DE1498986A1

DE1498986A1 - Method and apparatus for the rapid and reliable determination of the prothrombin complex and related factors

Info

Publication number: DE1498986A1
Application number: DE19631498986
Authority: DE
Inventors: Jacques Viret
Original assignee: EXPL DE MARQUES ET BREVETS S E
Current assignee: EXPL DE MARQUES ET BREVETS S E
Priority date: 1962-04-28
Filing date: 1963-04-20
Publication date: 1969-01-30
Also published as: BE631573A; CH433821A; FR1338339A; ES287273A3

Description

Paktoren.Pactors.

Die Erfindung bezieht sich auf die Prüfung der Blutgerinnung durch Untersuchung und biologische Dosierung einer besamten Anzahl von Paktoren, welche an diesem komplizieren Vorgang beteiligt sind und über welche so genau und so ras^h wie möglich Auskunft erhalten werden soll, beispielsweise ir., :-all einer schweren Blutung oder bei der überwachung einer medizinischen Behandlung von Herz- und Gefäßleiden durch Verabreichung von Medikamenten, die inter Wirksamkeit in cine_M bestimmten Sinne günstig sind, andererseits aber die οο,-iHialen Eigenschaften des menschlichen Blutes, 'insbesondre was seine Gerinnbarkeit anbetrifft, ändern"können.The invention relates to the testing of blood coagulation by examination and biological dosing of an inseminated number of factors that are involved in this complicated process and about which information should be obtained as precisely and as quickly as possible, for example ir.,: - all serious bleeding or in monitoring a medical treatment of cardiac and vascular disease by administering drugs that inter effectiveness in cine _M certain sense are favorable, on the other hand, the οο, -iHialen properties of human blood, insbesondre what his coagulability regards' can change.

Der Zweck der Erfindung besteht insbesondere in der Schafrung eines Verfahrens zum raschen und sicheren Bestimmen desThe purpose of the invention is particularly that of sheep a method for quickly and reliably determining the

badbath

Prothrombinkomplexes und verwandter Paktoren unter bequemen und vollkommen reproduzierbaren Bedingungen und unter maximaler Ausschaltung der Gefahr für Fehler und persönlicher Interpretierung bei der Durchführung von Arbeitsvorgängen., die auf der einfachen Messung der "Quick-Zeit" beruhen, d.h. auf der im Glas vorgenommenen Messung der Dauer der in Gegenwart von hinzugefügtem calciumhaltigen Thromboplastin bei einer Temperatur von j57 C erfolgenden Gerinnung eines Plasmas, das aus einer Blutprobe erhalten ist, die in einem Antikoagulierungsgemisch gesammelt ist.Prothrombin complexes and related factors among convenient and completely reproducible conditions and with maximum elimination of the risk of errors and personal Interpretation in the execution of work processes., based on the simple measurement of "quick time", i.e. on the measurement made in the glass of the duration of the thromboplastin in the presence of added calcium-containing thromboplastin coagulation occurring at a temperature of 57 ° C Plasma obtained from a blood sample collected in an anticoagulant mixture.

Γ la .■ CLxduüg L·.- ivit-^lzl ,-itibtr; *_.. die ..af i'urtg hln'ii' einfachen, leicht beclieribaren und bequem ablesbaren tforriohtung ζur rοί■ chen. und ?xu--reichend genauen Aur.;ertunfv der durch die An-z/encung des ges-chilaerten "/erfatireris erhaltenen Ergebnisse. ·Γ la. ■ CLxduüg L · .- ivit- ^ lzl , -itibtr; * _ .. the ..af i'urtg hln'ii ' simple, easily recognizable and easily readable tforriohtung ζur r οί ■ chen. and ? xu - accurate calibration.

Bei der Durchführung des Verfahrens gemäß der Erfindung wird von an sich bekannten Arbeitsweisen Gebrauch gemacht, wie sie laufend in"Speziallaboratorien gewisser Krankenhäuser benutzt werden. Die Anwendung dieser Ärbeitsv/eisen is b jedoch bisher mit schwerwiegenden Nachteilen behaftet gewesen. Die Aufzeichnung einer Tageskurve nach der einzigen bisher wirklich brauchbaren Methode zur Bestimmung des Prothrombinanteilverhältnisses sowie zur Ermittlung der Kon- . zentration der Kofaktoren in dem zu untersuchenden Plasma ist ein langwieriger Vorgang.In carrying out the method according to the invention use is made of known working methods, as they are currently used in "special laboratories of certain hospitals. The application of these working methods is b however, up to now it has suffered serious disadvantages. The recording of a daily curve after the only one so far really useful method for determining the prothrombin content ratio as well as to determine the con-. concentration of the cofactors in the plasma to be examined is a tedious process.

Man hat auch zu Rechentafeln oder Kurvenfamilien Zu-You also have access to calculation tables or curve families

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fluht genommen, die im allgemeinen ein für alle Male unter experimentellen Bedingungen hergestellt sind, welche jedoch mit denjenigen des Benutzers nicht genau identisch sein können.; Sie liefern aus diesem Grund eine trügerische Sicherheit, weil sie nur ehen jedem Thromboplastin eigenen Parameter berücksichtigen. So können zwei Thromboplastine, die bei einem Vergleichsplasma mit 100 % Prothrombin zu einer gleichen Qulck-Zeit führen, bei dem gleichen, jedoch in beiden Fällen in dem gleichen Verhältnis verdünnten Vergleichsplasma zwei verschiedene Quick-Zeiten ergeben.flutes, which are generally manufactured once and for all under experimental conditions which, however, cannot be exactly identical to those of the user .; For this reason, they provide a deceptive security, because they only take into account parameters specific to each thromboplastin. Thus, two thromboplastins, which lead to the same Qulck time in a comparison plasma with 100% prothrombin, can produce two different Quick times in the same comparison plasma, but diluted in the same ratio in both cases.

Schließlich liefert die Methode der Messung der Quick-Zeit, die nach Anreicherung des Plasmas mit Calcium und einem 3n üblicher Weise, z.B. aus Säugetierhirn bereiteten Thromboplastin durchgeführt wird, eine Zahl, die nicht nur von dem Anteilverhältnis des Prothrombinkomplexes (Prothrombin und Kofak-toren), sondern auch von der möglichen und häufig unvorhersehbaren Anwesenheit eines im Überschuß vorliegenden Antithrombins (Herparln) abhängt, dessen Einfluß auf die Quick-Zeit umso größer sein kann, je höher seine Konzentration in dem Plasma ist. Der ungewisse Charakter von unter diesen Bedingungen durchgeführten Messungen kann von dem Wechsel (relais) der Heparinbehandlung durch die Antivitamine K, ferner von der in ehern ungeeigneten Augenblick vorgenommenen Blutentnahme von Kranken, die eine diskontinuierliche Behandlung mittels Heparins erfahren, sowie auch von einer verzögerten Ausschaltung des Heparins bei LeberkrankenFinally, the method of measuring the quick time, which after enrichment of the plasma with calcium and a 3n conventional way, e.g. prepared from mammalian brain Thromboplastin is performed, a number that not only depends on the proportion of the prothrombin complex (prothrombin and cofactors), but also of the possible and frequent unpredictable presence of an antithrombin (Herparln) present in excess depends on its influence the higher his concentration, the greater the quick time is in the plasma. The uncertain nature of measurements made under these conditions may depend on the Change (relay) of the heparin treatment by the antivitamins K, furthermore from the rather unsuitable moment Taking blood from sick people who are undergoing discontinuous treatment with heparins, as well as from a delayed elimination of heparin in liver patients

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herrühren. .originate. .

. . ί Durch das Verfahren gemäß der Erfindung zum raschen und. . ί By the method according to the invention for rapid and

sicheren Bestimmen des Prothrombinkomplexes und verwandter .'-reliable determination of the prothrombin complex and related .'-

Paktoren unter bequemen und vollkommen.reproduzierbaren Bedingungen werden die vorstehend geschilderten Nachteile behoben« ■Pactors under comfortable and perfectly reproducible conditions the disadvantages described above are eliminated " ■

Das Verfahren gemäß der Erfindung ist insbesondere dadurch gekennzeichnet, daß durch zwei Punkte die (im vorliegenden Fall eine Gerade darstellende) repräsentative Kurve der ttirombokinetischen Aktivität eines aus Tiergewebe stammenden Thromboplastins bestimmt wird, die durch die Neigung ,„. der Kurve ausgedrückt wird, welche durch Bezugnahme auf ein und dasselbe Vergleichsplasma,, und zwar ein menschliches Plasma, hergestellt ist, das aus Blut stammt, welches einer Person mit normaler Blutzusammensetzung entnommen und in irgendeinem üblichen Antikoagulierungsmedium gesammelt ist, wobei der erste der beiden Kurvenbestimmungspunkte als Abszisse die Konzentration von 100 fo und der zweite Punkt als Abszisse eine etwas geringere Konzentration hat, die beispielsweise einer Verdünnung des Vergleichsplasmas auf die Hälfte oder ein Drittel entspricht, wonach unter den gleichen Bedingungen die Quick-Zeit von irgendeinem anderen, nicht verdünnten Plasma gemessen wird, das aus einer Blutprobe stammt, die unter den gleichen Bedingungen und insbesondere .durch Aufnahme in einem Antikoagulierungsmedium identischer Zusammensetzung einer 'zu untersuchenden Person entnommen ist, dannThe method according to the invention is in particular characterized in that the representative curve (which in the present case represents a straight line) of the ttirombokinetic activity of a thromboplastin derived from animal tissue is determined by two points, which curve is determined by the slope, ". the curve prepared by referring to one and the same comparison plasma, namely a human plasma, derived from blood drawn from a person of normal blood composition and collected in any common anticoagulant medium, the first of the two curve determination points as the abscissa the concentration of 100 fo and the second point as the abscissa has a slightly lower concentration, which corresponds, for example, to a dilution of the comparison plasma to half or a third, after which the Quick time of any other, undiluted plasma is measured under the same conditions which originates from a blood sample which is taken under the same conditions and in particular .by being taken up in an anticoagulant medium of identical composition from a person to be examined, then

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BAD" ORIGINAL""ORIGINAL" BATHROOM

der Schnittpunkt der repräsentativen Kurve mit der Waagerechten, die als Ordinate die Quick-Zeit des zu prüfenden, nioht verdünnten Plasmas hat, bestimmt und die Konzentration des Prothrombinkomplexes in dem geprüften Plasma unmittelbar abgelesen wird, indem von dem genannten Schnittpunkt das Lot auf die Abszissenachse gefällt wird, -die vorher in Prozentstufen zwischen den beiden extremen Konzentrationen (z.B. 50 $> und 100 %) des Vergleichs plasmas geeicht worden ist, welches .zur Herstellung der repräsentativen Kurve der Aktivität des verwendeten Thromboplastins gdient hat.the intersection of the representative curve with the horizontal, which has as the ordinate the Quick time of the non-diluted plasma to be tested, is determined and the concentration of the prothrombin complex in the tested plasma is read off directly by dropping the perpendicular from the intersection mentioned onto the abscissa axis -which has previously been calibrated in percentage steps between the two extreme concentrations (for example 50 $> and 100 %) of the comparison plasma, which has gdient to produce the representative curve of the activity of the thromboplastin used.

Gemäß einem weiteren Merkmal der Erfindung, das auf die Erleichterung- der Ablesung und die Erhöhung der Genauigkeit der Messung gerichtet ist, wird von dem folgenden Kunstgriff Gebrauch gemacht. Da die Neigung der die Quick-Zeit wiedergebenden Kurve offensichtlich die gleiche bleibt, wenn sie um ISO gedreht wird, kann, indem außerdem der Abssissen- und Ordinatenmaßstab in einem gleichen, zwsken'GSpreehend gewählten Verhältnis geändert wird, der Umfang der graphischen Darstellung, der für die Bestimmung des Prothrombinanteilverhältnisses erforderlich ist, beträchtlich vermindert werden, indem sowohl für den Abszissenmaßstab als auch für den Ordinatenmaßstab zwei verschieden abgestufte und nacheinander verwendbare Teilungen gemäß der Pichtung und Größe der gemessenen Unterschiede zwischen der Quick-Zeit des 50 Joigen Vergleichsplasmas und derjenigen des geprüften Plasmas durch einfache Umkehrung der "Ablese-According to a further feature of the invention, that of making reading easier and increasing accuracy the measurement is directed, use is made of the following trick. As the inclination of the quick time reproducing curve obviously remains the same, if rotated by ISO, the Abssissen- and ordinate scale in the same, zwsken'GSpresenting the selected ratio is changed, the amount of graph used to determine the Prothrombin fraction ratio is required considerably be reduced by two differently graded for both the abscissa and the ordinate and successively usable divisions according to the direction and size of the measured differences between the Quick time of the 50 Joigen comparison plasma and that of the tested plasma by simply reversing the "reading

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ORIGINARY BATHROOM ,,

- β-- β-

lage vorgesehen werden=location to be provided =

Das aus tierischem Gewebe stammende Thromboplastin, das vorzugsweise zur Durchführung der Erfindung verwendet wird, ist das Produkt der plötzlichen Wiederhydratisierung eines Aeeton-Auszuges von Säugetierhirn., dem Calciumchlorid, ein Antiseptikum, wie Thymol., physiologisches SerumThe thromboplastin derived from animal tissue, which is preferably used for carrying out the invention is the product of the sudden rehydration of an aeeton extract from mammalian brain., the calcium chloride, an antiseptic such as thymol., physiological serum

und ein geeignetes Bindemittel zugesetzt sind und der auf einen pH-Wert zwischen etwa 1,3 und 8 eingestellt und nach einer Selektion, die eine Quick-Zeit zwischen etwa 11 und 13 Sekunden zu erreichen gestattet, durch Zusatz von 0,2 crrr dieses wiederhydratisierten Thromboplastins zu 0,1 cm normalen menschlichen Plasmas lyophilisiert ist. Auf diese Weise kann, indem eine geeignete Menge dieses ThrornBoplastins wiederhydratisiert wird, an dem gleichen Tag oder zumindest in dem Zeitraum einiger Stunden eine ganze Serie von Messungen durchgeführt werden, die auf die gleiche Quick-Zeitkurve bezogen sind, deren zwei Bestimraungspunkte ein für alle Male in der oben beschriebenen Weise erhalten worden sind.and a suitable binder are added and which is adjusted to a pH value between about 1.3 and 8 and, after a selection which allows a Quick time between about 11 and 13 seconds to be achieved, rehydrated by adding 0.2 cmr of this Thromboplastins is lyophilized to 0.1 cm normal human plasma. In this way, by rehydrating a suitable amount of this ThrornBoplastin, a whole series of measurements can be carried out on the same day or at least in the period of a few hours, which are related to the same Quick time curve, its two determination points once and for all have been obtained in the manner described above.

Gemäß einem weiteren Merkmal der Erfindung, das darauf gerichtet ist, bestimmte Ursachen für die oben genannten Fehler auszuschalten, die der möglichen Anwesenheit eines Antithrombins (z.B. von der Heparinart) zuzuschreiben sind, wird dem aus tierischem Gewebe stammenden Thromboplastin bei seiner Bereitung und vor seiner Lyophilisierung eine geringe Menge eines Stoffes zugesetzt, von dem bekannt ist, dai3 er die Eigenschaft-ijat, die Äntikoagulierungswirkung vonAccording to another feature of the invention that is thereon aimed to eliminate certain causes of the above errors, the possible presence of a Antithrombins (e.g. of the heparin type) are ascribed to thromboplastin derived from animal tissue during its preparation and before its lyophilization, a small amount of a substance is added which is known to be that it has the property, the anticoagulant effect of

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Heparin und analogen Substanzen zu hemmen»To inhibit heparin and analogous substances »

Das "Verfahren gemäß der Erfindung ist auch unter 'Verwendung an sich bekannter Arbeitsweisen mit Vorteil bei der Bestimmung der Anteilverhältnisse verschiedener Koagulierungsfaktcren anwendbar, wobei das grundsätzliche Prinzip immer darin besteht, die Koagulierungszeit eines Systems zu messen, das an Thromboplastin, an Calcium und an allen für die Koagulierung notwendigen Faktoren, außer demjenigen, den man zu dosieren wünscht, angereichert ist. Es kann daher insbesondere auch die rasche und sichere Bestimmung von Kofaktoren (oben auch mit verwandten Faktoren bezeichnet), wie des Accelerins, des wahren Prothrombins (Faktor II), äes Convertins (Faktor VII) und des Stuart-Faktors (Faktor X) oder der Gesamtheits Prothrombin (Faktor II) + Convertin (Faktor VII) + Stuart-Faktor (Faktor X) durchgeführt werden» Hierfür genügt es, das Verfahren gemäß der Erfindung mit der Verwendung selektiver Reagenzien, deren Herstellung bis auf einige Varianten bekannt ist und von denen sich bestimmte bereits im Handel befinden, zu kombinieren und noch mehr zu verdünnen (beispielsweise auf 1/10 und 1/20 für "das Vergleichsplasma und auf 1/1Q für das zu prüfende Plasma).The 'method according to the invention is also in use working methods known per se with advantage in the determination the proportions of various coagulation factors applicable, whereby the basic principle is always to measure the coagulation time of a system that thromboplastin, calcium and all for the Factors necessary for coagulation, other than that one wishes to dose is enriched. It can therefore in particular also the quick and reliable determination of cofactors (also referred to above with related factors), such as des Accelerins, the true prothrombin (factor II), aes convertins (Factor VII) and the Stuart factor (Factor X) or the Whole Prothrombin (Factor II) + Convertin (Factor VII) + Stuart factor (factor X) can be carried out »This is sufficient it, the method according to the invention with the use of selective reagents, their preparation up to a few Variants is known and of which certain are already on the market, to combine and to dilute even more (for example to 1/10 and 1/20 for "the comparison plasma and to 1 / 1Q for the plasma to be tested).

Im Rahmen der Erfindung kann insbesondere verwendet werdensIn the context of the invention, in particular, can be used

1. ein von Accelerin befreites Reagens, das reich an Prothrombin und Convertin ist,1. An accelerin-free reagent that is rich in Is prothrombin and convertin,

2. ein von Convertin befreites Reagens, das reich an2. A convertin-free reagent that is rich in

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Prothrombin und Acdelerin 1st,Prothrombin and Acdelerin 1st,

3' ein von Prothrombin befreites Reagens, 'das reich an Convertin und Accelerin ist, und 3 ' a prothrombin-depleted reagent' rich in convertin and accelerin, and

4. ein von Prothrombin und Convertin befreites Reagens, das reich an Acoelerin ist»4. a prothrombin and convertin-free reagent that is rich in acoelerin »

Die Gesamtheit der Ergebnisse für einen und denselben Kranken kann vorteilhaft in einer als analytisches Koagulogramm bezeichneten Tabelle gesammelt werden, in der auch andere Beobachtungen, die sich auf die Hfeiostase (Gefäßwiderstand, Blutungszeit, KoagulabilltMtsindex, Plattchenzählung usw.) beziehen, in zwei Spalten eingetragen sind, die zu beiden Seiten einer mittleren Spalte angeordnet SinU, welche den Blutmerkmalen einer in vollem physischen und physiologischen Gleichgewicht befindlichen Person entspricht, wobei beispielsweise die linke Spalte für Beobachtungen der Hypokoagulabilität und die rechte Spalte für Beobachtungen der Hyperkoagulabilität vorgesehen ist. Überdies kann die gleiche Tabelle bzw. das gleiche Koagulogramm an dem einen Rand eine Art Zusammenstellung aufweisen, die dem behandelnden Arzt gestattet, rasch über gemäß Jedem vorliegenden Fall durchzuführende Versuche zu entscheiden (Vorarbeitsbilanz, Diagnostik der BIutungssyndrome, Diagnostik der HyperkoagulabiIitäten, Vornahme und Überwachung der Antikoagulierungsbehandlungen, Diagnostik oder Pronostik bestimmter Leberaffektionen usw.).The totality of the results for one and the same Sick can be beneficial in an as an analytical coagulogram table, in which other observations relating to the hefeiostasis (vascular resistance, Bleeding time, coagula blood index, platelet count etc.) are entered in two columns, which are arranged on both sides of a middle column SinU, which denotes the Blood characteristics one in full physical and physiological Equilibrium corresponds to the person, for example the left column for observations of hypocoagulability and the right column is for observations of hypercoagulability. In addition, the same table or the same coagulogram at one edge a kind of compilation which allows the attending physician to quickly decide on the tests to be carried out in accordance with each case (preliminary work balance, diagnosis of bleeding syndromes, Diagnosis of hypercoagulability, implementation and monitoring of anticoagulant treatments, diagnostics or pronostics of certain liver affections, etc.).

Die Erfindung umfaßt ferner eine Vorrichtung zur Verwendung bei der Durchführung des oben beschriebenen VerfahrensThe invention also includes apparatus for use when performing the procedure described above

909805/0736 ·. ,κ ,ο909805/0736. , κ, ο

BAD ORIGINAL- ^Λ ~ γBAD ORIGINAL- ^ Λ ~ γ

und zur rationellen Ausnutzung der Ergebnisse, Diese Vorrichtung, von der eine bevorzugte Ausführungsform als Beispiel in der Zeichnung wiedergegeben ist, weist im wesentlichen die folgenden Elemente auf: and for the rational use of the results, this device, of which a preferred embodiment is shown as an example in the drawing, essentially has the following elements :

a) eine starre Platte 1 von allgemein rechteckiger Gestalt, die in unmittelbarer Nähe ihrer beiden großen Seiten zwei parallel zueinander verlaufende Skalen E₁ und Eo trägt, die jeweils in arithmetischer Progression und"im gleichen Sinn von zwei in gleicher Höhe liegenden Nullpunkten ausgehend eingeteilt sind und deren Teilungen mit Zahlen bezeichnet sind, die Sekunden bedeuten und derart angeordnet sind, daß, wenn die Platte senkrecht gehalten wird, die in dieser Lage lesbaren Zahlen immer diejenigen der rechten Skal'a sind, wobei an dem Nullpunkt der stärker unterteilten Skala Ep ein Loch vorgesehen ist, das gerade groß genug ist, um einen Durchgang für eine elastische Schnur 2 zu schaffen, die an der Rückseite der Platte 1 befestigt ist und die nach Belieben in die eine oder die andere vbn mehreren Kerben 2 eingelegt werfen kann, die längs der Innenkante eines neben der weniger unterteilten Skala E.. vorgesehenen schmalen Spaltes h in dgr Teilung dieser äkala entsprechenden regelmäßigen Abständen ausgebildet sind; a) a rigid plate 1 of generally rectangular shape, which has two parallel scales E ₁ and Eo in the immediate vicinity of its two large sides, each of which is divided into arithmetic progression and "in the same sense starting from two zero points at the same height and the divisions of which are denoted by numbers which mean seconds and are arranged in such a way that, if the plate is held vertically, the numbers readable in this position are always those of the right scale, with Ep at the zero point of the more strongly divided scale Hole is provided that is just big enough to create a passage for an elastic cord 2, which is attached to the back of the plate 1 and which can be inserted at will in one or the other of several notches 2, the lengthways the inner edge of a narrow gap h provided next to the less subdivided scale E .. in the division of this e-scale corresponding regularly are formed at regular intervals;

b) einen Schieber 5, an dessen beiden Enden Führungsstücke 6 bzw. 7 vorgesehen sind, die lang genug sind, um zu gewährleisten, daß der Schieber über die ganze Länge der Platte 1 in stets rechtwinkliger Lage zu den beiden Skalenb) a slide 5, at both ends of which guide pieces 6 and 7 are provided, which are long enough to ensure that the slide over the entire length of the Plate 1 always at right angles to the two scales

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E₁ und E₂ mit geringer Reibung bewegbar 1st und dabei ohne merkliche Reibung über die elastische Schnur 2 gleiten kann, die unter leichter Spannung in einer der Kerben 3 gehalten wirdj um durch ihre Neigung oder ihren Winkelkoeffizienten (die bzw. der unabhängig von der für die Ablesung verwendeten Lage der Vorrichtung unveränderlich ist) die repräsentative Kurve der thrombokinetischen Aktivität des für eine und dieselbe Reihe von Messungen benutzten Thromboplastins darzustellen, wobei der Schieber 5 an seinen beiden Rändern zwei sich über seine ganze Nutzlänge erstreckende Skalen trägt, deren Teilungen in unterschiedlicher Weise (beispielsweise in verschiedenen Farben oder in verschiedenen Schriftformen) ausgeführt sind, um die Übereinstimmung mit der jeweils zu benutzenden arithmetischen Skala kenntlich zu machen, und jeweils eine ziemlich große Anzahl von Teilungswerten für eine richtige und ausreichend genaue Bestimmung des Prothrombinanteilverhältnisses aufweisen, wobei diese Teilungen des Schiebers gemäß der die Quick-Zeit wiedergebenden Kurve für eine Auswahl von zweckentsprechend verteilten Konzentrationen und in genügend dichter Weise hergestellt sind.E ₁ and E _{2 can be moved} with little friction and can slide without noticeable friction over the elastic cord 2, which is held under slight tension in one of the notches 3 by its inclination or its angular coefficient (which is independent of the for the reading used position of the device is invariable) to show the representative curve of the thrombokinetic activity of the thromboplastin used for one and the same series of measurements, the slide 5 on its two edges having two scales extending over its entire useful length, the divisions of which in different ways (for example in different colors or in different written forms) are carried out in order to make the correspondence with the respective arithmetic scale to be used recognizable, and each have a fairly large number of division values for a correct and sufficiently accurate determination of the prothrombin content ratio, these Te settings of the slide are produced in accordance with the curve reproducing the Quick time for a selection of appropriately distributed concentrations and in a sufficiently dense manner.

Bei der als Beispiel beschriebenen bevorzugten .Ausführungsform der Vorrichtung gemäß der Erfindung, die den in der Zeichnung wiedergegebenen Abmessungen entspricht, bestimmen die beiden parallel zu den großen Seiten der Platte· 1 angeordneten arithmetischen Skalen E-, und Eg ein Q₁Ua-In the preferred embodiment of the device according to the invention described as an example, which corresponds to the dimensions shown in the drawing, the two arithmetic scales E- and Eg, arranged parallel to the large sides of the plate, determine a Q ₁ Ua-

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U98986U98986

drat von ungefähr 20 cm Seitenlänge, wobei die weniger unterteilte Skala E^ mit den um je 1/2 Sekunde voneinander entfernt liegenden Kerben 3 einen maximalen Bereich von 5 Sekunden zwischen einer nicht verdünnten Vergleichsprobe (100 ^) und einer zur Hälfte verdünnten Vergleichspröbe (50■%) darstellt und die stärker unterteilte Skala E₂ mit den um je 1 Sekunde voneinander entfernt liegenden Teilstrichen einen Bereich von höchstens 4o Sekunden zwischen der Zeit des Kranken und derjenigen (der kürzeren) der 50 ^igen Vergleichsprobe darstellt, während die beiden Skalen des Schiebers 5 globalen Konzentrationen (prozentuale globale prothrombinisehe Aktivität oder Prothrombihanteil) einerseits von 50 bis 100 $ und andererseits von 10 bis 50 % entsprechen, weil Konzentrationen unter 10 % nur sehr selten angetroffen werden und daher von keinem praktischen Interesse sind.drat about 20 cm on a side, with the less subdivided scale E ^ with the notches 3, each 1/2 second apart, a maximum range of 5 seconds between an undiluted comparative sample (100 ^) and a half-diluted comparative sample (50 ■%) and the more subdivided scale E _2, with the graduation marks 1 second apart, represents a range of no more than 40 seconds between the time of the patient and that (the shorter) of the 50% comparison sample, while the two scales of the Schieber's 5 global concentrations (percentage of global prothrombinant activity or prothrombin content) correspond on the one hand to 50 to 100 $ and on the other hand from 10 to 50 % , because concentrations below 10 % are found only very rarely and are therefore of no practical interest.

Die Erfindung wird nachstehend in Verbindung der Zeichnung an zwei konkreten, Beispielen der Anwendung der neuen Vorrichtung bei der Durchführung des Verfahrens gemäß der Erfindung näher erläutert, .The invention is described below in conjunction with the drawing on two concrete examples of the application of the new device when carrying out the method according to FIG Invention explained in more detail.

Es sei angenommen, daß ein reines Vergleichsplasma (100 ^aiges Plasma) verwendet wird, das mit einem Thromboplastin gemäß der Erfindung eine ^uick-Zeit von 13 Sekunden und mit dem gleichen, aber zur Hälfte vorzugsweise mittels eines Losungspuffers vom pH-Wert 7,35.oder anstelle dieses Puffers mittels physiologischem Serum verdünnten Thromboplastin (50 $iges Plasma) eine Qulck-Zeit von 1.7 Se-It is assumed that a pure comparison plasma (100 ^ aiges plasma) is used, which with a thromboplastin according to the invention a ^ uick time of 13 seconds and with the same, but preferably halfway by means of a solution buffer of pH 7.35. or instead Dilute this buffer with physiological serum Thromboplastin (50 $ plasma) had a Qulck time of 1.7 seconds

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künden ergibt. Da die beobachtete Differenz 17 - 13 = 4 Sekunden betrögt, wird die elastische Schnur in diejenige Kerbe der Skala E-j eingelegt, die der Zahl 4 gegenüberliegt. Die gerade Linie, die auf diese Weise von der auf Grund ihrer Elastizität gespannten Schnur dargestellt wird, ist für die benutzte Thromboplastinprobe charakteristisch und kann für alle Bestimmungen verwendet werden, die an dem gleichen Tage vor der Erschöpfung der wiederhydratisierten Thrbmboplastinmenge durchgeführt werden.announce results. Since the observed difference is 17-13 = 4 seconds the elastic cord is inserted into the notch on the E-j scale that is opposite the number 4. The straight line represented in this way by the cord stretched due to its elasticity is for the used thromboplastin sample is characteristic and can used for all determinations made on the same day prior to depletion of rehydrated thromboplastin be performed.

Es sei nun angenommen, daß das nicht verdünnte Plasma eines ersten Kranken eine Quick-Zelt von 14 Sekunden ejglbt, d.h. einen Wert, der um 17 - 14 = 5 Sekunden kleiner als die Quick-Zeit der 50 % igen Vergleichspro.be ist.It is now assumed that the undiluted plasma of a first patient has a Quick time of 14 seconds, ie a value which is 17-14 = 5 seconds less than the Quick time of the 50 % comparison sample.

Wenn die Platte 1 so gehalten wird, daß der mit den Kerben 3 versehene Spalt 4 rechts liegt, dann wird der Schieber 5 verschoben, bis sein oberer Rand in Ausrichtung mit dem j5 SekrTel1strieh der rechten Skala E^ liegt, und es braucht dann nur die an dem Schnittpunkt des oberen Schieberrandes mit der elastischen Schnur erscheinende Angabe abgelesen zu werden, um f estzustellen, daß der Prothrombingehalt- des untersuchten Plasmas 80 % beträgt. If the plate 1 is held in such a way that the gap 4 provided with the notches 3 is on the right, then the slide 5 is moved until its upper edge is in alignment with the j5 SekrTel1strieh the right scale E ^, and it then only needs the the information appearing at the point of intersection of the upper edge of the slide with the elastic cord can be read in order to establish that the prothrombin content of the plasma examined is 80 % .

In einem anderen Fall (Hypokoagulabilität) kann man einen Kranken annehmen, dessen nicht verdünntes Plasma beispielsweise eine Quick-Zeit von 29 Sekunden ergibt, d.h. einen Wert, der um 29 - I7 = 12 Sekunden größer als die Quick-Zeit der 50 folgen Vergleichs probe ist.In another case (hypocoagulability) one can assume a patient whose undiluted plasma gives, for example, a Quick time of 29 seconds, ie a value that is 29-17 = 12 seconds greater than the Quick time of the 50 following comparison sample is.

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Nach Umdrehen der Platte um I8ö° (der mit den Kerben 3 versehene Spalt ^.liegt dann links) wird der (tatsächlich) obere Rand des Schiebers 5 in Ausrichtung mit dem 12 Sek.--. Teilstrich der Skala E_g verschoben. Der Schnittpunkt dieses Schieberrandes mit der elastischen Schnur liegt dann bei der \ Zahl 20 der zugehörigen Schieberskala, und man kann daher \ sofort feststellen, daß der Prothrombingehalt des untersuchten Plasmas etwa 20 % beträgt.After turning the plate by 180 ° (the gap provided with the notches 3 is then on the left) the (actually) upper edge of the slide 5 is aligned with the 12 sec. Graduation of scale E _g shifted. The intersection of this slide edge with the elastic cord is then up to the \ number 20 of the associated slide scale, and one can therefore \ immediately determine that the prothrombin content of the examined plasma is about 20%.

Es sei bemerkt, daß die Erfindung weder auf die beschrie-· bene und in der Zeichnung dargestellte Ausführungsform, was die globale Dosierung des Prothrombinkomplexes betrifft, : noch auf die verschiebenen oben summarisch angedeuteten Varianten und Anwendungen beschränkt ist, welche die Bestimmung verschiedener Kofaktoren gemäß einer analogen-Arbeitsweise ermöglichen, wobei.selektive .Reagenzien eingesetzt werden, die an sich in der Technik bekannt sind.It should be noted that the invention is not limited to the embodiment described and shown in the drawing the global dosage of the prothrombin complex concerns: is still limited to the shifted variants and applications summarized above, which the determination different cofactors according to an analog working method enable, wherein.selective .Reagenzien are used, which are known per se in the art.

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Claims

1. A method for the rapid and reliable determination of the prothrombin complex and related factors under convenient and fully reproducible conditions based on the simple measurement of Quick time, characterized in that the representative curve of the (in the present case a straight line) is represented by two points thrombokinetic activity of a thromboplastin derived from animal tissue is determined, which is expressed by the inclination of the curve which is prepared by referring to one and the same comparison plasma, namely a human plasma, derived from blood obtained from a healthy person (with normal Blood composition) and collected in any conventional anti-coagulation medium, the first of the two curve determination points as the abscissa the concentration of 100 % and the second point as the abscissa a slightly lower concentration, for example a dilution of the comparison plasma by half or one third corresponds to, according to which, under the same conditions, the Quick time of any other, undiluted plasma is measured, which comes from a blood sample taken under the same conditions and in particular by being taken up in an anticoagulant medium of identical composition from a person to be examined , then the intersection of the

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representative curve with the horizontal, which has the Quick time of the non-diluted plasma to be tested as the ordinate, and the concentration of the prothrombin complex in the tested plasma is read off directly by the; Lot is dropped on the abscissa axis that has previously been calibrated in percentage steps between the two extreme concentrations (eg 50% and 100 $) of the comparison plasma, which was used to produce the representative curve, the activity of the thromboplastin used.

2. The method according to claim 1, characterized in that to facilitate the reading and to increase the measurement accuracy of the abscissa and the ordinate are changed in the same ratio, wdbei a concentration (for example 50 %) is assumed at which the Quick time of the diluted comparison plasma at the stated concentration is less than that of the plasma tested, β ..; ■ -

3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that that as an animal tissue thromboplasty the product of sudden rehydration of an extract of aoetone from mammalian brain, which contains calcium chloride, an antiseptic, such as thymol, physiological serum and a suitable one Binders are added and the pH is adjusted between about 7.3 and 8 and after a selection, the a quick tent between about 11 and 13 seconds

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allowed to achieve by Zußftfca of 0.2 enp with hydrated thromboplastins to 0.1 onr formal MenBchliohen Plasmas lyophilBiert let,

4. The method according to any one of claims 1 to J5, daduroh marked that to eliminate the causes of errors, the possible presence of ef.nee antithrombine (e.g. B. of the heparin) are attributable to an animal Tissue-derived thromboplastin is used * dem has added a small amount of a substance known to have the anticoagulant effects of heparin and other analogous substances.

5. The method according to any one of claims 1 to 4, characterized characterized that 2ur rapid and reliable determination of the various proportions of the coagulation factors the coagulation time according to a general principle known per se a system is measured, the thromboplastin, calcium and all necessary for coagulation Factors other than that to dose the inon wishes enriched 1st.

6. Device for rapid and sufficiently accurate evaluation by applying the method according to the claims 1 to 5 results obtained, characterized in that that it has the following elements:

a) a rigid plate (1) of generally rectangular shape, which in the immediate vicinity of its two large rides two parallel scales (E ₁ and E ₀ )

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each in arithmetic progression and in the same 31ηη are divided from two zero points at the same height and whose divisions are denoted by numbers that mean seconds and are arranged in such a way that when the plate is held vertically, the in this position legible numbers are always those on the right-hand scale, with _{a hole at the zero point of the more subdivided scale (E 2} ) that is just big enough to create a passage for an elastic cord (2) attached to the back of the Plate (1) is attached and which can be inserted into one or the other of several notches as desired, which along the inner edge of a narrow gap (4) in the division of this scale corresponding to the division of this scale is provided next to the less subdivided scale (E-) Intervals are formed;

b) a slide (5), at both ends of which guide sockets (6 and 7) are provided, di ^ are long enough to ensure that the slide over the entire length of the plate (I) is always at right angles to the two scales (e ₁ and e ₀₎ with low friction be moved and thereby without significant friction on the elastic cord (2) to slide lc-.min, which is held under slight tension in one of the notches ( 'j>) in order to its inclination or its angle coefficient (which is invariable regardless of the position of the device used for the student) .-]; a reot'unentative curve of thrombocytic activity

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of the thromboplastin used for one and the same series of measurements, the slide (5) on its two edges having two scales extending over its entire useful length, the divisions of which are carried out in different ways (for example in different colors or in different forms of writing) to indicate the correspondence with the respective arithmetic scale to be used, and each have a fairly large number of division values for a correct and sufficiently accurate determination of the prothrombin fraction ratio, these divisions of the slide according to the curve showing the squeak time for a selection of appropriately distributed concentrations and are made in a sufficiently dense manner.

y. Device according to claim u, characterized in that the two arithmetic scales (E., ur.d .Ep) arranged parallel to the large values of the middle (1) determine a square of approximately 20 on the side that the / one- iger subdivided scale (: ... ) At den Mn: For each 1/2 Sekui.de distant notches (3) a rraxiniflen range of 5 seconds between an undiluted comparative sample (100%) and a ζην half diluted comparative sample ( 50 /) and the more strongly divided scale (Ep) with the graduation marks, each 1 second apart, represents a range of at most ^ 0 seconds between the time of the patient and that (the shorter)

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the 50 #igen comparative sample , while the two scales of the slide (5) correspond to global concentrations (percentage global prothrombinic activity or prothrombin content) on the one hand from 50 to 100 % and on the other hand from up to 50 %.

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