DE2121915A1

DE2121915A1 - Radio-biology laboratory equipment - for integral radioactivity sample prepn in cell cultures

Info

Publication number: DE2121915A1
Application number: DE19712121915
Authority: DE
Inventors: Christoph 6900 Heidelberg Freienstein
Original assignee: CA. Greiner & Söhne, 7440 Nürtingen
Priority date: 1971-05-04
Filing date: 1971-05-04
Publication date: 1972-11-16

Abstract

The cultures are grown between the pot-shaped recesses in the folded halves of a plate of transparent easily cut e.g. plastic material. The two outer edges of the plate also fold down and have recesses for hairpin shaped wire clips. A hinged frame with recesses matching the culture cells is used for folding the plate and after incubation the folded plate is clamped between jig plates, the pots producing through the lower one into a gap in which a knife blade is guided, each sample falling down a pipe to its own test vessel arranged also in a matrix jig below it. There is a special anti-turbulence pipette.

Description

Geräte satz für Einbaustudien radioaktiver Materialien in Zellkulturen Die Erfindung betrifft einen Satz von Geräten zur Anzüchtung und Behandlung von Zellkulturen (Kulturen aus lebendem Zellgewebe) sowie zur Aufarbeitung und Verteilung derselben zur Messung bei Einbaustudien radioaktiver Substanzen.Equipment set for the study of the installation of radioactive materials in cell cultures The invention relates to a set of devices for growing and treating Cell cultures (cultures from living cell tissue) as well as for processing and distribution the same for measurements in installation studies of radioactive substances.

Bei solchen Einbaustudien ist es notwendig, daf3 Zellkulturen in großer Zahl unter konstanten Bedingungen in flüssigem Medium steril gezüchtet und mit den zu testenden Substanzen behandelt werden. Der Effekt dieser Substanzen auf den Stoffwechsel der Zellen ist zu erkennen am Einbau des anschließend applizierten radioaktiven Materials in Zellstrukturen.In such built-in studies it is necessary to keep cell cultures in large Number grown sterile under constant conditions in liquid medium and with the substances to be tested are treated. The effect of these substances on metabolism of the cells can be recognized by the incorporation of the subsequently applied radioactive Materials in cell structures.

Nach der bisher bekannten Methode werden die Zellkulturen in verstöpselten Röhrchen gehalten, welche sich bis ZU 90 Stück langsam drehend in einem sogenannten Roller befinden.According to the previously known method, the cell cultures are plugged in Tubes held, which up to 90 pieces slowly rotating in a so-called Scooters are located.

Nach Beendigung des Versuches werden die Kulturen lysiert und das Lysat wird auf Filterpapiere aufpipettiert. Diese beschickten Filterpapiere werden mehrmals in schwacher säure gebadet (fixierung der eingebauten und Extraktion der nicht eingebauten radioaktiven Substanzen). Nach einer Trocknung werden die Filterpapiere zur Messung in kleine Me3gefäße eingebracht.After the end of the experiment, the cultures are lysed and that Lysate is pipetted onto filter papers. These are loaded filter papers several times bathed in weak acid (fixation of the built-in and extraction of the radioactive substances not built in). After drying, the filter papers are placed in small measuring vessels for measurement.

Die getrennte Handhabung einzelner Röhrchen, die Lyse der Zellkulturen und das Aufpipettieren des Lyeates auf Filterpapiere sind zeitraubende und zum Teil auch kostenintensive Arbeiten. Die Glaswand der schrägliegenden, sich drehenden Röhrchen ist unterschiedlich dicht bewachsen, sodaß die.The separate handling of individual tubes, the lysis of the cell cultures and pipetting the lyeate onto filter papers are time-consuming and sometimes also costly work. The glass wall of the sloping, rotating Tube is overgrown with different densities, so that the.

Wachstumsbedingungen der Zellen ungleich sind. Die Versuchskapazität ist begrenzt auf 90 Röhrchen. Die Ver.uohsgenauigkeit wird beeinträchtigt durch die Aufbereitungsmanipulationen.The growth conditions of the cells are unequal. The experimental capacity is limited to 90 tubes. The verification accuracy is affected through the processing manipulations.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, mit apparativen Mitteln den lirbeitsaufwand zu verringern, die Kosten zu senken, die Versuchsgenauigkeit und die Versuchskupuzitat zu erhöhen.The invention is based on the object with apparatus Reduce labor, lower costs, and test accuracy and to increase the test coupons.

Zu diesem Zwecke wurde ein neuer Zellkulturgeratesatz entwickelt, der die Anwendung einer neuen Methode für Einbaustudien radioaktiver Materialien in Zellkulturen gestattet.For this purpose a new set of cell culture equipment was developed, the application of a new method for incorporation studies of radioactive materials permitted in cell cultures.

Eine Ausführung des neuen Geräte satzes wird dargestellt in den Zeichnungen, worin bedeuten Fig. 1 eine Seitenansicht der Kulturplatte, Fig. 2 eine Draufsicht auf die Kulturplatte, Fig. 3 eine Seitenansicht der Halterung mit eingelegter Kulturplatte, leicht aufgeklappt, Fig. 4 eine Seitenansicht der Verschlußklamrier zur Halterung, Fig. 5 eine Draufsicht auf die Halterung für eine Kulturplatte, Fig. 6 eine vergrößerte, perstektivische einsicht der Absaugpipette, Fig. 7 eine Draufsicht auf die Spitze der absaugpipette, vergroßert, Fig. 8 eine Seitenansicht des Schneide- u.Verteilgerats, Fig. 9 ein perspektivisches Detail zum Schneide- u.A version of the new equipment set is shown in the drawings, wherein Fig. 1 is a side view of the culture plate, Fig. 2 is a plan view onto the culture plate, FIG. 3 shows a side view of the holder with the culture plate inserted, slightly unfolded, Fig. 4 is a side view of the locking clip for holding, FIG. 5 shows a plan view of the holder for a culture plate, FIG. 6 shows an enlarged, perspective view of the suction pipette, FIG. 7 a plan view of the tip the suction pipette, enlarged, Fig. 8 a side view of the cutting and distribution device, Fig. 9 is a perspective detail of the cutting u.

Verteilgerät. Distribution device.

Die Kulturplatte Fig. 1,2 nimmt die Zellkulturen vu£. Sie besitzt zu diesem Zweck eine Mehrzahl von Kulturgefaäßen (Näpfen) 1 mit ebenem (planem) Boden in fester, paralleler Anordnung. Die Kulturpiatte wird aus durcnsichtigem, schneidbarem Stoff, vorzugsweise Kunststoff, hergestellt. Die Näpfe können sämtlich von gleicher Größe oder von unterschiedlicher Größe 1,2 sein. Im letzteren Fall hat der Benutzer die Wahl, welche Größe er für die Åufnahme der Zellkulturen benutzt.The culture plate Fig. 1,2 takes the cell cultures from. she owns for this purpose a plurality of culture vessels (wells) 1 with a flat (planar) Floor in a fixed, parallel arrangement. The culture plate is made of transparent, cuttable fabric, preferably plastic. The bowls can all be of the same size or different size 1,2. In the latter case the user can choose which size to use for taking up the cell cultures.

Die Kulturplatte ist in einer mittleren Perforationslinie 3 w-3 dergestalt faltbar, daß zwei gleiche Hälften aufeinander zu liegen kommen und die oeffnungen der gleich oder verschieden großen Näpfe 1,2 konzentrisch aufeinander zu liegen kommen.The culture plate is shaped in a central perforation line 3 w-3 foldable so that two equal halves come to rest on top of each other and the openings of the same or different sized bowls 1,2 to lie concentrically on one another come.

Der korrespondierende, oben liegende Napf dient während des ~lfachstums und der Behandlung der Kulturen als Deckel. Längs der Seitenkanten und parallel zur mittleren Perforationslinie 3 A-B trägt die Kulturplatte zwei weitere Perforationslinien 4,5 C-D. Dadurch entsteht auf beiden Seiten eine abknickbare und abreii3bare Randleiste 6, an der sich mehrere Vorsprünge 7 befinden. Diese Vorsprünge dienen zur Befestigung der Kulturplatte an der Halterung Fig. 3,4,5.The corresponding bowl on top is used during the ~ smoothness and treating the cultures as a lid. Along the side edges and parallel the culture plate carries two further perforation lines to the middle perforation line 3 A-B 4.5 C-D. This creates a kinkable and tearable edge strip on both sides 6, on which there are several projections 7. These projections are used for fastening the culture plate on the holder Fig. 3,4,5.

Zur ebenen Einstellung der Böden der Kulturgefäße (Näpfe) 1,2 in den Kulturplatten und zum festen Verschließen der einzelnen Kulturplatte dient eine Halterung. Die beiden Hälften (Tragerplatten) 8,9 der Halterung sind gelenkig miteinander verbunden (Scharnier 10) und untereinander deckungsgleich.For level adjustment of the bottoms of the culture vessels (bowls) 1,2 in the Culture plates and a fixed closure of the individual culture plate is used Bracket. The two halves (support plates) 8, 9 of the bracket are articulated with one another connected (hinge 10) and congruent with each other.

In aufgeklapptem Zustande der Halterung kann eine Kulturplatte aufgelegt und durch Zuklappen der Halterung aufeinander gefaltet werden. an ihren freien Längskanten tragen die Hälften der Halterung Löcher 12, die zur Aufnahme der Randleisten-VorsprAnge 7 der Kulturplatte dienen, wod-ch die Kulturplatte an der Halterung befestigt und ein leichtes, gemeinsames Offnen von Kulturplatte und Halterung erreicht wird. Die Halterung kann aus beliebigem Stoff, vorzugsweise IXetall oder Kunststoff, bestehen. Die Dicke der beiden Halften der Halterung ist größer als die Höhe der Näpfe 1,2 der Kulturplatte. In zusammengeklapptem Zustande werden die Hälften der Halterung mit einer in beiderseitige ausgründungen eingreifenden Klammer Fig.4 zusanaengehalten. Diese beiden Vorkehrungen bewirken, daß mit je einer Kulturplatte beschickte, zusaiengekla'ppte Halterungen völlig eben üebereinwander gestapelt werden können, beispielsweise in einem Brutschrank.When the holder is in the unfolded state, a culture plate can be placed on it and folded on top of each other by closing the holder. at their free long edges the halves of the bracket carry holes 12, which are used to receive the edge strip projections 7 serve the culture plate, where the culture plate is attached to the bracket and easy, common opening of the culture plate and holder is achieved. the Bracket can be made of any material, preferably metal or plastic. The thickness of the two halves of the holder is greater than the height of the cups 1,2 the culture plate. When folded, the halves of the bracket held together with a bracket Fig. 4 engaging in both sides. These two precautions have the effect that each one loaded with one culture plate and one clapped together Brackets can be stacked on top of each other, for example in an incubator.

Die Pipette Fig.6,7 dient zum Absaugen flüssiger Medien aus den Näpfen 1,2 der Kulturplatten, wie sie ein- oder mehrmals auf die Zellkulturen aufgegeben werden. Sie besteht vorzugsweise aus Glas oder Kunststoff und kann iiber einen Schlauch 13 an eine Unterdruckquelle, beispielsweise eine Wasserstrahl-Pumpe, angeschlossen werden. Die fein ausgezogene Spitze 14 ist in zwei Ebenen um jeweils 90 Winkelgrade abgeknickt. Es wird damit erieicht, daß das Absaugen aus den Näpfen 1 , 2 ohne Aufwirbeln erfolgt und die Zellkulturen auf dem Boden der Kulturgefäße verbleiben.The pipette Fig.6,7 is used to aspirate liquid media from the wells 1.2 of the culture plates as they are applied to the cell cultures one or more times will. It is preferably made of glass or plastic and can be connected via a hose 13 connected to a vacuum source, for example a water jet pump will. The finely drawn tip 14 is in two planes at 90 degrees each kinked. It is thereby achieved that the suction from the wells 1, 2 without Whirling takes place and the cell cultures remain on the bottom of the culture vessels.

Das Schneide- und Verteilgerät Fig. 8,9 dient zur schnellen und schonenden Abtrennung der zellkulturtragenden Böden der Näpfe 1,2 und deren einzelner, gegen Verwechslung gesicherter Verteilung auf die in fester Zuordnung bereitstehenden Meßgefäße 15. Dieses Gerät, das allein oder in Kombination beispielsweise aus Metall, Kunststoff und Holz bestehen kann, setzt sich aus Unterteil, Oberteil und Åndruckdeckel zusammen. Der Unterteil besteht aus einer Grundplatte 16, auf der die Meßgefäße 15 in vorausbestimmter Reihenfolge fest aufzustellen sind. Dazu können Ausgründungen, Fächer und/oder eine Lochplatte 17 dienen. Paßstifte 18 im Unterteil sorgen für das richtige Aufsetzen des Oberteils.The cutting and distributing device Fig. 8,9 is used for quick and gentle Separation of the cell culture-bearing floors of the wells 1,2 and their individual, against Confusion of assured distribution among those available in a fixed assignment Measuring vessels 15. This device, which alone or in combination, for example, is made of metal, Can consist of plastic and wood, consists of a lower part, an upper part and a pressure cover together. The lower part consists of a base plate 16 on which the measuring vessels 15 are to be set up in a predetermined order. Spin-offs, Compartments and / or a perforated plate 17 are used. Dowel pins 18 in the lower part ensure the correct placement of the upper part.

Der Oberteil besteht aus der gelochten Grundplatte 19 und den mit Hilfe der Seitenwände 27 damit verbundenen Messerführungsplatten 20, 21, deren Dicke und deren durch Bünde oder Beilegscheiben 22 bestimmter Zwischenraum 23 so bemessen sind, daß die Böden der Näpfe einer auf die obere Messerführungsplatte 21 aufgelegten Kulturplatte 24 durch die Löcher 25 in die korrespondierenden Löcher 26 der unteren Messerfuhrungsplatte 20 hineinragen. Stifte oder Teilgewindestifte 28 verbinden die Platten 20,21 und führen den Andruckdeckel 30, der entsprechende Löcher 33 besitzt, beim Aufsetzen.The upper part consists of the perforated base plate 19 and the with Using the side walls 27 associated knife guide plates 20, 21, their thickness and their space 23 determined by collars or washers 22 so dimensioned are that the bottoms of the bowls are placed on the upper knife guide plate 21 Culture plate 24 through the holes 25 into the corresponding holes 26 of the lower Knife guide plate 20 protrude. Connect pins or partial threaded pins 28 the plates 20,21 and guide the pressure cover 30, which has corresponding holes 33, when touching down.

Die korrespondierenden Löcher 26 der unteren Hesserführungsplatte 20 und die Löcher der 34 der Grundplatte 19 des Oberteils sind durch die Rohre oder Schläuche 29 jeweis miteinander verbunden, sodaß diese Rohre oder Schläuche jeweils in-ein zugeordnetes Meßgefäß 15 führen.The corresponding holes 26 of the lower Hesser guide plate 20 and the holes of 34 of the base plate 19 of the upper part are through the tubes or Hoses 29 each connected to one another, so that these pipes or hoses respectively lead into an assigned measuring vessel 15.

Der Andruckdeckel besteht aus der Platte 30, die massiv oder mit korrespondierenden, durchgehenden oder Sacklöchern 31 versehen sein kann, und dem Griff 32 von beliebiger Form.The pressure cover consists of the plate 30, which is solid or with corresponding, continuous or blind holes 31 may be provided, and the handle 32 of any Shape.

Der Andruckdeckel hält nach dem Aufsetzen eine aufgelegte, geschlossene oder offene Kulturplatte 24 auf der oberen Messerführungsplatte 21 nieder.After being put on, the pressure cover holds an open, closed one or open culture plate 24 on the upper knife guide plate 21 down.

Nunmehr wird ein Messer 36 mit langer Klinge und zweckmäßigerweise glatter Schärfe zwischen die Meserführungsplatten 20,21 eingeführt und es werden die Je eine Zellkultur tragenden Böden aller Näpfchen einer Kulturplatte 24 damit abgeschnitten. Jeder Boden fällt durch das darunter liegende Loch 26 der Platte 20, das zugehörige Rohr (oder den Schlauch) 29, das zugehörige Loch 34 der Oberteil-Grundplatte 19 und Loch 35 der Unterteil-Lochplatte 17 in das zugehörige Meß8efäß 15. Darin kann die einzelne Kultur in unverwechselbarer Weise Messungen und Zählungen (z.B.Now a knife 36 with a long blade and conveniently smooth sharpness between the knife guide plates 20,21 and there are each one cell culture supporting floors of all wells of a culture plate 24 cut off with it. Each floor falls through the underlying hole 26 of the Plate 20, the associated tube (or hose) 29, the associated hole 34 of the Upper part base plate 19 and hole 35 of the lower part perforated plate 17 in the associated Measuring vessel 15. In it the individual culture can take measurements in an unmistakable way and counts (e.g.

Szintillation) und auch anderen Behandlungen unterzogen werden.Scintillation) and other treatments.

Der Vorteil der Erfindung gegenüber der beschriebenen, bekannten Anordnung besteht in der Verminderung des Raum- und Stoffbedarfs (Zellen, Kulturmedium, radioaktive Substanzen), dem Wegfall von Arbeitsgängen und weiteren Stoffen, der Verminderung der Ubertragungsvorgänge auf nur noch einen (Abschneiden, freier Fall in die Meßgefäße 15) und der zwangsläufigen Gestaltung des Arbeitsablaufes durch den neuen Geräte satz durch die aufeinander abgestimmte Ausbildung seiner Bestandteile und endlich in einer Verminderung der arbeitszeit auf etwa ein Zehntel der früher benötigten Zeit.The advantage of the invention over the described, known arrangement consists in reducing the space and material requirements (cells, culture medium, radioactive Substances), the elimination of work processes and other substances, the reduction the transfer processes to only one (cutting off, free fall into the measuring vessels 15) and the inevitable design of the workflow by the new devices sentence through the coordinated formation of its components and finite in a reduction in working time to around a tenth of what was previously required Time.

Claims

Protection claims:

1. Set of equipment for bin construction studies of radioactive materials in cell cultures, characterized in that it consists of a plurality of culture vessels (1,2) culture plate containing (Fig.1,2) - made of cell culture-friendly, transparent, cuttable fabric, a perforated, stackable holder (Fig.3,4,5) for each a culture plate, a suction pipette (Fig. 6) with a double-angled tip (14) and a cutting and distributing device (Fig.

8,9) for separating the bottoms of the culture vessels of the culture plates with the cell culture on it and its inevitable transfer to each a measuring vessel assigned from the start.

2. Equipment set according to. Claim 1, characterized in that its Culture plate (Fig.1,2) a fixed arrangement of cup-shaped culture vessels (1,2) possesses and are so folded onto one another in a central perforation line 3 can that the openings of the culture vessels of its two halves are concentric to one another come to rest and each vessel forms the lid of the vessel below and furthermore, bend each culture plate two in the perforation lines (4,5) on the side. and has tearable edge strips which carry projections with which a fastening every culture plate in every holder is possible.

3. Equipment set according to ixnspruch 1, characterized in that its Suction pipette (Fig. 6) has a tip angled in two planes.

4. Equipment set according to claim 1, characterized in that its holder (Fig.3,4,5) consists of two identical, articulated halves (8,9), which in the Patterns of the culture vessels of one half of the culture plate are perforated and thicker than the Height of the culture vessels (1,2), the holes on the free edges for receiving of the projections (7) of the edge strips (6) of the culture plates and with a metal clip be closed, which intervenes in mutual husbands.

5. Equipment set according to claim 1, characterized in that its cutting and distribution device consists of a) a lower part, the measuring vessels (15) in a predetermined, contains inevitable order, b) one that can be placed on it with the help of dowel pins Upper part, which is composed of two in the pattern of the culture vessels of a culture plate perforated knife guide plates (20,21), in the space (23) of which the bottoms of the Culture vessels (1, 2) each placed culture plate half by means of an inserted there Knife (36) can be separated, a base plate (19) attached below and tubes or hoses (29) connecting each hole (26) of the lower knife guide plate (20) with the corresponding hole (34) in the base plate (19) and so the individual cut-off culture vessel bottom inevitably into the associated Conduct measuring vessel (15) and c) one which can be placed on the upper part with the aid of dowel pins Hand pressure cover.

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