DE1598583B1

DE1598583B1 - Method and device for the quantitative determination and preparative recovery of fractions of a substance mixture

Info

Publication number: DE1598583B1
Application number: DE19671598583
Authority: DE
Inventors: Strauch Dr Ludvik
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1967-03-31
Filing date: 1967-03-31
Publication date: 1970-09-24
Also published as: FR1574008A

Description

u. a., eine meist viel weitgehendere und schärfere 15 geschwindigkeit der Fraktionen aus dem Träger-among other things, a usually much more extensive and sharper 15 speed of the fractions from the carrier

Fraktionierung, da für die Trennung außer den Unterschieden in der elektrischen Ladung der einzelnen Teilchen auch deren Unterschiede in der Molekülgröße ausgenutzt werden. Bei der elektrophoretischen Wanderung durch die Poren der dreidimensionalen Gelstruktur werden größere Moleküle durch den sogenannten Molekularsiebeffekt gegenüber kleineren, gleichgeladenen Molekülen zusätzlich gebremst. Dadurch kann ein Substanzgemisch, welches gleichgeladene, jedoch verschieden große Moleküle enthält, in weitere Fraktionen unterteilt werden. Die Verwendung dieser Methoden ist zur Zeit jedoch lediglich auf den Bereich der analytischen Feststellung beschränkt, da die Isolierung von Frakmaterial geändert wird.Fractionation, as for the separation besides the differences in the electrical charge of the individual Particles whose differences in molecular size are also used. In the case of electrophoretic Larger molecules migrate through the pores of the three-dimensional gel structure due to the so-called molecular sieve effect compared to smaller molecules with the same charge braked. As a result, a substance mixture, which has the same charge but different sized molecules contains, can be divided into further fractions. The use of these methods is currently however, it is only limited to the area of analytical determination, since the isolation of fractured material will be changed.

Eine Anpassung der Eluierungsgeschwindigkeit kann gleichfalls auch dadurch vorgenommen werden, daß die Temperatur der Eluierungsflüssigkeit und/ oder die Temperatur der Pufferlösung in der Trennkammer verändert wird.The rate of elution can also be adjusted by that the temperature of the eluting liquid and / or the temperature of the buffer solution in the separation chamber is changed.

Eine weitere vorteilhafte Anpassung der Eluierungsgeschwindigkeit kann man durch Veränderung des Mischungsverhältnisses der Eluierungslösung erreichen, indem man im Laufe des EIuierungsvorganges einen Anteil der Eluierungslösungsmischung, der für eine rasche Eluierung geeignet ist, allmählich vermindert.A further advantageous adjustment of the elution rate can be achieved by changing the mixing ratio of the eluting solution can be achieved by in the course of the elution process a portion of the elution solution mixture that is suitable for rapid elution, gradually diminished.

Eine besonders schnelle und zuverlässige MessungA particularly fast and reliable measurement

tionen nach der elektrophoretischen Auftrennung aus 30 der Eluatmenge läßt sich durchführen, wenn man dem Gel bisher technisch nicht befriedigend gelöst die Eluierungsflüssigkeit nach dem EluierungsvorgangFunctions after the electrophoretic separation from 30 of the amount of eluate can be carried out if one The elution liquid after the elution process has not yet been solved in a technically satisfactory manner in the gel

werden konnte. Meist werden die Gelbereiche, welche die erwünschten Fraktionen enthalten, nach der Elektrophorese aus dem Gel herausgeschnitten und die Substanzen mühselig und mit schlechten Ausbeuten herauseluiert oder extrahiert. Bekannte Vorrichtungen arbeiten mit Substanzverlusten, oder es werden komplizierte Elutionssysteme verwandt, die mit großen Verdünnungen der aufgefangenen Frak-could be. Most of the gel areas that contain the desired fractions are after Electrophoresis cut out of the gel and the substances laborious and with poor yields eluted or extracted. Known devices work with substance losses, or it Complicated elution systems are used, which with large dilutions of the collected fraction

40 durch ein Durchlaufregistrierphotometer leitet und dabei die Vorschubgeschwindigkeit des Registriergerätes in Abhängigkeit von der Wanderungsgeschwindigkeit der zu messenden Fraktion verändert. 40 passes through a continuous registration photometer and thereby changes the feed speed of the recording device as a function of the migration speed of the fraction to be measured.

Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird eine Vorrichtung mit einer mit Trägermaterial und Pufferlösung gefüllten Trennkammer, mit einer an einem Ende dieser Trennkammer vorgesehenen Aufgabeeinrichtung für das Substanzgemisch und mit einer am anderen Ende dieser Trennkammer anschließenden Elutionskammer, einer Registriereinrichtung und einem Fraktionsteiler ver-To carry out the method according to the invention, a device with a carrier material and buffer solution-filled separation chamber, with one provided at one end of this separation chamber Feeding device for the substance mixture and with an elution chamber connected to the other end of this separation chamber, one Registration device and a fraction divider

tionen verbunden sind.tions are connected.

Die vorliegende Erfindung strebt deshalb ein Verfahren und eine Vorrichtung zu dessen Durchführung an, mit denen diese Nachteile vermieden werden
und mit denen eine genaue, schnelle und sichere Bestimmung der aufgetrennten Fraktion eines Substanz- 45 wendet, die gekennzeichnet ist durch eine Einrichgemisches durchgeführt werden kann. tung zur Beeinflussung der Eluierungsgeschwindig-The present invention therefore seeks a method and an apparatus for carrying out the same, with which these disadvantages are avoided
and with which an accurate, quick and reliable determination of the fractionated fraction of a substance can be carried out, which is characterized by a Einrichgemisches. to influence the elution speed

Das erfindungsgemäße Verfahren zeichnet sich dadurch aus, daß die Eluierungsgeschwindigkeit der Eluierungslösung zur Erhaltung einer dem wahren Anteil der Fraktion im Gemisch proportionalen Konzentration an die Wanderungsgeschwindigkeit der Fraktion angepaßt und der Anteil der Fraktion am Gemisch anschließend in bekannter Weise bestimmt wird.The inventive method is characterized in that the elution rate of Eluting solution to maintain a concentration proportional to the true fraction of the fraction in the mixture adapted to the rate of migration of the fraction and the fraction of the fraction on Mixture is then determined in a known manner.

Ein solches Verfahren besitzt den großen Vorteil, daß die einzelnen aufgefangenen Fraktionen unabhängig von ihrer Wanderungsgeschwindigkeit in der Trägersubstanz eine Konzentration in der Eluierungsflüssigkeit aufweisen, die ihrem relativen Anteil in dem ursprünglichen Substanzgemisch proportional ist. Außerdem können auf diese Weise auch von den Fraktionen mit kleiner Wanderungsgeschwindigkeit von vornherein Eluate mit hoher Konzentration erhalten werden. Dies bringt den wesentlichen VorteilSuch a process has the great advantage that the individual fractions collected are independent a concentration in the elution liquid of their migration speed in the carrier substance have, which are proportional to their relative proportion in the original substance mixture is. In addition, in this way, the fractions with a low migration speed can also be used eluates with a high concentration can be obtained from the outset. This brings the essential advantage

mit sich, daß die Menge der aufgefangenen Fraktion 65 einem die Temperatur der Eluierungslösung während ohne weitere Verfahrensschritte sogleich bestimmt des Eluierungsvorganges fortlaufend veränderndenwith it that the amount of fraction collected 65 a during the temperature of the eluting solution Without any further process steps, the elution process is determined to be continuously changing

Wärmeaustauscher besteht.
Eine gute Beeinflussung der Eluierungsgeschwin-There is a heat exchanger.
A good influence on the elution rate

keit in Abhängigkeit von der vorbestimmten Wanderungsgeschwindigkeit der Fraktionen des Substanzgemisches. speed as a function of the predetermined migration speed the fractions of the substance mixture.

Die Einrichtung zur Beeinflussung der Eluierungsgeschwindigkeit besteht vorzugsweise aus einer Pumpe, deren Drehzahl und Förderungsgeschwindigkeit für die Eluierungslösung im Laufe des Eluierungsvorganges kontinuierlich und stetig veränderbar ist.The device for influencing the elution rate preferably consists of one Pump, its speed and delivery speed for the eluting solution in the course of the elution process is continuously and continuously changeable.

Ebenso kann mit Erfolg als Einrichtung zur Beeinflussung der Eluierungsgeschwindigkeit ein Drosselventil verwendet werden, das in der Zuleitung der Eluierungslösung angeordnet ist und in Abhängigkeit von der Wanderungsgeschwindigkeit der Fraktionen kontinuierlich und stetig veränderbar.ist.A throttle valve can also be used successfully as a device for influencing the rate of elution can be used, which is arranged in the supply line for the eluting solution and as a function from the migration speed of the fractions continuously and steadily changeable. is.

Ausgezeichnete Ergebnisse werden gleichfalls mit einer Vorrichtung erhalten, bei der die Einrichtung zur Beeinflussung der Eluierungsgeschwindigkeit ausExcellent results are also obtained with an apparatus in which the device to influence the rate of elution

werden kann.
Als besonders zweckmäßig hat es sich erwiesen,can be.
It has proven to be particularly useful

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digkeit läßt sich gleichfalls durch eine Vorrichtung über die Trennsäule TS und die halbdurchlässige erreichen, bei der die Einrichtung zur Beeinflussung Membran M in das untere Elektrodengefäß UEG der Eluierungsgeschwindigkeit aus zwei weiteren die strömen kann. Die Pufferlösungsniveauhöhen N₁ Temperatur der Pufferlösung in der Trennkammer und N₂ werden durch einen Kreislauf über die Leiwährend des Eluierungsvorganges fortlaufend ver- ■ -5 rung K aufrechterhalten, durch die über eine Auslaßändernden Wärmeaustauschern besteht. leitung L₂, die im unteren Teil des unteren Elek-Speed can also be achieved by means of a device over the separation column TS and the semi-permeable one, in which the device for influencing membrane M can flow into the lower electrode vessel LEL of the elution rate from two further ones. The buffer solution level heights ₁ N temperature of the buffer solution in the separation chamber and N ₂ are continuously comparable through a circuit via the Leiwährend of Eluierungsvorganges ■ -5 tion K maintained there by a Auslaßändernden heat exchangers. line L ₂ , which is in the lower part of the lower elec-

Bei einer Vorrichtung, bei der zu beiden Seiten trodengefäßes UEG angeordnet ist, Pufferlösung ausIn the case of a device in which the electrode vessel LEL is arranged on both sides, buffer solution off

der Trennkammer an einer Gleichspannung liegende dem unteren Elektrodengefäß UEG abgezogen undremoved from the separation chamber at a DC voltage from the lower electrode vessel LEL and

Elektroden vorgesehen sind, besteht die Einrichtung durch eine Einlaßleitung L₁, die im oberen Elek-Electrodes are provided, the device consists of an inlet line L ₁ , which in the upper elec-

zur Beeinflussung der Eluierungsgeschwindigkeit ίο trodengefäß OEG unterhalb der Niveauhöhe N₁ an-to influence the elution speed ίο the electrode vessel OEG below the level N ₁ an-

zweckmäßigerweise aus einem Spannungsregler, geordnet ist, in das obere Elektrodengefäß OEG ein-expediently from a voltage regulator, is arranged in the upper electrode vessel OEG a

durch den die Höhe der angelegten Spannung fort- geführt wird. Die Niveauhöhe N₁ der Pufferlösungthrough which the level of the applied voltage is continued. The level N _{1 of} the buffer solution

laufend während des Eluierungsvorganges veränder- kann zusätzlich durch ein Überlaufrohr UR ganzcontinuously changing during the elution process - can also be completely changed through an overflow pipe UR

bar ist. genau und konstant eingestellt werden. Durch diesesis cash. can be set precisely and constantly. Because of this

Die Registriereinrichtung besteht vorteilhafter- 15 Überlaufrohr werden das Niveau JV₁ übersteigendeThe registration device is more advantageous - 15 overflow pipes will exceed _{level JV 1}

weise aus einem Durchflußphotospektrometer, dessen Pufferlösungen in das untere Elektrodengefäß UEG wise from a flow photospectrometer, its buffer solutions in the lower electrode vessel LEL

Registriergerät einen in Abhängigkeit von der Wan- abgeleitet.Registration device is derived depending on the wall.

derungsgeschwindigkeit der jeweils zu messenden Sowohl in dem oberen als auch in dem unterenrate of change of each to be measured both in the upper and in the lower

Fraktion veränderbaren Vorschub des Registrier- Elektrodengefäß OEG, UEG ist in der PufferlösungFraction variable feed of the recording electrode vessel OEG, LEL is in the buffer solution

materials aufweist. 20 je eine Elektrode E angeordnet, zwischen denen diematerials. 20 each have an electrode E arranged between which the

Im folgenden soll die Erfindung an Hand von in Gleichspannung einer nicht gezeigten Gleich-In the following, the invention is based on the use of a direct voltage, not shown,

der Zeichnung dargestellten beispielsweisen Ausfüh- Spannungsquelle angelegt werden kann, wobei diethe drawing shown exemplary execution voltage source can be applied, with the

rungsformen näher erläutert werden, in der Polung der Elektroden E je nach dem zu unter-Shapes are explained in more detail, in the polarity of the electrodes E depending on the

Fig. 1 in einer schematischen Darstellung eine suchenden Substanzgemisch gewählt wird. Die AnVorrichtung für die präparative Gel-Elektrophorese 25 Ordnung der Elektroden E in dem oberen und untezur Erläuterung des erfindungsgemäßen Verfahrens ren Elektrodengefäß OEG, UEG kann beliebig sein, zeigt; jedoch werden beide Elektroden E vorzugsweise aufFig. 1 is selected in a schematic representation of a searching substance mixture. The device for the preparative gel electrophoresis 25 order of the electrodes E in the upper and lower to explain the method according to the invention ren electrode vessel OEG, LEL can be arbitrary, shows; however, both electrodes E are preferably on

F i g. 2 zeigt in schematischer Darstellung eine er- der Mittellinie der Trennsäule TS angeordnet,F i g. 2 shows a schematic representation of a central line of the separation column TS ,

weiterte Anordnung zur Durchführung des erfin- Bei der Auftrennung eines zu untersuchendenFurther arrangement for the implementation of the invention

dungsgemäßen Verfahrens; 30 Substanzgemisches wird die Pufferlösung zunächstproper method; The buffer solution is initially used as a mixture of substances

F i g. 3 zeigt ein Diagramm, wie es bei der Durch- durch Einschalten des Kreislaufes über die Leitung K F i g. 3 shows a diagram of how it was when the circuit was switched on via line K

führung des erfindungsgemäßen Verfahrens erhalten auf die Niveauhöhen N₁ und N₂ gebracht. SodannImplementation of the method according to the invention is brought to the levels N ₁ and N ₂ . Then

wurde. wird das zu untersuchende Substanzgemisch in diebecame. is the substance mixture to be examined in the

In F i g. 1 ist mit TS eine Trennsäule bezeichnet, Trennsäule TS eingebracht, in der die einzelnen Teildie zum Teil oder ganz mit einem Trägergel TG ge- 33 chen des Gemisches unter der Wirkung der Schwerfüllt ist, das z. B. aus Stärkegel oder Polyacrylamidgel kraft verschieden schnell durch das Trägergel TG bestehen kann. Am unteren Ende der Trennsäule ist hindurchwandern, wobei sie sich in Fraktionen, wie eine Elutionskammer EK angeordnet. Diese EIu- z. B. F₁ und F₂, auftrennen. Bevor die erste Fraktionskammer steht mit der Trennsäule TS in Verbin- tion die Elutionskammer EK erreicht, wird mit der dung, und ihre Form wird vorzugsweise so gewählt, 40 Elution dieser Kammer EK durch die Eluierungsdaß ihr Querschnitt größer als der Querschnitt der lösung EP begonnen, so daß die einzelnen Fraktionen Trennsäule TS ist und daß nur eine minimale Menge zeitlich aufeinanderfolgend von diesem Eluierungs-Eluierungsflüssigkeit bzw. Eluierungslösung EP für lösungsstrom EP aufgenommen werden, sobald sie die Isolierung der aufgetrennten Fraktionen verwandt aus dem Trägergel TG in die Elutionskammer EK zu werden braucht. Auf der der Trennsäule TS gegen- 45 austreten. Die Eluierungslösung EP bewegt sich hierüberliegenden Seite der Elutionskammer EK ist eine bei senkrecht zu der Wanderungsrichtung der einzelhalbdurchlässige Membran M angeordnet, die für nen Fraktionen.In Fig. 1 TS denotes a separation column, separation column TS inserted in which the individual parts of the mixture are partly or wholly filled with a carrier gel TG 33 under the effect of the heavy filling, e.g. B. can consist of starch gel or polyacrylamide gel force at different speeds through the carrier gel TG . At the lower end of the separation column is wander through, whereby it is arranged in fractions, like an elution chamber EK. This EIu- z. B. F ₁ and F ₂ , separate. Before the first fraction chamber communicates with the separation column TS in conjunc- tion the elution EK reached, with the extension, and its shape is preferably chosen so EK started 40 Elution of this chamber through the Eluierungsdaß its cross-section larger than the cross-section of the solution EP, so that the individual fractions are separation column TS and that only a minimal amount of this elution-elution liquid or elution solution EP for solution flow EP is taken up in succession as soon as it needs to be used to isolate the separated fractions from the carrier gel TG into the elution chamber EK . Exit on the TS separating column. The elution solution EP moves over this side of the elution chamber EK is arranged at a perpendicular to the direction of migration of the single semipermeable membrane M , which is for the fractions.

die Stoffe des zu trennenden Substanzgemisches un- Wird gleichzeitig eine Auftrennung des Substanzdurchlässig ist. gemisches nach elektrischen oder magnetischen Ge- the substances of the substance mixture to be separated is simultaneously a separation of the substance is permeable. Mixture according to electrical or magnetic genes

Der obere, offene Teil der Trennsäule TS ragt in 50 Sichtspunkten gewünscht, so wird nach Einfüllen desThe upper, open part of the TS separation column protrudes in 50 points of view

ein oberes Elektrodengefäß OEG hinein, und der Substanzgemisches in die Trennsäule TS dem Gra-an upper electrode vessel OEG , and the substance mixture into the separation column TS to the gradient

Boden dieses oberen Elektrodengefäßes OEG ist vitationsfeld ein elektrisches Feld durch AnlegenAt the bottom of this upper electrode vessel OEG , an electrical field is applied to the vitationsfeld

dicht mit der Wand der Trennsäule TS verbunden. einer Gleichspannung an die Elektroden E oder eintightly connected to the wall of the separation column TS . a DC voltage to the electrodes E or a

Das obere Elektrodengefäß OEG ist vorzugsweise Magnetfeld, insbesondere ein inhomogenes Magnet-The upper electrode vessel OEG is preferably a magnetic field, in particular an inhomogeneous magnetic field

durch einen Deckel D verschließbar. 55 feld, durch eine nicht gezeigte Einrichtung überlagert,can be closed by a cover D. 55 field, superimposed by a device not shown,

Der untere Teil der Trennsäule TS, an dem die so daß das Substanzgemisch je nach seinen elektri-Elutionskammer EK, die mit einer Zuführungs- und sehen Ladungen bzw. Ladungsverhältnissen oder einer Abführungsleitung für die Eluierungslösung EP seinem Magnetismus zusätzlich in verschiedene Frakausgestattet ist, befestigt ist, ragt in ein unteres Elek- tionen aufgetrennt wird. Um eine Schädigung der trodengefäß UEG hinab. Das obere und das untere 60 aufzutrennenden Substanzen durch die entstehende Elektrodengefäß OEG, UEG können starr oder lös- Joulsche Wärme zu vermeiden, wird die Pufferbar oder relativ gegeneinander verschiebbar mitein- lösung in den Elektrodengefäßen OEG, UEG durch ander verbunden sein. eine in der F i g. 1 nicht gezeigte Kühlschlange ge-The lower part of the separation column TS, to which the substance mixture is attached, depending on its electrical elution chamber EK, which is additionally equipped with a supply and see charges or charge ratios or a discharge line for the elution solution EP its magnetism in different fracs , protrudes into a lower ele- ment. LEL down to damage the electrode vessel. The upper and lower 60 to be separated substances by the resulting electrode vessel OEG, LEG can be rigid or dissolvable. To avoid Joule heat, the buffer bar or relatively mutually displaceable with dissolution in the electrode vessels OEG, LEG can be connected through one another. one in FIG. 1 cooling coil (not shown)

Das obere und das untere Elektrodengefäß OEG, kühlt.The upper and the lower electrode vessel OEG, cools.

UEG sind bis zu einer Höhe N₁ bzw. N₂ mit Puffer- 65 In Fi g. 2 ist in schematischer Darstellung eine bei- LEL are up to a level N ₁ or N ₂ with buffer 65 In Fi g. 2 is a schematic representation of a two

lösung gefüllt, wobei die Höhe N₁ über dem oberen, spielsweise Gesamtanordnung zur Isolierung vonsolution filled, the height N ₁ above the upper, for example overall arrangement for the isolation of

offenen Rand der Trennsäule TS liegt, so daß die elektrischphoretisch in einem Trägergel aufgetrenn-open edge of the separation column TS , so that the electrophoretically separated in a carrier gel

Pufferlösung von der oberen Elektrodenkammer OEG ten Fraktionen eines Substanzgemisches gezeigt, beiBuffer solution from the upper electrode chamber OEG th fractions of a substance mixture shown at

der die in Fig. 1 gezeigte Trennsäulenvorrichtung verwandt ist, die allgemein mit A bezeichnet ist.which is related to the separation column apparatus shown in FIG. 1, generally designated A.

Die gezeigte Vorrichtung wird, wie bereits an Hand der Fig. 1 zum Teil erläutert wurde, so betrieben, daß der Kreislauf der Pufferlösung durch geeignete Wahl der Fördermenge einer Pumpe P₂ so eingestellt wird, daß die Niveauhöhen JV₁ und JV₂ konstant bleiben. Nach dem Einfüllen des Substanzgemisches in die Trennsäule TS wird an die Elektroden E eineAs already explained in part with reference to FIG. 1, the device shown is operated in such a way that the circuit of the buffer solution is _{adjusted by suitable selection of the delivery rate of a pump P 2} so that the levels JV ₁ and JV ₂ remain constant. After filling of the substance mixture into the separation column E is a TS to the electrodes

Fördermenge der PUmPeF₁ nach einem vorgegebenen Zeitplan, der in Form einer programmierten oder mechanisch zwangläufigen Steuerung vorliegen kann, steuert, insbesondere kontinuierlich verringert. Die Fördermenge der Pumpe P₁ kann z. B. dadurch verringert werden, daß die Umlaufgeschwindigkeit der Pumpe P₁ verändert wird.The delivery rate of the PUmPeF ₁ according to a predetermined schedule, which can be in the form of a programmed or mechanically compulsory control, controls, in particular continuously reduced. The delivery rate of the pump P ₁ can, for. B. can be reduced by changing the rotational speed of the pump P _1.

Eine Anpassung der Eluierungsgeschwindigkeit an die Wanderungsgeschwindigkeit der Fraktionen kann Gleichspannung angelegt, die durch eine Gleich- io jedoch auch ohne eine zeitliche Änderung der Menge Spannungsquelle GL erzeugt wird. Bevor die am der Eluierungslösung EP dadurch vorgenommen werschnellsten wandernde Fraktion des Substanzge- den, daß man bei konstanter Menge an Eluierungsmisches die unterste Schicht des Trägergels TG in der lösung EP, die pro Zeiteinheit durch die Elutions-Trennsäule TS erreicht hat und in die Elutionskam- kammer EK fließt, kontinuierlich die Gleichspannung mer EK eingetreten ist, wird durch die Elutionskam- 15 an den Elektroden E derart ändert, insbesondere mer EK ein sodann bis zum Ende der Elektrophorese kontinuierlich erhöht, daß die Zeit, die vom Eintritt kontinuierlich fließender Strom von Eluierungslösung der nach unten weisenden, vorderen Front der Frak- EP geführt. Dieser Strom wird durch eine Pumpe P₁ tionsschicht F₁ (s. F i g. 1) in die Elutionskammer EK erzeugt, die Eluierungslösung EP aus einem Vorrats- bis zum Eintritt der nach oben weisenden, hinteren behälter B für Eluierungslösung EP entnimmt und in ao Front der Fraktionsschicht F₁ vergeht, genauso lang die Elutionskammer EK einführt. ist wie die Zeit, die die Fraktion F₂ für ihren genausoAn adaptation of the elution rate to the rate of migration of the fractions can be applied DC voltage, which is generated by a DC voltage but also without a temporal change in the amount of voltage source GL . Before the fraction of the substance that migrates most rapidly on the elution solution EP is achieved by placing the lowest layer of the carrier gel TG in the solution EP, which has reached through the elution separation column TS per unit of time and which has come into the elution, with a constant amount of elution mixture. chamber EK flows, the DC voltage mer EK has occurred continuously, is changed by the elution chamber 15 at the electrodes E in such a way, in particular mer EK a then continuously increased until the end of the electrophoresis, that the time from the entry continuously flowing stream of eluting solution the downward-facing front of the Frak- EP . This current is controlled by a pump P ₁ tion layer F ₁ (s. F ig. 1) is generated in the elution EK, until the occurrence of the side facing the eluting solution EP of an inventories upward rear container B for eluting EP extracts and in ao the front of the fraction layer F ₁ passes, just as long the elution chamber EK introduces. is like the time that the F ₂ faction takes for its same

Die aus dem Trägergel TG im Laufe der Zeit nach- definierten Eintritt in die Elutionskammer EK beeinander in die Elutionskammer EK austretenden nötigt. Dies wird vorzugsweise durch eine lineare ErFraktionen werden fortlaufend von der Eluierungs- höhung der Wanderungsgeschwindigkeiten der FraklosungEP aufgenommen und zusammen mit dieser 25 tionen mit der Zeit erreicht. Für die Durchführung Eluierungslösung EP durch ein Durchflußphotospek- eines solchen Schrittes eignet sich z. B. ein Regler trometer DSP geleitet. Durch dieses Durchflußphoto- R_GL, der zwischen die Gleichspannungsquelle GL und spektrometer wird mit Hilfe einer Lichtquelle Q und die Elektroden E geschaltet ist und der die Spannung einer lichtempfindlichen Vorrichtung PZ, wie z.B. der Elektroden E kontinuierlich ändert, insbesondere einer Photozelle, kontinuierlich die Absorption oder 30 erhöht,
die Durchlässigkeit des durch die Vorrichtung hin- Ein ähnliches Verfahren kann angewandt werden, The entry into the elution chamber EK that emerges from the carrier gel TG in the course of time and exiting into the elution chamber EK one after the other is necessary. This is preferably done by means of a linear process. Fractions are continuously absorbed by the elution increase in the migration speed of the fraction solution EP and, together with this, are achieved over time. For carrying out eluting solution EP through a Durchflußphotospek- such a step is suitable, for. B. routed a controller trometer DSP . Through this flow photo R _GL , which is connected between the DC voltage source GL and the spectrometer with the help of a light source Q and the electrodes E and which continuously changes the voltage of a light-sensitive device PZ, such as the electrodes E , in particular a photocell, continuously changes the absorption or 30 raised,
the permeability of the through the device a similar method can be used

durchfließenden Eluatstromes gemessen. Die beobachteten Werte werden gleichzeitig kontinuierlich von einem Registriergerät RG aufgezeichnet. In F i g. 2 ist schematisch eine Registrierkurve C angedeutet. Die aus dem Durchflußregistrierphotometer DSP austretenden Eluate werden schließlich in einzelnen Behältern eines Fraktionsteilers FT aufgefangen. measured eluate stream flowing through. At the same time, the observed values are continuously recorded by a recording device RG . In Fig. A registration curve C is indicated schematically in FIG. The eluates emerging from the flow registration photometer DSP are finally collected in individual containers of a fraction divider FT.

wenn die Fraktionen auf Grund ihres Magnetismus in einem Magnetfeld aufgetrennt werden. In diesem Fall kann z. B. der elektrische Strom, mit dem das Magnetfeld erzeugt wird, so geregelt werden, daß durch die Änderung der Wanderungsgeschwindigkeiten der einzelnen Fraktionen dieselben Zeitbedingungen erfüllt werden wie im Falle der oben beschriebenen Änderung der Wanderungsgeschwindigkeit aufwhen the fractions are separated due to their magnetism in a magnetic field. In this Case can e.g. B. the electric current with which the magnetic field is generated can be controlled so that by changing the migration speeds of the individual fractions, the same time conditions be met as in the case of the change in the migration speed described above

Mit der vorliegenden Vorrichtung ist es möglich, 40 Grund eines elektrischen Feldes, nicht nur die einzelnen Fraktionen des ursprünglichen Eine weitere Möglichkeit, um die Eluierungsge-With the present device it is possible to measure 40 basic of an electric field, not only the individual fractions of the original Another possibility to determine the elution

Substanzgemisches getrennt aufzufangen, sondern es ist auch gleichzeitig möglich, die einzelnen Fraktionen sogleich so aufzufangen, daß jede EluatflüssigkeitCollect the substance mixture separately, but it is also possible to collect the individual fractions at the same time immediately to be collected in such a way that every eluate liquid

schwindigkeit an die Wanderungsgeschwindigkeit der Fraktionen anzupassen, besteht darin, daß vorzugsweise bei konstanter elektrischer Spannung an dento adapt speed to the rate of migration of the fractions, is that preferably with constant electrical voltage on the

eine dem wahren Anteil der Fraktion im Ursprung- 45 Elektroden E und bei konstanter Flußmenge an liehen Substanzgemisch proportionale Konzentration Eluierungslösung EP durch die Elutionskammer EK a concentration of eluting solution EP through the elution chamber EK that is proportional to the true proportion of the fraction in the original 45 electrodes E and with a constant flow of the lent substance mixture

die Temperatur der Eluierungslösung EP verändert wird. Diese Temperaturänderung sollte in der Richtung ausgeführt werden, daß sich eine größere Aufthe temperature of the eluting solution EP is changed. This temperature change should be carried out in the direction that there is a greater opening

aufweist.having.

Zu diesem Zweck wird die Eluierungsgeschwindigkeit der Wanderungsgeschwindigkeit der einzelnenFor this purpose, the elution rate is the migration rate of each

Fraktionen angepaßt. Dies kann z. B. dadurch ausge- 50 nahmefähigkeit der Eluierung EP für die Fraktionen führt werden, daß die Eluierungsgeschwindigkeit bzw. eine größere Löslichkeit der Fraktionen in derFractions adjusted. This can e.g. B. thereby the exceptional ability of the elution EP for the fractions leads to the fact that the elution rate or a greater solubility of the fractions in the

Eluierungslösung EP ergibt, wodurch ein zunehmend schnelleres Eintreten der Fraktionen in die Elutionskammer EK stattfindet. Dieselbe Wirkung kann durchElution solution EP results, whereby an increasingly faster entry of the fractions into the elution chamber EK takes place. The same effect can be achieved

Eine Anpassung der Eluierungsgeschwindigkeit an die Wanderungsgeschwindigkeit der Fraktionen durch eine Temperaturänderung der Eluierungslösung EP An adaptation of the elution rate to the rate of migration of the fractions by changing the temperature of the eluting solution EP

stufenförmig für jede zeitlich nacheinander austretende Fraktion geändert wird, wobei die Eluierungsgeschwindigkeit während des Eintritts eineris changed in steps for each fraction emerging one after the other, with the elution rate during the entry of a

Fraktion in die Elutionskammer EK konstant gehal- 55 eine Temperaturänderung der Pufferlösung in denFraction in the elution chamber EK kept constant 55 a temperature change of the buffer solution in the

ten wird. Zweckmäßigerweise wird jedoch die Eluie- Elektrodengefäßen OEG und UEG erreicht werden,will. Appropriately, however, the eluate electrode vessels OEG and LEL are reached,

rungsgeschwindigkeit kontinuierlich verändert. Diese — ■
Änderung der Eluierungsgeschwindigkeit, ob sie nun
stufenförmig oder kontinuierlich durchgeführt wird,rate of travel changed continuously. This - ■
Change the rate of elution, whether it is now
is carried out in stages or continuously,

erfolgt dabei so, daß jede Fraktion unabhängig von 60 oder der Pufferlösung braucht jedoch nicht bei kon-takes place in such a way that each fraction needs regardless of 60 or the buffer solution, but not in the case of con-

ihrer Wanderungsgeschwindigkeit von der gleichen stant gehaltener elektrischer Spannung oder konstanttheir migration speed from the same constant electrical voltage or constant

Menge Eluierungslösung EP aufgenommen wird. gehaltenem Magnetfeld bzw. konstanter FlußmengeAmount of eluting solution EP is absorbed. maintained magnetic field or constant flow rate

Eine solche Forderung kann zweckmäßigerweise an Eluitionslösung zu erfolgen, sondern es kann eineSuch a requirement can expediently be made on elution solution, but it can be a

dadurch erfüllt werden, daß die Menge der Eluie- solche Anpassung auch durch gleichzeitige kontinuier-can be met by the fact that the amount of eluent such adjustment also through simultaneous continuous-

rungslösung EP, die durch die Elutionskammer EK 65 liehe oder stufenweise Änderung aller oben beschrie-solution EP, which borrowed from the EK 65 elution chamber or gradually changed all of the above

geleitet wird, kontinuierlich, insbesondere linear mit benen Größen oder einiger dieser Größen erfolgen,is conducted, continuously, in particular linearly with benen sizes or some of these sizes,

der Zeit verringert wird. Zu diesem Zweck ist in Eine kontinuierliche oder stufenweise Änderungthe time is reduced. For this purpose it is in A continuous or gradual change

Fig. 2 eine ElutionssteuerungES vorgesehen, die die der Temperatur der Eluierungslösung EP oder derFig. 2 an elution control ES is provided, which the temperature of the eluting solution EP or the

Pufferlösung kann ζ. B. durch einen Wärmeäustau- Durch das vorliegende Verfahren können" gleichscher PF₁, der in die Leitung zwischen der Pumpe P₁ zeitig auch die relativen Anteile der einzelnen Frak- und der Elutionskammer EK eingebaut ist_s öder tionen am ursprünglichen Substanzgemisch direkt be-Wärmeäustauscher PF₂ und/oder W₃ erfolgen, die im stimmt werden. Dies wird dadurch erreicht, daß die unteren und/oder im oberen Elektrodengefäß UEK, ^C5 betreffenden Regeleinrichtungen, wie z. B. die EIu- OEK innerhalb der Pufferlösung angebracht sind. tionssteuerung EK oder die Regeleinrichtungen R_Wl Diese Wärmeaustauscher PF₁, PF₂, PF₃ können durch bzw. R_x^₂ oder Rqi, zur Steuerung der zu ändernden Regelvorrichtungen R_Wi bzw. R^₂ derart nach einem Größe direkt mit einer Steuerungseinrichtung SRG vorgegebenen Programm gesteuert werden, daß jede für das Registriergerät RG verbunden ist, durch das Fraktion von einer gleichgroßen Menge an Eluie- ±o die Vorschubgeschwindigkeit des Aufzeichnungsrüttgslösung EP aufgenommen wird, mediums des Registriergerätes RG proportional zuBuffer solution can ζ. B. "equal shear PF _1, which is also incorporated, the relative proportions of the individual parliamentary groups and the elution time EK in the line between the pump P ₁ _s may barren functions to the initial mixture of substances directly be-Wärmeäustauscher by a Wärmeäustau- by the present process PF ₂ and / or W ₃ take place, which are correct. This is achieved in that the lower and / or in the upper electrode vessel UEK, ^C 5 relevant control devices, such as the EIu- OEK are attached within the buffer solution. tion control EK or the control devices R _Wl These heat exchangers PF ₁ , PF ₂ , PF ₃ can be controlled by or R _x ^ ₂ or Rqi, to control the control devices R _Wi or R ^ ₂ to be changed according to a size directly with a control device SRG predetermined program are controlled so that each is connected to the registration device RG , through the fraction of an equal amount of elui- ± o the feed rate of the recording vibration solution EP is added, the medium of the recording device RG proportional to

Eine Anpassung kann gleichfalls auch dadurch der Änderungsgeschwindigkeit der zu steuernden vorgenommen werden, daß die EluierungslösüngEP Größe verändert wird.The rate of change of the rate to be controlled can also be adapted by changing the size of the elution solution EP.

aus zwei oder mehreren Komponenten besteht, von In Fig. 2 ist z. B. die ElutionssieuerungES durchconsists of two or more components, from In Fig. 2 z. B. the Elutionsieuerung ES

denen mindestens eine Komponente für die einzelnen ig eine elektrische Verbindungsleitung F₁, die Regel-Fraktionen ein größeres bzw', weitaus''größeres Auf- einrichtungen R^₁ bzw. R_W2 für den Warmeaustaunahmevermögen als die anderen Komponenten besitzt, scher PF₁ bzw. W₂ oder PF₃ durch eine elektrische und daß das Verhältnis der Anfeile der aufnahme- ' Verbindungsleitung V₂ bzw. F₃ und die Regeleinrichfähigeren Komponente zu der für die Fraktionen tungen R_Gi fürdie Gleichspannung der Elektroden E schlechter aufnahmefähigen Komponente in der äo durch eine elektrische Verbindungsleitung V₁ mit der Eluierungslösüng EP kontinuierlich oder stufenweise Steuerungseinrichtung SRG des Registriergerätes vergeändert wird. Ein solches Verfahren ist insbesondere bunden.which has at least one component for the individual ig an electrical connection line F ₁ , the rule fractions a larger or ', far''larger Auf- facilities R ^ ₁ or R _W2 for the heat exchange capacity than the other components, shear PF ₁ or W ₂ or PF ₃ by an electrical and that the ratio of the parts of the receiving 'connecting line V ₂ or F ₃ and the control device capable component to the for the fractions lines R _G i for the direct voltage of the electrodes E less absorbable component in the ao is changed continuously or in stages by an electrical connection line V ₁ with the elution solution EP control device SRG of the recording device. Such a method is particularly tied.

dann gut geeignet* wenn der gesamte öder der über- Der relative Anteil der jeweiligen Fraktion amthen well suited * if the entire or the over- The relative share of the respective fraction in the

wiegende Teil der Fraktionen von der besser aüfneh- Substanzgemisch wird unter diesen Bedingungen somenden Komponente aufgenommen wird und diese 25 gleich durch Integration der unter dem jeweiligen Komponente von der öder den änderen'Komponen- Peak der Kurve C, der durch Photometrierung des ten der Eluierungslösüng EP leicht abtrennbar ist. Eluats einer bestimmten Fraktion hervorgebracht Das Mischungsverhältnis der Anteile der beiden ver- .wird, Hegenden Fläche erhalten.
Schieden wirkenden Komponenten Wird zweckrnäßi- Gleichzeitig neben dieser quantitativen FeststellungMajor part of the fractions of the better aüfneh- substance mixture is absorbed under these conditions somenden component and this 25 equal by integration of the under the respective component of the or der änderen'Komponen- peak of the curve C, which by photometry of the th of the elution solution EP is easily detachable. Eluates of a certain fraction produced. The mixing ratio of the proportions of the two mixed areas is obtained.
Different acting components will be expedient at the same time in addition to this quantitative determination

gerweise linear geändert, wobei insbesondere bei 30 des relativen Anteils jeder Fraktion am Ursprungkonstanter Temperatur der Eluierungslösüng EP und liehen Substanzgemisch kann jedoch auch das Eluat konstantem elektrischem Feld und/oder Magnetfeld jeder Fraktion völlig getrennt von denjenigen der der Anteil der aufnahmefähigeren Komponente ver- nächstfolgenden Fraktionen ohne Hilfe durch eine ringert wird. Auch dieses Verfahren kann jedoch in Bedienungsperson aufgefangen werden. Dies wird Verbindung mit einem oder mehreren der vorher- 35 dadurch ermöglicht, daß der Fraktionsteiler FT beschriebenen Verfahren angewandt-Werden. (Fig. 2) vom RegistrierphotometerDSP aus so ge-Usually linearly changed, in particular at 30 of the relative proportion of each fraction at the original constant temperature of the elution solution EP and borrowed substance mixture, however, the eluate with constant electric field and / or magnetic field of each fraction can be completely separated from that of the fractions that follow the proportion of the more absorbent component is wrestled without help from one. However, this method can also be caught in the operator. This is made possible in connection with one or more of the methods described above by using the fraction divider FT . (Fig. 2) from the registration photometer DSP in such a way

Um eine möglichst Optimale Anpassung im Be- steuert wird, daß bei Erreichung eines Schwellenwerreich der Zur Verfügung stehenden^ nutzbaren Ände- tes der durch das Registriergerät RG aufgezeichneten rüngsmöglichkeit einer Größe, wie etwa der Eluie- Kurve oder z. B. der durch die Photozelle PZ abgerungslösungsmenge pro Zeiteinheit,'der elektrischen 40 gebenen Signale, der den Beginn einer neuen Frak-Spannung, des Magnetfeldes,- der Temperatur oder tion anzeigt, mit der Füllung eines neuen Gefäßes des des Mischungsverhältnisses der Elüienlngslösung EP, Fraktionsteilers FT begonnen wird. Durch diesen zu erhalten, wird zweckmäßigerweise zuerst ein Leer- Impuls, der bei der Überschreitung des Schwellenversüch mit einem Teil des Substailzgemisches. durch- wertes abgegeben wird, wird durch die Steuerungsgeführt, durch den die Zeit festgestellt wird, in der 45 vorrichtung SFT des FraktiottSteilers FT eine solche auch die letzte Fraktion des'Substanzgem'isches in die Relativbewegung zwischen dem Fräktionsteiler FT Elutionskammer EK gelangt ist. Auf Grund dieser und dem Ende einer aus dem Durchfiußphötospekfestgestellten Zeit wird södami je nach dem verwand- trometer DSP austretenden Zuflußleitung Z hervorgeten Verfahren zur Anpassung die betreffende Regel- bracht, daß das Eluat einer neuen Fraktion in ein einrichtung zur Steuerung der zu ändernden Größe 50 neues Auffanggefäß einläuft,
so programmiert bzw< eingestellt, daß innerhalb dieser Die Leistungsfähigkeit des erfindungsgemäßenIn order to achieve the best possible adjustment in the control, when a threshold value is reached, the available, usable change in the possibility of a variable recorded by the recording device RG , such as the eluent curve or z. B. the amount of solution removed by the photocell PZ per unit of time, the electrical signals given, which indicate the beginning of a new Frak voltage, the magnetic field, the temperature or tion, with the filling of a new vessel of the mixing ratio of the solution EP, Fraction divider FT is started. This is expediently first given an empty pulse, which when the threshold test is exceeded with part of the substailzgemisches. value is delivered, is guided by the control, by which the time is determined in the 45 device SFT of the fraction divider FT such as the last fraction of the substance mixture has reached the relative movement between the fraction divider FT elution chamber EK . On the basis of this and the end of a time determined from the flow photoscope, depending on the procedure for adapting the inflow line Z emerging from the related trometer DSP, the relevant rule is brought that the eluate of a new fraction is fed into a device for controlling the size to be changed 50 new Collecting vessel runs in,
programmed or <set that within this the performance of the invention

gemessenen Zeit die maximal nutzbare Änderung der Verfahrens soll noch an Hand eines Beispieles näher betreffenden Große durchlaufen wird. Vorzugsweise erläutert werden,
erfolgt, falls die zu ändernde Größe die Flußmengemeasured time the maximum usable change of the method is still to be run through on the basis of an example more closely related size. It is preferable to explain
occurs if the variable to be changed is the flow rate

der Eluierungslösüng EP pro Zeiteinheit ist, eine 55 Beispielthe elution solution is EP per unit time, an example

solche Einstellung der Elutionssteuerung ES_$ daß · ~such setting of the elution control ES _$ that · ~

diese Große im Verhältnis 30:1 während dieser Zeit In einer Vorrichtung entsprechend der in Fig. 2,this size in the ratio 30: 1 during this time In a device corresponding to that in Fig. 2,

verringert wird. bei der: die Anpassung der Eluierungsgeschwindigkeitis decreased. in the case of: the adjustment of the elution rate

Ein Leerversuch zur Feststellung der Durchflußzeit an die Wanderungsgeschwindigkeit der einzelnen des Substanzgemisches durch die Trennsäule TS ist 60 Fraktionen jedoch allein durch eine stetige lineare jedoch keineswegs notwendig. Vielmehr können die zeitliche Änderung der Eluierungslösungsflußmenge betreffenden Regeleinrichtungen zur Steuerung der durch die Elutionskammer EK vorgenommen wurde, zu ändernden Größe auch von vornherein so einge- wurde eine Isolierung einzelner Enzym- und Proteinstellt werden, daß die maximale, nutzvolle Änderung fraktionen aus der Röhkollägenase durchgeführt, der betreffenden Größe nach einer Zeit .erreicht wird, 65 Hierbei bestand die Probe aus 95 mg Röhkollagedie größer ist als die Zeit, die fur den Durchlauf des nase. Als Elektrodenpuffer wurden 3 g Tris + 14,4 g Substanzgemisches durch die Trennsäule TS schät- Glycin, gepuffert mit 1 Mol NaOH bis pH 9,0 und zungsweise angenommen wird, mit destilliertem Wasser auf 1000 ml aufgefüllt, ver-An empty test to determine the flow time on the migration speed of the individual substance mixture through the separation column TS is 60 fractions, however, by a steady linear one alone, but by no means necessary. Rather, the time change of the elution solution flow rate related control devices for controlling the size to be changed by the elution chamber EK can also be set up from the start so that the isolation of individual enzyme and protein fractions is carried out so that the maximum useful change is carried out from the Röhkollägenase, The size in question is reached after a period of time, 65 Here the sample consisted of 95 mg of crude collage, which is greater than the time required for the passage of the nose. As an electrode buffer, 3 g of Tris + 14.4 g of substance mixture were passed through the TS schät- glycine separation column, buffered with 1 mol of NaOH up to pH 9.0 and is assumed to be made up to 1000 ml with distilled water, then added.

Claims

turns. The gel buffer consisted of 40 g of Tris dissolved in about 500 ml of distilled water which had been brought to pH 8.0 with 1 mol of HCl and made up to 1000 ml with distilled water. 7.5% polyacrylamide in the gel buffer was used as the carrier gel. The sample was dissolved in 1 ml of gel buffer with the addition of glucose and applied to the carrier gel. The electrophoresis was carried out at 200 V and 60 mA at a temperature of 15 ° C. for 52 hours. During this time the elution solution flow rate per unit time was decreased in the ratio of 30: 1. In Fig. 3, P denotes the curve obtained in the recording device RG which indicates the distribution of the proteins. The activities of the enzymes were determined separately in individual fractions. Curve PA — proteinase, curve AIE — amidase / esterase, curve K1 — collagenase 1 (Clostridiopeptidase A, EC 3.4.4.19), curve K2' — collagenase 2, Pi pigments. -. ·· -: ■. ■ ·. ' This example once again clearly shows that the present invention provides a simple and perfectly functioning method and elution system. At the same time, however, the essential advantage is also obtained that the concentration ratios of the separated fractions in the eluate correspond to those in the gel itself. In this way, elution curves can be obtained which have the shape of extinction curves, as they are in the / direct photometry of the 3 °. Distribution in the gel ". At the same time, however, according to the present invention, an analytical evaluation of the isolated fractions can also be carried out. · -; ..- ■■ ■"

1. A method for the quantitative determination and preparative "recovery of fractions of a substance mixture which migrate in a carrier material permeated by buffer solution and which are eluted by means of an eluting solution when exiting the carrier material, characterized in that the elution rate of the eluting solution (EP) to maintain a The concentration proportional to the true fraction of the fraction in the mixture is adapted to the rate of migration of the fraction and the fraction of the fraction in the mixture is then determined in a known manner.

2. The method according to claim 1, characterized in that the adjustment of the elution rate is carried out by changing the flow rate of the elution solution (EP) .

3. The method according to claim Γ, characterized in that the adjustment of the elution rate is carried out by changing an electrical voltage applied to the carrier material.

4. The method according to claim 1, characterized in that the adjustment of the elution rate is made by changing a magnetic field.

5. The method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the adjustment of the elution rate is carried out by changing the temperature of the elution solution (EP) .

6. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that the adjustment of the elution rate is carried out by changing the temperature of the buffer solution in a separation chamber (EK) .

7. The method according to any one of claims 1 to 6, characterized in that the adjustment of the elution rate by changing the mixing ratio of the elution solution (EP) by gradually reducing the one portion of the elution solution mixture which is suitable for rapid elution, carried out in the course of the elution process will.

8. The method according to any one of claims 1 to 7, characterized in that the eluting solution after the elution process is passed through a continuous registration photometer (DSP) and the feed speed of the recording material of a recording device (RG) is changed depending on the migration speed of the respective fraction to be measured .

9. Device for performing the method according to claims 1 to 8 with a • Separation chamber filled with carrier material and buffer solution, with one at one end of this separation chamber provided feed device for the substance mixture and with one on the other At the end of this separation chamber, there is a subsequent elution chamber, a registration device and a fraction divider, characterized by a device for influencing the rate of elution as a function of the predetermined migration speed of the fractions of the substance mixture.

10. The device according to claim, characterized in that the device for influencing the elution rate consists of a pump (P ₁ ), the speed of which and thus the rate of delivery for the elution solution (EP) can be continuously and steadily changed in the course of the elution process.

11. The device according to claim 9, characterized in that the device for influencing the elution speed consists of a throttle valve which is arranged in the supply line of the elution solution (EP) and can be continuously and steadily changed as a function of the migration speed of the fractions.

12. The device according to claim 9, characterized in that the device for influencing the elution rate consists of a heat exchanger (J ^ ₁ ) which continuously changes the temperature of the eluting solution (JSP) during the elution process.

13. The device according to claim 9, characterized in that the device for influencing the elution rate consists of two further heat exchangers (W ₂ , W ₃ ) which continuously change the temperature of the buffer solution in the separation chamber (TK) during the elution process.

14. The device according to claim 9 with electrodes connected to a direct voltage for both Sides of the separation chamber, thus marked

net that the device for influencing the elution rate consists of a voltage regulator (RGL) by means of which the level of the applied voltage can be continuously changed during the elution process.

15. The device according to claim 9, characterized

indicates that the recording device consists of a flow photospectrometer (DSP) , the recording device (RG) of which has a feed rate of the recording material that can be changed depending on the migration speed of the particular fraction to be measured.

1 sheet of drawings

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