DE2109881A1 - Enzyme preparation - Google Patents
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Description
KDIiINELIJKE EEDERT.^DSCHE GIST- EN SPIRITUSFABRIEK N.V. DeIft, NiederlandeKDIiINELIJKE EEDERT. ^ DSCHE GIST- EN SPIRITUSFABRIEK N.V. DeIft, Netherlands
" Enzympräparat ""Enzyme preparation"
Priorität: 3. März 1970, Grossbritannlen, Nr. 10 240/70■Priority: 3rd March 1970, Great Britain, No. 10 240/70 ■
pie Erfindung betrifft Enzympräparate mit ausgezeichneten Eigenschaften zur Verwendung in V/aschiaitteln.pie invention relates to enzyme preparations with excellent Properties for use in detergents.
Die Herstellung von Enzymen, die insbesondere für Waschmittel verwendet v/erden sollen, ist mit einigen Schwierigkeiten verbunden. So ist es z.B. schwierig, das Enzym in solcher Reinheit herzustellen, dass es dem Waschmittel keinen unangenehmen Geruch verleiht. Ferner hat das Enzym eine Farbe, die bei der Ein verleibung des Enzyms im Waschmittel diese weniger ansprechendmacht. * ·The production of enzymes which are to be used in particular for detergents is associated with some difficulties. For example, it is difficult to produce the enzyme in such a purity that it does not give the detergent an unpleasant odor confers. Furthermore, the enzyme has a color that corresponds to the one incorporation of the enzyme in the detergent makes it less appealing. * ·
Aufgabe der Erfindung war es daher, Enzympräparate zu schaffen, die nicht die vorgenannten Kachteile auf v/eiaen und ausscrdem eine hohe Stabilität besitzen, so dass sie trotz Verwendung in geringer Menge eine bestimmte Wirkung entfalten und für die Gesundheit weniger Gefahren bestehen als bei den üblichen ßnzym-The object of the invention was therefore to create enzyme preparations which do not include the aforementioned parts of the kachon and also have a high stability, so that they develop a certain effect and for health despite being used in small quantities there are fewer dangers than with the usual enzyme
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Präparaten. Diese Aufgabe wird durch die Erfindung gelöst._ 2 -
Preparations. This object is achieved by the invention.
Gegenstand der Erfindung ist somit ein Enzympräparat, enthaltend einen Komplex aus einem Enzym und einem in wässrig-alkalischer lösung lösliehen Former mit einer unverzweigten oder verzweigten C-C-Ketts mit Carboxylgruppen als Substituenten and mit einem Durchschnittsmolekulargewicht νου mindestens 10 000, wobei das Polymer gegebenenfalls als v/eitere Subs ti. tuen ε en gegebenenfalls substituierte Kohlenwasserstoffreste enthalten kann und die C-C-Kette und bzw. oder die Kohlenwasserstoffreste gegebenenfalls durch Heteroatome, vorzugsweise oauerstoffatomey unterbrochen sein können.The invention thus relates to an enzyme preparation containing a complex of an enzyme and an aqueous-alkaline solution-soluble former with an unbranched or branched CC chain with carboxyl groups as substituents and with an average molecular weight νου at least 10,000, the polymer optionally being used as v / pus subs ti. tuen ε en can contain optionally substituted hydrocarbon radicals and the CC chain and / or the hydrocarbon radicals can optionally be interrupted by heteroatoms, preferably oxygen atoms y.
Vorzugsweise hat das Polymer ein Durchschnittsraolnkulargev/icht von mindestens 20 000. Die bevorzugten Polymere und Copolymere ' enthalten -CHXCY(COOH)-Gruppen, ir~ denen X ein V/asserstoffaiom oder eine Carboxylgruppe und Y ein V/asserstoffatora oder eine Methylgruppe bedeuten. Beispiele für derartige Polymere sind die Polymeren von Acrylsäure oder Methacrylsäure oder Copolymerisate von Acrylsäure, Methacrylsäure oder Maleinsäure mit z.B. Styrol, Äthylen c-d&r Vinylmethylather. Ferner sind auch partielle niedere Alkylester und partielle Amide dieser Polymeren und Copolymeren geeignet. __Preferably the polymer has an average molecular weight of at least 20,000. The preferred polymers and copolymers contain -CHXCY (COOH) groups, in which X is an hydrogen atom or a carboxyl group and Y a hydrogenator or a Mean methyl group. Examples of such polymers are the polymers of acrylic acid or methacrylic acid or copolymers of acrylic acid, methacrylic acid or maleic acid with e.g. styrene, ethylene c-d & r vinyl methyl ether. Furthermore, there are also partial lower alkyl esters and partial amides of these polymers and copolymers are suitable. __
Die Komplexe der Erfindung sind verhältnismässig rein, sie haben einen angenehmeren Geruch und eine bessere Farbe sov/ie eine - höhere Aktivität, bezogen auf Gewichtsbasis, als die herkömmlichen Enzyme. Übsrranchenderweise gehen diese günstigen Eigenschaften nicht verloren bzw. werden nicht beeinträchtigt, wenn man das Enzympräpaiat Waschmitteln einverleibt. Ein weitererThe complexes of the invention are relatively pure, they have a more pleasant smell and a better color both - higher activity on a weight basis than conventional ones Enzymes. Surprisingly, these favorable properties work not lost or impaired if the enzyme preparation is incorporated into detergents. Another
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Vorteil der Enzympräparate der Erfindung gegenüber den herkömmlilichen Enzymen ist ihre geringere Toxizität sowie die geringere Gefahr aLlergoner Reaktionen und ihre hohe Stabilität,.Advantage of the enzyme preparations of the invention over the conventional ones Enzymes is their lower toxicity as well as the lower one Risk of general reactions and their high stability.
Waschmittel, die ein Enzympräparat der Erfindung enthalten, besitzen zumindest vergleichbare Waschwirkung wie Waschmittel, die. ein übliches Enzytt gleicher enrz/mati scher Aktivität, ausgedrückt in DgIft-Einheiten (ITJ) enthalten. Ein weiterer Verteil der Erfindung ist darin zu crulicken, dass die Enzymkomplexe aus der filtrierten Gärmaischc bzw. dem·Zellextral t hergestellt werden können, wodurch die übliche Isolierung des Enzyms entfällt. Detergents that contain an enzyme preparation of the invention have at least a comparable washing effect as detergents that. Contains a common enzyme with the same enzymatic activity, expressed in DgIft units (ITJ). Another dispensing of the invention is to crulicken is that the enzyme complexes of the filtered Gärmaischc or the Zellextral · t can be made, whereby the usual isolation of the enzyme is omitted.
In-; Enzyme für die Enzympräparate der Erfindung leiten siel: von Enr-yiaen ab, wie sie üblicherweise in V.'aschmitteln verwendet werden, z.2. Proteasen, wie sie z.B. durch Bacillusarten erzeugt v/erden. Diese PiOteasen oder deren Gemische können vor der Herstellung des EnzymPräparates oder danach mit Amylasen, Lipa'iien oder ähnlichen Enzymen vermischt werden. Die Erfindung betrifft fenier Komplexe mit anderen Enzymen, die im allgemeinen nicht in V/aschnitteln verwendet, worden, wie spezielle Arten von Am;.· lasen, Li pas en, Alkoholdehydrasen und Carboxylaseii.In-; Enzymes for the enzyme preparations of the invention derive from Enr-yiaen as they are commonly used in detergents become, e.g. 2. Proteases such as those produced by Bacillus species v / earth. These PiOteases or their mixtures can be used before the Production of the enzyme preparation or afterwards with amylases, Lipa'iien or similar enzymes are mixed. The invention affects fenier complexes with other enzymes in general not used in sections, like special types by Am;. · lases, lipases, alcohol dehydrases and carboxylases.
Eine besor;.'i;?rr-. vorteilhafte Gruppe unter den Enzymkomple>:uü der" Erfindung i:,x diejenige, in der das Enzym mit einer. Polymer kombiniert ist, dessen C—C-Kette lediglich Kohlenwasserstoffreste, inöbesondere Aryireste, als Gubsxituenten neben den Carboxylgruppen enthält. ?eispiele für derartige Polymere si.r.ü solche, die J-irleiiiöäure als Monomereneinheit enthalten. L-Ie Aryjrestp in diesen Polymeren leiten sich z.B. von Hoiioar..·!-A besor;. 'I;? Rr-. advantageous group among the Enzymkomple>: UÜ the "invention i:, x is the one in which the enzyme is combined with a polymer, the C-C chain contains only hydrocarbon radicals, inöbesondere Aryireste as Gubsxituenten in addition to the carboxyl groups EXAMPLES for..? Such polymers si.r.ü those which contain I-irleiiiöääure as a monomer unit. L-Ie Aryjrestp in these polymers derive, for example, from Hoiioar ..
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äthyleneinheiten, insbesondere Styroleinheiten, ab. Vorzugsweise besteht das Polymer aus Lialeinsäure- und Styroleinheiten. Das bevorzugte Mengenverhältnis der Maleinsäure- und Styrolcinheiten beträgt etwa 3 : 1 bis 1:3, insbesondere 3 : 2 bis 2 : 3-Ein besonders geeignetes Polymer ist im Handel als wässrige Lösung unter dem Namen G-942 erhältlich, in der das Ι·ίο1 verhältnis der Styroleinbeiten zu den Haieinsäureeinheiten etwa 1 : Γ und das Durchschnittsmolekulargewicht mehr als 10 000 beträgt. Andere geeignete Moi-Gebereinheit en für die in den Enzympräparaten der Erfindung verwendeten Polymeren sind z.B. Acrylsäure und Methacrylsäure. Diese Monomeren können selbstverständlich aucV in Copolymerisaten vorhanden sein, in denen gHeichzeitig z.B. SLyroleinheiten anwesend sind; vergl. USA.-Patentschrift 2 205 882 und 2 205 901. In diesen Patentschriften sind Beispiele für Polymere genannt, die für die Enzympräparate der .Erfindung geeignet■sind.ethylene units, especially styrene units, from. Preferably the polymer consists of lialic acid and styrene units. That preferred quantitative ratio of maleic acid and styrene units is about 3: 1 to 1: 3, in particular 3: 2 to 2: 3-One A particularly suitable polymer is commercially available as an aqueous solution under the name G-942, in which the Ι · ίο1 ratio of the styrene units to the shark acid units about 1: Γ and the average molecular weight is more than 10,000. Other suitable Moi donor units for those in the enzyme preparations Polymers used in the invention include acrylic acid and methacrylic acid. These monomers can of course also be used be present in copolymers in which gHeichzeit e.g. SLyrene units are present; See U.S. Patent 2 205 882 and 2 205 901. Examples of polymers are given in these patents which are used for the enzyme preparations of the invention are ■ suitable.
Die in den Polymeren vorhandenen Carboxylgruppen können .-teilweise in Derivate, wie Amide oder Ester, umgewandelt sein. Pur die Ester kommen als Alkoholkomponente vorzugsweise niedere aliphatische Alkohole in Frage. Einige Carboxylgruppen sollen im Polymer in freier Form vorliegen. Die Erfindung betrifft auch Produkte, die bei der Umsetzung der Komplexe bzw. Enzympräparate dar .Erfindung mit Metallionen enthaltenden Lösungen oder Reaktionsteilnehmern anfallen, die mit diesen freien Carboxylgruppen des Polymers reagieren und eine Ausfällung und dew. oder Vernetzung der gebildeten Verbindung hervorrufen.The carboxyl groups present in the polymers can partially converted into derivatives such as amides or esters. Pure the Esters are preferably lower aliphatic as the alcohol component Alcohols in question. Some carboxyl groups are said to be in free form in the polymer. The invention also relates to products those involved in the implementation of the complexes or enzyme preparations .Erfindung with metal ion-containing solutions or reactants incurred with these free carboxyl groups of the Polymers react and a precipitation and dew. or cause crosslinking of the connection formed.
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Die Erfindung "betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung der Enzympräparate, das dadurch gekennzeichnet·ist, dass κη eine -wässrige Lösung des Enzyms mit einer wässrigen Lösung des Polymers zusammenbringt. Vor oder nach dem Vermischen wird der Pjj-Wert auf etwa 2 bis etwa 9, vorzugsweise etwa 2 bis etwa 6, eingestellt, Die gebildete Fällung wird nach üblichen Methoden abgetrennt, z.B. durch Abschleudern und Waschen und Trocknen des ausgefällten Enzympräparats, Zum Waschen des Enzympräparats sollen solche Lösungsmittel oder Löaungsmii;tolgemische verwendet -werden, die das Enzympräparat nicht nennenswert lösen oder zersetzen. Zu diesem Zweck eignen sich z.B. organische Losungsmittel, wie Aceton und.Äthanol. Die getrocknete Fällung kann als fr-eifliessendes Pulver erhalten werden, die sich V/aschmii;telii leicht einverleiben lasst.The invention "also relates to a process for the production of the enzyme preparations, which is · characterized in that a -wässrige solution κη of the enzyme with an aqueous solution of the polymer matches. Before or after the mixing of PJJ value is about 2 to about 9 , preferably about 2 to about 6, the precipitate formed is separated off by conventional methods, e.g. by spinning off and washing and drying the precipitated enzyme preparation, For washing the enzyme preparation, solvents or solvent mixtures should be used which do not include the enzyme preparation dissolve or decompose. Organic solvents such as acetone and ethanol are suitable for this purpose.
Die Polymerrneiigen zur Herstellung des Enzymkomplexes hängen von der Art des Enzyms und seiner Konzentration sowie der Art des verwendeten Polymers ab. Weitere Faktoren sind z.B. der p„-\Yert, die Gegenwart von Salzen, die elektrostatischen Ladungen des Enzyms und des Polymers, die die Komplexbildung beeinflussen. Auch die Menge des Polymers, die zur optimalen Komplexbildung erforderlich ist, hängt von diesen und anderen Faktoren ab, z.B- der Konzentration der Enzymlösung. Bei Verwendimg einer G-942—Lösung, die otwa 25 lp des Styrol -Maleinsäure-Copo] yrnori-sats enthält, werden vorzugsweise Mengen von etwa 0,l> bis 3 3 Gewichti3proz(=r.t pro Volumen der durch Bazillusarten erzeugter. Protease { MAXATASE ), bezogen auf eine Enzymlösung von etv/a 100 000 DU/g, verwendet. Für Spezialzwecke können auch andereThe polymers used to make the enzyme complex depend on the type of enzyme and its concentration, as well as the type of polymer used. Other factors are, for example, the value, the presence of salts, the electrostatic charges of the enzyme and the polymer, which influence the formation of the complex. The amount of polymer required for optimal complex formation also depends on these and other factors, e.g. the concentration of the enzyme solution. In Verwendimg a G-942 solution, which contains 25 OTWA l p of the styrene -maleic acid-Copo] yrnori-sats, preferably amounts of from about 0, l> are to 3 3 Gewichti3proz (rt = per volume of the generated by Bazillusarten. Protease {MAXATASE), based on an enzyme solution of about 100,000 DU / g, used. For special purposes, others can
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Mengen verwendet v/erden.Quantities used v / ground.
Die Enzympräparate der Erfindung können vorzugsweise nach dem Waschen mit Metallionen oder anderen Eeaktionsteilnehrnern uin^nsetzt v/erden. Geeignete Metallionen sind dreiwertige Metallionen, wie Aluminium-, Eiaen- und Chromionen. Es können auch Metallionen mit anderer Wertigkeit, z.B. Zirkcniumionen,verwendet v/erden.The enzyme preparations of the invention can preferably according to the Washing with metal ions or other reactants is involved v / earth. Suitable metal ions are trivalent metal ions such as aluminum, iron and chromium ions. It can too Metal ions with a different valence, e.g. zirconium ions, are used v / earth.
Die Erfindung betrifft schließlich Waschmittel, die einen oder mehrere der vorgenannter! Erizymkcmplexe zusammen mit mindestens einer waschaktiven Substanz enthalten. In den V/asehnitteln ist der Enzymkomplex in ausreichender Menge vorhanden, um eine gute enzymatische Aktivität zu erhalten. Die bevorzugte enzymatisch^ Aktivität in den Waschiaitteln der Erfindung bf-trägt etwa 1000 bis etwa 3000 DU/g.Finally, the invention relates to detergents that contain one or more of the above! Erizymkcmplexe together with at least contain a detergent substance. In the means of delivery is the enzyme complex is present in sufficient quantity to obtain good enzymatic activity. The preferred enzymatic ^ Activity in the detergents of the invention bf-carries about 1000 up to about 3000 DU / g.
In den Waschmitteln der Erfindung worden die üblichen bekannten waschaktiven .Substanzen verwendet, die in biologisch aktiven Waschmitteln verwendet werden. Im allgemeinen können nichtionische und anionische grenzflächenaktive Verbindungen verwendet werden, v/ie wasserlösliche Seifen, anionische, nichtionischß, ampholytische und zwitterionische netzmittel.In the detergents of the invention, the usual known detergent .Substanzen have been used, which in biologically active Detergents are used. In general, nonionic and anionic surfactants can be used are, v / ie water-soluble soaps, anionic, nonionic, ampholytic and zwitterionic wetting agents.
Beispiele für die wasserlöslichen Seifsn sind die Natrium-, Kalium-, Ammonium- und Alkanolammoniumsalze, z:13. die Mono-, Di- und Triäthano!ammoniumsalze höherer fettsäuren mit etwa 10 bis 22 C-Atomen. Spezielle Beispiele £Vr diese Klasse von Netzmitteln sind die "--itriura- oder Kaliumaal ze von Fettsäuregemischen, di<i sich von Kokosnuss öl und Ta3g ableiten.Examples of the water-soluble Seifsn are the sodium, potassium, ammonium and alkanolammonium z: 13, the mono-, di- and Triäthano ammonium salts of higher fatty acids having about 10 to 22 carbon atoms!. Specific examples £ Vr this class of surfactants are the "--itriura- or Kaliumaal ze of fatty acid mixtures, di <i found that oil from coconut and derive Ta3g.
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Beispiele für anionische Netzmittel sind die v/asserlösl.i chen Salze, z.]).. die Alkalimetallsalze organischer Scnvefclsäurereaktionsprodukte, die in ihrem Molekül einen Alk.yliv.~t mit etwa 8 bis etwa ?2 C-Atomen, und SuIfonat- oder Sulfatroste enthalten. Der 'Ausdruck Alkylrest schliesst auch den Alkylrest höherer Acylreste ein. Spezielle Beispiele für diese Klasse von Wetzmitteln sind die L'atrium- oder Kaliumalkylsulfate, wie insbesondere solche Verbindungen, die durch Sulfatierung höherar Alkohole mit 8 bis 18 C-Atomen erhalte:! worden und die |Examples of anionic surfactants are the v / asserlösl.i insoluble salts, z.]) .. The alkali metal salts of organic Scnvefclsäurereaktionsprodukte that a Alk.yliv in its molecule. ~ T of about 8 to w et a? 2 C atoms, and Contain sulphonate or sulphate gratings. The term alkyl radical also includes the alkyl radical of higher acyl radicals. Specific examples of this class of wetting agents are the sodium or potassium alkyl sulfates, such as, in particular, those compounds which, through sulfation, obtain higher alcohols with 8 to 18 carbon atoms :! been and the |
ihrerseits bei der Reduktion der Glyceride von Talg oder Kokosnussöl anfallen. Ferner Natrium- oder KalHurnbenzolsulf onate, in denen der Alkylvfint unverrweigt oder verzweigt ist und etwa 9 bis etwa llj> C-Atome enthält, wie Natriumdodecylb?nzolsulfonat, Katriumalkylglyccrylathersulfonate, j nsbesondere die A'uhor höherer Alkohole, die sich von Talg und Kokosnussöl ableiten, Hatrium-Kokosnussölfettsäuremonoglyceridsulfate und -sulfonate, natrium- oder Kaliumnalze von Schwefelsäureestern deo Reaktionsproduktes aus 1 Mol eines höheren Fettalkohols, wie Taug- oder Kokosnussölalkoholen, und etv/a 1 bis 6 Hol Äthylenoxid, Natrium- oder Kaliumsalkg von Alkylphenoläthyienoxidäthersulfaten mit etv/a 1 bis etwa 10 Äthylenoxideinheiten im Molekül und etwa 8 bis etwa 12 C-Atomen in den Alkylresten, , die Reaktionsprodukte von Fettsäuren, die mit Isäthicnsäure ■verestert und mit liatriumhydroxid neutralisiert sind, bei denen sich die Fettsäuren z.B. γοη Kokosnustöl ableiten, liatrium- oder Kaliumsalae von Pettsäureamiden eines Methyltaurids, in denen die Fettsäuren sich z.B. von Kcküf-nusnöl ableiten, so'./ie die ITatrium- und Kuliumsalze von sulfonierten C1n bis Co/-in turn arise when the glycerides of sebum or coconut oil are reduced. Furthermore, sodium or KalHurnbenzolsulf onate, in which the Alkylvfint unverrweigt or branched and about 9 to about l l j> C-atoms, such as Natriumdodecylb nzolsulfonat?, Katriumalkylglyccrylathersulfonate, j the A'uhor nsbesondere higher alcohols derived from tallow and Derive coconut oil, sodium coconut oil fatty acid monoglyceride sulfates and sulfonates, sodium or potassium salts of sulfuric acid esters deo reaction product from 1 mole of a higher fatty alcohol, such as dew or coconut oil alcohols, and etv / a 1 to 6 holv / a 1 to 6 ethylene oxide, sodium oxide or potassium alcoholsulfate with sodium oxide or potassium alcohol a 1 to about 10 ethylene oxide units in the molecule and about 8 to about 12 carbon atoms in the alkyl radicals, the reaction products of fatty acids which are esterified with isäthicnsäure ■ and neutralized with liatrium hydroxide, in which the fatty acids are derived, e.g. γοη coconut oil, liatrium- or Kaliumsalae of Pettsäureamiden of a methyl tauride, in which the fatty acids are, for example derive from Kcküf-nut oil, so './ ie the sodium and culture salts of sulfonated C 1n to C o / -
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Olefinen.Olefins.
Beispiele für niehtionische Netzmittel sind die Kondensationsprodukte von Alkylenoxiden nit organischen hydrophoben Verbindungen, die aliphatischer oder alky!aromatischer Art sein können. Die Länge der Polyoxyalkylenreste, die ;ait einer hydrophoben Gruppe kondensiert sein kann, lässt sich so einstellen, dass v/aaserlösliche Verbindungen mit dem gewünschten HLB-Wert erhalten v/erden. Eine andere. Klasse dieser Netzmittel hat halbpolaren Charakter. Spezielle Beispiele für diese Klasse nichtionischer Netzmittel sind: Examples of non-ionic wetting agents are the condensation products of alkylene oxides with organic hydrophobic compounds, which can be of the aliphatic or alkyl aromatic type. The length of the polyoxyalkylene radicals which; ait a hydrophobic Group can be condensed can be set so that that v / aas-soluble compounds with the desired HLB value get v / earth. Another. This class of wetting agents has a semi-polar character. Specific examples of this class of nonionic wetting agents are:
1) Die unter der Bezeichnung "Pluronic" bekannten nichtionischen Netzmittel. Diese Verbindungen werden durch Kondensation von Äthylenoxid, mit einer hydrophoben Base hergestellt, die durch Kondensation von Propylenoxid mit Propylenglykol erhalten wird. Der hydrophobe Teil des Moleküls, der wasserunlöslich ist, hat ein Molekulargewicht von etwa 1500 bis 1800. Durch Anlagerung von Polyoxyät-hylenresten an diesen hydrophoben Teil wird die Wasserlöslichkeit des Moleküls insgesamt erhöht und der flüssige Charakter des Produktes bis zu dem Punkt beibehalten, bei dem der Polyoxyäthy"! cngehalt etwa 50 l/a des Gesamtgewichtes des Kondensationsprodukts ausmacht.1) The nonionic wetting agents known under the name "Pluronic". These compounds are made by the condensation of ethylene oxide with a hydrophobic base obtained by the condensation of propylene oxide with propylene glycol. The hydrophobic part of the molecule, which is insoluble in water, has a molecular weight of about 1500 to 1800. The addition of polyoxyethylene residues to this hydrophobic part increases the water solubility of the molecule as a whole and maintains the liquid character of the product to the point where the polyoxyethylene content is about 50 l / a of the total weight of the condensation product.
Z) Die Poly oxy äthylenoxidkondensate von Alkyl phenolen, z.B. d:" c Kondenaatiorinprodukte von Alky !phenolen mit etwa 6 bJs 12 C-Atomeii in dem unver:;weigten oder verzweigten Alkylrest mit Ätliylenoxid. Das Xthylenoxici liegt in Mengen von 5 bis 2b Mol je Hol A-I ky] phenol γητ·. \.^v Alkylrcst dieser Verbindung kann s.ich von Oligomeren des Propylen^, Diisobutcns, Oc tens oder Nonens! Z) The poly oxy äthylenoxidkondensate phenols of alkyl, such as d "c Kondenaatiorinprodukte of alky phenols containing from about 6 BJS 12 C Atomeii in the non-:; weigten or branched alkyl radical having Ätliylenoxid The Xthylenoxici is present in amounts of from 5 to 2b Mol. per Hol AI ky] phenol γητ ·. \. ^ v The alkyl residue of this compound can be seen from oligomers of propylene, diisobutene, octene or nonene
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ableiten.derive.
3) Kondensationsprodukte von Äthylenoxid mit dem Umsetzungsprodukt von Propylenoxid und Äthylenddamin. Beispiele hierfür sind Verbindiingen, die etwa 40 bis etv/a 80 Gewichtsprozent Äthylenoxideimheiten enthalten und ein Molekulargewicht von etwa ?000 bis etwa 11 000 haben- und deren hydrophobe Ease das Umsetzungsprodukt von Äthylendiamin mit überschüssigeni Propylenoxid ist,3) Condensation products of ethylene oxide with the reaction product of propylene oxide and ethylenediamine. examples for this are Compounds containing about 40 to about 80 percent by weight of ethylene oxide units and have a molecular weight of about? 000 to about 11,000 - and their hydrophobic ease is the reaction product of ethylenediamine with excessi propylene oxide,
die ein Molekulargewicht der Grössenordnung von g 2500· VLs 3000 hat.which has a molecular weight of the order of magnitude of g 2500 · VLs 3000.
4) Kondensat;! onsprodukte unverzweig.ter oder vez^zwtii&üer aliphatisdher Alkohole mit 8 bis Z?. C-Atomen mit Athylenoxia, z.B. KokosTiMssalkohol-äthylenoxid-Kondensate mit 5 bis 30 Äthylenoxid einheit en und 10 bis 14 C-Atomen im Kokosnussalkoholteil.4) condensate ;! onproducts of unbranched or vez ^ zwtii & üer aliphatic alcohols with 8 to Z ?. C atoms with Athylenoxia, for example coconut alcohol-ethylene oxide condensates with 5 to 30 ethylene oxide units and 10 to 14 C atoms in the coconut alcohol part.
5) Die Säinreamide vor< Fettsäuren mit etwa 8 bis 18 C-Atomen mit Ammoniak, Monoäthanolamin und Diäthaiiolamin. Die Acylreste leiten sich" im allgemeinen von natürlich vorkommenden Glyceriden, v/ie Kokosnuss öl, Palmöl, Sojabohnenöl und Talg ab. Sie können jedoch auch synthetischen Ursprungs' sein. z.B. durch Oxydation von Erdöl oder durch Hydrierung von Kohlenmonoxid nach dem Fischer—f^prjch-Veriahren anfallen.5) The Säinreamide in front of < Fatty acids with about 8 to 18 carbon atoms with ammonia, monoethanolamine and diethalolamine. The acyl residues conduct "generally from naturally occurring glycerides, v / ie coconut oil, palm oil, soybean oil and sebum. You can but also of synthetic origin. e.g. by oxidation of petroleum or by hydrogenation of carbon monoxide after Fischer-f ^ prjch-Veriahren incurred.
6) langlfcelfctige tertiäre Aminoxide der allgemeinen Formel6) long-acting tertiary amine oxides of the general formula
H2
ιH 2
ι
R1 - (0R4)n - IJ -> 0R 1 - (0R 4 ) n - IJ -> 0
1 ''1 ''
in der E ein Alkyl rest mit etv/a 8 bis etv/a ?A C-Atomen, R''in which E is an alkyl radical with etv / a 8 to etv / a ? A C atoms, R ''
3 . 43. 4th
und R -Methy].-, Äthyl- oder Hydroxyäthylgruppen und R eineand R -Methy] .-, ethyl or hydroxyethyl groups and R a
109839/15^9109839/15 ^ 9
-ίο- 2109381-ίο- 2109381
Athylengruppe ist und η einen Wert von O bis etwa 10 hat. Spezielle Beispiele für diese Verbindungen sind I/iuothyldcde cylaminoxid und Bis-(2-hydrox.yäthyl )-doae;cylaininüx'-u.Is ethylene group and η has a value from 0 to about 10. Specific examples of these compounds are I / iuothyldcde cylamine oxide and bis (2-hydrox.yäthyl) -doae; cylaininüx'-u.
7) Langkettige tertiäre Phosphinoxide der allgemeinen Pornol7) Long chain tertiary phosphine oxides of common porn oil
H^-P-* 0H ^ -P- * 0
R7 R 7
5
in der R ein Alkyl-, Alkenyl- oder Monoh.y?roxy alkyirest mit
bis 24 C-Atomen in der Kette and R und R Alkyl- oder Monohydroxyalkylreste
mit 1 bic i C-Atomen sind. Beispiele für diene
Verbindungen sind Dimeth,yldoaecylpho53phinoxid und üimethyl-(2-hydroxydodecyl)-phosphinoxi
d.5
in which R is an alkyl, alkenyl or monohydroxyalkyl radical with up to 24 carbon atoms in the chain and R and R are alkyl or monohydroxyalkyl radicals with 1 bic i carbon atoms. Examples of diene compounds are dimeth, yldoaecylpho53phine oxide and dimethyl (2-hydroxydodecyl) phosphinoxy d.
8) langkettige Sulfoxide der allgemeinen Formal8) General Formal Long Chain Sulphoxides
8 ' Q
R-S- B.J 8 'Q
RS B. J
8
in der R ein Alkyirest mit etwa 10 bis etwa 18 C-Ätcmen und8th
in the R an alkyl radical with about 10 to about 18 C-Ätcmen and
R ein Alkyirest mit 1 bis 3 C-Atomen und 1 bis 2 Hydroxylgruppen ist. Spezielle Beispiele für diene Verbindungen sind Dod icylmetliylpulfoxid und ' 3-Hydroxytr ? Π γ.::7/1πο fchyl null'oxid.R is an alkyl radical with 1 to 3 carbon atoms and 1 to 2 hydroxyl groups is. Specific examples of your compounds are Dod icylmetliylpulfoxid and '3-Hydroxytr? Π γ. :: 7 / 1πο fchyl zero'oxide.
Beispiele für ampholytesehe Hetamittel sind Derivate_aliphati- , iichor sekunaärer und tertiärer Amine, in denen der Alkylrcßt unver^v/eir.t oder verzweigt ist und in denen einer aer aliphatischen Rente· etwa 8 bis 18 C-Atome enthält und ein Rest eine anionidohe, wasserlöslich wachende Gruppe, z.V>. eine Carboxyl-, SuIf ο-, SuI fat ο-, ihv-ophato- oaer Phosp''ionogrup])ü enthält. Beispiele für dieee Verbindungen sind Natrium-^-dodecylamino-Examples of ampholytic heta agents are aliphatic, iichorecondary and tertiary amines in which the alkyl group is undeveloped or branched and in which an aliphatic group contains about 8 to 18 carbon atoms and one radical contains an anionide, water-soluble guarding group, zV>. a carboxyl, SuIf ο-, SuI fat ο-, ihv-ophato- oaer Phosp''ionogrup]) ü contains. Examples of these compounds are sodium - ^ - dodecylamino-
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propionat und IJatrium-^-dodecylaminopropansulfonat.propionate and sodium - ^ - dodecylaminopropanesulfonate.
Beispiele für zwitterionische Netzmittel sind die Derivate ali-Ijhatiseher quartärer Ammonium-, Phosphonium- und Sulfoniumverbindungen, in denen der Alkylrest unverzv/eigt oder verzweigt ist und in denen einer der aliphatischen Reste etwa 8 bis 2-\ C-Atome enthält und e-iner der Reste eine omonische, wasserlöslich machende Gruppe enthält, z.B. eine Carboxyl-, Sulfo-, Sulfate-, Phospnato- oder Ph->.;phonogruppe. Beispiele für diese Verbindungen sind 3-(K,^-^iinethyl-K--hexadecylaninionio)-propan-l— sulfonat und ^-(NjN-Pimethyl-K-hexadecylammo^i ;) ^2-hydroxypropan-1-sulfonat. Diese Verbindungen siud wegen ihrer Kaltwasser-Ketzmittelcigenschcfton bevorzugt.Examples of zwitterionic wetting agents are the derivatives of aliphatic quaternary ammonium, phosphonium and sulfonium compounds in which the alkyl radical is unbranched or branched and in which one of the aliphatic radicals contains about 8 to 2 carbon atoms and is inert the remainder contains an omonic, water-solubilizing group, for example a carboxyl, sulfo, sulfate, phosphnato or Ph ->; phono group. Examples of these compounds are 3- (K, ^ - ^ iinethyl-K - hexadecylaninionio) propane-1-sulfonate and ^ - (NjN-Pimethyl-K-hexadecylammo ^ i;) ^ 2-hydroxypropane-1-sulfonate. These compounds are preferred because of their cold water heretic properties.
Die vorgenannten lietzTni itel können allein oder im Gemisch verwundet werden. Bei der vorstellenden Aufzählung handelt es sich lediglich um Beispiele für die zahlreichen Netzmittel, die füi? die Waschmittel der Erfindung in Frage kommen. Er, keimen auch andere organische Verbindungen mit Ketzmitteleigensch'tften verwendet werden. Gewöhnlich sind die waschaktiven Substanzen in Mengen von et v/a 4 ' g bis etwa 20 >' des V/aschnittels .vorhanden.The aforementioned last items can be wounded alone or in combination. The list presented is merely a sample of the numerous wetting agents that can be used for? the detergents of the invention come into question. He, germinate also other organic compounds with heretic properties are used. The washing-active substances are usually present in amounts of from about 4 g to about 20% of the average.
Die Waschmittel der Erfindung können auch weitere übliche Zusätze enthalten, v;i e komplexe Phosphate, z.B. NatriumtrTpoly- : phosphat und l.Atriunpyrophosphat, die vorzugsweise in Mengen von etwa 4 0 bin 50 Gewichtsprozent des Waschmittels verwendet werden. Ferner können solche Verbindungen verwendet werden, *./io Uatj-ium-cyantriacetat und Tiatrivimcitrat. Die wichtigste) V.'irkungThe detergent of the invention may also contain other conventional additives, v IU complex phosphates, for example NatriumtrTpoly-: phosphate and l.Atriunpyrophosphat, preferably in amounts of from about 4 0 bin 50 weight percent of the detergent are used. Such compounds can also be used, *. / Io Uatj-ium-cyantriacetat and Tiatrivimcitrrat. The most important) effect
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dieser Verbindungen besteht in der Weichmachung des Wassers, Andere Zusätze sind z.B. wasserfreies Natriumsilikaü, gewöhnlich in Mengen von 1 bis 10 Gewichtspx'ozent, schwach alkalische Verbindungen, v/ie Natriumbicarbonat, gewöhnlich in Mengen bis zu 20 Gewichtsprozent, Millstoffe, v/ie Natriumsulfat, und andere Verbindungen, wie Carboxymethylcellulose, Parfüme und optische Aufheller. Die Waschmittel können in üblicher V/eise hergestellt werden, z.B. durch Mischen der Bestandteile oder durch Herstellung einer Vormischung, die anschliessend mit den weiteren Bestandteilen vermischt wird. Vorzugsweise wird das Enzympräparat der Erfindung oder sein Umsetzungspr-odukt ro it Metallionen oder ähnlichen Reaktionsteilnehmern mit einer oder mehreren der anderen Verbindungen gemischt, z.B. dem Füllstoff, der gewöhnlich Natriumsulfat ist. Auf diese Weise wird zunächst ein Konzentrat mit bestimmter Enzymaktivität hergestellt, das anschliessend mit den anderen Bestandteilen vermischt werden kann.of these compounds consists in the softening of the water. Other additives are, for example, anhydrous sodium silica, usually in amounts of 1 to 10 percent by weight, weakly alkaline compounds, v / ie sodium bicarbonate, usually in amounts up to 20% by weight, mill substances, v / ie sodium sulfate , and other compounds such as carboxymethyl cellulose, perfumes and optical brighteners. The detergents can be prepared in the usual way, for example by mixing the constituents or by preparing a premix which is then mixed with the other constituents. Preferably, the enzyme preparation of the invention or its reaction product is mixed with metal ions or similar reactants with one or more of the other compounds, for example the filler, which is usually sodium sulfate. In this way, a concentrate with a certain enzyme activity is first produced, which can then be mixed with the other components.
Die Enzymaktivität wird folgendermassen bestimmt. Die Aktivität eines Enzyms wird in Einheiten angegeben. Eine Einheit des Enzyms ist diejenige Menge des Enzyms, die eine bestimmte chemische Umsetzung innerhalb einer bestimmten Seit durchführt. Die Reaktionsbeaingungen beeinflussen die Bestimmung der Aktivität erheblich. Die Aktivität wird vorzugsweise unter solchen Bedingungen bestimmt, v/ie sie in Waschlaugen vorliegen, da einige Proteasen in Waschpulvern verwendet werden. Aus diesen Gründen wird die Bestimmung in Gegenwart von Natr:; umtripolyphosphatThe enzyme activity is determined as follows. The activity of an enzyme is given in units. One unit of the enzyme is the amount of the enzyme that carries out a certain chemical conversion within a certain side. the Reaction conditions influence the determination of the activity considerably. The activity is preferred under such conditions determines how they are in washing liquors, as some proteases are used in washing powders. For these reasons is the determination in the presence of sodium :; umtripolyphosphate
durchgeführt, veil dieses Salz in den meisten Waschmitteln vorwerden
handen ist. Weiterhin / der p„-Wert und die Temperatur aufbecause this salt is found in most laundry detergents
hand is. Furthermore / the p “-value and the temperature
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die Waschbedingungen eingestellt. Die Bestimmung der Aktivität, die in Delft-Einheiten (DU) abgegeben wird, erfolgt durch Bestimmung der Reaktion des Enzyms gegenüber Kasein. Die Stabilität wässriger lösungen des Enzyms wird durch Bestimmung der Aktivität der Lösung in Zeitabständen bestimmt»set the washing conditions. The determination of the activity, that is dispensed in Delft Units (DU) is determined by determination the reaction of the enzyme to casein. The stability of aqueous solutions of the enzyme is determined by determining the activity the solution determined at time intervals »
Zur Bestimmung der Aktivität dieses Enzyms werden folgende Reagensien
verwendet;
Reagenz 1: 130 g OaCIg-OH2O gelöst, in destilliertem V/asser aufThe following reagents are used to determine the activity of this enzyme;
Reagent 1: 130 g of OaCIg-OH 2 O dissolved in distilled water
3000 ml.
Reagenz 2: 42 g MgCTp.6"HpO gelöst in destilliertem Wasser auf3000 ml.
Reagent 2: 42 g MgCTp.6 "HpO dissolved in distilled water
3000 ml.
Reagenz 3: 63 g NaHCO.* gelöst in destilliertem V/asser auf3000 ml.
Reagent 3: 63 g NaHCO. * Dissolved in distilled water
3000 ml.
Reagenz 4: Ein Gemisch aus 100 ml Reagenz 1, 100 ml Roagenz 2,
100 ml Reagenz 3 in 9700 ml destilliertem V/asser.3000 ml.
Reagent 4: A mixture of 100 ml of reagent 1, 100 ml of Roagenz 2, 100 ml of reagent 3 in 9700 ml of distilled water.
Diese Lösung hat eine Härte von 15° (deutsche Härtegrade ).
Reagenz 5: 36,34 g Tris-hydroxymethylaminomethan gelöst inThis solution has a hardness of 15 ° (German degrees of hardness).
Reagent 5: 36.34 g of tris-hydroxymethylaminomethane dissolved in
Reagenz 4 auf 1000 ml.
Reagenz 6: Ein Gemisch, aus 1000 g Iiatriumtripolyphosphat,
500 ml Reagenz 1, 500 ml Reagenz 2, 500 ml Reagenz 3Reagent 4 to 1000 ml.
Reagent 6: A mixture of 1000 g of iatrium tripolyphosphate, 500 ml of reagent 1, 500 ml of reagent 2, 500 ml of reagent 3
_ ι_ ι
■*·" t ■ * · " t
in 48,5 Liter destilliertem Wasser. Der p„-Wert wirdin 48.5 liters of distilled water. The p "value is
mit lOprozentiger Salzsäure auf 8,5 eingestellt, Reagenz J; 540 g Trichloressigsaure in destilliertem Wasser auf adjusted to 8.5 with 10 percent hydrochloric acid, reagent J; 540 g of trichloroacetic acid in distilled water
3000 ml.
Reagenz 8: 900 g Ratriumacetat . 3H2C gelb'at in destilliertem
Wa&ser auf 3000 ml. 3000 ml.
Reagent 8: 900 g sodium acetate. 3H 2 C Gelb'at in distilled water to 3000 ml.
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Reagenz 9: 900 ml Essigsäure gelöst in destilliertem Wasser auf 3000 ml.Reagent 9: 900 ml acetic acid dissolved in distilled water to 3000 ml.
Reagenz 10: 2,5 ml Tween-80 gelöst in destilliertem M:\sse.v auf 50 ml.Reagent 10: 2.5 ml of Tween-80 dissolved in distilled M: \ sse.v to 50 ml.
Feagenz 11: 100 ml Reagenz 7, 100 ml Reagenz 8, 100 ml Reagenz und 4 ml Reagenz 10 werden in der angegebenen Reihenfolge miteinander vermischt und mit destilliertern V/asser auf 1000 ml verdünnt.Feagent 11: 100 ml of reagent 7, 100 ml of reagent 8, 100 ml of reagent and 4 ml of reagent 10 are used in the order given mixed together and with distilled V / ater diluted to 1000 ml.
Reagenz 12: Caseinsubstratlösung. Diese LSsang wird folgendermassen hergestellt:Reagent 12: Casein substrate solution. This LSsang is as follows manufactured:
36,0 g Casein (Merck, für biochemische Zwecke) werden in 2,5 Liter Reagenz 4 unter Rühren gelöst. Das Gemisch wird weitere 10 Minuten gerührt, mit 300 ml Reagenz 5 versetzt und nochmals 10 Minuten gerührt. Anschließend wird das Gemisch auf einem V/asserba.d auf 70"C erwärmt und gerührt, bis die Temperatur 40 C erreicht hat. Bei dieser Temperatur wird der p„-Wert mit 1 η Natronlauge auf 8,5 eingestellt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wird das Gemisch mit Reagenz 4 auf 3 Liter verdünnt und die Lösung nochmals gerührt. Diese Lösung ist einen Tag haltbar, sofern sie im Kühlschrank aufbewahrt wird,36.0 g of casein (Merck, for biochemical purposes) will be dissolved in 2.5 liters of reagent 4 with stirring. The mixture is stirred for an additional 10 minutes, with 300 ml Reagent 5 was added and the mixture was stirred for another 10 minutes. Then the mixture is on a V / asserba.d heated to 70 "C and stirred until the temperature Has reached 40 C. At this temperature, the p n value is adjusted to 8.5 with 1 η sodium hydroxide solution. After cooling to room temperature the mixture is diluted to 3 liters with reagent 4 and the solution is stirred again. This solution is one Best before day, provided it is kept in the refrigerator,
Die Proteaseaktivität wird folgendermassen bestimmt:The protease activity is determined as follows:
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Eine abgewogene Menge eines homogenen Enzympräparats wird in einer geeigneten Menge Reagenz 6 gelöst. Der ρ„-Wert dieatr Lösung wird mit 1" η Natronlauge oder In Salzsäure bei iiaumtemperatur auf 8,5 eingestellt. Die Enzymkonzontration der Lösung ist so gewählt, dass die Aktivität der Lösung etwa 20 bis 30 DeIft-Einheiten Protease/ml beträgt. Diese Lösung darf nicht länger als 2 Stunden aufbewahrt werden. Die Enzymlösung, das CaseinsubsOrat und einige Zentrifugenröhrchen werdnn auf einem Wasser-A weighed amount of a homogeneous enzyme preparation is placed in a suitable amount of reagent 6 dissolved. The ρ “value is the opposite of the solution is with 1 "η sodium hydroxide solution or in hydrochloric acid at iiaum temperature set to 8.5. The enzyme concentration of the solution is chosen so that the activity of the solution is about 20 to 30 DeIft units Protease / ml. This solution should not be kept for more than 2 hours. The enzyme solution, the casein substrate and some centrifuge tubes are placed on a water
o * πo * π
bad auf 40 C + 0,3 C erwärmt. 1 ml der Enzymlcsung wird in ein Zentrifugenröhrchen pipettiert. Sobald diese Lösung 40 -C er- " reicht hat, werden 5 ~1 der Gaseinsiib st ratiosung in das Zentrifugenröhrchen pipetti ert und mit der Enzymlösung gründlich vermincht. Die Reaktionszeit beträgt genau 40 Minuten. Anschliessend werden 5 ml Reagenz 11 in das Zentrifugenröhrchen pipettiert und mit der Lösung vermischt. Das Zentrifugenröhrchen wird dann 30 Minuten in ein Wasserbad eingestellt, damit die Fällung koaguliert. Anschliessend wird das Zentrifugenröhrchen 15 Kinuten zentrifugiert.heated bath to 40 C + 0.3 C. 1 ml of the enzyme solution is poured into a Centrifuge tubes pipetted. As soon as this solution is 40 -C " is enough, 5 ~ 1 of the gas entrainment ratio into the centrifuge tube pipetted and minified thoroughly with the enzyme solution. The reaction time is exactly 40 minutes. Afterward 5 ml of reagent 11 are pipetted into the centrifuge tube and mixed with the solution. The centrifuge tube will then placed in a water bath for 30 minutes so that the precipitate coagulates. Then the centrifuge tube is 15 minutes centrifuged.
Für jede Enzymlösung wird ein Blindversuch durchgeführt, indem 5 ml Reagenz 11 in ein Zentrifugenröhrchen pipettiert werden, 'die Lösung auf 40 G erwärmt und anschliessend mit 1 ml Enzyir.lösung und 5 ml Cjiseinsubstratlösung versetzt wird. Der Inhalt der. Röhrchens wirci gründlich vermischt, anschliessend wird das Röhrchen 30 Minuten in ein Wasserbad eingestellt und hierauf 15 Minuten zentrifugiert. Die optische Dichte der klaren Lösung bei 275 nm gegen destilliertes Wasser wird in einem UV-Spc^tro-· photometer beütirnnt. Der Unterschied zwischen der optischen Dichte uer Testlösung und der Ko-ntrollösung ( Λ OD) soll etwaA blank test is carried out for each enzyme solution by pipetting 5 ml of reagent 11 into a centrifuge tube. 'The solution is warmed to 40 G and then with 1 ml of enzyme solution and 5 ml of cjisein substrate solution is added. The content the. The tube is mixed thoroughly, then the Place the tube in a water bath for 30 minutes and centrifuge for 15 minutes. The optical density of the clear solution at 275 nm against distilled water is in a UV-Spc ^ tro- · photometer supported. The difference between the optical The density of the test solution and the control solution (Λ OD) should be approximately
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£109881£ 109881
0,4 "bis 0,6 betragen. Wenn der Unterschied zu hoch oder zu niedrig ist, muss ein neuer Versuch mit einer stärker verdünnten oder stärker konzentrierten Enzymlösung "durchgeführt v/erden. Die Aktivität des Enzyms, ausgedrückt in DU/g enzymhaltigern Material, kann folgend^rmassen "berechnet werden:0.4 "to 0.6. If the difference is too high or too is low, a new test must be carried out with a more dilute or more concentrated enzyme solution ". The activity of the enzyme, expressed in DU / g enzyme-containing Material can be calculated as follows:
χ 11.x Verdünnungsfaktor χ 4,545χ 11.x dilution factor χ 4.545
11 bedeutet die Verdünnung der Enzymlösung durch das Substrat und das Reagenz .11. Der Verdünnungsfaktor ist der Quotient der Gesamtzahl an ml Enzyr.;löf3ung und dem Gewicht der Probe in g. Die Zahl 4,545 ist ein Umwandlungsfaktor.11 means the dilution of the enzyme solution by the substrate and the reagent .11. The dilution factor is the quotient of Total number of ml of enzyme solution and the weight of the sample in g. The number 4,545 is a conversion factor.
Die Beispiele erläutern die "Erfindung,The examples explain the "invention,
Rohe Protease, die bei der Züchtung eines Bacillus jjubtilis erhalten wurde, wird in Wasser bis zu einer Konzentration von etwa 100 000 DU/ml gelöst. Der p^-Wert wird auf 7 eingestellt. Hierauf wird die Enzymlösung mit 10 Volumprozent einer 15 Gewichtsprozent/Volumen verdünnten Lösung der Polymerlösung G-942 (einer 24 bis 2Gprozentigen wässrigen Lösung eines 1 : 1 Maleinsäure-Styrol-Copolymbrisats) in Wasser versetzt. Es bildet sich in geringer Menge eine Fällung. Das Gemisch wird ge-Crude protease produced in the cultivation of a Bacillus jjubtilis is dissolved in water to a concentration of about 100,000 DU / ml. The p ^ value is set to 7. The enzyme solution is then added at 10 percent by volume to 15 percent by weight / volume dilute solution of the polymer solution G-942 (a 24 to 2% aqueous solution of a 1: 1 Maleic acid-styrene copolymer) was added to water. It educates a small amount of precipitation occurs. The mixture is
Ä · Ä ·
rührt und der p^-Wert mit verdünnter Salzsäure auf 5 eingestellt. Hierbei bildet sich, eine grosse Menge einer JVillung, die den Komplex der Protease mit dem Polymer darstellt. Die erhaltene Suspension wird 1 Stunde gerührt, die Fällung abftitriert, in Aceton suspendiert und wieder abfiltriert. An-stirs and the p ^ value is adjusted to 5 with dilute hydrochloric acid. Here, a large amount of a JVillung forms, which represents the complex of the protease with the polymer. The received The suspension is stirred for 1 hour, the precipitate is titrated off, suspended in acetone and filtered off again. At-
schliessend wird dia Fällung getrocknet. Das erhaltene Protease-the precipitate is then dried. The protease obtained
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ORIGINAL INSPECTEDORIGINAL INSPECTED
präparat hat eine 2 "bis 4 mal höhere Reinheit als das rohe Ausgangsmaterial. preparation is 2 "to 4 times more pure than the raw starting material.
Die unterschiedlichen Eigenschaften des Proteasekomplexes und eines herkömmlichen Proteasepräparates wird durch die folgenden Versuche erläutert.The different properties of the protease complex and a conventional protease preparation is illustrated by the following experiments.
Die Präparate werden jeweils in Wasser bis zu einer Enzymaktivität von 100 000 DU/ml gelöst. Der p„-Wert wird durch gleichzeitige Zugabe verdünnter Natronlauge bei 9 gehr.lten. Dann wird eine verdünnte Lösung von Hyaniin 1622 (p-tert.-Cotylphenoxy- äthoxyäthyldimethylbenzylammoniumchlorid) zugegeben. In der Lösung des erfindungsgemässen Enzymkomplexes bildet sich eine Fällung, während in der Lösung des anderen Enzympräparates keine Fällung gebildet wird. Ein Blindversuch, der mit einer verdünnten Lösung der Polymerlösung ohne das Enzym durchgeführt wurde, . ergab ebenfalls eine Fällung nach Zugabe von Hyamin 1622. Daraus kann geschlossen v/erden, dass das Polymer einen Teil des Proteasekomplexes bildet.The preparations are each in water up to an enzyme activity dissolved by 100,000 DU / ml. The p "value is given by simultaneous Add dilute sodium hydroxide solution at 9 degrees. Then it will be a dilute solution of hyaniine 1622 (p-tert.-cotylphenoxy- ethoxyethyldimethylbenzylammonium chloride) admitted. One forms in the solution of the enzyme complex according to the invention Precipitation, while no precipitate is formed in the solution of the other enzyme preparation. A blind test that was carried out with a diluted Dissolving the polymer solution without the enzyme was carried out. also resulted in a precipitation after the addition of Hyamin 1622. From this can conclude that the polymer forms part of the protease complex.
Bei einem anderen Versuch v/urde das erfindungsgemässe Enzympräparat sowie ein übliches Enzympräparat in einem Elektrofocussier« test nach H. Haglund,Science Tools, Bd. 14. Kr. 2, Seite 17 (1967) verglichen. Der Versuch mit dem erfindungsgemässen Enzympräparat zeigt die Bildung einer Zone fester Stoffe im niedrigeren p„-Bereich« Diese festen Stoffe ergeben nach dem Abtrennen und Auflösen in Wasser bei hohem pr,-Wert eine Fällung mit Hyamin 1622. Das UV-Absorptionsspektrum dieser Lösung ist identisch mit dem UV-Absorptionsspektrum einer verdünnten Lö sung von G-942. Der Versuch mit dem Üblichen EnzympräparatIn another experiment, the enzyme preparation according to the invention and a customary enzyme preparation were compared in an electrofocusing test according to H. Haglund, Science Tools, Vol. 14. Kr. 2, page 17 (1967). The experiment with the enzyme preparation according to the invention shows the formation of a zone of solid substances in the lower p "range". After separation and dissolution in water, these solid substances result in a precipitation with Hyamin 1622 at a high p, value. The UV absorption spectrum of this solution is identical to the UV absorption spectrum of a dilute solution of G-942. The experiment with the usual enzyme preparation
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zeigt, dass eine derartige Zone fester Stoffe nicht im angegebenen p^-C^ebiet gebildet wird und die Zugabe von neamin 1622 keine. Fällung hervorrief. Dieser Versuch zeigt ferner, dass das erfindungsgemässe Enzympräparat sich von den üblichen Enzympräparaten dadurch unterscheidet, dass das Enzym in einem Kornplex mit dem Polymer gebunden ist.shows that such a zone of solids is not in the specified p ^ -C ^ ebiet is formed and the addition of neamine 1622 no. Caused precipitation. This experiment also shows that the The enzyme preparation according to the invention differs from the usual enzyme preparations differs in that the enzyme is in a complex is bound to the polymer.
Das Enzympräparat der 'Erfindung wird zur Herstellung eines Waschmittels folgender Zusammensetzung verwendet:The enzyme preparation of the 'invention is used for the manufacture of a detergent of the following composition:
wasserfreies Natriumsulfat 54anhydrous sodium sulfate 54
Natriumtripolyphosphat 24Sodium tripolyphosphate 24
llatriumpyrophosphat 6sodium pyrophosphate 6
Natriumbicarbonat 10Sodium bicarbonate 10
Carboxymethylcellulose 2Carboxymethyl cellulose 2
Dialkylphenoxypoly(äthylenoxy)äthanol 4Dialkylphenoxypoly (ethyleneoxy) ethanol 4
Enzympräparat der Erfindung 2000 DU/gEnzyme preparation of the invention 2000 DU / g
Das erhaltene Waschmittel hat die gleiche Waschaktivität wie ein ähnliches Waschmittel, bei dem anstelle des Enzymkomplexes ein übliches Enzympräparat verwendet wird. Das vorstehend genannte Waschmittel mit dem Enzymkomplex ist heller und hat einen geringeren Geruch als ähnliche Waschmittel, die^mit üblichen Enzympräparaten hergestellt sind-.The detergent obtained has the same washing activity as a similar detergent in which instead of the enzyme complex a common enzyme preparation is used. The above-mentioned detergent with the enzyme complex is lighter in color and has have a lower odor than similar detergents that ^ with usual Enzyme preparations are made-.
Zur Bestimmung der Waschaktivität wird ein Waschversuch mit den nachstehend genannten Waschmitteln durchgeführt, bei denen die Bestandteile (mit Ausnahme der Enzymkomponente) die gleichen sind, wie in dem vorgenannten Waschmittel. Es werden mehrere Pro-To determine the washing activity, a washing test is carried out with the The detergents mentioned below are carried out in which the constituents (with the exception of the enzyme component) are the same are, as in the aforementioned detergent. There will be several
109839/1549109839/1549
ben hergestellt, die O, 250, 500, 1000 und 2000 DU/g des erfindungsgemässen Enzympräparates sowie O, 250, 500, 1000 und 2000 DU/g eines" herkömmliciien Enzympräparates enthalten. Pur diesen Versuch werden Stoffproben mit den Abmessungen 5 x 5 cm des Typs EMPA-116 (Eidgenössische Material-Prüfungs- und Versuchsanstalt für Industrie, Bauwesen und Geweibe in St. Gallen, Schweiz) verwendet, die mit Blut, Milch und Russ verschmutzt sind. " . -ben produced the O, 250, 500, 1000 and 2000 DU / g of the invention Enzyme preparation as well as O, 250, 500, 1000 and 2000 DU / g of a "conventional enzyme preparation. Pure This experiment uses fabric samples with dimensions of 5 x 5 cm of the type EMPA-116 (Eidgenössische Material-Prüfungs- und Versuchsanstalt) used for industry, construction and tissue in St. Gallen, Switzerland) that is soiled with blood, milk and soot are. ". -
Durch Auflösen von 4 g Waschmittel in synthetischen Leitungswasser (Reagenz 4) auf 1 Liter werden Waschlaugen hergestellt. Pur jede Probe wird ein 300 ml fassender Erlenmeyer-Kolben verwendet, der 250 ml der Waschlauge enthält. Die Erlenmeyer-Kolben werden bei. 45 C in ein Wasserbad eingestellt. In jedem Kolben wird eine Stoffprobe eingebracht und genau 1 Stunde bei 45 C eingeweicht. Der Inhalt der Kolben wird jede 10 Minuten um-By dissolving 4 g of detergent in synthetic tap water (Reagent 4) wash liquors are prepared for 1 liter. A 300 ml Erlenmeyer flask is used for each sample. which contains 250 ml of the washing liquor. The Erlenmeyer flasks become at. 45 C set in a water bath. In every flask a fabric sample is introduced and soaked for exactly 1 hour at 45 C. The contents of the flasks are changed every 10 minutes.
geschüttelt. Danach v/ird die Waschlauge abgegossen, hierauf werden 250 ral Standard-Leitungswasser zugegeben, die Erlenmeyer-Kolben werden mit einem Gummistopfen verschlossen und genau 1 Minute kräftig geschüttelt. Sämtliche Stoffproben werden hier- ' auf in ein Becher*;las gegeben und in langsam laufendem Leitungswasser mindestens 10 Minuten gespült. Danach werden die Stoffproben entnommen, zwischen saubere Handtücher gelegt~ünd 16 bis 18 Stunden ohne Druck getrocknet. Die Ergebnisse der Reinigung swirkung wex'den mit einem Blrepho-Remissionsapparat unter Verwendung von Magnesiumoxid als Beaugssubstanz bestimmt. Es wird ein. Filter Nr. 1 verwendet. Die Remissionen v/erden in Prozent der Remission einer vollständig sauberen Stoffprobe berechnet. In Tabelle J. sind die Ergebnisse zusammengestellt.shaken. Then the wash liquor is poured off, then 250 ral standard tap water are added to the Erlenmeyer flasks are closed with a rubber stopper and shaken vigorously for exactly 1 minute. All fabric samples are here- ' up in a beaker *; read and poured into slowly running tap water rinsed for at least 10 minutes. Then the fabric samples are taken, placed between clean towels and 16 dried for up to 18 hours without pressure. The results of the cleaning effect are reduced with a Blrepho remission apparatus Use of magnesium oxide as substance determined. It will a. Filter # 1 used. The remissions are in percent of the Calculated remission of a completely clean fabric sample. The results are summarized in Table J.
109838/1549109838/1549
™ / Probe mit dem Enzym- Probe mit herkömm-™ / sample with the enzyme- sample with conventional
'^ präparat der Er fin- lichem Enzympräpa-'^ preparation of the invented enzyme prepa-
dung ratdung advice
0 45 450 45 45
250 58 · 59250 58 59
500 66 66500 66 66
1000 ". 69 701000 ". 69 70
2000 - 75 . 732000 - 75. 73
Aus der Tabelle ist ersichtlich, dass die Remissionswerte nicht signifikant verschieden sind. Daraus ist zu entnehmen, dass die Waschaktivität der Proben mit dem erfindungsgemässen Enzymkomplex die gleiche ist wie die der Proben mit dem herkömmlichen Enzympräparat.From the table it can be seen that the reflectance values are not are significantly different. It can be seen from this that the washing activity of the samples with the enzyme complex according to the invention is the same as that of the samples with the conventional one Enzyme preparation.
Ein konzentriertes Kulturfiltrat, das bei der Züchtung eines Bacillus.subtilis erhalten wurde, und das einen p„-Wert von 7 und eine Aktivität von etwa 100 000 DIJ/ml hat, wird in einer Menge von 10 Volumprozent mit einer 20gewichtsprozentigen/Volumen verdünnten lösung der 25prozentigen Polynierlösung G-942 in Wasser versetzt. Es bildet sich in geringer Menge eine Fällung. Der Pjj-Wert wird mit verdünnter Schwefelsäure unter Rühren auf 4 eingestellt. Hierbei bildet ßich eine gx-osse Menge einer fällung, die den Protease-Polymerkomplex darstellt. Die Fällung wird gemäße Beispiel 1 abgetrennt und aufgearbeitet. A concentrated culture filtrate obtained from culturing a Bacillus subtilis, which has a p n value of 7 and an activity of about 100,000 DIJ / ml, is diluted in an amount of 10% by volume with a 20% by weight / volume solution the 25 percent polynizing solution G-942 in water. A small amount of precipitate forms. The Pjj value is adjusted to 4 with dilute sulfuric acid while stirring. This forms a large amount of a precipitate which represents the protease-polymer complex. The precipitate is separated off according to Example 1 and worked up.
Das erhaltene Enzympräparat hat eine 2 bis 4 mal höhere Reinheit als die nach üblichen Methoden erhaltenen Präparate. Die Ausbeute beträgt 90 $ der Theorie, bezogen auf die Proteaaeaktivitivfc The enzyme preparation obtained is 2 to 4 times more pure than the preparations obtained by conventional methods. The yield is $ 90 of theory, based on the protease activity
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der eingesetzten Lösung.the solution used.
Aus diesem Enzympräparat wird ein Waschmittel hergestellt, da3 die gleichen Wascheigenschaften hat, wie ein ähnliches Waschmittel, das eine vergleichbare Menge eines herkömmlichen Enzympräparats enthält.A detergent is made from this enzyme preparation, da3 has the same washing properties as a similar detergent that has a comparable amount of a conventional enzyme preparation contains.
Es werden verschiedene Enzympräparate durch Zusatz "einer wässrigen Lösung des au untersuchenden Polymers zu einer Proteaselö.sung mit einer Aktivität von 80 000 bis 100 000 DU/ml und ™ Einstellen des p^-Wertas auf 4 hergestellt. Die erhaltenen Fällungen werden abfiltriort oder abgeschleudert und gemäss Beispiel 1 gewaschen und getrocknet. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengestellt.There are different enzyme preparations by adding "an aqueous Solution of the polymer to be investigated to form a protease solution with an activity of 80,000 to 100,000 DU / ml and ™ Setting the p ^ value to 4 established. The precipitates obtained are filtered off or spun off and according to the example 1 washed and dried. The results are shown in Table II.
''Dt-JORGEN SCHtI-OEWAHN'' GER-JORGEN SCHtI-OEWAHN
PATENTANWALT! S Manchen 23,PATENT ADVOCATE! S some 23,
u.Z.: Fu.z .: F
- 22 Tabelle II- 22 Table II
Dosifj,■
Dosifj,
te, <p Stress
te, <p
DU/gActivity,
DU / g
sat 2 : 1Acrylic acid-styrene copolymer
sat 2: 1
mer is at 2:1 * Methacrylic acid-3i; 7) r r oil copoly
mer is at 2: 1 *
risat 1 : ΓMaleic acid-styrene copolymers
Risat 1: Γ
risat 1 : 1Walflinsäur e ~ styrene copolyEie-
Risat 1: 1
rifjat 5:2'Times an au re - S ty r ο 1 - C ο ρ ο 1,7 r, io -
rifjat 5: 2 '
merisat 1:1, vernetztEthylene Maleic Acid Copoly
merisat 1: 1, networked
mer is at 1 : iEthylene Maleic Acid Copoly
mer is at 1: i
Mal e :i iisäur e-Ccpulyiner i yat
1 : 1 und Maleinsäure-
Styrol—Copolyr-icrisat 1 : 11: 1 mixture of ethylene
Mal e: i iisäur e-Ccpulyiner i yat
1: 1 and maleic acid
Styrene copolymer 1: 1
sat 1 : 1Maleic acid-styrene copolymer
sat 1: 1
Methyl vinyläther-Copolv iiiori-
sat 1 : 1Maleic acid racnobutyl ester
Methyl vinyl ether copolv iiiori-
sat 1: 1
(1) io Gewicht/Volumen, beaogenauf den Trockensubötanzgehalt,(1) io weight / volume, based on the dry substance content,
Bei spielExample
Der Einfluss der Menge der Polymerlösung G-942 wurde anhand von Fällungsversuchen mit einer Bacillus subtilis Profceaaelösung untersucht, die etwa 70 ÖOO DU/ral enthält. Die Fällungsausbeuten werden durch Auflösen der feuchten Fällungen und Bestimmen der proteolytischen Aktivität fctiti«*** Β4· mittBgtn *erden ge- ; mäas Beispiel 1 gewaschen und getrocknet, Sf? polyii«r|ih4lt der ' ; The influence of the amount of the polymer solution G-942 was investigated on the basis of precipitation tests with a Bacillus subtilis Profceaa solution which contains about 70,000 DU / ral . The precipitation yields are determined by dissolving the moist precipitates and determining the proteolytic activity . mäas example 1 washed and dried, Sf? polyii «r | ih4lt der ';
INSPECTgQINSPECTgQ
Trockenpräparate wird bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengestellt.Dry preparations is determined. The results are in the table III compiled.
ziellen G-942-LÖ-
sung. "Dose, c fo der kommer
cial G-942-LÖ-
sung
trockenem Präparat, c/j G-942 polymer content in
dry preparation, c / j
Aus der Tabelle geht hervor, dass nan eine optimale Fällungsausbeute bei einer Dosis xon 4 bis 8 $ der kommerziellen G-942-Lb*sung erhält.From the table it appears that nan optimum precipitation yield at a dose xon 4 to 8 $ commercial G-942-Lb obtained solution *.
Beispiel 5 Maleinsäure-Styrol-Copolymerisatkomplex von Alcalase Example 5 Maleic acid-styrene copolymer complex from Alcalase
Eine Lösung von Alcalase (ein von Bacillus subtilis erzeugtes Enzym) wird mit 5 Volumprozent einer 1 : 5 verdünnten Lösung der Polymerlösung G-942 versetzt. Der p„-Uert wird mit 4 η Essigsäure auf 4,2 eingestellt. Die Fällung wird abfiltriert, mit Aceton gewaschen und getrocknet.' Das Trockenpräparat hat eine Aktivität "von 2 420 000 Dü/g. Ausbeute 92 $ der Theorie.A solution of Alcalase (one produced by Bacillus subtilis Enzyme) is mixed with 5 percent by volume of a 1: 5 diluted solution of the polymer solution G-942. The p “value is obtained with 4 η acetic acid set to 4.2. The precipitate is filtered off, washed with acetone and dried. The dry preparation has a Activity "of 2,420,000 deu / g. Yield 92% of theory.
Baispiel §_ Basic game l §_
Maleinsäure-Styrol-Copolymerisatkomplex einer ProteaseMaleic acid-styrene copolymer complex of a protease
800 ml ,eines Kulturfiltrats von Bacillus alkalophilus, das etwa 28 .000 DU/ml enthält, werden "mit 16 ml einer 1:5 ver-lünn-.800 ml, of a culture filtrate of Bacillus alkalophilus, which is about 28,000 DU / ml are "diluted with 16 ml of a 1: 5.
108839/1549108839/1549
ten Losung der Polymerlösung G-942 versetzt. Der p^-Wert wird snt 4 η Essigsäure auf 4,2 eingestellt. Die gebildete Fällung wird ab"zentrifugiert, mit einem i:i_Gemisch von Methanol und Aceton gewaschen und getrocknet. Die proteolytische Aktivität beträgt, 10 900 000 Dü/g. Ausbeute 86 <?o der Theorie.th solution of the polymer solution G-942 added. The p ^ value is adjusted to 4.2 by 4 η acetic acid. The precipitate formed is centrifuged off, washed with an i: i mixture of methanol and acetone and dried. The proteolytic activity is 10,900,000 g / g. Yield 86 <? O of theory.
Beispiel 7 Maleinsäure-Styrol-Copolymerisatkomplex von Amylase Example 7 Maleic acid-styrene copolymer complex of amylase
200 ml einer lösung -von Amy'lase, die mit einem Bacillus subtilis erzeugt wurde, v/erden mit. 20 ml einer 1 : 5 verdünnten Lösung der Polymerlösung von G-942 versetzt. Der p^-Wert wird mit 1 η Salzsäure auf 4,0 eingestellt. Die gebildete Fällung wird abzentrifugiert und in wenig Wasser suspendiert. Der Pu-Wert der Suspension wird 1 η Natronlauge auf 7 eingestellt200 ml of a solution of Amy'lase with a Bacillus subtilis was generated, v / ground with. 20 ml of a 1: 5 diluted Solution of the polymer solution of G-942 added. The p ^ value is adjusted to 4.0 with 1 η hydrochloric acid. The precipitate formed is centrifuged and suspended in a little water. Of the The Pu value of the suspension is adjusted to 7 with 1 η sodium hydroxide solution
Xl «Xl «
und die Suspension wird mit dor dreifachen Volumenrnenge Aceton versetzt. Die Fällung wird abfiltriert, mit Aceton gewaschen und getrocknet. Das Produkt hat 81 </o der ursprünglichen Amylaseaktivität. and three times the volume of acetone are added to the suspension. The precipitate is filtered off, washed with acetone and dried. The product has 81 </ o of the original amylase activity.
Beispiel 8 Maleinsäure-Styrol-Copolymeris-atkomplex einer Lipase Example 8 Maleic acid-styrene copolymer complex of a lipase
20 ml einer Lösung, die 600 mg eines Lipasepräparates aus der Kulturbrühe von Candida cylindracaea nov. sp. erfthält, und einen p„~V/ert von 4,5 aufweist, werden mit 2 m3 einer 1 : verdünnten Lösung der Polymerlösung von G-942 versetzt. Der Pjj-Wert wird mit 1 η Salzsäure auf 3,? eingestellt. Die Fällung wird abzentrifugiert, mit Aceton gewaschen und getrocknet. Es werden 26j$ mg eines Produktes mit etwa 90 $ der ursprünglichen Lipaueaktivität erhalten.20 ml of a solution containing 600 mg of a lipase preparation from the culture broth of Candida cylindracaea nov. sp. receives, and has a p "~ V / ert of 4.5, with 2 m3 a 1: diluted solution of the polymer solution of G-942. The Pjj value is increased to 3 with 1 η hydrochloric acid. set. The precipitation is centrifuged off, washed with acetone and dried. It will be $ 26j mg of a product with about $ 90 of the original Preserve lipau activity.
109S3Ö/1649109S3Ö / 1649
Maleinsäure-Styrol-Copol.ymerisatkomplex einer LactaseMaleic acid-styrene copolymer complex of a lactase
40 ml einer Lösung, die 1 c/o eines Lactasepräparates aus Hefe und 0,5 c/o Gelatine enthält, werden mit 4,4 ml einer 1 : 5 verdünnten Lösung der Polymerlösung G-942 versetzt. Der p„-Y/ert wird auf 4,0 eingestallt. Die gebildete Fällung enthält 61 $ der ursprünglichen Lactaseaktivität. Ein Blindversuch ohne Zusatz der P ο lyrner lösung G-942 ergibt beim Ansäuern ebenfalls eine Fällung, die jedoch weniger als 1 fo der ursprünglichen f Lactaseaktivität enthält.40 ml of a solution containing 1 c / o of a lactase preparation from yeast and 0.5 c / o gelatin are mixed with 4.4 ml of a 1: 5 diluted solution of the polymer solution G-942. The p "-Y / ert is set to 4.0. The precipitate formed contains $ 61 of the original lactase activity. A blank test without addition of the P ο lyrner solution G-942 upon acidification yields also a precipitation, but less than 1 fo f contains the initial lactase activity.
^nase Maleinsäure-Styrol-Copolymerisatkomplex einer Alkoholdehydroge">^ nase maleic acid-styrene copolymer complex of an alcohol dehydrogen ">
Aus autorisierter Bäckerhefe wird ein Alkoholdchydrogenasefiltrat erhalten. 120 ml dieses Filtrats mit einem p^-Wert von 7 werden mit 4 Volumprozent einer 1 : 5 verdünnten Lösung der Polymerlösung von G-942 versetzt. Der p^-Wert wird mit 4 η Essigsäure auf 4,5 eingestellt. Die gebildete Fällung wird abzentrifugiert, mit Aceton gewaschen und getrocknet, Ss worden 3,3 g Trockenprodukt mit 55 $*der ursprünglichen Aktivität des Hefefiltrato erhalten.An alcohol chydrogenase filtrate is made from authorized baker's yeast obtain. 120 ml of this filtrate with a p ^ value of 7 become mixed with 4 percent by volume of a 1: 5 diluted solution of the polymer solution of G-942. The p ^ value is obtained with 4 η acetic acid set to 4.5. The precipitate formed is centrifuged off, washed with acetone and dried 3.3 g dry product with $ 55 * of the original activity of the yeast filtrato.
■ ■ Beispiel, 11 ~* Example, 11 ~ *
Es werden die toxischen Effekte von zwei Proben von proteolytischen EnzWpräparaten bestimmt. Die eine Probe ist ein in herkömralichei Weise durch Ausfällung mit einem organischen !lösungsmittel hergestelltes Enzympräparat, Diese Probe wird !,»it dem gemäs.i Beispiel 1 hergestellten Enzympräparat der Er-The toxic effects of two samples of proteolytic enzyme preparations are determined. One sample is an enzyme preparation produced in the traditional way by precipitation with an organic solvent. This sample is ! , »It the enzyme preparation of the Er-
ORiQiMALiNSPECTEDORiQiMALiNSPECTED
findung verglichen. Die Proben werden mit Natriumsulfat; auf eine proteolytische Aktivität von etwa 300 000 I)U/g eingestellt, in Wasser gelöst und mittels einer Sprühvorrichtung in einem Behälter verteilt. Jeder Behälter enthält 5 männHiche Hause mi" einem Körpergewicht von 24 g, erhalten von Carworth Europe, Alconbury, Huntingdon, England. Die Enzymkonzentration in der Luft beträgt 5000 DU/Liter im eraten Versuch. Die Behandlungsdauer beträgt 5 Stunden. Danach werden die Tiere 7 Tage beobachtet. Es werden folgende Ergebnisse ernalten. Bei dem herkömmlichen Produkt starben 2 Tiere. .Bei dem Enzympräparat der Erfindung erfolgten keine Todesfälle.finding compared. The samples are made with sodium sulfate; on set a proteolytic activity of about 300,000 I) U / g, dissolved in water and distributed in a container by means of a spray device. Each container contains 5 male homes with a body weight of 24 g obtained from Carworth Europe, Alconbury, Huntingdon, England. The enzyme concentration in the air is 5000 DU / liter in the erate experiment. The duration of treatment is 5 hours. The animals are then observed for 7 days. The following results will be obtained. With the conventional one Product 2 animals died. No deaths occurred in the enzyme preparation of the invention.
In einem zweiten Versuch wurden 8 Ratten (4 männliche und 4 weibliche von der gleichen Farm) einer Enzymaktivität von 800 DU/Liter während 68 Stunden ausge£)etzt. Nach dreitätiger Beobachtung werden folgende Ergebnisse erhalten: Mit dem herkömmlichen Produkt starben 6 Tiere, mit dem Enzympräparat der Erfindung erfolgten keine Todesfälle.In a second experiment, 8 rats (4 male and 4 female from the same farm) had an enzyme activity of 800 DU / liter exposed for 68 hours. After three days of observation The following results are obtained: 6 animals died with the conventional product, with the enzyme preparation No deaths occurred after the invention.
In einem dritten Versuch werden 8 Ratten an 5 aufeinanderfolgenden Tagen jeweils 5 Stunden einer Enzymaktivität von 800 DU/Liter ausgesetzt. Die Tiere werden während 14 Tagen beobachtet. Mit dem herkömmlichen Produkt starb ein Tier, während mit dem ', Enzympräparat der Erfindung keine Todesfälle beobachtet wurden.In a third experiment, 8 rats on 5 consecutive Days exposed to enzyme activity of 800 DU / liter for 5 hours. The animals are observed for 14 days. One animal died with the conventional product, while no deaths were observed with the "enzyme preparation of the invention".
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000018865A1 (en) * | 1998-09-30 | 2000-04-06 | The Procter & Gamble Company | Laundry detergent and/or fabric care compositions comprising a chemical entity, which contains a deposition aid, and a polymer |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2222080A1 (en) * | 1973-03-22 | 1974-10-18 | Viejo Jacques | Stabilisation of pepsin - by salt formation with a carboxy polymethylene |
CH596313A5 (en) * | 1975-05-30 | 1978-03-15 | Battelle Memorial Institute | |
GB1598686A (en) | 1977-04-29 | 1981-09-23 | Dia Prosim | Enzymes immobilised on a resin via chelation with a metal |
EP0270608B1 (en) * | 1986-05-21 | 1990-08-22 | Novo Nordisk A/S | Coated detergent enzymes |
CN1056187C (en) | 1988-02-11 | 2000-09-06 | 金克克国际有限公司 | Proteolytic enzymes and their use in detergents |
US6287841B1 (en) | 1988-02-11 | 2001-09-11 | Genencor International, Inc. | High alkaline serine protease |
FI96036C (en) * | 1988-08-24 | 1996-04-25 | Allied Colloids Ltd | Process for the preparation of particles containing a biologically produced material in a polymer matrix |
ATE153059T1 (en) * | 1990-09-14 | 1997-05-15 | Clorox Co | LIPASE SURFACE COMPLEX AND METHODS OF FORMATION AND USE THEREOF |
EP0478050A1 (en) * | 1990-09-24 | 1992-04-01 | Unilever N.V. | Detergent composition |
GB2287947A (en) * | 1994-03-19 | 1995-10-04 | Procter & Gamble | Detergent composition comprising lactase |
ATE206160T1 (en) * | 1994-03-24 | 2001-10-15 | Procter & Gamble | ENZYME GRANULES |
CA2241593A1 (en) * | 1995-12-29 | 1997-07-10 | The Procter & Gamble Company | Detergent compositions comprising immobilized enzymes |
AU4690796A (en) * | 1995-12-29 | 1997-07-28 | Procter & Gamble Company, The | Detergent compositions comprising immobilized enzymes |
ES2569913T3 (en) * | 2008-07-07 | 2016-05-13 | Basf Se | Enzyme composition comprising polymeric particles containing enzyme |
-
1970
- 1970-03-03 GB GB1024070A patent/GB1353317A/en not_active Expired
-
1971
- 1971-03-01 FR FR7106987A patent/FR2084033A5/fr not_active Expired
- 1971-03-01 CA CA106,517A patent/CA987613A/en not_active Expired
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- 1971-03-02 LU LU62698D patent/LU62698A1/xx unknown
- 1971-03-02 TR TR16938A patent/TR16938A/en unknown
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- 1971-03-02 SE SE7102630A patent/SE397194B/en unknown
- 1971-03-02 HU HUKO2585A patent/HU165382B/hu unknown
- 1971-03-03 ZA ZA711357A patent/ZA711357B/en unknown
- 1971-03-03 RO RO66133A patent/RO58839A/ro unknown
- 1971-03-03 IE IE260/71A patent/IE34979B1/en unknown
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000018865A1 (en) * | 1998-09-30 | 2000-04-06 | The Procter & Gamble Company | Laundry detergent and/or fabric care compositions comprising a chemical entity, which contains a deposition aid, and a polymer |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BE763681A (en) | 1971-09-02 |
FR2084033A5 (en) | 1971-12-17 |
LU62698A1 (en) | 1971-08-20 |
CA987613A (en) | 1976-04-20 |
ES388808A1 (en) | 1974-03-01 |
IE34979L (en) | 1971-09-03 |
AT318523B (en) | 1974-10-25 |
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