DE1937693A1

DE1937693A1 - Process for the production of yeast

Info

Publication number: DE1937693A1
Application number: DE19691937693
Authority: DE
Inventors: Rutgers Frederik Derk Herman; Rutgers Arend Joan; Deley Jozef Theophiel
Original assignee: Texaco Belgium NV SA
Current assignee: Chevron Belgium NV
Priority date: 1968-07-26
Filing date: 1969-07-24
Publication date: 1970-01-29
Also published as: IT1047878B; NL6911509A; ES369883A1; BE736323A; FR2013797A1; GB1204646A

Description

S. A. Texaco Belgium η., ν. 'ti tun inceSA Texaco Belgium η., Ν. 'ti do ince

_Ί . I *. JULI 1303 _Ί . I *. JULY 1303

Brüssel, BelgienBrussels Belgium

Process for the production of yeast

Die Erfindung betrifft die Herstellung von Nährhefe unter Verwendung von Kohlenwasserstoffen als Kohlenstoffquelle und insbesondere die Herstellung der Hefearten Candida guilliermondii oder Candida rugosa, indem man sie unter kontrollierten wachstumsfördernden Temperatur- und p_H-Wert-Bedingungen in Gegenwart eines KohlenwasserstoffSubstrats und eines säuerstoffhaltigen Gases in einem Nährmedium hält.The invention relates to the production of nutritional yeast using hydrocarbons as a carbon source and in particular the preparation of the yeast species Candida guilliermondii or Candida rugosa by placing them under controlled growth promoting temperature and _pH value conditions in the presence of a hydrocarbon substrate and a säuerstoffhaltigen gas in a Holds nutrient medium.

Hefen enthalten bekanntlich beträchtliche Mengen von B-Komplex-Vitaminen, Protein und Mineralstoffen, und daher ist nicht verwunderlich, dass man in neuerer Zeit der Verwendung von Hefe als ergänzendem Nahrungsmittel für Menschen und Tiere Beachtung geschenkt hat. Saccharomyces cerevisiae ist eine solche Hefeart, die als Nähr- und Futterhefe verwendet worden ist. Sie fällt als Nebenprodukt bei der Ale- und Bierzubereitung an. Eine weitere für Nährzwecke verfügbare Trockenhefe ist die Torulahefe, die eine Torulopsis utilis-Rasse darstellt.Yeasts are known to contain significant amounts of B-complex vitamins, Protein and minerals, and therefore it is not surprising that one has been using yeast in recent times as a complementary food for humans and animals. Saccharomyces cerevisiae is one such yeast which has been used as nutritional and fodder yeast. It is a by-product of ale and beer preparation. Another The dry yeast available for nutritional purposes is torula yeast, which represents a Torulopsis utilis breed.

Hefen stellen zwecks Wachstums bestimmte Ernährungsbedingungen, zu denen ausnutzbare Quellen für Kohlenstoff und Stickstoff, gewisse anorganische Salze und manchmal auch gewisse Wachstumsfaktoren und zwar für gewöhnlich Vitamine vom B-Komplextyp, gehören. Yeasts provide certain nutritional conditions for growth, which include exploitable sources of carbon and nitrogen, certain inorganic salts and sometimes certain growth factors usually vitamins of the B complex type.

Man kann Hefe mit Hilfe von Kohlehydraten als Kohlenstoffquelle züchten, wpfür man insbesondere oft billige Fabrikationsabfallprodukte, darunter beispielsweise gehopfte Malzwürze, Melassen aus der Rohr-, Rüben- und Maiszuckergewinnung sowie Sulfitab-One can make yeast with the help of carbohydrates as a carbon source breed, for which cheap industrial waste products are often used, including, for example, hopped malt wort, molasses from cane, beet and corn sugar production as well as sulphite waste

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laugen aus der Papierfabrikation für die Nährhefe^ewinnung verwendet hat. Neuerdings hat sich das Interesse auf die Verwendung von Kohlenwasserstoffen als Kohlenstoffquelle konzentriert. So offenbart beispielsweise die amerikanische Patentschrift 3 193 390, dass eine spezielle Hefeart, die Gondida lipolytiea, erfolgreich auf einem Kohlenwasserstoffsubstrat wächst.lyes from paper manufacture are used for nutritional yeast production Has. Lately there has been interest in its use concentrated of hydrocarbons as a carbon source. For example, US Pat. No. 3,193,390 discloses that a special type of yeast, Gondida lipolytiea, grows successfully on a hydrocarbon substrate.

Man kann keinesfalls alle Hefen dazu bringen, Kohlenstoff aus Kohlenwasserstoffen zu assimilieren, und jene, bei denen dies gelingt, weisen oftmals ganz verschiedene viachstuaisraten auf. Eine erfolgreiche Hefeproduktion fabrikatorischen Ausmasses verlangt also die Auffindung und Adaptierung einer Hefeart, die sich mit lohnens viert er Geschwindigkeit und hoher Ausbeute auf ψ einem Kohlenwasserstoffsubstrat vermehrt.It is by no means possible to induce all yeasts to assimilate carbon from hydrocarbons, and those in which this succeeds often have very different growth rates. A successful yeast production fabrikatorischen extent therefore requires the identification and adaptation of a yeast species, with extremely worthwhile it's fourth-speed and high yield at ψ a hydrocarbon substrate multiplied.

Das Wesen der Erfindung besteht nun darin, dass man je eine von zwei bestimmten Hefearten unter aeroben Bedingungen und eingeregelten Temperatur- und p_uWert-3edingungen mit einer wässrigenThe essence of the invention is that one of two specific yeast types under aerobic conditions and controlled temperature and p _u value 3 conditions with an aqueous

Nährstofflösung und einem Kohlenwasserstoffsubstrat in Kontakt bringt, das paraffinische Kohlenwasserstoffe enthält.Nutrient solution and a hydrocarbon substrate in contact brings that contains paraffinic hydrocarbons.

Taxonomisch ausgedrückt gehören diese erfindungsgemäss verwendeten Hefen zur Familie Cryptococcaceae, tJnterfamilie Cryptococcoideae, Gattung Candida und Art guilliermondii oder rugosa.In taxonomic terms, these are used according to the invention Yeasts belonging to the family Cryptococcaceae, subfamily Cryptococcoideae, Genus Candida and species guilliermondii or rugosa.

k Die beiden erfindungsgemäss hergestellten Hefearten wachsen auf einem Kohlenwasserstoffsubstrat raifc wirtschaftlich interessanter Schnelligkeit und Ausbeute. Da beide Arten genügend viel Protein, Mineralstoffe und Vitamine insbesondere vom B-Kmplex-Typ enthalten, kann man sie beide jenen Hefearten zuordnen, die man ernsthaft als Nährstoffergänzung für die menschliche Ernährung oder als Tierfutter in Betracht gezogen hat.k The two types of yeast produced according to the invention grow on a hydrocarbon substrate would be economically more interesting Speed and yield. Because both types are enough Protein, minerals and vitamins, especially of the B-complex type contain, they can both be assigned to those types of yeast that are seriously considered to be nutritional supplements for human beings Considered diet or as animal feed.

Beim erfindungsgemäss en Verfahren benutzt man. zur Züchtung dieser beiden Candida-Hefearten eine an ParafflnkohlenwasserstoffenIn the process according to the invention, one uses. to breed this both Candida yeasts one of paraffin hydrocarbons

909886/02S?909886 / 02S?

iAD ORJGiNAtiAD ORJGiNAt

reiehe Kohlenwasserstoffquellej der ein wässriges Medium beigegeben wird, das Stickstoff, Wachstumsfaktoren und anorganischen Nährstoff liefert. Fernerhin ist Belüftung erforderlich, und es muss ein saurer p„-Wert aufrechterhalten werden, um das Hefewachstuin zu begünstigen.A series of hydrocarbon sources are added to an aqueous medium will, the nitrogen, growth factors and inorganic Provides nutrient. Ventilation is also required, and so is it an acidic p “value must be maintained in order to reduce the yeast growth rate to favor.

Die verschiedenen erfindungsgemäss benutzten Hefearten kann man von irgendeiner der verschiedenen Mikroorganismuskultur-Samrnlungen beziehen, die überall auf der Welt und beispielsweise in Ländern wie den Vereinigten Staaten von Amerika, Prankreich und den Niederlanden unterhalten werden. Candida guilliermondii und Candida rugosa kannte man zwar schon als Candidaarten, wusste aber bisher noch nichts bezüglich ihrer Fähigkeit, Erdöl als Kohlenstoffquelle auswerten zu können.The various types of yeast used according to the invention can be from any of the various microorganism culture collections in use around the world and in, for example Countries like the United States of America, France, and the Netherlands are entertained. Candida guilliermondii and Candida rugosa was already known as a species of Candida, but so far nothing was known about its ability to act as petroleum To be able to evaluate the carbon source.

Für die Erfindungsdurchführung genügen im allgemeinen alle paraffinkohlenwasserstoffreichen Kohlenwasserstoffeingabestocks, unter ihnen verdienen aber jene besonderen Vorzug, die besonders reich an Nornialparaffinen sind. Somit sind verflüssigtes Paraffinwachs, Gatsch und andere paraffinmaterialreiche Raffinerieströine ideale Eingabestocks. Als Kohleristoffquelle eignen sich fernerhin Rohöle, darunter besonders vorteilhaft die paraffinischen, obwohl auch Mischbasisrohöle brauchbar sind. Asphaltische Rohstoffe sind durchweg unerwünscht. Als Nährquellen eignen sich von den paraffinischen Rohölen beispielsweise Tobias (Angola), Lafitte-Paradis _s Gulf Coast Light sowie Golden Meadow und von Misehbasis-Rohölen beispielsweise South Louisiana light regular sowie Texas-North New Mexico sour. Asphaltische Rohöle wie z.B. Hawkins sind weniger erwünscht. Als für die Erfindung ausnutzbares Kohlenstoffsubstrat eignen sich fernerhin auch Destillatströme, wie z.B. Kerosene, Gasöle, Mitteldestillate sowie Heizöle. In general, all paraffin-rich hydrocarbon input stocks are sufficient for carrying out the invention, but among them those which are particularly rich in normal paraffins deserve special preference. Liquefied paraffin wax, slack wax and other refinery fluids rich in paraffin materials are therefore ideal input sticks. Also suitable as a source of carbon are crude oils, including particularly advantageously the paraffinic ones, although mixed base crude oils can also be used. Asphaltic raw materials are consistently undesirable. Suitable nutrient sources of the paraffinic crude oils are, for example, Tobias (Angola), Lafitte-Paradis _s Gulf Coast Light and Golden Meadow, and of miseh base crude oils, for example, South Louisiana light regular and Texas-North New Mexico sour. Asphaltic crude oils such as Hawkins are less desirable. Furthermore, distillate streams such as kerosene, gas oils, middle distillates and heating oils are also suitable as carbon substrates that can be used for the invention.

9098 85/02 979098 85/02 97

Zur Förderung des Hefewachs turns- bedarf es bestimmter Nährstoffe, nämlich im allgemeinen, wie bereits gesagt, einer verwertbaren Kohlenstoffquelle, einer verwertbaren Stickstoffquelle, gewisser anorganischer Salze sowie oftmals auch bestimmter organischer Verbindungen, der sogenannten Wachstumsfaktoren. Sie alle müssen in ausreichender Konzentration und in einer für das Ve*- Hefewachsturn geeigneten Umwelt vorhanden sein. Zu letzterer gehören "Voraussetzungen wie bestimmter p_H-Wert, in speziellem, engem Bereich gehaltene Temperatur sowie zur Verfügung stehender, verwertbarer Sauerstoff. :To promote the yeast growth, certain nutrients are required, namely in general, as already said, a usable carbon source, a usable nitrogen source, certain inorganic salts and often also certain organic compounds, the so-called growth factors. They must all be present in sufficient concentration and in an environment suitable for Ve * yeast growth. To the latter include "certain conditions, such as _pH value, held in special, narrow range of available temperature and, usable oxygen.:

Beim erfindungsgemässen Verfahren wird, wie bereits gesagt, P die Nährkohlenstoffquelle von den paraffinischen Kohlenwasserstoffen geliefert. Die Stickstoffquelle unddie>übrigen, erforderlichen Materialien werden in eine wässrige Nährstofflösung eingegeben. Als brauchbar gefundene Kulturmedien enthalten einen Erdölkohlenwasserstoff als Kohlenstoffquelle, eine Stickstoffquelle für gewöhnlich in Form von ammoniakalischem Stickstoff und anorganischen Nährstoff, wie er von Mineralsalzen, wie Natriumchlorid, Calciumchlorid,'Magnesiumsulfat und saurem Kaliumphosphat geliefert wird. Zwecks Aufrechterhaltung des gewünschten pjj-VJertes gibt man für gewöhnlich noch eine Puffersubstanz, z.B. Calciumearbcriat, hinzu. Oftmals hängt das Hefewachstum von der Zugabe von Wachstumsfaktoren und zwar für gewöhnlich Vitamik nen ab, zu denen beispielsweise Biotim, Thiamin, Pantothensäure, Inosit, Nicotinsäure und Pyridoxin gehören. Man führt sie in kleiner Menge als Destillat, Lösung oder Hefeextrakt zu.In the method according to the invention, as already said, P the nutrient carbon source from paraffinic hydrocarbons delivered. The nitrogen source and the other necessary Materials are placed in an aqueous nutrient solution. Culture media found useful contain one Petroleum hydrocarbon as a carbon source, a nitrogen source usually in the form of ammoniacal nitrogen and inorganic nutrients such as those obtained from mineral salts such as sodium chloride, calcium chloride, magnesium sulfate and potassium acid phosphate is delivered. In order to maintain the desired pjj value, a buffer substance is usually added, e.g. calcium carbonate added. Often times the yeast growth depends on the addition of growth factors, usually vitamins These include, for example, biotime, thiamine, pantothenic acid, inositol, nicotinic acid and pyridoxine. You lead them in small amount as distillate, solution or yeast extract.

Die anorganischen Nährstoffsubstanzen lassen sich in eine Makro- und eine Mikrogruppe unterteilen, von denen für die erstere ein etwa 200 fach höherer Bedarf als für die letztere besteht. Zu den Makronährstoffen gehören Kalium, Magnesium, Phosphor und Schwefel lind zu den letzteren für gewöhnlich Eisen, Kupfer und Zink. ■■>■■■;'- The inorganic nutrient substances can be divided into a macro group and a micro group, of which there is a need for the former that is about 200 times higher than for the latter. Macronutrients include potassium, magnesium, phosphorus, and sulfur, and the latter usually include iron, copper, and zinc. ■■>■■■;'-

- 5 -909885/0297- 5 -909885/0297

&4D ORIGINAL& 4D ORIGINAL

Um den Verlust an flüchtigen Komponenten zu verringern, erviies sich eine 165° bis 3^3°C - Rohölfraktion als besonders geeignet, und ausserdem sind auch Dieselöle brauchbare Kohlenstoffquellen. Die Hefe wächst zwar gut auf Mischungen aus reinen C- - C^p Norrualparaffinen einschliesslich einer Cr₁ - C_no- oder einerIn order to reduce the loss of volatile components, a 165 ° to 3 ^ 3 ° C crude oil fraction has proven to be particularly suitable, and diesel oils are also useful sources of carbon. The yeast grows well on mixtures of pure C- - C ^ p norrual paraffins including a Cr ₁ - C _no - or a

ö Xc:ö Xc:

- C- C

-Mischung, die bevorzugten Norrnalparaffinwischungen-Mixture, the preferred normal paraffin wipes

"sind aber jene des C-,^ - C^-Bereichs oder einer Fraktion daraus, z.B. eine C-^ - C-^-Misehung."but are those of the C -, ^ - C ^ range or a fraction of it, E.g. a C- ^ - C- ^ - misehing.

Srfahrungsgernäss können dem erfindungsgemäss benutzten Kulturmedium reine Vitamine oder Hefeextrakt als Wachstumsfaktoren zugesetzt werden. Solche Zusätze sind aber nicht entscheidend, und die Candida guilliermondii kann sogar ohne sie gezüchtet werden, da sie offenbar während der Fermentation ihre eigenen Wachstumsfaktoren erzeugt.Experience has shown that the culture medium used according to the invention pure vitamins or yeast extract are added as growth factors. Such additives are not decisive, and the Candida guilliermondii can even be grown without them, since they appear to be on their own during fermentation Generated growth factors.

Das Viachstum der beiden Hefearten wird bei einem p„-Wert vonThe growth of the two types of yeast is at a p "value of

n.n.

4 bis β gefördert, wobei der p~-Wert 5 bevorzugt wird. Da während des Hefedachstums Säuren entstehen, muss der pv-Uert ständig oder periodisch nachgeregelt werden. Dies kann, durch Zugabe von Natriumhydroxyd oder durch Verwendung einer puffersubstanz, beispielsweise kleiner Marmorstückchen,, geschehen, Erfahrungsgemass sind aber Zugaben von Ammoniumhydroxyd am günstigsten, da diese Base nicht nur den optimalen p„-Wert aufrechterhält, son-4 to β promoted, the p ~ value 5 being preferred. Since during the yeast growth produces acids, the pv-Uert must constantly or adjusted periodically. This can be done by adding sodium hydroxide or by using a buffer substance, For example, small pieces of marble, happen, experience has shown but additions of ammonium hydroxide are the cheapest, since this base not only maintains the optimal p "value, but

riri

dem gleichzeitig auch noch den. Nälarstickstoffbedarf decken kann» Beim erfind^ngsgemässen, Verfahren erzielt man das günstigste Hef ewachsfcum, wenn, man die Temperatur. im Fermentationsgef ass zwischen 15° und j50° und vorzugsweise zwisahen lS° und 22⁰C hält.that at the same time also that. Can cover the need for nitrogenous nitrogen. With the process according to the invention, the most favorable yeast growth rate is achieved if the temperature is used. in Fermentationsgef ass between 15 ° and J50 ° and preferably zwisahen lS ° and holds 22 ⁰ C.

Bis beiden er^nd^tHgsgeßiäss feenatztäSti HsfjeiaasfeeiK. benötigen für günstigstes Wachsfeun asr-otoe Beäinpiiigect. Man kann beispielsweise Luft iriitt dem VfachstumsiaeäiMm dadureh in, Kötjtaikt briHgea^ class man s ie durch einen am Boden des Permeföta^iöiisgfefSsses an-Zerstäub er eiiiÄhHrfc uad in Form feteesE¹ BlSsßtoejt durchUntil both he ^ nd ^ tHgsgeßiäss feenatztäSti HsfjeiaasfeeiK. need asr-otoe Beäinpiiigect for the cheapest wax fairy. For example, air can be supplied to the VfachstumsiaeäiMm dadureh in, Kötjtaikt briHgea ^ class it can be eiiiÄhHrfc uad in the form of feteesE ¹ blow toejt through an atomizer at the bottom of the permeföta ^ iöiisgfsses

das ϋ 1-W ass er-V/achstuiüs medium aufsteigen lässt. Statt dessen bringt erfahrungsgemäss auch schon heftiges Durchrühren des Gefässinhalts für die Wachs turns förderung ausreichend viel Luft mit dem Nährraediun; in Berührung, sofern man über ihm genügend Luftraum.lässt. In grossen Fermentationsgefässen benötigt man zur ausreichenden Belüftung möglicherweise beide Massnahnien. An sich kann man mit Luft oder Sauerstoff arbeiten. Da letzterer aber keinen besonderen Vorteil liefert und teurer ist, stellt Luft das bevorzugte sauerstoffhaltige Gas dar.the ϋ 1-W ater-V / achstuiüs medium lets rise. Instead of this Experience has shown that even vigorous stirring of the contents of the container brings enough air for the wax turns to be conveyed with the nutrient; in touch, provided there is enough of it Airspace. Leaves. In large fermentation vessels you need for adequate ventilation possibly both measures. At you can work with air or oxygen. Since the latter but does not provide any particular benefit and is more expensive, air is the preferred oxygen-containing gas.

Grundsätzlich lässt sich das erfindungsgemasse Verfahren ansatzweise, kontinuierlich oder beides kombiniert durchführen, jedoch bestimmt oftmals die für maximale. Hefeerzeugung erforderliche Wachs■ turns periode die jeweils angewendete Verfahrens v/eise. Erfahrungsgemäss erzielt man bei beiden Hefearten maximales Wachstum nach drei- bis fünftägiger Ansatzfermentation. Am Ende dieser Periode kann man die Hefe in irgendwie geeigneter Weise vom Restöl.und Wachstumsmedium abtrennen, wofür sich Abzentrifugieren als besonders günstig erwiesen hat. Ebenso erfolgreich ist auch Einfrieren der Gesamtmischung und anschiiessendes Zentrifugieren» Die abgeschiedene Hefe wird dann mit Wasser von Cl- und Mediums rest en. befreit und schliesslich im WarrnluftstroRi getrocknet. Sie liegt dann als Feuchtkuchen oder Trockenpulver vor und kann als Ergänzungsnahrung für Mensch und Tier verwendet werden.In principle, the method according to the invention can be carried out batchwise, continuously or both in combination, however often determined for maximum. Yeast production required Wax ■ turns period the method used in each case. According to experience Maximum growth is achieved with both types of yeast after three to five days of initial fermentation. At the end of this During the period, the yeast can be separated from the residual oil and growth medium in any suitable way, which is done by centrifuging has proven to be particularly favorable. Is equally successful also freezing of the entire mixture and subsequent centrifugation » The separated yeast is then mixed with water from Cl- and medium residues. freed and finally dried in the warning air duct. It is then available as a wet cake or dry powder and can be used as a supplement for humans and animals will.

Nachstehend wird die Erfindung an Hand einiger Beispiele näher erläutert, ohne auf sie beseta*i&i£t zu sein.The invention is explained in more detail below with the aid of a few examples explained without being beseta * i & i £ t.

Vom Central Bureau vöor Sehiiaateleulture, DeIft (Niederlande) insgesamt 66 Hefeartem bezogen, unter denen sich acht Obtained a total of 66 types of yeast from Central Bureau vöor Sehiiaateleulture, DeIft (Netherlands), eight of which

■- j i ■ - ji

Das Sichten der Hefearten geschah In folgender Welse; Petrischalen wurden je mit durch Agar-Agar verfestigtem, wässrigem Wachs turns medium folgender Zusammensetzung gefüllt:The sifting of the yeast species happened in the following catfish; Petri dishes were each with agar-solidified, aqueous Wax turns medium filled with the following composition:

Table I.

Wässriges WachsturnsmediumAqueous growth medium g/1000 mlg / 1000 ml A. Makro τ NährstoffeA. Macro τ nutrients 55 (NH₄)₂S0₄ (NH ₄ ) ₂ S0 ₄ ■ ι■ ι KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 0,50.5 MgSO₄ZfH₂OMgSO ₄ ZfH ₂ O 0,10.1 CaCl₂.2H₂OCaCl ₂ .2H ₂ O 0,10.1 NaClNaCl /U g/1000 ml/ U g / 1000 ml B. Wachstums - NährstoffeB. Growth nutrients 22 BiotinBiotin 400400 CalciumpantothenatCalcium pantothenate 20002000 InositInositol . 400. 400 Niac inNiac in 200200 p-Aminobenzoesäure (PAB)p-aminobenzoic acid (PAB) 400400 Pyridoxin-HClPyridoxine HCl 400400 Thiamin-HClThiamine HCl 200200 RiboflavinRiboflavin

Je 1000 ml dieses Vi ac hs tu ms mediums wurden noch 2 ml wässrige Spurenelementelösung folgender Zusammensetzung zugegeben:Each 1000 ml of this Vi ac hs tu ms medium became 2 ml of aqueous Trace element solution of the following composition added:

C. Spurenelemente /Ug/2 ml wässriger Lösung C. Trace elements / Ug / 2 ml aqueous solution

0,6 δ0.6 δ

18 o
818 o
8th

2,6 0,42.6 0.4

9 09885/02 9 7 "⁸"9 09885/02 9 7 " ⁸ "

MoO₅ MoO ₅ ,,.10H₂O,,. 10H ₂ O CuSO₄.CuSO ₄ . 5H₂O5H ₂ O Z_nSo₄.Z _n So ₄ . 7H₂O7H ₂ O CoClg.CoClg. 6H₂O6H ₂ O KIAI NH₁₁VO,NH ₁₁ VO,

Jedes dieser Kulturmedien wurde mit einem dünnen PiIm aus Rohöl beschichtet, das in allen Fällen aus paraffinischem Tobias crude bestand, je.mit einer der 66 Hefearten geimpft und einige Tage lang bei 50⁰C inkubiert.Each of these culture media was coated with a thin Piim from crude oil, which consisted in all cases of paraffinic crude Tobias, je.mit one of the 66 yeast species inoculated and incubated for several days at 50 ⁰ C.

Nach dreitägiger Inkubationsperiode zeigten nur sechs der getesteten Hefearten merkliches Wachstum. Eine Übersicht über diesen Artentest gibt die nachstehende Tabelle II:After a three day incubation period, only six of those tested showed Yeast species noticeable growth. An overview of this species test is given in Table II below:

Table II

Gattunggenus Anzahl der
geprüften
Artennumber of
checked
species Anzahl der Arten mit
gutem Wachstum auf
ErdölsubstratNumber of species with
good growth
Petroleum substrate BrettanomycesBrettanomyces 44th keineno CandidaCandida 2626th 66th CryptococcusCryptococcus 55 keineno DebaryomycesDebaryomyces 88th keineno KloeckeraKloeckera 88th keineno RhodotorulaRhodotorula 77th keineno TrichosporonTrichosporon 77th keineno TrigonopsisTrigonopsis 11 keine ·no ·

6666

Ersichtlicherweise wuchsen nur 6 von den 66 getesteten Hefearten so gut auf Erdöl, dass ihre vieitere prüfung lohnte, während die übrigen Arten nur mittelrnässig, schwach oder garnicht wuchsen.Evidently only 6 of the 66 yeast species tested grew so well on petroleum that their fourth test was worthwhile, while the remaining species grew only moderately, weakly or not at all.

Example 2

Diejenigen Arten, die beim Petrischalentest gemäss Beispiel I-gut abschnitten, wurden der weiteren Untersuchung Im flüssigen Medium unterzogen. Zu diesem Zweck wurde eine Reihe von 100 ml-Those species that were found to be good in the Petri dish test according to Example I sections were subjected to further investigation in the liquid medium. For this purpose a series of 100 ml

- 9 ■-. . 9 0 9885/0297- 9 ■ -. . 9 0 9885/0297

BAD ORiGINALBAD ORiGINAL

Erlenmeyerkolben je mit 20 ml Nährstofflösung gemäss Tabelle I und 0,4 ml des untersuchten Erdöls gefüllt, jede Lösung mittels Natronlauge auf den p_H-Wert 5,5 eingestellt, mit einigen Marmorstückchen versetzt und im Kolben 20 Minuten lang bei 120°G sterilisiert. Nach Wiederabkühlen auf 30⁰C wurde jeder Kolben mitErlenmeyer flasks each with 20 ml nutrient solution in accordance with Table I, and 0.4 ml of the studied oil filled, each solution by means of sodium hydroxide solution, the _pH value _is adjusted 5.5, treated with a few marble chips and sterilized for 20 minutes at 120 ° G in the piston. After cooling down again to 30 ⁰ C each flask was with

10' Zellen einer Reinkultur der jeweils zur Untersuchung anstehenden Hefeart geimpft· Das Wachstum wurde durch Inkubation bei 30°C durchgeführt. Die Belüftung erfolgte durch Einbau der Kolben in ein mit 100 Hüben je Minute hin- und herschwingendes Rüttelgerät. Die Aufrechterhaltung des p„-Wertes und des Stickstoffbedarfs während des TAsts erfolgte durch periodische Ammoniakzugabe. Die Ausbeuteergebnisse nach 4 Tagen sind in der nachstehenden Tabelle III angegeben, wobei die Hefezellen vom Wachstumsmedium und öl abzentrifugiert wurden.10 'cells of a pure culture of the respective pending examination Yeast species inoculated · Growth was carried out by incubation at 30 ° C. The ventilation was done by installing the flasks into a vibrating device that vibrates back and forth at 100 strokes per minute. The maintenance of the p "value and the nitrogen requirement During the TAst, ammonia was added periodically. The yield results after 4 days are in the following Table III given, the yeast cells from the growth medium and oil were centrifuged off.

Tab eile IIITab hurry III

HefeartYeast type

CBS-Nr.CBS no.

1)1)

Candida guilliermondii 2021Candida guilliermondii 2021

Candida intermedia 2044Candida intermedia 2044

Candida lipolytica 2078Candida lipolytica 2078

Candida majoricensis 2875Candida majoricensis 2875

Candida rhagii 618Candida rhagii 618

Hefeproduktion mg Protein/1000 ml Medium +20Yeast production mg protein / 1000 ml medium +20

ml ölml of oil

Tobias QuIf Golden Leichcrude Coast Meadow tesTobias QuIf Golden Leichcrude Coast Meadow tes

light Heizöllight heating oil

457 675 448 911 schwach 61 schwach 785 schwach 593 4o3 932 302 schwach 300 248 355 383 351 337 457 675 448 911 weak 61 weak 785 weak 593 4o3 932 302 weak 300 248 355 383 351 337

Lagernummer des Central Bureau vaor SchimmeleultureWarehouse number of the Central Bureau vaor Schimmeleulture

Example ^

Die Candida guillierroondii-Hefe wurde einer weiteren Reihe von Testen unterworfen, die im wesentlichen wie beim Beispiel 2, The Candida guillierroondii yeast was subjected to a further series of tests essentially as in Example 2,

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jedoch mit den Abwändlungen durchgeführt wurden, dass erstens beim Nährstoffmedium gemäss Tabelle I die Wachstumsnährstoffe fortgelassen und zweitens 1,6 ml 01, d.h. viermal mehr als beim Beispiel II zugefügt wurden. Die Hefeernte erfolgte wiederum mittels Zentrifuge. In der nachstehenden Tabelle IV sind die Hefeausbeuten angegeben, die nach drei, fünf und sechs Tage langem Wachstum auf verschiedenen Erdölquellen als Kohlenstoffsubstrat erzielt wurden.however, with the amendments that were done first in the nutrient medium according to Table I, the growth nutrients are omitted and, secondly, 1.6 ml 01, i.e. four times more than in the Example II were added. The yeast harvest was again carried out using a centrifuge. In Table IV below are the Yeast yields indicated after three, five and six days of growth on various petroleum sources as the carbon substrate were achieved.

T a b e 1 1 e IV T a be 1 1 e IV

öl-Substratoil substrate

Leichtes HeizölLight heating oil

Ausbeute an Candida guilliermondii mg Protein/1000 ml Nährmedium 3 Tage 5 Tage 6 Tage Yield of Candida guilliermondii mg protein / 1000 ml nutrient medium 3 days 5 days 6 days

Tobias CrudeTobias Crude 20102010 16501650 17801780 Lafitte-Paradis CrudeLafitte-Paradis Crude 15901590 17801780 16101610 Gulf Coast Light CrudeGulf Coast Light Crude 20002000 22002200 25302530 Golden Meadow CrudeGolden Meadow Crude l46ol46o 13701370 13101310 South Louisiana Light
Reg. GrudeSouth Louisiana Light
Reg. Grude 16401640 16601660 15401540 W. Texas-New Mexico
Sour CrudeW. Texas-New Mexico
Sour Crude 12751275 15001500 15501550

i860i860

21552155

23002300

Example 4

Drei 1000 ml-Erlenmeyerkolben wurden je mit 2 ml leichtem Heizöl und 200 ml Nährstofflösung gemäss Beispiel 1 (mit allen drei Komponentengruppen) gefüllt* nach Einstellung des Lösungs~p_H-Wertes auf 5»5 mittels Natronlauge und Zugabe einiger etwa 4 mm grosser, würfliger Marmorstüekchen als Puffersubstanz samt Inhalt 20 Minuten lang bei 120°C sterilisiert, auf 30⁰C abgekühlt, und danach je mit 50 bis 100 mg folgender Bodenproben geimpft:Three 1000 ml Erlenmeyer flask, according with 2 ml of light fuel oil and 200 ml of nutrient solution Example 1 each filled (with all three groups of components) * by adjustment of the solution ~ p _H -value to 5 »5 by means of sodium hydroxide solution and adding a few about 4 mm large, würfliger Marmorstüekchen as buffer substance and its contents sterilized for 20 minutes at 120 ° C, cooled to 30 ⁰ C, and thereafter, each with 50 to 100 mg of the following soil samples inoculated:

a) Boden vom Durkee Field, Harris County, Texas,a) Soil from Durkee Field, Harris County, Texas,

b) Athabasca Teersand und c) Boden von Trinidad. Ansehliessend wurden die Kolben lose mit einem Baumwollballen verschlossen, inb) Athabasca tar sands; and c) Soil of Trinidad. Then the flasks were loosely closed with a cotton ball, in

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eirv-mit-100" Hüben je Minute hin- und herschwingendes Rüttelgerät eingebaut und-schliesslich drei bis fünf Tage lang bei JO G inkubiert. -eirv-with-100 "strokes per minute reciprocating vibrator built-in and finally for three to five days at JO G incubated. -

Am Ende dieser Periode zeigte sich in allen drei Kolben mikrobiologisches Wachstum, das je für'sich isoliert und als Hefe identifiziert wurde.At the end of this period all three flasks were microbiological Growth each isolated and identified as yeast.

Die taxonomisehe Stellung dieser drei Hefeausbeuten wurde nach den Verfahren bestimmt, wie sie im Standardwerk für Hefetaxonomie von Lodder und Krejer-Van Rij "The yeasts, a taxonomic study", North-Ho11and Pub. Co. Amsterdam 1952 angegeben sind. Alle drei Hefeausbeuten erwiesen sich als asporogene Hefe von in allen Fällen gleicher Art, nämlich als aus der Familie Cryptococcaceae, Unterfamilie Cryptococcoideae, Gattung Candida, die Art rugosa.The taxonomic position of these three yeast yields was after the method as determined in the standard work for yeast taxonomy by Lodder and Krejer-Van Rij "The yeasts, a taxonomic study ", North-Ho11and Pub. Co. Amsterdam 1952. All three yeast yields were found to be asporogenic yeast of the same type in all cases, namely to be of the family Cryptococcaceae, subfamily Cryptococcoideae, genus Candida, the species rugosa.

Um die Identität dieser drei Hefeausbeuten als Candida rugosa zu bestätigen, wurden vom CBS, DeIf t vier Reinkulturen von C. rugosa und eine Reinkultur von Candida lipolytica als naher Artverwandten von C. rugosa bezogen und in ihren Eigenschaften mit den Hefeausbeuten verglichen, die auf den ölböden gewachsen und als C. rugosa identifiziert waren. Die Ergebnisse sind nachstehend zusammengestellt:To identify the identity of these three yeast yields as Candida rugosa to confirm, four pure cultures of C. rugosa and a pure culture of Candida lipolytica as close relatives sourced from C. rugosa and compared in their properties with the yeast yields grown on the oil soils and identified as C. rugosa. The results are below compiled:

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Obwohl die aus ölboden gewonnenen Hefen mit C. lipolytica nahe verwandt sind, ist ihr Galactoseassimilations-Vermögen für ihre Identifizierung als Candida rugosa entscheidend,Although the yeasts obtained from oil soil are close to C. lipolytica are related, their galactose assimilation ability is to theirs Identification as Candida rugosa is crucial,

Example 5

In einer Testreihe wurde Candida rugosa auf verschiedenen Erdölsubstraten gezüchtet.In a series of tests, Candida rugosa was found on various petroleum substrates bred.

In ähnlicher Art wie beim Beispiel 4 wurde eine Reihe von Kolben je mit Nährstofflösung, Marmorstückchen und Erdölsubstrat gefüllt,In a manner similar to Example 4, a number of flasks were each filled with nutrient solution, marble pieces and petroleum substrate,

7
sterilisiert, mit etwa 10 Zellen einer Reinkultur von aus Böden isolierter Candida rugosa geimpft und im früher beschriebenem Büttelgerät vier bis fünf Tage lang bei 30⁰C inkubiert. Die Ausbeute an Hefezellen aus den verschiedenen Kolben wurde nach der Folin-Ciocalteu-Methode zur proteinbestimniung gemessen. Es ergab sich dabei folgendes:7th
sterilized, inoculated with approximately 10 cells of a pure culture of isolated from soil Candida rugosa and incubated in the previously-described device Wolfenbüttel four to five days at 30 ⁰ C. The yield of yeast cells from the various flasks was measured by the Folin-Ciocalteu method for protein determination. The result was the following:

Table VI

C, rugosa-Ausbeute i η mg Protein/1000 ml Nährstoff-Erdölquelle lösung + 40 ml Erdöl C, rugosa yield i η mg protein / 1000 ml nutrient petroleum source solution + 40 ml petroleum

Tobias Crude 760Tobias Crude 760

South Louisiana Crude 940South Louisiana Crude 940

Lafitte-Paradis Crude ΙΙβΟLafitte-Paradis Crude ΙΙβΟ

Gulf Coast Light Crude 144QGulf Coast Light Crude 144Q

Golden Meadows Crude 880Golden Meadows Crude 880

Golden Meadows Crude 4000^Golden Meadows Crude 4000 ^

West Texas-New Mexico Sour Crude 1100West Texas-New Mexico Sour Crude 1100

Leichtes Heizöl 2050Light heating oil 2050

Leichtes Heizöl 3700 ¹^Light heating oil 3700 ¹ ^

^ Protein/1000 ml Nährstoff lösung: -j- 200 ml Erdöl^ Protein / 1000 ml nutrient solution: -j- 200 ml petroleum

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Claims

S. Α .. Texaco Belgium n * ν, Brussels, Belgium P at e η t a η s ρ r ü c h e

1) A method for obtaining yeast, characterized in that the yeast type Candida guilliermondii or Candida rugosa in the presence of an input stick containing paraffinic petroleum hydrocarbons as a carbon source on a aerobically cultivates liquid nutrient medium and the thus obtained Yeast collects.

2) Method according to claim 1, 'characterized in that the temperature is kept at 15 ° to 30 ⁰ C,

3) Method according to claim 1 or 2, characterized in that the p "value is adjusted to about 4 and 6.

4) Method according to claim 3, characterized in that one adjusts the _pH value by the addition of marble chips ·

5) A method as claimed in claim>, characterized in that one adjusts the _pH value by the addition of ammonium hydroxide.

6) Method according to one of the preceding claims characterized Ge, that a paraffinic oil is used as Eingabestoek,

7) A method according to any one of claims 1 to 5, characterized, in that verflüsaigtes paraffin wax or slack wax used as input Stock _t

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9 0 9885/02 9 79 0 9885/02 9 7

8) Method according to one of claims 1 to 5 *, characterized in that that you can use kerosene, gas oil, middle distillate, heating oil or petroleum used as an input stick.

9) The method according to any one of claims 1 to 5j, characterized in that normal ^ Cn ~ C ₇ p-paraffins verv ^ ends as input stick.

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