DE19857750A1

DE19857750A1 - Phosphatidylocholine as a drug with a protective effect on the mucous membrane

Info

Publication number: DE19857750A1
Application number: DE19857750A
Authority: DE
Inventors: Wolfgang Stremmel
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1998-08-06
Filing date: 1998-12-15
Publication date: 2000-02-24
Also published as: JP2011178786A; DE59907648D1

Abstract

The present invention relates to a medicament containing a therapeutically effective amount of phosphatidylcholine as an active ingredient in the treatment of diseases, whereby phosphatidylcholine has an advantageous, protective effect on mucosa in the the large intestine. The invention also relates to the use and application forms of phosphatidylcholine in local treatment of inflammations of the large intestine and prophylaxis against cancer of the colon. Phosphatidylcholine can administered as a rectal installation for local treatment of the inflammation (in the rectum or in a pouch) in addition to being administered orally in a delayed-release form. The orally administered delayed form of phosphatidylcholine prevents premature resorbtion and provides for targeted release in the lower sections of the small or large intestine.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Arzneimittel enthaltend als Wirkstoff Phosphatidylcholin in einer therapeutisch wirksamen Menge zur Behandlung von Erkrankungen, bei denen die schleimhautschützende Wirkung von Phophatidylcholin im Dickdarm vorteilhaft ist. Die Arz neimittel eigenen sich zur Behandlung von Colitis ulcera, Pouchitis, anderen Dickdarment zündungen sowie zur Prophylaxe des Dickdarmcarcinoms.The present invention relates to medicaments containing phosphatidylcholine as the active ingredient in a therapeutically effective amount for the treatment of diseases in which the Mucosal protective effect of phosphatidylcholine in the colon is beneficial. The Arz neimittel are suitable for the treatment of ulcerative colitis, pouchitis, other colon ignitions and for the prevention of colon cancer.

Die chronisch entzündlichen Darmerkrankungen Colitis ulcerosa und Morbus Crohn betreffen in hohem Maße Menschen im jugendlichen und mittleren Lebensalter mit steigender Frequenz (Prävalenz zusammen 1-2%). Der chronische Verlauf mit akuten entzündlichen Schüben sowie zahlreiche Komplikationen (Fistel- und Abszeßbildungen, Stenosen, akute entzündliche Schübe, Blutungen, Funktionsverlust des Dickdarmepithels, extraintestinale Manifestation) kennzeichnen den natürlichen Verlauf dieser Erkrankungen. Insbesondere bei Colitis ulcerosa ist nach langjährigem Verlauf ein erhöhtes Risiko für die Entstehung eines Dickdarmcarci noms hervorzuheben. Trotz intensiver Forschungsarbeiten ist es bisher nicht gelungen, die Ur sache dieser Erkrankungen festzustellen. Deshalb existiert auch nur eine symptomatische The rapie, die nicht ursachenspezifisch ist und häufig nicht die gewünschten Erfolge bewirkt.Chronic inflammatory bowel diseases affect ulcerative colitis and Crohn's disease to a large extent people in adolescence and middle age with increasing frequency (Prevalence together 1-2%). The chronic course with acute inflammatory flare-ups as well as numerous complications (fistula and abscess formation, stenosis, acute inflammatory Flare-ups, bleeding, loss of function of the colon epithelium, extraintestinal manifestation) characterize the natural course of these diseases. Especially in ulcerative colitis is an increased risk of developing a large intestine carci after many years to emphasize noms. Despite intensive research work, the Ur to determine the cause of these diseases. Therefore there is only a symptomatic The therapy that is not cause-specific and often does not produce the desired results.

Zwischen der Colitis ulcerosa und dem Morbus Crohn bestehen wesentliche Unterschiede, so daß von zwei verschiedenen Entstehungsmechanismen ausgegangen werden kann. Der Morbus Crohn kann prinzipiell den gesamten Gastrointestinaltrakt betreffen (häufigste Loka lisation am Ende des Dünndarmes im terminalen lleum). Die entzündlichen Veränderungen sind umschrieben, in einer sonst gesunden Schleimhaut angeordnet und können mit der Zeit wechseln. Hauptkomplikationen sind entzündliche Engstellungen von Darmabschnitten sowie Fistel- und Abszeßbildungen. Manifestationen außerhalb des Gastrointestinaltraktes sind möglich. Die Colitis ulcerosa zeigt dagegen eine kontinuierliche Entzündung mit oberflächli chen Ulcerationen ausgehend vom Ende des Dickdarmes (Proktum, Rektum). Je nach Schwe regrad kann sich die Colitis nach oben ausdehnen und schließlich den gesamten Dickdarm betreffen. In einem hohen Prozentsatz ist auch das Ende des Dünndarmes entzündet ("Back wash-lleitis"). Hauptkomplikationen sind Funktionseinschränkungen des Dickdarmes mit zahlreichen Durchfällen, Blutungen aus Schleimhautgeschwüren und selten eine dramatische Entzündung der gesamten Darmwand (toxisches Megacolon). Gefürchtet ist die häufige Ent stehung eines Dickdarmcarcinoms nach langjährigem Krankheitsverlauf. Zwischen beiden chronisch entzündlichen Darmerkrankungen gibt es allerdings fließende Übergänge in der Symptomatik, so daß die Unterscheidung oft sehr schwierig ist. There are significant differences between ulcerative colitis and Crohn's disease that two different mechanisms of origin can be assumed. The In principle, Crohn's disease can affect the entire gastrointestinal tract (most common loca lization at the end of the small intestine in the terminal lleum). The inflammatory changes are circumscribed, arranged in an otherwise healthy mucous membrane and can change over time switch. The main complications are inflammatory narrowing of intestinal sections as well Fistula and abscess formation. Manifestations outside the gastrointestinal tract are possible. In contrast, ulcerative colitis shows a continuous inflammation with superficial Chen ulcerations from the end of the large intestine (proctum, rectum). Depending on the The colitis can regress and eventually the entire colon affect. The end of the small intestine is also inflamed to a high percentage ("Back wash-lleitis "). The main complications are functional restrictions of the large intestine numerous diarrhea, bleeding from mucosal ulcers and rarely a dramatic one Inflammation of the entire intestinal wall (toxic megacolon). The frequent Ent is feared Colon cancer after a long history of the disease. Between the two inflammatory bowel diseases, however, there are smooth transitions in the Symptoms, so that the distinction is often very difficult.

Neben der oft unzureichenden symptomatischen Therapie muß bei der Colitis ulcerosa auf grund des komplizierten, schweren Krankheitsbildes und der drohenden Gefahr eines Carcinoms häufig der gesamte Dickdarm entfernt werden. Dabei wird aus der letzten Dünn darmschlinge ein Reservoir (Pouch) gebildet, in den Analkanal gelegt, dort fixiert und mit dem innen ausgeschälten, natürlichen Anus verbunden. Damit ist ein neues Auffangorgan für den Darminhalt geschaffen mit Erhalt des natürlichen Ausganges (kontinenzerhaltende ileoanale Pouchanlage). Bei ca. 30% der Patienten mit Colitis ulcerosa kann sich der Pouch entzünden (Pouchitis) und zu erheblichen Beschwerden führen. Wenn eine solche Pouchan lage bei anderen Grunderkrankungen (z. B. familiärer adenomatöser Polyposis) vorgenommen wird, kommt es dagegen nur in Ausnahmefällen zu einer Entzündung.In addition to the often inadequate symptomatic therapy, ulcerative colitis must be considered due to the complicated, severe clinical picture and the impending danger of Carcinomas frequently remove the entire colon. The last thin becomes intestinal loop, a reservoir (pouch) is formed, placed in the anal canal, fixed there and with connected to the natural anus peeled off inside. This is a new organ for the intestinal contents are created with preservation of the natural outcome (continence-preserving ileoanal pouch system). In about 30% of patients with ulcerative colitis, the pouch ignite (pouchitis) and cause considerable discomfort. If such a pouchan with other underlying diseases (e.g. familial adenomatous polyposis) on the other hand, inflammation only occurs in exceptional cases.

WO 95/18622 beschreibt die Verwendung von Derivaten der 2-Hydroxy-5-phenylazobenzoe säure als chemoprotektive Substanz zur Behandlung von Krebserkrankungen des Colons.WO 95/18622 describes the use of derivatives of 2-hydroxy-5-phenylazobenzoe Acid as a chemoprotective substance for the treatment of cancer of the colon.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, weitere Arzneimittel zur Behandlung von Dick darmerkrankungen zur Verfügung zu stellen.The object of the present invention was to provide further drugs for the treatment of dick to provide bowel diseases.

Überraschenderweise wurde gefunden, daß Phophatidylcholin als schleimhautschützende Substanz des Dickdarms fungiert. Aufgrund dieser schleimhautschützenden Wirkung eignet sich Phosphatidylcholin daher als therapeutischer Wirkstoff zur Behandlung von Colitis ulcerosa, Pouchitis, anderen Dickdarmentzündungen, sowie zur Prophylaxe des Dickdarm carcinoms.Surprisingly, it was found that phosphatidylcholine as a protective mucous membrane Large intestine substance acts. Because of this mucous membrane protective effect therefore phosphatidylcholine as a therapeutic agent for the treatment of colitis ulcerosa, pouchitis, other colon inflammation, and for the prevention of the large intestine carcinoma.

Phosphatidylcholin (PC) (synonym ist auch der Begriff Lecithin gebräuchlich), ist ein zu sammengesetztes phosphorhaltiges Lipid (Phospholipid) mit folgender schematischer Struk turformel:
Phosphatidylcholine (PC) (synonymous with the term lecithin), is a compound phosphorus-containing lipid (phospholipid) with the following schematic structural formula:

R₁ = (CH₂)_n-CH₃
R₂ = (CH₂)_n-CH₃ R ₁ = (CH ₂ ) _n -CH ₃
R ₂ = (CH ₂ ) _n -CH ₃

Zur Behandlung der Colitis ulcerosa eignen sich orale und/oder rektale Applikationsformen, z. B. als Klysma: Zur Behandlung der Pouchitis bei Colitis ulcerosa ist die rektale Applikation, z. B. als Klysma, bevorzugt. Sie kann unterstützt werden durch eine orale Gabe des Präparates. Für die symptomatische Therapie durch jegliche andere Formen der Colitis kann zum Schleimhautschutz sowohl die orale als auch rektale Applikation gewählt werden. Für die Prophylaxe des Coloncarcinoms, insbesondere bei Colitis ulcerosa, ist die orale Applikation bevorzugt. Die orale Gabe kann in Form von geeigneten Darreichungsformen, beispielsweise als Tabletten oder Kapseln, erfolgen, die die Resorption aus den ersten zwei Dritteln des Dünndarms verhindern und zur gezielten Freisetzung im unteren Abschnitt des Dünndarms führen.Oral and / or rectal administration forms are suitable for the treatment of ulcerative colitis, e.g. B. as a klysma: rectal application for the treatment of pouchitis in ulcerative colitis is e.g. B. as Klysma, preferred. It can be supported by oral administration of the preparation. For symptomatic therapy by any other form of colitis, Mucosal protection both oral and rectal application can be selected. For the Prevention of colon carcinoma, especially in ulcerative colitis, is oral administration prefers. Oral administration can take the form of suitable dosage forms, for example as tablets or capsules, the absorption from the first two thirds of the Prevent small intestine and for targeted release in the lower section of the small intestine to lead.

Arzneimittel, die Phosphatidylcholin enthalten, können lokal als rektale Applikationsform (z. B. Suppositorien oder Klysmen) oder auch oral verabreicht werden. Die Applikation von Phosphatidylcholin erfolgt in die unteren Dünndarmabschnitte und das Colon, vor allem zum Schutz der Dickdarmschleimhaut vor bakterieller Infektion. Für die orale Gabe eignen sich insbesondere solche Arzneiformen, die den Wirkstoff verzögert freisetzen (sog. Retardfor men). Die Retardierung wird zweckmäßigerweise erreicht durch magensaftresistente Über züge und durch Trägermatrices, die den Wirkstoff in Abhängigkeit des pH-Wertes freisetzen. Als Technismen sind Filmüberzüge geeignet, die beispielsweise Eudragit®-Acrylpolymere zur gesteuerten Wirkstoffabgabe (beispielsweise die Produkte mit der Markenbezeichnung Eudragit® L und Eudragit® S der Fa. Röhm, Darmstadt) enthalten.Drugs containing phosphatidylcholine can be taken locally as a rectal administration form (e.g. suppositories or clysms) or orally. The application of Phosphatidylcholine occurs in the lower sections of the small intestine and in the colon, especially the Protection of the colon mucosa from bacterial infection. Are suitable for oral administration in particular those dosage forms that release the active substance with a delay (so-called retardfor men). The retardation is expediently achieved by gastro-resistant over trains and through carrier matrices that release the active ingredient depending on the pH value. Film coverings, such as Eudragit® acrylic polymers, are suitable as technologies for controlled drug delivery (for example, the products with the brand name Eudragit® L and Eudragit® S from Röhm, Darmstadt).

Zur Herstellung von oral verabreichbarem Phosphatidylcholin wird vorteilhaft eine. verzögerte Freisetzungsform verwendet, um die Resorption in den proximalen lleumabschnitten zu ver meiden. Phosphatidylcholin kann dabei in großvolumige (z. B. 0,68 ml Inhalt) Kapseln (z. B. Gelatine) eingebracht werden. Diese sind beispielsweise mit Acrylpolymeren überzogen, z. B. Verwendung der o. g. Eugradit® -Präparaten). Eine Kombination aus Eugradit® S- und L-Ver bindungen (z. B. Eugradit® L/S 100) gewährt eine verzögerte Freisetzung bei pH < 6,4, wie er im terminalen lleum vorkommt. Die Verwendung von Eugradit® Präparaten und deren Mi schung (L-, S- und R-Verbindungen) ist seit langem etabliert.For the production of orally administrable phosphatidylcholine, a. delayed Release form used to verify absorption in the proximal ileum sections avoid. Phosphatidylcholine can be packed in large-volume (e.g. 0.68 ml content) capsules (e.g. Gelatin). These are covered, for example, with acrylic polymers, e.g. B. Use of the above Eugradit® preparations). A combination of Eugradit® S- and L-Ver bindings (e.g. Eugradit® L / S 100) allows a delayed release at pH <6.4, as he occurs in the terminal ileum. The use of Eugradit® preparations and their Mi Schung (L, S and R connections) has been established for a long time.

Zur Herstellung der Klysmen können Phosphatidylcholin-Präparationen (Lecithin) in einem lipophilen Lösungsmittel aufgelöst werden (z. B. Sojaöl). Die zu verabreichende Dosis beträgt beispielsweise 20 g in 100 ml Sojaöl. 100 ml der Lösung können als Klysma rektal appliziert werden.To prepare the clysms, phosphatidylcholine preparations (lecithin) can be combined in one lipophilic solvents (e.g. soybean oil). The dose to be administered is for example 20 g in 100 ml soybean oil. 100 ml of the solution can be applied rectally as a klysma become.

Erfindungsgemäße Arzneimittel enthalten Phosphatidylcholin in einer therapeutisch wirksa men Menge, die ausreicht, um die schleimhautschützende Wirkung im Dickdarm zu bewir ken. Der Wirkstoffgehalt in der Fertigarzneiform beträgt 1-500 mg, bevorzugt 100-300 mg. Für die orale Gabe kommen als geeignete Arzneiformen Tabletten, Granulate, Kapseln, Pellets oder Pellettabletten in Frage. Die Arzneiformen können ferner übliche pharmazeuti sche Zusatzstoffe, wie Hilfs- oder Trägerstoffe enthalten. Für die rektale Anwendung kommen primär Klysmen und Suppositorien in Frage. Diese enthalten den Wirkstoff in einer Menge von 10-5000 mg. Je nach Schwere der Erkrankung werden die Arzneiformen ein- oder mehr fach täglich verabreicht.Medicaments according to the invention contain phosphatidylcholine in a therapeutically effective Amount that is sufficient to have a protective effect on the colon in the large intestine ken. The active substance content in the finished pharmaceutical form is 1-500 mg, preferably 100-300 mg. Suitable oral dosage forms include tablets, granules, capsules, Pellets or pellet tablets in question. The dosage forms can also customary pharmaceutical contain additives such as auxiliaries or carriers. Come for rectal use primarily clysms and suppositories in question. These contain the active ingredient in an amount from 10-5000 mg. Depending on the severity of the disease, the dosage forms become one or more administered daily.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ferner ein diagnostisches Verfahren zur Kontrolle des Behandlungserfolges der Patienten, die erfindungsgemäß mit Phosphatidylcholin behan delt wurden. Überraschenderweise wurde gefunden, daß als Indikator für die schleimhaut schützende Wirkung des sich an der Darmwand befindlichen Phosphatidylcholins die Be stimmung von MDR3 Proteinen von diagnostischer Bedeutung ist. Das Fehlen von MDR3 Proteinen im terminalen lleum könnte ein Indikator für eine unzureichende Phosphatidylcho linsekretion ins Darmlumen mit nachfolgender Veränderung der Schleimzusammensetzung im Dickdarm und gesteigerter Anfälligkeit gegenüber dort ansässigen Bakterien sein. Die un zureichende Produktion von MDR3 Proteinen könnte inm Zusammenhang mit der reduzierten Menge an Phophatidylcholin im Darmlumen stehen. Aus der Korrelation zwischen der Kon zentration oder Menge an MDR3 Proteinen können eventuell Rückschlüsse auf die erforderli che optimale Menge an Phosphatidylcholin im Laufe der Therapie mit den erfindungsgemä ßen Arzneimitteln geschlossen werden. Die Diagnose ermöglicht so eine individuelle Anpas sung der erforderlichen Dosis an Phosphatidylcholin der zu behandelnden Patienten. Außer dem ermöglicht die Bestimmung des Phosphatidylcholins im Darmlumen eine unter dem Aspekt der Patientencompliance wichtige Verlaufskontrolle in der Therapie. The present invention also relates to a diagnostic method for checking the success of the treatment of the patients who treated phosphatidylcholine according to the invention delt were. Surprisingly, it was found as an indicator of the mucous membrane protective effect of the phosphatidylcholine located on the intestinal wall mood of MDR3 proteins is of diagnostic importance. The absence of MDR3 Proteins in the terminal lleum could be an indicator of insufficient phosphatidylcho Lens secretion into the intestinal lumen with subsequent change in the composition of the mucus in the colon and increased susceptibility to bacteria residing there. The un Adequate production of MDR3 proteins could be associated with the reduced Amount of phosphatidylcholine in the intestinal lumen. From the correlation between the Kon The concentration or amount of MDR3 proteins may allow conclusions to be drawn about the required che optimal amount of phosphatidylcholine in the course of therapy with the invention medicines are closed. The diagnosis thus enables individual adjustment solution of the required dose of phosphatidylcholine of the patients to be treated. Except This enables the determination of the phosphatidylcholine in the intestinal lumen one below the Aspect of patient compliance important follow-up in therapy.

Die Bestimmung der MDR3 Proteine erfolgt indirekt über die PCR-Vermehrung der für diese Proteine codierenden RNA (genetische Information).The MDR3 proteins are determined indirectly by means of the PCR multiplication of the proteins for them Protein coding RNA (genetic information).

Das MDR3 Protein bzw. die MDR3 Proteine sind Phospholipidtransporter in Plasmamembra nen. Die menschliche MDR (P-Glykoprotein) Genfamilie besteht aus zwei Mitgliedern (MDR1 und MDR3). Sie gehören entwicklungsgeschichtlich zur sehr alten Superfamilie der ABC-Transporter ATP-Binding-Cassette). Diese Proteine transportieren unterschiedlichste Substrate (hydrophobe Moleküle, Oxyanionen, Cl^- u. a.) von der Innenseite der Zelle über die Plasmamembran nach außen unter Aufwendung von Energie (ATP). Die beiden homologen MDR Gene liegen im Genom hintereinander (MDR3 ca. 30 kb downstream von MDR1) und umfassen zusammen etwa 230 kb. Beide Gene bestehen aus jeweils 28 Exons, von denen 27 beim MDR3 die Kodierregion enthalten. Vom MDR3 Gen sind vier Splicevarianten bekannt, von denen jede das Leseraster intakt läßt. In Variante C '4' fehlt das gesamte Exon 23 und führt so zu einem um 141 Nukleotide verkürzten Kodierregion. Exon 23 enthält die Trans membrandomäne 11. Ein Fehlen könnte zu einem Protein mit völlig unterschiedlicher Mem brantopologie fuhren. In MDR3 exprimierenden Geweben sind das nominale Transkript und dessen Varianten meist gleich abundant vertreten.The MDR3 protein or the MDR3 proteins are phospholipid transporters in plasma membranes. The human MDR (P-glycoprotein) gene family consists of two members (MDR1 and MDR3). In terms of development, they belong to the very old superfamily of the ABC transporter ATP binding cassette). These proteins transport a wide variety of substrates (hydrophobic molecules, oxyanions, Cl ^- etc.) from the inside of the cell via the plasma membrane to the outside using energy (ATP). The two homologous MDR genes lie one behind the other in the genome (MDR3 approx. 30 kb downstream from MDR1) and together comprise approximately 230 kb. Both genes consist of 28 exons, 27 of which contain the coding region in the MDR3. Four splicing variants of the MDR3 gene are known, each of which leaves the reading frame intact. In variant C '4' the entire exon 23 is missing and thus leads to a coding region shortened by 141 nucleotides. Exon 23 contains the trans membrane domain 11. A lack could lead to a protein with a completely different membrane topology. In tissues expressing MDR3, the nominal transcript and its variants are usually represented equally abundantly.

Das Produkt des MDR1-Gens ist verantwortlich für die Resistenz gegen verschiedene Cytostatika und gab der Familie ihren Namen: multidrug resistance (MDR) MDR3 ist eine membranständige, 170 kD große, energieabhängige Effluxpumpe für verschiedenste liphopile Substanzen. Wie bei anderen Mitgliedern der ABC-Transporter besteht MDRl aus zwei ho mologen Hälften, jede mit sechs transmembranen Domänen und einer Nukleotid-Bindungs stelle. MDR3 ist strukturell genauso aufgebaut, hat aber sowohl ein anderes gewebespezifi sches Verteilungsmuster als auch eine andere Funktion, da es nicht zur "multidrug resistance" führt. Die physiologische Funktion von MDR3 war lange Zeit ungeklärt.The product of the MDR1 gene is responsible for resistance to various Cytostatics and gave the family its name: multidrug resistance (MDR) MDR3 is one Membrane-based, 170 kD, energy-dependent efflux pump for a wide variety of liphopiles Substances. As with other members of the ABC transporter, MDRI consists of two ho mologous halves, each with six transmembrane domains and a nucleotide binding Job. MDR3 is structurally the same, but has a different tissue specification distribution pattern as well as another function since it does not result in "multidrug resistance" leads. The physiological function of MDR3 was unknown for a long time.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung in repräsentativer Weise.The following examples illustrate the invention in a representative manner.

example 1 Determination of MDR3 in the gastrointestinal tract using PCR

Zur Untersuchung einer möglichen Expression wurden Primer zur Amplifikation von MDR3spezifschen Transkripten synthetisiert. Dazu wurden Sequenzen, die nur spezifisch für MDR 3 und nicht für MDR1 sind, ausgewählt. Die 5'/3'-Primer sollten idealerweise in ver schiedenen Exons liegen, damit eine Amplifizierung von genetischer DNA bei der PCR aus geschlossen bzw. erkannt werden kann.To investigate a possible expression, primers for the amplification of Synthesized MDR3-specific transcripts. To this end, sequences were only specific for MDR 3 and not for MDR1 are selected. The 5 '/ 3' primers should ideally be used in ver different exons are thus an amplification of genetic DNA from the PCR can be closed or recognized.

Der 5-Primer ist ein 25 bp großes Oligonukleotid von bp 2411-2435 der cDNA und liegt in Exon 20. Der 3-Primer ist ein 33 bp großes Oligonukleotid von bp 3180-3148 und liegt im Exon 25. Das entstehende PCR-Produkt ist damit 769 bp groß. Mit diesem Primerpaar kann auch die Splicevariante C^-141 in der RNA nachgewiesen werden, da hier das Exon 23 fehlt und so das entstehende PCR-Produkt um 141 Basenpaare verkürzt ist. Als Ausgangsmaterial für die RNA-Isolierung werden Biopsien verwendet, die bei Gastroskopien bzw. Koloskopien an fielen. Dabei werden jeweils 2 Biopsien eines Patienten zur Isolierung von RNA mit' dem Fast-RNA Kit der Firma Dianova verwendet. Die Mengen an Gesamt RNA, die damit isoliert werden kann, beträgt bis zu 70 µg. Auf eine Isolierung von Poly(A⁺)RNA kann verzichtet werden, da die Menge an Transkript in der Gesamt-RNA bereits für einen PCR-Nachweis aus reichend ist. 5, ug Gesamt-RNA wird für eine Erststrang cDNA-Synthese eingesetzt und 1/16 Volumen dieses Ansatzes (2 µl) zur Amplifikation der MDR 3-Transknpte. Die Bedingungen für einen erfolgreichen Nachweis von MDR3 werden mit Leber RNA ausgetestet, da hier eine besonders hohe Abundanz an Transkripten vorliegt Als interner Standard wird GAPDH am plifziert, um die Menge an cDNA in den unterschiedlichen Ansätzen vergleichen zu können.The 5 primer is a 25 bp oligonucleotide from bp 2411-2435 of the cDNA and is located in exon 20. The 3 primer is a 33 bp oligonucleotide from bp 3180-3148 and is located in exon 25. The resulting PCR product is thus 769 bp in size. With this primer pair, the splice variant C- ¹⁴¹ in the RNA can also be detected, since exon 23 is missing here and the resulting PCR product is thus shortened by 141 base pairs. Biopsies are used as the starting material for RNA isolation, which were obtained during gastroscopy or colonoscopy. Two biopsies of a patient are used to isolate RNA using the Dianova Fast RNA Kit. The amount of total RNA that can be isolated is up to 70 µg. There is no need to isolate poly (A ⁺ ) RNA, since the amount of transcript in the total RNA is already sufficient for PCR detection. 5, ug total RNA is used for a first strand cDNA synthesis and 1/16 volume of this approach (2 ul) for the amplification of the MDR 3 transcripts. The conditions for a successful detection of MDR3 are tested with liver RNA, since there is a particularly high abundance of transcripts. As an internal standard, GAPDH is used to compare the amount of cDNA in the different approaches.

Es wurden Biopsien aus Ösophagus, Magen, Duodenum, terminalem lleum, Colon transver sum und Rektum untersucht. Bei gesunden Patienten konnten MDR3-Transkripte in Magen, Duodenum und terminalem lleum nachgewiesen werden, während sie im Ösophagus, Colon transversum und Rektum fehlten.Biopsies from esophagus, stomach, duodenum, terminal lleum, colon transver were performed sum and rectum examined. In healthy patients, MDR3 transcripts in the stomach, Duodenum and terminal lleum can be detected while in the esophagus, colon transversum and rectum were missing.

Dabei wurde auch immer und in gleicher Menge die Splicevariante C^-141 mitamplifziert. Die beiden PCR-Produkte wurden dann im puc18 kloniert und ansequenziert. Dadurch konnte do kumentiert werden, daß es sich bei den amplifizierten Sequenzen wirklich um MDR3 handelt. The ^splicing variant C ^-141 was also always ^amplified in the same quantity. The two PCR products were then cloned in puc18 and sequenced. As a result, it could be documented that the amplified sequences are really MDR3.

Example 2 MDR3 expression in the ileoanal pouch epithelium

Untersucht wurden Patienten, die aufgrund einer fortgeschrittenen Colitis ulcerosa colekto miert werden mußten und einen Pouch erhielten. Bei keinem dieser Colitis ulcerosa Patienten konnten in der Pouchschleimhaut MDR3-Transkripte nachgewiesen werden. Es stellte sich deshalb die Frage, ob das Fehlen der Transkripte auf die Tatsache zurückzuführen war, daß es sich um Colitis ulcerosa Patienten handelte. Oder war mit Anlegen eines Pouches per se und des damit einhergehenden veränderten bakteriellen Milieus für das terminale lleum ein verän dertes Expressionsmuster aufgetreten? Deshalb wurden im Vergleich Patienten untersucht, die einen Pouch nach Colektomie bei familiärer adenomatöse Polyposis (FAP) erhielten. Diese Patienten wiesen jedoch alle MDR3-Transkripte im Pouch auf. Dies wies daraufhin, daß das Fehlen von MDR3 im Pouch spezifisch für die Colitis ulcerosa ist. Die dadurch möglicher weise bedingte verminderte Phosphatidylcholinsekretion in den Schleim könnte somit die beobachtete Pouchitis bahnen. Da die Pouchschleimhaut der des terminalen lleums entspricht, müßte folgerichtig bei Colitis ulcerosa auch in diesem Dünndarmabschnitt MDR3 fehlen.Patients with advanced ulcerative colitis colitis were examined had to be lubricated and received a pouch. None of these ulcerative colitis patients MDR3 transcripts could be detected in the pouch mucosa. It turned out hence the question of whether the lack of transcripts was due to the fact that it were ulcerative colitis patients. Or was with a pouch per se and of the associated changed bacterial milieu for the terminal ileum changed expression pattern? Therefore, patients who were compared were examined received a pouch after colectomy in familial adenomatous polyposis (FAP). This However, patients had all MDR3 transcripts in the pouch. This indicated that the Absence of MDR3 in the pouch is specific for ulcerative colitis. The more possible wise conditional decreased phosphatidylcholine secretion in the mucus could observed pouchitis. Since the pouch mucosa corresponds to that of the terminal ileum, consequently, ulcerative colitis should also be missing in this section of the small intestine, MDR3.

Example 3 MDR3 expression in the terminal ileum in healthy subjects, patients with disease Crohn's and ulcerative colitis

Es wurde untersucht, ob Colitis ulcerosa Patienten im terminalen lleum eine MDR3 Expres sion zeigen. Analysiert wurden 31 Patienten mit Colitis ulcerosa und verglichen mit 14 Ge sunden und 6 Morbus Crohn Patienten.It was examined whether ulcerative colitis patients in the terminal lleum had an MDR3 express sion show. 31 patients with ulcerative colitis were analyzed and compared with 14 Ge and 6 Crohn's disease patients.

Bei keinem der Colitis ulcerosa Patienten konnte mit der verwendeten, hoch sensitiven Tech nik MDR3 im terminalen Ileum nachgewiesen werden, während es bei allen gesunden Kon trollpersonen und bei den Morbus Crohn Patienten nachweisbar war. Dieses eindeutige Er gebnis weist darauf hin, daß ausschließlich bei Colitis ulcerosa ein Defekt in der MDR3 Ex pression vorliegt. Daraus kann geschlossen werden, daß bei diesen Patienten eine gestörte Phospholipidsekretion in den Darm vorliegt, welches die Schleimzusammensetzung so stört, daß Bakterien das Epithel eher angreifen können.None of the ulcerative colitis patients could use the highly sensitive tech nik MDR3 can be detected in the terminal ileum, while it is found in all healthy con trolls and was detectable in Crohn's disease patients. This unique he result indicates that only in ulcerative colitis is a defect in the MDR3 Ex pression is present. From this it can be concluded that these patients have a disturbed There is phospholipid secretion in the intestine, which disrupts the mucus composition, that bacteria are more likely to attack the epithelium.

Claims

1. Medicament containing as active ingredient phosphatidylcholine in a therapeutic effect seed amount for the treatment of diseases in which the mucosal protective Effect of phosphatidylcholine in the colon is beneficial.

2. Medicament according to claim 1 for the treatment of ulcerative colitis.

3. Medicament according to claim 1 for the treatment of pouchitis.

4. Medicament according to claim 1 for the treatment of colon diseases or Inflammation in the colon.

5. Medicament according to claim 1 for the treatment or prophylaxis of the large intestine carcinoma.

6. Medicament according to one of claims 1-5 as a rectally administered pharmaceutical form for local treatment of inflammation in rectum or pouch.

7. Medicament according to one of claims 1- S as an oral dosage form delayed drug release.

8. Use of phosphatidylcholine for the treatment of diseases in which the Mucosal protective effect of phosphatidylcholine in the colon is beneficial.

9. Procedure for determining the presence or absence of MDR3 transcripts in one Sample from patients with suspected colon disease in whom treatment with phosphatidylcholine is indicated.

10. The method according to claim 9, wherein the sample is obtainable from biopsies from esophagus, Stomach, duodenum, terminal ileum, transverse colon or rectum.