DE1620547C - Process for the preparation of 5-ribonucleotides - Google Patents
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung /on 5'-Ribonucleotiden durch Umsetzung von Riboiucleosiden mit einem speziellen Phosphorylierungs-.nittel in Gegenwart von bestimmten Phenolen und anschließende Hydrolyse.The invention relates to a method for the production of 5'-ribonucleotides by converting ribonucleosides with a special phosphorylation agent in the presence of certain phenols and subsequent hydrolysis.
Ribonucleoside haben drei Hydroxylgruppen in 2'-, Y- und 5'-Stellung an ihrer Ribosekomponente. Wenn Ribonucleoside direkt "der Phosphorylierung unter- -vorfen werden, entsteht ein Gemisch von Riboiucleosid-2',5'-diphosphat und -3',5'-diphosphat. Zur clektiven Herstellung von 5'-Ribonucleotic!en aus !em entsprechenden Ribonucleosid war es daher notwendig, die Hydroxylgruppen in der 2'- und 3'-Stel!ung nit geeigneten Substituenten zu schützen, bevor die Phosphorylierung in der 5'-Stellung vorgenommen //urde. .Ribonucleosides have three hydroxyl groups in the 2 ', Y and 5' positions on their ribose component. If ribonucleosides are directly subjected to phosphorylation, a mixture of ribolucleoside-2 ', 5'-diphosphate and -3', 5'-diphosphate is formed. For the clever production of 5'-ribonucleotics from the corresponding ribonucleoside It was therefore necessary to protect the hydroxyl groups in the 2 'and 3' positions with suitable substituents before the phosphorylation in the 5 'position was carried out.
Die bisher bekannten Verfahren zur Herstellung /on 5'-Ribonucleotid aus dem entsprechenden Ribolucieosid bestehen darin, daß man die 2'- und 3'-Hyiroxylgruppen an der Ribosekomponente mit einem Acylrcst (z. B. mit einem Acetylrest oder Bcnzoylrest) ider einer Isopropylidengruppe schützt und anchließend die freie 5'-Hydroxylgruppe durch geeignete vlittel phosphoryliert, worauf die schützenden Grupjen entfernt werden, oder aber daß man in Gegenwart on Ketonen arbeitet.The previously known processes for the production of 5'-ribonucleotide from the corresponding ribolucieoside consist in that the 2'- and 3'-Hyiroxylgruppen on the ribose component with a Acyl residue (e.g. with an acetyl residue or benzoyl residue) or an isopropylidene group protects and subsequently the free 5'-hydroxyl group is phosphorylated by suitable means, whereupon the protective groups be removed, or that one works in the presence of ketones.
Es wurde nun überschaschenderweise gefunden, daß iur eine OH-Gruppe in der 5'-Stellung des Riboiucleosids selektiv phosphoryliert wird, ohne daß ein ichutz der Hydroxylgruppen in der 2'- und 3'-Stellung /or der Phosphorylierung erforderlich ist, wenn las Ribonucleosid mit einem Phosphorylierungsnittel in Gegenwart von bestimmten Phenolen umgesetzt wird.It has now surprisingly been found that there is only one OH group in the 5 'position of the riboiucleoside is selectively phosphorylated without any use of the hydroxyl groups in the 2 'and 3' positions / before phosphorylation is required when las ribonucleoside with a phosphorylating agent is reacted in the presence of certain phenols.
Gegenstand der Erfindung ist demgemäß ein Ver-.ihren zur Herstellung von 5'-RibonucIeosiden durch elektive Phosphorylierung von Ribonucleosiden in /-Stellung mit Pyrophcsphoryltetrachlorid oder Phos- >horoxychlorid, das auch teilhydratisiert bzw. -alkohoisiert sein kann und anschließender Hydrolyse des uräerst erhaltenen Phosphorylierungsproduktes, das iadurch gekennzeichnet ist, daß man die Phosphoryerung in Phenol, Chlorphenol, Kresol und/oder {ylenol als Lösungsmittel durchführt, ohne die Hy-Iroxylgruppen in 2'-, 3'-Stellung vorher besonders zu chützen.Accordingly, the subject matter of the invention is a ver-.ihren for the production of 5'-ribonucleosides by elective phosphorylation of ribonucleosides in / Position with pyrophosphoryl tetrachloride or phosphorus oxychloride, which also partially hydrates or alcoholizes can be and subsequent hydrolysis of the uräerst obtained phosphorylation product, the is characterized in that the phosphorylation in phenol, chlorophenol, cresol and / or {ylenol performs as a solvent without the hydroxyl groups Special protection in the 2 ', 3' position beforehand.
Beim Verfahren der Erfindung werden die 5'-Riboiucleotide in guter Ausbeute in einfacher Weise eralten. In the method of the invention, the 5'-riboiucleotides obtain in a good yield in a simple manner.
Für die Zwecke der Erfindung kommen natürliche ;nd synthetische Ribonucleotise in Frage, die eine 'urinbase (z. B. Adenin, Hypoxanthin, Guanin), eine 'yrimidinbase (z. B. Cytosin, Uracil, Thymin) und ine Pyridinbase (z. B. Nikotinamid) enthalten.For the purposes of the invention, natural and synthetic ribonucleotides are suitable, the one 'urine base (e.g. adenine, hypoxanthine, guanine), a' yrimidine base (e.g. cytosine, uracil, thymine) and contain a pyridine base (e.g. nicotinamide).
In das Verfahren der Erfindung werden Phenol, -Chlorphenol, Kresol (o-, m-, p-Kresol oder deren Jemische) und Xylenol als Lösungsmittel eingesetzt.In the process of the invention, phenol, chlorophenol, cresol (o-, m-, p-cresol or their Jemische) and xylenol are used as solvents.
Als Phosphorylierungsmitte! werden Pyrophosphoyltetrachlorid, Phosphoroxychlorid, teilweise hydroysiertes oder teilweise alkoholisiertes Phosphoroxyhlorid in das Verfahren c'er Erfindung eingesetzt. )iese Verbindungen werden allein oder in Kombination erwenc'et.As a phosphorylation agent! are pyrophosphoyl tetrachloride, Phosphorus oxychloride, partially hydrolyzed or partially alcoholized phosphorus oxychloride used in the process of the invention. ) These compounds are used alone or in combination Erwenc'et.
Die obergenannten Ribonucleoside, Phenole oder hosphorylierungsmittel müssen nicht unbedingt in jiner Form verwendet werden.The above-mentioned ribonucleosides, phenols or phosphorylating agents do not necessarily have to be in jiner form can be used.
Die verwendeten Mengen der Phenole und des Phoshorylicrungsmittcls sind verschieden, je nach der Art des Ribonucleosids, der Phenole oder Phosphorylierungsmittel. Das Phosphorylierungsmittel wird in einer Menge von etwa 1 bis 30 Mol, vorzugsweise von etwa 2 bis 15 Mol, bezogen auf das Ribonucleosid, verwendet. Die verwendete Phenolmenge beträgt wenigstens etwa 10 Mol, bezogen auf das Ribonucleosid. Die Phenole werden in einer Menge von etwa 10 bis ICO, vorzugsweise von etwa 15 bis 50 Mol pro Mol Ribonucleosid verwendet.The amounts of the phenols and the phosphorylation agent used are different depending on the type of ribonucleoside, phenols or phosphorylating agents. The phosphorylating agent is used in an amount of from about 1 to 30 moles, preferably from about 2 to 15 moles based on the ribonucleoside is used. The amount of phenol used is at least about 10 moles based on the ribonucleoside. The phenols are used in an amount of about 10 to ICO, preferably from about 15 to 50 moles per mole of ribonucleoside is used.
Die Reaktion läuft bei Raumtemperatur ab. Gegebenenfalls kann während der Reaktion erhitzt oder gekühlt werden.The reaction takes place at room temperature. Possibly can be heated or cooled during the reaction.
Da die Phenole als Lösungsmittel wirken, ist kein weiteres Lösungsmittel für die Reaktion erforderlich. Gegebenenfalls kann jedoch ein geeignetes Lösungsmittel (z. B. Benzol, Xylol, Dioxan) zusammen mit den Phenolen verwendet werden, solange es die Reaktion nicht hemmt. Insbesondere kann bei Verwendung von Benzol zusammen mit den Phenolen als Lösungsmittel die Menge der Phenole verringert werden.Since the phenols act as a solvent, no additional solvent is required for the reaction. If necessary, however, a suitable solvent (e.g. benzene, xylene, dioxane) can be used together with the phenols can be used as long as it does not inhibit the reaction. In particular, when using of benzene together with the phenols as a solvent decreases the amount of the phenols will.
Die Hydrolyse wird in an sich bekannter Weise durchgeführt, indem beispielsweise das Produkt in "Wasser gegossen wird oder indem der pH-Wert des in der ersten Stufe erhaltenen Reaktionsgemisches auf einen Wert im schwach sauren Bereich zweckmäßig auf etwa 1 bis 2 eingestellt wird, indem eine Alkaliverbindung (z. B. Natriumhydroxyd, Kaliumhydroxyd, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat) zugesetzt wird. Hierbei wird das gewünschte 5'-Ribonucleotid gebildet.The hydrolysis is carried out in a manner known per se, for example by using the product in "Water is poured or by increasing the pH of the reaction mixture obtained in the first stage a value in the weakly acidic range is expediently set to about 1 to 2 by an alkali compound (e.g. sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, potassium carbonate) is added. The desired 5'-ribonucleotide is thereby formed.
So lassen sich gemäß der Erfindung 5'-Ribonucleotide im Vergleich zu bekannten Verfahren, z. B. dem der französischen Patentschrift 1 369 079, unter milderen Bedingungen in kürzerer Reaktionszeit und höherer Ausbeute herstellen.Thus, according to the invention, 5'-ribonucleotides can be compared with known methods, e.g. B. the French patent 1,369,079, under milder conditions in a shorter reaction time and produce higher yield.
Zu einer Suspension von 196 g Inosin in 3,8 1 m-Kresol wurden 380 g Pyrophosphoryltetrachlorid bei 100C gegeben. Das Gemisch wurde 2,5 Stunden bei dieser Temperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in 13,6 1 Eiswasser gegossen, worauf das Gemisch mit 21 Benzol geschüttelt wurde, um das m-Kresol in die Benzolschicht zu überführen. Die Benzolschicht wurde zweimal mit 4,5 1 Wasser gewaschen. Die mit der Waschflüssigkeit vereinigte wäßrige Schicht wurde mit Benzol geschüttelt. Dann wurde die wäßrige Schicht abgetrennt und mit wäßriger 5 n-Natriumhydroxydlösung auf den pH-Wert 1 eingestellt. 380 g of pyrophosphoryl tetrachloride were added at 10 ° C. to a suspension of 196 g of inosine in 3.8 1 m-cresol. The mixture was stirred at this temperature for 2.5 hours. The reaction mixture was poured into 13.6 liters of ice water, whereupon the mixture was shaken with 21% benzene to transfer the m-cresol to the benzene layer. The benzene layer was washed twice with 4.5 liters of water. The aqueous layer combined with the washing liquid was shaken with benzene. Then the aqueous layer was separated and adjusted to pH 1 with an aqueous 5N sodium hydroxide solution.
D.'e Analyse der eingestellten Lösung durch Papierelektrophorese (Boratpuffer, ρH-Wert 9,2) ergab, daß Inosin-5'-monophosphat in quantitativer Ausbeute gebildet worden war.D.'e analysis of the adjusted solution by paper electrophoresis (borate buffer, ρH value 9.2) showed that Inosine 5'-monophosphate had been formed in quantitative yield.
Die Lösung wurde mit Wasser auf ein Volumen von 50 1 gebracht und an einer Säule adsorbiert, die mit 2 kg Aktivkohle gefüllt war. Die Säule wurde mit Wasser gewaschen und mit einer 0,7%igen wäßrigen Natriumhydroxydlösung eluiert. Das Eluat wurde auf pH-Wert 8,6 eingestellt und eingeengt, wobei 240 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Inosin-5'-monophosphat (gerechnet als Anhydrid) erhalten wurden. Die Ausbeute betrug 83,5%.The solution was brought to a volume of 50 1 with water and adsorbed on a column, which with 2 kg of activated charcoal was filled. The column was washed with water and with a 0.7% aqueous Sodium hydroxide solution eluted. The eluate was adjusted to pH 8.6 and concentrated, with 240 g Crystals of the disodium salt of inosine 5'-monophosphate (calculated as anhydride) were obtained. The yield was 83.5%.
Ein Gemisch von 60 ml m-Kresol und 2,7 g Inosin wurde eine Stunde bei 40 bis 500C gerührt, wobei sichA mixture of 60 ml of m-cresol and 2.7 g of inosine was stirred for one hour at 40 to 50 ° C., during which
eine homogene Lösung bildete. Nach Kühlung der Lösung auf 5°C wurden 20 ml Pyrophosphoryltetrachlorid zugesetzt und das Gemisch 2 Stunden gerührt. Die Aufarbeitung des Reaktionsgemisches auf die im Beispiel 1 angegebene Weise ergab 3,3 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Inosin-S'-monophosphat. Die Ausbeute betrug 85%.formed a homogeneous solution. After cooling the solution to 5 ° C., 20 ml of pyrophosphoryl tetrachloride were added added and the mixture stirred for 2 hours. The work-up of the reaction mixture on the im In the manner given in Example 1, 3.3 g of crystals of the disodium salt of inosine S'-monophosphate were obtained. the Yield was 85%.
Das erhaltene Produkt wurde durch Papierelektrophorese (1. Boratpuffer, pH 9,2; 2. Citratpuffer, pH 5,8) und . Papierchromatcgraphie (aufsteigende Methode unter Verwendung von 1. Isobuttersäure:: wäßrigem 0,5 n-Ammoniak = 10: 6 und 2. gesättigtem Ammoniumsulfat : Isopropanol: Wasser = 79 : 2 :19) analysiert. Durch die Wanderungsstrecke und den Rf-Wert wurde das Produkt als Inosin-5'-monophosphat identifiziert. Die Perjodsäure-Bcnzol-Reaktion des Produkts war positiv. Es wurde durch 5'-NucIeotidase aus Stiersamen vollständig dephosphoryliert.The product obtained was determined by paper electrophoresis (1st borate buffer, pH 9.2; 2nd citrate buffer, pH 5.8) and . Paper Chromatography (Ascending Method Using 1. Isobutyric Acid :: Aqueous 0.5 n-ammonia = 10: 6 and 2. saturated ammonium sulfate : Isopropanol: water = 79: 2: 19) analyzed. By the migration distance and the Rf value the product was identified as inosine 5'-monophosphate. The periodic acid-benzene reaction of the product was positive. It was produced by 5'-nucleotide from bull semen completely dephosphorylated.
Zu einer Suspension von 3,9 g Adenosin in 76 ml m-Kresol wurden 7,6 g Pyrophosphoryltetrachlorid bei 10° C gegeben. Das Gemisch wurde 2 Stunden bei dieser Temperatur gerührt. Durch Aufarbeitung des Reaktionpgemisches auf die im Beispiel 1 angegebene Weise wurden 3,3 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Adenosin-5'-monophosphat (gerechnet als Anhydrid) erhalten. Die Ausbeute betrug 75%.7.6 g of pyrophosphoryl tetrachloride were added to a suspension of 3.9 g of adenosine in 76 ml of m-cresol given at 10 ° C. The mixture was stirred at this temperature for 2 hours. By processing the Reaction mixture in the manner given in Example 1 gave 3.3 g of crystals of the disodium salt of Adenosine 5'-monophosphate (calculated as anhydride) obtained. The yield was 75%.
B e i s ρ i c I 4B e i s ρ i c I 4
Zu einer Suspension von 3,9 g Inosin in 76 ml m-Kresol wurden 13,8 g rohes Pyrophosphoryltetrachlorid, das 55 Gewichtsprozent Pyrophosphoryltetrachlorid und 45 Gewichtsprozent Phosphoroxychlorid enthielt, bei 1O0C gegeben. Das Gemisch wurde bei dieser Temperatur 2 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise aufgearbeitet, wobei 4,8 g Kristalle des Dinatriumsalzes von ,Inosin-S'-monophosphat erhalten wurden. Die Ausbeute betrug 84%.To a suspension of 3.9 g of inosine in 76 ml m-cresol, 13.8 g of crude Pyrophosphoryltetrachlorid containing 55 weight percent Pyrophosphoryltetrachlorid and 45 percent by weight phosphorus oxychloride, optionally at 1O 0 C. The mixture was stirred at this temperature for 2 hours. The reaction mixture was worked up in the manner described in Example 1 to give 4.8 g of crystals of the disodium salt of 'inosine S'-monophosphate. The yield was 84%.
Zu einer Suspension von 1,9 g Inosin in 56 ml einer Mischung aus 31 Gewichtsprozent Phenol, ^Gewichtsprozent o-Kresol, 38 Gewichtsprozent m-p-Kresol, 19 Gewichtsprozent Xylenol wurden 5,6 g Pyrophosphoryltctrachlorid bei 10°C gegeben. Das Gemisch wurde bei dieser Temperatur 2 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf die im Beispiel 1 angegebene Weise aufgearbeitet, wobei 2,35 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Inosin-5'-monophosphat erhalten wurden. Die Ausbeute betrug 85%.To a suspension of 1.9 g of inosine in 56 ml of a mixture of 31 percent by weight phenol, ^ percent by weight o-cresol, 38 percent by weight of m-p-cresol, 19 percent by weight of xylenol were 5.6 g of pyrophosphoryl trachloride given at 10 ° C. The mixture was stirred at this temperature for 2 hours. The reaction mixture was based on that in Example 1 worked up as indicated, giving 2.35 g of crystals of the disodium salt of inosine 5'-monophosphate became. The yield was 85%.
Zu einer Suspension von 1,97 g Guanosin in 36 ml m-Kresol wurden 5,4 g Pyrophosphoryltetrachlorid bei 100C gegeben. Das Gemisch wurde bei dieser Temperatur 4 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf die im Beispiel 1 angegebene Weise aufgearbeitet, wobei 2,0 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Guanosm-5'-monophosphat (gerechnet als Anhydrid) erhalten wurden. Die Ausbeute betrug 70%. 5.4 g of pyrophosphoryl tetrachloride were added at 10 ° C. to a suspension of 1.97 g of guanosine in 36 ml of m-cresol. The mixture was stirred at this temperature for 4 hours. The reaction mixture was worked up in the manner indicated in Example 1, 2.0 g of crystals of the disodium salt of guanosm 5'-monophosphate (calculated as anhydride) being obtained. The yield was 70%.
Zu 600 ml o-Chlorphenol wurden 2,7 g Inosin gegeben. Das Gemisch wurde 0,5 Stunden bei 4O0C gerührt. Nach Abkühlung der Lösung auf 5°C wurden 20 ml Pyrophosphoryltetrachlorid zugesetzt. Das Gemisch wurde 2 Stunden gerührt. Durch Aufarbeitung des Reaktionsgemisches auf die im Beispiel 1 angegebene Weise wurden 3,3 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Inosin-5'-monophosphat erhalten. Die Ausbeute betrug 85%.2.7 g of inosine were added to 600 ml of o-chlorophenol. The mixture was stirred for 0.5 hours at 4O 0 C. After the solution had cooled to 5 ° C., 20 ml of pyrophosphoryl tetrachloride were added. The mixture was stirred for 2 hours. By working up the reaction mixture in the manner indicated in Example 1, 3.3 g of crystals of the disodium salt of inosine 5'-monophosphate were obtained. The yield was 85%.
Zu einer Lösung von 4,9 g Uridin in 210 ml m-Krcsol wurden 7 ml Pyrophosphoryltetrachlorid bei 5°C7 ml of pyrophosphoryl tetrachloride were added at 5 ° C. to a solution of 4.9 g of uridine in 210 ml of m-Krcsol
ίο gegeben. Das Gemisch wurde bei dieser Temperatur 2 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf die im Beispiel 1 angegebene Weise aufgearbeitet, wobei 5,9 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Uridin-5'-monophosphat (gerechnet als Anhydrid) erhalten wurden. Die Ausbeute betrug 80%· Das Ultraviolett-Absorptionsverhältnis des Produkts in Wasser von 290 μ/260 μ, 280 μ/260 μ und 250 μ/260 μ wurde mit 0,04, 0,38 und 0,74 bestimmt. Das Produkt wurde durch 5'-NucIeotidase aus Stiersamen vollständigίο given. The mixture was at this temperature Stirred for 2 hours. The reaction mixture was worked up in the manner indicated in Example 1, 5.9 g of crystals of the disodium salt of uridine 5'-monophosphate (calculated as anhydride) being obtained became. The yield was 80%. The ultraviolet absorption ratio of the product in water of 290 μ / 260 μ, 280 μ / 260 μ and 250 μ / 260 μ was determined to be 0.04, 0.38 and 0.74. The product was complete by 5'-nucleotide from bull semen
ao dephosphoryliert.ao dephosphorylated.
Zu einer Lösung von 3,4 g Cytidin in 300 ml m-Kresol wurden 10 ml Pyrophosphoryltetrachlorid bei 5°C10 ml of pyrophosphoryl tetrachloride were added at 5 ° C. to a solution of 3.4 g of cytidine in 300 ml of m-cresol
as gegeben. Das Gemisch wurde bei dieser Temperatur 2 Stunden gerührt, wobei eine Reaktion stattfand. Durch Aufarbeitung auf die im Beispiel 1 angegebene Weise wurden 4,5 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Cytidin-5'-monophosphat (gerechnet als Anhydrid) erhalten. Ausbeute 87%.as given. The mixture was at this temperature Stirred for 2 hours, during which time a reaction took place. By working up to that given in Example 1 4.5 g of crystals of the disodium salt of cytidine 5'-monophosphate (calculated as anhydride) were obtained. Yield 87%.
Das Produkt wurde durch 5'-Nucleotidase aus Stiersamen vollständig dephosphoryliert.The product was isolated by 5'-nucleotidase from bull semen completely dephosphorylated.
0,98 g Inosin wurden bei 25°C in einer Lösung von 10 g Dioxan in 20 g m-Xylenol suspendiert. Nach Zutropfen von 3,8 g Pyrophosphoryltetrachlorid wurde das Inosin unter Bildung einer homogenen Lösung gelöst. Das Gemisch wurde bei 25°C gehalten, wobei eine Reaktion stattfand. Das Reaktionsgemisch wurde auf die im Beispiel 1 angegebene Weise aufgearbeitet, wobei 1,2 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Inosin-S'-monophosphat (gerechnet als Anhydrid) erhalten wurden. Ausbeute 83,8%.0.98 g inosine were at 25 ° C in a solution of 10 g of dioxane suspended in 20 g of m-xylenol. After dropping 3.8 g of pyrophosphoryl tetrachloride dissolved the inosine to form a homogeneous solution. The mixture was kept at 25 ° C, whereby a reaction took place. The reaction mixture was worked up in the manner indicated in Example 1, 1.2 g of crystals of the disodium salt of inosine S'-monophosphate (calculated as anhydride) were obtained. Yield 83.8%.
0,98 g Inosin wurden bei 25° C in einer Lösung von 10 g Benzol in 20 g m-Xylenol suspendiert. Nach Zutropfen von 3,8 g Pyrophosphoryltetrachlorid wurde das Inosin unter Bildung einer homogenen Lösung gelöst. Die Lösung wurde bei 250C gerührt, wobei eine Reaktion stattfand. Das Reaktionsgemisch wurde auf die im Beispiel 1 angegebene Weise aufgearbeitet, wobei 1,18 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Inosin-5'-monophosphat (gerechnet als Anhydrid) erhalten wurden. Ausbeute 82,5%.0.98 g of inosine were suspended at 25 ° C. in a solution of 10 g of benzene in 20 g of m-xylenol. After adding dropwise 3.8 g of pyrophosphoryl tetrachloride, the inosine was dissolved to form a homogeneous solution. The solution was stirred at 25 ° C., a reaction taking place. The reaction mixture was worked up in the manner indicated in Example 1, 1.18 g of crystals of the disodium salt of inosine 5'-monophosphate (calculated as anhydride) being obtained. Yield 82.5%.
20 g Phenol wurden exotherm in 3,8 g Pyrophosphoryltetrachlorid gelöst. Nach Abkühlung der Lösung auf 3O0C wurden 0,98 g Inosin zugesetzt. Das Gemisch wurde bei der gleichen Temperatur 30 Minuten gerührt, wobei eine Reaktion stattfand. Das· Reaktionsgemisch wurde auf die im Beispiel 1 angegebene Weise aufgearbeitet, wobei 1,12 g Kristalle des Dinatriumsalzes von Inosin-5'-monophosphat (gerechnet als Anhydrid) erhalten wurden. Ausbeute 78,3%.20 g of phenol were exothermically dissolved in 3.8 g of pyrophosphoryl tetrachloride. After cooling the solution to 3O 0 C 0.98 g of inosine were added. The mixture was stirred at the same temperature for 30 minutes, whereby a reaction took place. The reaction mixture was worked up in the manner indicated in Example 1, 1.12 g of crystals of the disodium salt of inosine 5'-monophosphate (calculated as anhydride) being obtained. Yield 78.3%.
' 5 ■ 6'5 ■ 6
R i η i e 1 13 chlorid gegeben, das durch Mischen von 4,5 ml Phos-R i η i e 1 13 given chloride, which by mixing 4.5 ml of phosphor
phoroxycnlorid und 0,01 ml Wasser erhallen wordenphoroxycnlorid and 0.01 ml of water
17 g Phosphoroxychlorid wurden mit 17 g Xylol war. Das Gemisch wurde 7,5 Stunden bei 5 bis 10uC17 g of phosphorus oxychloride were added to 17 g of xylene. The mixture was left at 5 to 10 ° C for 7.5 hours
gemischt. Nach Abkühlung des Gemisches wurde gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in 100 nil Äthermixed. After the mixture had cooled, it was stirred. The reaction mixture was in 100 nil ether
1 g Wasser zugerührt. Das Gemisch wurde 5 Stunden 5 gegossen, wobei weilie Kristalle gebildet wurden, die1 g of water was added. The mixture was poured for 5 hours, whereby crystals were formed which
bei 90 bis 95" C gerührt. Nach Auflösung von 20 g abgetrennt und zur Hydrolyse in Eiswasser gegossenstirred at 90 to 95 ° C. After 20 g had dissolved, separated off and poured into ice water for hydrolysis
Phenol wurden 1,96 g Inosin zugesetzt. Nach 2 Stun- wurden.Phenol was added to 1.96 g inosine. After 2 hours.
den wurde das Reaktionsgemisch auf die im Beispiel 1 Die hydrolysierte Lösung wurde auf die im BeispielThe reaction mixture was based on that in Example 1. The hydrolyzed solution was based on that in Example
angegebene Weise aufgearbeitet, wobei 2,38 g Kristalle 16 angegebene Weise behandelt, wobei 600 mg des Di-worked up indicated manner, with 2.38 g of crystals 16 treated manner indicated, with 600 mg of the di-
des Dinatriumsulzes von lnosin-5'-monophosphat (ge- 10 natriumsalzes von lnosin-5'-monophosphat erhaltenof the disodium salt of inosine 5'-monophosphate (obtained from the sodium salt of inosine 5'-monophosphate
rechnet als Anhydrid) erhalten wurden. Ausbeute wurden. Die Ausbeute betrug 77,4u/0 (gerechnet alscalculated as anhydride). Yield were. The yield was 77.4 u / 0 (calculated as
83,1 0I0. Anhydrid).83.1 0 I 0 . Anhydride).
Beispiel 14 Beispiel 18Example 14 Example 18
0,98 g Inosin wurden in einer Lösung von 5 g Benzol 15 Zu einer Suspension von 560 mg Guanosin in in 10 g hhenol suspendiert. Bei Zugabe von 3,8 g Pyro- 7,5 ml m-Kresol wurde teilweise alkoholisches Phosphospuoryltetraclilorid bei 20" C loste sich aas Inosin phoroxychlorid gegeben, das durch Mischen von schnell unter Bildung einer homogenen Lösung. Das 4,5 ml Fhosphoroxychlorid und 0,2 ml t-Butylalkohol Gemisch wurde 1 Stunde beider gieicl.en lemperatur erhalten worden war. Das Gemisch wurde 8 Stunden gehalten, wobei eine Reaktion stattfand. Das Reaktions- 20 bei 5 bis 10" C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde gemisch wurde auf die im Beispiel 1 angegebene Weise in 100 ml Äther gegossen, wobei weiLe Kristalle geaul'gearbeitet, wobei 1,21 g Kristalle ues Dinatrium- bildet wuraen, die abgetrennt und zur Hydrolyse in salzes von lnosin-5'-monophosphat (gerechnet als Eiswasser gegossen wurden.0.98 g of inosine were added to a solution of 5 g of benzene 15 to a suspension of 560 mg of guanosine in suspended in 10 g of hhenol. When 3.8 g of pyro-7.5 ml of m-cresol were added, partially alcoholic phosphoryl tetra-chloride became at 20 "C aas inosine dissolved phosphorus oxychloride, which was obtained by mixing quickly forming a homogeneous solution. The 4.5 ml phosphorus oxychloride and 0.2 ml t-butyl alcohol The mixture was kept for 1 hour at the same temperature. The mixture was 8 hours held, with a reaction taking place. The reaction mixture was stirred at 5 to 10 ° C. The reaction mixture was mixture was poured into 100 ml of ether in the manner indicated in Example 1, whereby white crystals were worked, 1.21 g of disodium crystals were formed, which were separated and used for hydrolysis in inosine 5'-monophosphate salt (calculated as ice water was poured.
Anhydrid) erhalten wurden. Ausbeute 84,5%· Die Analyse des Hydrolysats durch Papierelektro-Anhydride). Yield 84.5% Analysis of the hydrolyzate by paper electro-
25 phorese ergab, daß Guanosin-5'-monopnosphat in25 phoresis showed that guanosine 5'-monopnosphate in
.·■;■·· B e i s p i e 1 15 einer Ausbeute von 81 u/0 gebildet worden war. Durch. · ■; ■ ·· Example 1 15 was formed in a yield of 81 u / 0 . Through
Behandlung der hydrolysieren Lösung auf die im Bei-Treatment of the hydrolyzed solution to the
Zu einer Suspension von 2 g Inosin in einem Ge- spiel 16 angegebene Weise wurden 61umg (Ausbeute:
misch von 20 g m-Kresol und 12 g Benzol wurden 76ü/0) des Dinatriumsalzes von Guanosin-5'-mono-2,8
g Pyrophosphoryltetrachlorid bei 10" C gegeben. 30 phosphat erhalten.
Das Gemisch wurde 4 Stunden bei dieser lemperaturTo a suspension of 2 g inosine in an overall manner specified play 16 were 61umg (yield: mixing of 20 g of m-cresol and 12 g of benzene was 76 u / 0) of the disodium salt of guanosine-5'-monophosphate-2,8 g of pyrophosphoryl tetrachloride given at 10 "C. 30 phosphate obtained.
The mixture was left at this temperature for 4 hours
gehalten, wobei eine Reaktion stattfand. Die Auf- Beispiel 19held, with a reaction taking place. Example 19
arbeitung des Gemisches auf die im Beispiel 1 angegebene Weise ergab das als Dinatriumsalz vor- Zu einer Suspension von 534 mg Adenosin in 7,5 ml hegence Inosin-5'-monophosphat (gerechnet als An- 35 m-Kresol wurae teilweise alkoholisches Phosphoroxyhydrid) in einer Ausbeute von 82,2 u/0. chlorid gegeben, das durch Mischen von 4,5 ml Phos-. . phoroxycnlorid und 0,2 ml t-Butylalkohol erhalten Beispiel 16 worden war. Das Gemisch wurde 7,5 Stunden bei 5 bisWorking the mixture in the manner indicated in Example 1 resulted in the disodium salt pre- To a suspension of 534 mg adenosine in 7.5 ml hegence inosine 5'-monophosphate (calculated as an 35 m-cresol wurae partially alcoholic phosphorus oxyhydride) in a yield of 82.2 u / 0 . given chloride, which is obtained by mixing 4.5 ml of Phos-. . phosphoroxy chloride and 0.2 ml of t-butyl alcohol obtained in Example 16. The mixture was left at 5 to 7.5 hours
Zu einer Suspension von 504 mg Inosin in 7,5 ml 10° C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in 100 ml m-Kresol wurde teilweise alkoholisches Phosphoroxy- 40 Äther gegossen, wobei weite Kristalle erhalten wurden, chlorid gegeben, das durch Mischen von 4,5 ml Phos- die abgetrennt und zur Hydrolyse in Eiswasser gephoroxychlorid und 0,2 ml t-Butylalkohol erhalten gössen wurden.Stirred at 10 ° C. to a suspension of 504 mg inosine in 7.5 ml. The reaction mixture was in 100 ml m-cresol was partially poured alcoholic phosphoroxy- 40 ether, whereby large crystals were obtained, given chloride, which separated by mixing 4.5 ml of phosphorus and phosphorus oxychloride for hydrolysis in ice water and 0.2 ml of t-butyl alcohol was poured.
worden war. Das Gemisch wurde 8 Stunden bei 5 bis Die Analyse des Hydrolysats durch Papierelektro-had been. The mixture was stirred for 8 hours at 5 to The analysis of the hydrolyzate by paper electro-
10°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurce in 100 ml phorese ergab, dall Adenosin-5'-monopiiosphat in Äther gegossen, wobei weihe Kristalle gebildet wurden, 45 einer Ausbeute von 88υ/0 gebildet worden war. Die die abgetrennt und zur Hydrolyse in hiswasscr gc- Behandlung der hydrolysierten Lösung auf die im gössen wurden. Beispiel 16 angegebene Weise ergab 680 mg (Aus-Stirred at 10 ° C. The reaction mixture was dissolved in 100 ml. Phoresis showed that adenosine 5'-monophosphate was poured into ether, whereby white crystals were formed, 45 in a yield of 88 ½ / 0 . The the separated and for hydrolysis in hiswasscr gc- treatment of the hydrolyzed solution on which were poured. Example 16 given manner gave 680 mg (Aus
Die hydrolysierte Lösung wurde in eine mit Ionen- beute: 86,7%) Dinatriumsalz von Adcnosin-5'-monoaustauschharz gefüllte Säule gegossen, an dem das phosphat.The hydrolyzed solution was converted into a disodium salt of adcnosine-5'-mono-exchange resin with ionic spoil: 86.7%) filled column poured on to which the phosphate.
Produkt adsorbiert wurce. Als Austauschharz wurae 50 B e i s ρ i e 1 20Product adsorbed. The replacement resin was 50 B e i s ρ i e 1 20
ein gclförmiges primär, sekundär und tertiär alipha-a gcl-shaped primary, secondary and tertiary aliphatic
tiscl.es Amin-Pl.enol-Formaldehyd-Polykondensat in Zu einer Suspension von 534 mg Adenosin in 7,5 mltiscl.es amine-pl.enol-formaldehyde polycondensate in To a suspension of 534 mg adenosine in 7.5 ml
der HO-Form verwendet. Die Säule wurde mit 30 ml m-Kresol wuroe teilweise hydrolysates Phosphoroxy-Wasser gewaschen und mit wäLriger ln-Ammoniak- Chlorid gegeben, das durch Miscncn von 4,5 ml Phoslcsung eluiert. Das hluat wurde eingeengt und mit 55 phoroxycnlorid und 0,02 ml Wasser erhalten worden einem gelförmigcn Polystyrol, das als aktive Gruppen war. Das Gemisch wurde 8 Stunden bei 5 bis 100C die bestandteile C0H4SO3H aufweist, in der Natrium- gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in 100 ml salzform behandelt, wodurch das lJrodukt in das ent- Äther gegossen, wobei wen.e Kristalle gebildet wurden, sprechende Natriumsalz umgewandelt wurde. Die so die abgetrennt und zur Hydrolyse in Eiswasser gebchandelte Losung wurde auf 4 ml eingeengt und mit 60 gössen wurden.the HO form is used. The column was washed with 30 ml of m-cresol, partially hydrolysed phosphorusoxy-water and added with aqueous in-ammonia chloride, which eluted by mixing 4.5 ml of phosphorus solution. The fluid was concentrated and obtained with phosphorus chloride and 0.02 ml of water, a gel-like polystyrene which was as active groups. The mixture was stirred for 8 hours at 5 to 10 0 C, the components C 0 H 4 SO 3 H comprising in the sodium. The reaction mixture was treated in 100 ml salt form, whereby the l J roduct in the ether corresponds cast, wen.e crystals were formed, speaking sodium salt was converted. The solution separated in this way and bundled in ice water for hydrolysis was concentrated to 4 ml and poured with 60 ml.
4 ml Methanol versetzt, wobei 620 mg Kristalle des Die Analyse des Hydrolysats durch Papicrclektro-4 ml of methanol are added, whereby 620 mg of crystals of the analysis of the hydrolyzate by Papicrclektro-
Dinatriumsalzcs von lnosin-5'-monophosphat erhalten phorese ergab, daß AdcnosinrS'-monophospliat in wurden. Die Ausbeute betrug 84,2u/0 (gerechnet als einer Ausbeute von 87U/O gebildet worden war. Die Anhydrid). ' hydrolysierte Lösung wurde auf pH-Wert 1,5 bis 2 cin-Disodium salt obtained from inosine 5'-monophosphate phoresis revealed that adcnosine 5'-monophosphate became. (Was calculated as a yield of 87 U / O formed. The anhydride) The yield was 84.2 u / 0th 'hydrolyzed solution was adjusted to pH 1.5 to 2
Uc j spiel 17 6s gestellt und auf 2 ml eingeengt. Zu dem so behandeltenUc j game 17 6s made and concentrated to 2 ml. To the so treated
Kondensat wurden 8 ml Methanol bzw. 8 ml AcetonThe condensate was 8 ml of methanol and 8 ml of acetone
Zu einer Suspension von 530 mg Inosin in 7,5 ml gegeben, wobei 510 mg (Ausbeute: 741V0) Kristalle von m-Kresol wurde teilweise hydrolysates Phosphoroxy- Aucnosin-S'-monophosphat erhalten wurden.Added to a suspension of 530 mg of inosine in 7.5 ml, 510 mg (yield: 74 1 V 0 ) of crystals of m-cresol being obtained, partially hydrolyzed phosphoroxy-aucnosine-S'-monophosphate.
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