DE1767856A1

DE1767856A1 - Process for the recovery of microorganisms

Info

Publication number: DE1767856A1
Application number: DE19681767856
Authority: DE
Inventors: Chaffaut Jean Amaudric Du
Original assignee: BP PLC
Current assignee: BP PLC
Priority date: 1960-08-22
Filing date: 1968-06-25
Publication date: 1971-09-30
Also published as: FR95245E; NL6809933A; GB1224881A; DE1767856B2; DE1767856C3

Description

PATENTANWÄLTE
DR.-ING. VON KREISLER DR.-ING. SCHÖNWALDPATENT LAWYERS
DR.-ING. BY KREISLER DR.-ING. SCHÖNWALD

DR.-ING. TH. MEYER DR. FUES 1767856 KÖLN 1, DEfCHMANNHAUS DR.-ING. TH. MEYER DR. FUES 1767856 COLOGNE 1, DEfCHMANNHAUS

Köln, den 14.7p 1968 R/AxCologne, July 14, 1968 R / Ax

The British Petroleum Company Limited,

Britannic House, Moor Lane, London, E.C.2 (England)Britannic House, Moor Lane, London, E.C.2 (England)

"Verfahren zur Gewinnung von Mikroorganismen""Process for the production of microorganisms"

Die Erfindung "betrifft ein Verfahren zur Gewinnung eines kultivierten Mikroorganismus₀ The invention "relates to a method for obtaining a cultivated microorganism ₀

Gegenstand des "britischen Patents 9 14 567 ist ein Verfahren zur Gewinnung von Hefen, die in Gegenwart von Kohlenwasserstoffen kultiviert worden sind. Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man zu einem in dieser Form erhaltenen Gemisch aus Hefe, mineralischem Medium und Kohlenwasserstoff wenigstens 50 Gew_e-Telle eines oberflächenaktiven Mittels ppo Million Gewichtsteile gibt und anschließend zentrifugiert, wobei man eine Paste erhält, die aus Hefe und wässrigem mineralischem Medium "besteht. Als oberflächenaktive Mittel können kationaktive Mittel, z„B. St earyl.tr imethylammoniumchlorid, nichtionogene oberflächenaktive Mittel, z.B. Kondensate von Oleinsäure -und Äthylenoxyd, oder anionaktive Mittel, z.B. Natriumalkylsulfate, verwendet werden. ■- _ - The subject of "British patent 9 14 567 is a process for the production of yeasts which have been cultivated in the presence of hydrocarbons. The process is characterized in that at least 50 wt _e part of a surfactant ppo million parts by weight and then centrifuged to obtain a paste composed of yeast and aqueous mineral medium ". Cation-active agents, e.g. Stearyl.trimethylammoniumchlorid, nonionic surface-active agents, for example condensates of oleic acid and ethylene oxide, or anionic agents, for example sodium alkyl sulfates, can be used. ■ - _ -

Die Erfindung betrifft eine Verbesserung oder Modifikation der Erfindung, die Gegenstand des britischen Patents 914 567 ist. Sie betrifft die Gewinnung eines Mikroorganismus, der in Gegenwart eines Kohlenwasserstoffs kultiviert worden ist,The invention relates to an improvement or modification of the invention which is the subject of British Patent 914,567 is. It concerns the production of a microorganism which has been cultivated in the presence of a hydrocarbon,

109 840/OOB1109 840 / OOB1

ÖAO ORIGINALÖAO ORIGINAL

nach einem Verfahren, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man zu einem in dieser Form erhaltenen Gemisch aus einem Mikroorganismus, einem wässrigen mineralischen Medium und einem Kohlenwasserstoff ein oberflächenaktives Mittel, das die Formelaccording to a process which is characterized in that a mixture obtained in this form of a Microorganism, an aqueous mineral medium and a hydrocarbon a surface active agent, that's the formula

_n " ^CH2 ~ ° ~ _n " ^CH 2 ~ ° ~

hat, in der η eine ganze Zahl von 11 "bis 14 und m eine ganze Zahl von 4 bis 12 ist und X für Natrium oder Kalium steht, in einer Menge von vorzugsweise wenigstens 50 Teilen pro Million Teile des Gemisches gibt und anschließend zentrifugiert und hierdurch eine Paste erhält, die aus dem Mikroorganismus und wässrigem mineralischem Medium besteht.has, in which η is an integer from 11 "to 14 and m is a is an integer from 4 to 12 and X is sodium or potassium, in an amount of preferably at least 50 parts per million parts of the mixture and then centrifuged and thereby obtain a paste consisting of the microorganism and an aqueous mineral medium.

Die Fraktion, in der die Kohlenwasserstoffe überwiegen, und die eine gewisse Menge des in Emulsion gehaltenen und oberflächenaktives Mittel enthaltenden wässrigen Mediums enthält ,/mit einer Verbindung gewaschen, die ein Metallion enthält, das mit dem oberflächenaktiven Mittel ein in Wassär unlösliches Salz bildet. Zweckmäßig ist diese Verbindung ein Erdalkalimetall» Besonders geeignet sind Calcium- und Bariumverbindungen, insbesondere Calcium- und Bariumhydroxyd und Salze dieser Hydroxyde, z„B_e die Carbonate. Geeignet sind ferner Salze von Schwermetallen und Salze von Zink.The fraction in which the hydrocarbons predominate and which contains a certain amount of the emulsified and surfactant-containing aqueous medium / washed with a compound containing a metal ion which forms a water-insoluble salt with the surfactant. Conveniently, this compound is an alkaline earth metal "are particularly suitable calcium and barium compounds, in particular calcium and barium, and salts of these hydroxides, for" B _e carbonates. Salts of heavy metals and salts of zinc are also suitable.

Nach einer weiteren bevorzugten Methode wird die Fraktion, in der die Kohlenwasserstoffe überwiegen, und die eine gewisse Menge des in Suspension gehaltenen, oberflächenaktives Mittel enthaltenden wässrigen Mediums enthält, mit einer Mineralsäure, z„B* Salzsäure oder Schwefelsäure, gewaschen. Auch andere Säuren können verwendet werden, vorausgesetzt, daß sie unter den angewendeten Bedingungen das oberflächenaktive Mittel zu hydrolysieren vermögen. Nach dieser Behandlung wird freie Säure, die aus dem oberflächenaktiven Mittel stammt, in einer wässrigen Fraktion von einer Kohlenwasserstofffraktion durch Zentrifugieren abge-According to a further preferred method, the fraction in which the hydrocarbons predominate, and a certain amount of the surface-active agent kept in suspension Contains agent-containing aqueous medium, washed with a mineral acid, for example hydrochloric acid or sulfuric acid. Other acids can also be used, provided that, under the conditions used, they capable of hydrolyzing surfactants. After this treatment, free acid is released from the surfactant Agent originates in an aqueous fraction from a hydrocarbon fraction by centrifugation.

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trennt. Die Kohlenwasserstofffraktion wird zur Entfernung der Mineralsäure vorzugsweise mit Wasser gewaschen und zentrifugiert.separates. The hydrocarbon fraction is used for removal the mineral acid is preferably washed with water and centrifuged.

Nach einer weiteren bevorzugten Methode zur Behandlung der Fraktion, in der die Kohlenwasserstoffe überwiegen, wird diese Fraktion gekühlt, und zwar vorzugsweise auf eine Temperatur im Bereich von -10° bis +10⁰C, insbesondere aufAccording to another preferred method of treatment of the fraction in which the hydrocarbons predominate, this fraction is cooled, preferably to a temperature in the range of -10 ° to +10 ⁰ C, and in particular

O⁰C, und dann zentrifugierte ~ ~ m O ⁰ C, and then centrifuged ~ ~ m

Eine weitere bevorzugte Methode zur Behandlung der Fraktion besteht darin, daß man ein lösungsmittel, ZoB₀ 15 "bis 25 Gew,-$ Isopropanol zusetzt und dann zentrifugiert„A further preferred method for treatment of the fraction is in that a solvent, ZOB ₀ 15 "to 25 wt, - $ is added isopropanol, and then centrifuged"

Die geradkettigen Kohlenwasserstoffe sind in dem Einsatzmaterial gemäß der Erfindung als. Paraffine vorhanden«, Sie können jedoch auch als Olefine vorliegen_o Ferner können Gemische verwendet werden, die geradkettige Paraffine und Olefine enthalten«The straight chain hydrocarbons are in the feedstock according to the invention as. Paraffins present «, but they can also be present as olefins _o Mixtures containing straight-chain paraffins and olefins can also be used«

Als Einsatzmaterial wird zweckmäßig eine aus Erdöl erhaltene Kohlenwasserstofffraktion verwendete Vorzugsweise besteht die Kohlenwasserstofffraktion teilweise aus geradkettigen J Kohlenwasserstoffen, die ein'mittleres Molekulargewicht haben, das 10 Kohlenstoffatomen im Molekül entspricht«,A feed material obtained from petroleum is expediently used Hydrocarbon fraction used. Preferably, the hydrocarbon fraction consists partly of straight chain J Hydrocarbons that have an average molecular weight that corresponds to 10 carbon atoms in the molecule «,

Zu den für das Verfahren gemäß der Erfindung geeigneten Einsatzmaterialien gehören Leuchtpetroleum, Gasöle und Schmieröle» Diese Einsätzmaterialien können raffiniert oder einer gewissen raffinierenden Behandlung unterworfen worden sein, jedoch müssen sie gewöhnlich einen Anteil an geradkettigen Kohlenwasserstoffen enthalten, um für die Zwecke der Erfindung geeignet zu sein. Zweckmäßig enthält die Erdölfraktion 3 bis 4-5 Gew.-^ geradkettige Kohlenwasserstoffe. Suitable feedstocks for the process according to the invention include kerosene, gas oils and Lubricating Oils »These feedstocks can be refined or Some refining treatment, however, they must usually contain a proportion of straight chain hydrocarbons in order for the purposes of the invention to be suitable. The petroleum fraction expediently contains 3 to 4-5 wt .- ^ straight-chain hydrocarbons.

Das Verfahren gemäß der Erfindung ist von besonderem Wert für die Behandlung von Gasölfraktionen aus Erdöl, dieThe method according to the invention is of particular value for the treatment of gas oil fractions from petroleum, the

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SAD ORiGINAuSAD ORiGINu

geradkettige Kohlenwasserstoffe in Form von Wachsen enthalten, da beim Verfahren gemäß der Erfindung ein Gasöl mit verbessertem Stockpunkt erhalten wird, während die Wachse in ein wertvolles Produkt umgewandelt werden»Contain straight-chain hydrocarbons in the form of waxes, since in the method according to the invention a gas oil with improved pour point is obtained while the waxes are converted into a valuable product »

Unter den hier gebrauchten Ausdruck "Mikroorganismus" fallen auch Gemische von Mikroorganismen, Vorzugsweise iät der Mikroorganismus in der Lage, auf wenigstens einigen n-Paraffinen zu wachsen.»The term "microorganism" used here includes also mixtures of microorganisms, preferably the diet Microorganism able to grow on at least some n-paraffins. "

Als Mikroorganismen, die auf die hier beschriebene Weise kultiviert werden, kommen Hefen, Pilze oder Bakterien in Frage« Die hier genannten Hefen sind nach dem Klassifizierungssystem eingestuft, das in "The Yeasts, a Taxonomic Study" von J.Lodder und W₀J₀W₀ Kreger-Van Rij, herausgegeben von North Holland Publishing Co. (Amsterdam 1952), beschrieben ist οAs microorganisms that are cultivated in the manner described here, yeasts, fungi or bacteria come into question. The yeasts mentioned here are classified according to the classification system that is in "The Yeasts, a Taxonomic Study" by J.Lodder and W ₀ J ₀ W ₀ Kreger-Van Rij, published by North Holland Publishing Co. (Amsterdam 1952), is described ο

Me in dieser Beschreibung genannten Bakterien sind nach dem Klassifizierungssystem eingestuft, das in "Bergey's Manual of Determinative Bacetriology" von R.S. Breed, E₀G₀Do Murray und N₀Ro Smith, herausgegeben von Bailliere, Tindall and Cox (London 1957)» 7«Auflage, beschrieben ist.The bacteria mentioned in this description are classified according to the classification system in "Bergey's Manual of Determinative Bacetriology" by RS Breed, E ₀ G ₀ Do Murray and N ₀ Ro Smith, edited by Bailliere, Tindall and Cox (London 1957) »7 «Edition that is described.

Bei Verwendung einer Hefe gehört diese vorzugsweise zur Familie Cryptococcaceae, insbesondere zur Unterfamilie Cryptococcoideae» Gegebenenfalls können jedoch auch asccsporogene Hefen der Unterfamilie Saccharomycoideae verwendet werden. Die bevorzugten Gattungen der Unterfamilie Cryptococcoideae sind Torulopsis (auch als Torula bekannt) und Candida. Bevorzugte Hefespezies werden nachstehend genannt. Besonders bevorzugt wird die Verwendung der nachstehend zusammen mit den Hinterlegungsnummern genannten Stämme. Die mit CBS gekennzeichneten Stämme sind beim Centraal Bureau vor Schimmelculture, Baarn,Holland, und der mit IHRA gekennzeichnete Stamm beim Institut National de la Recherche Agronomique, Paris, hinterlegt.If a yeast is used, it preferably belongs to the Cryptococcaceae family, in particular to the subfamily Cryptococcoideae »If necessary, however, asccsporogene Yeasts of the subfamily Saccharomycoideae are used will. The preferred genera of the subfamily Cryptococcoideae are Torulopsis (also known as Torula) and candida. Preferred yeast species are mentioned below. It is particularly preferred to use the following together with the deposit numbers mentioned strains. The strains marked with CBS are at Centraal Bureau in front of Schimmelculture, Baarn, Holland, and the strain marked with IHRA at the Institut National de la Research Agronomique, Paris, deposited.

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BAD ORiGINALBAD ORiGINAL

Preferred tribes

Candida Candida Candida (üandida Candida Torulopsis Hansenula OidiumCandida Candida Candida (üandida Candida Torulopsis Hansenula Oidium

Neurospora.Neurospora.

MycodermaMycoderma

lipolyticalipolytica

pulcherrimapulcherrima

utilisutilis

utilis, Variati majorutilis, Variati major

tropicalistropicalis

collieulosacollieulosa

anomalaanomala

lactislactis

sitophilasitophila

cancoillptecancoillpte

CBS 610CBS 610

CBS 841 CIS 2317 CBS 133 CBS 110CBS 841 CIS 2317 CBS 133 CBS 110

INRA: SiDT 11INRA: SiDT 11

Von den vorstehend genannten Stämmen wird Candida lipolytica "besonders bevorzugt»Candida lipolytica "particularly preferred"

Wie bereits erwähnt, können als Mikroorganismen auch Kleinpilze verwendet werden. Geeignet ist die Gattung Penicillittin, wobei Penicillium expansum bevorzugt wird» line weitere geeignete Gattung ist Aspergillus*As already mentioned, small mushrooms can also be used as microorganisms be used. The genus penicillittin is suitable, whereby Penicillium expansum is preferred »line another suitable genus is Aspergillus *

Die erfindungsgemäß gezüchteten Bakterien gehören zweckmäßig zu den Ordnungen Paeudomonadales, Eubacteriales und Actinomyoetales. Vorzugsweise werden Bakterien der Pämilien Corynebaeteriaceae, Microoocoaoeae, Achromobaoteraceae, Actinoymyoetaoeae, BhizobiaQeae, Bacillaoeae und Pseudomonadadeae verwendet* Bevorzugte Spezies sind Bacillus megaterium, Bacillus subtilis und Pseudomonas aeruginosa. Weitere geeignete Spezies sind:The bacteria grown according to the invention are useful to the orders Paeudomonadales, Eubacteriales and Actinomyoetales. Preferably bacteria of the premily Corynebaeteriaceae, Microoocoaoeae, Achromobaoteraceae, Actinoymyoetaoeae, BhizobiaQeae, Bacillaoeae and Pseudomonadadeae used * Preferred species are Bacillus megaterium, Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa. Other suitable species are:

Bacillus amylobacter Xanthomonas begoniaeBacillus amylobacter Xanthomonas begoniae

Pseudomonaa natriegens Flavobacterium devoransPseudomonaa natriegens Flavobacterium devorans

ArthrobaOter sp, Acetobacter sp.ArthrobaOter sp, Acetobacter sp.

Microcooeus sp. Actinomyces sp.Microcooeus sp. Actinomyces sp.

Corynebaoterium sp, looardia opacaCorynebaoterium sp, looardia opaca

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BAD ORiGlNALORIGlNAL BATHROOM

Die Kultivierung wird gewöhnlich abgebrochen, "bevor eine stationäre Phase erreicht ist. Die Wachstumsstufe wird jedoch gewöhnlich kontinuierlich unter kontinuierlicher Entfernung einer Brühe durchgeführt» In dieser Phase ist es gewöhnlich möglich, den Mikroorganismus mit nicht abgebautem Einsatzmaterial und einer gewissen Menge des wässrigen Nährmediums von der Hauptmasse des wässrigen Mhrmediums 'abzutrennen. Vorzugsweise erfolgt die Abtrennung durch Dekantieren. Zusätzlich oder als Alternative kann zentrifugiert werden. Die Fraktion, die den Mikroorganismus enthält, wird nun der oben beschriebenen Behandlung mit einem wässrigen Medium urterworfen, das ein oberflächenaktives Mittel enthält.Cultivation is usually stopped "before a stationary phase is reached. However, the growth stage usually becomes continuous with continuous Removal of a broth carried out »At this stage it is usually possible to remove the microorganism with undegraded Feedstock and a certain amount of the aqueous nutrient medium from the bulk of the aqueous nutrient medium 'to separate. The separation is preferably carried out by decanting. In addition or as an alternative, centrifugation can be used will. The fraction that contains the microorganism is now the above-described treatment with a aqueous medium containing a surfactant.

Die den Mikroorganismus enthaltende Fraktion wird mit dem wässrigen oberflächenaktiven Mittel vorzugsweise kräftig gemischt und ohne eine weitere Wachstumsperiode des Mikroorganismus einer weiteren Trennung vorzugsweise durch Zentrifugieren unterworfen, wobei eine Mikroorganismusfraktion, eine ausgebrauchte wässrige Phase und eine aus restlichem Kohlenwasserstoff bestehende Phase erhalten werden. Palis erforderlich, werden die Wasch- und Trennbehandlungen einmal oder mehrmals wiederholt, wobei ein wässriges oberflächenaktives Mittel in der Waschstufe verwendet wird. Nach dem Waschen mit dem oberflächenaktiven Mittel muß mit einem wässrigen Medium gewaschen werden, das kein oberflächenaktives Mittel enthält. Vorzugsweise wird Wasser als dieses Medium verwendet. Auch hier kann gegebenenfalls die Wasch- und Trennbehandlung mehrmals wiederholt werden.The fraction containing the microorganism is preferably vigorous with the aqueous surfactant mixed and without a further growth period of the microorganism further separation, preferably by centrifugation subjected, whereby a microorganism fraction, a spent aqueous phase and a residual Hydrocarbon phase can be obtained. Palis required, the washing and separating treatments are once or repeated several times using an aqueous surfactant in the washing step. After this Washing with the surfactant must be washed with an aqueous medium other than a surfactant Contains funds. Preferably water is used as this medium. Here, too, the washing and separation treatment are repeated several times.

Die Waschbehandlungen werden vorzugsweise durchgeführt, bis der Kohlenwasserstoffgehalt des Mikroorganismus niedriger ist als 7$, bezogen auf das Gewicht des Mikroorganismus (für den trockenen Zustand berechnet). Vorzugsweise liegt dieser Kohlenwasserstcffgehalt unter 5$. Als oberflächenaktives Mittel für als Wäsche eignet sich beispielsweise ein anionaktiv«? SsT-e^ees, das aus äthoxyliertem laurin-The washing treatments are preferably carried out until the hydrocarbon content of the microorganism is less than $ 7 based on the weight of the microorganism (calculated for the dry state). This hydrocarbon content is preferably below 5 $. As a surfactant for laundry as for example an anionic suitable "? SsT-e ^ ees, which is made from ethoxylated laurine

BAD ORIGINALBATH ORIGINAL

alkoholeulfat besteht»alcohol sulfate consists »

Die den restlichen Kohlenwasserstoff enthaltende Phase, die eine gewisse Menge oberflächenaktives Mittel enthält, wird dann nach einer der nachstehend beschriebenen Methoden behandelt,. Wenn das der Wachs turns stufe zugeführte Einsatzmaterial ein 'Gasöl ist, wird eine Kohlenwasserstofffraktion erhalten, die einen niedrigen Wachsgehalt hat und im wesentlichen frei von dem oberflächenaktiven Mittel ist, das bei dem hier beschriebenen Behandlungsverfahren verwendet wird«The phase containing the remaining hydrocarbon, which contains a certain amount of surfactant is then prepared by one of the methods described below treated,. When the feedstock being fed to the wax turns stage a 'gas oil becomes a hydrocarbon fraction which has a low wax content and is essentially free of the surfactant that is used in the treatment procedure described here «

' ■ Beispiel 1 , '■ Example 1 ,

Die Hefe Candida tropicalis wurde in einem kontinuierlich betriebenen Fermenter, der ein Arbeitsvolumen von 5000 (Fassungsvermögen 7000 l) hatte, in Gegenwart eines wässrigen Nährmediums der folgenden Zusammensetzung kultiviert:The yeast Candida tropicalis was produced in a continuous operated fermenter, which had a working volume of 5000 (capacity 7000 l), in the presence of an aqueous Culture medium with the following composition:

Diammoniumhydrogenphosphat 2gDiammonium hydrogen phosphate 2g

Kaliumchlorid 1,15 gPotassium chloride 1.15 g

Magnesiumsulfatheptahydrat 0,65 gMagnesium sulfate heptahydrate 0.65 g

Mangansulfattetrahydrat 0,068 gManganese sulfate tetrahydrate 0.068 g

Eisensulfatheptahydrat 0,124 gIron sulfate heptahydrate 0.124 g

Zinksulfatheptahydrat 0,308 gZinc sulfate heptahydrate 0.308 g

Hefeextrakt 0,025 gYeast extract 0.025 g

leitungswasser zur Auffüllung auf 11tap water to replenish on 11

Der verwendete Fermenter hatte die Form eines stehenden zylindrischen Gefäßes, das ein koaxiales zylindrisches Führungsrohr hatte. Das Verhältnis der Querschnittsfläche des Ringraumes zur Querschnittsfläche des Innenraumes des Führungsrohres betrug 1:1. Der Fermenter war mit einem Propeller versehen.The fermenter used was in the shape of a standing one cylindrical vessel that had a coaxial cylindrical guide tube. The ratio of the cross-sectional area of the annular space to the cross-sectional area of the interior of the guide tube was 1: 1. The fermenter was with one Provided propeller.

Die luft wurde durch Wirbelbelüftung in einer Menge von 60 V/V/Std. zugeführt. Die Brühe wurde bei 30⁰O und der PjT-Wert durch kontinuierliche Zugabe von Ammoniak bei 4 gehalten.The air was swirled at a rate of 60 V / V / hr. fed. The broth was kept at 30 ⁰ O and the PjT value at 4 by the continuous addition of ammonia.

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BAD ORiQINAUBAD ORiQINAU

Als Kohlenstoffquelle wurde ein aus Mittelost-Rohöl erhaltenes Gasöl zugeführt, das die folgenden Kennzahlen hattetAs a carbon source, one obtained from Middle Eastern crude oil was used Gas oil supplied, which had the following key figures

Spezifisches Gewicht bei 15,6/15,6⁰C 0,870 Stockpunkt +15⁰CSpecific gravity at 15.6 / 15.6 ⁰ C 0.870 pour point +15 ⁰ C

Siedebereich 300-39O⁰CBoiling range 300-39O ⁰ C

Ein Gemisch aus Gasöl und wässrigem Nährmedium im Volumenverhältnis von 1,5s 10 wurde dem Fermenter in einer Menge von 1000 1/Std_o zugeführt,.A mixture of gas oil and aqueous nutrient medium in a volume ratio of 1.5 s 10 was fed to the fermentor in an amount of 1000 1 / h _o ,.

Ein Produktstrom wurde kontinuierlich abgezogen und in ein Dekantiergefäß geführt. 70 VoI·-$ der dekantierten Phase, die aus ausgebrauchtem wässrigem Medium bestand, wurde abgezogen. Zu den verbleibenden 30$, die aus einer Hefecreme bestanden, wurden 70$ frisches Wasser gegeben, um das ursprüngliche Gemisch wieder herzustellen. Diesem wieder hergestellten Gemisch wurde pro Liter 1,0 g eines oxyäthylierten Laurinalkoholsulfats zugegeben, das durchschnittlich 7 Äthylenoxydgruppen pro Molekül enthielt, einen Schwefelgehalt von 1,4 Gew,-$ hatte und unter der Bezeichnung B 6608A im Handel ist»A stream of product was continuously withdrawn and passed into a decanter. 70 VoI · - $ of the decanted Phase consisting of spent aqueous medium was drawn off. On top of the remaining $ 30 that came from a If the yeast cream passed, $ 70 fresh water was added to restore the original mixture. This one reconstituted mixture was added 1.0 g of an oxyethylated lauric alcohol sulfate per liter, the average Contained 7 ethylene oxide groups per molecule, had a sulfur content of 1.4% by weight and below that Designation B 6608A is available in stores »

Das in einer Menge von 915 kg/Std_o anfallende Gemisch wurde gerührt und dann zentrifugiert, wobei stündlich die folgenden Fraktionen erhalten wurden:The resulting in an amount of 915 kg / h _o mixture was stirred and then centrifuged to obtain an hourly, the following fractions were obtained:

a) 105 kg einer Gasölphase, die 0,6 g Hefe/1 enthielt.a) 105 kg of a gas oil phase containing 0.6 g yeast / l.

b) 765 kg einer wässrigen Phase, die 0,2 g Hefe/1 enthielt.b) 765 kg of an aqueous phase containing 0.2 g yeast / l.

c) 45 kg einer Hefepaste, die 90 g Hefe/1 enthieltc) 45 kg of a yeast paste containing 90 g yeast / l

(auf Trockenbasis),(on a dry basis),

Die Hefepaste wurde mit Wasser in einen Mischer gegeben. Das hierbei erhaltene Gemisch wurde zentrifugiert, wobei folgende Fraktionen anfielen» a) eine ölphase, b) eine wässrige Phase und o) eiäe dicke Hefeoreme, die 20 Gew.-# Hefe (gerechnet als Trockenhefe) und 80 Gew.-jG Wasser und nur eine sehr geringe ölmenge enthielt.The yeast paste was placed in a mixer with water. The resulting mixture was centrifuged, and the following fractions were incurred "a) the oil phase, b) an aqueous phase and o) eiäe Hefeoreme thick containing 20 wt .- # yeast (calculated as a dry yeast) and 80 parts by weight water and only jG contained a very small amount of oil.

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Wach anschließendem Spülen mit Wasser und Zentrifugieren ■wurde ein Hefeprodukt erhalten, das 65 Gew_o-$ Wasser zusammen mit Spurenmengen von verunreinigenden Kohlenwasserstoffen enthielte Durch weiteres Zentrifugieren wurde eine unreine Hefecreme erhalten, die etwa 1 Gew_o-Teil trockene verunreinigte Hefe/1,5 Gew_o-Teile Wasser enthielteWax followed by rinsing with water and centrifugation ■ yeast product was obtained containing 65 wt _o - $ water together with trace amounts of contaminating hydrocarbons contained By further centrifuging an impure yeast cream was obtained which was about 1 percent by dry _o -part contaminated yeast / 1.5 contained wt _o parts by water

Diese Hefecreme wurde dann in einen Extraktor gepumpt, der die"Form eines Trommelfliters hatte, das sich mit waagerechter Achse drehte. Ein lösungsmittelgemisch, das aus 3 VoI,.-Teilen Isopropanol und 5 Volo-Tellen. eines azeotropen Gemisches (80 Gew.-$ η-Hexan und 20 Gew„-$ Iso- M propylalkohol) "bestand, wurde in den Extraktor gegossen,» Das Volumen des Lösungsmittels ist auf 1 VoI₀-!Teil trockene (verunreinigte) Hefe "bezogen. Das Gemisch wurde 20 Minuten bei 80⁰C gehalten, worauf das Lösungsmittel abgezogen wurde, und zwar zum Schluß unter vermindertem DruckeThis yeast cream was then pumped into an extractor, which had the "shape of a drum fliter, which rotated with a horizontal axis. A solvent mixture, which consists of 3 Vol. .- parts of isopropanol and 5 vol. $ η-hexane and 20 percent "- $ iso M propyl alcohol)" was, was poured into the extractor, "the volume of the solvent is set to 1 by volume ₀ -. based part dry (contaminated) yeast" the mixture was 20 minutes kept at 80 ⁰ C, whereupon the solvent was stripped off, namely at the end under reduced pressure

Eine zweite Extraktionsstufe wurde in der gleichen Weise wie die erste Extraktionsstufe durchgeführt. In dieser zweiten Extraktlonsstufe wurde das gewonnene feste Material mit Isopropylalköhol in einer Menge von 4 Raumteilen pro Raumteil Trockenhefe 90 Minuten bei 5O⁰C gewaschen. Die restlichen Lösungsmittel und Verunreinigungen wurden entfernt. Abschließend wurde das Hefeprodukt in überhitztem Dampf getrocknet,A second stage of extraction was carried out in the same way as the first stage of extraction. In this second Extraktlonsstufe the recovered solid material with Isopropylalköhol in an amount of 4 parts by volume per part dry yeast room was washed for 90 minutes at 5O ⁰ C. The remaining solvents and impurities were removed. Finally, the yeast product was dried in superheated steam,

Example 2

Der in Beispiel 1 beschriebene Versuch wurde wiederholt, wobei die Hefe Candida lipolytiea an Stelle von Candida tropicalis verwendet wurde. Ähnliche Ergebnisse wurden erhalten*The experiment described in Example 1 was repeated, the yeast being Candida lipolytiea instead of Candida tropicalis was used. Similar results were obtained obtain*

1Ö8S-4O/C0S11Ö8S-4O / C0S1

BAD ORIGINALBATH ORIGINAL

Claims

- ίο - claims

1) Process for the extraction of In the presence of hydrocarbons cultivated microorganisms and a hydrocarbon Fraction with reduced wax content from a microorganism, an aqueous mineral medium and Hydrocarbons "containing mixture, characterized in that the mixture is a surface-active Adding means of the following formula

CH, - (CH ₂ ) n _{-CH 2} -0- (CH ₂ -O-GH ₂ ) m-GH ₂ -0 ~ S0, X

in which η is an integer from 11 to 14, m is an integer are from 4 to 12 and X is sodium or potassium, and then the mixture is centrifuged, one den A paste containing microorganism and aqueous mineral medium is obtained.

2) Method according to claim 1, characterized in that the surface-active agent in amounts of 0.02 to 0.5 Wt .- ^, based on the microorganism, aqueous mineral Medium and hydrocarbons containing ι mixture is added.

3) Method according to claim 1 and 2, characterized in that that the mixture is vigorously mixed after the addition of the surfactant and then without the microorganism Centrifugation is used to give opportunity for further growth.

K) Method according to one of the preceding claims, characterized in that öa £ - the paste containing the microorganism is diluted with elnetn aqueous medium and then again

BAD ORIGINALBATH ORIGINAL

5) Method according to claim 4, characterized in that the obtained paste containing the microorganism of a Is subjected to a plurality of washing and centrifugation stages, the microorganism containing at least an initial stage with a surfactant

V? tend aqueous medium and in at least one later Stage with an aqueous surfactant-free Medium is diluted.

6) Method according to claim 5> characterized in that the microorganism obtained after the various dilution and centrifugation stages is washed with water and centrifuged again ^. -

7) Method according to one of the preceding claims, characterized in that the microorganism is an n-paraffins consuming microorganism is used.

8) Method according to one of the preceding claims, characterized in that a yeast is used as the microorganism will.

9) Method according to claim 8, characterized in that a Yeast of the family Crypto co ccaceae. is used.

10) Method according to claim 9, characterized in that a yeast of the subfamily Cryptococcoideae is used

_t "will.

11) Method according to claim 10, characterized in that a yeast of the genus Torulopsis is used.

12) Method according to claim 10, characterized in that a yeast of the genus Candida is used.

Method according to claim 12 »characterized in that used as yeast Candid ^ Aipolytica.

10 9 8 40/0051 "■

BATH ORIGINAL

I ¹ )) "Method according to claim 12, characterized in that c.aj? Used as yeast CanclidaAropicalis .Ird.

1 ^) Method according to claims 1 to 1, characterized in that a bacterium is used as the milirocrgmisrnus - ν ende '"- ^v jj.-d.

Ic) Method according to one of the preceding claims, characterized in that the mixture containing the microorganism, the v; v; veinous mineral medium and the hydrocarbons is carried out in that a microorganism is borrowed from water: ffe containing or die-con substrate in the presence of a '/ iLSrigrn Iloiiiimedium .; \: nah in the opposite of a sour: ffhaltlg ^ n Gi goü is bred, before a part of the four-year sewing _; ediu.;: s afcgetrenn "and the mixture obtained, if necessary, s fj.n ^ j ·

Zv .. ische? xlehand.lur: £ unterv; o rf en - .. "ird.

17) Method according to claim 16, characterized in that deiJ A petroleum fraction is used as a carbon substrate vervicndet;. 'ird.

l8) The method according to claim l6 or 17, characterized that a gas oil is used as the Iv.-vhlen-.raGGerotoff substrate ν? earth.

19.) The method according to any one of the preceding claims, characterized ^ elzennz ^ ichret, ca f .; after centrifugation of the mixture, which has been mixed with eggs, a fraction is separated which essentially comes from an Ubor-Tviegendf.ii Antt. : 1 consists of Ivjhlermass'stof fen and a smaller proportion of emulsion, surface-active agent-containing aqueous medium, whereupon the surface-active agent from this fraction by precipitation or hydrolysis ontffrn ".. v: ird.

1 0 9 8 A 0 / 0 0 B 11 0 9 8 A 0/0 0 B 1

ORIGlNAL BATHROOM