DE2319247A1

DE2319247A1 - Physiological properties of fresh blood cells - by analysis with coulter counter-type apparatus

Info

Publication number: DE2319247A1
Application number: DE2319247A
Authority: DE
Inventors: Hans Juergen Nitsche; Juergen Dr Ing Schulz
Original assignee: Licentia Patent Verwaltungs GmbH
Current assignee: Licentia Patent Verwaltungs GmbH
Priority date: 1973-04-16
Filing date: 1973-04-16
Publication date: 1974-10-31
Also published as: IT1040550B; IL44597A0; SE405174B; CA1010955A; JPS5042896A; NL7404864A; CH591697A5; JPS5712093B2; IL44597A

Abstract

The props. are determined on a fresh cell suspension in which the resistivity of the analysis liquid is recorded by means of an electric current flowing through the liquid and the subsequent analysis is effected by means of the discrete intensities which impart a notable variation in the resistivity of the liquid. When results are plotted, there is a pronounced elbow on the curve for each type of cell, and it is possible to differentiate between different types of cell. This is impossible after cells have been fixed, e.g., on a slide.

Description

"Verfahren zur Ermittlung physiologischer Eigenschaften nativer Blutzellen und Anordnungen zur Durchführung des Verfahrens" Zusatz zu Patent . (AZ.: P 22 19 778.0) Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Ermittlung physiologischer Eigenschaften nativer lebender Blutzellen, die in einer Untersuchungsflüssigkeit suspendiert sind, und auf Anordnungen zur Durchführung des Verfahrens. "Method for the determination of physiological properties of native blood cells and arrangements for carrying out the procedure "Addendum to Patent. (AZ .: P 22 19 778.0) The invention relates to a method for determining physiological Properties of native living blood cells in a test liquid are suspended, and on orders to conduct the proceedings.

Unter den Namen seines Erfinders - Coulter - ist ein elektronisch arbeitendes Meßverfahren zur Bestimmung der Volumengrößen von in einer elektrolytischen Untersuchungsflüssigkeit suspendierten Partikeln bekannt, das mit Hilfe von zwei Gefasen arbeitet, die durch eine kleine Meßöffnung miteinander verbunden sind. Die Untersuchungsflüssigkeit fließt durch diese MeBöffnung vom dem einen Gefäß in das andere. In die Untersuchungsflüssigkeit tauchen zu beiden Seiten der Meßöffnung Elektroden unterschiedlichen Potentials ein, die an einen elektrischen Meßkreis angeschlossen sind Die Leitfähigkeit der Untersuchungsflüssigkeit zwischen den Elektroden ändert s sich beim Durchtritt eines Partikels durch die Meß öffnung proportional zu dem Volumen des Partikels, womit eine Volumenbestimmung der in der Untersuchungsflüssigkeit suspendierten Partikel möglich ist.Under the name of its inventor - Coulter - is an electronic one working measuring method for determining the volume sizes of in an electrolytic Examination fluid suspended particles known that with the help of two Gefasen works, which are connected to one another by a small measuring opening. the The test liquid flows through this measuring opening from one vessel into the other. Immerse in the test liquid on both sides of the measuring opening Electrodes of different potential a, the to an electric Measuring circuit are connected The conductivity of the test liquid between the electrodes changes when a particle passes through the measuring opening proportional to the volume of the particle, whereby a volume determination of the in the Examination liquid suspended particles is possible.

Die von Coulter zur Durchführung seines Verfahrens ursprünglich angegebene Anordnung wurde inzwischen weiterentwickelt.The one originally specified by Coulter to carry out his procedure Arrangement has since been further developed.

So ist z. 3. aus der deutschen Auslegeschrift 1 805 512 nach dem Coulter-Verfahren arbeitende Anordnung bekannt, bei der die Partikel nicht der Elektrolytflüssigkeit in de@ vefaß vor der Neßöffnung beigemengt sind, sondern der Meßöffnung durch eine eigens dafür vorgesehene Zuführungseinrichtung zugeleitet werden, die eine Austrittsöffnung in sehr geringen Abstand vor der Meßöffnung hat, so daß der in die Meßöffnung einfließende Elektrolyt Probensuspension (Partikelsuspension) aus der Austrittsöffnung der Zuführungseinrichtung heraussaugt.So is z. 3. from the German Auslegeschrift 1 805 512 according to the Coulter method working arrangement known in which the particles are not the electrolyte liquid are added in de @ vefaß in front of the opening, but the measuring opening through a specially provided feed device are fed to an outlet opening at a very small distance in front of the measuring opening, so that the flowing into the measuring opening Electrolyte sample suspension (particle suspension) from the outlet opening of the feed device sucks out.

Es findet dann ein hydrodynamischer Fokussiervorgang statt, durch den bewirkt wird,- daß alle zu bestimmenden Partikel nahezu in Zentrum der Meßöffnung durch diese hindurch wandern Ritzels einer derartigen Anordnung wird gegenüber der Genauigkeit, die mittels der ursprünglich von Coulter angegebenen rnordnung erzielbar ist, eine erhebliche Steigerung den Meßgenauigkeit erreicht.A hydrodynamic focusing process then takes place which is effected - that all the particles to be determined are almost in the center of the measuring opening through this wander through the pinion of such an arrangement is opposite to the Accuracy that can be achieved using the order originally specified by Coulter is, a considerable increase in the measurement accuracy is achieved.

Bei der Bestimmung des mittleren Zeilvolumens lebender Zellen, insbesondere bei der Bestimmung des mittleren Zeilvolumens von Säugetiererythrozyten, ergaben sich in der Praxis bisher Diskrepanzen zwischen den Ergebnissen der elektronischen Voumenbestimmung nach dem Coulter-Verfahren und den Ergebnissen der physikalischen Bestimmung über Hämatokrit und Zellzahl; es wurde eine Unterbewertung der Zellvolumina bei der Messung nach dem Coulter-Verfahren festgestellt. Nan hat dies zunächst allein anf die Form und Verformbarkeit der zu untersuchenden Zellen zurückgeführt und entsprechende Korrekturen in den Meßergebnissen vorgesehen, denn der Einfluß von Form und Verformbarkeit der Zellen ist zweifellos gegeben. Dennoch wurden nach diesen Xorrekturen bei der Messung nativer Zellen noch immer Diskrepanzen der genannten Art festgestellt; diese Diskrepanzen traten bei der Messung fixierter Zellen allerdings nicht auf.When determining the mean cell volume of living cells, in particular in determining the mean cell volume of mammalian erythrocytes In practice so far there have been discrepancies between the results of the electronic Volume determination according to the Coulter method and the results of the physical Determination via hematocrit and cell count; it became an undervaluation of the cell volumes detected when measured by the Coulter method. Nan has this alone at first The shape and deformability of the cells to be examined are traced back and corresponding Corrections are provided in the measurement results because of the influence of shape and deformability of cells is undoubtedly given. Nevertheless, after these corrections were made in the Measurement of native cells still found discrepancies of the type mentioned; these However, there were no discrepancies in the measurement of fixed cells.

Patent Dem Haupt/ liegt die Aufgabe zugrunde, ein vom Coulter-Verfahren ausgehendes neuartiges Verfahren zur Ermittlung physiologIscher Eigenschaften nativer Blutzellen anzugeben, die in er Untersuchungsflüssigkeit suspendiert sind. Patent The main / is based on the task of a von Coulter process outgoing novel process for the determination of physiological properties of native Indicate blood cells that are suspended in the test fluid.

patent Diese Aufgabe wird gemäß dem Haupt/ dadurch gelöst, daß der spezifische elektrische Widerstand der Untersuchungsflüssigkeit als Funktion eines durch sie fließenden elektrischen Strones auf genommen wird und jene diskreten Stromstärken für die weitere Auswertung verwendet werden, bei denen eine merkliche Änderung des spezifischen elektrischen Widerstandes der Untersuchungsflüssigkeit festgestellt wird. patent This object is achieved according to the main / in that the specific electrical resistance of the liquid under investigation as a function of a electric flowing through them Strones is taken on and those discrete current intensities are used for further evaluation in which a noticeable change in the specific electrical resistance of the test liquid is detected.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, vorteilhafte Wei terbildungen des Gegenstandes des hauptpatentes anzugeben.The invention has for its object to develop advantageous Wei indicate the subject of the main patent.

Die Lösung dieser Aufgabe ist der folgenden Beschreibung und den Patentansprüchen entnehmbar.The solution to this problem is the following description and the claims removable.

Im Sinne der dem Eauptoatent zugrunde liegenden und der vorliegenden Erfindung wird das mittlere Zellvolumen nativer Blutzellen zweckmäßigerweise aus dem Gipfelwert der Volumenverteilungskurve oder dem Mittelwert der Verteilung als Funktion des durch die Meßöffnung fließenden elektrisctnen Stromes (Meßstromes) aufgenommen und als Maß fur die gesuchte Eigenschaft ein nichtlinearer Zusammenhang zwischen dem mittleren Zellvolumen und dem Meßstrom festgestellt.In the sense of the main patent underlying and the present Invention, the mean cell volume of native blood cells is expediently determined the peak value of the volume distribution curve or the mean value of the distribution as Function of the electrical current flowing through the measuring opening (measuring current) and a non-linear relationship as a measure of the property sought determined between the mean cell volume and the measuring current.

Es wurde eingangs schon erwähnt, daß man bei der Partikel volumenanalyse nach dem Coulter-Verfahren in dem bei einer Coulter-Anordnung verwendeten elektrischen Meßkreis volumenproportionale oder nahe zu volumenproportionale Stromänderungen beim Durchtritt eines Partikels durch die Neßöffnung erhält. In der Praxis geht man dabei so vor, daß man eine vorgegebene bestimmte Potentialdifferenz zwischen den beiden Elektroden, die zu beiden Seiten der Neßöffnung in der Elektrolytflüssigkeit angeordnet sind, einstellt, wodurch sich ein bestimmter Strom, der durch die Elektrolytflüssigkeit von der einen Elektrode zur anderen durch die Meßöffnung hindurchfließt, ergibt. Bei konstanter Potentialdifferenz zwischen den beiden Elektroden ändert sich diese Stromstärke beim Durchtritt eines Partikels durch die Heßöffnung, sofern die Leitfähigkeit des Partikels eine andere ist als die Leitfähigkeit des das Partikel 1«^gebenden Elektrolyten. Man mißt also im Grunde einen bestiften elektrischen Widerstand zwischen den beiden Elektroden, der sich verändert, wenn ein Partikel sich in der Meßöffnung befindet. Dieser Widerstand ist selbstverständlich von der Art des verwendeten Elektrolyten und von der Art, Größe und Anzahl der in diesem suspendierten Partikel abhängig.It was already mentioned at the beginning that the particle volume analysis according to the Coulter process in the electrical one used in a Coulter arrangement Measuring circuit volume-proportional or almost too volume-proportional current changes when a particle passes through the opening. In practice it works you do so before that you have a predetermined certain potential difference between the two electrodes on either side of the opening in the electrolyte liquid are arranged, adjusts, whereby a certain current flowing through the electrolyte liquid flows from one electrode to the other through the measuring opening, results. If the potential difference between the two electrodes remains constant, this changes Amperage when a particle passes through the opening, provided the conductivity of the particle is different from the conductivity of the one giving the particle 1 «^ Electrolytes. So you basically measure an electrical resistance between the two electrodes, which changes when a particle enters the measuring port is located. This resistance is of course dependent on the type of electrolyte used and on the type, size and number of particles suspended in it.

Vergrößert man die Potentialdifferenz zwischen den beiden Elektroden, so vergrößert sich linear hiermit auch der Strom durch den Elektrolyten, sofern nicht dessen Leitfähigkeit t durch e re durch höheren Strom bewirkte Erwärmung verändert wird.If one increases the potential difference between the two electrodes, so the current through the electrolyte increases linearly, if so its conductivity is not changed by heating caused by higher currents will.

In analoger Weise kann man auch zwischen den beiden Elektroden einen konstanten Meßstrom zwischen den beiden Elektroden einsteller, wodurch sich bei Durchtritt eines Partikels durch die Neßöffnung die elektrische Potentialdifferenz zwischen den Elektroden ändert.In an analogous way, one can also place one between the two electrodes constant measuring current between the two electrodes adjuster, whereby at If a particle passes through the opening, the electrical potential difference changes between the electrodes.

Entsprechend der Stromvergrößerung im Elektrolyten vergrößern sich auch die Stromunterschiede im Meßkreis beim Durchtritt eines Partikel durch die Meßöffnung, Hat-man dem Elektrolyten z. 3. Latexpartikel beigemischt, so stellt man fest, das die Stromänderungen linear mit dem Strom im Meßkreis anwachsen.According to the increase in current in the electrolyte, increase also the current differences in the measuring circuit when passing through of a particle through the measuring opening, Has-you the electrolyte z. 3. latex particles mixed in, so you can see that the changes in current increase linearly with the current in the measuring circuit.

Bewertet man nur das Verhältnis von Stromänderungen zu Strom ~: Meßkreis, so geht der absolute spezifische Widerstand des eßkreises, d h. der Elektrolytenstrecke im Meßkreis, nicht e in die Messung ein. Einflüsse durch Temperaturerhöhungen es Elektrolyten sind hiermit ausgeschaltet. Es findet dam eine Bewertung der relativen Änderung des spezitischen Widerstandes der Elektrolytstrecke in der Meßöffnung statt.If one only evaluates the ratio of current changes to current ~: measuring circuit, so goes the absolute specific resistance of the eßkreis, ie. the electrolyte line in the measuring circuit, not e in the measurement. Influences by temperature increases it Electrolytes are thereby switched off. There is then an evaluation of the relative Change of the specific resistance of the electrolyte path in the measuring port instead.

Damit ist eine nach dem Coulter-Verfahren arbeitende Anordnung in hervorragender Weise geeignet, bei der Durchführung eines Verfahrens zur Ermittlung von physiologischen Eigenschaften nativer Blutzellen herangezogen zu werden. Führt -an nämlich die soeben am Beispiel von Latexpartikeln erläuterte Messung mit nativen Blutzellen durch, so stellt man fest, da das Verhältnis von Stromänderung zu Stromstärke für eine vorgegebene Partikel art, z. 3. Erythrozyten, nicht unabhängig von der eingestellten Stromstärke ist. Das bedeutet, daß die Leitfähigkeit oder der spezifische Widerstand des sich in der Meß öffnung befindenden Untersuchungsflüssigkeits-Volumens, in dem ein Partikel enthalten ist, nicht unabhängig von der Strom stärke ist. hiermit erklärt sich auch die eingangs erwähnte, zwischen nativen und fixierten Zellen auftretende Diskrepanz.Thus, an arrangement working according to the Coulter method is in eminently suited to performing a method of identification to be drawn from physiological properties of native blood cells. Leads - namely the measurement with native, just explained using the example of latex particles Blood cells pass through, it is found that there is the ratio of change in current to current strength for a given particle type, e.g. 3. Erythrocytes, not independent of the set amperage. This means that the conductivity or the specific Resistance of the test liquid volume in the measuring opening, by doing a particle is contained, not independent of the current strength is. this also explains the aforementioned between native and fixed cells occurring discrepancy.

DIe genannten Stromänderungen werden beim Coulter-Verfahren n Form von Impulsen erfaßt. Man braucht also nur die Impulshöhen oder deren mittelwert über der Stromstärke aufzutragen, festzustellen, in welcher Weise die Impulshöhen von der eingestellten Stromstärke abhängig sind. Dabei stellt man fest; daß von der Stromstärke Null beginnend die Impulse zunächst linear mit der Stromstärke anwachsen. Ab einer bestimmten Stromstärke wachsen die Impulse jedoch nicht in gleichem Maße wie die Stromstärke an, sondern langsamer.The current changes mentioned are n form in the Coulter method detected by pulses. So you only need the pulse heights or their mean value plotted against the current strength, determine in which way the pulse heights depend on the current strength set. One finds out; that of Starting with a current strength of zero, the pulses initially increase linearly with the current strength. However, above a certain current strength, the impulses do not grow to the same extent like the amperage, but slower.

Trägt man die Funktion in einer Graphik auf, so stellt man fest, daß für jede Art von untersuchten Blutzellen ein ausgeprägter Knick im Rurvenverlauf vorhanden ist. Die Lage dieses Knick.-punktes und die Steigung des weiteren geradlinigen Verlaufs sind zwei Parameter und lassen für die einzelne Blutzellart Rückschlüsse auf deren Zustand zu. So wurde festgestellt, daß diese Parameter bei verschiedenen Personen verschieden sind. Es konnte auch festgestellt werden, daß die Knickpunkte für verschieden große Zellen und für die verschiedenen Blutzellarten bei verschiedenen Stromstärken liegen.If you plot the function in a graph, you can see that a pronounced kink in the course of the curve for each type of blood cell examined is available. The position of this kink point and the slope of the further straight line There are two parameters of the course and allow conclusions to be drawn for the individual blood cell type towards their condition. It was found that these parameters were at different People are different. It was also found that the break points for cells of different sizes and for different types of blood cells in different Currents lie.

Diese Phänomene, die bei fixierten Blutzellen nicht auftreten, sind vermutlich dadurch bedingt, daß bei höheren Stromstärken.These are phenomena that do not occur in fixed blood cells probably due to the fact that at higher currents.

(das bedeutet bei einer höheren Feldstärke, der die einzelne Blutzelle ausgesetzt ist), eine Änderung im Isolationsverhalten der Blutzellen eintritt. Wahrscheinlich findet ein Ionendurchbruch durch die Zellmembran statt, durch den die Leitfähigkeit der untersuchten Blutzelle erhöht wird.(This means at a higher field strength that the individual blood cells is exposed), a change in the isolation behavior of the blood cells occurs. Probably an ion breakthrough takes place through the cell membrane, through which the conductivity the blood cell being examined is increased.

dem Hauptpatent und der vorliemenden zugrunde liegenden Der genannte Effekt, der gemäß der/Erfindung für die Bestimmung physiologischer Eigenschaften nativer Blutzellen herangezogen wird, wurde zuvor noch nicht beobachtet und veröffentlicht. Dies mag seine Ursache darin haben, das oe bislang verwendeten Methoden der Leitfähigkeitsuntersuchung von-Blut die hohen Feldstärken, die zu dem vermuteten Ionendurchbruch durch die Zellmembran führen, nicht auftreten. 3vi Messungen nit einer nach dem Coulter-Verfahren arbeitenden '-crdnung werden jedoch aufgrund der geringen Abmessungen der Meßöffnung bereits bei verhältnismäßig niedrigen Spannungen, eIner Potentialdifferenz zwischen den beiden Elektroden von 20 Volt in der Meßöffnung Feldstärken von im Beispielsfall etwa 2 kV/cm hervorgerufen. Die Ströme, die dabei fließen, liegen in der Größenordnung von etwa 1 mA. Die in Wärne umgesetzte Energie in der Meßöffnung ist daher denkbar gering. the main patent and the present underlying Effect according to the invention for the determination of physiological properties native blood cells has not been observed or published before. This may be due to the above methods of conductivity investigation used so far von-Blut the high field strengths that lead to the suspected ion breakthrough by the Cell membrane lead, not occur. 3vi measurements with one according to the Coulter method working '-crdnung are due to the small dimensions of the measuring opening even at relatively low voltages, there is a potential difference between the two electrodes of 20 volts in the measuring opening field strengths of in the example about 2 kV / cm. The currents that flow are of the order of magnitude of about 1 mA. The energy converted into heat in the measuring opening is therefore conceivable small amount.

Eine nach dem Coulter-Verfahren arbeitende Anordnung ist gemäß dem Hauptpatent und daher besonders geeignet, das Verfahren/ der vorliegenden Erfindung zu vo@@ziehen. Besonders vorteilhaft eignet sich hierzu eine nach dem Coulter-Verfahren arbeitende Anordnung, bei der die Partikel durch eine eigens dafür vorgesehene Zuführungseinrichtung der Meßöffnung zugeleitet werden. Der Elektrolyt in den Gefäß vor der Meßöffnung ist dabei partikelfrei. Die Zuführungseinrichtung weist eine Öffnung auf, die der Meßöffnung zugekehrt ist Die Partikel, die aus dieser Zuführungseinrichtung austreten, werden durch den in die Meßöffnung ein fließende@ Elektrolyten hydrodynamisch in das Zentrum der Meßöffnung hineinfokussiert. Dabei dann gemäß der Lehre der deutschen Auslegeschrift 1 806 512 der Abstand der Austrittsöffnung der Zuführungseinrichtung zur Meßöffnung derart klein gemacht werden, daß der in die Meßöffnung einfließende Elektrolyt die Probensuspension aus der Öffnung der Zuführungseinrichtung heraussaugt, wodurch die Fokussierung in das Zentrum der @eßöffnung besonders gut wird. Die durch die hydrodynamische Fokussierung erreichten Meßgenauigkeitssteigerungen sind erheblich, weil annähernd alle Zellen die gleiche Feldstärke in der Mittelachse der Meßöffnung durchlaufen, so daß ein scharfer Knick beim Einsetzen des transzellularen Ionenflusses entsteht.A working according to the Coulter process arrangement is according to the Main patent and therefore particularly suitable for the method / of the present invention pull to vo @@. One according to the Coulter method is particularly advantageous for this purpose working arrangement in which the particles are fed through a specially provided feed device are fed to the measuring opening. The electrolyte in the vessel in front of the measuring opening is particle-free. The feed device has an opening which the The measuring opening is facing The particles that emerge from this feed device are hydrodynamically in the center of the measurement opening is focused in. Then according to the teaching of the German Auslegeschrift 1 806 512 the distance between the outlet opening of the feed device to the measuring opening are made so small that the flowing into the measuring opening Electrolyte sucks the sample suspension out of the opening of the feed device, whereby the focus in the center of the opening is particularly good. By the hydrodynamic focussing achieved increases in measurement accuracy are considerable, because almost all cells have the same field strength in the central axis of the measuring opening run through, so that a sharp kink at the onset of the transcellular ion flow arises.

nine Anordnung zur Durchführung des beschriebenen Verfahrens besteht daher aus einer an sich bekannten, nach dem Coulter-Verfahren arbeitenden Anordnung mit oder ohne getrennte Partikelzuführung und einer Einrichtung, mit der entweder der genannte Potentialunterschied zwischen den Elektroden, die bei diesen Anordnungen vorgesehen sind,oder der genannte Meßstrom durch die Meßöffnung veränderbar ist. Vorzugsweise ist im elektrischen Meßkreis eine Auswerteeinrichtung vorgesehen, deren Hilfe die Impulsamplituden, d. h. die Stromänderungen entsprechend der verschiedenen in der Probensuspenslon vorhandenen Blutzellpopulationen getrennt erfaßbar sind und mit der eine Zuordnung der Impulsamplituden zu dem jeweils herrschener Potentialunterschied zwischen den Elektroden bzw. zur augenblicklichen MeBstrom durchführbar ist. Mit einer solchen hnordnung ist das Meßverfahren weitgehend automatisierbar.nine arrangement for performing the method described exists therefore from an arrangement which is known per se and operates according to the Coulter method with or without separate particle feed and a device with which either the mentioned potential difference between the electrodes in these arrangements are provided, or said measuring current can be changed through the measuring opening. An evaluation device is preferably provided in the electrical measuring circuit Help the momentum amplitudes, d. H. the current changes according to the various Blood cell populations present in the sample suspension can be detected separately and with the one assignment of the pulse amplitudes to the respectively prevailing potential difference can be carried out between the electrodes or for the instantaneous measurement current. With With such an arrangement, the measuring process can be largely automated.

-e bereits erwähnt, findet die Änderung im Leitfähigkeitsverhalten der Blutzellen sehr plötzlich statt. In den Kurven, die man aufnehmen kann, äußert sich das in einen Knick. Die Lage der Knickpunkte und die Steigung des geradlinigen Verlaufs hinter den Knick, d. h. in Richtung zu höheren Feldstärken bzw zu höheren MeBströmen gibt daher Aufschlüsse über die Art und den Zustand der verschiedenen Blutzellen.-e already mentioned, the change takes place in the conductivity behavior of blood cells take place very suddenly. Expresses itself in the curves that one can take that in a kink. The location of the break points and the slope of the straight line Course behind the kink, d. H. in the direction of higher field strengths or higher Measurement currents therefore provide information about the nature and condition of the various Blood cells.

Aus der Steigung des Verlaufs oberhalb des Knickstromes bei steigendem lrießstrom kann die innere Leitfähigkeit der Zelle gemessen und damit z. B. bei roten Blutzellen ein Maß für die Hämoglobinkonzentration gefunden werden.From the slope of the curve above the kink current with increasing Lrießstrom can measure the internal conductivity of the cell and thus z. B. at red blood cells a measure of the hemoglobin concentration can be found.

Es genügt hierbei die Ermittlung der Impulshöhenverteilung und Ihres Mittelwertes bei einem Meßstrom unterhalb und zwei Werten oberhalb des Knickstromes.It is sufficient to determine the pulse height distribution and yours Average value for a measuring current below and two values above the knee current.

Dabei ist es zweckmäßig, mit der Erhöhung des Meßstromes ei Impulsverstärkung proportional zu reduzieren und nur die tbweichung von linearen Zusammenhang zwischen Impulshöhe und Meßstrom zu registrieren.It is useful to increase the measuring current ei pulse amplification to reduce proportionally and only the deviation of linear relationship between To register pulse height and measuring current.

gemäß dem Hauptpatent sowie Das Verfahren nach der Erfindung und/ vorteilhafte Anordnungen zur Durchführung dieser Verfahren werden anhand der Zeichnungen nunmehr erläutert. according to the main patent and the method according to the invention and / advantageous arrangements for carrying out these methods are based on the drawings now explained.

Figur 1 zeigt den Widerstandsverlauf einer mit Blutzellen versetzten Elektrolytflüssigkeit, wenn man ihn unter gegeben nen Bedingungen bei verschiedenen Stromstärken aufnimmt.FIG. 1 shows the resistance profile of a blood cell mixed with blood Electrolyte liquid, if you take it under given conditions at different Absorbs currents.

Dabei zeigt sich, daß bei verschiedenen Stromstärken, le in der Figur 1 mit II und I2 bezeichnet sind, eine sprunghafte Änderung des Widerstandes auftritt. Die Ursache hierin wirc - wie bereits erwähnt - darin gesehen, daß die Leltfähigkeit der Blutzellen erhöht und damit der Widerstand der gesamten Untersuchungsflüssigkeit herabgesetzt wird.It can be seen that at different currents, le in the figure 1 are designated by II and I2, a sudden change in resistance occurs. The cause here we - as already mentioned - seen in it, that the capacity of the blood cells increases and thus the resistance of the whole Examination liquid is reduced.

Figur 2 zeigt eine nach dem Coulter-Verfanren arbeitende Anordnung mit getrennter Partikel zuführung. Von einen Gefäßraum 1 fließt Elektrolytflüssigkeit 2 durch eine kleine Meßöffnung 3 in einen Gefäßraum 4. In geringem Abstand vor aer Meßöffnung 3 ist die Austrittsöffnung einer Zuführungseinrichtung 5 vorgesehen, in der eine Blutprobe enthalten ist. Die in die Meßöffnung 3 einfließende Elektrolytflüssigkeit 2 saugt beim Vorbeifließen an der Austrittsöffnung der Zuführungseinrichtung 5 die Blutprobe aus dieser Zuführungseinrichtung heraus und transportiert sie im Zentrum der Meßöffnung 3 durch diese hindurch. In die Elektrolytflüssigkeit zu beiden Seiten der Meßöffnung tauchen Elektroden 6 und 7 ein, die gegeneinander unterschiedliches Potential aufweisen und an einen elektrischen Meßkreis angeschlossen sind. Ire solche Anordnung ist z. B. in der deutschen Auslegeschrift 1 805 512 beschrieben. Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens ist jedoch in der elektrischen Einrichtung 8, mit deren Hilfe die Messungen durchgeführt werden, eine Einrichtung vorgesehen, mit deren Hilfe die Potentialdifferenz bzw. der Meßstrom zwischen den Elektroden 6 und 7 verändert werden kann. Weiterhin sind in der Einrichtung 8 Mittel vorgesehen, lt deren Silfe die durch das Hindurchtreten von Partikeln durch die Meßöffnung 3 hervorgerufenen Stromänderungen bei jeder eingestellten Potentialdifferenz oder jedem M@ßstromwert festgehalten werden können, um sie den verschiedenen Blutzellarten zuordnen zu können. Weiterhin sind in der Einrichtung 8 Mittel vorgesehen, die als Funktion der Potentialdifferenz zwischen den Elektroden 6 und 7 bzw. als Funktion des Meßstromes die absoluten oder relativen Stromänderungen für die einzelnen Blutzellenarten aufnehmen und diejenigen Parameter festhalten, die für die Beurteilung einzelner Zelleigenschaften aus der sprunghaften Änderung im Verhalten der Stromänderungen von Bedeutung sind.FIG. 2 shows an arrangement operating according to the Coulter method with separate particle feed. Electrolyte fluid flows from a vessel space 1 2 through a small measuring opening 3 into a vascular space 4. At a short distance in front of aer Measuring opening 3 is the outlet opening of a feed device 5, which contains a blood sample. The electrolyte liquid flowing into the measuring opening 3 As it flows past the outlet opening of the feed device 5, 2 sucks the Blood sample out of this feed device and transports it to the center the measuring opening 3 through this. Into the electrolyte fluid on both sides electrodes 6 and 7, which differ from one another, are immersed in the measuring opening Have potential and are connected to an electrical measuring circuit. Irish such Arrangement is z. B. in the German Auslegeschrift 1 805 512 described. To carry out the method according to the invention is, however, in the electrical device 8, with the help of which the measurements are carried out, a facility provided with whose help the potential difference or the Measuring current between the Electrodes 6 and 7 can be changed. There are also 8 resources in the facility provided, lt their silfe the by the passage of particles through the Measuring opening 3 caused current changes at each set potential difference or every measured current value can be recorded in order to differentiate it in the different blood cell types to be able to assign. Furthermore, means are provided in the device 8, which as Function of the potential difference between electrodes 6 and 7 or as a function of the measuring current, the absolute or relative current changes for the individual types of blood cells record and record those parameters that are necessary for the assessment of individual Cell properties from the sudden change in the behavior of the current changes are important.

Die elektrische Einrichtung 8 in Fig. 2 besteht einerseits zur Versorgung des Detektors aus einem Strom- bzw. Spannungserzeuger, aessen Ausgangswerte vorzugsweise fernsteuerbar einstellbar sind, und andererseits aus einem Vorverstärker zur Vorverstärkung der Impulse aus dem Detektor und aus einen Impulshöhenanalysator üblicher Bauart, der einen Rauptverstärker zur Weiterverstärkung der Impulssignale, einen Analog-Digital-Wandler zur Bewertung der Impuishöhe durch einen Zahlenwert, einen Speicher zur Sortierung und Aufbewahrung dieser Zahlenwerte und einen Rechner zur Berechnung der ermittelten digitagen Verteilungskurve -sowie gegebenenfalls einen Oszillographen, Schreiber oder Drucker zur direkten Betrachtung oder Aufzeichnung der Verteilungskurve besitzt.The electrical device 8 in Fig. 2 is on the one hand for supply of the detector from a current or voltage generator, ate output values preferably can be adjusted remotely, and on the other hand from a preamplifier for preamplification the pulses from the detector and from a pulse height analyzer of conventional design, the one main amplifier for further amplifying the pulse signals, an analog-to-digital converter to evaluate the impulse height by a numerical value, a memory for sorting and storage of these numerical values and a calculator for calculation the determined digital distribution curve - as well as an oscilloscope, if applicable, Recorder or printer for direct viewing or recording of the distribution curve owns.

Ein Ausführungsbeispiel eines Stromgenerators zur Versorgung des Zell-Detektors mit fernsteuerbar geschaltetem Meßstrom, angeschlossenem stromempfindlichen Vorverstärker und fernsteuerbar veränderbarer Verstärkung-über einen geschalteten Spannungsteiler zeigt Fig. 3.An embodiment of a current generator for supplying the cell detector with remote controlled switched measuring current, connected current-sensitive preamplifier and remotely controllable variable gain via a switched voltage divider 3 shows.

Eine andere Verstellmöglichkeit des Meßstrom-Generators über ein schrittmotorgetriebenes Potentiometer zeigt Fig. 4.Another possibility of adjusting the measuring current generator using a stepper motor Potentiometer is shown in Fig. 4.

n Ausführungsbeispiel eines Spannungsgenerators zur Versorgung des Zell-Detektors mit fernsteuerbar geschalteter Meßspannung, angeschlossenem spannungs empfindlichen Vorverstärker und fernsteuerbar veränderbarer Verstärkung über einen geschalteten Spannungsteiler zeigt Fig. 5.n embodiment of a voltage generator for supplying the Cell detector with remote controlled switched measuring voltage, connected voltage sensitive preamplifier and remote controllable variable gain via one switched voltage divider is shown in FIG. 5.

Eine andere Verstellmöglichkeit des Meßspannungsgenerators über ein schrittmotorgetriebenes Potentiometer zur Verstellung der Referenzspannung zeigt Fig. 6.Another possibility of adjusting the measuring voltage generator via a shows stepper motor driven potentiometer for adjusting the reference voltage Fig. 6.

Das Blockschaltbild eines Impulshöhenanalysators mit on-line.The block diagram of a pulse height analyzer with on-line.

oder off-line angeschlossenem Digitalrechner und möglicher direkter Fernsteuerung von Meßstrom bzw. -spannung und Verstärkung der Detektorimpulse zeigt Fig. 7.or off-line connected digital computer and possibly more direct Remote control of measuring current or voltage and amplification of the detector pulses shows Fig. 7.

Die Speisung des Zell-Detektors mit konstantem Strom und die stromempfindliche Vorverstärkung der Impulse gemäß Fig. 3 ist für die vorliegende Aufgabenstellung vorteilhaft, da die temperaturabhängige Elektrolytleitfähigkeit nicht in das Meßergebnis eingeht. Fig. 3 zeigt ein Ausführungsbeispiel einer geeigneten Schaltung. Ein Konstantstromtransistor T1 wird mit einer festen negativen Basisspannung -U0 versorgt ( -30 .. -100 V), so daß die Kollektorbasisspannung des npn-Transistors oder eines äquivalenten Feldeffekt-Transistors in Meßbetrieb positiv und damit die Bedingung eines hohen nnenwiderstandes am Kellektor für die Konstantstromerzeugung erfüllt ist. Die Größe des Konstantstromes wird durch die Höhe der Fußpunktspannung -U1 (-100 ... -500 V), die Größe des Emitterwiderstandes R1, R2, R3 oder R4 und das Emitterpotential bestin, das sich aus der Summe der Basisspannung U0 und der Basis-Emitterspannung von T1 zusammensetzt. Es ist vorteilhalt, die Fußpunktspannung -U0 groß zu wählen, um den temperaturabhängigen Einfluß der Basis-Emitterspannung von 21 auf die Größe des Meßstromes klein zu halten.The supply of the cell detector with constant current and the current-sensitive Pre-amplification of the pulses according to FIG. 3 is necessary for the present task advantageous because the temperature-dependent electrolyte conductivity is not included in the measurement result comes in. Fig. 3 shows an embodiment of a suitable circuit. A constant current transistor T1 is supplied with a fixed negative base voltage -U0 (-30 .. -100 V), so that the collector base voltage of the npn transistor or an equivalent field effect transistor positive in measuring mode and thus the condition of a high internal resistance at the trowel gate for constant current generation is fulfilled. The size of the constant current is determined by the level of the base voltage -U1 (-100 ... -500 V), the size of the emitter resistance R1, R2, R3 or R4 and the emitter potential bestin, which is the sum of the base voltage U0 and the base emitter voltage of T1. It is advantageous to use the foot point tension -U0 to be chosen large in order to take into account the temperature-dependent influence of the base emitter voltage of 21 to keep the size of the measuring current small.

Der Detektor wurde in Fig. 3 stark vereinfacht dargestellt, weil zum Verständnis der Schaltung lediglich der Gleichstromwiderstand von Bedeutung ist, der durch die in den Elektrolyten 3 im Behälter 4 eingetauchten Elektroden 1 und 2 gebildet wird.The detector has been shown greatly simplified in Fig. 3 because for Understanding the circuit only the DC resistance is important, by the electrodes 1 and 4 immersed in the electrolyte 3 in the container 4 2 is formed.

Das Signal wird von der Elektrode 1 über den Koppelkondensator ç einem stromempfindlichen Vorverstärker zugeführt, während die Elektrode 2 auf Massepotential gelegt ist. Der stromempfindliche Vorverstärker wird vorzugsweise unter Verwendung eines Operationsverstärkers 5 mit ohmscher Gegenkopplung R aufgebaut.The signal is from the electrode 1 via the coupling capacitor ç a current-sensitive preamplifier supplied, while the electrode 2 at ground potential is laid. The current sensitive preamplifier is preferably used an operational amplifier 5 with ohmic negative feedback R constructed.

Die erfindungsgemäße fernsteuerbare und damit voll automatisierbare Verstellung des Meßstromes zur Erzeugung der gewünschten verschiedenen Arbeitspunkte des Detektors kann gemäß Fig. 3 zum einen mit Hilfe des fernsteuerbaren Schalters S1 in Form eines Relais und Einschaltung verschieden großer Emitterwiderstände R1, R2, R3 oder R4, zum anderen durch die Änderung der Gleichspannung -U1 von der Gleichspannungserzeugung her als auch durch Verändern der Basisspannung -U0 vorgenommen werden, wobei die letztgenannte Möglichkeit durch die Forderung ausreichend positiver Kollektor-Basisspannung für den Konstantstrombetrieb von 21 stark eingeschränkt ist. Die erfindungsgemäße fernsteuer bare und damit voll automatisierbare Verstellung der Impulsvestarkung kann gemäß Fig. 3 mit Rilfe des Spannungsteilers Rp, R6, R7, R8, der im Verstärkungszug hinter dem Vorverstärker vorzusehen ist, durchgeführt werden, wobei der fernsteuerbare Schalter S2 - wie durch die gestrichelten Wirkungslinien angedeutet - synchron und in Zuordnung mit dem Schalter S1 zur Meßstromverstellung ungeschaltet wird. Das geteilte Impulssignal wird dann dem Hauptverstärkereingang eines Impulshöhenanalysators zugeführt.The remote controllable and thus fully automatable according to the invention Adjustment of the measuring current to generate the various desired operating points of the detector can according to FIG. 3 on the one hand with the help of the remotely controllable switch S1 in the form of a relay and switching on emitter resistors R1 of various sizes, R2, R3 or R4, on the other hand by changing the DC voltage -U1 from the DC voltage generation and by changing the base voltage -U0, whereby the the latter possibility through the requirement of a sufficiently positive collector base voltage for constant current operation of 21 is severely restricted. The inventive Remotely controllable and therefore fully automated adjustment of the impulse intensity can according to Fig. 3 with the aid of the voltage divider Rp, R6, R7, R8, which is to be provided in the reinforcement train behind the preamplifier, can be carried out, where the remotely controllable switch S2 - as indicated by the dashed lines of action indicated - synchronously and in association with the switch S1 for measuring current adjustment is unswitched. The split pulse signal then goes to the main amplifier input fed to a pulse height analyzer.

Die Verstellung der Impulsverstärkung kann auch auf andere Weise, z 3. durch Umschaltung von Gegenkopplungswiderständen in Vorverstärker oder auch durch Umschaltung von Spannungsteilern oder Gegenkopplungswiderständen im Hauptverstärker des Impulshöhenanalysators, erreicht werden.The impulse gain can also be adjusted in other ways, z 3. by switching negative feedback resistors in preamplifiers or also by switching voltage dividers or negative feedback resistors in the main amplifier of the pulse height analyzer.

Fig. 4 zeigt darüber hinaus eine weitere Möglichkeit zur Verstellung des Meßstromes in einer Schaltung mit Konstantstromtransistor gemäß Fig. 3, wobei der Emitterwiderstand durch einen festen Widerstand R1' zur Strombegrenzung und ein mit Schrittmotor M fernsteuerbar angetriebenes Potentiometer R2 gebildet wird.Fig. 4 also shows a further possibility for adjustment of the measuring current in a circuit with a constant current transistor according to FIG. 3, wherein the emitter resistance by a fixed resistor R1 'for current limiting and a potentiometer R2 driven remotely by a stepper motor M is formed.

Eine andere Realisierungsmöglichkeit für die Speisung des Detektors zeigt Fig. 5, wobei der Einfluß der temperaturabhängigen Elektrolytleftfäh'igkeit auf die Impulshöhe durch spannungskonstante Speisung des Detektors und spannungsempfindliche Vorverstärkung beseitigt wurde.Another way of realizing the power supply to the detector FIG. 5 shows the influence of the temperature-dependent electrolyte conductivity on the pulse height through the voltage constant Power supply to the detector and voltage sensitive preamplification has been eliminated.

Diese Schaltung sieht eine steuerbare Gleichspannungsquelle 7 vor, die über den Arbeitswiderstand R9 einen Stromfluß durch den Detektor über die in den Elektrolyten 3 im Behälter 4 eingetauchten Elektroden 1 und 2 bewirkt. Der tatsächlich fließende Meßstrom kann in dieser Schaltung über den Spannungsabfall an R9 bestimmt werden. Zur Konstanthaltung der Detektorspannung - unabhängig von der Elektrolytleitfahigkeit - wird die Spannung an Elektrode 1 über R10 einem Differenzverstärker 6 zugeführt, der diese Spannung mit einer Referenzspannung vergleicht und eine mögliche Abweichung- zwischen beiden über eine Verstellung der steuerbaren Gleichspannungsquelle 7 ausregelt.This circuit provides a controllable DC voltage source 7, which via the load resistor R9 a current flow through the detector via the in the electrolyte 3 in the container 4 immersed electrodes 1 and 2 causes. That actually The measuring current flowing in this circuit can be determined via the voltage drop at R9 will. To keep the detector voltage constant - regardless of the electrolyte conductivity - the voltage at electrode 1 is fed to a differential amplifier 6 via R10, who compares this voltage with a reference voltage and identifies a possible deviation between the two by adjusting the controllable DC voltage source 7.

Um zu verhindern, daß hierbei auch die gewünschten Spannungssignale beim Durchtritt einer Zelle durch die Neßöufnung ausgeregelt werden, wurde der Regelkreis fur schnelle Änderungen durch die Zeitkonstante R10 . C2 unempfindlich gemacht.In order to prevent that the desired voltage signals be regulated when a cell passes through the new opening, became the control loop for quick changes through the time constant R10. C2 made insensitive.

Die Röhe der Referenzspannung bestimmt die gleichgroße Spannung am Detektor und wird durch Spannungsteilung von U0 über die Widerstandsteiler R13, R14, R15 und R16 und Umschaltung durch den fernsteuerbaren Schalter S1 verstellbar erzeugt. Die Referenzspannung könnte ebenso gemäß Fig. 6 über den Spannungsteiler R17' R18 und das mit Hilfe eines fernsteuerbaren, mittels eines Schrittmotors M' getriebenen Potentiometers R19 erzeugt werden.The height of the reference voltage determines the same voltage on the Detector and is generated by dividing the voltage of U0 via the resistor divider R13, R14, R15 and R16 and switching can be adjusted using the remote-controlled switch S1 generated. The reference voltage could also be shown in FIG. 6 via the voltage divider R17 ' R18 and that with the help of a remotely controllable, by means of a stepper motor M 'driven Potentiometer R19 can be generated.

Fig. 5 zeigt außerdem den Anschluß des spannungsempfindlichen Vorverstärkers 5 über den Koppelkondensator C1 an die Elektrode 1 zur Übertragung der durch Widerstandsänderungen in der Meßöffnung erzeugten Spannungsimpulse, Der Ausgang des Vorverstärkers ist wiederum mit einem Spannungsteiler R20 ... R23 versehen, dessen Abgriffe über den fernsteuerbaren und synchron nit geschalteten Schalter S2 zur erfindungsgemäßen, synchronen Verstellung der Impulsverstärkung vor Verbindung ri-..t dem nachfolwerden Hauptverstärker des Impulshöhenanalysators in vorgegebener Zuordnung ausgewählt werden.Fig. 5 also shows the connection of the voltage sensitive preamplifier 5 via the coupling capacitor C1 to the electrode 1 for the transmission of the changes in resistance voltage pulses generated in the measuring opening, the output of the preamplifier is again provided with a voltage divider R20 ... R23, whose taps are connected to the remotely controllable and synchronously switched switch S2 for the invention, synchronous adjustment of the pulse amplification before connection ri - .. t following Main amplifier of the pulse height analyzer selected in a given assignment will.

Der Impulshöhenanalysator gebräuchlicher und bekannter Bauart besteht - wie in Blockschaltbild der Fig. 7 dargestellt - aus einem Hauptverstärker 24, einem Analog-Digital-Wandler 25, einem Digital-Speicher 26 und einem Rechner 27 zur Auswertung der Meßergebnisse. Der Digital-Speicher 26 besitzt in vielen Anwendungsfällen darüber hinaus noch eine an sich bekannte direkte oszillographische Anzeige der gespeicherten Information, die für das Verständnis und die Durchführung des Erfindungsgedankens nicht wesentlich ist und in Fig. 7 deshalb weggelassen wurde.The pulse height analyzer of common and well-known type consists - as shown in the block diagram of FIG. 7 - from a main amplifier 24, an analog-to-digital converter 25, a digital memory 26 and a computer 27 for evaluating the measurement results. The digital memory 26 has many uses in addition, a direct oscillographic display of the known per se stored information necessary for understanding and carrying out the idea of the invention not is essential and has therefore been omitted in FIG.

Der Hauptverstärker 24 bringt die Detektorimpulse aus dem Vorverstärker 5 auf einen für die nachfolgende Analog-Digi-@tal-Wandlung geeigneten Pegel, der Analog-Digital-Wandler 25 wandelt die analoge Impulshöhe in wenigen Mikro sekunden in einen digitalen Zahlenwert, der digitale Speicher 26 sortiert diese Zahlenwerte, indem er zu jedem auftretenden Zahlenwert eine "Eins" additiv registriert und die Verteilungsfunktion der Impulshöhen bzw. in diesem speziellen Anwendungsfall der Zellvolumina als gespeicherte, aufsummierte "Einsen", der Zellzahl, über der Größe des Zahlenwertes vom Analog-Digital-Wandler, den Zellvolumen, übersichtlich wiedergibt. Diese Verteil lungsfunktion kann gemäß Fig. 7 vom Rechner 27 ferngesteuert ur verschieaene Werte des Meßstromes unterhalb und oberhalb des Knickstromes angefordert, die zugehörigen Verteilungsfunktionen digital von Speicher dem Rechner on-line oder off-lIne übergeben und der vollautomatischen Berechnung der Zelleigenschaften ninsichtlich Membran und Plasma zugeführt werden. Der Rechner kann dabei selbsttätig den Knickstrom bestimmen und danach die Festlegung der anderen Meßwerte optimal vornehmen.The main amplifier 24 brings the detector pulses from the preamplifier 5 to a level suitable for the subsequent analog-digital conversion, the Analog-digital converter 25 converts the analog pulse height in a few microseconds into a digital numerical value, the digital memory 26 sorts these numerical values, by registering a "one" additively for each numerical value that occurs and the Distribution function of the pulse heights or, in this special application, the Cell volumes as stored, summed up "ones", the cell number, over size of the numerical value from the analog-to-digital converter, the cell volume, clearly shows. This distribution function can be remotely controlled ur different according to FIG. 7 from the computer 27 Values of the measuring current below and above the knee current requested, the associated Distribution functions are transferred digitally from memory to the computer on-line or off-line and the fully automatic calculation of the cell properties with regard to the membrane and plasma are supplied. The computer can automatically determine the knee current and then optimally determine the other measured values.

Ebenso ist natürlich eine halbautomatische oder auch Eandausortung auf grund des erfindungsgemäßen Grundgedankens möglich. Likewise, of course, is a semi-automatic or site removal possible on the basis of the basic idea according to the invention.

in der Fig. 8 ist für verschiedene Partikel, die mit einer oei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens benutzbauen Anordnung untersucht wurden, der jeweils zugehörige Verlauf der sich ergebenden Stromänderungsamplituden A über der Stromstärke I, dem meßstrom aufgezeichnet. In dieser Darstellung bedeutet die gestricheite Linie den Kurvenverlauf für native Erythrozyten, wie man ihn normalerweise erwartet. Dieser Kurvenverlauf ist mit 9 bezeichnet. Dabei stellt man fest, daß ab einer bestimmten Stromstärke 1k dieser Verlauf nicht -ehr den Erwartungen folgt. Vielmehr werden aie Stromänderungsamplituden - nicht mehr in gleichem Umfange größer wie die Stromstärke. Im Kurvenverlauf bildet sich ein ausgesprochener Knick heraus, der in der Darstellung durch einen Pfeil hervorgeoben ist. Der zugehörige Kurvenverlauf ist mit 10 bezeichnet.in Fig. 8 is for different particles that with an oei Implementation of the method according to the invention usable building arrangement were examined, the associated course of the resulting current change amplitudes A over the current I, the measured current recorded. In this representation, the means dashed line shows the curve for native erythrocytes, as they are normally found expected. This curve profile is denoted by 9. It is found that from a certain current strength 1k this curve does not follow expectations. Rather, the current change amplitudes - no longer increase to the same extent like the amperage. A pronounced kink forms in the course of the curve, which is highlighted in the illustration by an arrow. The associated curve shape is denoted by 10.

ve- strichpunktierte Verlauf 11 gibt denjenigen an, den man bei er Messung fixierter Erythrozyten erhält. Bei diesen Zellen läßt sich der erwähnte Effekt nicht feststellen, die Stromänderungsamplituden beim Durchtritt der Partikel durch Meßöffnung wachsen linear mit der eingestellten Stromstärke. Die punktierte Linie e 12 schließlich ist eine solche, wie sie bei der Messung von Latexpartikeln gewonnen wird. Diese Partikel sind völlig neutral, daher zeigt die Kurve einen völlig linearen Verlauf. Bei nativen Erythrozyten läßt - wie bereits erwähnt - die Lage des Knickpunktes Rückschlüsse auf die untersuchte Zelle zu. Weiterhin ist in der Größe der Steigung nach dem Knickpunkt im Kurvenverlauf eine weitere Beurteilungsmöglichkeit für die untersuchte Blutzellart gegeben.dashed-dotted curve 11 indicates the one who is with him Measurement of fixed erythrocytes is obtained. With these cells the mentioned Effect does not determine the current change amplitudes when the particles pass through through the measuring opening grow linearly with the set current intensity. The dotted Finally, line e 12 is the same as when measuring latex particles is won. These particles are completely neutral, so the curve shows you completely linear course. In the case of native erythrocytes - as already mentioned - the situation the kink point to draw conclusions about the examined cell. Farther is Another possibility for assessment is the size of the slope after the break point in the curve given for the type of blood cell examined.

Claims

P a t e n t a n s p r ü c h e

Ö eriahren to determine the physiological properties of native blood cells, which are suspended in an examination liquid when it is carried out the specific electrical resistance of the liquid under investigation as a function an electric current flowing through it is absorbed and those discrete Amperages are used for further evaluation at which a noticeable Change in the specific electrical resistance of the liquid to be examined is established according to the Halptpatent. ... ... (AZ .: P 22 19 778.0), thereby characterized in that at least three discrete values of the measuring current or

the measuring voltage, at least one below the value for the residual current and at least two others above the knee current by hand or fully automatically can be set.

2. The method according to claim 1, characterized in that the reduced Incline in the course of the function between pulse height and measuring current or measuring voltage determined from the measuring points of this function determined by the edge or automatically and is used for the characterization of the cell plasma.

3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that simultaneously with the increase in the measuring current or

the measuring voltage a proportional reduction or a reduction of the measuring current (measuring voltage) a proportional increase in the pulse amplification is carried out fully automatically.

4- The method according to claim 3, characterized in that with the Enlargement of the measuring current or measuring voltage is disproportionate or disproportionate Reduction or with reduction of the measuring current or covering an under or disproportionate enlargement of the impulse amplification made fully automatically will.

5. Arrangement for performing the method according to one of the claims 1 to 4, characterized in that means for changing the measuring current are used the base voltage of a constant current transistor, in whose collector circuit the detector electrodes and the electrolyte represent a conductive connection, provided to a different value are.

6. Arrangement for carrying out the method according to one of the claims 1 to 4, characterized in that for setting of the measuring current or the measuring voltage means for changing the emitter resistance of a constant current transistor, in its collector circuit the detector electrodes and the electrolyte a conductive one Represent connection, are provided for a different value.

7. Arrangement according to claim 6, characterized in that the emitter resistor of the constant current transistor is formed from a rotentiometer, which by means of a stepper motor can be adjusted remotely.

8. Arrangement according to claim 6, characterized in that the central resistance of the constant current transistor via remote controllable discrete resistors is changeable.

9. Arrangement for performing the method according to one of the claims 1 to 4, characterized in that the measuring current or measuring voltage by changing the base voltage - U1 (Fig. 4) of a constant current transistor, in its collector circuit the detector electrodes and the electrolyte constitute a conductive connection another value can be set.

10. Arrangement according to claim 5 or 9, characterized in that the base or base voltage of the constant current transistor above a remotely switched voltage divider can be changed.

11. Arrangement for carrying out the method according to a.

of claims 1 to 4, characterized in that the measuring current or Measurement voltage by changing the reference voltage of a differential amplifier in one slow control loop to keep the detector voltage constant (Fig 6) on one other value can be set.

12. The arrangement according to claim 11, characterized in that the change the reference voltage of the differential amplifier via a remote controlled Voltage divider can be brought about.

13. The arrangement according to claim 11, characterized in that the change the reference voltage of the differential amplifier via a connected as a voltage divider Potentiometer with a drive by stepper motor (Fig. 7) can be brought about.

14. Arrangement according to claim 3 or 4, characterized in that with a remotely controllable change in the measuring current or the measuring voltage at the same time and also remotely controllable the amplification of the impulses in pre-given Dimensions can also be changed is, and that this remote controllable gain switching by a remote-controlled switch for switching a voltage divider at the output of the preamplifier before forwarding the signal to the main amplifier of the pulse height analyzer or at another suitable point in the course of the pulse amplification in the preamplifier or in the main amplifier of the pulse height analyzer. (Fig. 3 R5 ... R8, S2 and Fig. 6: R20 ... R23, S2 ').

15. Arrangement according to claim 3 or 4, characterized in that with a remotely controllable change in the measuring current or the measuring voltage at the same time and also remotely controllable the amplification of the impulses in a given one Dimensions can be changed and that this gain switching by a remote-controlled Switch for switching the negative feedback in the course of the preamplifier or also of the main amplifier of the pulse height analyzer can be brought about.

L e r s e i t e