DE19850149C2

DE19850149C2 - Process for the topographical representation of fluorescent inner surfaces

Info

Publication number: DE19850149C2
Application number: DE19850149A
Authority: DE
Inventors: Reginald Birngruber; Joachim Noack; Ursula Schmidt-Erfurth
Original assignee: MED LASERZENTRUM LUEBECK GmbH; Medizinisches Laserzentrum Luebeck GmbH
Current assignee: UNIVERSITAET ZU LUEBECK, 23562 LUEBECK, DE
Priority date: 1998-10-30
Filing date: 1998-10-30
Publication date: 2002-10-10
Anticipated expiration: 2018-10-31
Also published as: DE19850149A1; US6234633B1

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur topographischen Darstellung von inneren Oberflächen eines Objektes, bei dem das Objekt mit einem Laserstrahl lateral abgetastet und da bei induzierte Fluoreszenz als Funktion des Ortes detektiert wird.The invention relates to a method for topographic Representation of inner surfaces of an object in which the object is laterally scanned with a laser beam and there detected with fluorescence as a function of the location becomes.

State of the art

Aus der DE 44 27 101 A1 ist ein Verfahren zur optischen Cha rakterisierung von innerer Struktur und Zusammensetzung ei ner ausgedehnten streuenden Probe bekannt. Hierzu werden ei ne oder mehrere Lichtquellen zum Bestrahlen der Probe und Lichtdetektoren zum Empfangen des von der Probe zurückkom menden Lichtes verwendet. Damit das eingekoppelte Licht ohne direktes Übersprechen der Lichtquelle durch die Probe zum Detektor gelangen kann, muss die Probe das eingedrungene Licht streuen.DE 44 27 101 A1 describes a method for optical cha characterization of internal structure and composition an extensive scattering sample. For this, egg ne or more light sources for irradiating the sample and Light detectors for receiving the coming back from the sample used light. So that the coupled light without direct crosstalk of the light source through the sample to Detector, the sample must be the penetrated Scatter light.

Ferner ist in der Medizin mittels Fluoreszenzangiographie eine topographische Gefäßdarstellung an einem Körperorgan möglich. Hierzu wird dem Patienten ein exogener Fluoreszenz farbstoff, z. B. Fluorescein oder Indiocyanin Grün in die Blutbahn injiziert und anschließend wird die Fluoreszenz des Farbstoffes durch punktförmige Abtastung des Organs, z. B. des Auges mit einem Laserstrahl geeigneter Wellenlänge ange regt und lateral ortsaufgelöst mit einem Detektor erfaßt. Bei dem so gewonnenen Fluoreszenzbild erscheinen die Gefäß strukturen hell vor dem dunkleren Hintergrund. Gefäßleckagen erscheinen als Regionen vermehrter Fluoreszenz. Eine herkömmliche Fluoreszenzdarstellung ermöglicht es, den Ort der Fluoreszenz in lateraler Richtung sehr genau zu bestimmen.It is also used in medicine using fluorescence angiography a topographical vascular representation on a body organ possible. For this, the patient is exogenous fluorescence dye, e.g. B. fluorescein or indiocyanine green in the Bloodstream is injected and then the fluorescence of the Dye by scanning the organ, e.g. B. of the eye with a laser beam of a suitable wavelength excited and laterally resolved with a detector. The vessels appear in the fluorescence image obtained in this way structures bright against the darker background. vascular leakage appear as regions of increased fluorescence. A conventional one Fluorescence display enables the location of the To determine fluorescence very precisely in the lateral direction.

Man gewinnt jedoch keine Aussage über die Tiefe der Fluores zenz.However, no information about the depth of the fluores is obtained zenz.

Object of the invention

Aufgabe der Erfindung ist es daher, ein Verfahren der ein gangs genannten Art zu schaffen, mit dem eine dreidimensio nale Fluoreszenzdarstellung ermöglicht wird.The object of the invention is therefore a method of to create the kind mentioned above, with which a three-dimensional nale fluorescence display is made possible.

Diese Aufgabe wird beim Verfahren der eingangs genannten Art erfindungsgemäß durch die kennzeichnenden Merkmale des Pa tentanspruches 1 gelöst. Hierbei werden nicht nur lateral, sondern auch in unterschiedlicher Tiefe (z-Richtung) konfo kal Fluoreszenzbilder erzeugt. Für jeweilige lateral abge tastete Positionen wird ein Fluoreszenztiefenprofil F_r (z), welches die Fluoreszenzintensität als Funktion der Tiefe (z) angibt, ermittelt und für die Bestimmung der Tiefe des Fluo reszenzortes wird ein bestimmtes Charakteristikum des Fluo reszenztiefenprofils ausgewertet.This object is achieved in the method of the type mentioned in the invention by the characterizing features of Pa tent Claims 1. Here, fluorescent images are generated not only laterally, but also at different depths (z-direction). A fluorescence depth profile F _r (z), which specifies the fluorescence intensity as a function of the depth (z), is determined for respective laterally scanned positions, and a specific characteristic of the fluorescence depth profile is evaluated for determining the depth of the fluorescence location.

Zur Vorbereitung des Verfahrens wird in dem zu untersuchen den Objekt ein Fluoreszenzfarbstoff appliziert. Neben der systematischen Applikation von exogenen Fluoreszenzfarbstof fen können diese auch lokal durch Injektion oder im Kontakt verfahren appliziert und somit im zu untersuchenden Objekt, z. B. im biologischen Gewebe räumlich verteilt werden. Insbe sondere kann Fluoreszenzfarbstoff in der Gefäßstruktur von biologischen Gewebe appliziert werden. Weiterhin können im Objekt natürlich verhandene, sogenannte endogene Fluorophore durch insbesondere punktförmige Abtastung ortsaufgelöst an geregt werden. To prepare for the procedure will be examined in the applied a fluorescent dye to the object. In addition to the systematic application of exogenous fluorescent dye These can also be obtained locally by injection or in contact method applied and thus in the object to be examined, z. B. spatially distributed in biological tissue. in particular special can fluorescent dye in the vascular structure of biological tissue can be applied. Furthermore, in Object naturally known, so-called endogenous fluorophores spatially resolved by in particular punctiform scanning be excited.

Die Fluoreszenz wird mittels einer konfokalen Laserabtastung tiefen- und ortsaufgelöst detektiert. Hierbei wird das zu untersuchende Material, welches ein Körperorgan, z. B. die Netzhaut des Auges sein kann, mit einem Laserstrahl geeigne ter Wellenlänge abgetastet und die induzierte Fluoreszenz als Funktion des Ortes mit einem Fotodetektor registriert. Durch die Verwendung eines konfokalen Aufbaus bei der Detek tion wird das erzeugte Fluoreszenzlicht umso effizienter de tektiert je mehr es aus der abgetasteten Tiefe des Laserfo kus kommt. Durch die konfokale Abtastung vieler Orte im Raum läßt sich ein dreidimensionales Bild der Fluoreszenzintensi tät im Objekt, z. B. am Augenhintergrund oder der Haut ge winnen. The fluorescence is measured using a confocal laser scan detected in depth and location. This becomes investigative material, which is a body organ, e.g. B. the Retina of the eye can be suitable with a laser beam ter wavelength and the induced fluorescence registered as a function of the location with a photo detector. By using a confocal structure at Detek tion, the fluorescent light generated is all the more efficient the more it detects from the scanned depth of the laser fo kus is coming. By confocal scanning of many places in the room can get a three-dimensional image of the fluorescence intensity act in the object, e.g. B. ge fundus or skin winnen.

Es können beispielsweise 32 Fluoreszenzbilder in Ebenen unterschiedlicher Tiefe erzeugt werden. Man erhält dadurch eine dreidimensionale Datenmatrix von Fluoreszenzintensitä ten vorliegen. Die Anzahl der Matrixelemente in lateraler Richtung (x bzw. y) kann beispielsweise bei jeweils 256 und in axialer Richtung (z) 32, entsprechend den verschiedenen Schnittebenen, betragen. Aus diesem Gesamtdatensatz der Fluoreszenzintensitäten läßt sich für jede laterale Position das Fluoreszenztiefenprofil F_r (z) der Fluoreszenzintensität als Funktion der Tiefe (z) extrahieren.For example, 32 fluorescence images can be generated in planes of different depths. This gives a three-dimensional data matrix of fluorescence intensities. The number of matrix elements in the lateral direction (x or y) can be, for example, in each case 256 and in the axial direction (z) 32 , corresponding to the different sectional planes. The fluorescence depth profile F _r (z) of the fluorescence intensity as a function of the depth (z) can be extracted from this total dataset of the fluorescence intensities for each lateral position.

Die Bestimmung der Tiefe des Ortes, an dem die Fluoreszenz auftritt, wird unabhängig von der absoluten Größe der Fluo reszenzintensität durchgeführt. Hierzu wird der Verlauf des Fluoreszenztiefenprofils im Hinblick auf Charakteristika der Kurve des Fluoreszenztiefenprofils ausgewertet. Derartige Charakteristika können sein beispielsweise ein Wendepunkt, bestimmte Orte des monotonen Kurvenanstiegs zum Maximum der Kurve, das Maximum der Kurve selbst oder dergleichen. Bei der Auswertung der einzelnen Fluoreszenztiefenprofile wird immer das gleiche Charakteristikum des Kurvenverlaufes ausgewertet, um die Tiefe des "Einsetzen" der Fluoreszenz zu bestimmen. In bevorzugter Weise führt man eine Normierung des Fluoreszenz tiefenprofils bzw. der Kurve dieses Profils durch, so daß die Auswertung unabhängig von der absoluten Größe der Fluoreszen zintensität wird.Determining the depth of the place where the fluorescence occurs regardless of the absolute size of the fluo Resence intensity performed. For this, the course of the Fluorescence depth profile in terms of characteristics of the Fluorescence depth profile curve evaluated. such Characteristics can be, for example, a turning point, certain locations of the monotonous curve rise to the maximum of Curve, the maximum of the curve itself or the like. In the Evaluation of the individual fluorescence depth profiles is always evaluated the same characteristic of the curve, to determine the depth of "onset" of fluorescence. In it is preferred to standardize the fluorescence depth profile or the curve of this profile, so that the Evaluation regardless of the absolute size of the fluorescence intensity will.

Beispielsweise wird die Tiefe des "Einsetzen" der Fluoreszenz als der Ort definiert, an dem die Fluoreszenz erstmals einen gewissen Bruchteil c, z. B. 80% des Maximalwertes des Fluores zenztiefenprofils überschreitet. Die Bestimmung der Tiefe für jeden lateralen Ort, in der die Fluoreszenz "einsetzt", führt zu einer topographischen Karte des Fluoreszenzvolumens und somit zu einer konfokal erzielten Topographie fluoreszieren der innerer Oberflächen im Objekt. Diese kann einerseits in Graustufen kodiert und andererseits als perspektivische Darstellung wiedergegeben werden. In diesen Darstellungen sind z. B. bei der Fluoreszenzangiographie am Augenhinter grund die retinalen Gefäße als deutliche Erhebungen erkenn bar. Durch die Visualisierung der dreidimensionalen Oberflä che der fluoreszierenden Strukturen ergibt sich eine grundle gende Erweiterung der Fluoreszenzdarstellung. Es können beispielsweise in der Fluoreszenzangiographie vaskuläre Veränderungen diagnostiziert werden. Ferner ist dort die Verlaufskontrolle und die Evaluierung von Therapieerfolgen bei Gefäßerkrankungen möglich. Durch die Darstellung von Gefäßleckagen ergibt sich ein dreidimensionales Funktionsbild der Gefäßstruktur. Ferner können Hautuntersuchungn durchge führt werden.For example, the depth of "onset" of fluorescence defined as the place where fluorescence first certain fraction c, e.g. B. 80% of the maximum value of the fluorescence depth profile. Determining the depth for any lateral location where fluorescence "sets in" to a topographic map of the fluorescence volume and thus fluoresce to a confocal topography of the inner surfaces in the object. On the one hand, this can be done in Grayscale coded and on the other hand as a perspective Representation are reproduced. In these representations are z. B. in fluorescence angiography on the back of the eye Recognize the retinal vessels as clear elevations bar. By visualizing the three-dimensional surface basic fluorescent structures extension of the fluorescence display. It can for example in vascular fluorescence angiography Changes are diagnosed. There is also the Follow-up and evaluation of therapeutic success possible with vascular diseases. By representing Vascular leakage results in a three-dimensional functional picture the vascular structure. Skin examinations can also be carried out leads.

Eine bevorzugte Verwendung findet die Erfindung bei Untersu chungen am Auge, insbesondere am Augenhintergrund.The invention finds a preferred use at Untersu eye, especially the fundus.

Examples

Anhand der Figuren wird die Erfindung an einem Ausführungs beispiel noch näher erläutert. Es zeigt:Based on the figures, the invention is carried out on an embodiment example explained in more detail. It shows:

Fig. 1: Eine schematische Darstellung der Vorrichtung, mit welcher das erfindungsgemäße Verfahren sich durch führen läßt; Fig. 1: A schematic representation of the device with which the inventive method can be performed;

Fig. 2: Eine Erläuterung der in der Vorrichtung der Fig. 1 vorgesehenen Auswerteeinrichtung, welche die Speicherung der erhaltenen Fluoreszenzindensitätsdaten und Verarbeitung dieser Daten zur Aufberei tung eines dreidimensionalen Bildes durchgeführt; FIG. 2: An explanation of the evaluation device provided in the device of FIG. 1, which carries out the storage of the fluorescence intensity data obtained and the processing of these data for processing a three-dimensional image;

Fig. 3: eine Veranschaulichung der verschiedenen Tiefen, aus denen Fluoreszenzbilder am Beispiel eines Augenhintergrunds dargestellt sind; FIG. 3 shows an illustration of the different depths from which fluorescence images are shown on the example of an eye fundus;

Fig. 4: ein beispielsweise durch laterale Mittelung erzeug tes Fluoreszenztiefenprofil; und FIG. 4 is a erzeug for example by lateral averaging tes fluorescence depth profile; and

Fig. 5: eine perspektivische Darstellung einer mit Hilfe der Erfindung gewonnenen Gefäßtopographie am Augenhintergrund. Fig. 5 is a perspective view of a obtained by means of the invention, the vessel topography of the fundus.

In der Fig. 1 ist eine Laserstrahlquelle 1 dargestellt, deren Laserstrahl durch eine laterale (x, y) - Ablenkeinrich tung 2 und eine Umlenkeinrichtung 3 auf den Hintergrund eines Auges 4 gerichtet wird. Die von diesem Laserstrahl induzierte Fluoreszenz in den Gefäßen des Augenhintergrundes wird mit tels konfokaler Ophthalmoskopie erfaßt. Hierzu ist eine Fokusierungseinrichtung 5 vorgesehen, welche zusammen mit einer konfokalen Blende 9, wie bei herkömmlicher Konfokalmi kroskopie, die in unterschiedlichen Tiefen (z-Richtung) in jeweiligen Schnittebenen induzierten Fluoreszenzintensitäten für die Erfassung einem Detektor 6 zuleitet. Durch Verschie bung z. B. der Fokusierungsoptik oder der konfokalen Blende 9 lassen sich die Fluoreszenzintensitäten für jeweilige Orte eines dreidimensionalen Datenpunktgitters 15 (Fig. 3) ermit teln. In den beiden lateralen Richtungen (x, y) können bei spielsweise jeweils 256 Gitterpunkte liegen und in axialer Richtung (z) 32 Gitterebenen vorgesehen sein. Durch eine mit dem Detektor 6, der lateralen (x, y)-Ablenkeinrichtung 2, der Fokussierungsoptik 5 und der konfokalen Blende 9 verbundenen Elektronik 7 läßt sich die vom Detektor 6 erfaßte Fluoreszenz den jeweiligen Orten des Datenpunktgitters 15 zuordnen und in einem Speicher 10 (Fig. 2) einer Bildverarbeitungseinrichtung 8 speichern.In Fig. 1 a laser beam source 1 is shown, whose laser beam (x, y) by a lateral - Rich deflection device 2, and a deflection device is directed at the background of an eye 4 3. The fluorescence induced by this laser beam in the vessels of the fundus is detected using confocal ophthalmoscopy. For this purpose, a focusing device 5 is provided which, together with a confocal aperture 9 , as in conventional Konfokalmi microscopy, supplies the fluorescence intensities induced at different depths (z-direction) in respective sectional planes for detection to a detector 6 . By shifting z. B. the focusing optics or the confocal aperture 9 , the fluorescence intensities for respective locations of a three-dimensional data point grid 15 ( FIG. 3) can be determined. In the two lateral directions (x, y) there can be 256 grid points, for example, and 32 grid planes can be provided in the axial direction (z). By means of electronics 7 connected to the detector 6 , the lateral (x, y) deflection device 2 , the focusing optics 5 and the confocal diaphragm 9 , the fluorescence detected by the detector 6 can be assigned to the respective locations of the data point grid 15 and stored in a memory 10 ( Save Fig. 2) of an image processing device 8.

Aus diesem dreidimensionalen Gesamtdatensatz der Fluoreszenz wird für jeweilige laterale Positionen (r) das Fluoreszenz tiefenprofil F_r (z), welches die Fluoreszenzintensität als Funktion der Tiefe (z) angibt, extrahiert, wie es schematisch durch eine Einheit 11 in der Fig. 2 dargestellt ist. Der Verlauf des Fluoreszenztiefenprofils kann mit einem deutli chen Rauschen überlagert sein. Es kann sich hierbei um elek tronisches Rauschen und nicht vollständig korrigierte Bewe gungsartefakte aufgrund von Objektbewegung während der Auf nahme des Datenpunktgitters handeln. Bei vielen Objekten, insbesondere im biologischen Gewebe kann angenommen werden, daß sich die Fluoreszenzintensität innerhalb einer Bildebene kontinuierlich und nicht sprunghaft ändert. Zur Veringerung des Einflusses des Rauschens auf das Fluoreszenzprofil, kann daher in diesen Fällen eine laterale Mittelung über einen bestimmten Bereich durchgeführt werden, beispielsweise eine laterale Mittelung über eine Umgebung mit 7 × 7 lateralen Positionen. Hieraus resultiert dann eine deutliche Verringe rung des Rauschens auf dem Fluoreszenztiefenprofil. Die Mittelung kann in einer Stufe 12 der Fig. 2 erfolgen. In der Fig. 4 ist ein derartiges durch laterale Mittelung gewonne nes und geglättetes Fluoreszenztiefenprofil dargestellt.The fluorescence depth profile F _r (z), which indicates the fluorescence intensity as a function of the depth (z), is extracted from this three-dimensional total data set of fluorescence for respective lateral positions (r), as is represented schematically by a unit 11 in FIG. 2 is. The course of the fluorescence depth profile can be overlaid with a clear noise. This may be electronic noise and incompletely corrected motion artifacts due to object movement during the acquisition of the data point grid. With many objects, particularly in biological tissue, it can be assumed that the fluorescence intensity changes continuously and not abruptly within an image plane. To reduce the influence of the noise on the fluorescence profile, a lateral averaging over a certain area can therefore be carried out in these cases, for example a lateral averaging over an environment with 7 × 7 lateral positions. This results in a significant reduction in noise on the fluorescence depth profile. The averaging can take place in a stage 12 of FIG. 2. In FIG. 4, such a gewonne by lateral averaging nes and smoothed fluorescence depth profile is illustrated.

Aus dem Kurvenverlauf der jeweils ermittelten Fluoreszenztie fenprofile, welcher vorzugsweise noch normiert (Maximum = 1) worden ist, läßt sich die Tiefe (z) bestimmen, in der die Fluoreszenz einsetzt (Stufe 13 in Fig. 2). Aufgrund der geringen Tiefenauflösung des konfokalen Verfahrens verursa chen selbst schlagartige Übergänge, wie z. B. an Gefäßen, lediglich einen graduellen Anstieg der Fluoreszenzintensität mit wachsender Tiefe. Die Tiefe des "Einsetzen" der Fluores zenz wird daher als der Ort definiert, an dem die Floureszenz erstmals einen bestimmten Bruchteil (c), z. B. 80% des Maxi malwertes überschreitet. Es können auch andere Charakteristi ka im Kurvenverlauf, z. B. ein Wendepunkt oder bestimmter Gradient in einem monotonen Anstieg oder dergleichen für die Auswertung verwendet werden.The depth (z) at which the fluorescence sets in can be determined from the curve profile of the respectively determined fluorescence depth profile, which has preferably still been standardized (maximum = 1) (step 13 in FIG. 2). Due to the low depth resolution of the confocal process Chen even sudden transitions such. B. on vessels, only a gradual increase in fluorescence intensity with increasing depth. The depth of the "onset" of the fluorescence is therefore defined as the place where the fluorescence for the first time a certain fraction (c), z. B. exceeds 80% of the maximum value. There may also be other characteristics in the curve, e.g. B. a turning point or certain gradient in a monotonous increase or the like can be used for the evaluation.

Die Bestimmung der Tiefe, in der Fluoreszenz für jeden Ort "einsetzt", führt zu einer topographischen Karte des Fluores zenzvolumens, die z. B. in Graustufen kodiert oder als per spektivische Darstellung dargestellt werden kann. Dies er folgt in einer Stufe 14 der Fig. 2, wobei die gewonnene topographische Karte in perspektivischer Darstellung in Fig. 5 gezeigt ist. In dieser Darstellung sind z. B. die retinalen Gefäße eines Fluoreszenzangiograms des Augenhintergrunds als deutliche Erhebungen erkennbar.The determination of the depth at which fluorescence "sets in" for each location leads to a topographic map of the fluorescence volume, which, for. B. encoded in grayscale or can be represented as a per spective representation. This takes place in a stage 14 of FIG. 2, the topographic map obtained being shown in perspective in FIG. 5. In this illustration, e.g. B. the retinal vessels of a fluorescence angiogram of the fundus can be seen as distinct elevations.

Da für die Aufnahme der beispielsweise 32 Fluoreszenzbilder in den unterschliedlichen Tiefen eine bestimmte Zeit (ca. 1,5 bis 2 Sekunden) erforderlich ist, kann es zu einer Bewegung des Objekts, z. B. des Augapfels kommen. In diesem Fall können die einzelnen Ebenen, in denen die Fluoreszenzbilder liegen, zunächst anhand von charakteristischen Merkmalen ausgerichtet und so die Augenbewegung kompensiert werden. Hierbei können sowohl Rotations- als auch Translationsbewegungen berücksich tigt werden. Für die Ausrichtung der einzelnen Schnittebenen wird eine Ebene in einem mittleren Tiefenbereich als Referenzebene gewählt und alle übrigen Fluoreszenzbilder an dieser Referenzebene ausgerichtet. Hierdurch wird die Akkumulation von Registrierungsfehlern, wie sie sich beim Ausrichten benachbarter Schnittbilder ergeben kann, vermieden. As for the acquisition of, for example, 32 fluorescence images a certain time in the different depths (approx. 1.5 up to 2 seconds), it can cause movement of the object, e.g. B. the eyeball. In this case, you can the individual levels in which the fluorescence images lie, initially aligned on the basis of characteristic features and so the eye movement can be compensated. Here you can both rotational and translational movements are taken into account be done. For the alignment of the individual cutting planes becomes a plane in a middle depth range as a reference plane selected and all other fluorescence images on this Reference plane aligned. This will cause the accumulation of registration errors as they occur when aligning neighboring sectional images can be avoided.

LIST OF REFERENCE NUMBERS

11

Laserstrahlquelle
laser beam source

22

x-y-Ablenkeinrichtung
xy deflector

33

Umlenkeinrichtung
deflecting

44

Auge
eye

55

Fokussierungsoptik
focusing optics

66

Detektor
detector

77

Elektronik
electronics

88th

Bildverarbeitungseinrichtung
Image processing means

99

Konfokale Blende
Confocal aperture

1010

Speicher
Storage

1111

Extrahierungseinheit
extracting

1212

Mittelungseinheit
Averaging unit

1313

Bestimmung der Fluoreszenztiefe
Determination of the depth of fluorescence

1414

Topographieeinheit
Topography unit

Claims

1. A method for the topographical representation of inner surfaces of an object, in which the object is laterally scanned with a laser beam and thereby induced fluorescence is detected as a function of the location, characterized in that
that is scanned at different depths (z)
that for respective lateral image positions (r) a fluorescence depth profile F _r (z), which indicates the fluorescence intensity as a function of depth (z), is determined and
that a specific characteristic of the fluorescence depth profile is evaluated for the determination of the depth of the fluorescence location.

2. The method according to claim 1, characterized in that the fluorescence by a fluorescent dye, which in the Object is applied, is generated.

3. The method according to claim 1, characterized in that the fluorescent dye by injection or in contact method is applied in the object.

4. The method according to claim 1, characterized in that the fluorescence by at least one naturally in the Ob ject existing fluorescent dye is generated.

5. The method according to claim 1, characterized in that as a characteristic a turning point, the maximum Fraction of the maximum, or a certain gradient nes monotonous curve part is used.

6. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized ge indicates that lateral averaging of the fluores depth profile of several lateral image positions Area for determining the depth of the fluorescence tes is formed.

7. The method according to any one of claims 1 to 6, characterized ge indicates that the fluorescence depth profile normalizes becomes.

8. The method according to any one of claims 1 to 7, characterized ge indicates that for the alignment of the levels in which If the fluorescence images are generated, one level an average depth is determined as the reference plane and the fluorescence images of the other planes on this reference level.

9. Use of a method according to one of claims 1 to 8 when examining the biological tissue.

10. Use of a method according to one of claims 1 to 9 when examining the eye, especially eyes background.

11. Use of a method according to one of claims 1 to 9 when examining the skin.