 ml portions. The content of substance FR-1923 in the passed solution was determined by biological testing using Pseudomonas aeruginosa. The adsorption capacity of Diaion HP 20 for the substance FR-1923 was calculated at the point in time when the concentration of the substance FR-1923 in the solution that had passed through had reached the same value as in the starting solution (1310 r / ml) with a value of 10 , 4 g / l was found.

II. Reinigung der Substanz FR-1923 unter Anwendung der Methode AII. Purification of substance FR-1923 using method A

9,5 g rohe Kristalle der Substanz FR-1923 (Gehalt an Substanz FR-1923: 7,9 g) wurden in 2,5 Γ Wasser suspendiert. Die Suspension wurde mit einer wässrigen 6n Natriumhydroxidlösung auf pH 7,5 eingestellt und darin gelöst. Außerdem wurde die Lösung mit 6n Chlorwasserstoffsäure auf pH 6,0 eingestellt und zu der Lösung wurden 150 g Natriumchlorid und Wasser zugegeben, um das Volumen der Lösung auf 3 1 zu bringen. Die Lösung wurde durch9.5 g of crude crystals of substance FR-1923 (content of substance FR-1923: 7.9 g) were suspended in 2.5 water. The suspension was adjusted to pH 7.5 with an aqueous 6N sodium hydroxide solution and dissolved therein. In addition, the solution was adjusted to pH 6.0 with 6N hydrochloric acid and became the solution 150 g of sodium chloride and water were added to bring the volume of the solution to 3 liters. The solution was through

eine mit 1 £ Diaion HP 20 gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 77 mm, Füllhöhe des Harzes: 230 mm) mit einer Geschwindigkeit von SV=I laufengelassen. Die adsorbierte Substanz FR-1923 wurde nach dem Waschen der Säule mit Wasser mit 30%igem wässrigen Methanol eluiert. Die aktiven Fraktionen ( 1950 ml) wurden gesammelt und unter vermindertem Druck eingeengt. Das Konzentrat wurde unter Rühren auf pH 2,2 eingestellt und danach in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei Kristalle erhalten wurden. Die Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und getrocknet. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle angegeben.a column filled with £ 1 Diaion HP 20 (internal diameter of the column: 77 mm, filling height of the resin: 230 mm) run at a speed of SV = I. The adsorbed substance FR-1923 became after washing the column is eluted with water containing 30% aqueous methanol. The active fractions (1950 ml) were collected and concentrated under reduced pressure. The concentrate was adjusted to pH 2.2 with stirring and then left to stand in a refrigerator to obtain crystals. The crystals were collected by filtration collected and dried. The results are given in the table below.

III. Reinigung der Substanz FR-1923 unter Anwendung der Methode BIII. Purification of the substance FR-1923 using the Method B.

200 g rohe Kristalle der Substanz FR-1923 (Gehalt an Substanz FR-1923: 168 g), bei denen es sich um die gleichen Kristalle wie in dem obigen Test II handelte, wurden in 2 1 Wasser suspendiert. Die Suspension wurde mit einer wässrigen Natriumhydroxidlösung auf pH 7,2 eingestellt und darin gelöst. Die Lösung wurde durch eine mit 1 £ Diaion HP 20, das mit der Substanz FR-1923 gesättigt worden war, gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 77 mm, Füllhöhe des Harzes: 230 mm) mit einer Geschwindigkeit von SV=I laufengelassen. Es wurden 4 1 Wasser durch die Säule geschickt. 4500 ml aktive Fraktionen wurden aus der durchgelaufenen Lösung gesammelt und zu der dabei erhaltenen Lösung wurde Wasser zugegeben, um das Volumen der Lösung auf 16 1 zu bringen. Die Lösung wurde200 g raw crystals of the substance FR-1923 (content of Substance FR-1923: 168 g), which were the same crystals as in Test II above suspended in 2 l of water. The suspension was adjusted to pH 7.2 with an aqueous sodium hydroxide solution and dissolved in it. The solution was through a 1 £ Diaion HP 20, which was saturated with the substance FR-1923 filled column (inside diameter of column: 77 mm, filling height of resin: 230 mm) at one speed run from SV = I. 4 liters of water were passed through the column. 4500 ml of active fractions were collected from the leaked solution, and water was added to the resulting solution to remove the Bring the volume of the solution to 16 liters. The solution was

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unter Rühren auf pH 2,5 eingestellt und dann über Nacht in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei Kristalle erhalten wurden. Die Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und getrocknet. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle angegeben.adjusted to pH 2.5 with stirring and then left to stand in a refrigerator overnight to obtain crystals became. The crystals were collected by filtration and dried. The results are in the given in the following table.

Methode AMethod a Methode BMethod B. 9,5g/l£
Harz9.5g / l £
resin 187g/l£
Harz187g / l £
resin 7,2 g7.2 g 160 g160 g 92,7 %92.7% 98,4 % 98.4 %

Adsorptionsvermögen des Harzes für die Behandlung von rohen Kristallen der Substanz FR-1923 Ausbeute an Kristallen Reinheit der Kristalle Reinheit-berechneteResin adsorption capacity for raw crystal treatment of the substance FR-1923 Yield of crystals Purity of crystals purity-calculated

Ausbeute der SubstanzYield of the substance

FR-1923 84,5 % 93,6 %FR-1923 84.5% 93.6%

Die vorstehend wiedergegebenen Ergebnisse zeigen, daß das Volumen der nach der Methode B behandelten Substanz FR-1923 etwa das 20-fache desjenigen der nach der Methode A -behandelten betrug, obgleich die Reinheit und die Ausbeute der Substanz FR-1923 bei beiden Methoden fast gleich waren,The above results show that the volume of the FR-1923 about 20 times that of the method A treated, although the purity and the yield of the substance FR-1923 were almost the same for both methods,

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert, ohne jedoch darauf beschränkt zu sein.The invention is illustrated in more detail by the following examples, without, however, being restricted thereto.

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example 1

Zu einer durch Züchten von Nocardia uniformis var. tsuyamanensis ATCC 21806 bei 30°C für eine Zeitraum von 120 Stunden in 150 1 eines 3 Gew.% Glycerin, 2 Gew.% Baumwollsamenmehl, 2 Gew.% getrocknete Hefe, 2,18 Gew.% Kaiiumdihydrοgenphosphat, 1,43 Gew.% Dinatriumhydroganphosphatdodecahydrat und 0,5 Gew.% Magnesiumchloridheptahydrat enthaltenden Nährmediums hergestellten Kulturbrühe wurden 6 % Radiolite (Handelsbezeichnung für ein Filterhilf smaterial der Firma Showa Kagaku Kogyo Co, Ltd. ) zugegeben und dann wurde die Mischung filtriert. 3 1 des dabei erhaltenen Filtrats (Gehalt an der Substanz FR-1923: 3030 mg) wurden durch eine mit einem makroporösen,nichtionischen Adsorptionsharz, Diaion HP 20_tgefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 8 cm, Füllhöhe des Harzes: 26 cm) mit einer Geschwindigkeit von SV=I laufengelassen. Die Säule wurde mit Wasser gewaschen, danach wurde die Substanz FR-1923 mit einer 20%igen wässrigen Methanollösung eluiert. 3 1 des dabei erhaltenen Eluats wurden unter vermindertem Druck eingeengt und dann auf pH 2,5 eingestellt. Die Lösung wurde in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei man 2490 mg des Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.To one obtained by growing Nocardia uniformis var. Tsuyamanensis ATCC 21806 at 30 ° C for a period of 120 hours in 150 l of 3 wt.% Glycerol, 2 wt. 6% Radiolite (trade name for a filter aid material from Showa Kagaku Kogyo Co, Ltd.) was added and the mixture was then filtered. 3 l of the resulting filtrate (content of the substance FR-1923: 3030 mg) were passed through a _{column filled with a macroporous, nonionic adsorption resin, Diaion HP 20 t} (internal diameter of the column: 8 cm, filling height of the resin: 26 cm) run at a speed of SV = I. The column was washed with water, after which the substance FR-1923 was eluted with a 20% aqueous methanol solution. 3 l of the eluate obtained in this way were concentrated under reduced pressure and then adjusted to pH 2.5. The solution was left to stand in a refrigerator, whereby 2490 mg of FR-1923 substance was obtained in the form of colorless crystals.

Example 2

Eine Kulturbrühe die im wesentlichen auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 hergestellt worden war, wurdeA culture broth prepared in substantially the same manner as in Example 1 was prepared

509840/0966 "~509840/0966 "~

mit verdünnter Schwefelsäure auf pH 4,0 eingestellt, dann wurde die Kulturbrühe filtriert. Zu dem dabei erhaltenen Filtrat wurden 6 % Radiolite zugegeben ydaiach wurde die Mischung filtriert. 900 ml des dabei erhaltenen Filtrats (Gehalt an Substanz FR-1923: 774 mg) wurden durch eine mit einem makroporösen,nicht-ionischen Adsorptionsharz, Amberlite XAD-4jgefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule 3,6 cm, Füllhöhe des Harzes: 30 cm) mit einer Geschwindigkeit SV=I laufengelassen. Nachdem die Säule mit Wasser gewaschen worden war, wurde die Substanz FR 1923 mit 20%igem wässrigem Aceton eluiert. 600 ml des dabei erhaltenen Eluats wurden unter vermindertem Druck eingeengt, mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,0 eingestellt und dann in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei man 365 mg der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.adjusted to pH 4.0 with dilute sulfuric acid, then the culture broth was filtered. 6% radiolite was added to the filtrate obtained in this way, and then the Mixture filtered. 900 ml of the resulting filtrate (content of substance FR-1923: 774 mg) were through a column filled with a macroporous, non-ionic adsorption resin, Amberlite XAD-4j (inner diameter of Column 3.6 cm, filling height of the resin: 30 cm) at a speed SV = I. After the pillar was washed with water, the substance FR 1923 was eluted with 20% aqueous acetone. 600 ml des the resulting eluate was concentrated under reduced pressure with dilute hydrochloric acid Adjusted pH 2.0 and then left to stand in a refrigerator, giving 365 mg of the substance FR-1923 in the form obtained from colorless crystals.

Example 3

300 ml eines Kulturfiltrats (pH 4,0), das im wesentlichen auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 hergestellt worden war, wurden durch eine mit einem makroporösen, nichtionischen Adsorptionsharz, Diaion HP20, gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 30 mm, Füllhöhe des Harzes: 160 mm) mit einer Geschwindigkeit von SV=I laufengelassen. Die Säule wurde mit Wasser gewaschen, danach wurde die Substanz FR-1923 mit einer wässrigen Natriumhydroxidlösung (pH 12j0) eluiert. 600 ml der dabei erhaltenen aktiven Fraktion wurden gesammelt und unter vermindertem Druck auf 15 ml eingeengt» Das Konzentrat wurde mit 6n Chlor-300 ml of a culture filtrate (pH 4.0) which is essentially prepared in the same manner as in Example 1 were passed through a column filled with a macroporous nonionic adsorbent resin, Diaion HP20 (Inner diameter of the column: 30 mm, filling height of the resin: 160 mm) at a speed of SV = I. The column was washed with water, after which FR-1923 was treated with an aqueous sodium hydroxide solution (pH 12j0) eluted. 600 ml of the thereby obtained active Fraction were collected and concentrated under reduced pressure to 15 ml. The concentrate was treated with 6N chlorine

wasserstoffsäure unter Rühren auf pH 2,5 eingestellt, danach wurde die Lösung 24 Stunden lang in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei man 360 mg der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.hydrofluoric acid adjusted to pH 2.5 with stirring, thereafter, the solution was left to stand in a refrigerator for 24 hours, leaving 360 mg of the substance FR-1923 in the form of colorless crystals.

Example 4

20 g eines groben Pulvers der Substanz FR-1923 (Gehalt an Substanz FR-1923: 10,2 g) wurden in 6,2 1 Wasser suspendiert. Die Suspension wurde mit einer 6n wässrigen Natriumhydroxidlösung auf pH 8,1 eingestellt, danach wurden 50 g Natriumchlorid zu der Lösung zugegeben. Die Lösung wurde durch eine mit einem makroporösen, nichtionischen Adsorptionsharz, Diaion HP 20, gefüllte Säule(lnnendurchmesser der Säule: 87 mm, Füllhöhe des Harzes: 520 mm) mit einer Geschwindigkeit von SV=⁸I laufengelassen. Die Säule wurde mit Wasser gewaschen, danach wurde die Substanz FR-1923 mit einer 30%igen wässrigen Methanollösung eluiert. Die erhaltenen aktiven Fraktionen (4,48 1) wurden gesammelt und dann unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 400 ml eingeengt. Das Konzentrat wurde mit 6n Chlorwasserstoffsäure auf pH 2,5 eingestellt und dann über Nacht in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei 10,0 g der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhalten wurden.20 g of a coarse powder of the substance FR-1923 (content of substance FR-1923: 10.2 g) were suspended in 6.2 l of water. The suspension was adjusted to pH 8.1 with a 6N aqueous sodium hydroxide solution, after which 50 g of sodium chloride were added to the solution. The solution was passed through a column filled with a macroporous, nonionic adsorption resin, Diaion HP 20 (internal diameter of the column: 87 mm, filling height of the resin: 520 mm) at a speed of SV = ⁸ l. The column was washed with water, after which the FR-1923 substance was eluted with a 30% methanol aqueous solution. The obtained active fractions (4.48 liters) were collected and then concentrated under reduced pressure to a volume of 400 ml. The concentrate was adjusted to pH 2.5 with 6N hydrochloric acid and then allowed to stand overnight in a refrigerator to obtain 10.0 g of FR-1923 in the form of colorless crystals.

Example 5

18 g eines rohen Pulvers der Substanz FR-1923 (Gehalt an Substanz FR-1923: 10,2 g) wurden in 360 ml Wasser sus-18 g of a raw powder of the substance FR-1923 (content of Substance FR-1923: 10.2 g) were suspended in 360 ml of water

509840/0966509840/0966

pendiert, danach wurde die Suspension mit einer wässrigen 6n Natriumhydroxidlösung auf pH 7,0 eingestellt, um sie darin zu lösen. Die Lösung wurde durch eine mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz, Amberlite XAD-8, gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 30 mm, Füllhöhe des Harzes: 160 mm), das mit der Substanz FR-1923 gesättigt war, mit einer Geschwindigkeit von SV=I laufengelassen, danach wurden 400 ml Wasser durch die Säule geschickt. 700 ml der aktiven Fraktionen wurden aus der durchgelaufenen Lösung gesammelt und dann wurde die Lösung unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 200 ml eingeengt. Das dabei erhaltene Konzentrat wurde mit 6n Chlorwasserstoffsäure unter Rühren auf pH 2,5 eingestellt, dann 24 Stunden lang in einem Kühlschrank stehen-gelassen, wobei man 10,13 g der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.suspended, then the suspension was adjusted to pH 7.0 with an aqueous 6N sodium hydroxide solution, to solve them in it. The solution was through a with a macroporous, non-ionic adsorption resin, Amberlite XAD-8, filled column (inner diameter of the column: 30 mm, filling height of the resin: 160 mm), which is connected to the Substance FR-1923 was saturated at a rate from SV = I, then 400 ml of water was passed through the column. 700 ml of the active fractions were collected from the passed solution, and then the solution was reduced in volume under reduced pressure concentrated by 200 ml. The concentrate thus obtained was dissolved with 6N hydrochloric acid with stirring pH adjusted to 2.5, then left to stand for 24 hours in a refrigerator, 10.13 g of the substance FR-1923 in the form of colorless crystals.

Example 6

18 g eines rohen Pulvers der Substanz FR-1923 (Gehalt an Substanz FR-1923ilO,2 g) wurden in 360 ml Wasser suspendiert und mit einer wässrigen 6n Natriumhydroxidlösung auf pH 7,0 eingestellt, um sie darin zu lösen. Die Lösung wurde durch eine mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz, Amberlite XAD-4, gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 30 mm, Füllhöhe des Harzes; 160 mm) das mit der Substanz FR-1923 gesättigt war, mit einer Geschwindigkeit von SV=I laufengelassen, danach wurden 540 ml Wasser durch die Säule geschickt. 900 ml der aktiven Fraktionen wurden aus der durchgelaufenen Lösung ge-18 g of a crude powder of the substance FR-1923 (content of substance FR-1923ilO, 2 g) were suspended in 360 ml of water and adjusted to pH 7.0 with a 6N aqueous sodium hydroxide solution to dissolve them therein. The solution was passed through a column (inner diameter of the column: 30 mm, filling height of the resin; 160 mm) saturated with the substance FR-1923, at a speed from SV = I, then 540 ml of water was passed through the column. 900 ml of the active Fractions were separated from the solution which had passed through

5 09840/09665 09840/0966

sammelt und dann wurde die Losung unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 350 ml eingeengt. Das dabei erhaltenen Konzentrat wurde mit 6n Chlorwasserstoffsäure unter Rühren auf pH 2,5 eingestellt und dann in einem Kühlschrank 24 Stunden lang stehengelassen, wobei man 9,41 g der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.collects and then the solution was reduced under Pressure reduced to a volume of 350 ml. The concentrate thus obtained was treated with 6N hydrochloric acid adjusted to pH 2.5 with stirring and then left to stand in a refrigerator for 24 hours, leaving 9.41 g of substance FR-1923 was obtained in the form of colorless crystals.

Example 7

19 g eines rohen Pulvers der Substanz FR-1923 (Gehalt an Substanz FR-1923: 10,7 g) wurden in 380 ml Wasser suspendiert und dann wurde die Lösung mit einer wässrigen 6n Natriumhydroxidlösung auf pH 7,0 eingestellt,um sie darin zu lösen. Die Lösung wurde durch eine mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz,Amberlite XAD-7, gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 30 mm, Füllhöhe des Harzes: 160 mm), das mit der Substanz FR-1923 gesättig; war, mit einer Geschwindigkeit von SV= 1 laufengelassen, wonach 400 ml Wasser durch die Säule geschickt wurden. 700 ml der aktiven Fraktionen wurden aus der durchgelaufenen Lösung gesammelt und danach wurde die Lösung mit δη Chlorwasserstoffsäure unter Rühren auf pH 2,5 eingestellt und in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei man 10,28 g der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.19 g of a raw powder of the substance FR-1923 (content of Substance FR-1923: 10.7 g) was suspended in 380 ml of water and then the solution was treated with an aqueous 6N Sodium hydroxide solution adjusted to pH 7.0 to keep it in it to solve. The solution was filled through one with a macroporous, nonionic adsorbent resin, Amberlite XAD-7 Column (inside diameter of column: 30 mm, filling height of resin: 160 mm) saturated with substance FR-1923; was run at a rate of SV = 1, after which 400 ml of water was passed through the column. 700 ml of the active fractions were collected from the passed solution, and thereafter the solution was mixed with δη hydrochloric acid adjusted to pH 2.5 with stirring and left to stand in a refrigerator, leaving 10.28 g of substance FR-1923 in the form of colorless crystals received.

Example 8

19,75 g eines rohen Pulvers der Substanz FR-1923 (Gehalt19.75 g of a raw powder of the substance FR-1923 (content

509840/0 966509840/0 966

an Substanz FR-1923: 17,16 g) wurden in 395 ml Wasser suspendiert und die Suspension wurde mit einer wässrigen 5n Natriumhydroxidlösung auf pH 7,5 eingestellt , um sie darin zu lösen. Die Lösung wurde durch eine mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz, Diaion HP 20, gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 30 mm, Füllhöhe des Harzes: 160 mm), das mit der Substanz FR-1923 gesättigt war, mit einer Geschwindigkeit von SV=I laufengelassen, danach wurden 400 ml Wasser durch die Säule geschickt. 600 ml der aktiven Fraktionen wurden aus der durchgelaufenen Lösung gesammelt, danach wurde die erhaltene Lösung mit 6n Chlorwasserstoffsäure unter Rühren auf pH 2,5 eingestellt und in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei man 16,8 g der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.of substance FR-1923: 17.16 g) were in 395 ml of water suspended, and the suspension was adjusted to pH 7.5 with an aqueous 5N sodium hydroxide solution to make it to solve in it. The solution was made by one containing a macroporous, non-ionic adsorption resin, Diaion HP 20, filled column (internal diameter of the column: 30 mm, filling height of the resin: 160 mm) containing the substance FR-1923 was saturated, allowed to run at a rate of SV = I, after which 400 ml of water was passed through the Pillar sent. 600 ml of the active fractions were collected from the passed solution, after which it was the resulting solution is adjusted to pH 2.5 with 6N hydrochloric acid with stirring and in a refrigerator left to stand, 16.8 g of the substance FR-1923 being obtained in the form of colorless crystals.

Example 9

15 1 eines Kulturfiltrats (pH 4,0) (GebautanSubstanz FR-19-23: 14,25g), das im wesentlichen auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 hergestellt worden war, wurden durch eine mit einem makroporösen,nicht-ionischen Adsorptionsharz, Diaion HP 20, gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 110 mm, Füllhöhe des Harzes: 550 mm) mit einer Geschwindigkeit von SV=I laufengelassen. Die Säule wurde mit 5 Wasser gewaschen, danach wurde die Substanz FR-1923 mit einer 30%igen wässrigen Methanollösung eluiert. 7 940 ml der dabei erhaltenen aktiven Fraktionen wurden gesammelt und dann mit 6n Chlorwasserstoffsäure auf pH 3,3 eingestellt. Die Lösung wurde durch eine mit Aluminiumoxid ge-15 1 of a culture filtrate (pH 4.0) (built on substance FR-19-23: 14.25g), which is essentially the same as was prepared in Example 1, were by a with a macroporous, non-ionic adsorption resin, Diaion HP 20, filled column (inner diameter of the column: 110 mm, filling height of the resin: 550 mm) at a speed of SV = I. The column was with 5 Washed with water, then the substance FR-1923 was eluted with a 30% aqueous methanol solution. 7 940 ml the active fractions thereby obtained were collected and then adjusted to pH 3.3 with 6N hydrochloric acid. The solution was

509840/0966509840/0966

25Ί239625-2396

gefüllte Säule (saures Aluminiumoxid, Innendurchmesser der Säule: 46 mm, Füllhöhe des Aluminiumoxids: 300 mm) geschickt. Die Säule wurde mit 500 ml Wasser gewaschen, danach wurde die Substanz FR-1923 mit einer wässrigen 0,3 M Kaliumbiphosphatlösung eluiert. Es wurden 1800 ml aktive Fraktionen gesammelt und dann unter vermindertem Druck auf ein Volumen auf 800 ml eingeengt. Das Konzentrat wurde mit 6n Chlorwasserstoffsäure unter Rühren auf pH 2,2 eingestellt, danach wurde die Lösung über Nacht in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei man 11,94 g der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.filled column (acidic aluminum oxide, inner diameter of the column: 46 mm, filling height of the aluminum oxide: 300 mm) sent. The column was washed with 500 ml of water, after which the substance FR-1923 was washed with an aqueous 0.3 M potassium biphosphate solution eluted. There were 1800 ml active fractions collected and then concentrated under reduced pressure to a volume of 800 ml. The concentrate was adjusted to pH 2.2 with 6N hydrochloric acid with stirring, after which the solution became over Left to stand overnight in a refrigerator, leaving 11.94 g of the substance FR-1923 in the form of colorless crystals received.

Example 10

30 1 eines KuIturfiltrats (pH 4,0) (Gehalt an Substanz FR-1923: 32,4 g), das im wesentlichen auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 hergestellt worden war, wurden durch eine mit einem makroporösen, nicht-ionischen Adsorptionsharz, Diaion HP 20, gefüllte Säule (Innendurchmesser der Säule: 140 mm, Füllhöhe des Harzes: 600 mm) mit einer Geschwindigkeit vonSV=l geschickt. Die Säule wurde mit 10 1 Wasser gewaschen, danach wurde die Substanz FR-1923 mit einer wässrigen 0,01n Natriumhydroxidlösung eluiert. 30,1 t der aktiven Fraktionen wurden gesammelt und dann mit 6n Chlorwasserstoffsäure auf pH 3,3 eingestellt. Die Lösung wurde durch eine mit Aluminiumoxid gefüllte Säule (saures Aluminiumoxid, Innendurchmesser der Säule: 77 mm, Füllhöhe des Aluminiumoxids: 440 mm) geschickt. Die Säule wurde mit 2 1 Wasser gewaschen,30 liters of a culture filtrate (pH 4.0) (content of substance FR-1923: 32.4 g), which had been prepared in substantially the same manner as in Example 1, was through one with a macroporous, nonionic adsorption resin , Diaion HP 20, filled column (inner diameter of the column: 140 mm, filling height of the resin: 600 mm) at a speed of SV = 1. The column was washed with 10 l of water, after which the substance FR-1923 was eluted with an aqueous 0.01N sodium hydroxide solution. 30.1 tons of the active fractions were collected and then adjusted to pH 3.3 with 6N hydrochloric acid. The solution was passed through a column filled with alumina (acidic alumina, inside diameter of column: 77 mm, filling height of alumina: 440 mm). The column was washed with 2 l of water,

509840/0966509840/0966

danach wurde die Substanz FR-1923 mit einer wässrigen 0,3 M Kaliumbiphosphatlösung eluiert. Es wurden 12,3 der aktiven Fraktionen gesammelt und dann unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 1600 ml eingeengt. Das Konzentrat wurde mit 6n Chlorwasserstoffsäure unter Rühren auf pH 2,2 eingestellt, danach wurde die Lösung über Nacht in einem Kühlschrank stehengelassen, wobei man 25,95 g der Substanz FR-1923 in Form von farblosen Kristallen erhielt.then the substance FR-1923 with an aqueous 0.3 M potassium biphosphate solution eluted. 12.3 of the active fractions were collected and then reduced under reduced pressure Pressure reduced to a volume of 1600 ml. The concentrate was washed with 6N hydrochloric acid with stirring adjusted to pH 2.2, after which the solution was left to stand overnight in a refrigerator, whereby Received 25.95 g of substance FR-1923 in the form of colorless crystals.

Patentansprüche!Patent claims!

509840/0966509840/0966

Claims

- 23 -

Claims

( 1 / Process for purifying the antibiotic substance FR-1923, characterized in that an aqueous solution containing the substance FR-1923 together with impurities is brought into contact with a macroporous, nonionic adsorption resin.

2. The method according to claim 1, characterized in that one is the substance FR-1923 together with impurities brings containing aqueous solution into contact with a macroporous, non-ionic adsorption resin, to adsorb the substance FR-1923 thereon, and then the adsorbed substance FR-1923 with a hydrophilic one Solvent system or with an alkaline aqueous Solution eluted from the resin.

3. The method according to claim 1, characterized in that one the substance FR-1923 together with impurities containing aqueous solution with a macroporous, non-ionic adsorption resin previously with the substance FR-1923 has been saturated, brings into contact in order to adsorb the impurities thereon, and the substance FR-1923 is recovered from the solution that has passed through.

4. The method according to at least one of claims 1 to 3, characterized in that the aqueous solution containing the substance FR-1923 is a substance FR-1923 culture broth filtrate containing used.

'5098A0 / 0966 ""

5. The method according to at least one of claims 1 to 3, characterized in that the substance FR-1923 aqueous solution containing a previously extracted culture solution containing the substance FR-1923 used.

6. The method according to at least one of claims 1 to 3, characterized in that the substance FR-1923 containing aqueous solution in the form of an aqueous solution of a crude solid material containing substance FR-1923 is present.

7. The method according to claim 1 and / or 3, characterized in that the substance FR-1923 containing aqueous solution in the form of an aqueous solution containing the substance FR-1923 together with coloring materials Solution is available.

8. The method according to claim 1 and / or 3, characterized in that the substance FR-1923 containing aqueous solution in the form of one containing the substance FR-1923 together with the isomer of the substance FR-1923 aqueous solution is present.

9. The method according to at least one of claims 1 to 3, characterized in that one is used as the adsorption resin a macroporous crosslinked resin with an aromatic Basic structure used.

10. The method according to claim 9, characterized in that

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25-2396

that one as a macroporous, crosslinked resin of an aromatic Basic structure a macroporous styrofoam polymer cross-linked with divinylbenzene is used.

11. The method according to claim 1 and / or 2, characterized in that the hydrophilic solvent system a lower dialkyl ketone, a lower alkanol, a mixture of the lower dialkyl ketone and the lower Alkanol or an aqueous solution of the lower dialkyl ketone, the lower alkanol or a mixture thereof used.

12. The method according to claim 1 and / or 2, characterized in that with an alkaline solution with at pH 8-13 eluted.

13. The method according to claim 11, characterized in that a mixture is used as the hydrophilic solvent system used from water and a lower alkanol.

14. The method according to claim 11, characterized in that a mixture is used as the hydrophilic solvent system used from water and a lower dialkyl ketone.

15. The method according to claim 13, characterized in that the lower alkanol used is methanol.

16. The method according to claim 13, characterized in that the lower alkanol used is ethanol.

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17. The method according to claim 13, characterized in that the lower alkanol used is propanol.

18. The method according to claim 14, characterized in that that acetone is used as the lower dialkyl ketone.

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