DE1276583B - Process for the preparation of 5'-inosic acid - Google Patents
Process for the preparation of 5'-inosic acidInfo
- Publication number
- DE1276583B DE1276583B DEK58208A DEK0058208A DE1276583B DE 1276583 B DE1276583 B DE 1276583B DE K58208 A DEK58208 A DE K58208A DE K0058208 A DEK0058208 A DE K0058208A DE 1276583 B DE1276583 B DE 1276583B
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- atcc
- acid
- fermentation
- inosinic acid
- urea
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
- C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLANDFEDERAL REPUBLIC OF GERMANY
DEUTSCHESGERMAN
PATENTAMTPATENT OFFICE
Int. α.:Int. α .:
Deutsche KL:German KL:
Nummer:
Aktenzeichen:
Anmeldetag:
Auslegetag:Number:
File number:
Registration date:
Display day:
C12dC12d
C07dC07d
6b-16/036b-16/03
12 ρ-7/1012 ρ-7/10
P 12 76 583.2-41 (K 58208)P 12 76 583.2-41 (K 58208)
21. Januar 1966January 21, 1966
5. September 19685th September 1968
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 5'-Inosinsäure.The present invention relates to a process for the preparation of 5'-inosinic acid.
5'-Inosinsäure, die chemisch als Hypoxanthinribosid-5-phosphorsäure bezeichnet wird, ist eine bekannte Verbindung. Bisher wurde 5'-Inosinsäure aus Fleischextrakt, aus Muskeln durch enzymatische Desaminierung der Muskeladenylsäure und durch Hydrolyse von Inosintriphosphat hergestellt. Die Verbindung ist in Wasser und Ameisensäure einigermaßen löslich, in Alkohol und Äther jedoch nur wenig löslich. Beim Kochen mit einer Säure hydrolysiert die 5'-Inosinsäure zu 1 Mol Phosphorsäure, 1 Mol Hypoxanthin und 1 Mol D-Ribose.5'-inosinic acid, chemically called hypoxanthine riboside-5-phosphoric acid is a well-known compound. So far was 5'-inosinic acid from meat extract, from muscles through enzymatic deamination of muscle adenylic acid and through Hydrolysis of inosine triphosphate produced. The compound is somewhat in water and formic acid soluble, but only slightly soluble in alcohol and ether. Hydrolyzed with an acid when boiled 5'-inosinic acid to 1 mole of phosphoric acid, 1 mole of hypoxanthine and 1 mole of D-ribose.
Aus der USA.-Patentschrift 3 152 966 ist es bereits bekannt, in einem Biotin enthaltenden Nährmedium Mutanten von Micrococifcus glutamicus und Brevibacterium ammoniagenes zur Herstellung von 5'-Inosinsäure zu züchten.It is already known from US Pat. No. 3,152,966, in a nutrient medium containing biotin Mutants of Micrococifcus glutamicus and Brevibacterium ammoniagenes for the production of 5'-inosinic acid to breed.
Die vorliegende Erfindung hat sich die Aufgabe gestellt, 5'-Inosinsäure in hoher Reinheit und mit erhöhter Ausbeute in industriellem Maßstabe herzustellen. The present invention has the task of producing 5'-inosinic acid in high purity and with produce increased yield on an industrial scale.
Ausgehend vom Stand der Technik zur Herstellung von 5'-Inosinsäure durch Züchten eines Biotin benötigenden Mutanten von Brevibacterium ammoniagenes oder Micrococcus glutamicus im üblichen wäßrigen Nährmedium und unter den hierfür üblichen Bedingungen wird diese Aufgabe erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß man Brevibacterium ammoniagenes ATCC 19 183, ATCC 19 184, Micrococcus glutamicus ATCC 19 185 oder ATCC 19 186 einsetzt.Based on the prior art for the production of 5'-inosinic acid by growing a Biotin-requiring mutants of Brevibacterium ammoniagenes or Micrococcus glutamicus im According to the invention, this object is achieved in the customary aqueous nutrient medium and under the conditions customary for this purpose solved by Brevibacterium ammoniagenes ATCC 19 183, ATCC 19 184, Micrococcus glutamicus ATCC 19 185 or ATCC 19 186 begins.
Die vorstehend aufgeführten Microorganismen, die gemäß der Erfindung angewandt werden, sind Mutantenstämme, die durch wiederholte Behandlung von Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6871 und Micrococcus glutamicus ATCC 13 032 mit Strahlen (UV-Strahlen, Röntgenstrahlen) oder chemischen Mitteln (Diäthylsulfat) erhalten wurden.The microorganisms listed above which are used according to the invention are Mutant strains caused by repeated treatment of Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6871 and Micrococcus glutamicus ATCC 13 032 with rays (UV rays, X-rays) or chemical Agents (diethyl sulfate) were obtained.
Verfahren zur Herstellung von 5'-InosinsäureProcess for the preparation of 5'-inosinic acid
Anmelder:Applicant:
Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., TokioKyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., Tokyo
Vertreter:Representative:
Dr.-Ing.H.RuschkeDr.-Ing.H. Ruschke
und Dipl.-Ing. H. Agular, Patentanwälte,and Dipl.-Ing. H. Agular, patent attorneys,
8000 München 27, Pienzenauer Str. 28000 Munich 27, Pienzenauer Str. 2
Als Erfinder benannt:Named as inventor:
Shigeo Abe, Asagaya, Suginami-ku; Tokio;Shigeo Abe, Asagaya, Suginami-ku; Tokyo;
Akira Furuya, Machida-shi (Japan)Akira Furuya, Machida-shi (Japan)
Beanspruchte Priorität:
Japan vom 23, Januar 1965 (3376),
vom ^Januar 1965 (3798)Claimed priority:
Japan January 23, 1965 (3376),
dated ^ January 1965 (3798)
Die als Ursprungsstämme verwendeten Organismen Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6871 und Micrococcus glutamicus ATCC 13 032 wachsen in dem in der Fußnote 1 der Tabelle beschriebenen Minimalnährmedium gut. Auch die gemäß der vorliegenden Erfindung verwendeten Mutantenstämme wachsen in diesem Minimalnährmedium. Jedoch wird das Wachstum der Mutantenstämme durch Verwendung eines Nährmediums signifikant beschleunigt, welches durch Zugabe von Aminosäuren, die in Fußnote 2 der Tabelle I aufgeführt sind, oder eines Nucleinsäurebestandteils, entweder einzeln oder als Gemisch von zwei oder mehreren dieser Bestandteile, zu dem angeführten Minimalnährmedium hergestellt wurde. Der Einfluß dieser Substanzen auf das Wachstum der erfindungsgemäßen Mutantenstämme ist in der nachfolgenden Tabelle gezeigt.The organisms used as the original strains Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6871 and Micrococcus glutamicus ATCC 13 032 grow in the area described in footnote 1 of the table Minimal nutrient medium good. Also the mutant strains used according to the present invention grow in this minimal nutrient medium. However, the mutant strains will grow through Significantly accelerates the use of a nutrient medium, which by adding amino acids, listed in footnote 2 of Table I, or a nucleic acid component, either individually or as a mixture of two or more of these components, prepared for the specified minimal nutrient medium became. The influence of these substances on the growth of the mutant strains according to the invention is shown in the table below.
ammoniagenes
Ursprungsstamm
ATCC 6871Brevibacterium
ammoniagenes
Stem of origin
ATCC 6871
stamm
ATCC 19184Mutants
tribe
ATCC 19184
glutamicus
Ursprungsstamm
ATCC 13032Micrococcus
glutamicus
Stem of origin
ATCC 13032
stamm
ATCC 19185Mutants
tribe
ATCC 19185
stamm
ATCC 19186Mutants
tribe
ATCC 19186
8.3
6.46.2
8.3
6.4
stamm
ATCC 19183Mutant »
tribe
ATCC 19183
5,1
5,42.8
5.1
5.4
8,2
6,36.3
8.2
6.3
4,8
5,22.4
4.8
5.2
5,2
5,62.9
5.2
5.6
Minimalkulturmedium
+ Aminosäuren2)
Minimalkulturmedium
+ Adenin. 20 mg 1 Minimal culture medium 1 )
Minimal culture medium
+ Amino acids 2 )
Minimal culture medium
+ Adenine. 20 mg 1
4,7
5,12.3
4.7
5.1
809 599/171809 599/171
Fortsetzungcontinuation
BrevibacteriumBrevibacterium
ammoniagenesammoniagenes
UrsprungsstammStem of origin
ATCC 6871ATCC 6871
Mutantenstamm ATCC 19183ATCC 19183 mutant strain
Mutantenstamm
ATCC 19184Mutant strain
ATCC 19184
MicrococcusMicrococcus
glutamicusglutamicus
UrsprungsstammStem of origin
ATCC 13032ATCC 13032
Mutantenstamm ATCC 19185ATCC 19185 mutant strain
Mutantenstamm ATCC 19186ATCC 19186 mutant strain
MinimalkulturmediumMinimal culture medium
+ Guanin, 20 mg/1 + Guanine, 20 mg / 1
MinimalkulturmediumMinimal culture medium
+ Adenin und Guanin, jeweils
20 mg/1 + Adenine and guanine, respectively
20 mg / 1
Minimalkulturmedium
+ Adenin, 20 mg/1,
+ Aminosäuren2) Minimal culture medium
+ Adenine, 20 mg / 1,
+ Amino acids 2 )
Minimalkulturmedium
+ Guanin, 20 mg/1,
+ Aminosäuren2) Minimal culture medium
+ Guanine, 20 mg / 1,
+ Amino acids 2 )
MinimalkulturmediumMinimal culture medium
-F- Adenin und Guanin, jeweils-F- adenine and guanine, respectively
20 mg/1,20 mg / 1,
+ Aminosäuren2) + Amino acids 2 )
6,5
6,7
9,0
9,26.5
6.7
9.0
9.2
9,49.4
5,2
6,3
8,1
7,25.2
6.3
8.1
7.2
8,58.5
6,6
6,8
9,0
9,36.6
6.8
9.0
9.3
9,69.6
4,5 6,4 7,94.5 6.4 7.9
7,47.4
8,68.6
5,4 6,4 8,2 7,65.4 6.4 8.2 7.6
8,78.7
1J Das Miniinalnährmedium hatte die folgende Zusammensetzung (je Liter entionisiertem Wasser): 1 J The miniinal nutrient medium had the following composition (per liter of deionized water):
Glucose ; 50 gGlucose; 50 g
KH2PO4 . 1,0gKH 2 PO 4 . 1.0g
K2HPO4 3,0gK 2 HPO 4 3.0g
MgSO4 ■ 7 H2O 0,3 gMgSO 4 · 7 H 2 O 0.3 g
FeSO4-7H2O 10mgFeSO 4 -7H 2 O 10mg
CaCI2 ■ 2 H2O 10 mgCaCl 2 · 2 H 2 O 10 mg
MnCl2-4H2O , 3μξ MnCl 2 -4H 2 O, 3μξ
Calciumpantothenat 10 mgCalcium pantothenate 10 mg
Biotin 30 μgBiotin 30 µg
Harnstoff 5 gUrea 5 g
Der pH-Wert der Lösung wurde vor der Sterilisierung auf 7,2 eingestellt. Der Harnstoff wurde getrennt von den anderen Bestandteilen sterilisiert und anschließend zugesetzt.The pH of the solution was adjusted to 7.2 before sterilization. The urea was sterilized separately from the other ingredients and then added.
2) Zu den verwendbaren Aminosäuren gehören die folgenden: L-Alanin, L-Arginin, L-Asparaginsäure, L-Cystein, L-Cystin, L-Giutaminsäure, L-Glycin, L-Histidin, L-Isoleucin, L-Leucin, L-Lysin, L-Methionin, L-Phenylalanin, L-Prolin, L-Serin, L-Threonin, L-Tyrosin, L-Tryptophan und L-Valin. Diese Aminosäuren wurden zu dem Nährmedium in einer Menge von 20 mg/1 zugegeben. 2 ) The amino acids that can be used include the following: L-alanine, L-arginine, L-aspartic acid, L-cysteine, L-cystine, L-giutamic acid, L-glycine, L-histidine, L-isoleucine, L-leucine, L-lysine, L-methionine, L-phenylalanine, L-proline, L-serine, L-threonine, L-tyrosine, L-tryptophan and L-valine. These amino acids were added to the nutrient medium in an amount of 20 mg / l.
3) Die Züchtung jedes Stammes wurde auf folgende Weise aus-' geführt: 20 ml des Nährmediums wurden in konischen Kolben von 25OmI Inhalt unter Druck bei einer Temperatur von 1200C während 15 Minuten sterilisiert. Dann wurde die Harnstofflösung, die getrennt sterilisiert worden war, zugegeben. Zu dem auf diese Weise hergestellten Nährmedium wurden 0,2 ml der Zellsuspension, die durch Waschen von den jeweils vorgezüchteten Stämmen bis zur Sporenfreiheit erhalten worden waren, zu jedem Kolben zugegeben. Das Schütteln der Kultur wurde dann bei 300C während 94 Stunden ausgeführt. Nach dieser Zeit wurde die Menge der erhaltenen Zellkörper bestimmt 3) The growth of each strain was off in the following manner 'out: sterilized conical flask of 25OmI content under pressure at a temperature of 120 0 C during 15 minutes 20 ml of the nutrient medium. Then the urea solution which had been sterilized separately was added. To the nutrient medium prepared in this way, 0.2 ml of the cell suspension, which had been obtained by washing the respective pre-cultured strains to be free of spores, was added to each flask. The culture was then shaken at 30 ° C. for 94 hours. After this time, the amount of cell bodies obtained was determined
Die S'-Inosinsäure wird beim Züchten des Ursprungsstammes in dem beschriebenen Minimalnährmedium1) nicht erhalten. Jedoch wird 5'-Inosinsäure bei Verwendung der erfindungsgemäßen Mutantenstämme,, erhalten. Darüber hinaus wird diese Produktion von S'-Inosmsäure weiterhin durch Zugabe von Aminosäuren, Adenin oder Guanin gesteigert, und eine weitere Steigerung tritt ein, wenn diese Verbindungen in Kombination von zwei oder mehr Stoffen zugegeben werden.The S'-inosinic acid is not obtained when the original strain is grown in the described minimal nutrient medium 1). However, 5'-inosinic acid is obtained using the mutant strains of the invention. In addition, this production of S'-inosmic acid is further increased by adding amino acids, adenine or guanine, and a further increase occurs when these compounds are added in combination of two or more substances.
Die bekannten synthetischen Nährmedien oder natürlichen Nährmedien sind bei dem Verfahren der vorliegenden Erfindung geeignet, wenn sie die wesentlichen Nährstoffe für das Wachstum des angewandten Stammes enthalten. Derartige Nährstoffe sind auf dem Fachgebiet bekannt. Hierzu gehören geeignete Mengen von Substanzen, wie eine Kohlenstoffquelle, eine Stickstoffquelle, anorganische Verbindungen und dergleichen, die von dem angewandten Mikroorganismus verwendet werden. So können als Kohlenstoffquelle z.B. Kohlenhydrate,, wie Glucose, Fructose,. Maltose, Rohrzucker, Stärke, Stärkehydrolysate, Melassen und dergleichen, oder irgendwelche anderen geeigneten Kohlenstoffquellen, wie Glycerin, Mannit, Sorbit, organische Säuren, Glutaminsäure und dergleichen, eingesetzt werden.The known synthetic nutrient media or natural nutrient media are in the method of present invention suitable if they have the essential nutrients for the growth of the applied Tribal included. Such nutrients are known in the art. These include appropriate amounts of substances such as a carbon source, a nitrogen source, inorganic compounds and the like used by the applied microorganism. For example, carbohydrates, such as glucose, fructose ,. Maltose, cane sugar, starch, starch hydrolysates, molasses and the like, or any other suitable carbon sources, such as glycerin, mannitol, sorbitol, organic acids, Glutamic acid and the like can be used.
Diese Substanzen können entweder allein oder in Mischungen von zwei oder mehr Verbindungen angewandt werden. Als Stickstoffquelle können verschiedene Arten von anorganischen oder organischen5 Salzen oder Verbindungen, wie Harnstoff oder Ammoniumsalze, wie Ammonchlorid, Ammonsulfat, Ammonnitrat, Ammonphosphat und dergleichen, oder eine oder mehrere Aminosäuren, auch in Kombination, oder natürliche Substanzen, die Stickstoff enthalten, wie Maisquellwasser, Hefeextrakt, Fleischextrakt, Pepton, Fischmehl, Caseinhydrolysate, lösliche Fischstoffe, Reisschalenextrakt, Ribonucleinsäure und dergleichen, angewandt werden. Auch diese Substanzen können einzeln oder in Kombination von zwei oder mehr Stoffen verwendet werden. Zu den anorganischen Verbindungen, welche zu dem Nährmedium zugegeben werden können, gehören z. B. Magnesiumsulfat, Natriumphosphat, Kaliumdihydrogenphosphat, Kaliummonohydrogenphosphat, Eisensulfat oder andere Eisensalze, Manganchlorid, Calciumchlorid und dergleichen. Die hier zur Herstellung von 5'-Inosinsäure angewandte Fermentierung wird unter aeroben Be* dingungen ausgeführt, beispielsweise aerobes Schütteln der Kultur oder Rühren einer Submerskultur, bei einer Temperatur von etwa 20 bis 400C undThese substances can be used either alone or in mixtures of two or more compounds. As the nitrogen source, various kinds of inorganic or organic 5 salts or compounds, such as urea or ammonium salts such as ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium nitrate, ammonium phosphate and the like, or one or more amino acids, in combination, or natural substances containing nitrogen such as corn steep liquor , Yeast extract, meat extract, peptone, fish meal, casein hydrolyzate, soluble fish matter, rice husk extract, ribonucleic acid and the like can be used. These substances can also be used individually or in combination of two or more substances. The inorganic compounds which can be added to the nutrient medium include e.g. B. magnesium sulfate, sodium phosphate, potassium dihydrogen phosphate, potassium monohydrogen phosphate, iron sulfate or other iron salts, manganese chloride, calcium chloride and the like. The here applied for the production of 5'-inosinic acid fermentation is performed under aerobic conditions Be *, for example, aerobic shaking culture or agitation submerged culture, at a temperature of about 20 to 40 0 C and
einem pH-Wert von etwa 4 bis 9. Die Einstellung des pH-Wertes des Kulturmediums während der Fermentierung kann durch Verwendung von Neutralisationsmitteln, wie wäßrigem Ammoniak, Natriumhydroxyd und dergleichen, oder Harnstoff bewirkt werden. Nach 2 bis 8 Tagen Züchtung sammeln sich bemerkenswert große Mengen an 5'-Inosinsäure in dem Kulturmedium und in den Zellkörpern an. Gleichzeitig werden auch geringe Mengen Hypoxanthin gebildet.a pH of about 4 to 9. Adjustment of the pH of the culture medium during fermentation can by using neutralizing agents such as aqueous ammonia, sodium hydroxide and the like, or urea. After 2 to 8 days of cultivation they collect remarkably large amounts of 5'-inosinic acid in the culture medium and in the cell bodies. At the same time, small amounts of hypoxanthine are also formed.
Nach beendeter Fermentierung werden die Zellkörper entfernt und die 5'-Inosinsäure auf übliche Weise gewonnen, z. B. durch eine Ionenaustauschharzbehandlung, wie nachfolgend im Beispiel 1 beschrieben oder nach irgendeinem anderen üblichen Ionenaustauschverfahren, Extraktion mit Lösungsmitteln, Ausfallung mit Metallsalzen, Chromatographie und dergleichen. After the fermentation has ended, the cell bodies are removed and the 5'-inosinic acid is used as usual Way won, e.g. B. by an ion exchange resin treatment as described in Example 1 below or by any other conventional ion exchange process, extraction with solvents, Precipitation with metal salts, chromatography and the like.
Die folgenden Beispiele dienen zur weiteren Erläuterung der Erfindung. Falls nichts anderes angegeben ist, sind die Prozentsätze auf das Gewicht bezogen.The following examples serve to further illustrate the invention. Unless otherwise stated the percentages are by weight.
Der Stamm Brevibacterium ammoniagenes ATCC 19 183 wurde als Mikroorganismus verwendet und bei 300C während 24 Stunden in einem Kulturmedium aus 2°/o Glucose, 1% Pepton, 1% Fleischextrakt, 0,3% NaCl und 20 μg/l Biotin vorgezüchtet.The strain Brevibacterium ammoniagenes ATCC 19183 was used as the microorganism and incubated at 30 0 C for 24 hours in a culture medium of 2 ° / o glucose, 1% peptone, 1% meat extract, 0.3% NaCl, and 20 .mu.g / l biotin pre-cultured.
Das Fermentationsmedium wurde durch Auflösung von 70 g Glucose, 6,0 g Harnstoff, 1 g KH2PO4 3,0 g K2HPO4, 0,3 g MgSO4 · 7H2O, 0,01 g FeSO4 · 7H2O, 5,0 g Casaminosäure, 30 μg Biotin, 5 mg Vitamin Bi und 10 mg Calciumpantothenat in 11 Wasser hergestellt. Der pH-Wert der erhaltenen Lösung wurde vor dem Sterilisieren auf 7,5 eingestellt. Der Harnstoff wurde in Form einer 40%igen Lösung getrennt sterilisiert und in solcher Menge zugegeben, daß sich 6,0 g Harnstoff je Liter des Nährmediums ergaben.The fermentation medium was made by dissolving 70 g of glucose, 6.0 g of urea, 1 g of KH 2 PO 4, 3.0 g of K2HPO4, 0.3 g of MgSO 4 · 7H 2 O, 0.01 g of FeSO 4 · 7H 2 O, 5.0 g casamino acid, 30 μg biotin, 5 mg vitamin Bi and 10 mg calcium pantothenate in 11 water. The pH of the resulting solution was adjusted to 7.5 before sterilization. The urea was sterilized separately in the form of a 40% solution and added in such an amount that 6.0 g urea per liter of the nutrient medium resulted.
10 Volumprozent der vorstehend aufgeführten Impfkultur wurden in das beschriebene Fermentationsmedium geimpft. Mengen von 30 ml ' des Gemisches beider Medien wurden in sterile konische Kolben von 250 ml gegeben. Das Schütteln der Kultur wurde dann bei 30° C ausgeführt.10 percent by volume of the above-listed inoculum were in the fermentation medium described vaccinated. 30 ml 'quantities of the mixture of both media were poured into sterile conicals 250 ml flask. Shaking of the culture was then carried out at 30 ° C.
Nach einer Züchtung von 110 Stunden fanden sich 16,4 mg/ml 5'-Inosinsäure in der Fermentationsflüssigkeit. 11 der überstehenden Lösung, die nach Entfernung der Zellkörper von der Fermentationsflüssigkeit erhalten worden war, wurde auf einen pH-Wert von 1,4 mit Salzsäure eingestellt und durch eine Kolonne mit einem Dia-Ion-SK-Nr.-1-Harz (Η-Form) gegeben. Unmittelbar anschließend wurde destilliertes Wasser durch die Kolonne geleitet, und eine aliquote Menge des Durchlaufs, der während der frühen Stufe des Waschens mit destilliertem Wasser erhalten worden war, wurde mit dem nachfolgenden, die 5'-Inosinsäure enthaltenden Eluat vermischt. Das Gemisch aus aliquoter Menge Waschflüssigkeit und Eluat wurde dann auf einen pH-Wert von 7,2 mit Natriumhydroxyd eingestellt. Durch Abkühlen der erhaltenen Lösung nach Konzentrierung unter vermindertem Druck wurden Kristalle von Natrium-5'-inosinat erhalten. Die Ausbeute betrug 11,6 g. Es wurde auch etwas 5'-Inosinsäure in den Zellkörpern angesammelt.After culturing for 110 hours, 16.4 mg / ml 5'-inosinic acid was found in the fermentation liquid. 11 of the supernatant solution after Removal of the cell bodies obtained from the fermentation liquor was carried out on one Adjusted pH value of 1.4 with hydrochloric acid and through a column with a Dia-Ion-SK-Nr.-1 resin (Η-form) given. Immediately afterwards, distilled water was passed through the column, and an aliquot of the run-through used during the early stage of washing with distilled Water was obtained with the subsequent eluate containing 5'-inosinic acid mixed. The aliquot mixture of wash liquid and eluate was then brought to pH of 7.2 adjusted with sodium hydroxide. By cooling the resulting solution after concentration under reduced pressure, crystals of sodium 5'-inosinate were obtained. The yield was 11.6 g. Some 5'-inosinic acid also accumulated in the cell bodies.
Bei spiel 2Example 2
Es wurde derselbe Stamm wie im Beispiel 1 angewandt und der pH-Wert des Kulturmediums während der Fermentation bei etwa 7,0 durch Zugabe der beschriebenen Harnstofflösung gehalten.The same strain as in Example 1 and the pH of the culture medium were used maintained at about 7.0 during the fermentation by adding the urea solution described.
Das in diesem Beispiel angewandte Fermentationsmedium enthielt 100 g Glucose, 2,0 g KH2PO4, 4,0 g K2HPO4, 0,3 g MgSO4-7H2O, 5,0 g Fleischextrakt, 5,0 g Harnstoff (als getrennt sterilisierte 40%ige Lösung in solcher Menge zugegeben, daß sich 5,0 g Harnstoff je Liter Nährmedium ergaben), 30 μg Biotin, 5 mg Vitamin Bi und 10 mg Calciumpantothenat, gelöst in 11 Wasser. Der pH-Wert der Lösung wurde vor der Sterilisierung auf 7,5 eingestellt. The fermentation medium used in this example contained 100 g glucose, 2.0 g KH 2 PO 4 , 4.0 g K 2 HPO 4 , 0.3 g MgSO 4 -7H 2 O, 5.0 g meat extract, 5.0 g Urea (added as a separately sterilized 40% solution in such an amount that there were 5.0 g urea per liter nutrient medium), 30 μg biotin, 5 mg vitamin Bi and 10 mg calcium pantothenate, dissolved in 11 water. The pH of the solution was adjusted to 7.5 before sterilization.
Die Fermentation wurde unter denselben Züchtungsbedingungen wie im Beispiel 1, ausgenommen die pH-Regelung, durchgeführt. Nach 96stündiger Züchtung waren 18,6 mg/ml 5'-Inosinsäure und 0,9 mg/ml Hypoxanthin in der Fermentationsflüssigkeit angesammelt. *The fermentation was carried out under the same cultivation conditions as in Example 1, except the pH control is carried out. After 96 hours of cultivation there was 18.6 mg / ml 5'-inosinic acid and 0.9 mg / ml hypoxanthine accumulated in the fermentation liquid. *
Das Stamm Brevibacterium ammoniagenes ATCCThe strain Brevibacterium ammoniagenes ATCC
19 184 wurde als Mikroorganismus verwendet. Die Vorzüchtung und die angewandten Fermentationsmedien und Züchtungsbedingungen waren wie im Beispiel 2. Nach 96stündiger Züchtung hatten sich 17,8 mg/ml 5'-Inosinsäure und 0,6 mg/ml Hypoxanthin gebildet.19 184 was used as a microorganism. The pre-growth and the fermentation media and conditions used were as in Example 2. After 96 hours of cultivation, 17.8 mg / ml 5'-inosinic acid and 0.6 mg / ml hypoxanthine had each other educated.
Der Stamm Micrococcus glutamicus ATCC 19 185 wurde in einem Nährmedium aus 2% Glucose, 1% Pepton, 1% Fleischextrakt, 0,3% NaCl undThe strain Micrococcus glutamicus ATCC 19 185 was in a nutrient medium of 2% glucose, 1% peptone, 1% meat extract, 0.3% NaCl and
20 μg Biotin je Liter Wasser bei 3O0C während 24 Stunden gezüchtet. Das in diesem Beispiel angewandte Fermentationsmedium enthielt 70 g GIucose, 6,0 g Harnstoff, 1 g KH2PO4, 3,5 g K2HPO4, 0,3 g MgSO4-7H2O, 0,01g FeSO4 · 7H2O, 5,0 g Casaminosäure, 30 μg Biotin, 5 mg Vitamin Bi und 10 mg Calciumpantothenat, gelöst in 11 Wasser. Der pH-Wert der Fermentationsflüssigkeit wurde auf 7,5 vor dem Sterilisieren eingestellt. Der Harnstoff wurde als getrennt sterilisierte 40%ige Lösung in solcher Menge zugegeben, daß die Menge Harnstoff 6 g je Liter Nährmedium betrug.Biotin 20 ug per liter of water cultured at 3O 0 C for 24 hours. The fermentation medium used in this example contained 70 g glucose, 6.0 g urea, 1 g KH 2 PO 4 , 3.5 g K 2 HPO 4 , 0.3 g MgSO 4 -7H 2 O, 0.01 g FeSO 4 . 7H 2 O, 5.0 g casamino acid, 30 μg biotin, 5 mg vitamin Bi and 10 mg calcium pantothenate, dissolved in 11 water. The pH of the fermentation liquor was adjusted to 7.5 before sterilization. The urea was added as a separately sterilized 40% solution in such an amount that the amount of urea was 6 g per liter of nutrient medium.
10 Volumprozent der Impfkultur wurden in das Fermentationsmedium geimpft. Dann wurden 30 ml des Gemisches dieser Medien in sterile konische Kolben von 250 ml gegeben. Das Schütteln der Kultur wurde dann bei 300C ausgeführt.10 percent by volume of the inoculum was inoculated into the fermentation medium. Then 30 ml of the mixture of these media was placed in sterile 250 ml conical flasks. The culture was then shaken at 30 ° C.
Nach einer Züchtung von 110 Stunden befanden sich 15,6 mg/ml 5'-Inosinsäure in der Fermentationsflüssigkeit. Nach der Entfernung der Zellkörper aus der Fermentationsflüssigkeit wurde 11 der überstehenden Lösung auf einen pH-Wert von 1,4 mit Salzsäure eingestellt und durch eine Kolonne mit Dia-Ion-SK-Nr. 1-Harz (Η-Form) gegeben. Unmittelbar anschließend wurde destilliertes Wasser durch die Kolonne geleitet und eine aliquote Menge des Durchlaufs, der während der frühen Stufe des Waschens gewonnen worden war, wurde zusammen mit dem 5'-Inosinsäure enthaltenden Eluat vermischt und der pH-Wert dieses Gemisches auf 7,2 mit Natriumhydroxyd eingestellt. Kristalle von Natrium-5'-inosinat wurden dann durch Abkühlen der erhaltenenAfter culturing for 110 hours, there were 15.6 mg / ml of 5'-inosinic acid in the fermentation liquid. After removing the cell body from the fermentation liquor became 11 of the supernatants Solution adjusted to a pH value of 1.4 with hydrochloric acid and through a column with Dia-Ion SK no. 1 resin (Η shape) given. Direct then distilled water was passed through the column and an aliquot of the run-through, which had been obtained during the early stage of washing was taken along with the 5'-Inosinic acid-containing eluate mixed and the pH of this mixture to 7.2 with sodium hydroxide set. Crystals of sodium 5'-inosinate were then obtained by cooling the
Lösung nach Einengen unter vermindertem Druck erhalten. Die Ausbeute betrug 11,2 g. Zusätzliche Inosinsäure war auch in den Zellkörpern vorhanden.Solution obtained after concentration under reduced pressure. The yield was 11.2 g. Additional Inosinic acid was also present in the cell bodies.
Es wurde derselbe Stamm wie im Beispiel 4 als Mikroorganismus verwendet und der pH-Wert des Fermentationsmediums auf etwa 7 "durch Zugabe von Harnstofflösung eingestellt.The same strain as in Example 4 was used as the microorganism and the pH of the Fermentation medium adjusted to about 7 "by adding urea solution.
Das Fermentationsmedium enthielt 100 g Glucose, 2,0 g KHaPO4, 4,0 g K2HPO4, 0,3 g MgSO4 · 7H2O, 5,0 g Fleischextrakt, 5,0 g Harnstoff (eine getrennt sterilisierte 40%ige Lösung wurde in solcher Menge zugegeben, daß sich 5,0 g Harnstoff je Liter Fermentiermedium ergaben), 30 μg Biotin, 5 mg Vitamin Bi und 10 mg Calciumpantothenat, gelöst in 11 Wasser. Der pH-Wert wurde auf 7,5 vor dem Sterilisieren eingestellt.The fermentation medium contained 100 g glucose, 2.0 g KHaPO 4 , 4.0 g K 2 HPO 4 , 0.3 g MgSO 4 · 7H 2 O, 5.0 g meat extract, 5.0 g urea (a separately sterilized 40 % solution was added in such an amount that 5.0 g of urea per liter of fermentation medium resulted), 30 μg of biotin, 5 mg of vitamin Bi and 10 mg of calcium pantothenate, dissolved in 1 liter of water. The pH was adjusted to 7.5 before sterilization.
Es wurden die im Beispiel 4 angewandten Züchtungsbedingungen ausschließlich der pH-Regelung angewandt. Nach 96stündiger Züchtung wurden 18,9 mg/ml 5'-Inosinsäure und 0,9 mg/ml Hypoxanthin erhalten.The cultivation conditions used in Example 4 were exclusively for pH regulation applied. After 96 hours of cultivation, 18.9 mg / ml 5'-inosinic acid and 0.9 mg / ml hypoxanthine became obtain.
Die Fermentation wurde mit dem Stamm Micrococcus glutamicus ATCC 19186 als Mikroorganismus ausgeführt. Die Vorzüchtung, das Impfmedium und das Fermentationsmedium waren wie im Beispiel 5. Nach 96stündiger Züchtung waren 19,6 mg/ml 5'-Inosinsäure und 0,9 mg/ml Hypoxanthin in der Fermentationsflüssigkeit vorhanden.The fermentation was carried out with the strain Micrococcus glutamicus ATCC 19186 as the microorganism executed. The preculture, inoculation medium and fermentation medium were like in Example 5. After 96 hours of cultivation there were 19.6 mg / ml 5'-inosinic acid and 0.9 mg / ml hypoxanthine present in the fermentation liquid.
Claims (1)
USA.-Patentschrift Nr. 3 152 966.Considered publications:
U.S. Patent No. 3,152,966.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1276583X | 1965-01-23 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE1276583B true DE1276583B (en) | 1968-09-05 |
Family
ID=14965514
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DEK58208A Pending DE1276583B (en) | 1965-01-23 | 1966-01-21 | Process for the preparation of 5'-inosic acid |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE1276583B (en) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3152966A (en) * | 1961-03-11 | 1964-10-13 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Method for producing inosinic acid and adenylic acid by fermentation |
-
1966
- 1966-01-21 DE DEK58208A patent/DE1276583B/en active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3152966A (en) * | 1961-03-11 | 1964-10-13 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Method for producing inosinic acid and adenylic acid by fermentation |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE1517823A1 (en) | Process for the production of L-lysine by fermentation | |
DE1276583B (en) | Process for the preparation of 5'-inosic acid | |
DE2135246C3 (en) | ||
DE1275980B (en) | Process for the biotechnological production of inosic acid | |
DE2418365A1 (en) | METHOD OF PRODUCING L-ARGININE BY FERMENTATION | |
DE1695325B2 (en) | METHOD FOR FERMENTATIONAL PRODUCTION OF NICOTINAMIDADENINDINUCLEOTIDE | |
DE1257148B (en) | Process for the production of adenosine diphosphate and triphosphate | |
DE1795356C3 (en) | Process for the production of inosine and 5'-guanosine mono-, di- and triphosphoric acid by fermentation | |
DE1695304C3 (en) | Process for the preparation of 5'-inosinic acid and S'-guano-sinmono-, di- and triphosphate | |
DE1795721C2 (en) | Process for the fermentative production of orotidylic acid | |
DE1642717C (en) | Method of making L Pro Im | |
DE1570022C (en) | Process for the production of 5-purine nucleotides by fermentation of microorganisms in an aqueous nutrient medium | |
DE1517860C (en) | Process for the biotechnological production of inosic acid | |
DE1517826C (en) | ||
DE1695325C3 (en) | Process for the fermentative production of nicotinamide adenine dinucleotide | |
DE1695323A1 (en) | Process for the production of adenosine diphosphate and adenosine triphosphate | |
US3620922A (en) | Process for producing inosine | |
DE1517831C (en) | Use of fermentation liquids to obtain flavin adenine nucleotide | |
DE1695327C3 (en) | Process for the fermentative production of nicotinamide adenine dinucleotide | |
DE1916813A1 (en) | Process for the production of nicotinic acid mononucleotide | |
DE1792724C3 (en) | Use of a fermentation medium to obtain nicotinamide adenine dinucleotide | |
DE2151325C3 (en) | Process for the preparation of nicotinic acid amide adenine dinucleotide phosphate | |
DE1807622B (en) | Process for the biotechnological production of inosine | |
DE1642717B1 (en) | Process for the production of L-proline | |
DE2000879A1 (en) | Process for the production of uridine-5'-diphospho-glucose |