DE2338254C3 - Procedure for measuring the plasminogen content - Google Patents
Procedure for measuring the plasminogen contentInfo
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Description
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch ge- 48 Stunden dauern. Bd nahezu allen Verfahren wird kennzeichnet, daß die Bildung des Fibrins durch zur Plasminogenbestimmung die Auflösung des Fidie Bestimmung des Zeitpunktes seiner Verfesti- bringerinnsels gemessen, was aber einer Messung nur gung gemessen und die Verminderung des Pias- 20 schwer zugänglich ist. U. a. beruht daher die Länge minogengehaltes durch Vergleich des normalen der vorbekannten Verfahren auf der Schwierigkeit, Verfestigungszeitpunktes mit dem Verfestigungs- die Antiplasmine vom Plasminogen zu trennen, was Zeitpunkt bei beschleunigter Gerinnung gemessen bisher nut unvollständig gelungen ist.3. The method according to claim 1, characterized in that it takes 48 hours. Almost all methods indicate that the formation of the fibrin is measured by the dissolution of the fibrin for plasminogen determination, the determination of the time of its solidifying clot, which, however, can only be measured and the reduction in the pias is difficult to access. I.a. the length of the minogen content is therefore based on the difficulty of separating the antiplasmins from the plasminogen at the time of solidification with the solidification, which, when measured at accelerated coagulation, has so far only been incompletely achieved.
wird. Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, einwill. The invention is based on the object
4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch ge- 25 Verfahren zur Messung des Plasminogengehaltes zu kennzeichnet, daß der Gerinnungsverlauf be- schaffen, das erheblich schneller zu den gewünschten stimmt wird. Meßergebrissen führt und sich daher für die routine-4. The method according to claim 1, characterized in that a method for measuring the plasminogen content is added indicates that the coagulation process will produce the desired results considerably faster is true. Test results and is therefore suitable for the routine
5. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 4, mäßige Plaminogenbestimmung eignet.5. The method according to claims 1 to 4, moderate plaminogen determination is suitable.
dadurch gekennzeichnet, daß Plasminogen vor Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch ge-characterized in that plasminogen This object is achieved according to the invention by
der Fibrinbildung mittels eines Aktivators in 30 löst, daß der Plasminogengehalt durch Bestimmung Plasmin umgewandelt wird. der Bildung von Fibrin in einer Probe gemessenthe fibrin formation by means of an activator in 30 dissolves that the plasminogen content by determination Plasmin is converted. the formation of fibrin in a sample is measured
6. Verfahren nach Anspruch 1 und wenig- wird.6. The method according to claim 1 and little is.
stens einem der vorausgehenden Ansprüche, da- Insbesondere wird erfindungsgemäß die Bildungat least one of the preceding claims, that in particular, according to the invention, the formation
durch gekennzeichnet, daß die Antiplasmine des Fibrins in einer Lösung von Fibrinogen und anti-characterized in that the antiplasmins of fibrin in a solution of fibrinogen and anti-
durch Iso-amyl-alkohol zur Herstellung des Test- 35 plasminfreiem, plasminaktiviertem Probenplasmawith iso-amyl alcohol to produce the test plasmin-free, plasmin-activated sample plasma
plasmas ausgewaschen werden. unter Beifügung von Thrombin verzögert und derplasmas are washed out. with the addition of thrombin delayed and the
7. Verfahren nach Anspruch 1 und einem oder Plasminogengehalt durch die Bestimmung der Vermehreren
der vorausgehenden Ansprüche, da- zögerung des Gerinnungszeitpunktes festgelegt.
durch gekennzeichnet, daß die Gefinnungsge- Bei der Erfindung aktiviert man antiplasminfreies
schwindigkeit von Plasmaproben Gesunder als 40 Plasminogen, z.B. von einem Patienten vor Ein-Vergleichsgröße
verwendet wird. setzen einer konstant gewählten Fibrinbildung zu7. The method according to claim 1 and one or plasminogen content by determining the multiplicity of the preceding claims, delays in the coagulation point in time.
characterized in that the antiplasmin-free speed of plasma samples of healthy people is activated as 40 plasminogen, for example, is used by a patient before a comparative size. add to a constantly selected fibrin formation
Plasmin, so daß die plasminbedingte Fibrinspaltung mit der Fibrinbildung einsetzt. Die Gerinnung bei der Fibrinbildung wird durch die PiasminwirkungPlasmin, so that the plasmin-induced fibrin cleavage begins with the fibrin formation. The coagulation at the fibrin formation is caused by the piasmin effect
45 verzögert, und die Verzögerung der Gerinnung liefert das Maß für das Plasminogen.45 delayed, and the delay in clotting provides the measure for the plasminogen.
Insbesondere wird erfindungsgemäß die Bildung des Fibrins durch die Bestimmung des ZeitpunktesIn particular, according to the invention, the formation of fibrin is determined by determining the point in time
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Messung seiner Verfestigung gemessen und die VerminderungThe invention relates to a method for measuring its solidification measured and the reduction
des Plasminogengehaltes. 50 des Plasminogengehaltes durch Vergleich des nor-the plasminogen content. 50 of the plasminogen content by comparing the normal
Die Erfindung bezieht sich insbesondere auf die malen Verfestigungszeitpunktes mit dem Verfesti-The invention relates in particular to the paint time of solidification with the solidification
Bestimmung von Plasminogen im Patientenblut. Sie gungszeitpunkt bei beschleunigter Gerinnung gemes-Determination of plasminogen in patient's blood. The time of coagulation with accelerated coagulation
ist erforderlich, um eine fibrinolytische oder anti- sen.is required to have a fibrinolytic or antisense.
fibrinolytische Therapie bei thromboembolisch Er- Statt die Zeitpunkte zu bestimmen, kann manfibrinolytic therapy for thromboembolic he- Instead of determining the times, one can
krankten oder bei Patienten mit globaler Gerinnungs- 55 auch den Gerinnungsverlauf festlegen,
störung dosieren und ihren Verlauf kontrollieren zu Die Fibrinbildung kann konstant vorgegeben wer-who are ill or in patients with global coagulation 55 also determine the coagulation process,
dose the disturbance and check its course to The fibrin formation can be given constant
können. den, indem eine konstante Menge Fibrinogen durchbe able. by adding a constant amount of fibrinogen
Bekanntlich wird bei der Blutgerinnung durch eine konstante Dosis Thrombin zum Gerinnen ge-Thrombin
das lösliche Fibrinogen in das unlösliche bracht wird. Die Messung der Fibrinverfestigung
Fibrin umgewandelt. Plasmin, welches im Blut als 60 stellt kein Problem dar, weil hierfür Mechaniken in
Plasminogen (Vorstufe) vorliegt und durch Anti- Form der sogenannten Koagulometer (z.B. nach
plasmine blockiert ist, spaltet das Fibringerinnsel wie- Schnittger-Gross) zur Verfügung stehen,
derauf. Durch Waschen von Citratplasma mit 3 TeilenIt is known that in blood coagulation a constant dose of thrombin is used to clot the soluble fibrinogen into the insoluble one. The measurement of fibrin solidification is converted to fibrin. Plasmin, which is 60 in the blood, does not pose a problem because mechanics are available in plasminogen (precursor) and are blocked by anti-form of the so-called coagulometer (e.g. after plasmine, splits the fibrin clot like-Schnittger-Gross) are available,
the on. By washing citrated plasma with 3 parts
In den letzten Jahren ist es auf dieser Grundlage Isö-amyl-alkohol wird die gesamte Antiplasminaktibeispielsweise gelungen, durch den Plasminaktivator 65 vität eliminiert (The Significance of Plasma Inhibi-Streptokinase mit Hilfe des körpereigenen Plasmins tor [sj in the Control of Fibrinolytic [Plasmin] Acti-Blutgerinnsel wieder aufzulösen. Mit dieser Therapie vity in Blood, Monkhouse.F. C. et al., Thrombos. wurden sowohl Thrombosen als auch Herzinfarkte Diathes. haemorrh. 1972, 28, S. 367 bis 375).In recent years it is on this basis iso-amyl alcohol becomes the total antiplasmin acti, for example successfully eliminated by the plasmin activator 65 vity (The Significance of Plasma Inhibi-Streptokinase with the help of the body's own plasmin tor [sj in the Control of Fibrinolytic [plasmin] Acti blood clots to dissolve again. With this therapy vity in Blood, Monkhouse.F. C. et al., Thrombos. both thromboses and heart attacks became diathes. hemorrhage. 1972, 28, pp. 367 to 375).
Ir« der Regel wird die Messung so ausgelegt, daß die Btldungsgeschwindigkeit des Fibrins mäßig schneller verläuft als die Abbaugesch Bindigkeit.As a rule, the measurement is interpreted in such a way that the rate of formation of fibrin is moderate runs faster than the degradation process.
Dss effindungsgcmäßc Verfahren wird an Hand der Graphik näher erläutert:The effective procedure is carried out on hand the graphic explained in more detail:
Auf der Abszisse ist die Zeit aufgetragen, während die Ordinate die Verfestigung bzw. Gerinnt ng wiedergibtDie Parallele zur Abszisse, die mit α bezeichnet ist, bedeutet den Endpunkt der Messung im Koagulometer.The time is plotted on the abscissa, while the ordinate shows the solidification or coagulation. The parallel to the abscissa, which is denoted by α , means the end point of the measurement in the coagulometer.
Die mit 1 bezeichnete Kurve zeigt den Verlauf der Fibrinbildung bei einer Probe, die aus Fibrinogen, Urokinase und Thrombin besteht (ohne Plasmin). Bei dem Ausführungsbeispiel ist die Messung so ausgelegt, daß die Bildungsgeschwindigkeit des Fibrins» mäßig schneller verläuft als die Abbaugeschwindigkeit. Bei normalem Plasminogengehalt (10O0Zo) ergibt sich die Kurve 3, welche die FibrinbiJdung bei einer Probe aus Fibrinogen, Plasmin (100»/»), Urokinase und Thrombin wiedergibt.The curve labeled 1 shows the course of fibrin formation in a sample which consists of fibrinogen, urokinase and thrombin (without plasmin). In the exemplary embodiment, the measurement is designed in such a way that the rate of formation of the fibrin is moderately faster than the rate of breakdown. In normal plasminogen (10O 0 Zo), the curve 3 which (100 "/") represents the FibrinbiJdung in a sample from fibrinogen, plasmin, urokinase and thrombin yields.
Die Kurve 2 zeigt die Bildung von Fibrin in einer Probe aus Fibrinogen, Urokinase und Thrombin, sowie Plasmin in 50*/»iger Verdünnung.Curve 2 shows the formation of fibrin in a sample from fibrinogen, urokinase and thrombin, as well Plasmin in 50% dilution.
Die Graphik zeigt, daß die Verminderung des Plasminogen» durch die Bestimmung einer für die Meßgenauigkeit ausreichenden Verkürzung der Fibrinbildungszcit erreicht wird.The graph shows that the decrease in plasminogen "by determining one for the Measurement accuracy sufficient shortening of the fibrin formation Zcit is achieved.
Eine Eichkurve erhält man, wenn man ά;ζ Meßzeiten, die durch Verdünnung von Plasminogenproben gesunder Versuchspersonen gewonnen werden, in ein doppelt logarithmisches Millimeterpapier gegen die prozentuale Verdünnung aufträgt. Die Punkte ergeben dann annäherungsweise eine Gerade.A calibration curve obtained when one ά; ζ measurement times, the healthy by diluting Plasminogenproben subjects are obtained applying in a log-log graph paper against the dilution percentage. The points then approximate a straight line.
Nachfolgend wird ein praktisches Beispiel für das erfindungsgeinüße Meßverfahren beschrieben:A practical example of the measuring method according to the invention is described below:
Zunächst erfolgt die Zubereitung von antiplasminfreiem Plasma. Dazu wird Citratplasma etwa I Minute mit 3 Teilen Iso-amy-alkohol geschüttelt und anschließend bei 3000 U/min für etwa 30 Minuten zentrifugiert. Der Überstand wird abgehebert und verworfen. Darauf ist eine erneute Zentrifugation fur etwa 3G Minuten bei etwa 4° C erforderlich. Danach wird der Restüberstand verworfen.First, the preparation of antiplasmin-free takes place Plasma. To do this, citrate plasma is shaken with 3 parts iso-amy alcohol for about 1 minute and then shaken centrifuged at 3000 rpm for about 30 minutes. The supernatant is siphoned off and discarded. Then another centrifugation for about 3G minutes at about 4 ° C is necessary. After that the remaining supernatant is discarded.
Die eigentliche Messung geschieht wie folgt:The actual measurement is done as follows:
Vorgegeben wird eine definierte Menge Fibrinogen (z. B. 0,1 ml Humanfibnnogen plasminogenfrei der Firma Behringwerke in einer Konzentration von 200 mg·/·). Eine Probe an ti plasmin freies Patienten-A defined amount of fibrinogen (e.g. 0.1 ml human fibnogen, plasminogen-free) is specified Behringwerke in a concentration of 200 mg · / ·). A sample of ti plasmin-free patient
«o plasma wird hinzugefügt (z. B. 0,1 ml). Hierauf gibt man einen Plasminaktivator hinzu (z. B. I E Urokinase in 0,1 ml). «O plasma is added (e.g. 0.1 ml). Thereupon a plasmin activator is added (e.g. I U urokinase in 0.1 ml).
Nach einer konstanten Aktivierungszeit (z. B. 30see. bei 37°C) wird Thrombin zugefügt (z.B.After a constant activation time (e.g. 30 sec. At 37 ° C), thrombin is added (e.g.
Test-Thrombin der Firma Behringwerke, 0,3 E in 0,1 ml) und das automatische Zählwerk des Koagulators wird in Gang gesetzt.Test thrombin from Behringwerke, 0.3 U in 0.1 ml) and the automatic counter of the coagulator is set in motion.
Auf der zuvor ermittelten Eichkurve wird das zur Meßzeit zugehörige Plasminogen in Prozent abge-The plasminogen associated with the measurement time is shown in percent on the calibration curve determined beforehand.
ao lesen.ao read.
Die durch das erfindungsgemäße Verfahren erzielbaren Vorteile bestehen vor allem darin, daß die in den meisten Kliniken vorhandenen üblichen Koagulometer zur Durchführung des erfindungsgemäßenThe advantages that can be achieved by the process according to the invention are, above all, that the in common coagulometers available in most clinics for performing the invention
»5 Verfahrens benutzt werden können. Der Test ist auch sehr einfach in der Handhabung, so daß er in den Labors von medizinisch technischen Assistentinnen durchgeführt werden kann.»5 procedures can be used. The test is also very easy to use, so that it can be used in laboratories by medical technical assistants can be carried out.
Die Verkürzung der Meßzeit gegenüber den eingangs als bekannt vorausgesetzten Verfahren macht das erfindungsgemäße Verfahren für Routinezwecke geeignet. Das erfindungsgemäße Verfahren ist außerdem nennenswert billiger.The shortening of the measuring time compared to the initially assumed known method makes the method according to the invention is suitable for routine purposes. The inventive method is also significantly cheaper.
Durch das erfindungsgemäße Verfahren wird es möglich, die Tests in der klinischen Diagnostik z. B. in Form käuflicher Testsets einzuführen, um z. B. durch Dosierung von Streptokinase nach der Höhe des aktuellen Plasminogenspiegels diese Therapie zu verbessern und Komplikationen zu verringern.The inventive method makes it possible to carry out the tests in clinical diagnostics, for. B. in the form of commercial test sets to introduce z. B. by dosing streptokinase according to the altitude of the current plasminogen level to improve this therapy and reduce complications.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen1 sheet of drawings
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