DE2013840A1

DE2013840A1 - Double chamber for equipotential focussing and electrophoresis

Info

Publication number: DE2013840A1
Application number: DE19702013840
Authority: DE
Original assignee: RADOLA B
Current assignee: RADOLA B
Priority date: 1970-03-23
Filing date: 1970-03-23
Publication date: 1971-10-14

Abstract

Chamber has cooling surface with ratio of side lengths 2:1, 3:1 or 4:1. Separate electrode chambers surround this surface, so that separation can be effected in two directions; firstly onto a single rectangular support plate; or secondly onto 2, 3 or 4 square support plates.

Description

DOPPELKAMMER FÜR ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG UND ELEKTROPHORESE Gegenstand der Erfindung ist eine Doppelkammer, die für die Dünnschicht-isoelektrische Fokussierung und für die Dünnschicht-Elektrophorese auf Platten verschiedener Größe universell eingesetzt werden kann0 Es sind bereits Kammern für die Dünnschicht-Elektrophorese bekannt, bei denen die normalen 20 x 20 cm Dünnschicht Chromatographie--Platten verwendet werden können, Diese Kammern bestehen prinzipiell aus einer Kühlfläche und zwei Elektrodengefäßen im Abstand von etwa 20 cm. Die Kühlfläche und die Elektrodengefäße sind in einem abgeschloßenen Raum angeordnett der eine feuchte Kammer darstellt und der das Arbeiten bei hoher, konstanter Feuchtigkeit ermöglicht0 Dies ist eine wichtige Voraussetzung, die das Austrocknen der Dünnschicht-Platten verhindert. Eine Modifikation der Kammer mit bis zu 40 cm vergrößertem Abstand der Elektrodengefäße könnte zwar Trennungen auf 40 cm Platten ermöglichen, wäre jedoch für 20 cm lange Platten ungeeignet.DOUBLE CHAMBER FOR ISOELECTRIC FOCUSING AND ELECTROPHORESIS Object The invention is a dual chamber designed for thin film isoelectric focusing and universal for thin-film electrophoresis on plates of various sizes can be used0 There are already chambers for thin-film electrophoresis known to use the normal 20 x 20 cm thin layer chromatography plates can be used, These chambers consist in principle of a cooling surface and two electrode vessels about 20 cm apart. The cooling surface and the electrode vessels are arranged in a closed room that represents a humid chamber and which allows you to work in high, constant humidity0 This is one important prerequisite that prevents the thin-layer panels from drying out. A modification of the chamber with up to 40 cm increased distance between the electrode vessels could allow separations on 40 cm plates, but would be long for 20 cm Panels unsuitable.

Gegenstand der Brfindung ist eine Doppelkammer für Dünnsohicht-isoelelctrische Fokussierung und Dünnschicht-Elektrophorese mit einer Kühlfläche als Auilage für die Trägerplatten und Elektrodengefäßei, dadurch gekennzeichnet} daß die Kühlfläche rechteckig mit einem Verhältnis der Seitenlängen von etwa 2:1 oder 3:1 oder 4:1 ist und daß die Kühlfläche von getrennten Elektrodengefäßen umgeben ist, die so angeordnet sind, daß eine Trennung in zwei zueinander senkrechten Richtungen auf einer rechteckigen oder zwei bis vier quadratischen Trägerplatten vorgentimmen werden kann. Diese Anordnung ermöglicht es, die Doppelkammer universell zu verwenden, sowohl für 40 x 20 cm, 60 x 20 cm, 80 x 20 cm, als auch für 20 x 20 cm große Platten und auch für zweidimensionale Trennungen.The object of the invention is a double chamber for thin-layer isoelctrische Focusing and thin-film electrophoresis with a cooling surface as a support for the carrier plates and electrode vessel, characterized that the cooling surface is rectangular with a ratio of the side lengths of about 2: 1 or 3: 1 or 4: 1 and that the cooling surface is surrounded by separate electrode vessels which are arranged so that a separation in two mutually perpendicular directions Pre-tune on a rectangular or two to four square carrier plates can be. This arrangement makes it possible to use the double chamber universally, for 40 x 20 cm, 60 x 20 cm, 80 x 20 cm, as well as for 20 x 20 cm plates and also for two-dimensional separations.

Bei Verwendung der 20 x 20 cm Platten können gleichzeitig zwei bis vier Platten eingesetzt werden. Eine Trennung der Elektrodengefäße ermöglicht es, in einer Kammer gleichzeitig mit verschiedenen Puffersystemen zu arbeiten.When using the 20 x 20 cm plates, two to four plates can be used. Separation of the electrode vessels enables to work with different buffer systems in one chamber at the same time.

Der Aufbau der Doppelkammer ist z0B. aus Bild 1 ersichtlich0 Um eine Kühlfläche (1) in der Mitte der Doppelkammer sind sechs Elektrodengefäße (2 bis 7) angeordnet. Die rechts und links gezeigten Gefäße (4 und 7) sind für Trennungen auf 40 x 20 cm langen Platten bestimmte Die vier anderen Elektrodengefäße (2 und 6, 3 und 5) sind für die 20 cm Trennstrecke bestimmt, Als Elektrode dient Platindraht 68), der über die ganze Länge des Elektrodengefäßes gespannt ist. Die Elektrodengefäße können zusätzlich eine Trennwand (9) in der Längsrichtung erhalten, mit einem 2 mm breiten, über die ganze Länge des Elektrodengefäßes verlaufenden Spalt im unteren Teil.The structure of the double chamber is z0B. can be seen from picture 1 0 around a The cooling surface (1) in the middle of the double chamber contains six electrode vessels (2 to 7) arranged. The vessels (4 and 7) shown on the right and left are for separations The four other electrode vessels (2 and 6, 3 and 5) are intended for the 20 cm separating distance, platinum wire is used as the electrode 68), which is stretched over the entire length of the electrode vessel. The electrode vessels can also have a partition (9) in the longitudinal direction, with a 2nd mm wide, over the entire length of the electrode vessel in the lower gap Part.

Mit Hilie dieser Trennwand wird der Elektrodenraum in zwei Hälften aufgeteilt: in der einen befindet sich die Elektrode (8), in der anderen (10) sind die Kontaktstreifen zur Glasplatte mit dem Träger eingetaucht. Aufgabe dieser Anordnung ist es, die Elektrolyseprodukte an den Elektroden von der Trägerschicht durch ein Labyrinthsystem zu trennen. Eine vereinfachte Anordnung der Elektrodengefäße wird auf Bild 2 gezeigt. Die Kühlfläche (1wird von zwei L-förmigen Elektrodetgefäßen (12 und 13) umgeben, in denen die Elektroden (14) angeordnet sind. Die Auftrennung erfolgt auf 20 x 20 cm bzwO 40 x 20 cm oder 60 x 20 cm oder 80 x 20 cm Glasplatten, die mit einer dünnen Schicht eines entsprechenden Trägers beschichtet sind. Die Wahl der Schichtdicke und des Trägers wird åeweils vom Trennproblem her bestimmt, In Frage kommen: Cellulose, Agarose, Detran, Polyacrylamid und andere. Der Kontakt von der Trägerschicht zum Elektrodenraum wird durch einen Filterpapierstreifen, der in einem Dialysierschlauch eingehüllt ist, erreicht. Der Dialysierschlauch bleibt zumindest an einem Ende offen, um geringe Mengen der Elektrodenflüssigkeit, die sich im Inneren des Schlauches ansammelt, zu entfernen. Beide Enden des Schlauches können auch zugeschweißt werden, vorausgesetzt, daß der Schlauch im unteren Ende, welches in die Elektrodengefäße eingetaucht ist, perforiert ist0 Aufgabe beider Anordnungen ist es, einen elektrischen Kontakt von den Elektrodengefäßen zur Trägerschicht zu erreichen, den Durchgang der Flüssigkeit jedoch weitestgehend zu unterbinden0 Dank dieser Anordnung kann die Elektrodenflüssigkeit nicht in die Trägerschicht eindringen0 Ferner wird dadurch erreicht, daß der Wassergehalt der Trägerschicht auf der Glasplatte im Verlauf des Versuches konstant gehalten werden kann, was von entscheidender Bedeutung für viele Auftrennungen ist.With the help of this partition, the electrode space is divided into two halves divided: in one is the electrode (8), in the other (10) are the contact strips dipped to the glass plate with the carrier. Task of this arrangement is it, the electrolysis products at the electrodes from the carrier layer through a labyrinth system to separate. A simplified arrangement of the electrode vessels is shown in Figure 2. The cooling surface (1 is surrounded by two L-shaped electrodes (12 and 13), in which the electrodes (14) are arranged. The separation takes place on 20 x 20 cm or 40 x 20 cm or 60 x 20 cm or 80 x 20 cm glass plates with a thin Layer of a corresponding carrier are coated. The choice of layer thickness and the carrier is each determined by the separation problem, possible: cellulose, Agarose, detran, polyacrylamide and others. The contact from the carrier layer to the The electrode space is covered by a strip of filter paper that is placed in a dialysis tube is enveloped. The dialysis tube remains open at least at one end, by small amounts of the electrode liquid that is inside the tube accumulates, remove. Both ends of the hose can also be welded shut, provided that the tube in the lower end, which is in the electrode vessels is immersed, is perforated0 The task of both arrangements is to provide an electrical Contact from the electrode vessels to the carrier layer to achieve the passage The liquid can be prevented as far as possible thanks to this arrangement the electrode liquid does not penetrate into the carrier layer achieved that the water content of the carrier layer on the glass plate in the course of Attempt can be kept constant, which is vital for many Partings is.

Die Doppelkammer ist vor allem für DUnnschicht-isoelektrische Trennungen bestimmt' (BoJ. Radola, Biochimica et Biophysica-Acta, 1969, 194, 335>. Bei diesem Trennverfahren werden die Glasplatten mit einer 0,75 - 2 mm dicken Schicht in der Art von Dextran bzw. Polyacrylamid mit Zusatz von Trägerampholyten beschichtet. Im elektrischen Feld bilden die Trägerampholyte einen pH-Gradienten, in dem die Auftrennung aufgrund von Unterschieden im isoelektrischen Punkt der aufgetrennten Substanzen erfolgt. Verglichen mit der Säulentechnik der isoelektrischen Fokussierung in einem pH- und Dichte-Gradienten, bietet die Dünnschichtmethode eine Reihe von Vorteilen: die Trennschärfe bleibt im Abklatsch, der nach der Fokussierung angefertigt wird, erhalten, während es bei der Säulentechnik bei der Elution unvermeidlich zur Durchmischung der aufgetrennten Komponenten kommt. Die pHiMessung kann bei der DUnnschicht-Methode direkt auf der Platte mit einer Plan-Membran Glaselektrode vorgenommen werden. Dies ist eine wesentliche Vereinfachung verglichen sowohl mit der Säulentechnik der isoelektrischen Fokussierung als auch verglichen mit der Methode der sogenannten Disk-Fokussierung.The double chamber is mainly used for thin-film isoelectric separations determined '(BoJ. Radola, Biochimica et Biophysica-Acta, 1969, 194, 335>. In this Separation processes are the Glass plates with a thickness of 0.75 - 2 mm Layer in the form of dextran or polyacrylamide with the addition of carrier ampholytes coated. In the electric field, the carrier ampholytes form a pH gradient, in which the separation due to differences in the isoelectric point of the separated Substances takes place. Compared to the column technology of isoelectric focusing in a pH and density gradient, the thin film method offers a number of Advantages: the selectivity remains in the copy made after focusing is obtained, while it is inevitable for the elution in the column technique Mixing of the separated components occurs. The pH measurement can be carried out with the thin-film method can be made directly on the plate with a Plan-Membrane glass electrode. this is a significant simplification compared to both the column technology and the isoelectric Focusing as well as compared to the method of so-called disk focusing.

Für präparative Trennungen werden Tröge mit 0,5 - 2,0 mm hohen Rändern eingesetzt, die es ermöglichen mit Schichtdicken von 2 - 20 mm zu arbeiten. Für präparative Trennungen sind besonders 40 x 20 cm, 60 x 20 cm, 80 x 20 cm Tröge geeignet, für manche Zwecke könnten auch Tröge mit den Abmessungen 20 x 20 cm verwendet werden.Troughs with 0.5 - 2.0 mm high edges are used for preparative separations are used, which make it possible to work with layer thicknesses of 2 - 20 mm. For preparative separations are particularly suitable for 40 x 20 cm, 60 x 20 cm, 80 x 20 cm troughs, For some purposes, troughs measuring 20 x 20 cm could also be used.

Die Doppelkammer kann weiters für die Dünnschicht-Elektrophoreste eingesetzt werden. Dank der Anordnung der Elektrodongofäße können auch zweidimensionale Trennungen durchgeftilirt werden. Die Kammer kann ebenfalls für präparative elektrEphoretische Trennungen eingesetzt werden, wie bereits bei der isoelektrischen Fokussierung erwähnt wurde.The double chamber can also be used for thin-film electrophoresis can be used. Thanks to the arrangement of the electrodongos, two-dimensional Separations are filtered through. The chamber can also be used for preparative electrophoretic Separations are used, as already mentioned for isoelectric focusing became.

Claims

PATENTAN'S CLAIMS

1. Double chamber for thin-film soelectric focusing and thin-film electrophoresis with a cooler as a support for the carrier plate and electrode vessels, thereby characterized in that the cooling surface is rectangular with a ratio of the side lengths of about 2: 1 (or 3: 1 or 4: 1) and that the cooling surface of separate electrode vessels is surrounded, which are arranged so that a separation into two mutually perpendicular Directions on a rectangular or two to four square carrier plates can be made.

20 double chamber according to claim 1, characterized in that the cooling surface has a size of 40 x 20 cm, or 60 x 20 cm, or 80 x 20 cm

3. Double kssmer according to claim 1 or 2, characterized in that the cooling surface is separated from six Is surrounded electrodes.

4. Double chamber according to one of claims 1 to 3, characterized in that that the electrodes are made of platinum wire over the entire length of the electrode vessel is excited.

5. Double chamber according to claim 4, characterized in that white or more electrode vessels receive a partition in the longitudinal direction through which the Electrode space is divided into two halves, Blank page