DE19623363A1 - Rapid determination of DNA or RNA in aqueous solutions - Google Patents

Rapid determination of DNA or RNA in aqueous solutions

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Abstract

Rapid determination of DNA or RNA in aqueous solutions comprises determining the ultraviolet light (UV) absorption characteristics of nucleic acids at 254 nm. The process compares the shadow formed by a DNA droplet on a UV-illuminated fluorescing plate, with that formed by test strips. From this comparison, the concentration of the nucleic acid solution is determined.

Description

Es ist allgemeiner Stand der Technik, DNA- oder RNA-Konzentration spektophotometrisch zu bestimmen. Das Ver­ fahren basiert ebenfalls auf der Eigenschaft von Nuklein­ säuren, ultraviolettes Licht von 250-265 nm zu absorbieren. Beim Meßverfahren wird ein Lichtstrahl durch eine UV-durchlässige Küvette gelenkt, in der sich die Nukleinsäure­ lösung befindet. Da ein Teil des einfallenden Lichts absor­ biert wird, ist der Lichtstrahl nach dem Durchgang durch die Nukleinsäurelösung geschwächt. Der austretende Licht­ strahl wird auf eine Photodiode gerichtet und in ein elek­ tronisches Signal umgewandelt, das einem Ausgabegerät zuge­ führt wird. Bekannt ist ferner das Verfahren des UV-Shadowings von DNA, RNA und Proteinen (1, 2, 3).It is state of the art, DNA or RNA concentration to be determined spectophotometrically. The Ver driving is also based on the property of Nuklein Acids to absorb ultraviolet light from 250-265 nm. In the measuring process, a light beam is transmitted through a UV-transparent one Cuvette directed in which the nucleic acid solution is located. Because part of the incident light is absorbed the light beam is through after the passage the nucleic acid solution weakened. The emerging light beam is directed onto a photodiode and into an elec tronic signal converted to an output device leads. The method of UV shadowing is also known of DNA, RNA and proteins (1, 2, 3).

  • 1. Ein Teil der Nukleinsäurelösung wird bei dem üblichen spektrophotometrischen Verfahren mit einem Lösungsmittel (meistens Wasser) verdünnt und geht verloren. Die zur Mes­ sung verwendete Nukleinsäurelösung läßt sich nur unter großem Aufwand oder gar nicht wiedergewinnen. Deshalb wird sie meistens verworfen und nicht wieder verwendet. Versucht man, nur kleine Mengen der Nukleinsäurelösung zur Messung zu verwenden, so hat das zur Folge, daß sich der Meßfehler aufgrund Verdünnungsfehler erhöht. 1. Part of the nucleic acid solution is in the usual spectrophotometric method with a solvent (mostly water) diluted and lost. The for the Mes Solution used nucleic acid solution can only under recover a lot of effort or not at all. That is why mostly discarded and not reused. Tries one, only small amounts of the nucleic acid solution for measurement to use, the result is that the measurement error increased due to dilution error.  
  • 2. Für eine genaue Messung ist es notwendig, das Photometer vorzuwärmen, d. h. es muß mindestens 15 min vor der eigent­ lichen Messung eingeschaltet werden.2. For an accurate measurement it is necessary to use the photometer preheat, d. H. it must be at least 15 minutes before the actual measurement can be switched on.
  • 3. Ein Photometer ist teuer (Preis ab 7500.- DM).3. A photometer is expensive (price from 7500.- DM).

Mit dem Verfahren, für das Patent ersucht wird, entfallen die oben genannten Probleme.The procedure for which a patent is being sought does not apply the above problems.

  • 1. Die mit der Erfindung verbundenen Vorteile bestehen dar­ in, daß die zu messende Nukleinsäurekonzentration weiter­ verwendet werden kann und nicht durch Verdünnungsprozeduren unbrauchbar gemacht wird.1. The advantages associated with the invention are in that the nucleic acid concentration to be measured continues can be used and not by dilution procedures is made unusable.
  • 2. Die Messung ist sehr einfach, sie beinhaltet nur das Auftragen eines 5 µl großen Tropfens. Der Möglichkeit des Auftretens von Meßfehlern wird durch die geringe Anzahl zur Messung notwendiger Schritte entgegengewirkt.2. The measurement is very simple, it only includes that Apply a 5 µl drop. The possibility of Occurrence of measurement errors is due to the small number Measured necessary steps counteracted.
  • 3. Die Messung ist sehr schnell. Die Zeitdauer der Messung hängt davon ab, wie schnell die zu messende Nukleinsäurelö­ sung aufgetragen ist, und wie lange gebraucht wird, die In­ tensität des Schattens des Tropfens mit dem der Testfolie zu vergleichen.3. The measurement is very fast. The duration of the measurement depends on how fast the nucleic acid solution to be measured solution and how long it takes to use the In intensity of the shadow of the drop with that of the test film to compare.
  • 4. Das Verfahren ist wesentlich billiger als ein Photome­ ter.4. The process is much cheaper than a photome ter.
Beschreibung eines AusführungsbeispielsDescription of an embodiment

Auf eine bei 254 nm fluoreszierende Folie wird eine durch­ sichtige Haushaltsfolie gelegt. Über der Folie (ca. 20-40 cm) wird eine kurzwellige UV-Lampe angebracht. Ein Tropfen von 5 µl der zu messenden Nukleinsäurekonzentration wird auf die Saranfolie aufgetragen. Unter UV-Licht bei 254 nm werden die entstehenden Schatten des Teststreifens mit dem des Tropfens verglichen und die Konzentration der Nuklein­ säurelösung abgelesen. Der Vorgang ist schematisch in Abb. 1 dargestellt.A transparent household film is placed on a film fluorescent at 254 nm. A short-wave UV lamp is attached over the film (approx. 20-40 cm). A drop of 5 µl of the nucleic acid concentration to be measured is applied to the Saran film. Under UV light at 254 nm, the resulting shadow of the test strip is compared with that of the drop and the concentration of the nucleic acid solution is read off. The process is shown schematically in Fig. 1.

Quellenangaben:
(1) Hassur, S.M. and Whitlock, H.W., (1974): Anal. Bio­ chem., 59, 162
(2) Thurston S.J. and Saffer, J.D. (1989): Anal. Biochem., 178, 41-42
(3) Jansen, S., Kriegesmann, B., Jones, R., Brenig, B. (1995): Anal. Biochem. 228, 177-178Sources:
(1) Hassur, SM and Whitlock, HW, (1974): Anal. Bio chem., 59, 162
(2) Thurston SJ and Saffer, JD (1989): Anal. Biochem., 178, 41-42
(3) Jansen, S., Kriegenmann, B., Jones, R., Brenig, B. (1995): Anal. Biochem. 228, 177-178

Claims (8)

1. Verfahren zur spektrophotometrischen Konzentrationsmes­ sung von Nukleinsäuren (Desoxyribonukleinsäure oder Ribonu­ kleinsäure) mit UV-Licht, basierend auf der Eigenschaft von Nukleinsäuren, UV-Licht von 254 nm Wellenlänge konzentrati­ onsabhängig zu absorbieren, dadurch gekennzeichnet, daß unter UV-Bestrahlung die Schattenbildung eines DNA-Tropfens auf einer floureszierenden Platte mit der Schat­ tenbildung von Teststreifen verglichen und aus diesem Ver­ gleich die Konzentration der Nukleinsäurenlösung bestimmt wird.1. A method for spectrophotometric concentration measurement of nucleic acids (deoxyribonucleic acid or ribonucleic acid) with UV light, based on the property of nucleic acids, to absorb UV light of 254 nm wavelength in a concentration-dependent manner, characterized in that the shadow formation of a UV radiation DNA drop on a fluorescent plate with the shadow formation of test strips compared and from this comparison the concentration of the nucleic acid solution is determined. 2. Verfahren zur spektrophotometrischen Konzentrationsmes­ sung von Nukleinsäuren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der von einer nukleinsäurehaltigen wäßrigen Lösung auf eine fluoreszierende Platte geworfene Schatten mit dem ge­ worfenen Schatten einer Testsubstanz verglichen wird und daraus die Konzentration abgeleitet wird.2. Method for spectrophotometric concentration measurement solution of nucleic acids according to claim 1, characterized, that of a nucleic acid-containing aqueous solution a fluorescent plate cast shadows with the ge cast shadow of a test substance is compared and the concentration is derived from this. 3. Verfahren zur spektrophotometrischen Konzentrationsmes­ sung von Nukleinsäuren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die zu verwendenden Testsubstanzen, die als Referenz für das UV-Shadowing von nukleinsäurehaltigen Lösungen die­ nen, partiell durchlässig für die Wellenlänge von 254 nm sind.3. Method for spectrophotometric concentration measurement solution of nucleic acids according to claim 1, characterized, that the test substances to be used, which for reference for the UV shadowing of nucleic acid solutions  NEN, partially transparent for the wavelength of 254 nm are. 4. Verfahren zur spektrophotometrischen Konzentrationsmes­ sung von Nukleinsäuren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die zu verwendenden Teststreifen, die als Referenz für das UV-Shadowing von nukleinsäurehaltigen Lösungen dienen, partiell durchlässig für die Wellenlänge von 254 nm sind.4. Method for spectrophotometric concentration measurement solution of nucleic acids according to claim 1, characterized, that the test strips to be used, which are used as a reference for serve the UV shadowing of nucleic acid solutions, are partially transparent to the wavelength of 254 nm. 5. Verfahren zur spektrophotometrischen Konzentrationsmes­ sung von Nukleinsäuren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die zu verwendenden Teststreifen, die als Referenz für das UV-Shadowing von nukleinsäurehaltigen Lösungen in ver­ schiedenen Dicken Verwendung finden, um ein Absorbtionsver­ halten bei 254 nm von diversen Nukleinsäurekonzentrationen zu imitieren.5. Method for spectrophotometric concentration measurement solution of nucleic acids according to claim 1, characterized, that the test strips to be used, which are used as a reference for UV shadowing of nucleic acid solutions in ver different thicknesses find an Absorbtionsver keep at 254 nm of various nucleic acid concentrations to imitate. 6. Verfahren zur spektrophotometrischen Konzentrationsmes­ sung von Nukleinsäuren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die geworfenen Schatten der nukleinsäurehaltigen Lösung und die geworfenen Schatten der Testsubstanzen video­ optisch weiterverarbeitet werden und als Falschfarben dar­ gestellt werden können. 6. Method for spectrophotometric concentration measurement solution of nucleic acids according to claim 1, characterized, that the cast shadow of the nucleic acid solution and the cast shadows of the test substances video be processed optically and as false colors can be put.   7. Verfahren zur spektrophotometrischen Konzentrationsmes­ sung von Nukleinsäuren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die geworfenen Schatten der nukleinsäurehaltigen Lösung und die geworfenen Schatten der Testsubstanzen video­ optisch weiterverarbeitet und die Schwärzung durch die Schattenbildung in Zahlenwerte konvertiert werden können.7. Method for spectrophotometric concentration measurement solution of nucleic acids according to claim 1, characterized, that the cast shadow of the nucleic acid solution and the cast shadows of the test substances video optically processed and the blackening by Shadow formation can be converted into numerical values. 8. Verfahren zur spektrophotometrischen Konzentrationsmes­ sung von Nukleinsäuren nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß alle UV absorbierende Substanzen in der oben beschrie­ benen Weise quantifiziert werden können, wie z. B. Arznei­ mittel und Aromate.8. Method for spectrophotometric concentration measurement solution of nucleic acids according to claim 1, characterized, that all UV absorbing substances described in the above benen way can be quantified such. B. Medicine medium and aromatic.
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