DE2218215C3

DE2218215C3 - 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine and a process for the preparation of 22'-anhydro- (i-beta-D-arabinofuranosyl) -cytosine

Info

Publication number: DE2218215C3
Application number: DE19722218215
Authority: DE
Inventors: Tunebo; Kusaki Toshiatsu; Tunoda Kozo; Akimoto Norio; Iithuka Kunio; Miyaji Teruo; Nobeoka Sowa (Japan)
Original assignee: Asahi Kasei Kogyo KK
Current assignee: Asahi Kasei Corp
Priority date: 1971-04-15
Filing date: 1972-04-14
Publication date: 1977-02-17

Description

2020th

2. Verfahren zur Herstellung von 2,2'-Anhydro-l-/?-D-arabinofuranosyl)-cytosin der Formel (II)2. Process for the preparation of 2,2'-anhydro-1 - /? - D-arabinofuranosyl) -cytosine of formula (II)

HOH₂CHOH ₂ C

teuer, und die Ausbeute an 2,2'-Anhydro-(l-/?-D-arabinofuranosyl)-cytosin ist sehr niedrig.expensive, and the yield of 2,2'-anhydro- (l - /? - D-arabinofuranosyl) -cytosine is very low.

Vor kurzem wurde von Ichino und Kikugawa, Tetrahedron Letters (1970), Seite 867, ein einfaches Verfahren zur Herstellung von 2,2'.Anhydro.(J-^parabinofuranosyO-cytosin beschrieben, bei dem Cytidin mit einem Vilsmeier-Haack-Reagens, das aus einem Säurechlorid, wie Thionylchlorid, Phosphoroxychlorid oder Phosgen und Dimethylformamid hergestellt wurde, umgesetzt wird. Auch bei diesem Verfahren werden jedoch nur sehr geringe Ausbeuten erhalten. Ferner ist die Abtrennung und Reinigung des Reaktionsproduktes von zahlreichen Nebenprodukten sehr schwierig. Somit verläuft auch dieses Verfahren nicht zufriedenstellend.Recently Ichino and Kikugawa, Tetrahedron Letters (1970), p. 867, a simple one Process for the preparation of 2,2'.Anhydro. (J- ^ parabinofuranosyO-cytosine described in the cytidine with a Vilsmeier-Haack reagent, which consists of a Acid chloride such as thionyl chloride, phosphorus oxychloride or phosgene and dimethylformamide has been implemented. In this process too, however, only very low yields are obtained. Furthermore, the separation and purification of the reaction product from numerous by-products is great difficult. This method is therefore also unsatisfactory.

Es wurde gefunden, daß sich 2,2'-Anhydro-(l-/3-D. arabinofuranosyl)-cytosin in einem einfachen Verfahren, das über die neue Verbindung ^'-O-Sulfinylcytidin als Zwischenprodukt führt, im technischen Maßstab billig herstellen läßt. .It has been found that 2,2'-anhydro- (1- / 3-D. arabinofuranosyl) -cytosine in a simple process that uses the new compound ^ '- O-sulfinylcytidine as Intermediate leads, can be produced cheaply on an industrial scale. .

Gegenstand der Erfindung ist somit die neue Verbindung 2',3'-O-Sulfinylcytidin und ein Verfahren zur Herstellung von 2,2'-Anhydro-(1-0-D-arabinofura nosyl)-cytosin der Formel IIThe invention is therefore the new one Compound 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine and a method for the production of 2,2'-anhydro- (1-0-D-arabinofura nosyl) -cytosine of the formula II

(Π)(Π)

3°3 °

3535

HOHO

H0H,CH0H, C

dadurch gekennzeichnet, daß mancharacterized in that one

a) Cytidin in einem Nitril, einer Nitroverbindung, einem cyclischen Äther oder einem halogenierten Kohlenwasserstoff mit Thionylchlorid im Molverhältnis 1:1 bis 1 :5 hei Temperaturen von -20 bis 30° C umsetzt,a) cytidine in a nitrile, a nitro compound, a cyclic ether or a halogenated hydrocarbon with thionyl chloride in a molar ratio 1: 1 to 1: 5 hei temperatures of -20 to 30 ° C are reacted,

b) das Reaktionsgemisch zur Hydrolyse in kaltes Wasser einträgt, erwünschtenfalls die wäßrige Lösung mit Alkali neutralisiert undb) the reaction mixture is introduced into cold water for hydrolysis, if desired the aqueous one Solution neutralized with alkali and

c) das gebildete 2'_r3'-O-SulfinyL7tidin der Formel (I) in einem sauren wäßrigen Medium mit einem pH-Wert von 1,0 bis 5,0 auf Temperaturen von 50 bis 9O⁰C erhitzt.c the formed 2 3'-O-SulfinyL7tidin of formula (I) in an acidic aqueous medium with a pH of 1.0 to 5.0 at temperatures of from 50 heated) _'r-9O ⁰ C.

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man das 2',3'-O-SuIfinyIcytidin enthaltende Gemisch ohne vorhergehende Isolierung des 2'3'-O-Sulfinylcytidins erhitzt.3. The method according to claim 1, characterized in that that the mixture containing 2 ', 3'-O-SuIfinyIcytidin without prior isolation of the 2'3'-O-sulfinylcytidine heated.

5555

(N)(N)

das dadurch gekennzeichnet ist, daß manwhich is characterized in that one

a) Cytidin in einem Nitril, einer Nitroverbindung, einem cyclischen Äther oder einem halogenierten Kohlenwasserstoff mit Thionylchlorid im Molverhältnis 1 :1 bis 1 :5 bei Temperaturen von -20 bis 30° C umsetzt.a) Cytidine in a nitrile, a nitro compound, a cyclic ether or a halogenated one Hydrocarbon with thionyl chloride in a molar ratio of 1: 1 to 1: 5 at temperatures from -20 to 30 ° C.

c) das gebildete 2',3'-O-SuIfinylcytidin der Formel Ic) the 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine of the formula I formed

HOH₂CHOH ₂ C

Es sind bereits zahlreiche Verfahren zur Herstellung von 2,2'-Anhydro-(l-/f-D-arabinofuranosyi)-cytosin bekannt, vgl. z. B. das Verfahren K. K. O g i 1 ν i e, Can. ]. Chem., Bd. 47 (1969), Seite 495. Es ist jedoch nicht möglich, diese bekannten Verfahren im technischen Maßstab durchzuführen, da alle diese Verfahren den Nachteil haben, daß sehr mühsame und aufwendige Verfahrensschritte, wie die Einführung einer Schutzgruppe und deren Abspaltung, erforderlich sind. Ferner sind die bei der Umsetzung benötigten ReagentienThere are already numerous processes for the preparation of 2,2'-anhydro- (l- / f-D-arabinofuranosyi) -cytosine known, see e.g. B. the procedure K. K. O g i 1 ν i e, Can. ]. Chem., Vol. 47 (1969), page 495. However, it is not possible to use these known processes in the technical To carry out scale, since all these methods have the disadvantage that they are very laborious and expensive Process steps such as the introduction of a protective group and their separation, are required. Also included are the reagents required for the reaction

in einem sauren wäßrigen Medium mit einemin an acidic aqueous medium with a

pH-Wert von 1,0 bis 5,0 nuf Tempernturcn von 50 bis 9O⁰C erhitzt.heated pH-value of 1.0 to 5.0 nuf Tempernturcn from 50 to 9O ⁰ C.

Zuhlreiche Untersuchungen haben gezeigt., daß das erfindungsgemäße Verfahren die Nachteile der bekannten Verfahren nicht aufweist und sich einfach und billig \m technischen Maßstab durchführen lilßt.Numerous studies have shown that the process according to the invention does not have the disadvantages of the known processes and can be carried out simply and cheaply on an industrial scale.

In der ersten Stufe können als Nitrile 7.. IJ, Acetonitril und Prop'ionitril, als Nitroverbindungen 7.. B. Nitromethnn, Nitroäthan, Nitropropan und Nitrobenzol, als cyclische Äther z.B. Dioxan und Tetrahydrofuran und als halogenierte Kohlenwasserstoffe z. B. Dichloi äthan undTrichloräthan verwendet werden, Die Verwendung von Ketonen, wie Aceton, schwachbasischen Verbindungen, wie Dimethylformamid, und Aminen, wie -Pyridin, ist nicht empfehlenswert, da diese Verbindungen die Bildung von Nebenprodukten begünstigen und dadurch die Ausbeute an 2',3'-O-Sulfinylcytidin stark verringern. Das gemäß der Stufe a) verwendete Lösungsmittel wird im allgemeinen in Mengen von 0,5 bis 5 Liter, vorzugsweise von 2 bis 3 Liter, pro Mol des als Ausgangsverbindung eingesetzten Cy.idins verwendet. Ein größerer Überschuß an Lösungsmittel ist nicht empfehlenswert, da dadurch nicht nur die Löslichkeit des Cytidins im Reaktionsmedium herabgesetzt wird, wodurch sich die Ausheute verringert, sondern auch die ^₅ Abtrennung des 2',3' O-Sulfinylcytidins erschwert wird. Die Verwendung größerer Mengen von Thionylchlorid in der Stufe a) als angegeben ist nicht empfehlenswert, da dies nicht nur unwirtschaftlich ist, sondern auch die Reinigung des 2'3'-O-Sulfinylcytidins erschwert.In the first stage, as nitriles 7 .. IJ, acetonitrile and prop'ionitrile, as nitro compounds 7 .. B. Nitromethnn, nitroethane, nitropropane and nitrobenzene, as cyclic ethers such as dioxane and tetrahydrofuran and as halogenated hydrocarbons z. B. dichloroethane and trichloroethane can be used, the use of ketones such as acetone, weakly basic compounds such as dimethylformamide, and amines such as pyridine, is not recommended because these compounds promote the formation of by-products and thereby the yield of 2 ', 3 Greatly decrease '-O-sulfinylcytidine. The solvent used in step a) is generally used in amounts of from 0.5 to 5 liters, preferably from 2 to 3 liters, per mole of the cy.idin used as the starting compound. A larger excess of solvent is not recommended, as this not only the solubility of the cytidine is reduced in the reaction medium, the Ausheute thereby reduced, but also the separation of the ₅ ^ 2 ', 3' O-Sulfinylcytidins difficult. The use of larger amounts of thionyl chloride in stage a) than indicated is not recommended, since this is not only uneconomical, but also makes the purification of the 2'3'-O-sulfinylcytidine more difficult.

Bei höheren als den angegebenen Reaktionstemperaturen in der Stufe a) entstehen Nebenprodukte, und die ■Ausbeute an 2',3'-O-Sulfinylcytidin wird beträchtlich verringert. Im allgemeinen sind Reaktionszeiten von 30 ,Minuten bis 5 Stunden in Stufe a) ausreichend.At higher than the specified reaction temperatures in stage a) arise by-products, and the ■ Yield of 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine becomes considerable decreased. In general, reaction times of 30 minutes to 5 hours in stage a) are sufficient.

In der Stufe b) des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die wäßrige Lösung, falls erwünscht, zur Neutralisation mit Alkali, z. B. mit Natronlauge, versetzt. Nach I5stündigem Stehen der wäßrigen sauren oder mit Alkali neutralisierten Lösung in der Kälte können die ausgefallenen Kristalle abfiltriert und getrocknet werden. Auf diese Weise wird 2',3'-0-SuIfinylcytidiη als iHydrochlorid oder in Form der freien Base erhalten.In stage b) of the process according to the invention, the aqueous solution is used, if desired, for neutralization with alkali, e.g. B. with sodium hydroxide, added. After 15 hours of standing, the aqueous acidic or with Alkali-neutralized solution in the cold, the precipitated crystals can be filtered off and dried will. In this way, 2 ', 3'-0-SuIfinylcytidiη is used as iHydrochloride or obtained in the form of the free base.

Das im erfindungsgemäßen Verfahren in Stufe b) als Zwischenprodukt isolierbare 2',3'-O-SuIfinylcytidin wird nachstehend charakterisiert.The 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine which can be isolated as an intermediate in the process according to the invention in step b) is characterized below.

Das gemäß Beispiel 1 a) hergestellte Produkt wird auf Grund folgender Eigenschaften als 2',3'-0-SuIf inyl-( 1-0-D-ribofuranosyl)-cytosin-hydrochlorid oder in der 'crkürzten Bezeichnungsweise als 2',3'-O-Sulfinylcytidinhydrochlorid angesehen.The product prepared according to Example 1 a) is called 2 ', 3'-0-Sulphynyl- (1-0-D-ribofuranosyl) -cytosine hydrochloride or in the abbreviated designation as 2', 3 ' -O-sulfinylcytidine hydrochloride.

(1) ElementaranalyseCqHiiOeNjSHCI: Berechnet:(1) Elemental analysis CqHiiOeNjSHCI: Calculated:

C 33,2, H 3,7, N 12,9, S 9,8 Cl 10,8%; gefunden·C 33.2, H 3.7, N 12.9, S 9.8 Cl 10.8%; found·

C 333. H 3,7, N 12,3, S 9,3 Cl 10,5%.C 333. H 3.7, N 12.3, S 9.3 Cl 10.5%.

(2) Die alkalimetrische Titrationskurve zeigt, daß es sich um ein Hydrochlorid handelt.(2) The alkalimetric titration curve shows that it is a hydrochloride.

(3) Aus dem in der Abbildung dargestellten IR-Ab- f,₀ sorptionsspektrum von r^'-O-Sulfinylcytidn-hydrochlorid geht hervor, daß die auf der Gruppierung S-O beruhenden Absorptionen bei etwa 1010, 1021 und 1053 cm-' und die auf den fünfgliedrigen heterocyclischen Ring mit einer f,₅ Sulfitestergruppe zurückzuführenden intensiven und charakteristischen Absorptionen bei etwa 1201,1205 und 1210cm~' auftreten.(3) From the IR waste shown in the map f, ₀ absorption spectrum of r ^ '- O-Sulfinylcytidn hydrochloride shows that the absorptions based on the grouping SO at about 1010, 1021 and 1053 cm-' and the occur on the five-membered heterocyclic ring with an f, ₅ Sulfitestergruppe attributable intense and characteristic absorptions at approximately 1,201.1205 and 1210cm ~ '.

(4) Bei der Papierchromatographie mit Isopropanol/1 -m Ammoniumacetat (pH 4,0) »7:3 wird nur ein Fleck mit einem Ri-Wert von 0,68 beobachtet. Der Rf Wert von Cytidin beträgt 0,51,(4) For paper chromatography with isopropanol / 1 -m ammonium acetate (pH 4.0) »7: 3 will only a spot with an Ri value of 0.68 was observed. The Rf value of cytidine is 0.51,

(5) Das UV-Absorptionsspektrum bei pH 2,0 zeigt, daß die Wellenlänge der maximalen Absorption 278 mn und der minimalen Absorption 241 πΐμ bet· ägt.(5) The UV absorption spectrum at pH 2.0 shows that the wavelength of the maximum absorption is 278 mn and the minimum absorption 241 is πΐμ.

Erfindungsgemäß wird in der Stufe c) 2',3'O-Sulfinyl· cytidin in 2,2'-Anhydro-(l-/?-D-arabinofuranosyl)-cytosin überführt. Die Umsetzung erfolgt vorzugsweise bei 70 bis 9O⁰C mit sehr hohen Ausbeuten nn 2,2'-Anhydro-(l-/?-D-arabinofuranosyl)-cytosin, 2',3'-O-Sulfinylcytidin ist gegenüber Alkalien instabil und bilaet verschiedene Nebenprodukte, weshalb man in saurem Medium bei pH-Werten von 1,0 bis 5,0 arbeitet. Die in der Stufe c) verwendete Wassermenge ist nicht kritisch. Aus dem Reaktionsgemisch kann das 2,2'-Anhydro-(1-/?-D-arabinofyranosyl)-cytosin durch Abkühlen in kristalliner Form ausgefällt werden. Das Reaktionsgemisch kann z. B. auch nach dem Eindampfen mit einem Alkohol, wie Methanol, versetzt werden, wobei 2,2'-Anhydro-( 1 ,-ß-D-arabinofuranosyl)-cytosin in kristalliner Form ausfällt.According to the invention, in step c) 2 ', 3'O-sulfinyl cytidine is converted into 2,2'-anhydro- (l - /? - D-arabinofuranosyl) -cytosine. The reaction is preferably carried out at 70 to 9O ⁰ C with very high yields nn 2,2'-anhydro- (l - /? - D-arabinofuranosyl) cytosine, 2 ', 3'-O-Sulfinylcytidin is unstable to alkalis and bilaet various by-products, which is why one works in an acidic medium at pH values of 1.0 to 5.0. The amount of water used in step c) is not critical. The 2,2'-anhydro- (1 - /? - D-arabinofyranosyl) -cytosine can be precipitated in crystalline form from the reaction mixture by cooling. The reaction mixture can, for. B. after evaporation with an alcohol such as methanol, added, 2,2'-anhydro- (1 , -ß-D- arabinofuranosyl) -cytosine precipitates in crystalline form.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann gemäß einer bevorzugten Ausführungsform auch ohne vorhergehende Isolierung des in der Stufe b) gebildeten 2',3'-O-Sulfinylcytidins kontinuierlich durchgeführt werden.According to a preferred embodiment, the method according to the invention can also be carried out without a preceding embodiment Isolation of the 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine formed in step b) be carried out continuously.

Das erfindungsgemäße Verfahren ist vom wirtschaftlichen Standpunkt aus sehr vorteilhaft, da sich 2,2'-Anhydro-(l-/J-D-arabinofuranosyl)-CYtosin auf einfache Weise im technischen Maßstab billig und mit hoher Ausbeute herstellen läßt. Aus dem erfindungsgemäß hergestellten 2,2'-Anhydro-(f-/3-D-arabinofuranosyl)-cytosin kann in an sich bekannter Weise, z. B, durch Hydrolysieren in einem wäSrig-alkalischen Medium, l-jJ-D-Arabinofuranosyicytosin hergestellt weiden, das sich als Aniileukämiemittel eignet.The method according to the invention is very advantageous from an economic point of view, since 2,2'-Anhydro- (l- / J-D-arabinofuranosyl) -Cytosine in a simple way Way can be produced cheaply and with high yield on an industrial scale. From the invention 2,2'-anhydro- (f- / 3-D-arabinofuranosyl) -cytosine produced can in a manner known per se, for. B, by hydrolyzing in an aqueous-alkaline medium, l-jJ-D-arabinofuranosyicytosine produced willow that is useful as an anti-leukemia agent.

2,2'-Anhydro-(l-/?-D-arabinofuranosyl)-cytosin ist selbst ein wertvoiles Arzneimittel und dient z. B. zur Bekämpfung von Herpessimplex-Virus und von Vaccinia-Virus. Ferner kann es als nur schwach toxisches Antileukämiemittel eingesetzt werden.Is 2,2'-anhydro- (l - /? - D-arabinofuranosyl) -cytosine itself a valuable drug and serves z. B. to combat herpes simplex virus and vaccinia virus. It can also be used as an antileukemia agent that is only slightly toxic.

Die Beispiele erläutern die Erfindung.The examples illustrate the invention.

example 1

a) 500 ml Acetonitril werde >. mit 72 ml (1 Mol) Thionylchlorid und mit 60 g Cytidin versetzt. Das Gemisch wird unter Rühren etwa 3 Stunden bei 5 bis 7°C umgesetzt. Zunächst liegt eine Suspension des Cytidins im Reaktionsmedium vor-, mit fortschreitender Reaktion geht die Suspension in eine klare, schwach gelbe Lösung über. Das so erhaltene Reaktionsgemisch (Umwandlung von Cytidin in 2',3'-O-Sulfinylcytidin: 97,5%) wird in etwa 1,5 Liter Eiswasser eingetragen. Durch das Gemisch wird unter Rühren 1 Stunde Luft geleitet. Das Gemisch wird dann 15 Stunden in der Kälte stehengelassen. Die ausgefallenen Kristalle werden abfiltriert und getrocknet. Es werden 61,5 g 2',3'-O-Sulfiny!cytidin-hydrödilorid (Reinheit: 99,4 Prozent) erhalten. Das Filtrat enthält 12,2 g gelöstes 2',3'-O-SulfinyIcy lidin.a) 500 ml of acetonitrile will >. 72 ml (1 mol) of thionyl chloride and 60 g of cytidine are added. The mixture is reacted with stirring at 5 to 7 ° C for about 3 hours. First there is a suspension of the cytidine in the reaction medium; as the reaction progresses, the suspension changes into a clear, pale yellow solution. The reaction mixture thus obtained (conversion of cytidine into 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine: 97.5%) is introduced into about 1.5 liters of ice water. Air is passed through the mixture for 1 hour while stirring. The mixture is then left in the cold for 15 hours. The precipitated crystals are filtered off and dried. 61.5 g of 2 ', 3'-O-sulfinyl cytidine hydrodiloride (purity: 99.4 percent) are obtained. The filtrate contains 12.2 g of dissolved 2 ', 3'-O-SulfinyIcy lidine.

b) Ein gemäß Abschnitt a) hergestelltes Reaktionsgemisch, das 68,1 g 2'3'-O-SulfinyIcytidin enthält, wird in 1,5 Liter Wasser eingetragen. Der pH-Wert des Gemisches wird unter Rühren bei 10°C durch Zugabeb) A reaction mixture prepared in accordance with section a), which contains 68.1 g of 2'3'-O-SulfinyIcytidin, is in Entered 1.5 liters of water. The pH of the mixture is adjusted with stirring at 10 ° C by adding

von 1 π-Natronlauge auf 4,8 eingestellt. Das Gemisch wird dann 15 Stunden in der Kälte stehengelassen. Die ausgefallenen Kristalle werden abfiltriert und getrocknet. Es werden 54,8 g 2',3'-O-Sulfinylcytidin (Reinheit: 97,8 Prozent) erhalten.adjusted by 1 π-sodium hydroxide solution to 4.8. The mixture is then left in the cold for 15 hours. The precipitated crystals are filtered off and dried. 54.8 g of 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine (purity: 97.8 percent) are obtained.

c) 700 ml Nitromethan werden mit 36 ml (0,5 Mol) Thionylchlorid versetzt. Das Gemisch wird dann unter Rühren mit 60,8 g (0,25 Mol) Cytidin versetzt. Das so erhaltene Gemisch wird 2 Stunden bei 10⁰C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wird in etwa 2 Liter Wasser eingetragen. Der pH-Wert des so erhaltenen Gemisches wird durch Zugabe von 1 η-Natronlauge auf 3,5 eingestellt. Anschließend wird das Gemisch mit Äthanol versetzt. Nach 15stündigem Stehen in der Kälte werden die ausgefallenen Kristalle abfiltriert und getrocknet. Es werden 49,5 g 2'3'-O-Suifinylcytidin (Reinheit: 98,9 Prozent) erhalten. Das Filtrat enthält 17,4 g gelöstes 2',3'-O-SulfinyIcytidin.c) 700 ml of nitromethane are mixed with 36 ml (0.5 mol) of thionyl chloride. The mixture is then admixed with 60.8 g (0.25 mol) of cytidine with stirring. The mixture obtained in this way is ^{reacted at 10 °} C. for 2 hours. The reaction mixture is introduced into about 2 liters of water. The pH of the mixture thus obtained is adjusted to 3.5 by adding 1 η sodium hydroxide solution. Ethanol is then added to the mixture. After standing in the cold for 15 hours, the precipitated crystals are filtered off and dried. 49.5 g of 2'3'-O-sulfinylcytidine (purity: 98.9 percent) are obtained. The filtrate contains 17.4 g of dissolved 2 ', 3'-O-sulfinyylcytidine.

d) 700 ml Dichloräthan werden mit 72 ml Thionylchlorid und 61 g Cytidin versetzt. Das Gemisch wird 5 Stunden bei 5°C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wird in etwa 1 Liter Eiswasser eingetragen. Der pH-Wert des Gemisches wird durch Zugabe von Natronlauge auf 4,0 eingestellt. Das Dichloräthan wird unter vermindertem Druck bei Temperaturen von höchstens 30°C abgezogen. Das Konzentrat wird 15 Stunden in der Kälte stehengelassen. Die ausgefallenen Kristalle werden abfiltriert und getrocknet. Es werden 503 g 2',3'-O-Sulf inylcytidin (Reinheit: 98,1 Prozent) erhalten.d) 700 ml of dichloroethane are mixed with 72 ml of thionyl chloride and 61 g of cytidine. The mixture is 5 Reacted hours at 5 ° C. The reaction mixture is introduced into about 1 liter of ice water. The pH of the The mixture is adjusted to 4.0 by adding sodium hydroxide solution. The dichloroethane is reduced under Pressure withdrawn at temperatures not exceeding 30 ° C. The concentrate is left in the cold for 15 hours ditched. The precipitated crystals are filtered off and dried. There are 503 g of 2 ', 3'-O-sulf ynylcytidine (purity: 98.1 percent) was obtained.

e) 500 ml Propionitril werden mit 36 ml Thionylchlorid und 60 g Cytidin versetzt. Das Gemisch wird 3 Stunden bei 5° C umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wird wie in Abschnitt a) behandelt. Es werden 59,5 g 2'3'-OSulfinylcytidin-hydrochlorid in kristalliner Form (Reinheit: 98.J Prozent) erhalten.e) 500 ml of propionitrile are mixed with 36 ml of thionyl chloride and 60 g of cytidine are added. The mixture is reacted at 5 ° C. for 3 hours. The reaction mixture will as dealt with in section a). There are 59.5 g of 2'3'-OSulfinylcytidine hydrochloride in crystalline form (Purity: 98.J percent).

f) Das Verfahren von Abschnitt c) wird wiederholt, mit der Ausnahme, daß die 700 ml Nitromethan durch 1 Liter Nitrobenzol ersetzt werden. Es werden 47,3 g 2',3'-O-SuIfinylcytidin in kristalliner Form (Reinheit: 98.5 Prozent) erhalten.f) The procedure of section c) is repeated with the exception that the 700 ml of nitromethane is replaced by 1 Liters of nitrobenzene must be replaced. 47.3 g of 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine are obtained in crystalline form (purity: 98.5 percent).

g) Das Verfahren von Abschnitt a) wird wiederholt, mit der Ausnahme, äaß die 500 ml Acetonitril durch 500 ml Nitroberuoi ersetzt werden. Es werden 60,5 g 2',3'-Sulfinylcytidin-hydrochlorid in kristalliner Form (Reinheit: 97,3 Prozent) erhalten. Der Umwandlungsgrad von Cytidin in 2',3'-O-Sulfinylcytidin beträgt 96,8 Prozent.g) The procedure of section a) is repeated with the exception that the 500 ml of acetonitrile were passed through 500 ml of nitroberuoi to be replaced. There are 60.5 g of 2 ', 3'-sulfinylcytidine hydrochloride in crystalline form (Purity: 97.3 percent) obtained. The degree of conversion of cytidine to 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine is 96.8 Percent.

h) 33 g des gemäß Abschnitt a) hergestellten 2',3'-O-Sulfinylcytidin-hydrochlorids v/erden in 100 ml Wasser suspendiert. Der pH-Wert der Suspension wird mit 1 η-Natronlauge auf 5,0 eingestellt, wodurch das 2'3'-O-Sulfinylcytidin-hydiOchlorid vollständig in Lösung geht. Die Lösung wird 4 Stunden auf 80" C erhitzt. Der pH-Wert des Reaktionsgemisches wird lait fortschreitender Reaktion nach etwa 1 Stunde allmählich auf 3,0 herabgesetzt. Die papierchromatographische Untersuchung zeigt, daß da«: Rea'ctionsprodukt zum größten Teil aus 2,2'-Anhydro-(l-j3-D-arabinofuranosyl)-cytosin besteht. Messungen der optischen Dichte des Reaktionsproduktes ergeben, daß mehr als 95 Prozent der Ausgangsverbindung in 2,2'-Anhydro-(1-/?- D-arabinofuranosyI)-cytosin umgewandelt worden sind. Das erhaltene Reaktionsgemisch wird bei Temperaturen unter 4O⁰C zur Trockene eingedampft, und der Rückstand wird mit 200 ml Äthanol versetzt. Die ausgefallenen Kristalle werden abfiltriert und getrocknet. Es werden 27,9 g 2,2'-Anhydro-(1-0-D-arabinofura· nosyl)-cytosin-sulfat (Reinheit: 95,7 Prozent) erhalten.h) 33 g of the 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine hydrochloride prepared according to section a) suspended in 100 ml of water. The pH of the suspension is adjusted to 5.0 with 1 η sodium hydroxide solution, as a result of which the 2'3'-O-sulfinylcytidine hydrochloride is completely dissolved. The solution is heated to 80 ° C. for 4 hours. As the reaction proceeds, the pH value of the reaction mixture is gradually reduced to 3.0 after about 1 hour. Measurements of the optical density of the reaction product show that more than 95 percent of the starting compound in 2,2'-anhydro- (1 - /? - D-arabinofuranosyl have been) converted cytosine. the reaction mixture is evaporated at temperatures below 4O ⁰ C to dryness and the residue is treated with 200 ml of ethanol. the precipitated crystals are filtered and dried. There are 27.9 g of 2,2'- Anhydro (1-0-D-arabinofura · nosyl) cytosine sulfate (purity: 95.7 percent) was obtained.

Example 2

Eine Suspension von 60 g Cytidin in I Liter Tetrahydrofuran wird unter Rühren tropfenweise bei 10° C mit 54 g Thionyfehlorid versetzt Das Gemisch wird etwa 2,5 Stunden umgesetzt Das Reaktiontgemisch (Umwandlung von Cytidin'in 2'3'-O-SüJfinylcytl· din: §5,4 Prozent) wird zur Hydrolyse in 2 Liter A suspension of 60 g of cytidine in I liter of tetrahydrofuran is added dropwise with stirring at 10 ° C with 54 g Thionyfehlorid added The mixture is reacted for about 2.5 hours, the mixture Reaktiontge (conversion of Cytidin'in 2'3'-O-SüJfinylcytl · din: §5.4 percent) becomes hydrolysis in 2 liters

■ο Eiswasser eingetragen. Der pH-Wert des Gemisches wird mit I η wäßriger Ammoniaklösung auf 4,0 eingestellt. Das Gemisch wird 1 Stunde auf 90°C erhitzt Nach dem Abkühlen wird das 48,5 g 2,2'-Anhydro-{1-/l· D-arabinofuranosyl)-cytosin enthaltende Reaktionsge- ■ ο ice water entered. The pH of the mixture is adjusted to 4.0 with Iη aqueous ammonia solution. The mixture is heated to 90 ° C. for 1 hour. After cooling, the reaction mixture containing 48.5 g of 2,2'-anhydro- {1- / l · D-arabinofuranosyl) -cytosine is

misch (Umwandlung von 2'3'-O-Sulf'nylcytidin: 933 Prozent) über eine mit 350 m! Kationenaustauscher in der H+-Form (stark saures sulfonates Styrol-Divinylbenzol-Copolymerisat) gefüllte Säule gegeben. Die Elution wird mit einer 03-m Natriumchloridlösung mixed (conversion of 2'3'-O-sulf'nylcytidine: 933 percent) over a 350 m! Cation exchanger in the H + form (strongly acidic sulfonates styrene-divinyl benzene copolymer) given column filled. The elution is carried out with an 03-m sodium chloride solution

μ durchgeführt. Die 2,2'-Anhydro-(l-0-D-arabinofuranosyl)-cytosin enthaltenden Fraktionen werden vereinigt, konzentriert und dann gemäß Beispiel 1 h) behandelt Es werden 51,8 g 2,2'-Anhydro-{l-0-D-arabinofuranosyl)-cytosin-hydrochlorid in kristalliner Form (Reinheit: 98/» μ performed. The fractions containing 2,2'-anhydro- (l-0-D-arabinofurano syl) -cytosine are combined, concentrated and then treated according to Example 1 h) . 51.8 g of 2,2'-anhydro- {l- 0-D-arabinofuranosyl) -cytosine hydrochloride in crystalline form (purity: 98 / »

Z₅ Prozent) vom Schmelzpunkt 262 bis 264° C (Zersetzung) erhalten.Z ₅ percent) with a melting point of 262 to 264 ° C. (decomposition) .

Example 3

33 g des gemäß Beispiel 1 a) hergestellten 2'3'-Q-SuI-finylcytidin-hydrochiorids werden in 100 ml Wasser suspendiert. Die Suspension wird wie in Beispiel 1 h) behandelt, mit der Ausnahme, daß keine Neutralisation mit Natronlauge vorgenommen wird. Auf diese Weise wird ein Reaktionsgemisch erhalten, in dem der Umwandlungsgrad in 2,2'-Anhydro-(l-0-D-arabinofuranosyl)-cytosin 97,1 Prozent beträgt Das Reaktionsgemisch wird über eine mit 200 ml Ionenaustauscher in der Essigsäureform (Copolymerisat in Perlenforrn aus 33 g of the 2'3'-Q-SuI-finylcytidine hydrochloride prepared according to Example 1 a) are suspended in 100 ml of water . The suspension is treated as in Example 1 h) , with the exception that no neutralization with sodium hydroxide solution is carried out. In this way, a reaction mixture is obtained in which the degree of conversion in 2,2'-anhydro- (l-0-D-arabinofuranosyl) -cytosine 97.1 percent is the reaction mixture over a 200 ml with ion exchanger in the acid form (copolymer in pearl shape

einem Amin oder Polyämin und chlo.-.nethyüertem Styrol-Divinylbenzol). gefüllte Säule gegeben. Die aus der Säule austretende Flüssigkeit und die beim Waschen der Säule mit Wasser erhaltenen E!uate werde, vereinigt, zur Trockene eingedampft und dann wie in an amine or polyamine and chlo .-. methylated styrene-divinylbenzene). given filled column. The liquid emerging from the column and the oil obtained when the column is washed with water are combined, evaporated to dryness and then as in

Beispiel 1 h) behandölt. Es werden 21,5 g 2,2'-Anhydro-(l-j3-D-arabinofuranosyl)-cytosin-ac«;at in kristalliner Form (Reinheit: 99,4 Prozent) erhalten.Example 1 h) treated with oil. 21.5 g of 2,2'-anhydro- (l-j3-D-arabinofuranosyl) -cytosine-ac «; ate are obtained in crystalline form (purity: 99.4 percent).

Example 4

33 g (0,1 Mol) 2',3'-O-Sulfinylcytidin-hydrochlorid werden in etwa 70 ml Wasser suspendiert. Der pH- Wert der Suspension wird auf 4,0 eingestellt, und die 33 g (0.1 mol) of 2 ', 3'-O-sulfinylcytidine hydrochloride are suspended in about 70 ml of water. The pH of the suspension is adjusted to 4.0, and the

Suspension wird etwa 2 Stunden auf 9O⁰C erhitzt Der pH-Wert des so erhaltene,! Reaktionsgemisches (Umwandlung in 2,2'-Anhydro-{1-/?-D-arabinofuranosyl);cytosin: 96,1 Prozent) wird durch Zugabe von Schwefelsäure auf 2,0 eingestellt Das Gemisch wird wie in Suspension is about 2 hours at 9O ⁰ C. The heated pH-value of the thus obtained ,! Reaction mixture (conversion to 2,2'-anhydro- {1 - /? - D-arabinofuranosyl); cytosine: 96.1 percent) is adjusted to 2.0 by adding sulfuric acid. The mixture is made as in

Beispiel 1 h) behandelt. Es werden 283 g 2,2'-Anhydro-(l-^-D-arabinofuranosyl)-cytosin-sulfat in kristalliner Form (Reinheit: 96,9 Prozent) erhalten.Example 1 h) treated. 283 g of 2,2'-anhydro- (l - ^ - D-arabinofuranosyl) cytosine sulfate are obtained in crystalline form (purity: 96.9 percent).

Example 5

29 g (0,1 Mol) 2'3'-O-Sulfiny1cytidin werden in etwa 100 ml Wasser suspendiert. Der pH-Wert der Suspen-29 g (0.1 mol) of 2'3'-O-sulfiny1cytidine are approximately Suspended 100 ml of water. The pH of the suspension

sion wird mit Natronlauge auf 5,0 eingestellt. Die Suspension wird 5 Stunden auf 70° C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird dann auf 5° C abgekühlt. Der pH-Wert des Reaktionsgemisches wird mit Salzsäure auf 2,0 eingestellt. Das Gemisch wird bei Temperaturen von höchstens 40⁰C zur Trockene eingedampft. Dersion is adjusted to 5.0 with sodium hydroxide solution. The suspension is heated to 70 ° C. for 5 hours. The reaction mixture is then cooled to 5 ° C. The pH of the reaction mixture is adjusted to 2.0 with hydrochloric acid. The mixture is evaporated to dryness at temperatures of at most 40 ^{° C.} the Rückstand wird mit etwa 150 ml Äthanol versetzt, und das Gemisch wird unter Rückfluß erhitzt Die ausgefallenen Kristalle werden abfiltriert und getrocknet Es werden 21,4 g 2,2'-Anhydro-{1-/?-D-arabinofuranosyl)-cytosin-hydrochlorid (Reinheit: 98,1 Prozent) vom Schmelzpunkt 260 bis 265⁰C (Zersetzung) erhalten.About 150 ml of ethanol are added to the residue and the mixture is heated under reflux. The precipitated crystals are filtered off and dried. 21.4 g of 2,2'-anhydro- {1 - /? - D-arabinofuranosyl) -cytosine hydrochloride are obtained (Purity: 98.1 percent) obtained from the melting point 260 to 265 ⁰ C (decomposition).

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen1 sheet of drawings

709,007/237709.007 / 237

Claims

Claims;
, 2 ', 3'-O "Silfinylcytidin of the formula I

NH₃ NH ₃

HOH ₂ C

IOIO

(I)