DE19929410A1 - New octapepide compounds as alpha v beta 6 integrin inhibitors useful for treating and diagnosing heart disease, tumors, osteoporosis, fibrosis, inflammation, infection and psoriasis - Google Patents
New octapepide compounds as alpha v beta 6 integrin inhibitors useful for treating and diagnosing heart disease, tumors, osteoporosis, fibrosis, inflammation, infection and psoriasisInfo
- Publication number
- DE19929410A1 DE19929410A1 DE19929410A DE19929410A DE19929410A1 DE 19929410 A1 DE19929410 A1 DE 19929410A1 DE 19929410 A DE19929410 A DE 19929410A DE 19929410 A DE19929410 A DE 19929410A DE 19929410 A1 DE19929410 A1 DE 19929410A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- asp
- leu
- arg
- ser
- thr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
Description
Die Erfindung betrifft neuartige Peptide der Formel I, welche als Liganden
des Integrins αvβ6 biologisch wirksam sind,
The invention relates to novel peptides of the formula I which are biologically active as ligands of the integrin α v β 6 ,
Ac-Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-NH2 I
Ac-Arg-X 1 -Asp-X 2 -X 3 -X 4 -X 5 -X 6 -NH 2 I
worin
Ac Acetyl,
X1 Ser, Gly, Thr, Asp, Arg, Val, Tyr, His oder Ala,
X2 Leu, Ile, Nle, Val oder Phe,
X3 Asp, Glu, Lys, Phe, Aib, Nal, Gly, Ala, Bgl oder Phg,
X4 Gly, Ala, Ser, β-Ala oder ω-Abu,
X5 Leu, Ile, Nle, Val oder Phe,
X6 Arg, Har, Lys, Leu, Orn, Phe, Ala, Tyr, Gly, Ser oder Asp
bedeuten,
wobei die genannten Aminosäuren auch derivatisiert sein können,
die Aminosäurereste über die α-Amino- und α-Carboxygruppen peptidartig
miteinander verknüpft sind,
die D- als auch die L-Formen der optisch aktiven Aminosäurereste
eingeschlossen sind,
sowie deren physiologisch unbedenklichen Salze,
und wobei Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2 ausgenommen ist.wherein
Ac Acetyl,
X 1 Ser, Gly, Thr, Asp, Arg, Val, Tyr, His or Ala,
X 2 Leu, Ile, Nle, Val or Phe,
X 3 Asp, Glu, Lys, Phe, Aib, Nal, Gly, Ala, Bgl or Phg,
X 4 Gly, Ala, Ser, β-Ala or ω-Abu,
X 5 Leu, Ile, Nle, Val or Phe,
X 6 Arg, Har, Lys, Leu, Orn, Phe, Ala, Tyr, Gly, Ser or Asp
mean,
wherein the amino acids mentioned can also be derivatized, the amino acid residues are linked to one another in peptide fashion via the α-amino and α-carboxy groups,
the D and L forms of the optically active amino acid residues are included,
and their physiologically acceptable salts,
and wherein Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 is excluded.
Der Erfindung lag die Aufgabe zugrunde, neue Verbindungen mit wertvol len Eigenschaften aufzufinden, insbesondere solche, die zur Herstellung von Arzneimitteln verwendet werden können.The invention was based on the object, new compounds with valuable len properties to find, especially those that are used to manufacture of drugs can be used.
Es wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen und ihre Salze bei guter Verträglichkeit sehr wertvolle pharmakologische Eigen schaften besitzen.It has been found that the compounds according to the invention and their Salts with good tolerance very valuable pharmacological properties own properties.
Die erfindungsgemäßen Peptide können als wirksame Inhibitoren des αvβ6 Integrin-Rezeptors und somit zur Behandlung verschiedener Krankheiten und pathologischer Befunde eingesetzt werden. The peptides according to the invention can be used as effective inhibitors of the α v β 6 integrin receptor and thus for the treatment of various diseases and pathological findings.
Andere Inhibitoren des Integrins αvβ6 sind in der DE 198 58 857 und von S. Kraft et al. in J. Biol. Chem. 274, 1979-85 (1999) beschrieben. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind in bezug auf die genannte Anmeldung als Auswahlerfindung zu betrachten.Other inhibitors of the integrin α v β 6 are described in DE 198 58 857 and by S. Kraft et al. in J. Biol. Chem. 274, 1979-85 (1999). The compounds according to the invention are to be regarded as selection inventions in relation to the application mentioned.
Integrine gehören zu der Familie von heterodimeren Klasse I - Trans membran-Rezeptoren, die in zahlreichen Zell-Matrix- bzw. Zell-Zell- Adhäsionsvorgängen eine wichtige Rolle spielen (Tuckwell et al., 1996, Symp. Soc. Exp. Biol. 47). Sie können grob in drei Klassen eingeteilt werden: die β1-Integrine, die Rezeptoren für die extrazelluläre Matrix darstellen, die β2-Integrine, welche auf Leukozyten aktivierbar sind und während inflammatorischen Prozessen "getriggert" werden, sowie die αv- Integrine, die die Zellantwort bei Wundheilungs- und anderen patholo gischen Prozessen beeinflussen (Marshall and Hart, 1996, Semin. Cancer Biol. 7, 191).Integrins belong to the family of heterodimeric class I transmembrane receptors, which play an important role in numerous cell-matrix or cell-cell adhesion processes (Tuckwell et al., 1996, Symp. Soc. Exp. Biol. 47 ). They can be roughly divided into three classes: the β 1 integrins, which are receptors for the extracellular matrix, the β 2 integrins, which can be activated on leukocytes and are "triggered" during inflammatory processes, and the α v integrins, which influence the cell response in wound healing and other pathological processes (Marshall and Hart, 1996, Semin. Cancer Biol. 7, 191).
Die Integrine α5β1, αIIbβ3, α8β1, αvβ1, αvβ3, αvβ5, αvβ8 und αvβ6 binden alle an die Arg-Gly-Asp (RGD) Peptidsequenz in natürlichen Liganden, wie z. B. Fibronektin oder Vitronektin. Lösliche RGD-haltige Peptide vermögen die Interaktion jedes dieser Integrine mit dem entsprechenden natürlichen Liganden zu inhibieren. αvβ6 ist ein relativ seltenes Integrin (Busk et al., 1992, J. Biol. Chem. 267 (9), 5790), das bei Reperaturvorgängen in Epithelgewebe vermehrt gebildet wird und die natürlichen Matrixmoleküle Fibronectin und Tenascin bevorzugt bindet (Wang et al., 1996, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 15 (5), 664). Die physiologischen und pathologischen Funktionen von αvβ6 sind noch nicht genau bekannt, es wird jedoch vermutet, daß dieses Integrin bei physiologischen Vorgängen und Erkrankungen (z. B. Entzündungen, Wundheilung, Tumore), bei denen epitheliale Zellen beteiligt sind, eine wichtige Rolle spielt. So wird αvβ6 auf Keratinozyten in Wunden exprimiert (Haapasalmi et al., 1996, J. Invest. Dermatol. 106(1), 42), woraus anzunehmen ist, daß neben Wundheilungs prozessen und Entzündungen auch andere pathologische Ereignisse der Haut, wie z. B. Psoriasis, durch Agonisten oder Antagonisten des besag ten Integrins beeinflußbar sind. Ferner spielt αvβ6 im Atemwegsepithel eine Rolle (Weinacker et al., 1995, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 12(5), 547), so daß entsprechende Agonisten/Antagonisten dieses Integrins bei Atem wegserkrankungen, wie Bronchitis, Asthma, Lungenfibrosen und Atem wegstumoren erfolgreich eingesetzt werden könnten. Letztlich ist bekannt, daß αvβ6 auch im Darmepithel eine Rolle spielt, so daß entsprechende Integrin-Agonisten/-Antagonisten bei der Behandlung von Entzündungen, Tumoren und Wunden des Magen/Darmtraktes Verwendung finden könnten.The integrins α 5 β 1 , α IIb β 3 , α 8 β 1 , α v β 1 , α v β 3 , α v β 5 , α v β 8 and α v β 6 all bind to the Arg-Gly-Asp (RGD) peptide sequence in natural ligands, such as. B. fibronectin or vitronectin. Soluble RGD-containing peptides are able to inhibit the interaction of each of these integrins with the corresponding natural ligand. α v β 6 is a relatively rare integrin (Busk et al., 1992, J. Biol. Chem. 267 (9), 5790), which is increasingly formed in epithelial tissue during repair processes and which preferentially binds the natural matrix molecules fibronectin and tenascin (Wang et al., 1996, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 15 (5), 664). The physiological and pathological functions of α v β 6 are not yet exactly known, but it is believed that this integrin is important in physiological processes and diseases (e.g. inflammation, wound healing, tumors) in which epithelial cells are involved Role play. Thus α v β 6 is expressed on keratinocytes in wounds (Haapasalmi et al., 1996, J. Invest. Dermatol. 106 (1), 42), from which it can be assumed that in addition to wound healing processes and inflammation, other pathological events of the skin, such as B. psoriasis, can be influenced by agonists or antagonists of the said integrin. Furthermore, α v β 6 plays a role in the respiratory epithelium (Weinacker et al., 1995, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 12 (5), 547), so that corresponding agonists / antagonists of this integrin in respiratory diseases, such as Bronchitis, asthma, pulmonary fibrosis and respiratory tumors could be used successfully. Ultimately, it is known that α v β 6 also plays a role in the intestinal epithelium, so that corresponding integrin agonists / antagonists could be used in the treatment of inflammation, tumors and wounds of the gastrointestinal tract.
Die Abhängigkeit der Entstehung von Angiogenese von der Wechsel wirkung zwischen vaskulären Integrinen und extrazellulären Matrix proteinen ist von P. C. Brooks, R. A. Clark und D. A. Cheresh in Science 264, 569-71 (1994) beschrieben.The dependence of the development of angiogenesis on the change effect between vascular integrins and extracellular matrix protein is from P.C. Brooks, R.A. Clark and D.A. Cheresh in Science 264, 569-71 (1994).
Es bestand somit die Aufgabe, neben den bisher bekannten natürlichen hochmolekularen Liganden und Antikörpern, die therapeutisch und diag nostisch schwer handhabbar sind, potente, spezifische bzw. selektive niedermolekulare Liganden für αvβ6, vorzugsweise Peptide, zu finden, die für die genannten therapeutischen Gebiete aber auch als Diagnostikum oder Reagenz verwendet werden können.It was therefore the task, in addition to the previously known natural high-molecular ligands and antibodies, which are difficult to handle therapeutically and diagnostically, to find potent, specific or selective low-molecular ligands for α v β 6 , preferably peptides, for the therapeutic agents mentioned Areas can also be used as a diagnostic or reagent.
Es wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen peptidischen Verbindun gen und ihre Salze als lösliche Moleküle Wirkung auf Zellen ausüben, die den genannten Rezeptor tragen, oder wenn sie an Oberflächen gebunden sind, künstliche Liganden für die αvβ6-vermittelte Zellanhaftung darstel len. Vor allem wirken sie als αvβ6 Integrin-Inhibitoren, wobei sie insbeson dere die Wechselwirkungen des Rezeptors mit anderen Liganden hem men, wie z. B. die Bindung von Fibronektin. Diese Wirkung kann z. B. nach der Methode nachgewiesen werden, die von J. W. Smith et al. in J. Biol. Chem. 265, 12 267-12 271 (1990) beschrieben wird.It has been found that the peptide compounds according to the invention and their salts, as soluble molecules, have an effect on cells which carry the receptor mentioned or, if they are bound to surfaces, represent artificial ligands for α v β 6 -mediated cell attachment. Above all, they act as α v β 6 integrin inhibitors, in particular inhibiting the interactions of the receptor with other ligands, such as. B. the binding of fibronectin. This effect can e.g. B. can be detected by the method described by JW Smith et al. in J. Biol. Chem. 265, 12 267-12 271 (1990).
Weiter wurde gefunden, daß die neuen Substanzen bei guter Verträglich keit sehr wertvolle pharmakologische Eigenschaften besitzen und als Arzneimittel eingesetzt werden können. Dies wird weiter unten genauer beschrieben. It was also found that the new substances are well tolerated possess very valuable pharmacological properties and as Medicines can be used. This will be discussed in more detail below described.
Die erfindungsgemäßen peptidischen Verbindungen können ferner als Diagnostika zur Detektion und Lokalisierung von pathologischen Zustän den im epithelialen System in vivo verwendet werden, wenn sie mit ent sprechenden Markern (z. B. dem Biotinylrest) nach dem Stand der Technik ausgestattet sind.The peptide compounds according to the invention can also be used as Diagnostics for the detection and localization of pathological conditions used in vivo in the epithelial system when ent speaking markers (e.g. the biotinyl residue) according to the state of the Technology.
Die Erfindung umfaßt auch Kombinationen mit mindestens einem anderen Wirkstoff und/oder Konjugate mit anderen Wirkstoffen, wie zytotoxischen Wirkstoffen sowie Konjugate mit Radiomarkern für Röntgentherapie oder PET Diagnose aber auch Fusionsproteine mit Markerproteinen wie GFP oder Antikörpern, oder therapeutischen Proteinen wie IL-2.The invention also includes combinations with at least one other Active ingredient and / or conjugates with other active ingredients, such as cytotoxic Active ingredients and conjugates with radio markers for X-ray therapy or PET diagnosis but also fusion proteins with marker proteins such as GFP or antibodies, or therapeutic proteins such as IL-2.
Einige bevorzugte Gruppen von Verbindungen können durch die folgenden
Teilformeln Ia bis If ausgedrückt werden, die der Formel I entsprechen und
worin die nicht näher bezeichneten Reste die bei der Formel I angegebene
Bedeutung haben, worin jedoch
in
Some preferred groups of compounds can be expressed by the following sub-formulas Ia to If, which correspond to the formula I and in which the radicals not specified have the meaning given for the formula I, but in which in
-
a) X1 Ser, Gly oder Thr,
bedeutet; ina) X 1 Ser, Gly or Thr,
means; in -
b) X1 Ser, Gly oder Thr,
X2 Leu,
bedeutet; inb) X 1 Ser, Gly or Thr,
X 2 Leu,
means; in -
c) X1 Ser, Gly oder Thr,
X2 Leu,
X3 Asp oder D-Asp
bedeutet; inc) X 1 Ser, Gly or Thr,
X 2 Leu,
X 3 Asp or D-Asp
means; in -
d) X1 Ser, Gly oder Thr,
X2 Leu,
X3 Asp oder D-Asp,
X4 Gly, Ala oder Ser,
bedeutet; in d) X 1 Ser, Gly or Thr,
X 2 Leu,
X 3 Asp or D-Asp,
X 4 Gly, Ala or Ser,
means; in -
e) X1 Ser, Gly oder Thr,
X2 Leu,
X3 Asp oder D-Asp,
X4 Gly, Ala oder Ser,
X5 Leu
bedeutet; ine) X 1 Ser, Gly or Thr,
X 2 Leu,
X 3 Asp or D-Asp,
X 4 Gly, Ala or Ser,
X 5 Leu
means; in -
f) X1 Ser, Gly oder Thr,
X2 Leu,
X3 Asp oder D-Asp,
X4 Gly, Ala oder Ser,
X5 Leu,
X6 Arg
bedeutet;f) X1 Ser, Gly or Thr,
X 2 Leu,
X 3 Asp or D-Asp,
X 4 Gly, Ala or Ser,
X 5 Leu,
X 6 Arg
means;
sowie deren Salze.as well as their salts.
Gegenstand der Erfindung sind insbesondere peptidische Verbindungen
ausgewählt aus der Gruppe
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Ser-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Asp-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Ala-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-D-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-D-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Ala-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Aib-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Nal-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Ala-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Nle-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Ile-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ala-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Gly-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Har-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Lys-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Ala-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Gly-Leu-Arg-NH2,
sowie deren physiologisch unbedenklichen Salze.The invention relates in particular to peptide compounds selected from the group
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Ser-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Asp-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Ala-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-D-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-D-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Ala-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Aib-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Nal-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Ala-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Nle-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Ile-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ala-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Gly-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Har-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Lys-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Ala-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Gly-Leu-Arg-NH 2 ,
and their physiologically acceptable salts.
Die vor- und nachstehend aufgeführten Abkürzungen von Aminosäure
ersten stehen für die Reste folgender Aminosäuren:
Abu = 4-Aminobuttersäure
Aha = 6-Aminohexansäure, 6-Aminocapronsäure
Aib = α-Amino-isobuttersäure
Ala = Alanin
Asn = Asparagin
Asp = Asparaginsäure
Arg = Arginin
Bgl = C-alpha-tert.-Butylglycin
Cys = Cystein
Dab = 2,4-Diaminobuttersäure
Dap = 2,3-Diaminopropionsäure
Gln = Glutamin
Glp = Pyroglutaminsäure
Glu = Glutaminsäure
Gly = Glycin
Har = Homoarginin
His = Histidin
homo-Phe = homo-Phenylalanin
Ile = Isoleucin
Leu = Leucin
Lys = Lysin
Met = Methionin
Nal = Naphth-2-yl-alanin
Nle = Norleucin
Orn = Ornithin
Phe = Phenylalanin
Phg = Phenylglycin
4-Hal-Phe = 4-Halogen-phenylalanin
Pro = Prolin
Ser = Serin
Thr = Threonin
Trp = Tryptophan
Tyr = Tyrosin
Val = Valin.The abbreviations of amino acid first listed above and below stand for the residues of the following amino acids:
Abu = 4-aminobutyric acid
Aha = 6-aminohexanoic acid, 6-aminocaproic acid
Aib = α-amino-isobutyric acid
Ala = alanine
Asn = asparagine
Asp = aspartic acid
Arg = arginine
Bgl = C-alpha-tert-butylglycine
Cys = cysteine
Dab = 2,4-diaminobutyric acid
Dap = 2,3-diaminopropionic acid
Gln = glutamine
Glp = pyroglutamic acid
Glu = glutamic acid
Gly = glycine
Har = homoarginine
His = histidine
homo-Phe = homo-phenylalanine
Ile = isoleucine
Leu = leucine
Lys = lysine
Met = methionine
Nal = naphth-2-yl alanine
Nle = norleucine
Orn = ornithine
Phe = phenylalanine
Phg = phenylglycine
4-Hal-Phe = 4-halophenylalanine
Pro = proline
Ser = serine
Thr = threonine
Trp = tryptophan
Tyr = tyrosine
Val = valine.
Ferner bedeuten nachstehend:
Ac = Acetyl
BOC = tert.-Butoxycarbonyl
BSA = Bovine Serum Albumin
CBZ oder Z = Benzyloxycarbonyl
DCCI = Dicyclohexylcarbodiimid
DMF = Dimethylformamid
EDCI = N-Ethyl-N,N'-(dimethylaminopropyl)-carbodiimid
Et = Ethyl
FCA = Fluoresceincarbonsäure
FITC = Fluoresceinisothiocyanat
Fmoc = 9-Fluorenylmethoxycarbonyl
FTH = Fluoresceinthioharnstoff
HOBt = 1-Hydroxybenzotriazol
Me = Methyl
MBHA = 4-Methyl-benzhydrylamin
Mtr = 4-Methoxy-2,3,6-trimethylphenyl-sulfonyl
HONSu = N-Hydroxysuccinimid
OBut = tert.-Butylester
Oct = Octanoyl
OMe = Methylester
OEt = Ethylester
Pbf = 2,2,4,6,7-Pentamethyl-dihydrobenzofuran-5-sulfonyl
Pmc = 2,2,5,7,8-Pentamethylchroman-6-sulfonyl
POA = Phenoxyacetyl
Sal = Salicyloyl
TBS++ = Tris buffered Saline mit 2-wertigen Kationen
TBSA = TBS+BSA
TBTU = 2-(1H-Benzotriazol-1-yl)-1,1,3-tetramethyluronium
tetrafluoroborat
TFA = Trifluoressigsäure
Trt = Trityl(Triphenylmethyl).Furthermore, below mean:
Ac = acetyl
BOC = tert-butoxycarbonyl
BSA = Bovine Serum Albumin
CBZ or Z = benzyloxycarbonyl
DCCI = dicyclohexylcarbodiimide
DMF = dimethylformamide
EDCI = N-ethyl-N, N '- (dimethylaminopropyl) carbodiimide
Et = ethyl
FCA = fluorescein carboxylic acid
FITC = fluorescein isothiocyanate
Fmoc = 9-fluorenylmethoxycarbonyl
FTH = fluoresceinthiourea
HOBt = 1-hydroxybenzotriazole
Me = methyl
MBHA = 4-methyl-benzhydrylamine
Mtr = 4-methoxy-2,3,6-trimethylphenylsulfonyl
HONSu = N-hydroxysuccinimide
OBut = tert-butyl ester
Oct = octanoyl
OMe = methyl ester
OEt = ethyl ester
Pbf = 2,2,4,6,7-pentamethyl-dihydrobenzofuran-5-sulfonyl
Pmc = 2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl
POA = phenoxyacetyl
Sal = salicyloyl
TBS ++ = Tris buffered saline with divalent cations
TBSA = TBS + BSA
TBTU = 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3-tetramethyluronium tetrafluoroborate
TFA = trifluoroacetic acid
Trt = trityl (triphenylmethyl).
Sofern die vorstehend genannten Aminosäuren in mehreren enantiomeren Formen auftreten können, so sind vor- und nachstehend, alle diese Formen und auch ihre Gemische (z. B. die DL-Formen) eingeschlossen. Ferner können die Aminosäuren mit entsprechenden an sich bekannten Schutzgruppen versehen sein.Provided the above amino acids in several enantiomers Shapes can occur, so are before and after, all of these Forms and their mixtures (e.g. the DL forms) included. Furthermore, the amino acids can be used with corresponding known per se Protecting groups.
In die erfindungsgemäßen Verbindungen sind auch sogenannte Prodrug- Derivate eingeschlossen, d. h. mit z. B. Alkyl- oder Acylgruppen, Zuckern oder Oligopeptiden abgewandelte Verbindungen, die im Organismus rasch zu den wirksamen erfindungsgemäßen Verbindungen gespalten werden. Hierzu gehören auch bioabbaubare Polymerderivate der erfindungs gemäßen Verbindungen, wie dies z. B. in Int. J. Pharm. 115, 61-67 (1995) beschrieben ist.So-called prodrug- Including derivatives, i. H. with z. B. alkyl or acyl groups, sugars or oligopeptides modified compounds in the organism rapidly to be split into the active compounds according to the invention. This also includes biodegradable polymer derivatives of the invention appropriate connections, as z. B. in Int. J. Pharm. 115, 61-67 (1995) is described.
Die genannten Aminosäuren und Aminosäurereste, wie z. B. die NH- Funktionen oder auch die C-terminale Amidfunktion können auch derivati siert sein, wobei die N-Methyl-, N-Ethyl-, N-Propyl-, N-Benzyl- oder C Methylderivate bevorzugt sind. Weiter bevorzugt sind Derivate von Asp und Glu, insbesondere die Methyl-, Ethyl, Propyl, Butyl, tert.-Butyl, Neopentyl- oder Benzylester der Seitenketten-carboxy-gruppen, ferner auch Derivate von Arg, das an der -NH-C(=NH)-NH2-Gruppe mit einem Acetyl-, Benzoyl-, Methoxycarbonyl- oder Ethoxycarbonylrest substituiert sein kann. The amino acids and amino acid residues mentioned, such as. B. the NH functions or the C-terminal amide function can also be derivatized, the N-methyl, N-ethyl, N-propyl, N-benzyl or C methyl derivatives being preferred. Further preferred are derivatives of Asp and Glu, in particular the methyl, ethyl, propyl, butyl, tert-butyl, neopentyl or benzyl esters of the side chain carboxy groups, and also derivatives of Arg, which is attached to the -NH-C ( = NH) -NH 2 group can be substituted with an acetyl, benzoyl, methoxycarbonyl or ethoxycarbonyl radical.
In den erfindungsgemäßen Verbindungen sind neben den Verbindungen der Formel I, die N-terminal eine Acetylgruppe tragen auch solche Verbindungen eingeschlossen, in denen Ac durch eine andere Acylfunktion ersetzt ist, wie z. B. Propionyl, Butyryl oder auch Benzoyl.In the compounds according to the invention, in addition to the compounds of formula I, the N-terminal acetyl group also carry such Compounds included in which Ac is replaced by another Acylfunction is replaced, such as. B. propionyl, butyryl or benzoyl.
Ferner sind in die erfindungsgemäßen Verbindungen auch Derivate mit eingeschlossen, welche aus den eigentlichen erfindungsgemäßen Pep tiden und bekannten Marker-Verbindungen bestehen, die es ermöglichen, die Peptide leicht nachzuweisen. Beispiele für solche Derivate sind radioaktiv markierte, biotinylierte oder fluoreszenzmarkierte Peptide.Derivatives are also included in the compounds according to the invention included, which from the actual Pep tiden and known marker connections exist, which make it possible easily detect the peptides. Examples of such derivatives are radiolabelled, biotinylated or fluorescently labeled peptides.
Fluoreszierender Farbstoffrest bedeutet vorzugsweise 7-Acetoxycoumann- 3-yl, Fluorescein-5-(und/oder 6-)yl, 2',7'-Dichlorfluorescein-5-(und 6-)yl, Dihydrotetramethylrosamin-4-yl, Tetramethylrhodamin-5-(und/oder 6-)yl, 4,4-Difluor-5,7-dimethyl-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacen-3-ethyl oder 4,4- Difluor-5,7-diphenyl-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacen-3-ethyl.Fluorescent dye residue preferably means 7-acetoxycoumann- 3-yl, fluorescein-5- (and / or 6-) yl, 2 ', 7'-dichlorofluorescein-5- (and 6-) yl, Dihydrotetramethylrosamin-4-yl, tetramethylrhodamin-5- (and / or 6-) yl, 4,4-difluoro-5,7-dimethyl-4-bora-3a, 4a-diaza-s-indacen-3-ethyl or 4,4- Difluoro-5,7-diphenyl-4-bora-3a, 4a-diaza-s-indacen-3-ethyl.
Geeignete funktionalisierte fluoreszierende Farbstoffreste, die als Rea genzien zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I dienen können, sind z. B. beschrieben in "Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 5th Edition, 1992-1994, by R. P. Haughland, Molecular Probes, Inc.".Suitable functionalized fluorescent dye residues, which as Rea genien for the preparation of the compounds of formula I can serve z. B. described in "Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 5th Edition, 1992-1994, by R. P. Haughland, Molecular Probes, Inc. ".
Im allgemeinen sind die erfindungsgemäßen Peptide linear, sie können aber auch zyklisiert werden. Die Erfindung umfaßt nicht nur die genannten Peptide sondern auch Mischungen und Zubereitungen, welche neben diesen erfindungsgemäßen Verbindungen auch andere pharmakologische Wirkstoffe oder Adjuvantien enthalten, die die primäre pharmakologische Wirkung der erfindungsgemäßen Peptide in gewünschter Weise beeinflussen können.In general, the peptides according to the invention are linear, they can but also be cyclized. The invention does not only include the above Peptides but also mixtures and preparations, which besides these compounds according to the invention also other pharmacological Contain active ingredients or adjuvants that are the primary pharmacological Effect of the peptides according to the invention in the desired manner can influence.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen und auch die Ausgangsstoffe zu ihrer Herstellung werden im übrigen nach an sich bekannten und häufig eingesetzten Methoden hergestellt, wie sie in der Literatur (z. B. in den Standardwerken wie Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart); beschrieben sind, und zwar unter Reaktionsbedingungen, die für die genannten Umsetzungen bekannt und geeignet sind. Dabei kann man auch von an sich bekannten Varianten Gebrauch machen.The compounds of the invention and also the starting materials their manufacture are otherwise known and common methods used, as described in the literature (e.g. in the Standard works such as Houben-Weyl, methods of organic chemistry, Georg Thieme Verlag, Stuttgart); are described, namely under Reaction conditions known for the reactions mentioned and are suitable. You can also use known variants Make use.
Vorzugsweise können die erfindungsgemäßen Peptide mittels Fest phasensynthese und nachfolgender Abspaltung und Reinigung hergestellt werden, wie dies z. B. von Jonczyk und Meienhofer (Peptides, Proc. 8th Am. Pept. Symp., Eds. V. Hruby und D. H. Rich, Pierce Comp. III, p. 73-77, 1983, oder Angew. Chem. 104, 1992, 375) oder gemäß Merrifield (J. Am. Chem. Soc. 94, 1972, 3102) beschrieben wurde.The peptides according to the invention can preferably by means of solid phase synthesis and subsequent cleavage and purification be like this B. by Jonczyk and Meienhofer (Peptides, Proc. 8th At the. Pept. Symp., Eds. V. Hruby and D.H. Rich, Pierce Comp. III, p. 73-77, 1983, or Angew. Chem. 104, 1992, 375) or according to Merrifield (J. Am. Chem. Soc. 94, 1972, 3102).
Die erfindungsgemäßen Peptide können an fester Phase (manuell oder in einem Syntheseautomaten) in einer Fmoc-Strategie mit säurelabilen Seitenschutzgruppen hergestellt und mittels RP-HPLC gereinigt werden. Die Peakeinheitlichkeit kann durch RP-HPLC und die Substanzidentität mittels FAB-MS gemessen werden.The peptides according to the invention can be on a solid phase (manually or in a synthesizer) in an Fmoc strategy with acid labile Side protection groups are manufactured and cleaned by RP-HPLC. The peak uniformity can be determined by RP-HPLC and the substance identity can be measured using FAB-MS.
Im übrigen können die Peptide nach üblichen Methoden der Aminosäure- und Peptidsynthese hergestellt werden, wie dies z. B. aus Novablochem. - 1999 Catalog & Peptide Synthesis Handbook der Calbiochem-Novablo chem GmbH, D-65 796 Bad Soden, aus zahlreichen Standardwerken und publizierten Patentanmeldungen bekannt ist.Otherwise, the peptides can be prepared using customary methods of amino acid and peptide synthesis can be prepared as described e.g. B. from Novablochem. - 1999 Catalog & Peptide Synthesis Handbook by Calbiochem-Novablo chem GmbH, D-65 796 Bad Soden, from numerous standard works and published patent applications is known.
Es können schrittweise Kupplungen und Fragmentkondensationen genutzt werden. Unterschiedliche N-terminale, C-terminale und Seitenschutz gruppen können Verwendung finden, die bevorzugt orthogonal spaltbar ausgewählt werden. Kupplungsschritte können mit unterschiedlichen Kondensationsreagenzien wie Carbodiimiden, Carbodiimidazol, solchen des Uronium-Typs wie TBTU, gemischten Anhydrid-Methoden, sowie Säurehalogenid- oder Aktivester-Methoden durchgeführt werden. Aktivierte Ester werden zweckmäßig in situ gebildet, z. B. durch Zusatz von HOBt oder N-Hydroxysuccinimid.Gradual couplings and fragment condensation can be used become. Different N-terminal, C-terminal and side protection groups can be used which are preferably orthogonally cleavable to be selected. Coupling steps can be done with different Condensation reagents such as carbodiimides, carbodiimidazole, such of the uronium type such as TBTU, mixed anhydride methods, as well Acid halide or active ester methods are carried out. Activated Esters are conveniently formed in situ, e.g. B. by adding HOBt or N-hydroxysuccinimide.
Eine Cyclisierung eines linearen Vorläufermoleküls mit Seitenschutz gruppen ist ebenfalls mit solchen Kondensationsreaktionen durchführbar, wie z. B. in DE 43 10 643 oder in Houben-Weyl, I. c., Band 15/II, Seiten 1 bis 806 (1974) beschrieben.A cyclization of a linear precursor molecule with side protection groups can also be carried out with such condensation reactions, such as B. in DE 43 10 643 or in Houben-Weyl, I. c., Volume 15 / II, pages 1 to 806 (1974).
Bei der Festphasenpeptidsynthese sind unterschiedliche Harze und Ankerfunktionen nutzbar. Harze können z. B. auf Polystyrol oder Polyacrylamid basieren, Ankerfunktionen wie Wang, o-Chlortrityl sind zur Herstellung von Peptidsäuren, Aminoxanthenoxy-Anker z. B. zur Herstellung von Paptidamiden nutzbar.In solid phase peptide synthesis, different resins and Anchor functions can be used. Resins can e.g. B. on polystyrene or Polyacrylamide based, anchor functions like Wang, o-chlorotrityl are used Production of peptide acids, aminoxanthenoxy anchor z. B. for Production of paptidamides can be used.
Biotinylierte oder fluoreszenzmarkierte Peptide I Proteine können ebenfalls nach Standardmethoden hergestellt werden. (z. B. E. A. Bayer and M. Wilchek in Methods of Biochemical Analysis Vol 26 The Use of the Avidin-Biotin Complex as a Tool in Molecular Biology; und Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 6th Edition, 1996, by R. P. Haughland, Molecular Probes, Inc.; oder auch WO 97/14716).Biotinylated or fluorescence-labeled peptide I proteins can also be produced by standard methods. (e.g. BEA Bayer and M. Wilchek in Methods of Biochemical Analysis Vol 26 The Use of the Avidin-Biotin Complex as a Tool in Molecular Biology; and Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 6 th Edition, 1996, by RP Haughland, Molecular Probes, Inc .; or also WO 97/14716).
Selbstverständlich können die erfindungsgemäßen Peptide auch durch Solvolyse, insbesondere Hydrolyse, oder durch Hydrogenolyse ihrer funktionellen Derivate freigesetzt werden. Bevorzugte Ausgangsstoffe für die Solvolyse bzw. Hydrogenolyse sind solche, die anstelle einer oder mehrerer freier Amino- und/oder Hydroxygruppen entsprechende geschützte Amino- und/oder Hydroxygruppen enthalten, vorzugsweise solche, die anstelle eines H-Atoms, das mit einem N-Atom verbunden ist, eine Aminoschutzgruppe oder die anstelle des H-Atoms einer Hydroxy gruppe eine Hydroxyschutzgruppe tragen. Entsprechendes gilt für Carbonsäuren, die durch Substitution ihrer -CO-OH Hydroxyfunktion mittels einer Schutzgruppe, z. B. als Ester geschützt werden können. Of course, the peptides according to the invention can also by Solvolysis, especially hydrolysis, or by hydrogenolysis of them functional derivatives are released. Preferred starting materials for Solvolysis or hydrogenolysis are those which take the place of one or corresponding to several free amino and / or hydroxy groups contain protected amino and / or hydroxy groups, preferably those that, instead of an H atom connected to an N atom, an amino protecting group or a hydroxy instead of the H atom wear a hydroxy protecting group. The same applies to Carboxylic acids by substitution of their -CO-OH hydroxy function by means of a protective group, e.g. B. can be protected as an ester.
Der Ausdruck "Aminoschutzgruppe" ist allgemein bekannt und bezieht sich auf Gruppen, die geeignet sind, eine Aminogruppe vor chemischen Um setzungen zu schützen (zu blockieren), die aber leicht entfernbar sind, nachdem die gewünschte chemische Reaktion an anderen Stellen des Moleküls durchgeführt worden ist. Der Ausdruck "Hydroxyschutzgruppe" ist ebenfalls allgemein bekannt und bezieht sich auf Gruppen, die geeignet sind, eine Hydroxygruppe vor chemischen Umsetzungen zu schützen, die aber leicht entfernbar sind, nachdem die gewünschte chemische Reaktion an anderen Stellen des Moleküls durchgeführt worden ist. Das In-Freiheit- Setzen der Verbindungen aus ihren funktionellen Derivaten gelingt - je nach der benutzten Schutzgruppe - z. B. mit starken Säuren, zweckmäßig mit TFA oder Perchlorsäure, aber auch mit anderen starken anorgan ischen Säuren wie Salzsäure oder Schwefelsäure, starken organischen Carbonsäuren wie Trichloressigsäure oder Sulfonsäuren wie Benzol- oder p-Toluolsulfonsäure. Hydrogenolytisch entfernbare Schutzgruppen (z. B. CBZ oder Benzyl) können z. B. durch Behandeln mit Wasserstoff in Gegenwart eines Katalysators (z. B. eines Edelmetallkatalysators wie Palladium, zweckmäßig auf einem Träger wie Kohle) abgespalten werden.The term "amino protecting group" is well known and refers to on groups that are suitable, an amino group before chemical order to protect (block) settlements that are easily removable, after the desired chemical reaction elsewhere in the Molecule has been carried out. The term "hydroxy protecting group" is also generally known and refers to groups that are suitable are to protect a hydroxyl group from chemical reactions which but are easily removable after the desired chemical reaction elsewhere in the molecule. The in freedom The connections from their functional derivatives succeed - depending according to the protective group used - e.g. B. with strong acids, useful with TFA or perchloric acid, but also with other strong inorganic acids such as hydrochloric acid or sulfuric acid, strong organic Carboxylic acids such as trichloroacetic acid or sulfonic acids such as benzene or p-toluenesulfonic acid. Hydrogenolytically removable protective groups (e.g. CBZ or benzyl) can e.g. B. by treatment with hydrogen in Presence of a catalyst (e.g. a noble metal catalyst such as Palladium, conveniently split off on a support such as coal).
Typische Schutzgruppen für N-Termini und für seitenständige Amino gruppen sind Z, BOC, Fmoc, solche für C-Termini oder die Asp- oder Glu- Seitenketten sind O-prim.-Alkyl (z. B. OMe oder OEt), O-tert.-Alkyl (z. B. OBut) oder OBenzyl. Für die Guanidinofunktion des Arg ist z. B. Z, BOC, NO2, Mtr, Pmc oder Pbf geeignet. Alkoholische Funktionen können durch tert.-Alkylreste oder Tritylgruppen geschützt sein.Typical protecting groups for N-termini and for pendant amino groups are Z, BOC, Fmoc, those for C-termini or the Asp or Glu Side chains are O-primary alkyl (e.g. OMe or OEt), O-tertiary alkyl (e.g. OBut) or OBenzyl. For the guanidino function of the Arg. B. Z, BOC, Suitable for NO2, Mtr, Pmc or Pbf. Alcoholic functions can be caused by tert-alkyl radicals or trityl groups must be protected.
Die Gruppen BOC, OBut und Mtr können z. B. bevorzugt mit TFA in Di chlormethan oder mit etwa 3 bis 5n HCl in Dioxan bei 15-30° abgespalten werden, die FMOC-Gruppe mit einer etwa 5- bis 50%igen Lösung von Dimethylamin, Diethylamin oder Piperidin in DMF bei 15-30°. The groups BOC, OBut and Mtr can e.g. B. preferably with TFA in Di chloromethane or with about 3 to 5N HCl in dioxane at 15-30 ° be the FMOC group with an approximately 5 to 50% solution of Dimethylamine, diethylamine or piperidine in DMF at 15-30 °.
Die Tritylgruppe wird z. B. zum Schutz der Aminosäuren Histidin, Asparagin, Glutamin und Cystein eingesetzt. Die Abspaltung erfolgt, je nach gewünschtem Endprodukt, mit TFA/10% Thiophenol, wobei die Tritylgruppe von allen genannten Aminosäuren abgespalten wird, bei Einsatz von TFA/Anisol oder TFA/Thioanisol wird nur die Tritylgruppe von His, Asn und Gln abgespalten, wogegen sie an der Cys-Seitenkette verbleibt.The trityl group is e.g. B. to protect the amino acids histidine, Asparagine, glutamine and cysteine are used. The separation takes place, respectively according to the desired end product, with TFA / 10% thiophenol, the Trityl group is split off from all of the amino acids mentioned Only the trityl group is used with TFA / anisole or TFA / thioanisole split off from His, Asn and Gln, whereas on the Cys side chain remains.
Hydrogenolytisch entfernbare Schutzgruppen (z. B. CBZ oder Benzyl) können z. B. durch Behandeln mit Wasserstoff in Gegenwart eines Kata lysators (z. B. eines Edelmetallkatalysators wie Palladium, zweckmäßig auf einem Träger wie Kohle) abgespalten werden. Als Lösungsmittel eignen sich dabei die oben angegebenen, insbesondere z. B. Alkohole wie Methanol oder Ethanol oder Amide wie DMF. Die Hydrogenolyse wird in der Regel bei Temperaturen zwischen etwa 0 und 100° und Drucken zwischen etwa 1 und 200 bar, bevorzugt bei 20-30° und 1-10 bar durch geführt. Eine Hydrogenolyse der CBZ-Gruppe gelingt z. B. gut an 5 bis 10%igem Pd/C in Methanol oder mit Ammomiumformiat (anstelle von Wasserstoff) an Pd/C in Methanol/DMF bei 20-30°.Hydrogenolytically removable protective groups (e.g. CBZ or benzyl) can e.g. B. by treatment with hydrogen in the presence of a kata analyzer (e.g. a noble metal catalyst such as palladium a carrier such as coal) can be split off. Suitable as a solvent the above, especially z. B. alcohols such as Methanol or ethanol or amides such as DMF. The hydrogenolysis is in usually at temperatures between about 0 and 100 ° and printing between about 1 and 200 bar, preferably at 20-30 ° and 1-10 bar guided. Hydrogenolysis of the CBZ group succeeds e.g. B. good at 5 to 10% Pd / C in methanol or with ammonium formate (instead of Hydrogen) on Pd / C in methanol / DMF at 20-30 °.
Wie bereits erwähnt, umfassen die erfindungsgemäßen Peptide ihre phy siologisch unbedenklichen Salze, welche ebenfalls nach Standardmetho den hergestellt werden können. So kann eine Base einer erfindungsge mäsßen Verbindung mit einer Säure in das zugehörige Säureadditionssalz übergeführt werden, beispielsweise durch Umsetzung äquivalenter Men gen der Base und der Säure in einem inerten Lösungsmittel wie Ethanol und anschließendes Eindampfen. Für diese Umsetzung kommen insbe sondere Säuren in Frage, die physiologisch unbedenkliche Salze liefern. So können anorganische Säuren verwendet werden, z. B. Schwefelsäure, Salpetersäure, Halogenwasserstoffsäuren wie Chlorwasserstoffsäure oder Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäuren wie Orthophosphorsäure, Sul faminsäure, ferner organische Säuren, insbesondere aliphatische, alicyc lische, araliphatische, aromatische oder heterocyclische ein- oder mehr basige Carbon-, Sulfon- oder Schwefelsäuren, z. B. Ameisensäure, Essig säure, Propionsäure, Pivalinsäure, Diethylessigsäure, Malonsäure, Bern steinsäure, Pimelinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Milchsäure, Wein säure, Äpfelsäure, Citronensäure, Gluconsäure, Ascorbinsäure, Nicotin säure, Isonicotinsäure, Methan- oder Ethansulfonsäure, Ethandisulfon säure, 2-Hydroxyethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfon säure, Naphthalin-mono- und -disulfonsäuren, Laurylschwefelsäure. Salze mit physiologisch nicht unbedenklichen Säuren, z. B. Pikrate, können zur Isolierung und /oder Aufreinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden. Andererseits kann eine Säure der erfindungsgemäßen Verbindungen durch Umsetzung mit einer Base in eines ihrer physiolo gisch unbedenklichen Metall- oder Ammoniumsalze übergeführt werden. Als Salze kommen dabei insbesondere die Natrium-, Kalium-, Magnesium-, Calcium- und Ammoniumsalze in Betracht, ferner substituierte Ammo niumsalze, z. B. die Dimethyl-, Diethyl- oder Diisopropylammoniumsalze, Monoethanol-, Diethanol- oder Diisopropylammoniumsalze, Cyclohexyl-, Dicyclohexyl-ammoniumsalze, Dibenzylethylendiammoniumsalze, weiter hin z. B. Salze mit Arginin oder Lysin.As already mentioned, the peptides according to the invention include their phy Siologically acceptable salts, which are also based on standard metho that can be made. So a base of a fiction must be combined with an acid in the associated acid addition salt be transferred, for example by implementing equivalent menus base and acid in an inert solvent such as ethanol and then evaporating. In particular for this implementation special acids in question that provide physiologically acceptable salts. So inorganic acids can be used, e.g. B. sulfuric acid, Nitric acid, hydrohalic acids such as hydrochloric acid or Hydrobromic acid, phosphoric acids such as orthophosphoric acid, Sul Faminic acid, also organic acids, especially aliphatic, alicyc lische, araliphatic, aromatic or heterocyclic one or more basic carboxylic, sulfonic or sulfuric acids, e.g. B. formic acid, vinegar acid, propionic acid, pivalic acid, diethylacetic acid, malonic acid, Bern succinic acid, pimelic acid, fumaric acid, maleic acid, lactic acid, wine acid, malic acid, citric acid, gluconic acid, ascorbic acid, nicotine acid, isonicotinic acid, methane or ethanesulfonic acid, ethane disulfone acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfone acid, naphthalene mono- and disulfonic acids, lauryl sulfuric acid. Salts with physiologically unacceptable acids, e.g. B. picrates can be used Isolation and / or purification of the compounds according to the invention be used. On the other hand, an acid of the invention Compounds by reaction with a base in one of their physiolo gisch harmless metal or ammonium salts are transferred. In particular, sodium, potassium, magnesium, Calcium and ammonium salts into consideration, also substituted ammo nium salts, e.g. B. the dimethyl, diethyl or diisopropylammonium salts, Monoethanol, diethanol or diisopropylammonium salts, cyclohexyl, Dicyclohexylammonium salts, dibenzylethylenediammonium salts, further towards z. B. salts with arginine or lysine.
Die erfindungsgemäßen peptidischen Verbindungen können, wie bereits erwähnt, als Arzneimittelwirkstoffe in der Human- und Veterinärmedizin eingesetzt werden, insbesondere zur Prophylaxe und/oder Therapie von Erkrankungen bei denen epitheliale Zellen beteiligt sind. Besonders hervor zuheben sind hierbei Erkrankungen oder Entzündungen oder Wundhei lungsprozesse der Haut, der Atemwegsorgane und des Magen- und Darm bereichs, so zum Beispiel Apoplexie, Angina pectoris, Tumorerkrankun gen, osteolytischen Krankheiten wie Osteoporose, pathologisch angio genen Krankheiten wie z. B. Entzündungen, Lungenfibrose, ophthalmo logischen Krankheiten, diabetischer Retinopathie, makularer Degenera tion, Myopia, okularer Histoplasmose, rheumatischer Arthritis, Osteoarthri tis, rubeotischem Glaukom, ulcerativer Colitis, Morbus Crohn, Atheroskler ose, Psoriasis, Restenose nach Angioplastie, bei akutem Nierenversagen, Nierenentzündung, mikrobiellen Infekten und Multipler Sklerose. The peptide compounds according to the invention can, as already mentioned as active pharmaceutical ingredients in human and veterinary medicine are used, in particular for the prophylaxis and / or therapy of Diseases involving epithelial cells. Particularly outstanding Diseases or inflammation or soreness are to be raised here processes of the skin, the respiratory organs and the gastrointestinal tract areas such as apoplexy, angina pectoris, tumor disease genes, osteolytic diseases such as osteoporosis, pathological angio diseases such as B. inflammation, pulmonary fibrosis, ophthalmo logical diseases, diabetic retinopathy, macular degenera tion, myopia, ocular histoplasmosis, rheumatoid arthritis, osteoarthri tis, rubeotic glaucoma, ulcerative colitis, Crohn's disease, atheroscler ose, psoriasis, restenosis after angioplasty, with acute kidney failure, Inflammation of the kidneys, microbial infections and multiple sclerosis.
Gegenstand der Erfindung sind demgemäß peptidische Verbindungen der oben und unten sowie in den Ansprüchen definierten Formeln einschließ lich ihrer physiologisch unbedenklichen Salze als Arzneimittel, Diagnostika oder Reagenzien.The invention accordingly relates to peptide compounds of the include formulas defined above and below and in the claims Lich their physiologically acceptable salts as medicines, diagnostics or reagents.
Gegenstand der Erfindung sind insbesondere entsprechende Arzneimittel als Inhibitoren zur Bekämpfung von Erkrankungen, die mittelbar oder unmittelbar auf einer Expression des αvβ6-Integrinrezeptors beruhen, insbesondere also bei pathologisch angiogenen Erkrankungen, Throm bosen, Herzinfarkt, koronaren Herzerkrankungen, Arteriosklerose, Tumoren, Osteoporose, Entzündungen, Infektionen sowie zur Beein flussung von Wundheilungsprozessen.The invention particularly relates to corresponding medicaments as inhibitors for combating diseases which are based directly or indirectly on expression of the α v β 6 integrin receptor, in particular in the case of pathologically angiogenic diseases, thromboses, heart attack, coronary heart diseases, arteriosclerosis, tumors, osteoporosis , Inflammation, infections and to influence wound healing processes.
Gegenstand sind auch entsprechende pharmazeutische Zubereitungen, welche mindestens ein Arzneimittel der Formel I sowie gegebenenfalls Träger- und/oder Hilfsstoffe enthalten.Appropriate pharmaceutical preparations are also a subject of the invention, which at least one drug of formula I and optionally Contain carrier and / or auxiliary substances.
Ferner ist Gegenstand der Erfindung die Verwendung der peptidischen Verbindungen und/oder ihre physiologisch unbedenklichen Salze gemäß der Ansprüche und der Beschreibung zur Herstellung eines Arzneimittels zur Bekämpfung von Erkrankungen, die mittelbar oder unmittelbar auf einer Expression des αvβ6-Integrinrezeptors beruhen, insbesondere also bei pathologisch angiogenen Erkrankungen, Thrombosen, Herzinfarkt, koronaren Herzerkrankungen, Arteriosklerose, Tumoren, Osteoporose, Entzündungen, Infektionen sowie zur Beeinflussung von Wundheilungs prozessen. Die erfindungsgemäßen Arzneimittel bzw. sie enthaltende pharmazeutische Zubereitungen können in der Human- oder Veterinär medizin verwendet werden. Als Trägerstoffe kommen organische oder anorganische Substanzen in Frage, die sich für die enterale (z. B. orale), parenterale, topische Applikation oder für eine Applikation in Form eines Inhalation-Sprays eignen und mit den neuen Verbindungen nicht reagie ren, beispielsweise Wasser, pflanzliche Öle, Benzylalkohole, Alkylengly kole, Polyethylenglykole, Glycerintriacetat, Gelatine, Kohlehydrate wie Lactose oder Stärke, Magnesiumstearat, Talk, Vaseline. Zur oralen An wendung dienen insbesondere Tabletten, Pillen, Dragees, Kapseln, Pul ver, Granulate, Sirupe, Säfte oder Tropfen, zur rektalen Anwendung Sup positorien, zur parenteralen Anwendung Lösungen, vorzugsweise ölige oder wässrige Lösungen, ferner Suspensionen, Emulsionen oder Implan tate, für die topische Anwendung Salben, Cremes oder Puder. Die neuen Verbindungen können auch lyophilisiert und die erhaltenen Lyophilisate z. B. zur Herstellung von Injektionspräparaten verwendet werden. Die angegebenen Zubereitungen können sterilisiert sein und/oder Hilfsstoffe wie Gleit-, Konservierungs-, Stabilisierungs- und/oder Netzmittel, Emul gatoren, Salze zur Beeinflussung des osmotischen Druckes, Puffersub stanzen, Farb-, Geschmacks- und /oder mehrere weitere Wirkstoffe ent halten, z. B. ein oder mehrere Vitamine.The invention furthermore relates to the use of the peptide compounds and / or their physiologically acceptable salts according to the claims and the description for the manufacture of a medicament for combating diseases which are based, directly or indirectly, on expression of the α v β 6 integrin receptor, in particular thus in the case of pathologically angiogenic diseases, thromboses, heart attacks, coronary heart diseases, arteriosclerosis, tumors, osteoporosis, inflammation, infections and for influencing wound healing processes. The pharmaceuticals according to the invention or pharmaceutical preparations containing them can be used in human or veterinary medicine. Suitable carriers are organic or inorganic substances which are suitable for enteral (e.g. oral), parenteral, topical application or for application in the form of an inhalation spray and do not react with the new compounds, for example water, vegetable oils, benzyl alcohols, alkylene glycols, polyethylene glycols, glycerol triacetate, gelatin, carbohydrates such as lactose or starch, magnesium stearate, talc, petroleum jelly. Tablets, pills, dragees, capsules, powders, granules, syrups, juices or drops are used for oral use, sup positoria for rectal use, solutions, preferably oily or aqueous solutions, furthermore suspensions, emulsions or implants for parenteral use, for topical application of ointments, creams or powder. The new compounds can also be lyophilized and the lyophilizates obtained, for. B. can be used for the preparation of injectables. The specified preparations can be sterilized and / or auxiliaries such as lubricants, preservatives, stabilizers and / or wetting agents, emulsifiers, salts for influencing the osmotic pressure, punching buffer substances, colors, flavors and / or several other active substances , e.g. B. one or more vitamins.
Für die Applikation als Inhalationsspray können Sprays verwendet werden, die den Wirkstoff entweder gelöst oder suspendiert in einem Treibgas oder Treibgasgemisch (z. B. CO2 oder Fluorchlorkohlenwasserstoffen) enthal ten. Zweckmäßig verwendet man den Wirkstoff dabei in mikronisierter Form, wobei ein oder mehrere zusätzliche physiologisch verträgliche Lösungsmittel zugegen sein können, z. B. Ethanol. Inhalationslösungen können mit Hilfe üblicher Inhalatoren verabreicht werden.For application as an inhalation spray, sprays can be used which contain the active ingredient either dissolved or suspended in a propellant gas or propellant mixture (e.g. CO 2 or chlorofluorocarbons). The active ingredient is expediently used in micronized form, with one or more additional ones physiologically acceptable solvents may be present, e.g. B. ethanol. Inhalation solutions can be administered using standard inhalers.
Die erfindungsgemäßen Substanzen können in der Regel in Analogie zu anderen bekannten, im Handel befindlichen Peptiden (z. B. beschrieben in der US-A-4 472 305) verabreicht werden, vorzugsweise in Dosierungen zwischen etwa 0,05 und 500 mg, insbesondere zwischen 0,5 und 100 mg pro Dosierungseinheit verabreicht. Die tägliche Dosierung liegt vorzugs weise zwischen etwa 0,01 und 20 mg/kg Körpergewicht. Die spezielle Dosis für jeden Patienten hängt jedoch von den verschiedensten Faktoren ab, beispielsweise von der Wirksamkeit der eingesetzten speziellen Verbindung, vom Alter, Körpergewicht, allgemeinen Gesundheitszustand, Geschlecht, von der Kost, vom Verabreichungszeitpunkt und -weg, von der Ausscheidungsgeschwindigkeit, Arzneistoffkombination und Schwere der jeweiligen Erkrankung, welcher die Therapie gilt. Die parenterale Applikation ist bevorzugt.The substances according to the invention can generally be analogous to other known, commercially available peptides (e.g. described in US-A-4,472,305), preferably in dosages between approximately 0.05 and 500 mg, in particular between 0.5 and 100 mg administered per dosage unit. The daily dosage is preferred between about 0.01 and 20 mg / kg body weight. The special one However, dose for each patient depends on various factors depending, for example, on the effectiveness of the special Connection, age, body weight, general health, Gender, the diet, the time and route of administration, the Elimination rate, drug combination and severity of respective disease to which the therapy applies. The parenteral Application is preferred.
Ferner können die neuen Verbindungen der Formel I in der analytischen Biologie und Molekularbiologie verwendet werden.Furthermore, the new compounds of formula I in the analytical Biology and molecular biology are used.
Die neuen Verbindungen der Formel I, wobei X einen über eine -CONH-, -COO-, -NH-C(=S)-NH-, -NH-C(=O)-NH-, -SO2NH- oder -NHCO-Bindung verknüpften fluoreszierenden Farbstoffrest bedeutet, können als diagnostische Marker in der FACS (Fluorescence Activated Cell Sorter)- Technik und Fluoreszenz-Mikroskopie verwendet werden.The new compounds of formula I, wherein X is a -CONH-, -COO-, -NH-C (= S) -NH-, -NH-C (= O) -NH-, -SO 2 NH- or -NHCO bond linked fluorescent dye residue means can be used as diagnostic markers in the FACS (Fluorescence Activated Cell Sorter) technique and fluorescence microscopy.
Der Einsatz von markierten Verbindungen in der Fluoreszenz-Mikroskopie ist z. B. beschrieben von Y.-L. Wang und D. L. Taylor in "Fluorescence Microscopy of Living Cells in Culture, Part A + B, Academic Press, Inc. 1989".The use of labeled compounds in fluorescence microscopy is z. B. described by Y.-L. Wang and D. L. Taylor in "Fluorescence Microscopy of Living Cells in Culture, Part A + B, Academic Press, Inc. 1989 ".
Die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen können auch als Integrin liganden zur Herstellung von Säulen für die Affinitätschromatographie zur Reindarstellung von Integrinen verwendet werden. Der Komplex aus einem Avidin-derivatisierten Trägermaterial, z. B. Sepharose und den neuen Verbindungen wird nach an sich bekannten Methoden (z. B. E. A. Bayer and M. Wilchek in Methods of Biochemical Analysis Vol 26 The Use of the Avidin-Biotin Complex as a Tool in Molecular Biology) gebildet. Als polymere Trägermaterialien eignen sich dabei die an sich in der Peptid chemie bekannten polymeren festen Phasen mit vorzugsweise hydrophilen Eigenschaften, beispielsweise quervernetzte Polyzucker wie Cellulose, Sepharose oder Sephadex®, Acrylamide, Polymer auf Polyethylenglykol basis oder Tentakelpolymere.The new compounds according to the invention can also be used as integrins ligands for the manufacture of columns for affinity chromatography Pure representation of integrins can be used. The complex out an avidin-derivatized carrier material, e.g. B. Sepharose and the new compounds are prepared using methods known per se (e.g. E. A. Bayer and M. Wilchek in Methods of Biochemical Analysis Vol 26 The Use of the Avidin-Biotin Complex as a Tool in Molecular Biology). As polymeric carrier materials are suitable in themselves in the peptide Chemically known polymeric solid phases with preferably hydrophilic Properties, for example cross-linked poly sugars such as cellulose, Sepharose or Sephadex®, acrylamides, polymer on polyethylene glycol base or tentacle polymers.
Die Erfindung umfaßt schließlich auch rekombinante DNA-Sequenzen, welche Abschnitte enthalten, die für Peptidbereiche codieren, die die erfindungsgemäßen peptidischen Strukturmotive aufweisen. Finally, the invention also includes recombinant DNA sequences, which contain sections which code for peptide regions which the have peptide structural motifs according to the invention.
Solche DNA kann durch Partikel auf Zellen übertragen werden, wie in Ch. Andree et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 12 188-12 192 (1994) beschrieben ist, oder der Transfer auf Zellen kann durch andere Hilfsmittel, wie Liposomen, gesteigert werden (A. I. Aronsohn and J. A. Hughes J. Drug Targeting, 5, 163-169 (1997)).Such DNA can be transferred to cells by particles, as described in Ch. Andree et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 12 188-12 192 (1994), or the transfer to cells can be done by other means, such as liposomes, be increased (A.I. Aronsohn and J.A. Hughes J. Drug Targeting, 5, 163-169 (1997)).
Der Transfer einer solchen DNA könnte demnach in Hefen, mittels Bacculo-Viren oder in Säugerzellen für die Produktion der peptidischen Substanzen dieser Erfindung benutzt werden.The transfer of such a DNA could accordingly in yeast by means of Bacculo viruses or in mammalian cells for the production of peptide Substances of this invention are used.
Der Transfer einer solchen DNA könnte demnach in Hefen, mittels Bacculo-Viren oder in Säugerzellen für die Produktion der peptidischen Substanzen dieser Erfindung benutzt werden.The transfer of such a DNA could accordingly in yeast by means of Bacculo viruses or in mammalian cells for the production of peptide Substances of this invention are used.
Wird ein tierischer oder menschlicher Organismus mit solch einer rekombinanten DNA infiziert, dann können die durch die infizierten Zellen letztlich selbst gebildeten erfindungsgemäßen Peptide unmittelbar an den αvβ6-Integrinrezeptor, beispielsweise von Tumorzellen binden und ihn blockieren.If an animal or human organism is infected with such a recombinant DNA, the peptides according to the invention ultimately formed by the infected cells themselves can bind directly to the α v β 6 integrin receptor, for example from tumor cells, and block it.
Entsprechende rekombinante DNA, die durch bekannte und übliche Techniken bereitgestellt werden kann, kann beispielsweise aber auch in Form von Virus-DNA vorliegen, welche Abschnitte enthält, die für das Virus-Hüllprotein codieren. Durch Infektion eines Wirtsorganismus mit derartigen rekombinanten, vorzugsweise nicht pathogenen Viren, können Wirtszellen, die das Integrin αvβ6 exprimieren, bevorzugt angegriffen werden (Targetierung).Corresponding recombinant DNA, which can be provided by known and customary techniques, can also be present, for example, in the form of virus DNA which contains sections which code for the virus coat protein. By infection of a host organism with such recombinant, preferably non-pathogenic viruses, host cells which express the integrin α v β 6 can be attacked preferentially (targeting).
Geeignete Viren sind beispielsweise Adenovirenarten, die mehrfach schon als Vektoren für fremde Gene in Säugerzellen benutzt wurden. Eine Anzahl von Eigenschaften machen sie zu guten Kandidaten für Gen therapie, wie S. J. Watkins et al. Gene Therapy 4, 1004-1012 (1997) zu entnehmen ist (siehe auch J. Engelhardt et al. Hum. Gene Ther. 4, 759-769 (1993)).Suitable viruses are, for example, adenovirus types that have been used several times were used as vectors for foreign genes in mammalian cells. A A number of traits make them good candidates for genes therapy, such as S. J. Watkins et al. Gene Therapy 4, 1004-1012 (1997) (see also J. Engelhardt et al. Hum. Gene Ther. 4, 759-769 (1993)).
Wie in A. Fasbender et al. J. Clin. Invest. 102, 184-193 (1998) zu finden ist, sind gemeinsames Problem bei Gentherapie durch virale und nichtvirale Vektoren die limitierte Effizienz des Gentransfers. Mit der oben beschrie benen zusätzlichen Ligandensequenz für αvβ6 Integrin im Hüllprotein der Adenoviren kann eine Verbesserung des Transfers z. B. von Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) cDNA erreicht werden.As in A. Fasbender et al. J. Clin. Invest. 102, 184-193 (1998), common problem with gene therapy by viral and non-viral vectors is the limited efficiency of gene transfer. With the above-described additional ligand sequence for α v β 6 integrin in the coat protein of the adenoviruses, an improvement in the transfer z. B. Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) cDNA can be achieved.
Ähnlich wie in der Arbeit von T. Tanaka et al. Cancer Research 58, 3362-3369 (1998) kann statt der DNA für Angiostatin auch die DNA für die Sequenzen dieser Erfindung für Zelltransfektionen mittels retroviraler oder adenoviraler Vektoren genutzt werden.Similar to the work of T. Tanaka et al. Cancer Research 58, 3362-3369 (1998), instead of the DNA for angiostatin, the DNA for the Sequences of this invention for retroviral or cell transfection adenoviral vectors can be used.
Die erfindungsgemäßen Peptide können auch innerhalb eines Liposome komplexes aus Lipid/Peptid/DNA für eine Transfektion von Zellkulturen herstellt zusammen mit einem Liposomen-Komplex bestehend aus Lipid/DNA (ohne Peptid) für den Einsatz in der Gentherapie am Menschen eingesetzt werden. Die Herstellung eines Liposomenkomplexes aus Lipid/DNA/Peptid ist beispielsweise bei Hart S. L, et al 1998: Lipid- Mediated Enhancement of Transfection by a Non-Viral Integrin-Targeting Vector. Human Gene Therapy 9, 575-585, beschrieben.The peptides according to the invention can also be used within a liposome complex of lipid / peptide / DNA for transfection of cell cultures produces together with a liposome complex consisting of lipid / DNA (without peptide) for use in gene therapy in humans be used. The preparation of a liposome complex Lipid / DNA / peptide is, for example, by Hart S. L, et al 1998: Lipid- Mediated enhancement of transfection by a non-viral integrin targeting Vector. Human Gene Therapy 9, 575-585.
Ein Liposomenkomplex aus Lipid/Pepid/DNA ist beispielsweise aus folgenden Stammlösungen hergestellbar: 1 µg/µl Lipofectin (äquimolare Mischung aus DOTMA (= N-[1-(2,3-dioleyloxy)propyl]-N,N,N-trimethyl ammonium Chlorid) und DOPE (Dioleyl Phosphatidylethanolamin)), 10 µg/ml Plasmid DNA und 100 µg/ml Peptid. Sowohl DNA als auch Peptid werden dazu in Zellkulturmedium gelöst.A liposome complex of lipid / pepid / DNA is, for example, from following stock solutions can be prepared: 1 µg / µl lipofectin (equimolar Mixture of DOTMA (= N- [1- (2,3-dioleyloxy) propyl] -N, N, N-trimethyl ammonium chloride) and DOPE (dioleyl phosphatidylethanolamine)), 10 µg / ml plasmid DNA and 100 µg / ml peptide. Both DNA and peptide are dissolved in cell culture medium.
Der Liposomenkomplex wird durch Mischen der drei Komponenten in einem bestimmten Gewichtsverhältnis (Lipid: DNA: Peptid, z. B. 0,75 : 1 : 4) hergestellt. Liposomen DNA-Komplexe für eine Gentherapie am Menschen sind bereits beschrieben worden (Caplen N. J., et al 1995: Liposome-mediated CFTR gene transfer to the nasal epithelium of patients with cystic fibrosis Nature Medicine 1, 39-46).The liposome complex is made by mixing the three components in a certain weight ratio (lipid: DNA: peptide, e.g. 0.75: 1: 4) manufactured. Liposome DNA complexes for gene therapy on Humans have already been described (Caplen N.J., et al 1995: Liposome-mediated CFTR gene transfer to the nasal epithelium of patients with cystic fibrosis Nature Medicine 1, 39-46).
Gegenstand der Erfindung ist somit auch die Verwendung entsprechend modifizierter rekombinater DNA von Gen-freisetzenden Systemen, insbe sondere Virus-DNA, zur Bekämpfung von Krankheiten, welche mittelbar oder unmittelbar auf einer Expression von αvβ6-Integrinrezeptoren beruhen, insbesondere also bei pathologisch angiogenen Erkrankungen, Thrombosen, Herzinfarkt, koronaren Herzerkrankungen, Arteriosklerose, Tumoren, Osteoporose, Entzündungen, Infektionen sowie zur Beein flussung von Wundheilungsprozessen.The invention thus also relates to the use of appropriately modified recombinant DNA from gene-releasing systems, in particular virus DNA, for combating diseases which are based directly or indirectly on expression of α v β 6 integrin receptors, in particular in the case of pathologically angiogenic ones Diseases, thromboses, heart attacks, coronary heart diseases, arteriosclerosis, tumors, osteoporosis, inflammation, infections and to influence wound healing processes.
Vor- und nachstehend sind alle Temperaturen in °C angegeben.All temperatures above and below are given in ° C.
Die HPLC-Analysen (Retentionszeit Rt) erfolgten in den folgenden
Systemen:
Säule 5 µm LichroSpher 60 RP-Select B (250-4), mit einem 50-minütigen
Gradienten von 0 bis 80% 2-Propanol in Wasser/0,3% Trifluoressigsäure,
bei 1 ml/min Fluss und Detektion bei 215 nm.
Massenspektrometrie (MS): EI (Elektronenstoß-Ionisation) M+
FAB (Fast Atom Bombardment) (M+H)+ The HPLC analyzes (retention time Rt) were carried out in the following systems:
Column 5 µm LichroSpher 60 RP-Select B (250-4), with a 50-minute gradient from 0 to 80% 2-propanol in water / 0.3% trifluoroacetic acid, at 1 ml / min flow and detection at 215 nm.
Mass spectrometry (MS): EI (electron impact ionization) M +
FAB (Fast Atom Bombardment) (M + H) +
Prinzipiell erfolgte die Herstellung und Aufreinigung mittels Fmoc-Strategie unter Protektion säurelabiler Seitenketten auf särelabilen Harzen unter Benutzung eines kommerziell erhältlichen "continuous flow" Peptid synthesizers entsprechend den Angaben von Haubner et al. (J. Am. Chem. Soc. 118, 1996, 17 703). In principle, the production and purification was carried out using the Fmoc strategy with protection of acid labile side chains on acid labile resins under Use of a commercially available "continuous flow" peptide synthesizers according to the information provided by Haubner et al. (J. Am. Chem. Soc. 118, 1996, 17 703).
2 g Amino-Xanthenyloxy-Polystyrol-Harz (Novablochem 0.37 mmol/g) wurden nacheinander in einer Doppelkupplungstechnik 2 × mit je 0,50 g TBTU, 0,53 ml Ethyldiisopropylamin und Fmoc-Aminosäure in DMF in einem kommerziellen Synthesegerät und einer typischen Prozedur (Gerät und Handbuch Milligen 9050 PepSynthesizer™, 1987), für jeweils 30 Minuten, einem Kupplungsschritt unterworfen. Waschschritte erfolgten in DMF für 10 Minuten, Abspaltungsschritte in Piperidin/DMF (1 : 4 vol) für 5 Minuten, N-terminale Acetylierungen (Capping) wurden mit Essigsäure anhydrid/Pyridin/DMF (2 : 3 : 15 vol) für 15 Minuten durchgeführt. Es kamen die Aminosäuren Fmoc-Arg(Pmc), danach Fmoc-Leu, danach Fmoc-Ser(But), danach Fmoc-D-Asp(OBut), danach Fmoc-Leu, danach Fmoc-Asp(OBut), danach Fmoc-Gly und schließlich Fmoc-Arg(Pmc) zum Einsatz. Nach Abspalten der Fmoc-Schutzgruppe vom Fmoc-Arg(Pmc)-Gly-Asp(OBut)-Leu-D-Asp(OBut)-Ser(But)-Leu-Arg(Pmc)- aminoxanthenyloxy-Polystyrolharz wurde nochmals acetyliert. Nach Waschen mit DMF und Isopropanol und folgender Trocknung am Vakuum bei Raumtemperatur wurden 2,8 g Ac-Arg(Pmc)-Gly-Asp(OBut)-Leu-D- Asp(OBut)-Ser(But)-Leu-Arg(Pmc)-aminoxanthenyloxy-Polystyrolharz erhalten.2 g amino-xanthenyloxy-polystyrene resin (Novablochem 0.37 mmol / g) were successively in a double clutch technique 2 × with 0.50 g each TBTU, 0.53 ml ethyldiisopropylamine and Fmoc-amino acid in DMF in a commercial synthesizer and a typical procedure (device and manual Milligen 9050 PepSynthesizer ™, 1987), for 30 each Minutes, subjected to a coupling step. Washing steps took place in DMF for 10 minutes, cleavage steps in piperidine / DMF (1: 4 vol) for 5 Minutes, N-terminal acetylations (capping) were done with acetic acid anhydride / pyridine / DMF (2: 3: 15 vol) for 15 minutes. There came the amino acids Fmoc-Arg (Pmc), then Fmoc-Leu, then Fmoc-Ser (But), then Fmoc-D-Asp (OBut), then Fmoc-Leu, then Fmoc-Asp (OBut), then Fmoc-Gly and finally Fmoc-Arg (Pmc) for Commitment. After splitting off the Fmoc protecting group from Fmoc-Arg (Pmc) -Gly-Asp (OBut) -Leu-D-Asp (OBut) -Ser (But) -Leu-Arg (Pmc) - aminoxanthenyloxy polystyrene resin was acetylated again. To Wash with DMF and isopropanol and then dry in vacuo 2.8 g of Ac-Arg (Pmc) -Gly-Asp (OBut) -Leu-D- Asp (OBut) -Ser (But) -Leu-Arg (Pmc) aminoxanthenyloxy polystyrene resin receive.
Durch Behandlung dieses Peptidylharzes mit 20 ml Trifluoressig säure/Wasser/TIS (94 : 3 : 3 vol) für 2 Stunden bei Raumtemperatur, Filtration, Einengen im Vakuum und Verreiben mit Diethylether wurde ein 0,47 g Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2 (code EMD 272 974) erhalten.By treating this peptidyl resin with 20 ml of trifluoroacetic acid / water / TIS (94: 3: 3 vol) for 2 hours at room temperature, filtration, concentration in vacuo and trituration with diethyl ether, a 0.47 g Ac-Arg-Gly-Asp- Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 (code EMD 272 974) obtained.
Eine Reinigung des Produktes erfolgte per RP-HPLC auf Lichrosorb RP 18 (250-25,7 µm, Merck KGaA) in 0,3% TFA mit einem Gradienten von 4% auf 24% 2-Propanol in einer Stunde bei 10 ml/min und Beurteilung des Eluats mittels UV-Durchflussphotometer bei 215 und 254 nm. Es wurden 168 mg Produkt erhalten; Rt 15,5 min. FAB 973. The product was cleaned by RP-HPLC on Lichrosorb RP 18 (250-25.7 µm, Merck KGaA) in 0.3% TFA with a gradient of 4% to 24% 2-propanol in one hour at 10 ml / min and assess the Eluates using a UV flow photometer at 215 and 254 nm 168 mg of product received; Rt 15.5 min. FAB 973.
Analog wurden die folgenden Produkte hergestellt:
The following products were manufactured analogously:
Nomenklatur für Aminosäuren nach Eur. J. Biochem. 138, 9-371 (1984) kleiner Buchstabe = D-AminosäureNomenclature for amino acids according to Eur. J. Biochem. 138, 9-371 (1984) lowercase letter = D-amino acid
Die hergestellten erfindungsgemäßen Peptide wurden in Lösung zusam
men mit kompetetiv wirkenden Fibronektin an den immobiliserten αvβ6
Rezeptor gebunden und der Q-Wert als Maß für die Selektivität der Bin
dung des zu testenden Peptids an αvβ6 ermittelt. Der Q-Wert berechnet
sich dabei aus dem Quotienten der IC50-Werte von Testpeptid und einem
Standard. Als Standard diente das lineare Ac-RTDLDSLR-NH2 (Code
EMD 271 293) (Lit./Patent vgl. Pytela et al. Science 231, 1559, (1986)). Der
Bindungstest wurde im einzelnen wie folgt durchgeführt:
Die Immobilisierung von löslichem αvβ6 Rezeptor auf Microtiterplatten
erfolgte durch Verdünnung der Proteinlösung in TBS++ und anschlies
sender Inkubation über Nacht bei 4°C (100 µl/Vertiefung). Unspezifische
Bindungsstellen wurden durch Inkubation (2 h, 37°C) mit 3% (w/v) BSA in
TBS++ (200 µl/Vertiefung) blockiert. Überschüssiges BSA wurde durch
dreimaliges Waschen mit TBSA++ entfernt. Peptide wurden seriell (1 : 10)
in TBSA++ verdünnt und zusammen mit biotinyliertem Fibronektin (2 µg/ml)
mit dem immobilisierten Integrin inkubiert (50 µl Peptid + 50 µl Ligand
pro Vertiefung; 2 h; 37°C). Nicht gebundenes Fibronektin und Peptide
wurden durch dreimaliges Waschen mit TBSA++ entfernt. Die Detektion
des gebundenen Fibronektin erfolgte durch Inkubation (1 h; 37°C) mit
einem alkalische = Phosphatase-gekoppelten anti-Biotin-Antikörper (Biorad)
(1 : 20 000 in TBSA++; 100 µl/Vertiefung). Nach dreimaligem Waschen mit
TBSA++ erfolgte die kolorimetrische Detektion durch Inkubation (10-15 min.
5°C, im Dunkeln) mit Substratlösung (5 mg Nitrophenylphosphat, 1 ml
Ethanolamin, 4 ml H2O; 100 µl/Vertiefung). Die Enzymreaktion wurde
durch Zugabe von 0,4 M NaOH (100 µl/Vertiefung) gestoppt. Die Farbin
tensität wurde bei 405 nm im ELISA-Meßgerät bestimmt und gegen den
Nullwert abgeglichen. Als Nullwert dienten Vertiefungen, die nicht mit
Rezeptor beschichtet waren. Als Standard wurde Ac-RTDLDSLR-NH2
eingesetzt. Die IC50-Werte für die getesteten Peptide wurden aus einer
Graphik abgelesen und daraus zusammen mit dem IC50-Wert des
Standardpeptids der Q-Wert des erfindungsgemäßen Peptids ermittelt.
Q-Wert = IC50 Testpeptid/IC50 Standard
Q-Werte aus Versuchswiederholungen wurden gemittelt.The peptides according to the invention prepared were bound together with the competitively acting fibronectin to the immobilized α v β 6 receptor in solution and the Q value was determined as a measure of the selectivity of the binding of the peptide to be tested to α v β 6 . The Q value is calculated from the quotient of the IC 50 values of the test peptide and a standard. The linear Ac-RTDLDSLR-NH 2 (code EMD 271 293) was used as the standard (lit./patent, see Pytela et al. Science 231, 1559, (1986)). The binding test was carried out in detail as follows:
The soluble α v β 6 receptor was immobilized on microtiter plates by diluting the protein solution in TBS ++ and then incubating overnight at 4 ° C. (100 μl / well). Unspecific binding sites were blocked by incubation (2 h, 37 ° C) with 3% (w / v) BSA in TBS ++ (200 µl / well). Excess BSA was removed by washing three times with TBSA ++. Peptides were serially (1:10) diluted in TBSA ++ and incubated together with biotinylated fibronectin (2 µg / ml) with the immobilized integrin (50 µl peptide + 50 µl ligand per well; 2 h; 37 ° C). Unbound fibronectin and peptides were removed by washing three times with TBSA ++. The bound fibronectin was detected by incubation (1 h; 37 ° C.) with an alkaline = phosphatase-coupled anti-biotin antibody (Biorad) (1: 20,000 in TBSA ++; 100 µl / well). After washing three times with TBSA ++, the colorimetric detection was carried out by incubation (10-15 min. 5 ° C, in the dark) with substrate solution (5 mg nitrophenyl phosphate, 1 ml ethanolamine, 4 ml H 2 O; 100 µl / well). The enzyme reaction was stopped by adding 0.4 M NaOH (100 ul / well). The color intensity was determined at 405 nm in the ELISA measuring device and compared to the zero value. Wells that were not coated with receptor served as zero value. Ac-RTDLDSLR-NH 2 was used as the standard. The IC 50 values for the peptides tested were read from a graph and the Q value of the peptide according to the invention was determined therefrom together with the IC 50 value of the standard peptide.
Q value = IC 50 test peptide / IC 50 standard
Q values from repeated tests were averaged.
Die Ergebnisse des beschriebenen Tests sind in folgender Tabelle 1 zusammengefaßt:The results of the test described are in Table 1 below summarized:
Die nachfolgenden Beispiele betreffen pharmazeutische Zubereitungen:The following examples relate to pharmaceutical preparations:
Eine Lösung von 100 g Ac-RGDLdSLR-NH2 und 5 g Dinatriumhydrogen phosphat wird in 3 l zweifach destilliertem Wasser mit 2 n Salzsäure auf pH 6,5 eingestellt, steril filtriert, in Injektionsgläser abgefüllt, unter sterilen Bedingungen lyophilisiert und steril verschlossen. Jedes Injektionsglas enthält 5 mg Wirkstoff.A solution of 100 g of Ac-RGDLdSLR-NH 2 and 5 g of disodium hydrogen phosphate is adjusted to pH 6.5 in 3 l of double-distilled water with 2N hydrochloric acid, sterile filtered, filled into injection glasses, lyophilized and sterile sealed under sterile conditions. Each injection jar contains 5 mg of active ingredient.
Man schmilzt ein Gemisch von 20 g Ac-RGDLdSLR-NH2 mit 100 g Sojalecithin und 1400 g Kakaobutter, gießt in Formen und läßt erkalten. Jedes Suppositorium enthält 20 mg Wirkstoff.A mixture of 20 g Ac-RGDLdSLR-NH 2 is melted with 100 g soy lecithin and 1400 g cocoa butter, poured into molds and allowed to cool. Each suppository contains 20 mg of active ingredient.
Man bereitet eine Lösung aus 1 g Ac-RGDLdSLR-NH2, 9,38 g NaH2PO4.2 H2O, 28,48 g Na2HPO4.12 H2O und 0,1 g Benzalkoniumchlorid in 940 ml zweifach destilliertem Wasser. Man stellt auf pH 6,8 ein, füllt auf 1 l auf und sterilisiert durch Bestrahlung. Diese Lösung kann in Form von Augentropfen verwendet werden.A solution is prepared from 1 g Ac-RGDLdSLR-NH 2 , 9.38 g NaH 2 PO 4 .2 H 2 O, 28.48 g Na 2 HPO 4 .12 H 2 O and 0.1 g benzalkonium chloride in 940 ml double distilled water. It is adjusted to pH 6.8, made up to 1 l and sterilized by irradiation. This solution can be used in the form of eye drops.
Man mischt 500 mg Ac-RGDLdSLR-NH2 mit 99,5 g Vaseline unter aseptischen Bedingungen.500 mg of Ac-RGDLdSLR-NH 2 are mixed with 99.5 g of petroleum jelly under aseptic conditions.
Ein Gemisch von 1 kg Ac-RGDLdSLR-NH2, 4 kg Lactose, 1,2 kg Kartoffel stärke, 0,2 kg Talk und 0,1 kg Magnesiumstearat wird in üblicher Weise zu Tabletten verpreßt, derart, daß jede Tablette 10 mg Wirkstoff enthält.A mixture of 1 kg of Ac-RGDLdSLR-NH 2 , 4 kg of lactose, 1.2 kg of potato starch, 0.2 kg of talc and 0.1 kg of magnesium stearate is compressed into tablets in a conventional manner, such that each tablet contains 10 mg of active ingredient contains.
Analog Beispiel E werden Tabletten gepreßt, die anschließend in üblicher Weise mit einem Überzug aus Saccharose, Kartoffelstärke, Talk, Tragant und Farbstoff überzogen werden.Analogously to Example E, tablets are pressed, which are then made in the usual manner Wise with a coating of sucrose, potato starch, talc, tragacanth and dye are coated.
2 kg Ac-RGDLdSLR-NH2 werden in üblicher Weise in Hartgelatinekapseln gefüllt, so daß jede Kapsel 20 mg des Wirkstoffs enthält.2 kg of Ac-RGDLdSLR-NH 2 are filled into hard gelatin capsules in a conventional manner, so that each capsule contains 20 mg of the active ingredient.
Eine Lösung von 1 kg Ac-RGDLdSLR-NH2 in 60 l zweifach destilliertem Wasser wird steril filtriert, in Ampullen abgefüllt, unter sterilen Bedingun gen lyophilisiert und steril verschlossen. Jede Ampulle enthält 10 mg Wirkstoff.A solution of 1 kg of Ac-RGDLdSLR-NH 2 in 60 l of double-distilled water is sterile filtered, filled into ampoules, lyophilized under sterile conditions and sealed sterile. Each ampoule contains 10 mg of active ingredient.
Man löst 14 g Ac-RGDLdSLR-NH2 in 10 l isotonischer NaCl-Lösung und füllt die Lösung in handelsübliche Sprühgefäße mit Pump-Mechanismus. Die Lösung kann in Mund oder Nase gesprüht werden. Ein Sprühstoß (etwa 0,1 ml) entspricht einer Dosis von etwa 0,14 mg. 14 g of Ac-RGDLdSLR-NH 2 are dissolved in 10 l of isotonic NaCl solution and the solution is filled into commercially available spray vessels with a pump mechanism. The solution can be sprayed into the mouth or nose. One spray (approximately 0.1 ml) corresponds to a dose of approximately 0.14 mg.
Claims (8)
Ac-Arg-X1-Asp-X2-X3-X4-X5-X6-NH2 I
worin
Ac Acetyl,
X1 Ser, Gly, Thr, Asp, Arg, Val, Tyr, His oder Ala,
X2 Leu, Ile, Nle, Val oder Phe,
X3 Asp, Glu, Lys, Phe, Aib, Nal, Gly, Ala, Bgl oder Phg,
X4 Gly, Ala, Ser, β-Ala oder ω-Abu,
X5 Leu, Ile, Nle, Val oder Phe,
X6 Arg, Har, Lys, Leu, Orn, Phe, Ala, Tyr, Gly, Ser oder Asp
bedeuten,
wobei die genannten Aminosäuren auch derivatisiert sein können, die Aminosäurereste über die α-Amino- und α-Carboxygruppen peptidartig miteinander verknüpft sind,
die D- als auch die L-Formen der optisch aktiven Aminosäurereste eingeschlossen sind,
sowie deren Salze,
und wobei Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2 ausgenommen ist.1. Peptide compounds of formula I.
Ac-Arg-X 1 -Asp-X 2 -X 3 -X 4 -X 5 -X 6 -NH 2 I
wherein
Ac Acetyl,
X 1 Ser, Gly, Thr, Asp, Arg, Val, Tyr, His or Ala,
X 2 Leu, Ile, Nle, Val or Phe,
X 3 Asp, Glu, Lys, Phe, Aib, Nal, Gly, Ala, Bgl or Phg,
X 4 Gly, Ala, Ser, β-Ala or ω-Abu,
X 5 Leu, Ile, Nle, Val or Phe,
X 6 Arg, Har, Lys, Leu, Orn, Phe, Ala, Tyr, Gly, Ser or Asp
mean,
wherein the amino acids mentioned can also be derivatized, the amino acid residues are linked to one another in peptide fashion via the α-amino and α-carboxy groups,
the D and L forms of the optically active amino acid residues are included,
and their salts,
and wherein Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 is excluded.
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Ser-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Asp-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Ala-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-D-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-D-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Ala-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Aib-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Nal-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Ala-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Nle-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Ile-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ala-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Gly-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Har-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Lys-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Ala-NH2,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Gly-Leu-Arg-NH2,
sowie deren physiologisch unbedenklichen Salze.2. Peptide compounds according to claim 1 selected from the group
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Gly-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Ser-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Asp-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Ala-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-D-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-D-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Ala-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Aib-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Nal-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Gly-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Ala-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Nle-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Ile-D-Asp-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ala-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Gly-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Har-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-Asp-Ser-Leu-Lys-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-D-Ser-Leu-Arg-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Ser-Leu-Ala-NH 2 ,
Ac-Arg-Thr-Asp-Leu-D-Asp-Gly-Leu-Arg-NH 2 ,
and their physiologically acceptable salts.
Priority Applications (17)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19929410A DE19929410A1 (en) | 1999-06-26 | 1999-06-26 | New octapepide compounds as alpha v beta 6 integrin inhibitors useful for treating and diagnosing heart disease, tumors, osteoporosis, fibrosis, inflammation, infection and psoriasis |
PL00352374A PL352374A1 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Inhibitors of integrine o v beta 6 |
EP00949177A EP1189930A1 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | INHIBITORS OF THE INTEGRIN AlPHA V BETA 6 |
MXPA01013247A MXPA01013247A (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | INHIBITORS OF THE INTEGRIN alphav. |
BR0011954-7A BR0011954A (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Integrin inhibitors alfavbeta6 |
CN00809493A CN1358195A (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Inhibitors of integrin alpha V beta 6 |
HU0201729A HUP0201729A3 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Inhibitors of the integrin alpha v betha 6 |
JP2001507066A JP2003503422A (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Integrin αvβ6 inhibitor |
SK1872-2001A SK18722001A3 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Inhibitors of the integrin alpha'v'beta'6' |
CZ20014484A CZ20014484A3 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Inhibitors of alpha integrin in beta 6 |
KR1020017016580A KR20020015704A (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | INHIBITORS OF THE INTEGRIN αVβ6 |
CA002377224A CA2377224A1 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Inhibitors of the integrin .alpha.v.beta.6 |
PCT/EP2000/005404 WO2001000660A1 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | INHIBITORS OF THE INTEGRIN αvβ¿6? |
AU62630/00A AU771099B2 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-13 | Inhibitors of the integrin alphavbeta6 |
ARP000103177A AR024472A1 (en) | 1999-06-26 | 2000-06-23 | INHIBITORS OF THE INTEGRIN ALFAV BETA6. |
NO20016341A NO20016341L (en) | 1999-06-26 | 2001-12-21 | Inhibitors for the integrin <alfa> v <beta> 6 |
ZA200200673A ZA200200673B (en) | 1999-06-26 | 2002-01-24 | Inhibitors of the integrin avbeta6. |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19929410A DE19929410A1 (en) | 1999-06-26 | 1999-06-26 | New octapepide compounds as alpha v beta 6 integrin inhibitors useful for treating and diagnosing heart disease, tumors, osteoporosis, fibrosis, inflammation, infection and psoriasis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE19929410A1 true DE19929410A1 (en) | 2000-12-28 |
Family
ID=7912712
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19929410A Withdrawn DE19929410A1 (en) | 1999-06-26 | 1999-06-26 | New octapepide compounds as alpha v beta 6 integrin inhibitors useful for treating and diagnosing heart disease, tumors, osteoporosis, fibrosis, inflammation, infection and psoriasis |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1189930A1 (en) |
JP (1) | JP2003503422A (en) |
KR (1) | KR20020015704A (en) |
CN (1) | CN1358195A (en) |
AR (1) | AR024472A1 (en) |
AU (1) | AU771099B2 (en) |
BR (1) | BR0011954A (en) |
CA (1) | CA2377224A1 (en) |
CZ (1) | CZ20014484A3 (en) |
DE (1) | DE19929410A1 (en) |
HU (1) | HUP0201729A3 (en) |
MX (1) | MXPA01013247A (en) |
NO (1) | NO20016341L (en) |
PL (1) | PL352374A1 (en) |
SK (1) | SK18722001A3 (en) |
WO (1) | WO2001000660A1 (en) |
ZA (1) | ZA200200673B (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004069861A1 (en) * | 2003-02-06 | 2004-08-19 | Merck Patent Gmbh | Peptidic sulfonamides |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6972296B2 (en) | 1999-05-07 | 2005-12-06 | Encysive Pharmaceuticals Inc. | Carboxylic acid derivatives that inhibit the binding of integrins to their receptors |
GB0520068D0 (en) | 2005-10-03 | 2005-11-09 | Cancer Res Technology | av peptide ligand |
AU2007348941B2 (en) | 2006-08-03 | 2011-08-04 | Medimmune Limited | Antibodies directed to alphaVbeta6 and uses thereof |
ES2906109T3 (en) * | 2016-11-01 | 2022-04-13 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | Alpha-v beta-6 integrin ligands and uses thereof |
KR20200083523A (en) | 2017-11-01 | 2020-07-08 | 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 | Integrin ligands and uses thereof |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2029392A (en) * | 1991-05-14 | 1992-12-30 | Board Of Regents Of The University Of Oklahoma, The | Peptide inhibitors of inflammation |
ATE410179T1 (en) * | 1997-08-08 | 2008-10-15 | Univ California | TREATMENT OF LIVER FIBROSIS WITH ANTI-ALPHA V BETA 6 INTEGRIN ANTIBODIES |
CN1335853A (en) * | 1998-12-19 | 2002-02-13 | 默克专利股份公司 | Alpha v beta b integrin inhibitors |
-
1999
- 1999-06-26 DE DE19929410A patent/DE19929410A1/en not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-06-13 MX MXPA01013247A patent/MXPA01013247A/en unknown
- 2000-06-13 HU HU0201729A patent/HUP0201729A3/en unknown
- 2000-06-13 CZ CZ20014484A patent/CZ20014484A3/en unknown
- 2000-06-13 SK SK1872-2001A patent/SK18722001A3/en unknown
- 2000-06-13 JP JP2001507066A patent/JP2003503422A/en active Pending
- 2000-06-13 PL PL00352374A patent/PL352374A1/en unknown
- 2000-06-13 KR KR1020017016580A patent/KR20020015704A/en not_active Application Discontinuation
- 2000-06-13 EP EP00949177A patent/EP1189930A1/en not_active Withdrawn
- 2000-06-13 CN CN00809493A patent/CN1358195A/en active Pending
- 2000-06-13 CA CA002377224A patent/CA2377224A1/en not_active Abandoned
- 2000-06-13 BR BR0011954-7A patent/BR0011954A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-06-13 WO PCT/EP2000/005404 patent/WO2001000660A1/en not_active Application Discontinuation
- 2000-06-13 AU AU62630/00A patent/AU771099B2/en not_active Ceased
- 2000-06-23 AR ARP000103177A patent/AR024472A1/en not_active Application Discontinuation
-
2001
- 2001-12-21 NO NO20016341A patent/NO20016341L/en not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-01-24 ZA ZA200200673A patent/ZA200200673B/en unknown
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004069861A1 (en) * | 2003-02-06 | 2004-08-19 | Merck Patent Gmbh | Peptidic sulfonamides |
US7759302B2 (en) | 2003-02-06 | 2010-07-20 | Merck Patent Gmbh | Peptidic sulfonamides |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ZA200200673B (en) | 2003-04-24 |
SK18722001A3 (en) | 2002-05-09 |
AR024472A1 (en) | 2002-10-02 |
KR20020015704A (en) | 2002-02-28 |
CA2377224A1 (en) | 2001-01-04 |
AU771099B2 (en) | 2004-03-11 |
JP2003503422A (en) | 2003-01-28 |
WO2001000660A1 (en) | 2001-01-04 |
MXPA01013247A (en) | 2002-07-02 |
AU6263000A (en) | 2001-01-31 |
CN1358195A (en) | 2002-07-10 |
NO20016341L (en) | 2002-02-25 |
PL352374A1 (en) | 2003-08-25 |
HUP0201729A3 (en) | 2005-01-28 |
CZ20014484A3 (en) | 2002-04-17 |
NO20016341D0 (en) | 2001-12-21 |
BR0011954A (en) | 2002-05-07 |
EP1189930A1 (en) | 2002-03-27 |
HUP0201729A2 (en) | 2002-08-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0770622B1 (en) | Cyclic adhesion inhibitors | |
EP1196433B1 (en) | CYCLIC PEPTIDE DERIVATIVES AS INHIBITORS OF INTEGRIN ALPHA v BETA 6 | |
EP0683173B1 (en) | Cyclic adhesion inhibitors | |
EP0904285B1 (en) | Cyclic adhesion inhibitors | |
WO2000037487A1 (en) | αvβ6 INTEGRIN INHIBITORS | |
DE4310632A1 (en) | Linear Adhesion Inhibitors | |
DE19929410A1 (en) | New octapepide compounds as alpha v beta 6 integrin inhibitors useful for treating and diagnosing heart disease, tumors, osteoporosis, fibrosis, inflammation, infection and psoriasis | |
DE19728524A1 (en) | Cyclic azapeptides | |
EP0655462B1 (en) | Linear adhesion inhibitors | |
EP0771818B1 (en) | Biotin derivatives | |
EP1590366B1 (en) | Peptidic sulfonamides | |
SK8052001A3 (en) | Peptide compound, the use thereof and pharmaceutical composition comprising the same | |
MXPA01006229A (en) | &agr;v |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8139 | Disposal/non-payment of the annual fee |