DE19500723A1

DE19500723A1 - New variable domains of antibody recognising cancer specific mucin

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Publication number: DE19500723A1
Application number: DE19500723A
Authority: DE
Inventors: Takashi Kaneko; Kiyoshi Yasukawa; Yoshitaka Iba; Yong-Suk Chung; Michio Sowa
Original assignee: Tosoh Corp
Current assignee: Tosoh Corp
Priority date: 1994-01-13
Filing date: 1995-01-12
Publication date: 1995-07-20
Also published as: FR2714915A1; FR2714915B1; JPH07203974A

Abstract

Variable domains of the heavy (H) and light (L) chains of an antibody that recognises a cancer-specific mucin (A) contain the 122 (H) and the 112 (L) amino acid sequences given in the specification. Also claimed are: (1) nucleic acid encoding these domains (the pref. sequences are also given in the specification) and (2) vectors contg. DNA for one or both of these domains.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Gen oder Genfragment eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt. Insbesondere betrifft die Erfindung einen Abschnitt der V-Domäne der H-Kette oder L-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, ein diesen codierendes Gen, einen dieses Gen enthaltenden Vektor und ein Verfahren zur Herstellung des Abschnittes der Domäne oder des Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, umfassend die Züchtung eines mit diesem Vektor transformierten Wirtes. Außerdem betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung eines chimären Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt.The present invention relates to a gene or Gene fragment of an antibody, the cancer-specific mucin recognizes. In particular, the invention relates to a section the V domain of the H chain or L chain of an antibody which recognizes cancer-specific mucin, a gene encoding it, a vector containing this gene and a method for Production of the section of the domain or the antibody, the cancer-specific mucin recognizes comprehensively the breeding of a host transformed with this vector. also The invention relates to a method for producing a chimeric antibody that recognizes cancer-specific mucin.

Es ist bekannt, daß der Antikörper, der ein spezifisch in Krebszellen exprimiertes Antigen erkennt (krebsspezifisches Antigen), bei der Diagnose und der Therapie von Krebs wirksam ist. Ein Glykoprotein, bei dem N-Acetylgalactosamin und Serin oder Threonin über eine O-glykosidische Bindung verknüpft sind, wird Mucin genannt, von einem bestimmten Mucin weiß man, daß es ein krebsspezifisches Antigen ist.It is known that the antibody that is a specific in Antigen recognizes cancer cells (cancer-specific Antigen), effective in the diagnosis and therapy of cancer is. A glycoprotein containing N-acetylgalactosamine and serine or threonine linked via an O-glycosidic bond is called mucin, you know of a certain mucin, that it is a cancer-specific antigen.

Ho et al. immunisierten Mäuse mit dem Mucin, das aus ei nem menschlichen Pankreaskrebs-Zellstamm isoliert worden war, und erhielten ein Hybridom, das einen monoclonalen Maus-Anti körper produzierte, der spezifisch das Pankreaskrebsgewebe er kannte (Ho et al., Cancer Res. 51 (1991), 372). Sawada et al. wiesen nach, daß Nd2, ein von Ho et al. hergestellter Antikörper, spezifisch den menschlichen Pankreaskrebs erkannte, indem sie Nd2 an Mäuse verabreichten, denen menschlicher Pankreaskrebs transplantiert worden war (Sawada et al., Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4 (1991), 493).Ho et al. immunized mice with the mucin derived from egg a human pancreatic cancer cell strain was isolated, and received a hybridoma that had mouse monoclonal anti body that specifically produced the pancreatic cancer tissue (Ho et al., Cancer Res. 51 (1991), 372). Sawada et al. demonstrated that Nd2, one of Ho et al. manufactured Antibodies, specifically human pancreatic cancer recognized by administering Nd2 to mice who human pancreatic cancer had been transplanted (Sawada et al., Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4 (1991), 493).

Außerdem verabreichten Sawada et al. aus der Maus stam menden Nd2 an einen Patienten mit Pankreaskrebs und folgerten daraus, daß Nd2 für die intrakorporale Diagnose von Pankreas krebs nützlich sein könnte (Sawada et al., General Meeting of Japanese Cancer Assoc. (1991), S. 329).Sawada et al. stem from the mouse Nd2 to a patient with pancreatic cancer and concluded from the fact that Nd2 for the intracorporeal diagnosis of pancreas cancer could be useful (Sawada et al., General Meeting of Japanese Cancer Assoc. (1991), p. 329).

Wenn der monoclonale Antikörper, der krebsspezifisches Mucin erkennt, als intrakorporales Diagnostikum oder Medika ment eingesetzt wird, muß er in großen Mengen oder wiederholt verabreicht werden. Man weiß jedoch, daß bei Verabreichung eines aus der Maus stammenden Antikörpers, z. B. von Nd2 und dergleichen, an einen Menschen im Serum dieses Menschen ein Antikörper erscheint, welcher den Maus-Antikörper erkennt (Levy et al., Annu. Rev. Med. 34 (1983), 107). Aus diesem Grund birgt die Verabreichung von großen Mengen oder die wie derholte Verabreichung des aus der Maus stammenden Antikörpers an einen Menschen die mögliche Gefahr einer Anaphylaxie auf grund der Immunantwort, außerdem kann eine schnelle Spaltung des verabreichten Antikörpers auftreten, wodurch seine Aktivi tät verlorengeht.If the monoclonal antibody, the cancer-specific Mucin recognizes as an intracorporeal diagnostic or medication ment is used, it must be in large quantities or repeated be administered. However, it is known that when administered an antibody derived from the mouse, e.g. B. from Nd2 and the like, to a person in the serum of this person Antibody appears, which recognizes the mouse antibody (Levy et al., Annu. Rev. Med. 34 (1983), 107). For this The reason is the administration of large amounts or the like repeated administration of the mouse-derived antibody to a person the possible risk of anaphylaxis due to the immune response, moreover, a quick split of the administered antibody occur, whereby its Aktivi activity is lost.

Zur Lösung dieser Probleme kann menschlicher Antikörper verwendet werden, es ist jedoch schwierig, aus der Population der menschlichen B-Zellen eine B-Zelle zu isolieren, die den gewünschten Antikörper produziert, und ihr für die Züchtung die Fähigkeit zur Unsterblichkeit zu verleihen. Human antibody can help solve these problems used, however it is difficult to get out of the population of human B cells to isolate a B cell that desired antibody produced, and her for breeding the ability to confer immortality.

In den letzten Jahren wurde zur Lösung dieser Probleme ein chimärer Maus-Mensch-Antikörper vorgeschlagen. Der chimäre Maus-Mensch-Antikörper ist ein Antikörper, der eine antigen bindende Domäne, die von der vom Menschen verschiedenen Tier art stammt, d. h. die variable Domäne (V-Domäne), und eine konstante Domäne (C-Domäne) umfaßt, die vom Menschen stammt (Oi und Morrison, Biotechnology 4 (1986), 214), dadurch wird die Gefahr einer Anaphylaxie und dergleichen verringert, da die vom Menschen stammende C-Domäne keine Immunantwort von menschlichen Antikörpern erhält.In recent years, these problems have been solved proposed a mouse-human chimeric antibody. The chimeric Mouse-human antibody is an antibody that is an antigen binding domain that of the different animal type comes from, d. H. the variable domain (V domain), and a constant domain (C domain), which comes from humans (Oi and Morrison, Biotechnology 4 (1986), 214) reduces the risk of anaphylaxis and the like because the human-derived C domain has no immune response from human antibodies.

Kürzlich wurde ein humanisierter Antikörpertyp vorge schlagen. Der humanisierte Antikörpertyp ist ein Antikörper, der eine antigenbindende Minimumdomäne, die von der vom Men schen verschiedenen Tierart stammt, d. h. CDR-Domäne, und eine andere V-Domäne und eine C-Domäne, die vom Menschen stammen, umfaßt, durch sie wird die mögliche Immunantwort durch menschliche Antikörper noch weiter abgeschwächt.A humanized type of antibody has recently been featured beat. The humanized antibody type is an antibody which is an antigen-binding minimum domain that differs from that of the men different animal species, d. H. CDR domain, and one other V domain and a C domain that come from humans encompasses the possible immune response human antibodies weakened even further.

Um die Funktion des Antikörpers als intrakorporales Dia gnostikum oder Medikament zu verbessern, wurden außerdem ein fusioniertes Protein, umfassend den Antikörper und ein weite res Protein, sowie ein Antikörper, der nur die V-Domäne ent hält, vorgeschlagen (Ward et al., Nature 341 (1989), 544).To the function of the antibody as an intracorporeal slide To improve gnostic or medication were also a fused protein comprising the antibody and a broad one res protein, as well as an antibody that only ent the V domain holds, proposed (Ward et al., Nature 341 (1989), 544).

Aus Nd2 und dergleichen können, wie vorstehend beschrie ben, durch die verschiedenen in den letzten Jahren vorgeschla genen Techniken Antikörper erhalten werden, die als intrakor porale Diagnostika oder Medikamente noch wirksamer sind, je doch benötigt man zur Herstellung dieser Antikörper Gene, die die H-Kette und die L-Kette des Antikörpers codieren.From Nd2 and the like, as described above ben, through the various proposed in recent years techniques are obtained which are called intracor Poral diagnostics or medications are even more effective, ever however, genes that require encode the H chain and the L chain of the antibody.

Die Erfinder haben, gemäß der vorstehend beschriebenen Aufgabe, ein Gen der H-Kette oder der L-Kette des aus der Maus stammenden Antikörpers gegen krebsspezifisches Mucin aus führ lichen Studien unterworfen, als Ergebnis dieser Studien haben die Erfinder ein Gen der V-Domäne gefunden.The inventors have, according to that described above Task, a gene of the H chain or the L chain of the mouse derived antibody against cancer-specific mucin from leading subject to studies as a result of these studies the inventors found a gene of the V domain.

Die Erfindung betrifft die V-Domäne der H-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, enthaltend eine Aminosäuresequenz, wie in Sequenz Nr. 1 dargestellt, The invention relates to the V-domain of the H chain one Antibody that recognizes cancer-specific mucin an amino acid sequence as shown in Sequence No. 1,

Die Erfindung betrifft ferner die DNA, welche die V-Domäne der H-Kette des Antikörpers codiert, der das krebsspezifische Mucin erkennt, einen Vektor, der die DNA enthält, wobei die DNA in einer Wirtszelle exprimiert werden kann, und ein Verfahren zur Herstellung der V-Domäne der H-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, umfassend die Züchtung von Wirtszellen, die mit dem Vektor transformiert sind.The invention further relates to the DNA, which is the V-domain of H chain of the antibody encoding the cancer-specific Mucin recognizes a vector that contains the DNA, the DNA can be expressed in a host cell, and a Process for the preparation of the V-domain of the H chain Antibody that recognizes cancer-specific mucin the cultivation of host cells transformed with the vector are.

Außerdem betrifft die Erfindung die V-Domäne der L-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, ent haltend eine Aminosäuresequenz, wie in Sequenz Nr. 2 darge stellt,The invention also relates to the V domain of the L chain of an antibody that recognizes cancer-specific mucin holding an amino acid sequence as shown in Sequence No. 2 poses,

Die Erfindung betrifft ferner die DNA, welche die V-Domäne der L-Kette des Antikörpers codiert, der das krebsspezifische Mucin erkennt, einen Vektor, der die DNA enthält, wobei die DNA in einer Wirtszelle exprimiert werden kann, und ein Verfahren zur Herstellung der V-Domäne der L-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, umfassend die Züchtung von Wirtszellen, die mit dem Vektor transformiert sind.The invention further relates to the DNA, which is the V-domain of L chain of the antibody encoding the cancer-specific Mucin recognizes a vector that contains the DNA, the DNA can be expressed in a host cell, and a Method for producing the V-domain of the L chain Antibody that recognizes cancer-specific mucin the cultivation of host cells transformed with the vector are.

Außerdem betrifft die Erfindung einen Vektor, enthaltend sowohl die DNA, die die V-Domäne der H-Kette des Antikörpers codiert, der das krebsspezifische Mucin erkennt, als auch die DNA, die die V-Domäne der L-Kette des Antikörpers codiert, der krebsspezifisches Mucin erkennt, wobei diese DNAs in einem Wirt exprimiert werden können, und ein Verfahren zur Herstel lung eines chimären Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, umfassend die Züchtung von Wirtszellen, die mit dem Vektor transformiert sind.The invention also relates to a vector containing both the DNA, the V domain of the H chain of the antibody encoded, which recognizes the cancer-specific mucin, as well as the DNA encoding the V domain of the L chain of the antibody that recognizes cancer-specific mucin, with these DNAs in one Host can be expressed, and a method of manufacture chimeric antibody, the cancer-specific mucin recognizes comprehensively the cultivation of host cells with the Vector are transformed.

BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

Fig. 1 zeigt eine Restriktionsenzymkarte der V-Domäne der H-Kette von Nd2, wobei E, H, X, S und En eine EcoRI-Stelle, HindIII-Stelle, XbaI-Stelle, SacI-Stelle bzw. Enhancer bedeuten. Fig. 1 shows a restriction enzyme map of the V domain of the H chain of Nd2 thereof wherein E, H, X, S and En an EcoRI site, HindIII site, XbaI site, SacI site or enhancer.

Fig. 2 zeigt eine Restriktionsenzymkarte der V-Domäne der L-Kette von Nd2, wobei E, B, H und X eine EcoRI-Stelle, BamIH- Stelle, HindIII-Stelle bzw. XbaI-Stelle bedeuten. Figure 2 shows a restriction enzyme map of the V domain of the L chain of Nd2, where E, B, H and X represent an EcoRI site, BamIH site, HindIII site and XbaI site, respectively.

Fig. 3 zeigt eine Basensequenz der V-Domäne der H-Kette von Nd2 und eine Aminosäuresequenz der V-Domäne der H-Kette, herleitbar aus der Sequenz. Im Diagramm zeigen die drei unter strichenen Basensequenzen hypervariable Regionen (CDR1, CDR2 und CDR3 von der Stromaufwärtsseite aus). Fig. 3 shows a base sequence of the V domain of the H chain of Nd2 and an amino acid sequence of the V domain of the H chain derivable from the sequence. In the diagram, the three underlined base sequences show hypervariable regions (CDR1, CDR2 and CDR3 from the upstream side).

Fig. 4 zeigt eine Basensequenz der V-Domäne der L-Kette von Nd2 und eine Aminosäuresequenz der V-Domäne der L-Kette, herleitbar aus der Sequenz. Im Diagramm zeigen die drei un terstrichenen Basensequenzen hypervariable Regionen (CDR1, CDR2 und CDR3 von der Stromaufwärtsseite aus). FIG. 4 shows a base sequence of the V domain of the L chain of Nd2 and an amino acid sequence of the V domain of the L chain, which can be derived from the sequence. In the diagram, the three underlined base sequences show hypervariable regions (CDR1, CDR2 and CDR3 from the upstream side).

Fig. 5 zeigt den Expressionsvektor pSV2-HG1gpt/NdH4, wo bei Symbole verwendet werden, die die in der Gentechnik übliche Bedeutung haben. Fig. 5 shows the expression vector pSV2-HG1gpt / NdH4, where used in symbols that have the usual meaning in genetic engineering.

Fig. 6 zeigt den Expressionsvektor pSV2-HC_κneo/Ndκ₁₉ wo bei Symbole verwendet werden, die die in der Gentechnik übliche Bedeutung haben. Fig. 6 shows the expression vector pSV2-HC _κ neo / Ndκ₁₉ where symbols are used which have the usual meaning in genetic engineering.

Fig. 7 zeigt die Situation der Färbung auf der Platte, wobei die Bindungen des chimären Nd2-Antikörpertyps (○) bzw. des Maus-Nd2-Antikörpertyps (⚫) an Mucin nach dem in Beispiel 4 beschriebenen Verfahren untersucht wird, dabei zeigt die Or dinate die Absorption bei 500 nm und die Abszisse den Grad der Verdünnung von Mucin bei der Beschichtung. FIG. 7 shows the situation of the staining on the plate, the bindings of the chimeric Nd2 antibody type (○) or of the mouse Nd2 antibody type (⚫) to mucin being examined by the method described in Example 4, the Or dinate the absorption at 500 nm and the abscissa the degree of thinning of mucin in the coating.

Im folgenden wird die Erfindung ausführlich erläutert. The invention is explained in detail below.

Das erfindungsgemäße Gen eines Antikörpers, der krebsspe zifisches Mucin erkennt, ist ein Gen, das die V-Domäne der H- Kette codiert, oder ein Gen, das die V-Domäne der L-Kette codiert, wobei das Gen den Antikörper, der krebsspezifisches Mucin erkennt, produziert und konkret die als Sequenz Nr. 1 (Fig. 3) oder Sequenz Nr. 2 (Fig. 4) dargestellte Basensequenz aufweist. Das erfindungsgemäße Gen kann nach dem z. B. in Bei spiel 1 gezeigten Verfahren isoliert werden, wobei ein Hybri dom als Ausgangsmaterial verwendet wird, das den Antikörper produziert, der krebsspezifisches Mucin erkennt, ein solches Hybridom ist beispielsweise ein Hybridom, welches Nd2 produ ziert (Ho et al., Cancer Res. 51 (1991), 372).The gene according to the invention of an antibody which recognizes cancer-specific mucin is a gene which codes for the V domain of the H chain or a gene which codes for the V domain of the L chain, the gene being the antibody which is cancer-specific Mucin recognizes, produces and specifically has the base sequence shown as sequence No. 1 ( FIG. 3) or sequence No. 2 ( FIG. 4). The gene of the invention can be after the z. Example, in process shown in game 1, using a hybrid dom as starting material that produces the antibody that recognizes cancer-specific mucin, such a hybridoma is, for example, a hybridoma that produces Nd2 (Ho et al., Cancer Res 51: 372 (1991).

Außerdem kann das Gen der Sequenz Nr. 1 oder der Sequenz Nr. 2 unter Verwendung von z. B. DNA-Syntheseapparaturen hergestellt werden. Im Gen der Sequenz Nr. 1 oder der Sequenz Nr. 2 können eine oder mehrere Basen dazukommen, eine oder mehrere Basen können fehlen oder eine oder mehrere Basen können ausgetauscht sein.In addition, the gene of sequence No. 1 or the sequence No. 2 using e.g. B. DNA synthesis apparatus getting produced. In the gene of sequence No. 1 or the sequence No. 2 can add one or more bases, one or multiple bases may be missing or one or more bases can be exchanged.

Der erfindungsgemäße Antikörper (V-Domäne), der krebsspe zifisches Mucin erkennt, wird durch das vorstehend erwähnte Gen codiert und weist die Sequenz Nr. 1 (Fig. 3) oder die Sequenz Nr. 2 (Fig. 4) auf. Im Antikörper (V-Domäne) der Se quenz Nr. 1 oder der Sequenz Nr. 2 können ein oder mehrere Aminosäurereste dazukommen, ein oder mehrere Aminosäurereste este können fehlen oder ein oder mehrere Aminosäurereste können ausgetauscht sein.The antibody (V domain) according to the invention, which recognizes cancer-specific mucin, is encoded by the gene mentioned above and has the sequence No. 1 ( FIG. 3) or the sequence No. 2 ( FIG. 4). In the antibody (V domain) of sequence No. 1 or sequence No. 2, one or more amino acid residues may be added, one or more amino acid residues may be missing, or one or more amino acid residues may be exchanged.

Für die gentechnische Herstellung des Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, wird ein Vektor benötigt, der das Gen enthält, welches diesen Antikörper codiert. Der erfin dungsgemäße Vektor enthält, z. B., alle oder einen Teil der Genfragmente der Sequenz Nr. 1 und/oder der Sequenz Nr. 2 und kann das Gen in der Wirtszelle exprimieren. Aus diesem Grund kann der Vektor allgemein bekannte Gensequenzen enthalten, wie z. B. Promotor/Operator zur Expression (Transkription) des Gens, Terminator zur Beendigung der Expression (Transkription) des Gens und Gene zur Amplifikation des erfindungsgemäßen Gens in der/den Wirtszelle(n). Außerdem umfaßt die Erfindung dieje nigen, die das Gen, das die V-Domäne der H-Kette codiert, und das Gen, das die V-Domäne der L-Kette codiert, enthalten. Mit diesem Vektor kann ein Antikörper hergestellt werden, der krebsspezifisches Mucin erkennt, wobei dieser Antikörper die C-Domäne nicht enthält und nur aus der V-Domäne besteht (Fv- Antikörper).For the genetic engineering of the antibody, the cancer-specific mucin, a vector is needed that contains the gene encoding this antibody. The inventor contains vector according to the invention, for. B., all or part of Gene fragments of sequence No. 1 and / or sequence No. 2 and can express the gene in the host cell. For this reason the vector may contain well known gene sequences, such as e.g. B. promoter / operator for expression (transcription) of Gens, terminator for the termination of expression (transcription) of the gene and genes for amplifying the gene according to the invention in the host cell (s). The invention also includes these the gene encoding the H chain V domain and contain the gene encoding the V domain of the L chain. With an antibody can be produced from this vector which recognizes cancer-specific mucin, this antibody the C domain does not contain and only consists of the V domain (Fv- Antibody).

Wenn man außerdem das Genfragment, das die C-Domäne des menschlichen Antikörpers codiert, dem Vektor zufügt, kann man hierdurch einen Vektor erhalten, der die H-Kette oder die L- Kette des chimären Maus-Mensch-Antikörpers herstellen kann. In diesem Fall muß das Gen des menschlichen Antikörpers für dessen C-Domäne der H-Kette so vorliegen, daß das Raster mit dem der erfindungsgemäßen V-Domäne der H-Kette übereinstimmt, und das für die C-Domäne der L-Kette muß so vorliegen, daß das Raster mit dem der erfindungsgemäßen V-Domäne der L-Kette übereinstimmt. Außerdem ist das Genfragment, das die C-Domäne der H-Kette oder der L-Kette des menschlichen Antikörpers codiert, allgemein bekannt (z. B. Kameyama et al., FEBS Lett. 244 (1989), 301).If you also look at the gene fragment that is the C domain of encoded human antibody, adds to the vector, one can hereby obtain a vector which defines the H chain or the L- Chain of the chimeric mouse-human antibody can produce. In in this case the gene of the human antibody for whose C domain of the H chain is present so that the grid with corresponds to that of the H chain V domain according to the invention, and that for the C domain of the L chain must be such that the Grid with that of the L chain V domain according to the invention matches. It is also the gene fragment that is the C domain the H chain or the L chain of the human antibody encoded, generally known (e.g. Kameyama et al., FEBS Lett. 244 (1989), 301).

Zu den erfindungsgemäßen Vektoren zählt der Vektor für die Herstellung des chimären Maus-Mensch-Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, dieser Vektor enthält z. B. alle oder einen Teil der Gene der Sequenz Nr. 1, alle oder einen Teil der Gene der Sequenz Nr. 2, das Gen, das die C- Domäne der H-Kette des menschlichen Antikörpers codiert, und das Gen, das die C-Domäne der L-Kette des menschlichen Anti körpers codiert, wobei die Genfragmente in der Wirtszelle exprimiert werden können. Bei der Konstruktion des Vektors muß das Genfragment des menschlichen Antikörpers für die C-Domäne der H-Kette so vorliegen, daß das Raster mit dem der erfindungsgemäßen V-Domäne der H-Kette übereinstimmt und das für die C-Domäne der L-Kette muß so vorliegen, daß das Raster mit dem der V-Domäne der L-Kette übereinstimmt.The vector for includes the vector for the production of the chimeric mouse human antibody, the recognizes cancer-specific mucin, this vector contains z. B. all or part of the genes of sequence No. 1, all or part of the genes of sequence No. 2, the gene that the C- Domain of the H chain of the human antibody, and the gene that is the C domain of the L chain of human anti body encoded, the gene fragments in the host cell can be expressed. When constructing the vector must the human antibody gene fragment for the C domain of the H chain so that the grid matches that of the V chain of the H chain according to the invention matches and that for the C domain of the L chain must be such that the grid matches that of the V domain of the L chain.

Die Transformation der Wirtszelle durch den Vektor, wie vorstehend, kann nach herkömmlichen Verfahren durchgeführt werden und ist nicht besonders eingeschränkt. Sofern der Vektor z. B. für Escherichia coli geeignet ist, kann E. coli als Wirt verwendet werden, sofern er für Hefe geeignet ist, kann Hefe als Wirt verwendet werden. The transformation of the host cell by the vector, like above, can be carried out by conventional methods are and is not particularly restricted. If the Vector z. B. is suitable for Escherichia coli, E. coli be used as a host if it is suitable for yeast, yeast can be used as a host.

Durch Züchtung der in dieser Art und Weise transformier ten Wirtszellen unter geeigneten Bedingungen können verschie dene Formen von Antikörperproteinen hergestellt werden. Abhän gig von den Vektoren, die verwendet werden, können in der Er findung verschiedene Formen von Antikörperproteinen herge stellt werden, jedoch können bei Auswahl des erfindungsgemäßen Vektors, wie vorstehend beschrieben, ein V-Domäne-Protein in der H-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin er kennt, ein V-Domäne-Protein in der L-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, ein chimäres Protein, be stehend aus der V-Domäne der H-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, und der C-Domäne der H-Kette eines menschlichen Antikörpers, ein chimäres Protein, beste hend aus der V-Domäne der L-Kette eines Antikörpers, der krebsspezifisches Mucin erkennt, und der C-Domäne der L-Kette eines menschlichen Antikörpers, ein chimärer Antikörper, be stehend aus der V-Domäne eines Antikörpers, der krebsspezifi sches Mucin erkennt, und der C-Domäne eines menschlichen Anti körpers, oder dergleichen hergestellt werden. Außerdem kann auch ein Antikörperprotein hergestellt werden, das aus V-Domä nen der H-Kette und der L-Kette eines Antikörpers, der krebs spezifisches Mucin erkennt, besteht.By breeding the transform in this way host cells under suitable conditions can differ forms of antibody proteins are produced. Depend gig of the vectors that can be used in the Er different forms of antibody proteins are provided, however, when selecting the invention Vector as described above, a V-domain protein in the H chain of an antibody, the cancer-specific mucin knows a V-domain protein in the L chain of an antibody, recognizes the cancer-specific mucin, a chimeric protein, be standing from the V domain of the H chain of an antibody, the recognizes cancer-specific mucin, and the C domain of the H chain of a human antibody, a chimeric protein, best from the V domain of the L chain of an antibody, the recognizes cancer-specific mucin, and the C domain of the L chain a human antibody, a chimeric antibody, be standing from the V-domain of an antibody, the cancer-specific mucin recognizes, and the C-domain of a human anti body, or the like. Besides, can an antibody protein can also be produced from V-domain N of the H chain and the L chain of an antibody, the cancer recognizes specific mucin.

Ferner betrifft die Erfindung hypervariable Regionen (CDR) von Maus-Nd2. Konkret handelt es sich hierbei um die un terstrichenen Abschnitte der Basensequenz in der V-Domäne der H-Kette von Nd2 oder in der V-Domäne der L-Kette von Nd2, wie in Fig. 3 oder Fig. 4 dargestellt. Indem man nur diese CDR stehenläßt und andere Abschnitte in z. B. entsprechende Ab schnitte des menschlichen Antikörpers umwandelt, kann man einen humanisierten Antikörpertyp erhalten, der die gleiche Mucin-Bindungsfähigkeit wie Maus-Nd2 aufweist.The invention further relates to hypervariable regions (CDR) of mouse Nd2. Specifically, these are the underlined sections of the base sequence in the V domain of the H chain of Nd2 or in the V domain of the L chain of Nd2, as shown in FIG. 3 or FIG. 4. By leaving only this CDR and other sections in z. B. converts appropriate sections of the human antibody, one can obtain a humanized type of antibody that has the same mucin binding ability as mouse Nd2.

Die nachstehenden Beispiele dienen der Erläuterung der Erfindung, sie sollen in keiner Weise den Umfang der Pa tentansprüche einschränken.The following examples serve to explain the Invention, they are in no way intended to limit the scope of the Pa restrict tent claims.

example 1 Isolation of the Nd2 antibody gene

Zuerst wurde eine Hybridom-DNA von Nd2 nach dem folgenden Verfahren hergestellt. Nach dem Waschen wurden 1×10⁸ Nd2- Hybridome auf RPMI1640 (Ho et al., Cancer Res. 51 (1991), 372) mit PBS gezüchtet, sodann wurden sie in einer Guanidinisothio cyanatlösung suspendiert und anschließend über Cäsiumchlorid geschichtet und ultrazentrifugiert, wodurch die DNA (Über stand) von der RNA (Niederschlag) abgetrennt wurde. Nach der Dialyse wurde der Überstand zur Proteinentfernung und Reini gung nach herkömmlichen Verfahren mit Proteinase und RNase behandelt, wodurch 10 mg DNA gereinigt wurden. Aus dem Nieder schlag wurde mittels Proteinentfernung und Reinigung nach her kömmlichen Verfahren 1 mg RNA gereinigt.First, a hybridoma DNA of Nd2 was made after the following Process manufactured. After washing, 1 × 10⁸ Nd2- Hybridomas on RPMI1640 (Ho et al., Cancer Res. 51 (1991), 372) grown with PBS, then they were grown in a guanidine isothio Suspended cyanate solution and then over cesium chloride layered and ultracentrifuged, whereby the DNA (Via stand) was separated from the RNA (precipitate). After Dialysis became the supernatant for protein removal and reini by conventional methods with proteinase and RNase treated, whereby 10 mg of DNA were purified. From the low The blow was removed using protein removal and cleaning conventional method 1 mg RNA purified.

Sodann wurde eine Genbank nach dem folgenden Verfahren hergestellt. Nach Ligierung von DNA (2 µg), vollständig ge spalten mit dem Restriktionsenzym EcoRI, mit λDASHII (Toyobo Co., Ltd., 1 µg), auch vollständig gespalten mit EcoRI, 24 Stunden bei 4°C, wurden sie mit dem Phagenextrakt-1-Röhrchen des "in-vitro-Packaging-Kit" (Toyobo Co., Ltd.) gemischt und zwei Stunden bei 20°C inkubiert. Anschließend wurden zum Erhalt der Genbank 400 µl SM-Puffer zugefügt.Then a gene bank was created according to the following procedure manufactured. After ligation of DNA (2 µg), completely ge cleave with the restriction enzyme EcoRI, with λDASHII (Toyobo Co., Ltd., 1 µg), also completely cleaved with EcoRI, 24 Hours at 4 ° C, they were with the phage extract 1 tube of the "in vitro packaging kit" (Toyobo Co., Ltd.) mixed and incubated for two hours at 20 ° C. Subsequently, the Received 400 µl of SM buffer added to the gene bank.

Die Isolierung des Antikörpergens wurde folgendermaßen durchgeführt: Escherichia coli SRB (P2) wurde 24 Stunden ge züchtet und sodann in 100 ml TB-Medium, das 0,2% Maltose und 10 mM MgSO₄ enthielt, eingeimpft und gezüchtet, bis eine OD von 0,5 erhalten wurde. Sodann wurden die Bakterien gesammelt und in 20 ml 10 mM MgSO₄ suspendiert. Danach wurde der die Genbank enthaltende SM-Puffer, entsprechend 1×10⁶ Zellen, und P2392 in gleicher Menge gemischt, 30 Minuten bei 37°C inkubiert und auf zehn TB-Agarose-Platten (15 cm Durchmesser), enthaltend 8 mM MgSO₄, plattiert und 24 Stunden bei 37°C inku biert. Am nächsten Tag wurde ein Nylonfilter auf jede Platte gelegt und das Filter nach zweiminütigem Liegenlassen vorsich tig abgenommen. Anschließend wurde das Filter einer Alkalibe handlung unterworfen, indem es in eine Lösung von 0,5 N NaOH und 1,5 M NaCl eingetaucht wurde, sodann wurde es durch Ein tauchen in eine Lösung von 0,5 M Tris-HCl (pH 8,0) und 1,5 M NaCl neutralisiert, in eine Lösung von 0,2% SSC getaucht und danach an der Luft getrocknet. Anschließend wurde unter Ver wendung der J_H-Sonde oder der J_κ-Sonde (Kameyama et al., FEBS- Lett. 244 (1989), 301) die Plaquehybridisierung durchgeführt, wobei ein Clon NdH₄, der mit der J_H-Sonde hybridisierte, und ein Clon Ndκ₁₉, der mit der J_κ-Sonde hybridisierte, isoliert wurden. Das Fragment, das mit der J_H-Sonde hybridisierte, wies 2,5 kBp auf und das Fragment, das mit der J_κ-Sonde hybridi sierte, wies 6,2 kBp auf.The isolation of the antibody gene was carried out as follows: Escherichia coli SRB (P2) was grown for 24 hours and then inoculated into 100 ml of TB medium containing 0.2% maltose and 10 mM MgSO₄ and grown until an OD of 0. 5 was obtained. The bacteria were then collected and suspended in 20 ml of 10 mM MgSO₄. Then the SM buffer containing the gene bank, corresponding to 1 × 10⁶ cells, and P2392 were mixed in the same amount, incubated for 30 minutes at 37 ° C. and plated on ten TB-agarose plates (15 cm in diameter) containing 8 mM MgSO₄ and incubated for 24 hours at 37 ° C. The next day, a nylon filter was placed on each plate and the filter was carefully removed after leaving it there for two minutes. The filter was then subjected to an alkali treatment by immersing it in a solution of 0.5 N NaOH and 1.5 M NaCl, then it was immersed in a solution of 0.5 M Tris-HCl (pH 8, 0) and 1.5 M NaCl neutralized, immersed in a solution of 0.2% SSC and then air-dried. Subsequently, the plaque hybridization was carried out using the J _H probe or the J _κ probe (Kameyama et al., FEBS-Lett. 244 (1989), 301), a clone NdH₄ which hybridized with the J _H probe , and a clone Ndκ₁₉ that hybridized with the J _κ probe were isolated. The fragment that hybridized with the J _H probe was 2.5 kbp and the fragment that hybridized with the J _κ probe was 6.2 kbp.

Die vorstehenden Fragmente wurden jeweils in pBLUEscript eingefügt, wodurch pBLUE/NdH₄ und pBLUE/Ndκ₁₉ erhalten wurden. Außerdem wurde eine Restriktionsenzymkarte der Insert-DNA auf gestellt, um zu bestätigen, daß es sich hierbei um ein Anti körpergen handelte, in dem die isolierten Genfragmente wieder richtig zusammengestellt waren. Fig. 1 zeigt eine Restrik tionsenzymkarte der V-Domäne der H-Kette von Nd2 und Fig. 2 zeigt eine Restriktionsenzymkarte der V-Domäne der L-Kette von Nd2.The above fragments were each inserted into pBLUEscript, whereby pBLUE / NdH₄ and pBLUE / Ndκ₁₉ were obtained. In addition, a restriction enzyme map of the insert DNA was set up to confirm that it was an anti-body gene in which the isolated gene fragments were correctly put together again. Fig. 1 shows a restriction enzyme map of the V domain of the H chain of Nd2 and Fig. 2 shows a restriction enzyme map of the V domain of the L chain of Nd2.

Example 2 Determination of the base sequence of the Nd2- Antibody

Die Basensequenzen der V-Domäne der H-Kette und der V-Do mäne der L-Kette des Nd2-Antikörpers, isoliert nach dem in Beispiel 1 dargestellten Verfahren, wurden folgendermaßen be stimmt.The base sequences of the V domain of the H chain and the V-Do male of the L chain of the Nd2 antibody, isolated after the in Example 1 procedures were as follows Right.

Nach Einführung von pBLUE/NdH₄ bzw. pBLUE/Ndκ₁₉ in Esche richia coli Stamm MV1184 wurde E. coli gezüchtet und nach einem herkömmlichen Verfahren einzelsträngige DNA hergestellt, die sodann als Matrize für die Sequenz verwendet wurde. Für die Sequenz wurde das "Sequence Version 2.0 DNA Sequencing Kit" (Toyobo Co., Ltd.) eingesetzt, wobei die Basensequenz des Gens der V-Domäne der H-Kette oder der L-Kette des Nd2-Anti körpers bestimmt wurde. Die Ergebnisse von pBLUE/NdH₄ (V- Domäne der H-Kette) sind in Fig. 3 dargestellt, die Ergebnisse von pBLUE/Ndκ₁₉ (V-Domäne der L-Kette) sind in Fig. 4 darge stellt.After the introduction of pBLUE / NdH₄ or pBLUE / Ndκ₁₉ in ash richia coli strain MV1184, E. coli was grown and single-stranded DNA was prepared by a conventional method, which was then used as a template for the sequence. For the sequence, the "Sequence Version 2.0 DNA Sequencing Kit" (Toyobo Co., Ltd.) was used, the base sequence of the gene of the V domain of the H chain or the L chain of the Nd2 antibody being determined. The results of pBLUE / NdH₄ (V domain of the H chain) are shown in Fig. 3, the results of pBLUE / Ndκ₁₉ (V domain of the L chain) are shown in Fig. 4 Darge.

Example 3 Production of the chimeric Nd2 mouse human anti body

Die Insert-DNAs von pBLUE/NdH₄ und pBLUE/Ndκ₁₉ wurden in den chimären Maus-Mensch-Typ-H-Kette-Expressionsvektor pSV2- HG1gpt bzw. den chimären Maus-Mensch-Typ-L-Kette-Expressions vektor pSV2-HCκneo (Kameyama et al., FEBS Lett. 244 (1989), 301) eingeführt, wodurch pSV2-HG1gpt/NdH₄ und pSV2-HC_κ- neo/Ndκ₁₉ hergestellt wurden. Fig. 5 zeigt eine Restrik tionsenzymkarte von pSV2-HG1gpt/NdH₄, Fig. 6 zeigt eine Re striktionsenzymkarte von pSV2-HC_κneo/Ndκ₁₉.The insert DNAs from pBLUE / NdH₄ and pBLUE / Ndκ₁₉ were inserted into the chimeric mouse-human type H chain expression vector pSV2-HG1gpt and the chimeric mouse-human type L chain expression vector pSV2-HCκneo ( Kameyama et al., FEBS Lett. 244 (1989), 301), whereby pSV2-HG1gpt / NdH₄ and pSV2-HC _κ - neo / Ndκ₁₉ were produced. Fig. 5 shows a restriction enzyme map of pSV2-HG1gpt / NdH₄, Fig. 6 shows a restriction enzyme map of pSV2-HC _κ neo / Ndκ₁₉.

Die Einführung des Expressionsvektors in die Zelle wurde folgenermaßen durchgeführt: Nach dem Waschen wurden 1×10⁷ SP2/0-Zellen unter Verwendung von DMEM-Medium, enthaltend 10% Rinderserum mit PBS, nach einem herkömmlichen Verfahren gezüchtet, anschließend wurden sie in vorher auf 4°C gekühl ter 0,4 ml PBS suspendiert. Diese Suspension wurde mit einer Lösung gemischt, in der jeweils 50 µg pSV2-HG1gpt/NdH₄ oder pSV2-HC_κneo/Ndκ₁₉ in 0,4 ml PBS gelöst waren und die auf Eis gekühlt war, das Gemisch wurde zehn Minuten auf Eis gehalten, unter Verwendung des "Gene Pulser I" (Biorad Co.) wurde ein Puls von 1100 V und 25 Mikrofarad angelegt. Nach weiteren zehn Minuten auf Eis wurde das Gemisch mit Medium gewaschen und in einem herkömmlichen Medium weiter gezüchtet. Drei Tage später wurde das Medium gegen Selektivmedium (das zusätzlich zum her kömmlichen Medium 0,8 mg/ml G418 (Gypco Co.) enthielt) ausge tauscht und das Gemisch über eine Platte mit 96 Vertiefungen verteilt. Sieben Tage und 14 Tage später wurden die Medien ausgetauscht und 21 Tage später wurde der Titer des chimären Antikörpers im Überstand gemessen, um aus 156 Clonen positive Clone zu selektieren. Schließlich wurde Clon HCNd8A mit der höchsten Expression selektiert.The expression vector was introduced into the cell as follows: After washing, 1 × 10⁷ SP2 / 0 cells were grown using a DMEM medium containing 10% bovine serum with PBS by a conventional method, then they were previously grown to 4 ° C cooled ter 0.4 ml PBS suspended. This suspension was mixed with a solution in which 50 μg pSV2-HG1gpt / NdH₄ or pSV2-HC _κ neo / Ndκ₁₉ were dissolved in 0.4 ml PBS and which was cooled on ice, the mixture was kept on ice for ten minutes, using the "Gene Pulser I" (Biorad Co.) a pulse of 1100 V and 25 microfarads was applied. After an additional ten minutes on ice, the mixture was washed with medium and further grown in a conventional medium. Three days later, the medium was replaced with selective medium (which contained 0.8 mg / ml G418 (Gypco Co.) in addition to the conventional medium) and the mixture was distributed over a 96-well plate. Media was changed seven days and 14 days later, and 21 days later the titer of the chimeric antibody in the supernatant was measured to select positive clones from 156 clones. Finally, clone HCNd8A with the highest expression was selected.

Example 4 Binding ability of the chimeric Nd2 mouse human Antibody to mucin

Die Bestimmung des Titers des chimären Antikörpers wurde folgendermaßen durchgeführt: Eine Platte, die mit Anti-Mensch- IgG1 beschichtet war, wurde mit 1% BSA und PBS blockiert. Der Überstand nach der Züchtung wurde zugefügt und die Platte län ger als zwei Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach dem Waschen der Platte wurde HRP-gekoppeltes Anti-Mensch-Ig_κ zugefügt und die Platte länger als zwei Stunden bei Raumtempe ratur stehengelassen. Schließlich wurde nach dem Waschen der Platte ein Färbereagens (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) zugegeben und das Ausmaß der Färbung mit dem "Immunoreader" (MPR-A4, Tosoh Corp.) gemessen. Das Ergebnis zeigte, daß HCNd8A in dem nach der Züchtung erhaltenen Überstand etwa 10 µg/ml des chimären Antikörpers produziert hatte.The chimeric antibody titer was determined as follows: A plate coated with anti-human IgG1 was blocked with 1% BSA and PBS. The supernatant after growth was added and the plate was left at room temperature for more than two hours. After washing the plate, HRP-coupled anti-human Ig _{κ was} added and the plate was left to stand for more than two hours at room temperature. Finally, after washing the plate, a coloring reagent (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) was added and the extent of the coloring was measured with the "immunoreader" (MPR-A4, Tosoh Corp.). The result showed that HCNd8A had produced about 10 µg / ml of the chimeric antibody in the supernatant obtained after the cultivation.

Die Bindungsfähigkeit des hergestellten chimären Nd2-An tikörpers an Mucin wurde folgendermaßen bestimmt: Eine Platte mit 96 Vertiefungen, die mit dem aus dem Pankreaskrebs- Zellstamm SW1990 (Ho et al., Cancer Res. 51 (1991), 372) isolierten Mucin nach einem herkömmlichen Verfahren beschichtet worden war, wurde mit der Probe versetzt und länger als zwei Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach dem Waschen der Platte wurde HRP-gekoppeltes Anti-Mensch- Ig_κ zugefügt und das Ganze länger als zwei Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach dem Waschen der Platte wurde das Färbereagens (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) zugegeben und das Ausmaß der Färbung mit dem "Immunoreader" (MPR-A4, Tosoh Corp.) gemessen.The binding capacity of the chimeric Nd2 antibody produced to mucin was determined as follows: A 96-well plate containing the mucin isolated from the pancreatic cancer cell strain SW1990 (Ho et al., Cancer Res. 51 (1991), 372) after a was coated, the sample was added and left to stand at room temperature for more than two hours. After washing the plate, HRP-coupled anti-human Ig _{κ was} added and the whole was left to stand at room temperature for more than two hours. After washing the plate, the coloring reagent (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) was added and the extent of the coloring was measured with the "immunoreader" (MPR-A4, Tosoh Corp.).

Die Ergebnisse sind in Fig. 7 dargestellt. Wie aus Fig. 7 ersichtlich, besaß der nach der Züchtung von HCNd8A im Über stand enthaltene chimäre Antikörper die Bindungsfähigkeit an Mucin.The results are shown in FIG. 7. As can be seen from FIG. 7, the chimeric antibody contained in the supernatant after the cultivation of HCNd8A had the binding ability to mucin.

Example 5 Immunostaining of human pancreatic cancer tissue using the chimeric Nd2 mouse Human antibody

Die Immunfärbung von menschlichem Pankreaskrebsgewebe un ter Verwendung des chimären Nd2-Antikörpers wurde nach dem ABC-Verfahren (Yuan et al., Cancer Res. 45 (1989), 6179) fol gendermaßen durchgeführt: Zuerst wurde die intrinsische Per oxidase-Aktivität mit 1% Wasserstoffperoxid gehemmt. Danach wurde das Gewebe zu dem nach der Züchtung von HCNd8A erhaltenen Überstand verdünnt mit 5% Kaninchenserum, gegeben, und nacheinander wie üblich HRP-markiertem Anti-Mensch-Ig_κ und ABC-Reagens (Vector Laboratories) zugegeben. Zum Vergleich wurde die Immunfärbung mit dem Maus-Nd2-Antikörper durchgeführt.The immunostaining of human pancreatic cancer tissue using the chimeric Nd2 antibody was carried out according to the ABC method (Yuan et al., Cancer Res. 45 (1989), 6179) as follows: First, the intrinsic peroxidase activity was carried out at 1% Inhibited hydrogen peroxide. The tissue was then added to the supernatant obtained after culturing HCNd8A, diluted with 5% rabbit serum, and HRP-labeled anti-human Ig _κ and ABC reagent (Vector Laboratories) were added successively as usual. For comparison, immunostaining with the mouse Nd2 antibody was carried out.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 dargestellt. Wie aus Ta belle 1 ersichtlich, zeigten der chimäre Nd2-Antikörper und der Maus-Nd2-Antikörper ein ähnliches Muster. Dies beweist, daß die Antigen-Bindungsfähigkeit des chimären Nd2-Antikörpers ähnlich ist wie die des Maus-Nd2-Antikörpers. The results are shown in Table 1. As from Ta belle 1, the chimeric Nd2 antibody and the mouse Nd2 antibody has a similar pattern. This proves that the antigen binding ability of the chimeric Nd2 antibody is similar to that of the mouse Nd2 antibody.

Tabelle 1 Table 1

Mit den erfindungsgemäß bereitgestellten Genen, die die V-Domänen der H-Kette und der L-Kette eines Antikörpers codieren, der krebsspezifisches Mucin erkennt, und ferner mit den Mitteln und dem Verfahren zur Herstellung des Antikörpers unter Verwendung gentechnischer Methoden ist es möglich, den Antikörper mit verschiedenen zusätzlichen Funktionen in großen Mengen herzustellen. Diese sind für die Analyse der physiolo gischen Rolle von krebsspezifischem Mucin wichtig und spielen bei der Entwicklung von Medikamenten und Diagnostika gegen Krebs eine bedeutende Rolle.With the genes provided according to the invention, the V domains of the H chain and the L chain of an antibody code that recognizes cancer-specific mucin, and also with the means and the method for producing the antibody using genetic engineering methods, it is possible to Antibodies with various additional functions in large To produce quantities. These are for the analysis of the physiolo important role of cancer-specific mucin and play in the development of drugs and diagnostics against Cancer plays an important role.

Claims

1. V-domain of the H chain of an antibody that recognizes cancer-specific mucin, containing an amino acid sequence as shown in sequence no. 1.

2. gene that is the V domain of the H chain of the antibody that recognizes cancer-specific mucin, coded according to claim 1.

3. The gene of claim 2 which contains a base sequence, such as shown in sequence No. 1.

4. Vector containing the DNA of claim 2, wherein the Gene can be expressed in a host cell.

5. Method for producing the V-domain of the H chain one Antibody that recognizes cancer-specific mucin send the cultivation of the vector according to claim 4 transformed host cells.

6. V-domain of the L chain of an antibody which recognizes cancer-specific mucin, containing an amino acid sequence, as shown in sequence no. 2.

7. gene which is the V domain of the L chain of the antibody which recognizes cancer-specific mucin, coded according to claim 6.

8. The gene of claim 7 which contains a base sequence, such as shown in sequence No. 2.

9. A vector containing the DNA of claim 7, which Gene can be expressed in a host cell.

10. Method for producing the V domain of an L chain Antibody that recognizes cancer-specific mucin send the cultivation of the vector according to claim 9 transformed host cells.

11. Vector containing both the gene of claim 2, the encodes the V domain of the H chain of an antibody that cancer-specific mucin recognizes, as well as the gene Claim 7, which is the V domain of the L chain Encoded antibody that recognizes cancer-specific mucin, these genes can be expressed in a host.

12. The vector of claim 11, further containing a gene that the V domain of the H chain of a human Antibody and a gene encoding the V domain of the L- Coded chain of a human-derived antibody.

13. A method for producing a chimeric antibody which recognizes cancer-specific mucin, including breeding of host cells using the vector of claim 12 are transformed.