DE2409862A1 - ORAL APPLICABLE IMMUNOGLOBULIN COMBINATION - Google Patents
ORAL APPLICABLE IMMUNOGLOBULIN COMBINATIONInfo
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Description
BIOKEAlA SA. RENENS / SCHWEIZBIOKEALA SA. RENENS / SWITZERLAND
Die Erfindung betrifft eine spezifische, oral applizierbare Immunoglobulinkombination als Mittel gegen schädliche Kolibakterien der Art Escherichia coli pathog., wie sie insbesondere im Magen-Darm-Trakt des Säuglings gastro- enteritis ehe Infektionen hervorrufen.The invention relates to a specific, orally administrable immunoglobulin combination as a means against harmful E. coli bacteria of the kind Escherichia coli pathog., as they are in particular in the gastrointestinal tract the infant's gastroenteritis before infection.
Zweck der Erfindung ist die Schaffung eines derartigen Mittels, welches ohne Anwendung besonderer Verfahrensweisen hergestellt werden kann, einfach zu handhaben und oral anzuwenden sowie schnell und sicher wirksam ist, ohne dass erst - wie etwa bei einer Impfung - eine bestimmte Zeit verstreichen muss, bis sich Antikörper im infizierten Organismus gebildet haben.The purpose of the invention is to provide such a means which can be produced without using special procedures easy to handle and to use orally, as well as being effective quickly and safely without first - as is the case with a vaccination, for example - a certain amount of time must pass before antibodies have formed in the infected organism.
Eine solche oral applizierbare Immunoglobulinkombination ist erfindungsgemäss gekennzeichnet durch einen Gehalt an Laktoimmunoglobulinen, Colostralimmunoglobulinen und Seroimmunoglobulinen mitSuch an orally administrable immunoglobulin combination is according to the invention characterized by a content of lactoimmunoglobulins, colostral immunoglobulins and seroimmunoglobulins with
0900/B665.12D.1 - BIl/KW/bw0900 / B665.12D.1 - BIl / KW / bw
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spezifischen Antikörpern gegen Serotypen von Escherichia coli pathog.specific antibodies against serotypes of Escherichia coli pathog.
Sie enthält zweckmässigerweise wenigstens 50 Gew % Rinderimmunoglobuline aus Laktoimmunoglobulinen, Colostralimmunoglobulinen und Seroimmunoglobulinen mit spezifischen Antikörpern gegen Serotypen von Escherichia coli pathog.It expediently contains at least 50% by weight of bovine immunoglobulins from lactoimmunoglobulins, colostral immunoglobulins and seroimmunoglobulins with specific antibodies against serotypes of Escherichia coli pathog.
Der Restanteil kann aas höchstens 45 Gew % Albuminen und nichtimmunologischen Globulinen sowie 5 % Wasser bestehen. The remainder can consist of a maximum of 45% by weight albumins and non-immunological globulins as well as 5% water.
Eine besonders wirksame Immunoglobulinkombination besitzt vorzugsweise wenigstens 70 Gew % Rinderimmunoglobuline aus Laktoimmunoglobulinen, Colostralimmunoglobulinen und Seroimmunoglobulinen mit einem erhöhten Gehalt spezifischer Antikörper gegen Serotypen von Escherichia coli pathog. und einen Restanteil von höchstens 30 Gew % Albuminen und nichtimmunologischen Globulinen.A particularly effective Immunoglobulinkombination preferably has at least 70% by weight of Rinderimmunoglobuline Laktoimmunoglobulinen, Colostralimmunoglobulinen Seroimmunoglobulinen and with an increased content of specific antibodies against serotypes of Escherichia coli Pathog. and a remainder of at most 30% by weight of albumins and non-immunological globulins.
Die erfindungsgemässe Immunoglobulinkombination ist wasserlöslich und kann als physiologische oder hypotonische, wässerige Natriumchloridlösung zubereitet und angewendet werden.The immunoglobulin combination according to the invention is water-soluble and can be prepared and used as a physiological or hypotonic, aqueous sodium chloride solution.
Der wesentliche Vorteil der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination besteht darin, dass sie für therapeutische Zwecke oral anwendbar ist und dadurch mit der Nahrung aufgenommen werden kann. Diese Möglichkeit einer oralen Anwendbarkeit wirkt sich insbesondere bei Säuglingen sehr vorteilhaft aus, indem beispielsweise einfach zweimal täglich 10 ml einer wässrigen Lösung der Flaschenmilch zugesetzt werden können.The main advantage of the immunoglobulin combination according to the invention is that it can be used orally for therapeutic purposes and can therefore be ingested with food. These The possibility of oral use has a very advantageous effect, particularly in the case of infants, by simply adding twice, for example 10 ml of an aqueous solution of the bottled milk can be added daily.
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Diese äusserst einfach Anwendungsmöglichkeit war an sich nicht vorauszusehen, da normalerweise die Immunoglobulinpräparate zu therapeutischen und prophylaktischen Zwecken parenteral injiziert werden müssen, um dem Blut spezifische Antikörper gegen bestimmte Infektionskeime zuzuführen (passive Immunisierung) oder gegebenenfalls einen zu niedrigen Gammaglobulinspiegel wieder anzuheben. Dabei müssen aber bei wiederholter Anwendung homologe Immunoglobuline verwendet werden, da sonst die Gefahr der bekannten anaphylaktischen Schocks besteht.This extremely simple application was not in itself to be anticipated, since immunoglobulin preparations are normally injected parenterally for therapeutic and prophylactic purposes must be in order to deliver specific antibodies against certain infectious germs to the blood (passive immunization) or, if necessary Raising gamma globulin levels that are too low. However, homologous immunoglobulins must be used for repeated use otherwise there is a risk of known anaphylactic shocks.
Demgegenüber ist bei der Anwendung der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination in vorteilhafter Weise die Verwendung heterologer Rinderimmunoglobuline möglich, ohne dass die vorstehend erwähnte Schockgefahr besteht.In contrast, when using the immunoglobulin combination according to the invention The use of heterologous bovine immunoglobulins is advantageously possible without the aforementioned There is a risk of shock.
Bei Säuglingen bis zum Alter von ungefähr 6 Monaten und bei jungen Ferkeln findet man in den Exkrementen einen erheblichen Teil der oral angewandten Immunoglobulinkombination wieder, während keine Resorption durch die Darmwand zu beobachten ist, ausgenommen während der ersten 36 Lebensstunden von Ferkeln, so dass die Immunoglob ulinkombination innerhalb des Darmes ihre Wirkung entfaltet. In infants up to approximately 6 months of age and in youngsters A considerable part of the orally administered immunoglobulin combination is found in the excrement of piglets, while none Absorption through the intestinal wall is observed, except during the first 36 hours of life of piglets, so that the Immunoglobulin combination develops its effect within the intestine.
Diese vorteilhafte Eigenschaft der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination gestattet daher in einfacher Weise eine wirksame passive Immunisierung des Verdauungstraktes, insbesondere von Säuglingen, und zwar sowohl für prophylaktische als auch für therapeutische Zwecke, Dies ist insofern von Bedeutung als auf diese Weise dem infektionsgefährdeten oder bereits infizierten Organismus schnellThis advantageous property of the immunoglobulin combination according to the invention therefore allows an effective passive immunization of the digestive tract, especially of infants, in a simple manner, for both prophylactic and therapeutic Purposes, This is important insofar as in this way the infected or infected organism quickly
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natürliche Abwehrstoffe für das betroffene Organ zugeführt werden können, bis zu welchem im allgemeinen etwaige Serumantikörper nicht gelangen. Man weiss, dass nur aktive Immunisierung auf oralem Wege eine immunologische Reaktion der Darmschleimhaut hervorrufen kann, deren Wirkung jedoch erst nach einer gewissen Zeitspanne eintritt. Eine solche nachteilige Verzögerung bis zum Eintritt der Wirksamkeit ist dagegen bei Anwendung der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination nicht festzustellen.natural antibodies for the affected organ can be supplied, up to which in general any serum antibodies not get. It is known that only active immunization via the oral route induces an immunological reaction in the intestinal mucosa can, but their effect only occurs after a certain period of time. Such a disadvantageous delay before the onset of effectiveness is, on the other hand, when using the methods according to the invention Immunoglobulin combination cannot be determined.
Weitere Vorteile der erfindungsgemässen, spezifischen Immunoglobulinkombination bestehen darin, dass keine Resistenz beobachtet wurde, wie es bei Antibiotika der Fall ist, dass keine Störungen der normalen Darmflora auftreten und dass der Körper keine chemischen oder antibiotischen, mehr oder weniger toxischen Stoffe auszuscheiden hat. Es bestehen auch keine Gefahren von Allergien, zum mindesten keine höheren, als sie durch die Aufnahme von Milch und Fleisch gegeben sind, und nicht vergleichbar mit den Gefahren bei verschiedenen Allergens ubstanzen, wie gewisse Antibiotika oder Träger substanzen von solchen.Further advantages of the specific immunoglobulin combination according to the invention consist in the fact that no resistance has been observed, as is the case with antibiotics, that no disturbances of normal Intestinal flora occur and that the body does not have to excrete any chemical or antibiotic, more or less toxic substances. There are also no dangers of allergies, at least none higher than those caused by the consumption of milk and meat are, and not comparable with the dangers of various allergenic substances, such as certain antibiotics or carrier substances of such.
Gegenüber den Antibiotika besteht darüberhinaus auch weiterhin der Vorteil, dass die erfindungsgemässe Immunoglobulinkombination bei einem widerstandsgeschwächten Organismus eine günstigere Wirkung als die Antibiotika ausübt. Sind diese Antibiotika beispielsweise Bakteriostate, sind die natürlichen Abwehrkräfte des Körpers erforderlich, um die Keime zu beseitigen, sind sie Bakterieide, können unter Umständen durch Lyse der Bakterien Toxine entstehen und freigesetzt werden.Compared to the antibiotics, there is also still the Advantage that the immunoglobulin combination according to the invention has a more favorable effect on a resistance-weakened organism than the antibiotics exercises. For example, if these antibiotics are bacteriostats, the body's natural defenses are required to In order to eliminate the germs, they are bacterial oids, and in certain circumstances, toxins can be created and released through lysis of the bacteria will.
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Andererseits schliesst aber die Anwendung der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination eine antibiotische Behandlung nicht aus. Im Gegenteil kann in dem Fall, wo eine sofortige antibiotische Einwirkung notwendig erscheint, die gleichzeitige Anwendung der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination eine wertvolle, zusätzliche Wirkung erzielen.On the other hand, the application of the invention also includes Immunoglobulin combination does not rule out antibiotic treatment. On the contrary, in the case where an immediate antibiotic action appears necessary, the simultaneous use of the invention Immunoglobulin combination achieve a valuable, additional effect.
Die Herstellung der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination erfolgt nach an sich bekannten und auf diesem Gebiet üblichen serologischen Verfahren, beispielsweise unter Verwendung von Wiederkäuern und Schweinen als Wirtstiere. Bevorzugt werden gesunde Rinder von 3 bis 7 Jahren, welche seit mindestens 6 vorausgegangenen Monaten frei von Brucellose, Tuberkulose und Leukose gewesen sind. Die Kontrollen auf Tuberkulose und Brucellose werden regelmässig weitergeführt.The immunoglobulin combination according to the invention is prepared according to serological methods known per se and customary in this field Methods using, for example, ruminants and pigs as host animals. Preference is given to healthy cattle from 3 up to 7 years of age who have been free from brucellosis, tuberculosis and leukosis for at least the previous 6 months. The controls on tuberculosis and brucellosis are regularly continued.
Zur Anwendung gelangen alle Serotypen von Escherichia coli pathog., welcher als häufigster Erreger für eine gastro-enteritische Infektion gilt. In Betracht kommen dafür insbesondere die Gruppen Olli, O119, O125, O126, O26, O55, O128 und O86, welche bakteriologisch bekannt sind und daher nicht näher beschrieben zu werden brauchen.All serotypes of Escherichia coli pathog., which is considered to be the most common pathogen for gastro-enteric infection. The groups Olli, O119, O125, O126, O26, O55, O128 and O86, which are known bacteriologically and therefore do not need to be described in more detail.
Zur Gewinnung der Laktoimmunoglobuline verwendet man eine die genannten Serotypen enthaltende, antigene Suspension mit standardisierter Keimzahl und impft diese wiederholt und in von 10 bis 100 ml steigenden Mengen in das Euter einer Kuh, Die Immunisierungszeit bis zur ausreichenden Bildung der Laktoimmunoglobuline beträgt etwa fünf bis sechs Wochen, was durch Bestimmung des Serumtiters kontrolliert wird.A die is used to obtain the lactoimmunoglobulins Antigenic suspension containing the said serotypes with a standardized number of germs and inoculates them repeatedly and in from 10 to 100 ml increasing amounts in the udder of a cow, the immunization time until sufficient formation of lactoimmunoglobulins is about five to six weeks, which is controlled by determining the serum titer.
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Zur Gewinnung der Seroimmunoglobuline wird eine gleiche antigene Suspension wie vorstehend verwendet, die in von 10 bis 200 ml steigenden Mengen eingeimpft wird, wobei die jeweils angewandte Menge auf die Venenbahnen und subkutan verteilt wird. Die Immunisierungszeit dauert so lange, bis das Tier einen ausreichend hohen Serumtiter aufweist, was im Mittel nach 6 bis 7 Wochen erreicht ist. Tiere, die nach zwei Monaten den vorgesehenen Serumtiter nicht erreicht haben, werden ausgeschieden.To obtain the Seroimmunoglobuline is an identical antigen Suspension as used above, inoculated in increasing amounts from 10 to 200 ml, depending on the amount used is distributed to the venous tracts and subcutaneously. The immunization time lasts until the animal has a sufficiently high serum titer, which is achieved on average after 6 to 7 weeks. Animals that have not reached the intended serum titer after two months are eliminated.
Zur Gewinnung von Colostralimmunoglobulinen bewirkt man eine Immunisierung trächtiger Kühe durch zwei Injektionen der gleichen Serotypen, und zwar die erste Injektion nach 7 l/2 Monaten Tragzeit und die zweite nach 8 Monaten Tragzeit. Aufgearbeitet wird die sog. Colostralmilch.To obtain colostral immunoglobulins, pregnant cows are immunized by two injections of the same Serotypes, namely the first injection after 7 1/2 months of gestation and the second after 8 months of gestation. The so-called Colostrum.
Die Gewinnung der Immunoglobuline aus den verschiedenen organischen Medien, d.h. aus der Milch, dem Serum und der Colostralmilch, kann man unter Anwendung auf diesem Gebiet klassischer Verfahren durchführen, wobei die Immunoglobuline in trockener Form anfallen.Obtaining the immunoglobulins from the various organic Media, i.e. from milk, serum and colostrum, can be carried out using classic methods in this area, whereby the immunoglobulins are obtained in dry form.
Die quantitative Prüfung der Immunoglobuline kann ebenfalls nach bekannten Methoden erfolgen, beispielsweise nach FAHY, wobei die Prüflösung und Lösungen mit bekannten Serumtitern auf einen ein Antirindergammaglobulin enthaltenden Agarboden aufgebracht und die dabei auftretenden Ausfällungen in ihren flächenmässigen Ausdehnungen miteinander verglichen werden. Eine graphische Auswertung der Flächendurchmesser gestattet eine unmittelbare Ablesung des Titers der Prüflösung.The quantitative testing of the immunoglobulins can also be carried out according to known methods, for example according to FAHY, the Test solution and solutions with known serum titers applied to an agar soil containing an anti-bovine gamma globulin and the occurring precipitates in their areal extent be compared with each other. A graphic evaluation of the surface diameter allows an immediate reading of the titer the test solution.
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Sine Prüfung mittels Elektrophorese hat sich als nicht immer zuverlässig erwiesen, da gewisse Fraktionen der Immunoglobuline mit spezifischen Antikörpern mit anderen Globulinfraktionen wandern. Die quantitative Prüfung des Spiegels der spezifischen Antikörper erfolgt durch Schnell-Ägglutinationstest im Probierglas.Sine testing using electrophoresis has not always proven to be reliable proved that certain fractions of immunoglobulins with specific antibodies migrate with other globulin fractions. the Quantitative testing of the level of the specific antibodies is carried out by means of a rapid agglutination test in a test tube.
Die praktische Anwendung der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination kann in Pulverform, beispielsweise durch Zusatz zu Trockenmilch oder auch normaler Milch, worin sie sich ohne weiteres auflöst, erfolgen oder in Form einer Lösung in destilliertem Wasser, dem man eine gewisse Menge, beispielsweise 0,2 %, Kochsalz zusetzt.The practical application of the immunoglobulin combination according to the invention can be in powder form, for example by adding it to dry milk or normal milk, in which it is readily available dissolves, take place or in the form of a solution in distilled water to which a certain amount, for example 0.2%, of table salt is added.
Durch die Gewinnung und Anwendung der erfindungsgemässen Immunoglobulinkombination in Pulverform bietet sich beispielsweise beim Zusatz zu Milchpulver darüberhinaus auch die vorteilhafte Möglichkeit, einer Proliferation durch Escherichia coli pathog. entgegenzuwirken, falls bei der Verarbeitung des Milchpalvers durch widrige Umstände ein mit diesen Bakterien verseuchtes Wasser verwendet werden sollte. Die dem Milchpulver zugesetzten Immunoglobuline der erfindungsgemässen Kombination üben in diesem Fall eine neutralisierende Wirkung auf die vorhandenen Keime aus, welche aus serhalb eines menschlichen oder tierischen Organismus und völlig unabhängig davon auftritt.By obtaining and using the immunoglobulin combination according to the invention in powder form, for example, when adding to milk powder, there is also the advantageous option of a proliferation by Escherichia coli pathog. to counteract if during the processing of the milk palver due to adverse circumstances water contaminated with these bacteria should be used. The immunoglobulins according to the invention added to the milk powder In this case, the combination exerts a neutralizing effect on the germs present, which are outside of a human or animal organism and occurs completely independently of it.
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