DE2462221A1

DE2462221A1 - Cosmetic retarding ageing of skin - prepd with soluble human collagen extd from tissues esp placenta

Info

Publication number: DE2462221A1
Application number: DE19742462221
Authority: DE
Inventors: Andreas Hadhanyi; Venugopala Mohanaradhakrishnan
Original assignee: TROMMSDORFF FA H
Current assignee: TROMMSDORFF FA H
Priority date: 1974-02-02
Filing date: 1974-02-02
Publication date: 1976-05-06

Abstract

Cosmetic compsn. contains soluble human collagen, (I) from which non-helical peptides can be sepd. partly or completely, and which is obtd. from human tissues, partic. placenta. (I) stimulate fibril formation, leading to rejuvenation of skin. Use of human (I) prevents transfer of bacteria and latent viruses from animal to man. Modification by telopeptide degradation enhances activity in cosmetic or medicinal fields.

Description

Kosmetisches Mittel, enthaltend lösliches, natives Human-Kollagen (2. Ausscheidung aus Patent/Patentanmeldung P 24 05 002.0-41) Die Erfindung betrifft ein kosmetisches Mittel, das aus Humangewebe, insbesondere Placenta, gewonnenes, lösliches, natives Human-Kollagen enthält, dessen nicht-helikale Peptide teilweise oder vollständig abgetrennt sein können.Cosmetic agent containing soluble, native human collagen (2nd separation from patent / patent application P 24 05 002.0-41) The invention relates to a cosmetic product obtained from human tissue, in particular placenta, contains soluble, native human collagen, some of which are non-helical peptides or can be completely separated.

Kollagen ist ein faseriges Eiweiß, das je nach Ausgangsmaterial unterschiedliche Aminosäurezusammensetzung aufweist.Collagen is a fibrous protein that varies depending on the starting material Has amino acid composition.

Es ist wahrscheinlich das häufigste Eiweiß im Tier- und Menschenkörper und kommt hauptsächlich in Haut, Sehnen, Knochen und Bindegewebe vor. Frisch isoliertes Kollagen liegt in Form von weißen, silber-glänzenden Faserbündeln vor, die unter dem Einfluß von Wärme und Wasser schrumpfen.It is probably the most abundant protein in both animal and human bodies and occurs mainly in skin, tendons, bones and connective tissue. Freshly isolated Collagen is in the form of white, silver-shimmering fiber bundles that underneath shrink under the influence of heat and water.

Um etwa 40 % geschrumpftes Kollagen denaturiert und verliert damit seine natürlichen Eigenschaften.Collagen that has shrunk by around 40% is denatured and thus lost its natural properties.

Die kleinste Moleküleinheit des Kollagens ist das Tropokollagen vom Molekulargewicht 360.000, das aus drei in sich schraubenförmigen Ketten besteht, die helikal umeinander gedreht sind und durch Wasserstoffbindungen miteinander verknüpft sind. Die endständigen Peptide der Tropokollagenmoleküle, die Telopeptide, besitzen keine helikale Struktur.The smallest molecular unit of collagen is the tropocollagen from Molecular weight 360,000, which consists of three helical chains, which are helically around each other are twisted and through hydrogen bonds are linked. The terminal peptides of the tropocollagen molecules, the telopeptides do not have a helical structure.

Die Kollagenfasern entstehen durch Aneinanderlagern vieler Tropokollagenmoleküle. Solange das Kollagen, das im Gegensatz zu den meisten Proteinen des Tierkörpers nicht am Stoffwechsel teilnimmt und deshalb altert, noch jung ist, ist es in verdünnten Säuren, Alkalien und Salzlösungen löslich. Mit zunehmendem Alter vernetzen sich die Tropokollagenmoleküle durch Ausbildung von Hauptvalenzen in steigendem Maße, wodurch das Kollagen unlöslich wird. Diese Quervernetzung ist irreversibel und erfolgt insbesondere dann schnell, wenn die nicht-helikalen Telopeptide mit ihren C- und N-terminalen Bereichen voll reaktionsfähig sind.The collagen fibers are created by the agglomeration of many tropocollagen molecules. As long as the collagen, which is in contrast to most of the proteins in the animal body does not take part in the metabolism and therefore ages, is still young, it is in dilute Acids, alkalis and salt solutions soluble. Network with increasing age the tropocollagen molecules by the formation of main valences to an increasing extent, making the collagen insoluble. This cross-linking is irreversible and takes place especially quickly when the non-helical telopeptides with their C- and N-terminal areas are fully reactive.

Der Übergang des löslichen Kollagens in seine unlösliche Form geschieht sowohl im Organismus als auch in vitro, sogar bei getrocknetem isoliertem Kollagen und ist durch chemische oder physikalische Maßnahmen praktisch nicht steuerbar.The transition of the soluble collagen into its insoluble form occurs both in the organism and in vitro, even with dried isolated collagen and is practically not controllable by chemical or physical measures.

Da die Festigkeit des tierischen Gewebes in erster Linie durch die kollagenen Fasern bedingt ist, wurde die Verwendung von Kollagen zur Beschleunigung der reparativen Vorgänge bei der Wundheilung untersucht. Die einzelnen künstlich zugeführten löslichen Kollagenmoleküle vernetzen miteinander und mit dem im Gewebe, z.B. der Wunde, neu gebildeten und vorhandenen Kollagen und bilden auf diese Weise das neue gesunde Gewebe von hoher Beanspruchbarkeit und Reißfestigkeit.Since the strength of animal tissue is primarily due to the Due to collagen fibers, the use of collagen was made to speed it up investigated the reparative processes involved in wound healing. The individual artificially supplied soluble collagen molecules cross-link with each other and with that in the tissue, e.g. the wound, newly formed and existing collagen and form in this way the new healthy fabric with high durability and tear resistance.

Durch Zusatz von nativem, löslichem Kollagen ist es daher möglich, das Verhältnis lösliches Kollagen zu vernetztes unlösliches Kollagen in der Wunde zugunsten des löslichen zu verschieben. Damit kann die Gewebsneubildung verbessert werden.By adding native, soluble collagen, it is therefore possible the ratio of soluble collagen to cross-linked insoluble collagen in the wound to shift in favor of the soluble. This can improve the formation of new tissue will.

q S-ov, H. und CH. Engelhardt: Z. Gerontologie 5, so 61971) Wie aus vorstehendem klar wird, ist für diesen Zweck weder denaturiertes Kollagen noch unlösliches, quervernetztes Kollagen geeignet. Daher lassen sich zur Beschleunigung der Wundheilung weder die bekannten Kollagen-Hydrolysate, welche aus tierischen Knochen und Hufen durch säure- oder enzymatische Hydrolyse gewonnen werden, noch Gelatine, die aus ähnlichem Rohmaterial durch alkalischen Aufschluss und Erhitzen gewonnen wird, verwenden. Bei diesen bekannten Kollagen-Produkten - sind die Tropokollagenmoleküle hydrolysiert und die helikale Struktur weitgehend oder vollständig zerstört, so daß hieraus keine Kollagenfibrillen gebildet werden können.q S-ov, H. and CH. Engelhardt: Z. Gerontology 5, so 61971) As As is clear from the above, collagen is neither denatured for this purpose nor insoluble, cross-linked collagen. Therefore can be used to speed up neither the well-known collagen hydrolysates, which are derived from animal sources, of wound healing Bones and hooves are still obtained by acid or enzymatic hydrolysis Gelatin, which is made from a similar raw material through alkaline digestion and heating is obtained, use. In these well-known collagen products - are the tropocollagen molecules hydrolyzed and the helical structure largely or completely destroyed, so that no collagen fibrils can be formed from this.

Es sind auch Zubereitungen bekannt, die natives Kollagen aus dem Bindegewebe, meistens der Haut, junger Tiere enthalten.Preparations are also known that extract native collagen from connective tissue, mostly contained in the skin of young animals.

Mit solchen tierischen Kollagenen wurden bei Versuchstieren, z.B. Ratten, deutliche Steigerungen der Wundfestigkeit beobachtet. Im histologischen Bild erkennt man nach einer solchen Koilagenapplikation eine früher und verstärkt einsetzende Fibroblastenbildung. Als Folge läßt sich dann auch früher als bei den Kontrolltieren eine kräftige Faserneubildung feststellen. Solche Verbesserungen der Wundheilung ließen sich experimentell sowohl mit autologen als auch mit heterologen Kollagenpräparaten erzieien, wobei die löslichen Kollagenpräparationen aus Schweinehaut die geringste Antigenität unter allen bisher untersuchten Spezies zeigten.Such animal collagens have been used in experimental animals, e.g. Rats, marked increases in wound strength were observed. In the histological After such a Koilagenapplication one recognizes an earlier and stronger one onset of fibroblast formation. As a result, you can then also earlier than with the Control animals notice vigorous new fiber formation. Such improvements wound healing can be achieved experimentally with both autologous and heterologous Collagen preparations, the soluble collagen preparations from pig skin showed the lowest antigenicity among all species examined so far.

Jedoch ist die Anwendung von tierischem Kollagen auf den Menschen nicht nur wegen der antigenen Wirkung mit einen hohen Risiko belastet. Da natives, lösliches Kollagen sehr schonend extrahiert werden muß, besteht die Gefahr der Übertragung von Bakterien und latenter Viren vom Tier auf den Menschen, die aus medizinischer Sicht nicht hingenommen werden kann. Daher wurden bisher tierische Kollagene am Menschen nur mit großem Vorgehalt versuchsweise angewandt.However, the application of animal collagen to humans not only burdened with a high risk because of the antigenic effect. Because native, soluble collagen has to be extracted very gently, there is a risk of transmission from Bacteria and latent viruses from animals to humans from a medical point of view cannot be accepted. Therefore, until now, animal collagens have been used in humans only applied on a trial basis with a large amount in advance.

Aufgabe der Erfindung ist es, für kosmetische Verwendung ein Kollagen zur Verfügung zu stellen, das durch Anregung der Fibrillenbildung zu einer Verjüngung und Verschönerung der Haut führt. Gegenstand der Erfindung ist daher ein kosmetisches Mittel, enthaltend aus Humangewebe, insbesondere Placenta, gewonnenes, lösliches, natives Human-Kollagen, dessen nicht-helikale Peptide teilweise oder vollständig abgetrennt sein können.The object of the invention is to provide a collagen for cosmetic use to make available that by stimulating the fibril formation to a rejuvenation and skin beautification leads. The invention therefore relates to a cosmetic one Agents containing soluble, extracted from human tissue, in particular placenta, native human collagen, some or all of its non-helical peptides can be separated.

Die Gewinnung von gegebenenfalls modifiziertem löslichem, nativen Human-Kollagen wird in der DT-OS 2 405 002 beschrieben.The recovery of optionally modified soluble, native Human collagen is described in DT-OS 2 405 002.

Das Kollagen wird vorzugsweise aus Humanplacenta gewonnen, wobei die Placenten zusammen mit den Nabel schnüren verarbeitet werden können. Das Ausgangsmaterial wird mit Wasser von unter 60C blutfrei gewaschen und vorzugsweise in Anwesenheit von Eis fein zerkleinert. Hierbei hat es sich als günstig erwiesen, das Eis aus Leitungwasser, dem Antiseptica in geringer Menge zugesetzt wurden, herzustellen. Die Waschflüssigkeiten werden verworfen.The collagen is preferably obtained from human placenta, the Placents can be processed together with the umbilical cords. The source material is washed blood-free with water below 60C and preferably in presence finely chopped by ice. It has proven to be beneficial to remove the ice Tap water to which antiseptics have been added in small amounts. The washing liquids are discarded.

Eine erste Kollagenfraktion (A), die jedoch überwiegend monomolekulare Peptide enthält, wird durch Rühren des zerkleinerten und vom Blut gereinigten Gewebes über längere Zeit, beispielsweise 12 bis 72 h, in einer Salzlösung von Temperaturen unter 60C gewonnen. Diese Fraktion kann zusammen mit den weiteren Fraktionen zum Produkt aufgearbeitet werden, sie wird jedoch zur Erzielung eines besonders wirksamen Produkts vorzugweise verworfen. Der feste Rückstand der ersten Extraktion wird mit einer Harnstofflösung, der noch Ascorbinsäure zugesetzt sein kann, über längere Zeit in der Kälte behandelt, vorzugsweise in einem Rührwerk gerührt. Auch diese Extraktion kann beispielsweise 12 bis 72 h fortgeführt werden. Es werden dabei etwa 60 % des gesamten, in der Placenta enthaltenen löslichen Kollagens herausgelöst. Nach Zentrifugieren wird das Zentrifugat (B) abgetrennt und in der Kälte aufbewahrt, der Rückstand noch einmal extrahiert.A first collagen fraction (A), which, however, is predominantly monomolecular Containing peptides is obtained by stirring the shredded and blood-purged tissue for an extended period of time, for example 12 to 72 hours, in a salt solution at temperatures won below 60C. This group can together with the other groups to Product can be worked up, however, it is used to achieve a particularly effective Product preferably discarded. The solid residue from the first extraction is with a urea solution, to which ascorbic acid may also be added, over a longer period of time Treated time in the cold, preferably stirred in a stirrer. Even these Extraction can be continued for 12 to 72 hours, for example. There will be about 60% of the total soluble collagen contained in the placenta is removed. After centrifugation, the centrifugate (B) is separated off and stored in the cold, the residue extracted once more.

Zur vollständigeren Extraktion des Kollagens hat sich eine wässrige Äthylurethanlösung als besonders geeignet herausgestellt. Hiermit lassen sich innerhalb von etwa 12 bis 72 h unter Rühren nahezu 40 % des in der Placenta enthaltenen löslichen Kollagens extrahieren. Die überstehende Flüssigkeit (C) wird abzentrifugiert und in der Kälte aufbewahrt.For more complete extraction of the collagen, an aqueous one has been used Ethyl urethane solution found to be particularly suitable. This can be used within from about 12 to 72 hours with stirring almost 40% of the soluble content contained in the placenta Extract collagen. The supernatant liquid (C) is centrifuged off and stored in the cold.

Die abgetrennten Extrakte (A), (B) und (C), vorzugsweise jedoch nur die Extrakte (B) und (C) werden gegen Leitungswasser dialysiert. Dabei fällt rohes Kollagen aus, das noch verschiedene unerwünschte Gewebeeiweißstoffe und Verunreinigungen enthält, die unspezifische Reaktionen hervorrufen können und daher in der Therapie kontraindiziert sein können. Es ist jedoch möglich, dieses rohe Kollagen in externer Kosmetik, beispielsweise Hautpflegemitteln, zu verwenden. Zur Reinigung wird das Rohkollagen abzentrifugiert, in einer schwachen Carbonsäure, vorzugsweise Essigsäure, Milchsäure oder Zitronensäure gelöst'und schließlich mit einem geeigneten Salz, vorzugsweise Kochsalz, gesättigt. Hierdurch wird das reine Kollagen ausgefällt, während die Verunreinigungen in der konzentrierten Salzlösung in Lösung bleiben.The separated extracts (A), (B) and (C), but preferably only the extracts (B) and (C) are dialyzed against tap water. In the process, raw falls Collagen is made up of various unwanted tissue proteins and contaminants contains, which can cause unspecific reactions and therefore in therapy may be contraindicated. However, it is possible to use this raw collagen in external To use cosmetics, for example skin care products. This is used for cleaning Crude collagen centrifuged off, in a weak carboxylic acid, preferably acetic acid, Lactic acid or citric acid dissolved 'and finally with a suitable salt, preferably table salt, saturated. This precipitates the pure collagen, while the impurities remain in solution in the concentrated salt solution.

Das reine Kollagen wird abzentrifugiert, und entweder als solche oder nach Zugabe einer Carbonsäure oder eines Carbonsäurepuffers aufbewahrt oder gefriergetrocknet und dann aufbewahrt bzw. zu einem Heilmittel oder Kosmetikum durch Zugabe geeigneter Grundlagen und Trägerstoffe sowie Verarbeitungshilfsmittel verarbeitet.The pure collagen is centrifuged off, and either as such or stored or freeze-dried after adding a carboxylic acid or a carboxylic acid buffer and then kept or to a remedy or cosmetic by adding suitable ones Basics and carriers as well as processing aids processed.

Das erhaltene reine Kollagen kann durch Abbau der Telopeptide modifiert werden. Dies hat den Vorteil, daß die Vernetzungsreaktion und schnelle Bildung von unlöslichem Kollagen langsamer vonstatten gehen, so daß sowohl die Haltbarkeit des Kollagens verbessert wird als auch die Wirksamkeit bei der meidzinischen oder kosmetischen Anwendung erhöht wird. Die Abspaltung wird mit bekannten proteolytischen Enzymen, wie Pepsin oder Ficin in saurem Medium durchgeführt. So gibt man beispielsweise auf 100 1 H20 65 bis 110 g Pepsin, stellt mit Salzsäure auf pH 1 bis 4 ein und löst anschließend das gereinigte extrahierte Kollagen. Die Einwirkungszeit kann bei etwa 250C 10 bis 50 h betragen. Die Menge der abgespaltenen Telopeptide ist der Dauer der enzymatischen Einwirkung nahezu proportional. Erfindungsgemäß werden jedoch nur bis zu etwa 85 % der Telopeptide abgebaut. Ein Produkt mit 15 bis 40 % an Telopeptiden hat sich als besonders wirksam erwiesen.The pure collagen obtained can be modified by breaking down the telopeptides will. This has the advantage that the crosslinking reaction and rapid formation of insoluble collagen proceed more slowly, so that both the shelf life of the Collagen is improved as well as its effectiveness in avoidance or cosmetic Application is increased. The cleavage is carried out with known proteolytic enzymes, such as pepsin or ficin carried out in acidic medium. So you give, for example to 100 1 H20 65 to 110 g pepsin, adjusts to pH 1 to 4 with hydrochloric acid and dissolves then the purified extracted collagen. The exposure time can be about 250C 10 to 50 hours. The amount of cleaved telopeptides is the duration almost proportional to the enzymatic action. According to the invention, however only degraded up to about 85% of the telopeptides. A product with 15 to 40% telopeptides has been found to be particularly effective.

Anschließend wird mit Lauge, vorzugsweise 1 n Natronlauge neutralisiert und gegen Leitungswasser dialysiert. Dabei fällt das modifizierte Kollagen aus, das abzentrifugiert wird und als solches, vorzugsweise aber in einer Zitratpufferi-Ketoglutarsäure-Lösung in Konzentrationen von 1 bis 5 % aufgelöst, gelagert wird. Entweder wird das modifizierte Kollagen in dieser Lösung angewendet oder gefriergetrocknet und dann zu einem Heilmittel oder kosmetischen Mittel nach bekannten Verfahren konfektioniert Es hat sich als vortei lhaft erwiesen, die Lösung, die das Endprodukt enthält, mit Gaemastrahlen von etwa 5 M-Rad zu sterilisieren und in lichtundurchlässigen Behältern kütA aufzubewahren.It is then neutralized with lye, preferably 1N sodium hydroxide solution and dialyzed against tap water. The modified collagen falls out, which is centrifuged and as such, but preferably in a citrate buffer / ketoglutaric acid solution dissolved in concentrations of 1 to 5%, stored. Either the modified one Collagen in this solution is applied or freeze-dried and then turned into a remedy or cosmetic agents made up according to known processes It has been found to be Proven to be advantageous, the solution containing the end product with Gaema rays of about 5 M-Rad to be sterilized and kept in opaque containers.

auf dem gegebenenfalls modifizierten Kollagen werden mit @@@@@@ vor üblichen Träge- und @@@@tastoffen Präparate für @@@@@ @@@@ Dosmetik hergestellt. Insbesondere lassen sich sio: daraus Präparate herstellen, die die Alterung, insbesondere der Haut, aufschieben. Für solche Anwendungen ist in der Kosmetik ein großes Bedürfnis vorhanden.on the possibly modified collagen are preceded with @@@@@@ usual inert and @@@@ tastoffen preparations for @@@@@ @@@@ cosmetics. In particular, you can: use it to produce preparations that the Postpone aging, especially of the skin. For such applications, the Cosmetics are in great need.

Beispiel 1 10 kg Humanplacenta mit Nabelschnur werden in kaltem Wasser solange gewaschen, bis sie von Blut und anderen Verunreinigungen frei sind. Das Ausgangsmaterial wird grob zerkleinert und mit Wasser von 40C weiter gewaschen. Die Waschflüssigkeit wird verworfen.Example 1 10 kg of human placenta with umbilical cord are placed in cold water washed until they are free of blood and other contaminants. That The starting material is roughly crushed and further washed with water at 40C. The washing liquid is discarded.

Das Rohmaterial wird mit Hilfe eines Fleischwolfes in Anwesenheit von Eis, das 0,1 % einer Mischung von zwei Drittel Natriumbenzoat und ein Drittel Chloramin T enthält, fein zerkleinert und noch einmal mit Wasser von 40C solange gewaschen, bis das Gewebe blutfrei ist. Die Waschflüssigkeit wird verworfen.The raw material is in attendance with the help of a meat grinder of ice, which is 0.1% of a mixture of two-thirds sodium benzoate and one-third Chloramine T contains, finely chopped up and again with water at 40C for a long time washed until the tissue is free of blood. The washing liquid is discarded.

In 30 1 H20 werden 45 Mol = 2631 g NaCl und 6 Mol = 852 g NaH2P04 aufgelöst und in ein Rührwerk gegeben. Das zerkleinerte und gereinigte Gewebe wird zugesetzt und über 48 h langsam in der Kälte gerührt, anschließend portionsweise zentrifugiert und das Zentrifugat (A) abgetrennt.In 30 1 H20 45 mol = 2631 g NaCl and 6 mol = 852 g NaH2PO4 dissolved and placed in a stirrer. The shredded and cleaned tissue will added and stirred slowly in the cold for 48 h, then in portions centrifuged and the centrifugate (A) separated.

Der Rückstand wird in ein Rührwerk gebracht, in 50 1 H2O, in dem 18 kg Harnstoff und 500 g Ascorbinsäure aufgelöst wurden, gegeben und über'48 h langsam in der Kälte gerührt. Anschließend wird zentrifugiert und die überstehende Flüssigkeit (B) abgetrennt und bei 4"C aufbewahrt.The residue is placed in a stirrer, in 50 1 H2O, in the 18 kg of urea and 500 g of ascorbic acid were dissolved, given and slowly over'48 h stirred in the cold. It is then centrifuged and the supernatant liquid (B) separated and stored at 4 "C.

-Der feste Rückstand wird noch einmal in das Rührwerk gebracht und mit 30 1 H20, das 3 kg Äthylurethan (H2N-CO-OC2H5) gelöst enthält, gegeben und über 48 h langsam in der Kälte gerührt.-The solid residue is brought back into the stirrer and with 30 1 H20, which contains 3 kg of ethyl urethane (H2N-CO-OC2H5) dissolved, given and over Stirred slowly in the cold for 48 h.

Anschließend wird die überstehende Flüssigkeit (C) abzentrifugiert und bei 40C aufbewahrt.The supernatant liquid (C) is then centrifuged off and stored at 40C.

Die abgetrennten Extrakte (B) und (C) werden zusammengegeben und bis zur völligen Ausfällung (ca. 24 h) gegen Leitungswasser dialysiert. Das erhaltene rohe Kollagen wird abzentrifugiert, in 0,01 molarer Essigsäure suspendiert und bis zur Auflösung gerührt. Die klare Lösung wird mit NaCl gesättigt, über Nacht stehen gelassen und anschließend ausgefällt und von Verunreinigungen und überschüssigem Kochsalz durch Zentrifugieren abgetrennt.The separated extracts (B) and (C) are combined and up dialyzed against tap water for complete precipitation (approx. 24 h). The received raw collagen is centrifuged off, suspended in 0.01 molar acetic acid and up to stirred to dissolve. The clear solution is saturated with NaCl, stand overnight left and then precipitated and of impurities and excess Separated saline by centrifugation.

Zur Teilabspaltung der nicht-helikalen Peptide wird eine Lösung von 65 bis 110 g Pepsin in 100 1 H20 hergestellt und mit HC1 auf pH 2 angesäuert. In diese Lösung wird etwa 1 kg des aus den Extrakten (B) und (C) gewonnenen reinen Kollagens gegeben und bis zum vollständigen Lösen gerührt (ca. 24 h bei 250C), danach mit 1 n NaOH neutralisiert und über Nacht gegen Leitungswasser dialysiert. Das ausgefallene modifizierte Kollagen (Produkt) wird abzentrifugiert.A solution of 65 to 110 g of pepsin prepared in 100 l of H20 and acidified to pH 2 with HC1. In this solution becomes about 1 kg of the pure obtained from extracts (B) and (C) Added collagen and stirred until it has completely dissolved (approx. 24 h at 250C), then neutralized with 1N NaOH and dialyzed against tap water overnight. The unusual one modified collagen (product) is centrifuged off.

Das Produkt wird in einer Zitratpufferut-Xetoglutarsäure-Lösung, die aus 147 g (0,5 Mol) Tri-Natriumzitrat-2-Hydrat und 21 g (0,2 Mol) Zitronensäure sowie 4,38 g (0,035 Mol) o&Ketoglutarsäure pro Liter H20 hergestellt wurde, in Konzentrationen von 1 bis 5 %, vorzugsweise 2 %, aufgelöst.The product is in a citrate bufferut-xetoglutaric acid solution that from 147 g (0.5 mol) of tri-sodium citrate-2-hydrate and 21 g (0.2 mol) of citric acid and 4.38 g (0.035 mol) of o & ketoglutaric acid per liter of H20 was produced, dissolved in concentrations of 1 to 5%, preferably 2%.

Falls nötig, kann das so erhaltene lagerfähige Produkt noch einmal zentrifugiert und durch &-Stralen von 5 M-Rad sterilisiert werden. Anschließend wird es in lichtundurchlässigen Behältern kühl aufbewahrt.If necessary, the storable product obtained in this way can be used again centrifuged and sterilized by & -stralen of 5 M-Rad. Afterward it is kept cool in opaque containers.

Das so erhaltene Produkt ist eine farblose, silberglänzende, leicht trübe kolloidale Lösung, die Viskositäten zwischen 10 und 20 dl/g (150C) besitzt. Ihr pH-Wert liegt zwischen 3 und 5, die optische Drehung fiocg 360 mp beträgt 0,8 bis 1,4. Die Lösung ist geruchlos. Das UV-Spektrum hat einen Peak bei 275 nm.The product obtained in this way is a colorless, silvery, light one cloudy colloidal solution with viscosities between 10 and 20 dl / g (150C). Its pH value is between 3 and 5, the optical rotation of 360 mp is 0.8 to 1.4. The solution is odorless. The UV spectrum has a peak at 275 nm.

Das erhaltene modifizierte Kollagen hat eine Denaturierungstemperatur von 35 bis 380C und ist in verdünnten Säuren, Alkalien und Salzlösungen löslich, mit Wasser mischbar, in Fetten und organischen Lösungsmitteln unlöslich.The modified collagen obtained has a denaturation temperature from 35 to 380C and is soluble in dilute acids, alkalis and salt solutions, Miscible with water, insoluble in fats and organic solvents.

Beispiel 2 Beispiel 1 wird wiederholt, wobei jedoch der Extrakt (B) nicht mit Harnstoff und Ascorbinsäure, sondern mit Äthylurethan gewonnen wird.Example 2 Example 1 is repeated, except that the extract (B) is not obtained with urea and ascorbic acid, but with ethyl urethane.

Beispiel 3 Beispiel 1 wird wiederholt, jedoch wird das erhaltene rohe Kollagen statt in Essigsäure in verdünnter Milchsäure suspendiert.Example 3 Example 1 is repeated, but the one obtained is crude Collagen is suspended in dilute lactic acid instead of acetic acid.

Beispiel 4 Beispiel 1 wird wiederholt, wobei jedoch die enzymatische Spaltung statt mit Pepsin mit Ficin durchgeführt wird.Example 4 Example 1 is repeated, but the enzymatic Cleavage is carried out with ficin instead of pepsin.

Claims

Sponsorship claim

Cosmetic agent, containing from human tissue, in particular placenta, recovered, soluble, native human collagen, some of its non-helical peptides or can be completely separated.