DE1205933B

DE1205933B - Process for the biochemical production of 1-glutamic acid

Info

Publication number: DE1205933B
Application number: DEA40350A
Authority: DE
Inventors: Toshinori Matsui; Yukio Nishimura; Ichijiro Ide; Hiroshi Okada; Iwao Kameyama; Toshinao Tsunoda
Original assignee: Ajinomoto Co Inc
Current assignee: Ajinomoto Co Inc
Priority date: 1961-06-09
Filing date: 1962-06-02
Publication date: 1965-12-02

Description

Verfahren zur biochemischen Herstellung von 1-Glutaminsäure Die Erfindung betrifft ein Verfahren, 1-Glutaminsäure biochemisch in kurzer Zeit in hohen Ausbeuten herzustellen.Process for the biochemical production of 1-glutamic acid The invention relates to a process, 1-glutamic acid biochemically in a short time in high yields to manufacture.

Die fermentative 1-Glutaminsäureherstellung zerfällt in zwei Stufen a) die Bakterienwachstumsstufe, in der die Anzahl der Bakterien infolge Vermehrung zunimmt, und b) die 1-Glutaminsäurebildungsstufe, in der die eigentliche Glutaminsäureproduktion stattfindet. Es wurde gefunden, daß man bei der biochemischen Herstellung von 1-Glutaminsäure durch Züchtung von 1-Glutaminsäure bildenden Mikroorganismen in einem Kohlenhydrate, anorganische und organische Stickstoffsubstanzen, Mineralsalze und Wuchsstoffe enthaltendem Nährmedium unter aeroben Bedingungen die 1-Glutaminsäureausbeute bei Verkürzung der Fermentationszeit erhöhen kann, wenn man nach Abschluß der Wachstumsstufe der Mikroorganismen - wobei die üblichen Temperaturen eingehalten werden - dem Nährmedium eine hochkonzentrierte Zuckerlösung zusetzt und bei der weiteren Züchtung während der 1-Glutaminsäurebildungsstufe eine Temperatur von 34 bis 38°C einhält.The fermentative production of 1-glutamic acid breaks down into two stages a) the bacterial growth stage in which the number of bacteria as a result of reproduction increases, and b) the 1-glutamic acid formation stage in which the actual glutamic acid production takes place. It has been found that in the biochemical production of 1-glutamic acid by cultivating 1-glutamic acid-producing microorganisms in a carbohydrate, Containing inorganic and organic nitrogen substances, mineral salts and growth substances Nutrient medium under aerobic conditions the 1-glutamic acid yield with shortening the fermentation time can be increased if the Microorganisms - whereby the usual temperatures are maintained - the nutrient medium a highly concentrated sugar solution is added and during further cultivation the 1-glutamic acid formation stage maintains a temperature of 34 to 38 ° C.

Wenn auch bei der fermentativen 1-Glutaminsäureausbeute die Kohlenhydrate die wichtigsten Ausgangsmaterialien sind, war keineswegs zu erwarten, daß bei Steigerung der Kohlenhydratkonzentration im Kulturmedium auch die 1-Glutaminsäurekonzentration zunimmt, da bei der üblichen ferrnentativen 1-Glutaminsäureproduktion bei Überschreiten der (in bezug auf die eingesetzten Kohlenhydrate und die erreichte Glutaminsäuremenge) optimale Kohlenhydratkonzentration von etwa 10 g/100 ccm die 1-Glutaminsäureausbeute - auf den eingesetzten Kohlenstoff`lieferanten bezogen - merklich abnimmt.Even if the fermentative 1-glutamic acid yield is the carbohydrates are the most important starting materials, was by no means to be expected when increasing the carbohydrate concentration in the culture medium also the 1-glutamic acid concentration increases, since in the usual ferrnentative 1-glutamic acid production when exceeded the (in relation to the carbohydrates used and the amount of glutamic acid achieved) optimal carbohydrate concentration of about 10 g / 100 ccm the 1-glutamic acid yield - in relation to the carbon suppliers used - decreases noticeably.

Die Steigerung der 1-Glutaminsäureausbeute durch Erhöhung der Kohlenhydratkonzentration auf etwa 20 g/100 ccm Kulturmedium ist gemäß Erfindung dadurch gelungen, daß man die den optimalen Konzentrationsbereich überschreitende Kohlenhydratmenge in Form einer hochkonzentrierten Zuckerlösung erst gegen Ende des Stadiums des Bakterienwachstums zusetzt, gleichzeitig den bei der vorbekannten sehr temperaturempfindlichen -fermentativen 1-Glutaminsäureproduktion üblichen Bereich von 29 bis 33°C auf 34 bis 38'C steigert und damit die 1-Glutaminsäureproduktion oberhalb des bei der üblichen Verfahrensweise optimalen Temperaturbereichs durchführt.The increase in the 1-glutamic acid yield by increasing the carbohydrate concentration to about 20 g / 100 ccm of culture medium is achieved according to the invention in that one the amount of carbohydrates exceeding the optimal concentration range in the form a highly concentrated sugar solution only towards the end of the bacterial growth stage adds, at the same time as the already known very temperature-sensitive fermentatives 1-glutamic acid production usual range from 29 to 33 ° C to 34 to 38'C increases and thus the 1-glutamic acid production above that in the usual procedure performs optimal temperature range.

Nähere Einzelheiten des Verfahrens gemäß Erfindung sind den nachfolgenden Tabellen zu entnehmen. In Tabelle I ist die Menge der gebildeten 1-Glutaminsäure und die Ausbeute an 1-Glutaminsäure, auf den Gesamtzucker bezogen, in Abhängigkeit von dem Zugabezeitpunkt für den Zucker zusammengestellt. Tabelle 1 Gebildete 1-Glut- 1-Glutamin- Zugabezeitpunkt aminsäure- Säureausbeute menge (g/100 ccm) i° Nach 3o/oiger Abnahme der anfänglich vorhandenen Zuckermenge . . . . . . . . . . 5,50 29,0 Nach 6o/oiger Abnahme der anfänglich vorhandenen Zuckermenge . . . . . . . . . . 7,03 37,0 Nach 9o/oiger Abnahme der anfänglich vorhandenen Zuckermenge . .. . . .. ... 6,10 32,5 Bemerkung Medium: KH2P04 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,1 g/100 ccm M9S04 - 7 H20 . . . . . . . . . . . . . . . 0,04 g/100 ccm Fe** ........................ 2 ppm-. Mn** ........ ............. 2.ppm Maiseinweichwassser . . .-. . . . . . . . 0,5 g/100 ccm Vitamin B1 . . . . ... . . . . . . . . . . . . 80 y/100 ccm Anfänglich vorhandener Zucker 15 g/100-ccm Zucker nach Zugabe . . . . . . . . . . 19 g/100 ccm. Brevibacterium lactofermentum N0.2256 (ATCC 13869) wurde zur Beimpfung des Mediums verwendet und die Kultivierung 48 Stunden bei 30°C unter Schütteln durchgeführt.Further details of the process according to the invention can be found in the tables below. Table I shows the amount of 1-glutamic acid formed and the yield of 1-glutamic acid, based on the total sugar, as a function of the time at which the sugar was added. Table 1 Educated 1-Glut- 1-Glutamine- Time of addition amic acid-acid yield lot (g / 100 ccm) i ° After 30% decrease in the initially existing Amount of sugar. . . . . . . . . . 5.50 29.0 After 60% decrease in the initially existing Amount of sugar. . . . . . . . . . 7.03 37.0 After 90% decrease in the initially existing Amount of sugar. ... . .. ... 6.10 32.5 Remark medium: KH2P04. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.1 g / 100 cc M9S04 - 7 H20. . . . . . . . . . . . . . . 0.04 g / 100 cc Fe ** ........................ 2 ppm-. Mn ** ........ ............. 2.ppm corn steep water. . .-. . . . . . . . 0.5 g / 100 cc vitamin B1. . . . ... . . . . . . . . . . . 80 y / 100 cc of sugar initially present 15 g / 100 cc of sugar after addition. . . . . . . . . . 19 g / 100 cc. Brevibacterium lactofermentum N0.2256 (ATCC 13869) was used to inoculate the medium and cultivation was carried out for 48 hours at 30 ° C. with shaking.

Der Tabelle ist zu entnehmen, daß der für die Zuführung der hochkonzentrierten Zuckerlösung günstigste Zeitpunkt gekommen ist, wenn die anfangs vorhandene Zuckermenge um etwa 5 bis 8 °/o abgenommen hat.The table shows that the one for the supply of the highly concentrated Sugar solution The best time has come when the amount of sugar initially available has decreased by about 5 to 8 ° / o.

In Tabelle 1I ist die Menge der gebildeten 1-Gluta= minsäure, die Ausbeute an 1-Glutaminsäure, auf den Gesamtzucker bezogen, und die Kultivierungsdauer in Abhängigkeit von der Temperatur des Kulturmediums; bei welcher die hochkonzentrierte Zuckerlösung zugeführt worden ist, zusammengestellt. Tabelle Il- - Gebildete Ausbeute, auf Dauer der Temperatur 1-Glutamin- den Gesamt- Kultivierung Säuremenge zuckerbezogen (IC) - (g/100 ccm) (°/o) (Stunden) 30 7,45 36,5 50 34 8,01 39,3 44 36 8,87 43,5 40 _39 . . 6j5 322 - 44 _ Der Tabelle ist zu entnehmen, daß die günstigste Temperatur des- Kulturmediums in der 1-Glutaminsäurebildungsstufe bei etwa 34 bis 38°C liegt.In Table 1I, the amount of 1-glutamic acid formed, the yield of 1-glutamic acid, based on the total sugar, and the cultivation time are dependent on the temperature of the culture medium; in which the highly concentrated sugar solution was added. Table II- - Yield formed, in the long run Temperature 1-glutamine denotes total cultivation Amount of acid related to sugar (IC) - (g / 100 ccm) (° / o) (hours) 30 7.45 36.5 50 34 8.01 39.3 44 36 8.87 43.5 40 _39. . 6j5 322 - 44 _ The table shows that the most favorable temperature of the culture medium in the 1-glutamic acid formation stage is around 34 to 38.degree.

Tabelle III enthält Angaben über den Gesamtzucker, die gebildete 1-Glutaminsäuremenge,-die Ausbeute, auf den Gesamtzucker bezogen, und die Kultivierungsdauer in Abhängigkeit von der Zuckerzuführung und der Temperatur des Kulturmediums zu einem späteren Fermentationsstadium. - Tabelle III Gebildete Ausbeute, auf den Zuckerzugabe Temperatur Gesamtzucker 1-Glutaminsäure- Gesamtzucker Kultivierungsdauer menge bezogen (° C) (g/100 ccm) -_ (g/100 ccm) (%) (Stunden) Keine Zugabe . . . . . . . . 31,5 14,70 5,89 40,0 40 Keine Zugabe . . . . . .. . 36 14,70 6,21 42,2 36 Keine Zugabe .-. .. . . . . 36 20,16 7,52 37,3 42 Zugabe ............:. 36 20,16 8,55 42,4 36 Nach der Tabelle kann der 1-Glutaminsäurefermentationsprozeß nur dann schnell und mit gutem Erfolg durchgeführt werden, wenn die Zugabe der hochkonzentrierten Zuckerlösung und der Temperaturanstieg des Mediums in einem späteren Fermentationsstadium gleichzeitig erfolgen.Table III contains information about the total sugar, the amount of 1-glutamic acid formed, the yield based on the total sugar, and the cultivation time as a function of the sugar supply and the temperature of the culture medium at a later fermentation stage. - Table III Formed yield on which Sugar addition temperature Total sugar 1-glutamic acid total sugar Cultivation time quantity related (° C) (g / 100 ccm) -_ (g / 100 ccm) (%) (hours) No encore. . . . . . . . 31.5 14.70 5.89 40.0 40 No encore. . . . . ... 36 14.70 6.21 42.2 36 No addition .-. ... . . . 36 20.16 7.52 37.3 42 Encore ............:. 36 20.16 8.55 42.4 36 According to the table, the 1-glutamic acid fermentation process can only be carried out quickly and with good success if the addition of the highly concentrated sugar solution and the rise in temperature of the medium take place at the same time in a later fermentation stage.

Tabelle IV enthält Angaben über die Gesamtmenge des zugeführten Zuckers, die gebildete 1-Glutaminsäuremenge, die Ausbeute, auf den Gesamtzucker bezogen, und die Kultivierungszeit in Abhängigkeit von der zugeführten Zuckermenge. Tabelle IV Zugeführte Gesamt- Gebildete Ausbeute, Zuckermenge menge des 1-Glut- auf Kulti- in bezug zum an- Gesamt- vierungs- anfänglich gewandten menge zucker dauer vorhandenen Zuckers bezogen Zucker (g/100 ccm) (g/100 ccm) (o/o) (Stunden) 1/4 ...... 20,79 8,40 41,5 36 z/5 ....... 26,28 6,78 25,8 50 1/5 doppelt 24,70 7,32 29,6 53 1 ........ 32,03 5,35 16,7 50 Der Tabelle ist zu entnehmen, daß die durch die Zuckerzuführung erreichte Konzentration des Kulturmediums bei höchstens 21 bis 33 Gewichtsprozent/Volumprozent liegen soll. Übersteigt die durch die Zuckerzugabe erhaltene Konzentration des Mediums 30 Gewichtsprozent/Volumprozent, dann geht der Zuckermetabolismus merklich zurück.Table IV contains information on the total amount of sugar added, the amount of 1-glutamic acid formed, the yield based on the total sugar, and the cultivation time as a function of the amount of sugar added. Table IV Supplied Total Formed Yield, Amount of sugar Amount of 1-Glut- on cultivar in relation to the total fourth initially applied amount of sugar duration existing sugar Sugar (g / 100 ccm) (g / 100 ccm) (o / o) (hours) 1/4 ...... 20.79 8.40 41.5 36 z / 5 ....... 26.28 6.78 25.8 50 1/5 double 24.70 7.32 29.6 53 1 ........ 32.03 5.35 16.7 50 The table shows that the concentration of the culture medium achieved by adding sugar should be at most 21 to 33 percent by weight / percent by volume. If the concentration of the medium obtained by adding sugar exceeds 30 percent by weight / percent by volume, then the sugar metabolism is noticeably reduced.

Gemäß Erfindung können alle Mikroorganismen, die in Gegenwart von Kohlenstoffverbindungen und Stickstoffverbindungen 1-Glutaminsäure zu bilden vermögen, Verwendung finden.According to the invention, all microorganisms in the presence of Are able to form carbon compounds and nitrogen compounds 1-glutamic acid, Find use.

Einige Beispiele, die sich insbesondere für die 1-Glutaminsäureproduktion im industriellen Maßstab eignen, sind Species des Genus Bacillus, wie z. B. Bacillus megatherium, Bacillus subtilis, Bacillus circulars, Bacillus cereus, Species der Escherichia coli, Species, die zum Genus Micrococcus gehören, wie z. B. Micrococcus varians, Species, die zum Genus Brevibacterium gehören, wie z. B. Brevibacterium lactofermentum (z. B. ATCC 13655, 13869), Brevibacterium kawasakii, Brevibacterium devaricatum, Brevibacterium aminogenes, Brevibacterium saccharolyticum (z. B. ATCC 14066), Species, die zum Genus Corynebacterium, zum Genus Microbacterium gehören, u. a.Some examples that are particularly useful for 1-glutamic acid production are suitable on an industrial scale, species of the genus Bacillus, such as. B. Bacillus megatherium, Bacillus subtilis, Bacillus circulars, Bacillus cereus, species of Escherichia coli, species belonging to the genus Micrococcus, such as e.g. B. Micrococcus varians, species belonging to the genus Brevibacterium, such as e.g. B. Brevibacterium lactofermentum (e.g. ATCC 13655, 13869), Brevibacterium kawasakii, Brevibacterium devaricatum, Brevibacterium aminogenes, Brevibacterium saccharolyticum (e.g. ATCC 14066), species belonging to the genus Corynebacterium, to the genus Microbacterium, i.a.

Einige Beispiele für Kohlenwasserstofflieferanten, die in dem Kulturmedium gemäß Erfindung verwendet werden können, sind: Glucose, Fructose, Maltose, Saccharose, saure Stärkehydrolysatlösung, enzymatische Stärkehydrolysatlösung; für Stickstofflieferanten: NH40H, NH3, (NH4)2S04, NH4C1, NH4N03, Harnstoff; für anorganische Mineralsalze: KH1P04, M9S04, FeS04, MnS04, und für Wuchsstoffe: Maiseinweichwasser, Proteinhydrolysatlösung, Aminosäuren, Biotin, Desthiobiotin, Diaminopelargonsäure und Ölsäure. Das Verfahren gemäß Erfindung soll durch die folgenden Beispiele näher erläutert werden.Some examples of hydrocarbon suppliers that are in the culture medium can be used according to the invention are: glucose, fructose, maltose, sucrose, acidic starch hydrolyzate solution, enzymatic starch hydrolyzate solution; for nitrogen suppliers: NH40H, NH3, (NH4) 2S04, NH4C1, NH4N03, urea; for inorganic mineral salts: KH1P04, M9S04, FeS04, MnS04, and for growth substances: maize soaking water, protein hydrolyzate solution, Amino acids, biotin, desthiobiotin, diaminopelargonic acid and oleic acid. That Process according to the invention is to be explained in more detail by the following examples.

Beispiel l Mit Stärkehydrolysatlösung, die 15 Minuten bei 115°C sterilisiert worden war, und anderen Substanzen wurde ein 15 0001 fassender Fermenter gefüllt. Das Medium enthielt Zucker, die einer Menge von 15 g/100 ccm Glucose entsprechen, 0,1 g/100 ccm KH.P04, 0,04 g/100 ccm M9S04 - 7 H.0, 2 ppm Fe-Ion, 2 ppm Mn-Ion, 5 y/1 Biotin, 0,5 g/100 ccm Maiseinweichwasser und 50y/1 Vitamin B1.Example 1 With starch hydrolyzate solution which sterilizes at 115 ° C for 15 minutes and other substances were placed in a 15,000 liter fermenter. The medium contained sugar corresponding to an amount of 15 g / 100 ccm glucose, 0.1 g / 100 ccm KH.P04, 0.04 g / 100 ccm M9S04 - 7 H.0, 2 ppm Fe-Ion, 2 ppm Mn-Ion, 5 y / 1 biotin, 0.5 g / 100 ccm corn steeping water and 50 y / 1 vitamin B1.

Das Medium, das mit Ammoniakgas auf pH 7,8 eingestellt worden war, wurde mit Brevibacterium lactofermentum Stamm No.2256 beimpft und bei 31°C unter Schütteln und Belüftung kultiviert. Der pH-Wert des Mediums wurde im alkalischen Bereich gehalten.The medium, which had been adjusted to pH 7.8 with ammonia gas, was inoculated with Brevibacterium lactofermentum strain No.2256 and kept at 31 ° C Cultivated shaking and ventilation. The pH of the medium was alkaline Area kept.

Zu einem späteren Stadium der Vervielfältigung (Wachstum) der Bakterien, d. h. nach 16 Stunden, wurde das Medium auf 36°C erhitzt, nach 17 Stunden 11001 einer 46,6%igen Zuckerlösung dem Kulturmedium zugeführt, in welchem der anfängliche Zuckergehalt um 7,50/0 abgenommen hatte, und die Kultivierung bei 36°C 44 Stunden durchgeführt. Die verwendete Gesamtzuckermenge betrug 19,5 g/100 ccm.At a later stage of the reproduction (growth) of the bacteria, d. H. after 16 hours, the medium was heated to 36 ° C, after 17 hours 11001 a 46.6% sugar solution added to the culture medium, in which the initial Sugar content had decreased by 7.50 / 0, and cultivation at 36 ° C for 44 hours carried out. The total amount of sugar used was 19.5 g / 100 cc.

Die gebildete 1-Glutaminsäuremenge betrug 8,49 g/dl und die Ausbeute, auf den Gesamtzucker gezogen, 43,50/0. Die nach dem Abzentrifugieren der Mikroorganismen von dem Kulturmedium gebildete überstehende Flüssigkeit wurde konzentriert, auf pH 3,2 eingestellt und zur Kristallisation gebracht. Die erhaltene 1-Glutaminsäure wog 507 gk. Beispie12 Mit Brevibacterium saccharolyticum Stamm No. 7636 wurde ein Medium, das in der gleichen Weise wie im Beispiel 1 hergestellt worden war, beimpft, nach Abnahme des anfänglichen Zuckergehaltes in dem Medium um 80/0 wurden 6001 44,17%ige Zuckerlösung dem Kulturmedium zugeführt und auf 36°C erhitzt. Nach weiterer Abnahme des anfänglichen Zuckergehaltes um 3 0/0 in dem Medium, 22 Stunden nach Fermentationsbeginn, wurden noch einmal 6001 der gleichen Zuckerlösung zugeführt (Zuckerkonzentration 19,71 g/100 ccm, auf den angewandten Gesamtzucker bezogen).The amount of 1-glutamic acid formed was 8.49 g / dl and the yield added to the total sugar, 43.50 / 0. After centrifuging off the microorganisms supernatant formed from the culture medium was concentrated Adjusted to pH 3.2 and brought to crystallization. The 1-glutamic acid obtained weighed 507 gk. Example12 With Brevibacterium saccharolyticum strain no. 7636 became a Inoculated medium prepared in the same manner as in Example 1, after the initial sugar content in the medium had decreased by 80/0, 6001 became 44.17% Sugar solution added to the culture medium and heated to 36 ° C. After further acceptance the initial sugar content by 3% in the medium, 22 hours after the start of fermentation, 600 liters of the same sugar solution were added again (sugar concentration 19.71 g / 100 ccm, based on the total sugar used).

Die gebildete 1-Glutaminsäuremenge betrug 8,27 g/ 100 ccm und die Ausbeute, auf den Gesamtzucker bezogen, 42,0 0/0. Es wurden 572 kg kristalline 1-Glutaminsäure erhalten.The amount of 1-glutamic acid formed was 8.27 g / 100 ccm and the Yield based on total sugar, 42.0%. There were 572 kg of crystalline 1-glutamic acid obtain.

Beispiel 3 Brevibacterium flavum Stamm No. 3423 wurde in der im Beispiel 1 beschriebenen Weise kultiviert und dem Kulturmedium, nachdem sein anfänglich vorhandener Zuckergehalt um 6,5% abgenommen hatte, 16 Stunden nach Fermentationsbeginn 10001 einer 49%igen Zuckerlösung zugeführt (verwendeter Gesamtzucker 19,27 g/100 ccm), sodann nach 17 Stunden wurde das Medium auf 38'C erhitzt. Für die Fermentation wurden 48 Stunden benötigt.Example 3 Brevibacterium flavum strain no. 3423 was used in the example 1 and the culture medium after being initially present Sugar content had decreased by 6.5%, 16 hours after the start of fermentation 10001 added to a 49% sugar solution (total sugar used 19.27 g / 100 ccm), then after 17 hours the medium was heated to 38 ° C. Were used for fermentation 48 hours needed.

Die gebildete 1-Glutaminsäuremenge betrug 8,71 g/ 100 ccm und die Ausbeute, auf den Gesamtzucker bezogen, 45,2 0/0. Die 1-Glutaminsäure wog nach Kristallisation 574 kg. Beispie14 20 ml eines Kulturmediums mit einem Zuckergehalt, der 10 g/100 ccm Glucose entsprach, und 6y/1 Biotin, 0,1 g/100 ccm KHZP04, 0,04 g/100 ccm M9S04 - 7 H20, 0,5 m1/100 ccm Sojabohnenproteinhydrolysatlösung, 0,6 g/100 ccm Harnstoff, 2 ppm Fe-Ion und 2 ppm Mn-Ion wurden hergestellt und in einem 500-ml-Kolben sterilisiert.The amount of 1-glutamic acid formed was 8.71 g / 100 ccm and the Yield based on total sugar, 45.2%. The 1-glutamic acid weighed after crystallization 574 kg. Example 14 20 ml of a culture medium with a sugar content of 10 g / 100 cc of glucose and 6y / 1 biotin, 0.1 g / 100 cc KHZP04, 0.04 g / 100 cc M9S04 - 7 H20, 0.5 ml / 100 ccm soybean protein hydrolyzate solution, 0.6 g / 100 ccm urea, 2 ppm Fe ion and 2 ppm Mn ion were prepared and sterilized in a 500 ml flask.

Das Medium wurde mit Brevibacterium lactofermentum Stamm No. 2256 beimpft und nach der im Beispiel 1 beschriebenen Weise die Kultivierung durchgeführt. Während der Kultivierung wurde durch Zugabe von 0,5 ccm einer 450/0igen Harnstofflösung der pH-Wert des Mediums im alkalischen Bereich gehalten. Nach 20 Stunden wurden 5,5 ml einer 45%igen Melasselösung zugeführt und die Kultivierung bei 34°C durchgeführt. Die Durchführung der Fermentation dauerte 42 Stunden.The medium was mixed with Brevibacterium lactofermentum strain no. 2256 inoculated and carried out according to the manner described in Example 1, the cultivation. During the cultivation, by adding 0.5 ccm of a 450/0 urea solution the pH of the medium is kept in the alkaline range. After 20 hours were 5.5 ml of a 45% molasses solution were added and cultivation was carried out at 34.degree. The fermentation took 42 hours to complete.

Die gebildete 1-Glutaminsäuremenge betrug 7,3 g/ 100 ccm und die Ausbeute, auf den Gesamtzucker bezogen, 40,10/0.The amount of 1-glutamic acid formed was 7.3 g / 100 ccm and the yield based on total sugar, 40.10 / 0.

Claims

Claim: Process for the biochemical production of 1-glutamic acid by cultivating 1-glutamic acid-producing microorganisms in a carbohydrate, Containing inorganic and organic nitrogen substances, mineral salts and growth substances Nutrient medium under aerobic conditions, characterized in that after completion the growth stage of the microorganisms, the usual temperatures being maintained a highly concentrated sugar solution is added to the nutrient medium and in the further Cultivation during the 1-glutamic acid formation stage, a temperature of 34 to 38 ° C adheres to. References considered: USA: Patent No. 2,906,671; L. M a c h e n, "Biological distillery operational control", 1950, p. 97, para. 1 and 2.