DE1517736A1

DE1517736A1 - Process for the cultivation of microorganisms and for the removal of straight-chain hydrocarbon compounds from their mixtures with other hydrocarbons

Info

Publication number: DE1517736A1
Application number: DE19661517736
Authority: DE
Inventors: Vinh Ky Charles
Original assignee: BP PLC
Current assignee: BP PLC
Priority date: 1965-06-28
Filing date: 1966-06-25
Publication date: 1969-09-18
Also published as: GB1153292A; NL6608944A; FR1550061A

Description

20. Juni I966June 20, 1966

The British Petroleum Company Limited, Britannic House, Finsbury Circus, London E. C. 2 (England)The British Petroleum Company Limited, Britannic House, Finsbury Circus, London E. C. 2 (England)

Verfahren zum Kultivieren von Mikroorganismen und zur Entfernung von geradkettigen Kohlenwasserstoffverbindungen aus ihren Gemischen mit anderen KohlenwasserstoffenProcess for the cultivation of microorganisms and for the removal of straight-chain hydrocarbon compounds from their mixtures with other hydrocarbons

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Kultivierung und zur Gewinnung von Mikroorganismen. Das erfindungsgemäße Verfahren betrifft weiterhin die vollständige oder wenigstens teilweise Entfernung von geradkettigen Kohlenwasserstoffverbindungen aus ihren Gemischen mit anderen Kohlenwasserstoffverbindungen.The invention relates to a method for cultivating and obtaining microorganisms. The inventive The method also relates to the complete or at least partial removal of straight-chain Hydrocarbon compounds from their mixtures with other hydrocarbon compounds.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren, bei dem Mikroorganismen in Gegenwart eines Ausgangsmaterials kultiviert werden, das Kohlenwasserstoffverbindungen enthält oder daraus besteht. Dabei wird in Gegenwart eines wässrigen Nährmediums und eines freien Sauerstoff enthaltenden Gases gearbeitet. Anschließend wird ein Teil des wässrigen Nährmediums abgetrennt. Das die Mikroorganismen im Gemisch mit wenigstens einem Teil der restlichen Kohlenwasserstoffverbindungen und wenigstens einem Teil des restlichen Nährme-The invention relates to a method in which microorganisms cultivated in the presence of a starting material containing hydrocarbon compounds or consists of it. This is done in the presence of an aqueous nutrient medium and a gas containing free oxygen worked. Part of the aqueous nutrient medium is then separated off. That the microorganisms mixed with at least some of the remaining hydrocarbon compounds and at least part of the remaining nutrient

^ , *. „ ^ , 24^er 5in Teil hiervon^^, *. “^, 24 ^e r 5 part of this ^

diums enthaltende Produkt/wird anschließend mit einem ober flächenaktiven Mittel behandelt, das ein nichtionisches Netzmittel enthält oder daraus besteht. Anschließend wird das erhaltene Gemisch einer Trennung unterworfen, νobej /Kohlenwasserstoffverbindungen bestehendediums containing product / is then with an upper Treated surface-active agent that contains or consists of a nonionic wetting agent. Then will the mixture obtained is subjected to separation, νobej / Existing hydrocarbon compounds

Fraktion, eine Uberviegeriu aus vrässrigem Medium t^;;t;ehei.do Fraktion und schließlich eine Fraktion erhalten wird, ceFraction, a uberviegeriu from aqueous medium t ^ ;; t; ehei.do Fraction and finally a fraction is obtained, ce

BADBATH

9098 38/008 19098 38/008 1

aus einem Gemisch der Mikroorganismen und Wasser besteht oder dieses Gemisch enthält.consists of a mixture of microorganisms and water or contains this mixture.

Die Trennschritte benutzen vorzugsweise als"Verfahrensmittel das Zentrifugieren und/oder Filtern.The separation steps are preferably used as "process means" centrifugation and / or filtering.

Das erfindungsgemäß eingesetzte nichtionische Netzmittel enthält vorzugsweise im Molekül eine Kette von Äthylenoxydgruppen. Netzmittel der allgemeinen Formel A-(CHpCHpO) H sind bevorzugt, wobei A der Rest eines Alkohols oder einer Säure ist. Die Verbindungen H-A und die Werte von η sind dabei vorzugsweise - die Bereiche von η jeweils in Abhängigkeit von der bestimmten Verbindung H-A - die folgenden:The nonionic wetting agent used according to the invention preferably contains a chain of ethylene oxide groups in the molecule. Wetting agent of the general formula A- (CHpCHpO) H are preferred, where A is the remainder of an alcohol or an acid. The compounds H-A and the values of η are preferably - the ranges of η in each case Depending on the particular compound H-A - the following:

H-A Bereich des durchschnittlichen Wertes von η · HA range of the average value of η

Laurinalkohol (Laurylalkonol) ^Ύ - 10 Myristinalkohol (Myristvlaltor 7,5 - 11Lauric alcohol (lauryl alcohol) ^Ύ - 10 Myristic alcohol (Myristvlaltor 7.5 - 11

hol)get)

Cleinalkohoi (oieylalkohol) 13 - 15Cleinalkohoi (oieyl alcohol) 13-15

Palmitinsäure 14 - 17Palmitic acid 14-17

ölsäure 8,5 - Holeic acid 8.5 - H

Stearinsäure ' i!5>5 - 19Stearic acid 'i! 5> 5-19

Alternativ kann zu den als bevorzugtgenannten Netzmitteln auch ein se^lehes eingesetzt werden, das durch Kondensieren von Ä'thylenoxyd mit einem Gemisch von Laurinalkohol und i'lyriiStinalkoliol unter Bildung eines Produktes erhalten worden ist, das eine Äthylenoxydkette von durchschnittlieh 2 bis 10 i'ithyienoxydgruppen je endständige Gruppe aufweist. Insbesondere wird en bevorzugt,, IaS der Wert innerhalb dieses Bereiches 8,5 beträgt.Alternatively to the wetting agents mentioned as preferred also a se ^ lehes can be used, which by condensing of ethylene oxide with a mixture of lauric alcohol and i'lyrii-stinal coliol to form a product which has an ethylene oxide chain of 2 to 10 on average i'ithyienoxydgruppen has per terminal group. In particular, en is preferred, IaS the value within this Range is 8.5.

,j arch Verwendung- von Net «mitteln m~ !" cten bestimmter A'thylen-'•'xyoiketterilän^er. gemäß d~r Erfindung wird c-in erheblicher, arch Verwendung- j Net "forward m ~!" c th of certain A'thylen- '•' ^ xyoiketterilän it. according to d ~ r invention is c-in considerable

BAD ORIGINALBATH ORIGINAL

Vorteil für das beschriebene Verfahren erreicht. Wenn der Wert von η größer ist als die obere angegebene Grenze, dann wird das oberflächenaktive Mittel in Wasser zu stark löslich. Bei der Entfernung des Öles aus den Mikroorganismen bildet es eine stabile Emulsion mit Wasser, die nur unter beträchtlichen Schwierigkeiten gebrochen werden kann. Wenn der Wert von η kleiner als die untere angegebene Grenze wird, so 1st es nicht mehr möglich, eine so ausreichende Menge des Netzmittels in der wässrigen Phase zu lösen, daß es seiner Aufgabe bei der Trennung des Öles von den Mikroorganismen befriedigend erfüllt. g Advantage achieved for the method described. If the value of η is larger than the upper limit specified, the surfactant becomes too soluble in water. When the oil is removed from the microorganisms, it forms a stable emulsion with water that can only be broken with considerable difficulty. If the value of η is less than the lower limit given, it is no longer possible to dissolve such a sufficient amount of the wetting agent in the aqueous phase that it satisfactorily fulfills its task in separating the oil from the microorganisms. G

Das erfindungsgemäße Verfahren wird im folgenden - unter Einschluß von gegebenenfalls einzuschließenden Verfahrensstufen ausführlich geschildert. Jede Verfahrensstufe kann dabei absatzweise oder kontinuierlich betrieben werden.The method according to the invention is hereinafter - including of any procedural steps to be included. Each procedural stage can be used operated intermittently or continuously.

D#r Begriff "Mikroorganismus" umfaßt im Rahmen der Beschreibung Gemische von Mikroorganismen. Im erfindungsgemäßen Verfahren können als Mikroorganismen beispielsweise Hefen, Pilze oder Bakterien eingesetzt werden.The term “microorganism” includes in the context of the description Mixtures of microorganisms. In the method according to the invention, for example, as microorganisms Yeasts, fungi or bacteria are used.

Bei der Verwendung von Hefen sind solche der FamilieWhen using yeast, those are of the family

Cryptococcacceae und insbesondere der Unterfamilie Crypto- ä coccoideae bevorzugt; gewünschtenfalls können jedoch beispielsweise auch Ascosporogene-Hefen der Unterfamilie Saccharomyceloideae verwendet werden. Bevorzugte Geni der Familie Cryptococcoideae sind Torulopsis (auch bekannt als Torula) und Candida. Bevorzugte Hefestämme werden im folgenden genannt. Dabei wird es besonders bevorzugt, spezifische Materialien einzusetzen, die durch ihre "Baarn-Nummer" gekennzeichnet sind. Diese Nummern beziehen sich auf CBS-Materialien, die im Centraal Bureau vor Schimmerlculture, Baarn, Holland, hinterlegt sind bzw. auf INRA-Materialien, die im Institut National de la Recherche Agronomique, Paris, Frankreich, deponiert sind.Cryptococcacceae and in particular of the subfamily Crypto- ä coccoideae are preferred; if desired, however, Ascosporogenic yeasts of the Saccharomyceloideae subfamily can also be used, for example. Preferred geni of the Cryptococcoideae family are Torulopsis (also known as Torula) and Candida. Preferred yeast strains are mentioned below. It is particularly preferred to use specific materials that are identified by their "Baarn number". These numbers relate to CBS materials that are deposited in the Centraal Bureau in front of Schimmerlculture, Baarn, Holland, or to INRA materials that are deposited in the Institut National de la Recherche Agronomique, Paris, France.

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Candida lipolyticaCandida lipolytica

Candida pulcherrima CBS 610Candida pulcherrima CBS 610

Candida utilisCandida utilis

Candida utilis, Variati major CBS 841 Candida tropicalis CBS 23I7Candida utilis, Variati major CBS 841 Candida tropicalis CBS 23I7

Torulopsis colliculosa CBS 1J53Torulopsis colliculosa CBS 1J53

Hansenula anomala CBS 110Hansenula anomala CBS 110

Oidium lactis
Neurospora sitophila
^ Mycoderma cancoillote INRA; STV 11Oidium lactis
Neurospora sitophila
^ Mycoderma cancoillote INRA; STV 11

Von diesen Stämmen ist Candida lipolyticgifoesonders bevorzugt.Of these strains, Candida lipolyticgifoes is particularly preferred.

Aus der Klasse der Pilze sind die der Familie Aspergillaceae geeignet. Ein geeigneter Genus ist Pencillium. Bevorzugt wird Pencillium expansum eingesetzt. Ein anderer geeigneter Genus ist Aspergillus.From the class of the fungi, those of the family Aspergillaceae are suitable. A suitable genus is Pencillium. Is preferred Pencillium expansum used. Another suitable genus is Aspergillus.

Gewöhnlich wird die Kultivierung der Mikroorganismen in Gegenwart eines wässrigen Nährmediums durchgeführt. Gewünschtenfalls können auch bestimmte feste Nährmedien verwendet werden.The cultivation of the microorganisms is usually carried out in the presence of an aqueous nutrient medium. If so desired certain solid culture media can also be used.

| Pencillium expansum ist für die Kultivierung in einem wässrigen Nährmedium geeignet, das Kohlenwasserstoffverbindungen enthält.| Pencillium expansum is for cultivation in an aqueous Suitable nutrient medium that contains hydrocarbon compounds.

Pencillium roquefortii, Pencillium notatum, Aspergillus fussigatus und Aspergillus niger sowie Aspergillus versicolor können für die Kultivierung auf einem festen, Kohlenwasserstoffverbindungen enthaltenden Einsatz gezüchtet werden.Pencillium roquefortii, Pencillium notatum, Aspergillus fussigatus and Aspergillus niger as well as Aspergillus versicolor can be cultivated on a solid, Use containing hydrocarbon compounds are grown.

Geeignete Bakterien sind solche der Ordnungen Eubacteriales und Actinomycetales.Suitable bacteria are those of the orders Eubacteriales and Actinomycetales.

Bevorzugte Bakterien sind solche der Familien Bacillaceae und Pseudomonadaceae. Bevorzugte Spezies sind Bacillus megatherium,Preferred bacteria are those of the families Bacillaceae and Pseudomonadaceae. Preferred species are Bacillus megatherium,

Bacillus subtilis und Pseudonomas aeruginosa. Andere, mitBacillus subtilis and Pseudonomas aeruginosa. Others, with

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Vorteil verwendbare Stämme sind unter anderem:Advantages of usable strains include:

Bacillus amylobacterBacillus amylobacter

Pseudomonas natriegensPseudomonas natriegens

Arthrobacter sp.Arthrobacter sp.

Microooccus sp.Microooccus sp.

Corynebacterium michiganenseCorynebacterium michiganense

Pseudomonas syringaePseudomonas syringae

Xanthomonas begoniaeXanthomonas begoniae

Flavobacterium sp. devoransFlavobacterium sp. devorans

Acetobacter sp.Acetobacter sp.

Actinomyces sp. μ Actinomyces sp. μ

Agrobaoterium sp.Agrobaoterium sp.

Aplanobacter sp.Aplanobacter sp.

Für das Wachstum aller Mikroorganismen 1st neben dem Ausgangsmaterial und dem wässrigen Nährmedium die Zufuhr von Sauerstoff, und zwar vorzugsweise in der Form von Luft, erforderlich. For the growth of all microorganisms is next to the starting material and the aqueous nutrient medium, the supply of oxygen, preferably in the form of air, is required.

Die Sauerstoffaufnähme ist wesentlich für das Wachstum der Mikroorganismen. Um ein schnelles Wachstum zu gewährleisten, sollte die den Sauerstoff liefernde Luft in Form feiner Blasen vorliegen, wobei zweckmäßig zusätzlich gerührt wird. Die Luft kann durch gefilterte oder gefrittete Oberflächen eingeführt werden. Gewünschtenfalls kann auch das als fThe oxygen uptake is essential for the growth of the Microorganisms. In order to ensure rapid growth, the air supplying the oxygen should be finer in shape Bubbles are present, it is advisable to additionally stir. The air can pass through filtered or fritted surfaces to be introduced. If desired, this can also be used as f

"vortex-System" bekannte Verfahren zur innigen Belüftung eingesetzt werden."Vortex system" known methods for intimate aeration are used.

Es wurde gefunden, daß bei der Verwendung von Hefestämmen Candida lipolytica und unter Verwendung der "Vortex-Belüftung" eine hohe Wachstumsgeschwindigkeit erhalten wird, wobei die Generationszeit im Bereich von 2 bis 5 Stunden liegt und die Zellkonzentration innerhalb von 2 Tagen um einen Faktor bis zur Zahl 12 vergrößert wird.It has been found that when using yeast strains Candida lipolytica and using the "vortex aeration" a high growth rate is obtained, the generation time being in the range of 2 to 5 hours and the Cell concentration is increased by a factor up to 12 within 2 days.

Ein geeignetes Nährmedium für Hefen und Pilze hat die folgende Zusammensetzung:A suitable nutrient medium for yeast and fungi has the following composition:

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Diammoniumphosphat 2 gDiammonium phosphate 2 g

Kaliumchlorid 1,15 gPotassium chloride 1.15 g

Magnesiumsulfat, 7 HpO 0,65 gMagnesium sulfate, 7 HpO 0.65 g

Zinksulfat 0,17 gZinc sulfate 0.17 g

Magnesiumsulfat, 1 HpO . 0,045 gMagnesium sulfate, 1 HpO. 0.045 g

Ferrosulfat, 7 H₂O 0,068 gFerrous sulfate, 7H ₂ O 0.068 g

Leitungswasser 200 gTap water 200 g

Hefeextrakt 0,025 gYeast extract 0.025 g

destilliertes Wasser, aufgefüllt auf 1000 ml.distilled water, made up to 1000 ml.

Ein typisches Nährmedium für das Wachstum von Nocardia (ein Genus in der Ordnung Actinomycetales) besitzt die folgende ZusammensetzungiA typical nutrient medium for the growth of Nocardia (a genus in the order Actinomycetales) possesses the the following composition i

Ammoniumsulfat 1 gAmmonium sulfate 1 g

Magnesiumsulfat 0,02 gMagnesium sulfate 0.02 g

PerrosuMt, ζ H₂O 0,005 gPerrosuMt, ζ H ₂ O 0.005 g

Mangansulfat, 1 H₃O 0,002 gManganese sulfate, 1 H ₃ O 0.002 g

Monokaliumphosphat 2 gMonopotassium phosphate 2 g

Dinatriumphosphat J5 gDisodium phosphate J5 g

Kalziumchlorid 0,1gCalcium chloride 0.1g

Natriumcarbonat 0,1 gSodium carbonate 0.1 g

Hefeextrakt 0,008 g destilliertes Wasser , aufgefüllt auf 1000 ml.Yeast extract 0.008 g distilled water, made up to 1000 ml.

Für viele andere Bakterien ist eine geeignete Zusammensetzung des Nährmittels die folgende:For many other bacteria, a suitable composition of the nutrient is the following:

Monokaliumphosphat 7 gMonopotassium phosphate 7 g

Magnesiumsulfat, 7 HpO 0,2 gMagnesium sulfate, 7 HpO 0.2 g

Natriumchlorid 0,1 gSodium chloride 0.1 g

Ammoniumchlorid 2,5 gAmmonium chloride 2.5 g

Leitungswasser (Spurenelemente) 100 mlTap water (trace elements) 100 ml

Hefeextrakt 0,025 g Mit destilliertem Wasser auf 1000 ml aufgefüllt.Yeast extract 0.025 g Make up to 1000 ml with distilled water.

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Die eingesetzten Mikroorganismen sind vorzugsweise solche, die auf wenigstens einem η-Paraffin wachsen können.The microorganisms used are preferably those which grow on at least one η-paraffin can.

Mikroorganismen, und insbesondere Hefen, wachsen manchmal nur schwierig, wenn sie erstmals unter Verwendung von Kohlenwasserstofffraktionen als Einsatzmaterial gezüchtet werden, und es ist gelegentlich notwendig, ein Inoculum der Mikroorganismen zu verwenden, das vorher für das Wachstum auf den für den Einsatz geplanten Kohlenwasserstofffraktionen adaptiert worden ist. Darüber hinaus kann das Wachstum von Mikroorganismen Schwierigkeiten selbst in Gegenwart von wässrigen Mineralmedien mit den geeigneten Nährstoffen machen, weil die Kohlenwasserstofffraktion nicht die Wachstumsfaktoren enthält, die in einem Kohlehydra tmaterial vorliegen. Diese Schwierigkeit kann durch Zugabe der Wachstumsfaktoren ausgeschaltet werden.Microorganisms, and yeast in particular, are sometimes difficult to grow when using them for the first time Hydrocarbon fractions are grown as feed, and it is occasionally necessary to use an inoculum to use the microorganisms previously for growth on the hydrocarbon fractions planned for use has been adapted. In addition, the growth of microorganisms can cause difficulties in itself Presence of aqueous mineral media with the appropriate nutrients make it because the hydrocarbon fraction does not contain the growth factors found in a carbohydrate material. This difficulty can go through Addition of the growth factors can be switched off.

Das Wachstum der Mikroorganismen wird durch den Zusatz sehr geringer Mengen von Hefenextrakten zum Kulturmedium gefördert Hefeextrakte sind industrielle Produkte, die reich an Vitaminen der Oruppe B sind und durch Hydrolyse von Hefe erhalten werden - wobei allgemeiner gesagt, Vitamine der B-Gruppe und/oder Biotin Vorteile bringen. Die Menge dieser Komponen- f ten liegt vorzugsweise in der Größenordnung von 25 ppMio, bezogen auf das wässrige Fermentationsmedium. Es kann höher oder tiefer je nach den für die Wachstumsstufe gewählten Bedingungen liegen.The growth of the microorganisms is promoted by adding very small amounts of yeast extracts to the culture medium. Yeast extracts are industrial products rich in group B vitamins obtained by hydrolysis of yeast - whereby, more generally, vitamins of the B group and / or biotin are beneficial. The amount of this component f ten is preferably on the order of 25 ppMio, based on the aqueous fermentation medium. It can be higher or lower depending on the conditions chosen for the growth stage.

Das Wachstum der Mikroorganismen erfolgt auf Kosten des Kohlenwasserstoff haltigen Einsatzes unter zwischenzeitlicher Bildung von Verbindungen mit einer sauren Punktion, insbesondere Fettsäuren, und zwar in der Weise, daß der p„-Wert des wässrigen Mineralmediums zunehmend niedriger wird. Wenn man diese Erscheinung nicht ausgleicht, wird das Wachstum ziemlich rasch abgebremst, so daß die Konzentration der Mikroorganismen im Medium bzw. die Zelldichte nicht mehrThe growth of the microorganisms takes place at the expense of the hydrocarbon-containing use with intermittent Formation of compounds with an acidic puncture, especially fatty acids, in such a way that the p "value of the aqueous mineral medium becomes increasingly lower. If one does not compensate for this phenomenon, there will be growth decelerated fairly quickly, so that the concentration of microorganisms in the medium or the cell density no longer

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weiter ansteigt, womit die sogenannte stationäre Phase erreicht ist.continues to rise, with the so-called stationary phase being reached.

Erfindungsgemäß wird daher vorzugsweise das wässrige Nährmedium bei bestimmten erwünschten p„-Werten gehalten, und zwar durch stufenweises oder kontinuierliches Zusetzen eines wässrigen Mittels mit hohem p„-Wert. Bei der Verwendung von Pilzen oder Hefen, und insbesondere beim Arbeiten mit Candida lipolytica, wird gewöhnlich der p_H-Wert des Nährmittels im Bereich von 3 bis 6 und vorzugsweise im Bereich von 4 bis 5 gehalten. Bakterien benötigen in der Regel höhere p^-Werte, und zwar üblicherweise 6,5 bis Geeignete alkalische Mittel für den Zusatz in das Wachstumsgemisch sind beispielsweise Natriumhydroxyd, Kaliumhydroxyd, Dlnatriumhydrogenphosphat und Ammoniak, und zwar sowohl in freier Form als auch in wässriger Lösung.,According to the invention, the aqueous nutrient medium is therefore preferably kept at certain desired p "values, namely by gradually or continuously adding an aqueous agent with a high p" value. When using fungi or yeasts, and in particular when working with Candida lipolytica, the _pH value is maintained of the foodstuff in the range of 3 to 6 and preferably in the range 4-5 usual. Bacteria generally require higher p ^ values, usually 6.5 to. Suitable alkaline agents for addition to the growth mixture are, for example, sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium hydrogen phosphate and ammonia, both in free form and in aqueous solution.,

Die optimale Temperatur des Wachstumsgemisches ist dem jeweils gewählten Typ von Mikroorganismen angepaßt und liegt gewöhnlich im Bereich von 25 bis J55°C. Bei der Verweändung von Candida lipolytica ist die bevorzugte Temperatur im Bereich von 28 bis 52°C.The optimal temperature of the growth mixture is adapted to the type of microorganism selected in each case and is usually in the range from 25 to J55 ° C. When treating candida lipolytica is the preferred temperature in the range of 28 to 52 ° C.

Bei dem absatzweisen Arbeiten wächst gewöhnlich der Mikroorganismus anfänglich nur langsam, d. h. mit nur geringem Ansteigen der Zelldichte. Diese Phase des Wachstums wird gewöhnlich als "träge Phase" bezeichnet. Danach nimmt die Wachstumsgeschwindigkeit zu. Diese Periode der größeren Wachstumsgeschwindigkeit wird als "exponentiale Phase" bezeichnet. Schließlich wird in der "stationären Phase" die Zelldichte konstant.When working in batches, the microorganism usually grows initially only slowly, i. H. with only a slight increase in cell density. This stage of growth will be usually referred to as the "sluggish phase". After that, the growth rate increases. This period of the greater The rate of growth is referred to as the "exponential phase". Finally, in the "stationary phase" the cell density constant.

Die Entnahme von Mikroorganismen für den Ansatz eines nächstenThe removal of microorganisms for the approach of another

Absatzes im stufenweisen Verfahren findet vorzugsweise vorParagraphs in a step-by-step process are preferred

der Beendigung der Exponentla!phase statt. Die Wachstumsreaktionthe termination of the exponential phase takes place. The growth response

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wird gewöhnlich vor der stationären Phase abgebrochen.is usually terminated before the stationary phase.

Es ist erfindungsgemäß Jedoch bevorzugt, das Verfahren unter kontinuierlichen Bedingungen durchzuführen.According to the invention, however, it is preferred to use the method under to carry out continuous conditions.

Das Produkt aus der Kultivierungsstufe wird zur Entfernung der Hauptmasse der wässrigen Phase dekantiert. Zu dem verbleibenden Produkt wird das nichtionische Netzmittel und Wasser - entweder getrennt voneinander oder in Mischung oder auch teilweise gemischt - gegeben. Das Gemisch wird vorzugsweise kräftig gerührt, z.B. durch Verwendung einer ^ Vortex-Pumpe. Das Gemisch wird dann zentrifugiert. Hierbei werden die Mikroorganismen als Creme oder Paste gewonnen. Daneben fällt als einzige Fraktion oder auch als getrennte Fraktionen die wässrige Phase und die ölphase an. Bevorzugt wird das Wasser als eine getrennte Phase abgezogen. Wenn wässrige Phase und ölphase als nur eine Fraktion abgezogen werden, dann kann diese Fraktion zur Phasentrennung erneut zentrifugiert werden.The product from the cultivation stage is decanted to remove the bulk of the aqueous phase. To the remaining one The product is the nonionic wetting agent and water - either separately from one another or in a mixture or partly mixed - given. The mixture is preferably stirred vigorously, for example using a ^ Vortex pump. The mixture is then centrifuged. The microorganisms are obtained as a cream or paste. In addition, the aqueous phase and the oil phase are obtained as the only fraction or also as separate fractions. Preferred the water is withdrawn as a separate phase. When aqueous phase and oil phase as only one fraction are drawn off, then this fraction can be centrifuged again to separate the phases.

Die Creme- oder Pasten-artige Mikroorganismenfraktion wird anschließend vorzugsweise mit Wasser verdünnt und erneut zentrifugiert. Hierbei wird wieder in Creme- bzw. Pastenform der Mikroorganismus gewonnen und getrennt davon das ver- f brauchte Waschwasser. Die Creme bzw. Paste kann jetzt getrocknet werden. Bevorzugt wird Trommel-Trocknen. Alternativ kann das cremeartige bzw. pastenartige Produkt teilweise entweder durch Trommel-Trocknen oder durch Extraktion mit einem Alkohol, beispielsweise mit Isopropanol getrocknet werden, woraufhin das teilweise getrocknete Material mit einem Gemisch von Alkohol und Kohlenwasserstoffverbindungen extrahiert wird, beispielsweise mit einem Gemisch von Isopropanol und η-Hexan, das zweckmäßigerweise etwa 80 Gew.-% η-Hexan und etwa 20 Gew.-# Isopropanol enthält. Hierbei werden zurückgebliebene Spuren von Kohlenwasserstoffverbindungen und Lipide entfernt.The cream- or paste-like microorganism fraction is then preferably diluted with water and centrifuged again. The microorganism is recovered in the form of a cream or paste, and the washing water used is separated from it. The cream or paste can now be dried. Drum drying is preferred. Alternatively, the creamy or paste-like product can be partially dried either by drum drying or by extraction with an alcohol, for example with isopropanol, after which the partially dried material is extracted with a mixture of alcohol and hydrocarbon compounds, for example with a mixture of isopropanol and η .% containing η-hexane and about 20 wt .- # isopropanol - hexane, the suitably about 80 wt. This removes traces of hydrocarbon compounds and lipids that have remained.

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- ίο -- ίο -

Es ist bekannt, daß bestimmte Erdölfraktionen, und zwar insbesondere Gasöle, geradkettige Kohlenwasserstoffverbindungen, und zwar hauptsächlich Paraffine enthalten, die zu den Wachsen zählen und die einen nachteiligen Effekt auf den Fließpunkt der Fraktionen ausüben. Wenn diese Kohlenwasserstoffe teilweise oder vollständig entfernt werden, wird der Fließpunkt der Fraktion erniedrigt. Gewöhnlich wird das Wachs unter Verwendung von Lösungsmitteln ausgefällt, wobei das Wachs in der Form gewonnen wird, wie es ursprünglich in der Fraktion vorgelegen hat, dh. es findet hierbei keine Umwandlung des Wachses in wertvollere Produkte } statt,It is known that certain petroleum fractions, in particular gas oils, straight-chain hydrocarbon compounds, namely mainly containing paraffins, which are among the waxes and which are disadvantageous Have an effect on the pour point of the fractions. When these hydrocarbons are partially or completely removed the pour point of the fraction is lowered. Usually the wax is made using solvents precipitated, the wax being obtained in the form it was originally in the fraction, ie. it finds no conversion of the wax into more valuable products} instead,

Auch die unterhalb des Gasöls siedenden Erdölfraktionen, beispielsweise also Schwerbenzine und Leuchtpetroleum, enthalten geradkettige Kohlenwasserstoffe, die ein wertvolles Ausgangsmaterial für Umwandlung in andere Produkte sein könnten. Bis heute hat jedoch im allgemeinen die Verwendung dieser Kohlenwasserstoffverbindungen Schwierigkeiten gemacht, weil ihre Abtrennung aus den Erdölfraktionen notwendig ist, bevor sie in andere Produkte umgewandelt werden können.Also the petroleum fractions boiling below the gas oil, for example heavy gasoline and kerosene, contain straight-chain hydrocarbons, which are valuable starting materials for conversion into other products could be. To date, however, these hydrocarbon compounds have generally been difficult to use made because their separation from the petroleum fractions is necessary before they can be converted into other products.

Die Erfindung umfaßt in einer besonders bevorzugten Ausführungs-" form ein Verfahren, das die Kultivierung der beschriebenen Mikroorganismen in Gegenwart von Erdölfraktionen betrifft, die teilweise geradkettige Kohlenwasserstoffe mit einem mittleren Molekulargewicht von wenigstens 10 C-Atomen je Molekül enthalten, wobei auch hier in Gegenwart eines wässrigen Nährmediums gearbeitet wird. Es wird weiterhin auch hier in Gegenwart eines freien Sauerstoff enthaltenden Gases gearbeitet. Von dem Reaktionsgemisch werden dann einerseits die gebildeten Mikroorganismen und andererseits eine Erdölfraktion abgetrennt, die einen verringerten Gehalt an geradkettigen Kohlenwasserstoffen aufweist, oder das von den geradkettigen Kohlenwasserstoffen frei ist, woraufhin dann die gewonnenen Mikroorganismen in der beschriebenen Weise weiter aufgearbeitet werden.The invention comprises in a particularly preferred embodiment " form a process that concerns the cultivation of the described microorganisms in the presence of petroleum fractions, the partially straight-chain hydrocarbons with an average molecular weight of at least 10 carbon atoms each Contain molecule, which is also carried out here in the presence of an aqueous nutrient medium. It will continue to be here in Worked in the presence of a gas containing free oxygen. From the reaction mixture, on the one hand, the formed Microorganisms and, on the other hand, a petroleum fraction separated, which have a reduced content of straight-chain Has hydrocarbons, or which is free from the straight-chain hydrocarbons, whereupon then the recovered Microorganisms are processed further in the manner described.

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- li -- li -

Das erfindungsgemäße Verfahren ist in dieser Ausführungsform insbesondere wertvoll für die Behandlung von Erdöl-GasöIfraktionen, die geradkettige Kohlenwasserstoffe in Form von Wachsen enthalten. Hierbei wird nämlich gleichzeitig einerseits ein Gasöl mit verbessertem Fließpunkt erhalten, andererseits werden die Wachse in ein wertvolleres Produkt umgewandelt.The method of the invention is in this embodiment particularly valuable for the treatment of petroleum gas oil fractions, which contain straight-chain hydrocarbons in the form of waxes. Here is namely at the same time on the one hand a gas oil with an improved pour point is obtained, on the other hand the waxes become a more valuable one Product converted.

Die geradkettigen Kohlenwasserstoffe liegen in den erfindungsgemäß eingesetzten Ausgangsmaterialien gewöhnlich als Paraffine vor. Sie können jedoch auch Olefine sein. Auch Mischungen von geradkettigen Paraffinen und Olefinen kommen in Betracht.The straight-chain hydrocarbons are those according to the invention The starting materials used are usually paraffins. However, they can also be olefins. Also mixtures of straight-chain paraffins and olefins are suitable.

Es ist ein wichtiges Merkmal der Erfindung, daß beim Kultivieren von Hefen in Gegenwart von Ausgangsmaterialien, wie sie hier beschrieben worden sind, unter den das Hefewachstum begünstigenden Bedingungen die geradkettigen Kohlenwasserstoffe,nicht aber die anderen Kohlenwasserstoffverbindungen, also beispielsweise Isoparaffine, Naphthene und Aromaten methabolisiert werden, oder daß wenigstens der Anteil dieser anderen Kohlenwasserstofftypen sehr klein ist.It is an important feature of the invention that when cultivating yeast in the presence of starting materials such as they have been described here, under the conditions favorable to yeast growth the straight-chain hydrocarbons, not but the other hydrocarbon compounds, for example isoparaffins, naphthenes and aromatics are metabolized, or that at least the proportion of these other types of hydrocarbons is very small.

In Abweichung von üblichen chemischen Verfahren, die dem Hassenwirkungsgesetz unterliegen, wird die Geschwindigkeit in der Entfernung der geradkettigen Kohlenwasserstoffverbindungen nicht wesentlich verringert, wenn der Anteil dieser Kohlenwasserstofftypen in dem Gesamtgemisch abnimmt - mit Ausnahme selbstverständlich in den allerletzten Stufen des Verfahrens. GewÜnschtenfalls kann also die tatsächlich eingetretene prozentuale Umwandlung der geradkettigen Kohlenwasserstoffe in den Bereich von 100 % gebracht werden, ohne daß damit eine unangemessen lange Ausdehnung der Kontaktzelt unter Erreichung nur kleiner Fortschritte notwendig wird. Im kontinuierlichen Verfahren wird es darüber hinaus möglich, derart hohe prozentuale Umsetzungen zu erreichen, ohne auf lange Reaktionswege zurückgreifen zu müssen.In deviation from the usual chemical processes, which are subject to Hassen's law of action, the rate of removal of the straight-chain hydrocarbon compounds is not significantly reduced if the proportion of these types of hydrocarbons in the overall mixture decreases - with the exception of course in the very last stages of the process. If so desired, the percentage conversion of the straight-chain hydrocarbons that actually occurred can be brought into the region of 100% without the need for an inappropriately long expansion of the contact tent with only small progress being made. In the continuous process, it is also possible to achieve such high percentage conversions without having to resort to long reaction paths.

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Durch Betrieb des Verfahrens unter Bedingungen, die die Umwandlung von geradkettigen Kohlenwasserstoffen in gewünschter Weise beschränken, ist es auch möglich, nur einen gewünschten Anteil dieser Kohlenwasserstoffverbindungen zu entfernen.By operating the process under conditions that favor the conversion of straight chain hydrocarbons into desired Restrict way, it is also possible to only a desired proportion of these hydrocarbon compounds remove.

Geeignete Einsatzmaterialien für das Verfahren der Erfindung sind beispielsweise Leuchtpetroleum, Gasöle und Schmieröle. Diese Materialien können im unraffinierten Zustand eingesetzt werden, sie können aber auch einer Raffinierungsbehandlung unterworfen worden sein, sofern sie noch einen Anteil von geradkettigen Kohlenwasserstoffen enthalten, um dem Sinne der Erfindung entsprechen zu können. Geeignete Erdölfraktionen enthalten beispielsweise 3 bis 45 Gew.-% an geradkettigen Kohlenwasserstoffen.Suitable feedstocks for the process of the invention are, for example, kerosene, gas oils and lubricating oils. These materials can be used in the unrefined state, but they can also have been subjected to a refining treatment, provided that they still contain a proportion of straight-chain hydrocarbons in order to be able to correspond to the meaning of the invention. Suitable petroleum fractions include, for example, 3 to 45 wt -.% Of straight-chain hydrocarbons.

Bevorzugte Verfahren, die bei der Kultivierung der Mikroorganismen und bei der Gewinnung des Produktes eingesetzt werden können, sind in dem britischen Patent 914 567 sowie in den folgenden Patentanmeldungen beschrieben:Preferred methods used in the cultivation of the microorganisms and which can be used in the recovery of the product are disclosed in British Patent 914 567 as well described in the following patent applications:

B 74 851 IVa/6a B 79 321 IVa/6bB 74 851 IVa / 6a B 79 321 IVa / 6b

B 79 322 IVa/6b B 85 070 IVa/6a B 85 07I IVa/6a B 85 072 IVd/23b B 85 073 IVd/23b B 85 074 IVa/6a B 85 075 IVa/6a B 74 851 IVa/6a Britische Anmeldungen:B 79 322 IVa / 6b B 85 070 IVa / 6a B 85 07I IVa / 6a B 85 072 IVd / 23b B 85 073 IVd / 23b B 85 074 IVa / 6a B 85 075 IVa / 6a B 74 851 IVa / 6a British registrations:

44 606/62
46 906/62
2 234/63
49 049/62
49 050/62
49 051/6244 606/62
46 906/62
2 234/63
49 049/62
49 050/62
49 051/62

909838/0081909838/0081

49 055/62 49 054/62 49 058/62 49 059/62 49 060/62 49 065/62 1 168/65 49 068/62 49 069/62 21 255/65 21 668/65 25 210/65 45 000/65 m 49 055/62 49 054/62 49 058/62 49 059/62 49 060/62 49 065/62 1 168/65 49 068/62 49 069/62 21 255/65 21 668/65 25 210/65 45 000 / 65 m

44 998/65 *44 998/65 *

45 014/65 45 OI5/65 45 OI2/65 45 OH/65 45 OIO/65 45 OO8/65 45 007/65 45 006/65 45 005/65 45 005/65 45 002/6545 014/65 45 OI5 / 65 45 OI2 / 65 45 OH / 65 45 OIO / 65 45 OO8 / 65 45 007/65 45 006/65 45 005/65 45 005/65 45 002/65

example 1

Eine Hefe Candida lipolytica wird in einem kontinuierlich betriebenen Fermenter eines Rauminhaltes von 50 irr in Gegenwart eines wässrigen Nährmediums der folgenden Zusammensetzung gezüchtet:A yeast Candida lipolytica is in a continuously operated fermenter with a volume of 50 irr in Grown in the presence of an aqueous nutrient medium of the following composition:

g/lg / l

2,02.0

KCl 1,15KCl 1.15

MgSO₄- 7H₂O 0,65MgSO ₄ - 7H ₂ O 0.65

MnSO₄* 4H₂O 0,06MnSO ₄ * 4H ₂ O 0.06

FeSO₄. 7H₂O 909838/0081FeSO ₄ . 7H ₂ O 909838/0081

ZnSO₄. 7H₂O CZnSO ₄ . 7H ₂ OC

Es wird dabei mit einer Belüftungsgeschwindigkeit von 60 V/V/Std. unter Verwendung einer Vortex-Rührung gearbeitet.It is with a ventilation speed of 60 V / V / hour. worked using a vortex agitation.

Als Substrat wird ein Gasöl aus Irak-Erdöl eingesetzt, das die folgenden Charakterisitiken aufweist: ■A gas oil from Iraq petroleum is used as the substrate has the following characteristics: ■

Spezifisches Gewicht 0,870Specific gravity 0.870

Fließpunkt +15°CPour point + 15 ° C

Siedebereich 500-58O⁰CBoiling range 500-58O ⁰ C

Ein Gemisch von Gasöl und wässrigem Nährmedium in dem Verhältnis von 28/I72 Volumteilen wird dem Permenter in einer Menge von 200 l/nr Permenter/Stunde zugeführt. Das Produkt wird kontinuierlich abgezogen. Der Fermenter wird bei einer Temperatur von 3O⁰C und einem p„-Wert von 4 unter kontinu-A mixture of gas oil and aqueous nutrient medium in the ratio of 28/172 parts by volume is fed to the permenter in an amount of 200 l / nr permenter / hour. The product is drawn off continuously. The fermenter is operated at a temperature of 3O ⁰ C and a p "value of 4 under continuous

XlXl

ierlicher Zugabe von wässrigem Ammoniak gehalten. Das Produkt hat per nr Produkt die folgende Zusammensetzung:The addition of aqueous ammonia is maintained. The product has the following composition per product:

Restgasöl Ij5j5 1Residual gas oil Ij5j5 1

Candida lipolytica 7 kgCandida lipolytica 7 kg

Wasser + restliche Salze 860 1Water + remaining salts 860 1

Durch Dekantieren werden je m^ Produkt 66O 1 wässriger Phase abgetrennt und durch 36O 1 Wasser ersetzt, wobei ein Gemisch anfällt, das pro nr die folgende Zusammensetzung aufweist:Decanting produces 66O 1 aqueous phase per m ^ product separated and replaced by 36O 1 of water, a mixture accrues, which has the following composition per nr:

RestgasölResidual gas oil

Candida lipolytica 7 kgCandida lipolytica 7 kg

wässrige Phase 500 1aqueous phase 500 1

Zu diesem Gemisch werden je nr 0,35 kg eines nichtionischen Netzmittels zugefügt, das unter der Handelsbezeichnung "NI 29" vertrieben wird und ein Produkt ist, das durch Kondensieren eines Gemisches von Laurinalkohol und Myristinalkohol mit Äthylenoxyd gewonnen worden ist, wobei eine Äthylenoxydkettenlänge von durchschnittlich 8,5 Einheiten je Endgruppe vorliegt.0.35 kg of a nonionic are added to this mixture Wetting agent added which is sold under the trade name "NI 29" and is a product which is produced by condensation a mixture of lauric alcohol and myristic alcohol with ethylene oxide has been obtained, with an ethylene oxide chain length of an average of 8.5 units per end group is present.

Es wird sorgfältig gemischt und zentrifugiert (unter Verwendung einer "Sharples"-Autojektor-DG 2-Zentrifuge). Es werden als getrennte Produkte je 700 1 des Gemisches folgende Fraktionen erhalten: 909838/0081 Mix thoroughly and centrifuge (using a "Sharples" autojector DG 2 centrifuge). The following fractions are obtained as separate products per 700 l of the mixture: 909838/0081

Hefepaste 35 kgYeast paste 35 kg

Gasöl 135 1Gas oil 135 1

wässrige Phase 532 1aqueous phase 532 1

Die Hefepaste enthält noch 1,5 Gew.-^ Rückstandsgasöl (bezogen auf das Gewicht der trockenen Hefe).The yeast paste still contains 1.5 wt .- ^ residual gas oil (based on the weight of the dry yeast).

Die Paste wird mit 665 1 Wasser vermischt und erneut zentrifugiert. Die jetzt erhaltene Hefepaste enthält noch 1 Gew.-# Restgasöl (bezogen auf das Gewicht der Trockenhefe), Diese Paste wird in der Trommel mit Dampf bei 4 kg Druck und einer Trommelflächentemperatur von ca. 14O°C getrocknet.The paste is mixed with 665 l of water and centrifuged again. The yeast paste now obtained still contains 1 wt .- # residual gas oil (based on the weight of the dry yeast), This paste is dried in the drum with steam at 4 kg pressure and a drum surface temperature of approx. 140 ° C.

Die trockene Hefe wird mit η-Hexan in einer Menge von 2 1 η-Hexan je kg Hefe extrahiert. Diese Lösungsmittelextraktion wird 5 mal wiederholt. Dabei fällt ein praktisch Kohlenwasserstoff freies Produkt an.The dry yeast is extracted with η-hexane in an amount of 2 liters of η-hexane per kg of yeast. This solvent extraction is repeated 5 times. Practically a hydrocarbon falls in the process free product on.

Example 2

50 1 des folgenden wässrigen Mineralmediums werden in einen 50 1 fassenden Fermenter mit Rührung eingeführt (jeweils Gewichtsteile):50 liters of the following aqueous mineral medium are poured into a 50 1 fermenter with stirrer introduced (each part by weight):

dreibasisches Natriumphosphat 3*4tribasic sodium phosphate 3 * 4

Kaliumchlorid 0,6Potassium chloride 0.6

Magnesiumsulfat 0,3Magnesium sulfate 0.3

Ammoniumsulfat 2,5 |Ammonium sulphate 2.5 |

auf 1000 Teile aufgefüllt mit weichem, Spurenelemente enthaltendem Wasser.made up to 1000 parts with soft, containing trace elements Water.

Anstelle dieses Gemisches kann auch das folgende Medium eingesetzt werden:The following medium can also be used instead of this mixture will:

Diammoniumphosphat 2Diammonium phosphate 2

JfJ Kaliumchlorid 1,15JfJ potassium chloride 1.15

«> Magnesiumsulfat ,7 HgO 0,65«> Magnesium sulfate, 7 HgO 0.65

ω Zinksulfat 0,17ω zinc sulfate 0.17

" Mangansulfat, 1 HgO 0,045"Manganese sulfate, 1 HgO 0.045

Ferrosulfat,7 H₀O 0,068Ferrous sulfate, 7 H ₀ O 0.068

cd Leitungswasser 200cd tap water 200

"* Hefeextrakt 0,025"* Yeast extract 0.025

destilliertes Wasser, auf 1000 Teile aufgefüllt.distilled water, made up to 1000 parts.

Dem Permenterinhalt werden einige ppMio an Hefeextrakt und dann 1200 g Candida lipolytica in Form einer wässrigen, etwa 20 Gew,-# Trockenmaterial enthaltenden Creme zugesetzt. Anschließend werden 2000 g eines schweren Erdölgasöls mit einem Gehalt von 20 Gew.-% η-Paraffinen zugesetzt.A few ppMio of yeast extract and then 1200 g of Candida lipolytica in the form of an aqueous cream containing about 20% by weight of dry material are added to the permenter content. Subsequently, 2000 g of a heavy petroleum gas oil with a content of 20 wt -.% Η-paraffins added.

Nachdem in der Kultur die gewünschte Konzentration von Hefezellen für das kontinuierliche Verfahren erreicht ist, wird dem Permenter kontinuierlich wässriges mineralisches Medium und Erdöl zugegeben. Die Temperatur wird bei 50⁰C und der Pjr des Mediums bei einem Wert von 4 durch Zugabe von wässrigem Ammoniak gehalten.After the desired concentration of yeast cells for the continuous process has been reached in the culture, aqueous mineral medium and petroleum are continuously added to the permenter. The temperature is kept at 50 ⁰ C and the PJR of the medium at a value of 4 by addition of aqueous ammonia.

Das aus dem Permenter erhaltene Produkt zeigt je nr die folgende Zusammensetzung:The product obtained from the Permenter shows nr each the following composition:

restliches Gasölremaining gas oil

Candida lipolytica 8 kgCandida lipolytica 8 kg

Wasser + Salze 854 1Water + salts 854 1

Zu einem 700 1-Ansatz dieses Gemisches werden verschiedene Netzmittel in unterschiedlichen Beträgen , so wie es in der folgenden Tabelle gezeigt ist, zugegeben. Das erhaltene Gemisch wird zentrifugiert (Sharples-Autojektor DG Zentrifuge). Dabei werden als getrennte Produkte erhalten a) eine Hefepaste, die Spuren von öl enthält, b) Restgasöl, das einige Hefezellen enthält und c) eine wässrige Phase, die Spuren von öl und Hefezellen enthält.For a 700 1 batch of this mixture there are various Wetting agents added in different amounts, as shown in the following table. The received Mixture is centrifuged (Sharples Autojector DG centrifuge). This gives as separate products a) a yeast paste that contains traces of oil, b) residual gas oil, which some Contains yeast cells and c) an aqueous phase which contains traces of oil and yeast cells.

Die Hefepaste wird mit Wasser auf 700 1 Hefesuspension aufgefüllt und erneut zentrifugiert, wobei anfällt a) eine Hefepaste, b) Restgasöl und c) eine wässrige Phase.The yeast paste is made up to 700 l of yeast suspension with water and centrifuged again, resulting in a) a yeast paste, b) residual gas oil and c) an aqueous phase.

Bei den Versuchen wird festgestellt, daß für den Fall, daß die Äthylenoxydeinheiten weniger als 7 beträgt, bei Netzmitteln auf der Basis von Laurinalkohol die Mischbarkeit mit Wasser sehr gering ist und daher die Gewinnung der Produkte unbefriedigend ist.In the tests it is found that in the event that the ethylene oxide units are less than 7, in the case of wetting agents on the basis of lauric alcohol the miscibility with water is very low and therefore the extraction of the Products is unsatisfactory.

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Wenn andererseits die Zahl der Äthylenoxydeinheiten mehr als 15 beträgt, dann ist bei Netzmitteln auf der Basis von Laurylalkohol die Hefegewinnung unbefriedigend wegen ihrer zu hohen Löslichkeit in Wasser. Es ist weiterhin ersichtlich, daß der unverseifbare Restanteil, bezogen auf Hefe, ansteigt, wenn das oberflächenaktive Mittel Je Molekül mehr als 8,5 Äthylenoxydeinheiten je Einheit Laurinalkohol aufweist, was wiederum das Vorliegen eines Optimums anzeigt.On the other hand, if the number of ethylene oxide units is more than 15, wetting agents are based the yeast extraction of lauryl alcohol is unsatisfactory because of its excessive solubility in water. It is still it can be seen that the unsaponifiable remainder, related on yeast, increases if the surfactant per molecule is more than 8.5 ethylene oxide units per unit Has lauric alcohol, which in turn indicates the presence of an optimum.

Bei Stearinsäure ist die niedrigste Zahl der Äthylenoxyd- einheiten je Molekül 6 bis 8, um sicherzustellen, daß das ™ oberflächenaktive Mittel ausreichend wasserlöslich ist. Oberhalb von 20 Äthylenoxydeinheiten wird das Netzmittel zu stark löslich in Wasser.Stearic acid has the lowest number of ethylene oxide units 6 to 8 per molecule to ensure that the ™ surfactant is sufficiently soluble in water. The wetting agent is used above 20 ethylene oxide units too soluble in water.

Bei ölsäure sind die Grenzwerte der Äthylenoxydeinheiten 6 bis 15 je Molekül, wobei ein optimaler Bereich von 8,5 bis 11 Einheiten je Molekül liegt.In the case of oleic acid, the limit values are the ethylene oxide units 6 to 15 per molecule, with an optimal range of 8.5 to 11 units per molecule.

Bei der Gewinnung von Candida lipolytica - Hefe unter Verwendung des Netzmittels auf der Basis von Laurinalkohol mit 8,5 Einheiten Äthylenoxyd (MI 29) wird eine Hefepaste mit einem Gehalt von 1 Gew.-^ restlichem Gasöl - bezogen auf g das Hefetrockengewicht - erhalten. Die Hefepaste wird einer Trommeltrocknung unter Verwendung von Dampf bei 4 kg Druck und einer Trommelflächentemperatur von etwa 140 C unterworfen. When Candida lipolytica yeast is obtained using the wetting agent based on lauric alcohol with 8.5 units of ethylene oxide (MI 29), a yeast paste with a content of 1% by weight of residual gas oil - based on g of the dry yeast weight - is obtained. The yeast paste is drum-dried using steam at 4 kg pressure and a drum surface temperature of about 140 ° C.

Die trockene Hefe enthält einige restliche Kohlenwasserstoffverbindungen. Ein Kohlenwasserstoff freies Produkt kann durch Lösungsmittelextraktion erhalten werden. Hierfür wird vorzugsweise ein Gemisch von η-Hexan und Isopropanol eingesetzt, wie es beispielsweise in den folgenden/fafSfifShmeldungen beschrieben 1st: 25 2IO/63, 18 180/66 und 18 179/66.The dry yeast contains some residual hydrocarbon compounds. A hydrocarbon free product can be obtained by solvent extraction. For this it is preferred a mixture of η-hexane and isopropanol is used, as described, for example, in the following reports 1st: 25 2IO / 63, 18 180/66 and 18 179/66.

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Example 3

Das Verfahren des Beispiels 2 wird unter Verwendung eines Hefestammes Candida utilis wiederholt. Es werden entsprechende Ergebnisse erhalten.The procedure of Example 2 is repeated using a yeast strain Candida utilis. There will be appropriate Get results.

Example 4

Das Verfahren des Beispiels 2 wird unter Verwendung des Hefestammes Hansenula suavelens durchgeführt. Es werden vergleichbare Ergebnisse erhalten.The procedure of Example 2 is carried out using the yeast strain Hansenula suavelens. It comparable results are obtained.

Example 5

Das Verfahren des Beispiels 2 wird unter Verwendung eines Hefestammes Candida tropicalis wiederholt. Auch hier werden vergleichbare Ergebnisse erhalten.The procedure of Example 2 is repeated using a yeast strain of Candida tropicalis. Will be here too get comparable results.

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Tabel

HandelsbezeichnungTrade name

Zahl der Äthylenoxydeinheiten Number of ethylene oxide units

eingesetzte Menge von Netzmittel (kg/m³)Amount of wetting agent used (kg / m ³ )

gewonnene Produkte: Hefe, kg Gaeöl, wässrige Phase«obtained products: yeast, kg Gaeöl, aqueous phase "

Gew.-% Ünverseifbares (bezogen auf Trockenhefe) nach dem Wascher mit Netzmittel % By weight of unsaponifiable (based on dry yeast) after the washer with wetting agent

zugesetzte Menge an Spülwasseradded amount of rinse water

Gew.-Ji Ünverseifbares (bezogen auf Trockenhefe) nach dem Spülen mit Wasser Gew.-Ji Unsaponifiable (based on dry yeast) after rinsing with water

LaurinalkoholLauric alcohol NI 29NI 29 SN b5'/5 .SN b5 '/ 5. 22 ulfatierter
Laurinalkoholsulfated
Lauric alcohol 22 StearinsäureStearic acid NI174NI174 ölsäureoleic acid 0,50.5 22 iSmull 1 012
OiSmull 1 012
O 22 ucro-
eester
ο* Tailucro-
eester
ο * Tail IF 7IF 7 8,58.5 1515th 44
158
51844
158
518 rensopolrensopol 42
158
52042
158
520 NII73NII73 1515th B 65/21 BB 65/21 B 58
I58
52458
I58
524 45
I58
5I945
I58
5I9 1212th 45
I58
51945
I58
519 SESOSESO 77th 0,50.5 0,50.5 -- 7,57.5 7,17.1 1010 22 99 0,50.5 η 6η 6 22 44
158
51844
158
518 44
158
51844
158
518 656656 11 658658 22 41
158
52141
158
521 662662 657657 45
I58
51945
I58
519 657657 22 44
158
51844
158
518 1,51.5 -- 5,75.7 42
158
52042
158
520 1,51.5 41
158
52141
158
521 1,21.2 1,81.8 4,24.2 44
L58
518 ^44
L58
518 ^ 656656 656656 2,82.8 659659 657657 656656 η 1,0η 1.0 658658 659659 5,55.5 -- 656656 1,81.8 1,21.2 2,62.6 88th

Claims

Pat ent claims

1) Method of cultivating microorganisms on a hydrocarbon feedstock, the straight chain hydrocarbons contains or consists of it, in the presence of an aqueous nutrient medium and a containing free oxygen Gas, with subsequent separation of part of the aqueous nutrient medium and separation of the reaction mixture, characterized in that the remaining Product or part thereof that contains the microorganisms in a mixture with at least part of the remaining hydrocarbon compounds and contains at least a portion of the remaining nutrient medium, with a surface-active one Agent added which consists of a nonionic wetting agent or contains such a wetting agent, whereupon the mixture obtained in this way is subjected to a separation, from which a predominantly hydrocarbon compounds containing fraction, a fraction containing predominantly aqueous medium and a fraction containing the microorganisms Faction to be won.

2) Method according to claim 1, characterized in that a compound is used as the nonionic wetting agent which contains a chain of Ä'thylenoxydgruppen in its molecule.

3) Method according to claim 1, characterized in that wetting agents of the general formula A- (CH CH ₂ O) _n H are used, where A is the remainder of an alcohol, and the following relationships also exist between A and η:

Lauric alcohol: mean value of η in the range from 7-10 Myristic alcohol: mean value of η in the range from 7.5 - H oleine alcohol: mean value of η in the range from I} - Vj

4) Method according to claim 1 and 2, characterized in that

BATHROOM QRIGIMAL

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that in the wetting agent of the formula A-A denotes an acid residue and is between A and η the following relationships exist:

Palmitic acid: mean value of η in the range of 14 oleic acid: mean value of η in the range of 8.5 stearic acid: mean value of η in the range of 15.5 -

5) Method according to claim 1 to 4, characterized in that yeasts are used as microorganisms, those * »of the family Cryptococcaceae, preferably of the subfamily Cryptococcoideae are preferred, the % working with yeasts of the Geni Torulopsis or Candida, especially Candida lipolytica be appropriate

6) Method according to claim 1 to 4, characterized in that bacteria are used as microorganisms.

7) Method according to claim 1 to 6, characterized in that the product fraction containing the microorganisms and water is extracted with solvents, solvents containing hydrocarbons, in particular mixtures of hydrocarbons and polar solvents. f

8) Method according to claim 7, characterized in that the polar solvent used is alcohols, e.g. B. ethanol or Find isopropanol use, while η-hexane is used as the hydrocarbon in the extractant, with it is expedient to work with an azeotropic mixture of the constituents of the extractant.

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