DE2215141A1 - Process for the production of citric acid by fermentation - Google Patents
Process for the production of citric acid by fermentationInfo
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Description
Ajinomoto Co., Inc. Tokyo / JapanAjinomoto Co., Inc. Tokyo / Japan
Verfahren zur Herstellung von Citronensäure durchProcess for the production of citric acid by
FermentierungFermentation
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Citronensäure durch Fermentierung und befaßt sich insbesondere mit einem Verfahren zur Herstellung von Citronensäure, wobei in einem wässrigen Medium neue Species von Hefen, nämlich Candida fibrae und Candida subtropicalis, kultiviert werden und die in der Fermentationsbrühe angesammelte Citronensäure gewonnen wird.The invention relates to a process for the production of citric acid by fermentation and deals in particular with a process for the production of citric acid, wherein in an aqueous Medium new species of yeast, namely Candida fibrae and Candida subtropicalis, can be cultivated and the citric acid accumulated in the fermentation broth is recovered.
Citronensäure wird in weitem' Umfang in der Nahrungsmittelindustrie und der pharmazeutischen Industrie beispielsweise als Säuerungsmittel für Getränke oder bei der Herstellung von Marmeladen verwendet. Citronensäure wird auch als Antioxidationsmittel oder als Stabilisator bei verschiedenen Nahrungsprodukten verwendet.Citric acid is widely used in the food industry and the pharmaceutical industry, for example as an acidulant for beverages or in used in the production of jams. Citric acid is also used as an antioxidant or as a stabilizer used in various food products.
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Bisher wurde Citronensäure aus Kohlehydraten, wie Melassen, durch Kultivierung von Hefepilzen hergestellt. In letzter Zeit wurde berichtet, daß bestimmte Stämme von Candida Citronensäure aus Kohlehydraten oder n-Alkanen produzieren.So far, citric acid has been made from carbohydrates such as molasses by cultivating yeasts. Recently, it has been reported that certain strains of Candida contain citric acid from carbohydrates or produce n-alkanes.
Es wurden nun neue Species von Hefen (yeasts) isoliert, nämlich Candida fibrae und Candida subtropicalis, aus natürlichen Vorkommen und dabei festgestellt, daß die neuen Species in hohen Ausbeuten Citronensäure aus verschiedenen Arten von assimilierbaren Kohlenstoffquellen bilden können, wenn sie aerob in einem wässrigen Medium kultiviert werden.New species of yeasts have now been isolated, namely Candida fibrae and Candida subtropicalis, from natural occurrences and found that the new species made from citric acid in high yields Different types of assimilable carbon sources can form when aerobically in an aqueous Medium to be cultivated.
Die Erfindung ergibt ein Verfahren zur Herstellung von Citronensäure, wobei ein aus Candida fibrae oder Candida subtropicalis gewählter Mikroorganismus aerob in einem wässrigen Medium kultiviert wird und die in der Fermentationsbrühe angesammelte Citronensäure gewonnen wird-The invention provides a process for the production of citric acid, wherein a from Candida fibrae or Candida subtropicalis selected microorganism is cultivated aerobically in an aqueous medium and is used in Citric acid accumulated in the fermentation broth is obtained will-
Die neuen Species gemäß der Erfindung können die Citronensäure aus verschiedenen Arten von Kohlenstoffquellen in hoher Ausbeute bilden, während die bekannten Citronensäure bildenden Hefen die Citronensäure lediglich aus einer oder höchsten zwei Arten von Kohlenstoffquellen, beispielsweise η-Paraffin und Kohlehydraten im Fall von Candida lipolytica, bilden. Deshalb ist es ohne irgend eine Änderung der Mikroorganismen möglich, die bevorzugtesten Kohlenstoffquellen zu wählen oder die bei niedrigeren Kosten auf dem Markt zur Verfügung stehende Kohlenstoffquelle einzusetzen.The new species according to the invention can contain citric acid from various types of carbon sources form in high yield, while the known citric acid-forming yeasts only form citric acid from one or at most two types of carbon sources, for example η-paraffin and carbohydrates im Case of Candida lipolytica, form. Therefore it is possible without any change in the microorganisms that to choose the most preferred carbon sources or those available on the market at lower cost Use carbon source.
Die im Eahmen der Erfindung eingesetzten Mikroorganismen sind neue Species des Genus Candida, nämlich Candida fibrae und Candida subtropicalis und haben die folgenden toxanomischen Eigenschaften:The microorganisms used in the context of the invention are new species of the genus Candida, viz Candida fibrae and Candida subtropicalis and have the following toxanomic properties:
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Wachstum in Malzextrakt: nach 3 Tagen bei 250C sind die Zellen rund, oval, zylindrisch oder länglich (2,5-7) x (3-7-60) und treten einzeln, in Paaren oder als Pseudomycele auf. Zahlreiche Eyphal-Eragmente werden beobachtet. Ein Sediment und die Spur eines Ringes wird gefunden. Nach einem Monat bei 170C sind ein dünner Ring und ein Sediment vorhanden.Growth in malt extract: after 3 days at 25 0 C, the cells are round, oval, cylindrical or oblong (2.5-7) x (3-7-60), and occur singly, in pairs or as Pseudomycele on. Numerous Eyphal fragments are observed. A sediment and a trace of a ring are found. After a month at 17 ° C., a thin ring and a sediment are present.
Wachstum auf Malzagar: nach 3 Tagen bei 250C werden ausschließlich echte Mycele gebildet. Nach einem Monat bei 170C ist die Strichkultur gelblich-weiß bis weiß haarartig über die gesamte Oberfläche«, wenn auch teilweise gewinkelt und hat einen ciliierten Rand.Growth on malt agar: after 3 days at 25 0 C only real mycelia are formed. After one month at 17 0 C the streak culture is yellowish-white white hair-like, albeit angled up over the entire surface "part and has a ciliierten edge.
Schrägschnittkultur: echte Mycel-Entwicklung überreichlich. Papilierte Hyphen werden häufig beobachtet. Blastosporen sind rund bis oval in Ketten oder in Trauben,Bevel culture: real mycelium development is abundant. Papilated hyphae are often observed. Blastospores are round to oval in chains or in clusters,
Fermentierung: D-G-lucose, B-Galaetose (langsam) 9 Saccharose, Maltose (langsam und. schwach), Raffinos® (langsam) und Trehalose (versteckt) werden fermentiert. Melibiose, Melezitose, Inulin, D-Arabinose, L-Rhamnose, Dulcit, DL-Milchsäure und Inosit werden nicht assimiliert.Fermentation: DG-lucose, B-galaetose (slow) 9 sucrose, maltose (slow and weak), Raffinos® (slow) and trehalose (hidden) are fermented. Melibiose, melezitose, inulin, D-arabinose, L-rhamnose, dulcit, DL-lactic acid and inositol are not assimilated.
Kaliumnitrat wird nicht als einzige Stickstoffquelle verwendet.Potassium nitrate is not used as the sole source of nitrogen.
Arbutin wird gespalten.Arbutin is split.
Gelatine wird verflüssigt.Gelatin is liquefied.
Stärkeartige Verbindungen werden nicht gebildet.No starch-like joints are formed.
Die maximale Wuchstemperatur beträgt 37-380C.The maximum growth temperature is 37-38 0 C.
Vitamine sind nicht für ein Wachstum bei 250C erforderlich. Vitamins are not required for growth at 25 ° C.
Urease wird nicht auf dem Christensen-Medium festgestellt. Urease is not detected on the Christensen medium.
Herkunft: Bananen vom Nahrungsmittelmarkt, Tokyo, Mai 1962.Origin: bananas from the food market, Tokyo, May 1962.
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Diese Species bildet überreiche, gut entwickelte echte Mycele und fermentiert eine beträchtliche Anzahl von Zuckern und ähnelt Candida tropicalis in diesen Gesichtspunkten, unterscheidet sich Jedoch von dieser, da sie Raffinose, D-Ribose, Erythrit assimiliert, Raffinose fermentiert, Gelatine verflüssigt, kein Vitamin erfordert und eine niedrigere maximale Wuchstemperatür als Candida tropicalis besitzt.This species forms abundant, well-developed true mycelia and ferments significant numbers of sugars and is similar to Candida tropicalis in these respects, but differs from this one, since it assimilates raffinose, D-ribose, erythritol, ferments raffinose, liquefies gelatin, no vitamin requires and a lower maximum growth temperature than Candida tropicalis.
Wachstum in MY-Brühe: nach 3 Tagen bei 250C sind die Zellen rund, kurz-oval, oval oder länglich, (2,5-9) x (3-11-30)/U und treten einzeln, in Paaren oder in Ketten auf.Growth in MY broth: after 3 days at 25 0 C the cells are round, short-oval, oval or oblong, (2.5-9) x (3-11-30) / U and occur singly, in pairs or in chains.
Eine Pelliole wird gebildet.A pellet is formed.
Wachstum auf MY-Agar: nach einem Monat bei 170C ist die Kolonie weiß bis blaß-gelblich weiß, flach bis gehoben, glatt, weich und hat einen völligen oder ciliierten Rand.Growth on MY agar: after one month at 17 ° C., the colony is white to pale yellowish white, flat to raised, smooth, soft and has a complete or ciliated margin.
Schrägschnittkultur auf Tomaten-Dextrose-Agar: Pseudomycele und echte Mycele werden überreichlich gebildet. Blastosporen sind rund bis kurz-oval oder länglich und treten einzeln in Ketten und bisweilen in Trauben auf.Bevel culture on tomato dextrose agar: pseudomycele and real mycelia are abundantly produced. Blastospores are round to short-oval or oblong and occur singly in chains and sometimes in clusters.
Bildung von Ascosporen: nicht beobachtet.Formation of ascospores: not observed.
Fermentierung: D-Glucose, D-Mannose, D-Galactose, Saccharose, Maltose (bisweilen schwach) werden fermentiert. Lactose, Raffinose und Melibiose werden nicht fermentiert.Fermentation: D-glucose, D-mannose, D-galactose, Sucrose, maltose (sometimes weak) are fermented. Lactose, raffinose and melibiose are not fermented.
Assimilierung von Kohlenstoffverbindungen: D-Glucose, D-Mannose, D-Galactose, Saccharose, I-Sorbose (schwach), Ellobiose (variierend), Trehalose, Melezitose, D-Xylose, Äthanol, Glycerin (bisweilen latent), Adonitol, D-Mannit, D-Sorbit, 2-Methyl-D-glucosid, Salicin (variierend), Kaliumgluconat (variierend), Calcium-2-ketogluconat, Bernsteinsäure und Citronensäure werden assimiliert. Lactose,Assimilation of carbon compounds: D-glucose, D-mannose, D-galactose, sucrose, I-sorbose (weak), Ellobiose (varying), trehalose, melezitose, D-xylose, Ethanol, glycerine (sometimes latent), adonitol, D-mannitol, D-sorbitol, 2-methyl-D-glucoside, salicin (varying), Potassium gluconate (varying), calcium 2-ketogluconate, succinic acid and citric acid are assimilated. Lactose,
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Melibiose, Raffinose, Inulin, lösliche Stärke, L-Arabinose, D-Arabinose, D-Ribose, L-Rhamnose, Erythrit, Dulcit und Inosit werden nicht assimiliert.Melibiose, raffinose, inulin, soluble starch, L-arabinose, D-arabinose, D-ribose, L-rhamnose, erythritol, dulcitol and inositol are not assimilated.
Assimilierung von Kaliumnitrat als einzige Stickstoff quelle: negativ.Assimilation of potassium nitrate as the only nitrogen source: negative.
Spaltung von Fett: positiv,Splitting fat: positive,
Hydrolyse von Harnstoff: negativ (Christensen-Medium), Verflüssigung von Gelatine: negativ, Herstellung des überwiegenden Carotinoid-Pigmentes:Hydrolysis of urea: negative (Christensen medium), Liquefaction of gelatine: negative, production of the predominant carotenoid pigment:
negativ,negative,
Herstellung überschüssiger Mengen an Säuren: negativ, Bildung von stärkeartigen Verbindungen: negativ, erforderliches Vitamin: Biotin, maximale Wuchs tempera tür: 40-410C, optimaler pH-Wert zum Wachsen: 4-7.Production of excess amounts of acids: negative, formation of starch-like compounds: negative, required vitamin: biotin, maximum growth temperature: 40-41 0 C, optimal pH value for growth: 4-7.
Diese Species unterscheidet sich von Candida tropicalis, da sie lösliche Stärke nicht assimiliert und kein feines Haar bildet, während eine gealterte Kolonie von Candida tropicalis mit feinem Haar bedeckt sind.This species differs from Candida tropicalis in that it does not assimilate soluble starch and not a fine one Hair forms while an aged colony of Candida tropicalis is covered with fine hair.
Die Mikroorganismen wurden hauptsächlich entsprechend J. Lodder und N.J.W. Kreger-van Rij "The Yeasts, a Toxanomic Study", North Holland Publ. Co., Amsterdam, 1952, bestimmt.The microorganisms were mainly identified according to J. Lodder and N.J.W. Kreger-van Rij, "The Yeasts, a Toxanomic Study ", North Holland Publ. Co., Amsterdam, 1952.
Candida fibrae und Candida subtropicalis sind im Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology., Nr. 1-8-5, Inage-higashi, Chiba-3hi, Chiba-ken, Japan, als FERM-P Nr. 889 und FERM-P Nr. 888 niedergelegt.Candida fibrae and Candida subtropicalis are in the Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology., No. 1-8-5, Inage-higashi, Chiba-3hi, Chiba-ken, Japan, laid down as FERM-P No. 889 and FERM-P No. 888.
Die erfindungsgemäß angewandten wässrigen Medien enthalten assimilierbare Kohlenstoffquellen, assimilierbare Stickstoffquellen und anorganische Salze und erforderlichenfalls geringe Mengen an organischen Nährstoffen.The aqueous media used according to the invention contain assimilable carbon sources Sources of nitrogen and inorganic salts and, if necessary, small amounts of organic nutrients.
Als assimilierbare Kohlenstoffquellen können Kohlehydrate, Alkohole, organische Säuren, n-Alkane, Glyceride und andere Fette oder öle und ebenfalls Rohmaterialien,Carbohydrates, alcohols, organic acids, n-alkanes, glycerides can be used as assimilable carbon sources and other fats or oils and also raw materials,
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die diese Kohlenstoffmaterialien enthalten, verwendet werden. Diese Kohlenstoffquellen können einzeln oder in Form von Gemischen von mehreren verwendet werden. Bevorzugt werden die Kohlenstoffquellen, insbesondere die Alkohole oder Säuren, in das wässrige Medium während des Kultivierungszeitraums entsprechend dem Verbrauch der Kohlenstoffquellen zugeführt. containing these carbon materials can be used. These carbon sources can be used singly or in the form of mixtures of several. The carbon sources, in particular the alcohols or acids, are preferably added to the aqueous medium during the cultivation period in accordance with the consumption of the carbon sources.
Zu den assimilierbaren Kohlehydraten gehören Glucose, Fructose, Rohrzucker und Stärke. Hydrolysate von Stärken oder Melassen können gleichfalls als Kohlenstoffquellen verwendet werden.Assimilable carbohydrates include glucose, fructose, cane sugar and starch. Hydrolysates of starches or molasses can also be used as carbon sources.
Geeignete n-Alkane sind solche mit Kohlenstoffzahlen von 9 bis 20. Sie werden einzeln oder in Form von Gemischen verwendet. Ton diesen Kohlenstoffquellen sind Kohlehydrate, n-Alkane, Äthylalkohol und Essigsäure die bevorzugtesten Kohlenstoffquellen, da sie im Handel zu vernünftigen Kosten erhältlich sind.Suitable n-alkanes are those with carbon numbers from 9 to 20. They are taken individually or in the form of mixtures used. These carbon sources are made up of carbohydrates, Normal alkanes, ethyl alcohol, and acetic acid are the most preferred carbon sources as they are commercially available at a reasonable cost are available.
Geeignete Stickstoffquellen sind anorganische und organische Ammoniumsalze, gasförmiges Ammoniak, wässriges Ammoniak, Aminosäuren und andere übliche Stickstoffquellen.Suitable nitrogen sources are inorganic and organic ammonium salts, gaseous ammonia, aqueous Ammonia, amino acids, and other common sources of nitrogen.
Die anorganischen Salze sind vollständig üblich und Beispiele hierfür sind Phosphate, Sulfate, Chloride, sowie Kalium-, Natrium-, Magnesium-, Eisen(II)-, Eisen(lll)- oder Mangansalze.The inorganic salts are completely common and examples include phosphates, sulfates, chlorides, as well Potassium, sodium, magnesium, iron (II), iron (III) or manganese salts.
Al3 organischer Hilfsnährstoff ist Biotin für das Wachstum von Candida subtropicalis erforderlich. In einigen Fällen int es zur Erhöhung der Ausbeute an Citronensäure wirksam, zu dem Medium einen Hefeextrakt, Malzextrakt, Maisquellflün3igkeit, Pepton, Fleischextrakt, Sojabohnen-Hydrolynat, Casein-HydroIysat oder andere Rohmaterialien zuzusetzen, die organische Hilfsnährstoffe enthalten.Al3 organic auxiliary nutrient, biotin is required for the growth of Candida subtropicalis. In some Cases int it to increase the yield of citric acid effective, to the medium a yeast extract, malt extract, corn swelling liquid, Peptone, meat extract, soybean hydrolyzate, Adding casein hydrolyzate or other raw materials, which contain organic auxiliary nutrients.
Die Fermentierung wird aerob durchgeführt. Man läßt die Fermentierung üblicherweise zwei bis sieben Tage bei Temperaturen von 24 bis 370C ablaufen. Der pH-Wert des Mediums wird üblicherweise im Bereich von 5 bis 9 durchThe fermentation is carried out aerobically. The fermentation is allowed to proceed normally to 37 0 C for two to seven days at temperatures of 24th The pH of the medium is usually in the range of 5 to 9 by
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Zusatz von Alkalien oder Säuren gehalten.Addition of alkalis or acids kept.
Die in der Permentationsbrühe angesammelte Citronensäure wird nach üblichen Verfahren gewonnen, beispielsweise nach der Entfernung der Zellen wird die Citronensäure durch Ionenaustauschharze vom Filtrat abgetrennt oder das Filtrat eingeengt und das Calciumcitrat aus dem eingeengten Piltrat nach Zusatz von Calciumhydroxid erhalten. The citric acid accumulated in the permentation broth is obtained by conventional methods, for example after removing the cells, the citric acid is separated from the filtrate by ion exchange resins or the filtrate is concentrated and the calcium citrate from the concentrated piltrate obtained after the addition of calcium hydroxide.
Ein wässriges Medium wurde hergestellt, welches 5 g/dl Glucose, 0,4 g/dl Hefeextrakt, 0,1 g/dl KH2PO4, 0,1 g/dl MgSO4-7H2O, 3 g/dl CaCO- (getrennt sterilisiert) enthielt und dessen pH-Wert auf 6,0 eingestellt. 20 ml des wässrigen Mediums wurden jeweils in einen 500 ml-Kolben gebracht und dann in einem Dampfautoklaven erhitzt.An aqueous medium was prepared which contained 5 g / dl glucose, 0.4 g / dl yeast extract, 0.1 g / dl KH 2 PO 4 , 0.1 g / dl MgSO 4 -7H 2 O, 3 g / dl CaCO - (sterilized separately) and adjusted its pH to 6.0. Each 20 ml of the aqueous medium was placed in a 500 ml flask and then heated in a steam autoclave.
Die sterilisierten Medien wurden mit Candida fibrae oder Candida subtropicalis inokuliert und bei 3O0C während 72 Stunden unter Schütteln kultiviert.The sterilized media were fibrae with Candida or Candida subtropicalis and cultured at 3O 0 C for 72 hours with shaking.
Nach der Kultivierung wurde ein Gehalt von 2,0 g/dl bzw. 2,5 g/dl an Citronensäure in den Permentationsbrühen von Candida fibrae und Candida subtropicalis gefunden.After the cultivation, a content of 2.0 g / dl or 2.5 g / dl of citric acid was found in the permentation broths found from Candida fibrae and Candida subtropicalis.
1 1 der Permentationsbrühe von Candida fibrae wurde filtriert und mit Schwefelsäure angesäuert. Nach der Entfernung des ausgefällten Calciumsulfate durch Piltrierung wurde das Piltrat mit Calciumhydroxid neutralisiert und erhitzt. 31,5 g Kristalle von Calciumcitrat wurden erhalten. 1 liter of the Candida fibrae permentation broth was filtered and acidified with sulfuric acid. After removing the precipitated calcium sulphate by piltration the piltrate was neutralized with calcium hydroxide and heated. 31.5 g of crystals of calcium citrate were obtained.
Ein wässriges Medium wurde hergestellt, welchesAn aqueous medium was prepared which
2 g/dl Äthylalkohol, 0,4 g/dl Hefeextrakt, 0,05 g/dl KH2PO4, 0,05 g/dl MgSO4-7H2O und 3 g/dl CaCo5 (getrennt2 g / dl ethyl alcohol, 0.4 g / dl yeast extract, 0.05 g / dl KH 2 PO 4 , 0.05 g / dl MgSO 4 -7H 2 O and 3 g / dl CaCo 5 (separately
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sterilisiert) enthielt, und dessen pH-Wert auf 6,0 eingestellt. Eine Anzahl von 500 ml-Kolben wurden jeweils mit 20 ml des wässrigen Mediums versetzt und dann in einem Dampfautoklaven erhitzt.sterilized) and adjusted its pH to 6.0. A number of 500 ml flasks were each mixed with 20 ml of the aqueous medium and then heated in a steam autoclave.
Die sterilisierten Medien wurden mit Candida fibrae oder Candida subtropicalis inokuliert und bei 300C während 72 Stunden unter Schütteln kultiviert.The sterilized media were inoculated with Candida subtropicalis fibrae or Candida and cultured at 30 0 C for 72 hours with shaking.
Nach der Kultivierung wurden 0,8 g/dl bzw. 0,9/dl an Citronensäure in den Permentationsbrühen von Candida fibrae bzw. Candida subtropicalis gesammelt.After cultivation, 0.8 g / dl and 0.9 / dl of citric acid were found in the permentation broths of Candida fibrae or Candida subtropicalis collected.
Ein wässriges Medium wurde hergestellt, welches 5 g/dl η-Paraffin (handelsübliches), 0,4 g/dl Hefeextrakt, 0,1 g/dl KH2PO4, 0,1 g/dl MgSO4-7H2O, 3 g/dl CaCO3 (getrennt sterilisiert) enthielt, und der pH-Wert auf 6,0 eingestellt. Eine Reihe von 500 ml-Kolben wurde jeweils mit 20 ml des wässrigen Mediums versetzt und dann in einem Dampfautoklaven erhitzt.An aqueous medium was prepared containing 5 g / dl η-paraffin (commercially available), 0.4 g / dl yeast extract, 0.1 g / dl KH 2 PO 4 , 0.1 g / dl MgSO 4 -7H 2 O, Contained 3 g / dl CaCO 3 (sterilized separately), and the pH was adjusted to 6.0. 20 ml of the aqueous medium were added to a series of 500 ml flasks and then heated in a steam autoclave.
Die sterilisierten Medien wurden mit Candida fibrae oder Candida subtropicalis inokuliert und bei 300C während 72 Stunden kultiviert. Die erhaltenen Permentation3brühen von Candida fibrae und Candida subtropicalis enthielten 2,5 g/dl bzw. 2,8 g/dl an Citronensäure.The sterilized media were inoculated with Candida subtropicalis fibrae or Candida and cultured at 30 0 C for 72 hours. The Candida fibrae and Candida subtropicalis permentation broths obtained contained 2.5 g / dl and 2.8 g / dl of citric acid, respectively.
Ein wässriges Medium wurde hergestellt, welches 2,94 g/dl Calciumacetat, 0,3 g/dl Hefeextrakt, 0,05 g/dl KH2PO4, 0,05 g/dl MgSO4*7H2O enthielt, und der pH-Wert auf 6,0 eingestellt. 20 ml des wässrigen Mediums wurden in eine Reihe von 500 ml-Kolben gegeben und duroh Er- .An aqueous medium was prepared containing 2.94 g / dl calcium acetate, 0.3 g / dl yeast extract, 0.05 g / dl KH 2 PO 4 , 0.05 g / dl MgSO 4 * 7H 2 O, and the pH adjusted to 6.0. 20 ml of the aqueous medium was added to a series of 500 ml flasks and thrown through Er-.
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hitzen sterilisiert.heat sterilized.
Die sterilisierten Medien wurden mit Candida fibrae oder Candida subtropicalis inokuliert und bei 300C während 72 Stunden kultiviert. Die erhaltenen Fermentationsbrühen von Candida fibrae und Candida subtropicalis enthielten 0,8 g/dl bzw. 1,0 g/dl an Citronensäure.The sterilized media were inoculated with Candida subtropicalis fibrae or Candida and cultured at 30 0 C for 72 hours. The resulting fermentation broths of Candida fibrae and Candida subtropicalis contained 0.8 g / dl and 1.0 g / dl of citric acid, respectively.
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