DE1192785B

DE1192785B - Process for the production of the antibiotic ZN-6 (fusidic acid) and its salts

Info

Publication number: DE1192785B
Application number: DEL40063A
Authority: DE
Inventors: Wagn Ole Godtfredsen; Henning Otto Bojsen Lorck; Sverre Jahnsen
Original assignee: Leo Pharmaceutical Products Ltd AS
Current assignee: Leo Pharma AS
Priority date: 1960-09-21
Filing date: 1961-09-21
Publication date: 1965-05-13

Description

Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums ZN-6 (Fusidinsäure) und seiner Salze Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung des neuen Antibiotikums ZN-6, welches inzwischen die Bezeichnung »Fusidinsäure« erhalten hat, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man Fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki), Stamm ATCC 14 700, auf üblichem biologischem Wege züchtet und die gebildete Fusidinsäure aus dem Kulturmedium isoliert.Process for the preparation of the antibiotic ZN-6 (fusidic acid) and its salts The invention relates to a process for the production of the new antibiotic ZN-6, which has since been given the name "fusidic acid", is what makes it is characterized in that Fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki), strain ATCC 14 700, cultivates in the usual biological way and the fusidic acid formed from the culture medium isolated.

Der Fusidinsäure bildende Organismus kann vom »Centralbureau voor Schimmelculturese, Baarn, Holland, bezogen werden. Auch wurde eine Kultur dieses Organismus bei der »American Type Culture Collectione, 2112 M Street, North West, Washington 7, D. C., unter der Hinterlegungsnummer ATCC 14 700 hinterlegt. Der Stamm gehört zur Gattung von Fusidium coccineum. Eine synonyme Bezeichnung für diese Gattung ist Ramularia coccinea. Die Gattung Fusidium gehört zur Klasse Oosporeae, zur Familie Mucedinaceae und zur Gruppe Hyphomycetales.The organism producing fusidic acid can be obtained from the »Centralbureau voor Schimmelculturese, Baarn, Holland. Also a culture became this Organism at the American Type Culture Collectione, 2112 M Street, North West, Washington 7, D. C., on deposit under ATCC 14,700. The strain belongs to the genus Fusidium coccineum. A synonymous name for this genus is Ramularia coccinea. The genus Fusidium belongs to the class Oosporeae, to the family Mucedinaceae and to the Hyphomycetales group.

Fusidinsäure ist eine schwache Carbonsäure. Die elektrometrische Titration in 80°/oigem wäßrigem Äthanol ergibt einen pKa,-Wert von 7,25, was einem pKa-Wert von ungefähr 5,3 in Wasser entspricht. Die Titration ergibt für Fusidinsäure ein Äquivalentgewicht von 516. Fusidinsäure bildet mit verschiedenen anorganischen und organischen Basen Salze. Außerdem ist sie befähigt, mit bestimmten Lösungsmitteln Solvatationsprodukte zu bilden.Fusidic acid is a weak carboxylic acid. Electrometric titration in 80% aqueous ethanol gives a pKa, value of 7.25, which is a pKa value of approximately 5.3 in water. The titration gives a for fusidic acid Equivalent weight of 516. Fusidic acid forms with various inorganic and organic bases salts. It is also able to work with certain solvents To form solvation products.

Fusidinsäure besitzt die Bruttoformel C"H"06 und enthält ein Cyclopentenopolyhydrophenanthrenringsystem, das durch zwei Hydroxylgruppen, eine Acetoxygruppe und vier Methylgruppen substituiert und in 17-Stellung über eine Doppelbindung mit dem x-Kohlenstoffatom von 5-Methyl-4,5-heptensäure verbunden ist. Es wird angenommen, daß Fusidinsäure nachstehende Formel (I) hat, worin die wellenförmigen Bindestriche andeuten, daß die Konfiguration an den betreffenden Ringkoblenstoffatomen noch nicht feststeht: Fusidinsäure ist in Wasser und Hexan sehr wenig löslich, jedoch löslich in Äthanol, Aceton, Methylbutylketon, Amylacetat, Chloroform und ähnlichen Lösungsmitteln. Die papierchromatographisch unter Verwendung der von B u s h in Biochemical Journal, Bd. 50 (1952), S. 370, beschriebenen Lösungsmittelsysteme gefundenen Werte betragen 0,38 im B (1)- und 0,73 im B (5)-Lösungsmittelsystem.Fusidic acid has the gross formula C "H" 06 and contains a cyclopentenopolyhydrophenanthrene ring system which is substituted by two hydroxyl groups, one acetoxy group and four methyl groups and is connected in the 17 position via a double bond to the x carbon atom of 5-methyl-4,5-heptenoic acid . It is assumed that fusidic acid has the following formula (I), in which the wavy hyphens indicate that the configuration of the ring carbon atoms in question has not yet been determined: Fusidic acid is very sparingly soluble in water and hexane, but soluble in ethanol, acetone, methyl butyl ketone, amyl acetate, chloroform and similar solvents. The values found by paper chromatography using the solvent systems described by Bush in Biochemical Journal, Vol. 50 (1952), p. 370, are 0.38 in the B (1) and 0.73 in the B (5) solvent system.

Mit Benzol bildet Fusidinsäure ein kristallines Solvatationsprodukt, das in heißem Benzol löslich, in kaltem Benzol jedoch kaum löslich ist und einen Schmelzpunkt von 189 bis 189,5°C aufweist.Fusidic acid forms a crystalline solvation product with benzene, which is soluble in hot benzene but hardly soluble in cold benzene and one Has a melting point of 189 to 189.5 ° C.

Nach dem Trocknen des Solvatationsproduktes bis zur Gewichtskonstanz bei 50°C/0,01 Torr erhält man ein reines, benzolfreies Produkt, F.191 bis 192°C, [a] ö = -9° (10/" Chloroform). Bei 220 mg. zeigt Fusidinsäure einen molaren Extinktionskoeffizienten von 8000 in Äthanol und keine charakteristische Absorptionsbande über dieser Wellenlänge. Das IR-Spektrum von Fusidinsäure ist in der Figur gezeigt. Dieses zeigt charakteristische Absorptionsbanden bei 1265, 1385, 1695, 1730 und 3450 cm-' (Kaliumbromidverfahren).After the solvation product has dried to constant weight at 50 ° C / 0.01 Torr a pure, benzene-free product is obtained, mp 191 to 192 ° C, [a] δ = -9 ° (10 / "chloroform). At 220 mg. fusidic acid shows a molar extinction coefficient of 8000 in ethanol and no characteristic absorption band over this wavelength. The IR spectrum of fusidic acid is shown in the figure. This shows characteristic Absorption bands at 1265, 1385, 1695, 1730 and 3450 cm- '(potassium bromide method).

Bakteriologische Versuche ergaben, daß Fusidinsäure gegen eine große Zahl pathogener Mikroorganismen wirksam ist, vor allem gegen Staphylococcus aureus, Neisseria gonorhoeae einschließlich der gegen Penicillin resistenten Stämme, Neisseria meningitides, Mycobakterium tuberculosis und die gegen Streptomycin, Isonicotinsäurehydrazid oder p-Aminosalicylsäure resistenten Stämme dieses Organismus, ferner gegen Corynebacterium diphteriae.Bacteriological tests showed that fusidic acid against a large Number of pathogenic microorganisms is effective, especially against Staphylococcus aureus, Neisseria gonorhoeae including the penicillin resistant strains, Neisseria meningitides, Mycobacterium tuberculosis and those against streptomycin, isonicotinic acid hydrazide or p-aminosalicylic acid resistant strains of this organism, also against Corynebacterium diphteriae.

In nachstehender Tabelle sind die 50°/oigen Hemmkonzentrationen des Natriumsalzes von Fusidinsäure in mg/1 in der in Stunden angegebenen Zeit für verschiedene Organismen aufgeführt: Tabelle I Organismus Nährboden Zeit 50°(pige Hemm- Stunden konzentration Staphylococcus aureus........................... Nährbouillon 24 0,063 Staphylococcus aureus, penicillinasebildender Stamm Nährbouillon 24 0,050 Staphylococcus aureus, penicillinresistenter Stamm aus dem Laboratorum, der keine Penicillinase bildet. .. Nährbouillon 48 0,16 Neisseria gonorhoeae . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . Blutascites-Agar 24 0,32 Neisseria gonorhoeae penicillinresistenter Stamm .... Blutascites-Agar 24 0,63 Neisseria meningitides . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Blutascites-Agar 24 0,32 Haemophilus infiuenzae . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Blutascites-Agar 24 10,0 Diplococcus pneumoniae ...... . . . . . . . . . . . . . .. . . . Nährbouillon 24 16,0 mit 5 °/o Serum Streptococcus pyogenes .......................... Nährbouillon 24 3,2 mit 5 °/o Serum Streptococcus zooepiden-iicus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Nährbouillon 24 2,5 mit 5 % Serum Streptococcus agalactiae . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 16,0 mit 5 °/o Serum Streptococcus lactis . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 13,0 mit 5 °/o Serum Streptococcus faecalis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 5,0 mit 5 °/o Serum Pseudomonae aeruginosa . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . Nährbouillon 24 30,0 Vibrio comma . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 > 30,0 Alcaligenes faecalis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 13,0 Escherichia coli . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 > 30,0 Klebsiella pneumoniae . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 > 30,0 Serratia marcescens ............................. Nährbouillon 24 > 30,0 Proteus vulgaris . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 > 30,0 Salmonella typhi murium . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 > 100,0 Bacillus subtilis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährbouillon 24 1,6 Mycobacterium tuberculosis var. hum.............. Nährmedium 24 0,79 nach Dubos 144 Mycobacterium tuberculosis var. hum., streptomycin- Nährmedium 24 1,6 resistenter Stamm . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . nach Dubos 144 Mycobacterium tuberculosis var. hum., gegen p-Ami- Nährmedium 24 1,6 nosalicylsäure resistenter Stamm . . . . .. . . . . . . . . .. nach Dubos 144 Organismus Nährboden Zeit 50°/oige Hemm- stunden konzentration Mycobacterium tuberculosis var. hum., gegen Isoni- Nährmedium 240 0,50 cotinsäurehydrazid resistenter Stamm . . . . . . . . . . . . nach Dubos 144 Candida Albicans . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährmedium 24 100,0 nach Sabouraud Tricophyton mentagrophytes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1*#Tährmedium 72 100,0 nach Sabouraud Aspergillus niger . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nährmedium 72 100,0 nach Sabouraud Clostridium perfringens . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Thioglycollatmedium 48 0,25 Clostridium tetani . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Thioglycollatmedium 48 0,02 Actinomyces bovis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Thioglycollatmedium 48 0,05 Corynebacterium pyogenes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Fleischbrühe 24 0,05 mit 100/0 Serum Klinische Untersuchungen zeigten, daß Fusidinsäure und bestimmte Salze derselben die an Antibiotika gestellten pharmazeutischen Anforderungen erfüllen. Sie sind bei der Behandlung von Infektionskrankheiten verwendbar und ganz besonders wertvoll bei der Behandlung solcher, die durch verschiedene Stämme von Staphylococci, einschließlich der penicillinresistenten Stämme, hervorgerufen werden.The following table shows the 50% inhibitory concentrations of the sodium salt of fusidic acid in mg / 1 in the time given in hours for various organisms: Table I. Organism culture medium time 50 ° (pige inhibitory Hours of concentration Staphylococcus aureus ........................... Nutrient Broth 24 0.063 Staphylococcus aureus, penicillinase-producing strain nutrient broth 24 0.050 Staphylococcus aureus, penicillin-resistant strain from the laboratory that does not produce penicillinase. .. nutrient broth 48 0.16 Neisseria gonorhoeae. . . . . . . . . . . . . ... . . . . . . . . . . . . Blood ascites agar 24 0.32 Neisseria gonorhoeae penicillin-resistant strain .... Blood ascites agar 24 0.63 Neisseria meningitides. . . . . . ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . Blood ascites agar 24 0.32 Haemophilus infiuenzae. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Blood ascites agar 24 10.0 Diplococcus pneumoniae ....... . . . . . . . . . . . . ... . . Nutrient broth 24 16.0 with 5% serum Streptococcus pyogenes .......................... nutrient broth 24 3.2 with 5% serum Streptococcus zooepiden-iicus. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. nutrient broth 24 2.5 with 5% serum Streptococcus agalactiae. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24 16.0 with 5% serum Streptococcus lactis. . . . . . . . . . . . ... . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24 13.0 with 5% serum Streptococcus faecalis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24 5.0 with 5% serum Pseudomonae aeruginosa. . . . . . . . . . . . . . . ... . . . . . . Nutrient Broth 24 30.0 Vibrio comma. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24> 30.0 Alcaligenes faecalis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24 13.0 Escherichia coli. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24> 30.0 Klebsiella pneumoniae. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24> 30.0 Serratia marcescens ............................. nutrient broth 24> 30.0 Proteus vulgaris. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24> 30.0 Salmonella typhi murium. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24> 100.0 Bacillus subtilis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient broth 24 1.6 Mycobacterium tuberculosis var. Hum .............. nutrient medium 24 0.79 after Dubos 144 Mycobacterium tuberculosis var. Hum., Streptomycin nutrient medium 24 1.6 resistant strain. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . after Dubos 144 Mycobacterium tuberculosis var. Hum., Against p-Ami nutrient medium 24 1.6 nosalicylic acid resistant strain. . . . ... . . . . . . . .. after Dubos 144 Organism culture medium time 50% inhibitory hours of concentration Mycobacterium tuberculosis var. Hum., Against Isoni nutrient medium 240 0.50 cotinic hydrazide resistant strain. . . . . . . . . . . . after Dubos 144 Candida Albicans. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient medium 24 100.0 according to Sabouraud Tricophyton mentagrophytes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 * # growth medium 72 100.0 according to Sabouraud Aspergillus niger. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nutrient medium 72 100.0 according to Sabouraud Clostridium perfringens. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Thioglycollate Medium 48 0.25 Clostridium tetani. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Thioglycollate Medium 48 0.02 Actinomyces bovis. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Thioglycollate Medium 48 0.05 Corynebacterium pyogenes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Meat broth 24 0.05 with 100/0 serum Clinical studies have shown that fusidic acid and certain salts thereof meet the pharmaceutical requirements placed on antibiotics. They are useful in the treatment of infectious diseases and are particularly valuable in the treatment of those caused by various strains of staphylococci, including the penicillin-resistant strains.

Für pharmazeutische Zwecke kann Fusidinsäure als solche oder in Form ihrer mehr oder weniger wasserlöslichen Salze mit nicht toxischen anorganischen oder organischen Basen verwendet werden.For pharmaceutical purposes, fusidic acid can be used as such or in the form their more or less water-soluble salts with non-toxic inorganic salts or organic bases can be used.

Wäßrige Lösungen oder Salze von Fusidinsäure können parenteral verabreicht werden. Vorzugsweise werden jedoch die Salze peroral gegeben, da sie ohne weiteres aus dem Magen-Darm-Trakt in die Körperflüssigkeiten übergehen. In diesen ist eine ausreichende Konzentration des Antibiotikums genügend lange nachweisbar.Aqueous solutions or salts of fusidic acid can be administered parenterally will. Preferably, however, the salts are given orally, since they are readily available pass from the gastrointestinal tract into the body fluids. There is one in these sufficient concentration of the antibiotic can be detected for a sufficiently long time.

Dies konne in einem Resorptionsversuch festgestellt werden, bei welchem acht Personen individuell einmal peroral zwei Kapseln mit je 0,250 g des Natriumsalzes der Fusidinsäure erhielten. Anschließend wurde in bestimmten Zeitabständen nach der Verabreichung die Plasmakonzentration bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle II aufgeführt, worin die Zahlen die Plasmakonzentrationen in t,g/ml Plasma nach einer oder mehreren Stunden ausdrücken. Tabelle II Person Stunden 1 1 2 1 3 1 4 j 7 1 9 [ 12 Gruppe l A ..... . . 1,6 9,5 7,2 5,5 2,9 2,1 1 5 B ....... 0,9 1,2 3,0 2,7 3,6 3,1 2,2 C ....... 0,6 10,0 6,1 6,1 5,2 4,0 2,2 D ....... 0,8 11,0 8,5 9,3 5,2 4,7 1,7 Gruppe 1I E ....... 1,6 6,6 8,1 6,6 4,0I 3,2 2,4 F ....... 0,6 1,7 7,5 6,1 3,4 3,0 2,4 G ....... 2,5 12,3 8,6 6,7 3,5 3,1 1,8 In Gruppe I wurde das Antibiotikum den Versuchspersonen auf nüchternen Magen verabreicht, in Gruppe II hatten die Versuchspersonen vorher eine Mahlzeit zu sich genommen.This could be determined in an absorption experiment in which eight people individually received two capsules perorally, each containing 0.250 g of the sodium salt of fusidic acid. The plasma concentration was then determined at certain time intervals after the administration. The results are shown in Table II, in which the numbers express the plasma concentrations in t, g / ml plasma after one or more hours. Table II Person hours 1 1 2 1 3 1 4 y 7 1 9 [12 Group l A ...... . 1.6 9.5 7.2 5.5 2.9 2.1 1 5 B ....... 0.9 1.2 3.0 2.7 3.6 3.1 2.2 C ....... 0.6 10.0 6.1 6.1 5.2 4.0 2.2 D ....... 0.8 11.0 8.5 9.3 5.2 4.7 1.7 Group 1I E ....... 1.6 6.6 8.1 6.6 4.0I 3.2 2.4 F ....... 0.6 1.7 7.5 6.1 3.4 3.0 2.4 G ....... 2.5 12.3 8.6 6.7 3.5 3.1 1.8 In group I, the antibiotic was administered to the test subjects on an empty stomach; in group II, the test subjects had previously eaten a meal.

In einem ähnlichen Versuch wurde gezeigt, daß die mittlere Plasmakonzentration 24 Stunden nach Verabreichung der gleichen Menge 0,75 p.g/ml betrug, wodurch die außerordentlich langsame Ausscheidung der Substanz aus dem Körper gezeigt wird.In a similar experiment it was shown that the mean plasma concentration 24 hours after administration of the same amount was 0.75 p.g / ml, whereby the shown to be extremely slow excretion of the substance from the body.

In Tierversuchen mit Mäusen wurde eine ausreichend niedrige akute Toxizität der Fusidinsäure beobachtet. Die LD5o in mg/kg Körpergewicht betrug bei: a) intravenöser Verabreichung des Na- triumsalzes der Fusidinsäure ...... 200 bis 250 b) subkutaner Verabreichung des Na- triumsalzes der Fusidinsäure ...... 400 c) oraler Verabreichung des Benzolsol- vatationsproduktes der Fusidinsäure > 1500 Weiterhin konnten bei über einen längeren Zeitraum durchgeführten toxikologischen Tierversuchen mit männlichen und weiblichen Ratten, denen an 6 Tagen wöchentlich peroral je 0,400 mg/kg Körpergewicht des Natriumsalzes der Fusidinsäure verabreicht wurden, weder signifikante Gewichtsunterschiede zwischen den Versuchs- und Kontrolltieren, noch durch das Antibiotikum hervorgerufene pathologische Veränderungen beobachtet werden, was auf das Fehlen von chronischer Toxizität hinweist.A sufficiently low acute toxicity of fusidic acid was observed in animal experiments with mice. The LD50 in mg / kg body weight was: a) intravenous administration of the Na- trium salt of fusidic acid ...... 200 to 250 b) subcutaneous administration of the Na- trium salt of fusidic acid ...... 400 c) oral administration of the benzene vatation product of fusidic acid> 1500 Furthermore, in toxicological animal experiments carried out over a longer period of time with male and female rats, to which 0.400 mg / kg body weight of the sodium salt of fusidic acid were administered orally on 6 days a week, neither significant differences in weight between the test and control animals nor those caused by the antibiotic were found pathological changes are observed, indicating the absence of chronic toxicity.

Die kontrollierte klinische Behandlung eines ausreichend großen Krankengutes von Furunkulose-, Osteomyelitis- und Endocarditispatienten mit Gelatinekapseln, die das Natriumsalz von Fusidinsäure in einer geeigneten Zubereitung enthielten, zeigte die einzigartigen Eigenschaften der Fusidinsäure.The controlled clinical treatment of a sufficiently large patient population of furunculosis, osteomyelitis and endocarditis patients with gelatin capsules, which contained the sodium salt of fusidic acid in a suitable preparation, demonstrated the unique properties of fusidic acid.

Nach oraler Behandlung der Patienten mit täglichen Gaben oder für die praktische Durchführung geeigneten Intervallen erfolgte bei ausreichend langer Behandlungsdauer 100°/oige Heilung, ohne Auftreten von Nebenwirkungen oder toxischen Reaktionen. Auch bei längerdauernder Beobachtungszeit wurden keine Rezidiven gesehen.After oral treatment of the patient with daily doses or for the practical implementation of suitable intervals was carried out at sufficiently long Treatment duration 100 per cent healing, without occurrence of Side effects or toxic reactions. Even after a longer observation period there were none Seen relapses.

Für die klinische Behandlung eignen sich die wasserlöslichen Salze von Fusidinsäure, vor allem das Natriumsalz.The water-soluble salts are suitable for clinical treatment of fusidic acid, especially the sodium salt.

Doch können auch in Wasser schwerlösliche Salze der Fusidinsäure oder sogar die freie Säure oral verabreicht werden. Hierbei ist die Absorptionsgeschwindigkeit des Antibiotikums geringer, so daß die Wirkung vorzugsweise im Magen-Darm-Trakt erfolgt.However, salts of fusidic acid or fusidic acid that are sparingly soluble in water can also be used even the free acid can be administered orally. Here is the rate of absorption of the antibiotic less, so that the effect preferentially in the gastrointestinal tract he follows.

Ferner können in Wasser schwerlösliche Salze der Fusidinsäure in Form einer Suspension in einem geeigneten Medium zur Erzielung länger anhaltender Blutspiegel injiziert werden.Furthermore, salts of fusidic acid which are sparingly soluble in water can be used in the form a suspension in a suitable medium to achieve longer-lasting blood levels injected.

Erfindungsgemäß züchtet man den Pilz Fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki), Stamm ATCC 14 700, unter aeroben Bedingungen in einem Gärmedium, das Kohlenhydrate, Stickstoffquellen, z. B. Proteine und geeignete Mengen der für die Ernährung des Pilzes notwendigen anorganischen Salze und anderen Substanzen enthält. Die Fermentation wird fortgesetzt, bis die Lösung eine wesentliche antibiotische Wirksamkeit zeigt, worauf man die entstandene Fusidinsäure abtrennt, konzentriert und in reiner Form isoliert oder in an sich bekannter Weise in ein Salz mit einer pharmazeutisch zulässigen Base überführt.According to the invention, the fungus Fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki) is grown, Strain ATCC 14 700, under aerobic conditions in a fermentation medium, the carbohydrates, Nitrogen sources, e.g. B. Proteins and appropriate amounts of those for the nutrition of the Mushroom contains necessary inorganic salts and other substances. The fermentation continues until the solution shows substantial antibiotic activity, whereupon the resulting fusidic acid is separated off, concentrated and in pure form isolated or in a manner known per se in a salt with a pharmaceutically acceptable one Base transferred.

Die Bildungsgeschwindigkeit des Antibiotikums wird während der Fermentationsdauer nach einem der üblichen Bestimmungsverfahren zur Aktivitätsbestimmung im Kulturfiltrat festgestellt, z. B. durch den Agarplattentest unter Verwendung von Staphylococcus:aureus als Testorganismus.The rate of formation of the antibiotic will be during the fermentation period according to one of the usual determination methods for determining the activity in the culture filtrate found, e.g. B. by the agar plate test using Staphylococcus: aureus as a test organism.

Im technischen Maßstab erhielt man die beste Ausbeute an Fusidinsäure bei einer Fermentation von 80 bis 100 Stunden bei einer Temperatur von etwa 20 bis etwa 30°C, vorzugsweise bei etwa 24 bis etwa 28°C. Doch hängt die günstigste Fermentationsdauer auch von der Form des Gärkessels und der Art des verwendeten Rührwerkes ab. Es wurden handelsübliche Gärkessel benutzt, die 10 bis 30 m3 Kulturflüssigkeit aufnehmen konnten.The best yield of fusidic acid was obtained on an industrial scale for a fermentation of 80 to 100 hours at a temperature of about 20 to about 30 ° C, preferably at about 24 to about 28 ° C. However, the most favorable fermentation time depends also depends on the shape of the fermentation vessel and the type of agitator used. There were Commercially available fermentation kettles were used, which could hold 10 to 30 m3 of culture liquid.

Für die Durchführung des Verfahrens sind verschiedene wohlbekannte Kulturmedien verwendbar, bevorzugt werden solche, die als Eiweißquelle Maisquellwasser oder Sojabohnenmehl und als Kohlenhydratquelle Glucose oder Saccharose enthalten. Ferner enthält ein geeignetes Kulturmedium unter anderem z. B. Hefeextrakt, Glycerin, Maltose, Fruktose, Fettsäuren, Kaseinhydrolysat, gewisse Aminosäuren und wasserlösliche Vitamine.Various are well known for practicing the method Culture media can be used; preference is given to those containing corn steep liquor as the protein source or soybean meal and contain glucose or sucrose as a source of carbohydrates. Furthermore, a suitable culture medium contains, inter alia, z. B. yeast extract, glycerin, Maltose, fructose, fatty acids, casein hydrolyzate, certain amino acids and water-soluble ones Vitamins.

Zur Aufarbeitung trennt man vorzugsweise zunächst das Mycel von der Kulturlösung ab, z. B. durch Filtration. Hierauf konzentriert man die Fusidinsäure durch Adsorption aus dem Kulturfiltrat an einem festen Adsorptionsmittel, z. B. Aktivkohle oder einem Ionenaustauscherharz und anschließendes Eluieren. Oder aber extrahiert man die Fusidinsäure mit einem geeigneten Lösungsmittel, gegebenenfalls nach Einstellung eines geeigneten pH-Wertes der wäßrigen Lösung.For work-up, the mycelium is preferably first separated from the Culture solution from, e.g. B. by filtration. The fusidic acid is concentrated on this by adsorption from the culture filtrate on a solid adsorbent, e.g. B. Activated carbon or an ion exchange resin and subsequent elution. Or but the fusidic acid is extracted with a suitable solvent, if appropriate after setting a suitable pH of the aqueous solution.

Geeignete Lösungsmittel sind z. B. Ester, Ketone oder Halogenkohlenwasserstoffe. Technisch sind vor allem Methylisobutylketon, Amylacetat und Butylacetat geeignet.Suitable solvents are e.g. B. esters, ketones or halogenated hydrocarbons. Technically, methyl isobutyl ketone, amyl acetate and butyl acetate are particularly suitable.

Aus dem Extrakt kann die Fusidinsäure durch Einengen auf ein kleines Volumen und Kühlen oder durch Ausfällen mit einer die Löslichkeit vermindernden Substanz oder vorzugsweise durch Eindampfen zur Trockene und Zusatz von Benzol, zur Herstellung ihres leicht kristallisierenden Benzolsolvatationsproduktes, isoliert werden.The fusidic acid can be extracted from the extract by reducing it to a small amount Volume and cooling or by precipitation with a reducing solubility Substance or preferably by evaporation to dryness and addition of benzene, for the production of their easily crystallizing benzene solvation product, isolated will.

Auch kann man auf Grund der sauren Eigenschaften der Fusidinsäure die organische Schicht mit einer wäßrig-alkalischen Lösung oder mit einer wäßrigen Suspension einer alkalischen Verbindung extrahieren und so konzentrierte wäßrige Lösungen von Salzen der Fusidinsäure erhalten. Aus diesen Lösungen kann man durch Ansäuern die Fusidinsäure ausfällen oder aber das Salz als solches isolieren.Also, due to the acidic properties of fusidic acid, it can be used the organic layer with an aqueous alkaline solution or with an aqueous one Extract suspension of an alkaline compound and so concentrated aqueous Obtain solutions of salts of fusidic acid. From these solutions you can get through Acidification precipitate the fusidic acid or isolate the salt as such.

Es ist sehr zweckmäßig, die Fusidinsäure in Gegenwart eines organischen Lösungsmittels auszufällen, mit dem sie ein gutkristallisierendes Reaktionsprodukt bildet, wobei man bereits durch die Kristallisation eine weitgehende Reinigung erzielt. So kann man das kristallisierbare Benzolsolvatationsprodukt direkt aus der wäßrigen Lösung eines Salzes von Fusidinsäure, gegebenenfalls nach dem Abdampfen eines Teils des Wassers, z. B. in einem Vakuumverdampfer, durch Zugabe einer für die Bildung des Solvatationsproduktes ausreichenden Menge Benzol und Ansäuern ausfällen. Dieses wird anschließend getrocknet, wobei man je nach den Trocknungsbedingungen und der Arbeitstemperatur das reine Solvatationsprodukt oder Fusidinsäure als solche erhält.It is very convenient to use the fusidic acid in the presence of an organic Solvent to precipitate, with which they a well-crystallizing reaction product forms, whereby an extensive purification is already achieved by the crystallization. So you can the crystallizable benzene solvation directly from the aqueous Solution of a salt of fusidic acid, optionally after evaporation of part of the water, e.g. B. in a vacuum evaporator, by adding one for formation of the solvation product, precipitate a sufficient amount of benzene and acidify. This is then dried, depending on the drying conditions and the Working temperature the pure solvation product or fusidic acid as such.

Auch kann man die rohe Fusidinsäure in einem kleinen Volumen heißen Methanols lösen, worauf nach dem Abkühlen das Methanolsolvatationsprodukt, F.179 bis 179,5°C, in überraschend reiner Form auskristallisiert. Dies Verfahren ist für die Gewinnung einer für pharmazeutische Zwecke ausreichend reinen Fusidinsäure besonders geeignet.The crude fusidic acid can also be called in a small volume Dissolve methanol, whereupon, after cooling, the methanol solvation product, F.179 up to 179.5 ° C, crystallized in surprisingly pure form. This procedure is for the production of a sufficiently pure fusidic acid for pharmaceutical purposes in particular suitable.

Die Salze der Fusidinsäure können durch Neutralisieren von Fusidinsäure oder eines seiner Solvatationsprodukte mit der entsprechenden Base in einem geeigneten Medium, aus dem das Salz ausfällt oder durch Zugabe einer die Löslichkeit herabsetzenden Verbindung ausgefällt werden kann oder durch Eindampfen des Reaktionsgemisches erhalten werden. Auch kann ein vorgebildetes Salz der Fusidinsäure mit der entsprechenden Base umgesetzt oder durch doppelte Umsetzung mit einem, das gewünschte Metallion oder die Base enthaltenden, Salz das gewünschte Salz der Fusidinsäure hergestellt werden.The salts of fusidic acid can be obtained by neutralizing fusidic acid or one of its solvation products with the corresponding base in a suitable one Medium from which the salt precipitates or by adding a solubility reducing agent Compound can be precipitated or obtained by evaporation of the reaction mixture will. A pre-formed salt of fusidic acid can also be mixed with the corresponding Reacted base or by double reaction with one, the desired metal ion or the base-containing salt prepared the desired salt of fusidic acid will.

Unter anderem wurden die in Wasser leichtlöslichen Natrium-, Kalium-, Ammonium-, Triäthylammonium-, Piperidin-, Morpholin-, Cyclohexylammonium- und Monoäthanolammoniumsalze, sowie die in Wasser schwerlöslichen Calcium-, Magnesium-, Dibenzyläthylendiammonium-, Benzyl-ß-phenyläthylammonium- und Prokainsalze hergestellt. Auch können Salze mit Pyrrolidin, Piperazin, Guanidin, Methylamin, Äthylamin, Benzylamin, anderen unsubstituierten oder substituierten Aminen, ferner mit quaternären Aminen, z. B. Cholin und dessen Abkömmlingen und mit anderen Antibiotika mit basischen Eigenschaften, z. B. Streptomycin, hergestellt werden.Among other things, the sodium, potassium, Ammonium, triethylammonium, piperidine, morpholine, cyclohexylammonium and monoethanolammonium salts, as well as calcium, magnesium, dibenzylethylenediammonium, Benzyl-ß-phenylethylammonium and procaine salts are produced. You can also use salts Pyrrolidine, piperazine, guanidine, methylamine, ethylamine, benzylamine, other unsubstituted or substituted amines, also with quaternary amines, e.g. B. Choline and its Descendants and with other antibiotics with basic properties, e.g. B. streptomycin, getting produced.

Die Erfindung wird an Hand nachstehender Beispiele näher erläutert: Beispiel 1 In einem 1,5 m3 fassenden Fermentationskessel aus rostfreiem Stahl, mit Rührwerk, wurden 1,00 m3 Kulturmedium der nachstehenden Zusammensetzung zubereitet: Glucose ........................ 20,0 kg Fleisch- und Knochenmehl . . . . . . . . 20,0 kg Maisquellwasser, 50 % Trockensub- stanz ......................... 2,5 kg Glycerin ........................ 7,5 kg NaCI . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4,0 kg MgS04 ......................... 0,05 kg Leitungswasser auf . . . . . . . . . . . .... 10001 Das Kulturmedium (pH-Wert 6,1) wurde durch Zugabe einer verdünnten NaOH-Lösung auf den pH-Wert 6,5 gebracht, in der Hitze sterilisiert und nach dem Abkühlen mit 31 einer Kultur von Fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki), Stamm ATCC 14 700 geimpft, die 48 Stunden in einem Schüttelgefäß bei 28°C gewaschen war. Der Kesselinhalt wurde 96 Stunden bei 28°C gerührt und mit 0,6 m3/h Luft belüftet. Eine Korrektur des pH-Wertes war während dieser Zeit nicht erforderlich. Am Ende der Fermentationszeit entsprach die antibiotische Wirksamkeit des Kulturmediums 70 mg/1 Fusidinsäure, bestimmt im Agar-Becher-Test gegen Staphylococcus aureus, durch Vergleich mit der Wirksamkeit reiner Fusidinsäure.The invention is explained in more detail using the following examples: Example 1 In a 1.5 m3 fermentation kettle made of stainless steel, with a stirrer, 1.00 m3 of culture medium with the following composition was prepared: Glucose ........................ 20.0 kg Meat and bone meal. . . . . . . . 20.0 kg Corn steep water, 50 % dry substance punch ......................... 2.5 kg Glycerin ........................ 7.5 kg NaCl. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.0 kg MgS04 ......................... 0.05 kg Tap water on. . . . . . . . . . . .... 10001 The culture medium (pH 6.1) was brought to pH 6.5 by adding a dilute NaOH solution, sterilized in the heat and, after cooling, with a culture of Fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki), ATCC 14 700 strain, which was washed in a shaker at 28 ° C. for 48 hours. The contents of the kettle were stirred for 96 hours at 28 ° C and ventilated with 0.6 m3 / h of air. A correction of the pH value was not necessary during this time. At the end of the fermentation period, the antibiotic effectiveness of the culture medium corresponded to 70 mg / 1 fusidic acid, determined in the agar cup test against Staphylococcus aureus, by comparison with the effectiveness of pure fusidic acid.

Das Mycel wurde von dem Kulturmedium abfiltriert, wobei man 7001 Filtrat erhielt. Dessen pH-Wert wurde durch Zugabe einer 25°/jgen Schwefelsäurelösung auf 3,3 gebracht und das Filtrat im Gegenstrom in einem Podbielniak-Extraktionsgefäß mit 2301 Butylacetat extrahiert. Die Butylacetatschicht wurde mit 771 Wasser extrahiert, dem eine 10°/oige NaOH-Lösung bis zu einem pH-Wert der wäßrigen Schicht von 10,0 zugegeben wurde. Die wäßrige Schicht wurde hierauf abgetrennt, deren pH-Wert durch Zugabe von 25°/oiger Schwefelsäure auf 3,2 gebracht und die Lösung mit 401 Methylisobutylketon extrahiert. Die Methylisobutylketonschicht wurde abgetrennt, mit 40 g Aktivkohle behandelt und anschließend im Vakuum bei einer Siedetemperatur von 25°C zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in 500 ml Benzol gelöst und die Lösung über Nacht im Eisschrank belassen, wobei das Benzolsolvatationsprodukt der Fusidinsäure auskristallisierte. Dieses wurde abfiltriert und aus Benzol umkristallisiert, wobei man 12,0 g reines Benzolsolvatationsprodukt der Fusidinsäure, F. 189 bis 189,5°C, erhielt.The mycelium was filtered off from the culture medium, leaving 700 l of filtrate received. Its pH was increased by adding a 25% sulfuric acid solution 3.3 brought and the filtrate in countercurrent in a Podbielniak extraction vessel extracted with 230 l of butyl acetate. The butyl acetate layer was extracted with 77 liters of water, a 10% NaOH solution up to a pH of the aqueous layer of 10.0 was admitted. The aqueous layer was then separated off, the pH of which was reduced Addition of 25% sulfuric acid brought to 3.2 and the solution with 40 l of methyl isobutyl ketone extracted. The methyl isobutyl ketone layer was separated with 40 g of activated carbon treated and then in vacuo at a boiling temperature of 25 ° C to dryness evaporated. The residue was dissolved in 500 ml of benzene and the solution overnight Leave in the refrigerator, whereupon the benzene solvation product of fusidic acid crystallized out. This was filtered off and recrystallized from benzene to give 12.0 g of pure Benzene solvation product of fusidic acid, mp 189-189.5 ° C.

500 mg des Benzolsolvatationsproduktes wurden in 20 ml Wasser suspendiert und durch Zugabe einer wäßrigen 0,5 n-NaOH-Lösung auf einen pH-Wert von 9,0 gebracht. Die Lösung wurde filtriert, dem Filtrat 50 ml n-Butanol zugegeben und das Wasser durch azeotrope Destillation im Vakuum entfernt. Aus dem Rückstand wurde das Natriumsalz durch Zugabe von Äther gefällt, abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. Durch Umkristallisieren aus Äthanol-Aceton erhielt man 360 mg reines, kristallines Natriumsalz.500 mg of the benzene solvation product were suspended in 20 ml of water and brought to a pH of 9.0 by adding an aqueous 0.5N NaOH solution. The solution was filtered, 50 ml of n-butanol were added to the filtrate and the water removed by azeotropic distillation in vacuo. The sodium salt became the residue precipitated by adding ether, filtered off, washed with ether and dried. Recrystallization from ethanol-acetone gave 360 mg of pure, crystalline Sodium salt.

Beispiel 2 Aus einer schrägen Agarkultur im Proberöhrchen wurden Sporen von Fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki), Stamm ATCC 14700 in 31 steriles Kulturmedium der nachstehenden Zusammensetzung eingebracht: Glycerin ........................ 7,5 g/1 Maisquellwasser . . . . . . . . . . . . . . . . . 2,5 g/1 Glucose .................. . ... 10,0 g/1 KH2PO¢ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,6 g/1 Sojabohnenmehl . . . . . . . . . . . . . . . . . 3,0 g/1 NaCI . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4,0 g/1 M9S04 - 7 H20 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,5 g/1 FeS04 7 H20 . . . . . . . . . . : . . . . . . . . 0,005 g/1 CUS04 5 H20 . . . . . . . . . . . ....... 0,004 g/1 Die Kultur wurde aerob bei 27°C 40 bis 60 Stunden in einem hin und her gehenden Schüttelgefäß inkubiert. Das so entstandene Impfmaterial kann direkt zum Impfen eines technischen Fermentationsansatzes verwendet werden. Hier wurde jedoch ein Kulturmedium der nachstehenden Zusammensetzung in einem 700-1-Gefäß geimpft und 40 bis 48 Stunden bei 26°C inkubiert, zur Entwicklung vegetativer Formen des Pilzes, vor der Impfung des Hauptfermentationskessels.Example 2 From an inclined agar culture in the test tube, spores of Fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki), strain ATCC 14700 were introduced into sterile culture medium of the following composition: Glycerine ........................ 7.5 g / 1 Corn steep water. . . . . . . . . . . . . . . . . 2.5 g / 1 Glucose ................... ... 10.0 g / 1 KH2PO ¢. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.6 g / 1 Soybean meal. . . . . . . . . . . . . . . . . 3.0 g / 1 NaCl. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.0 g / 1 M9S04 - 7 H20. . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.5 g / 1 FeS04 7 H20. . . . . . . . . . :. . . . . . . . 0.005 g / 1 CUS04 5 H20. . . . . . . . . . . ....... 0.004 g / 1 The culture was incubated aerobically at 27 ° C. for 40 to 60 hours in a reciprocating shaker. The resulting inoculum can be used directly for inoculating a technical fermentation batch. Here, however, a culture medium of the following composition was inoculated in a 700-1 vessel and incubated for 40 to 48 hours at 26 ° C., for the development of vegetative forms of the fungus, before the inoculation of the main fermentation vessel.

16 0001 Kulturmedium der nachstehenden Zusammensetzung: Glucose ........................ 30 g/1 Glycerin ........................ 5 g/1 KHZPO4 - 2 H20 . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 g/1 NaN03 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 g/1 KCl............................ 0,5 g/1 MgS04 - 7 H20 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,5 g/1 ZnS04 - 6 H20 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 mg/1 Hefeextrakt (Difco) . . . . . . . . . . . . . . 0,12 g/1 wurden auf einen pH-Wert von 7,2 gebracht, in dem Hauptfermentationskessel1/2 Stunde bei 120°C sterilisiert und nach dem Abkühlen mit einer der beiden Arten der Impfsubstanz geimpft. Unter Rühren und Einpressen von etwa 0,51 Luft je Liter Kulturmedium je Minute durch einen Verteiler wurde das Mycel erzeugt und die Fermentation 4 Tage bei 26°C fortgeführt.16 0001 culture medium with the following composition: Glucose ........................ 30 g / 1 Glycerine ........................ 5 g / 1 KHZPO4 - 2 H20. . . . . . . . . . . . . . . . . 5 g / 1 NaN03. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 g / 1 KCl ............................ 0.5 g / 1 MgS04 - 7 H20. . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.5 g / 1 ZnS04 - 6 H20. . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 mg / 1 Yeast extract (Difco). . . . . . . . . . . . . . 0.12 g / 1 were brought to a pH of 7.2, sterilized in the main fermentation vessel for 1/2 hour at 120 ° C and, after cooling, inoculated with one of the two types of inoculant. The mycelium was produced while stirring and forcing in about 0.51 air per liter of culture medium per minute through a distributor and the fermentation was continued at 26 ° C. for 4 days.

Während der ganzen Fermentationsdauer wurde die Aktivität in filtrierten Kulturproben durch Messung der Hemmzone gegen Staphylococcus - aureus im Agarbecherverfahren bestimmt. Nach beendeter Fermentation wurde eine Aktivität entsprechend 150 #tg Fusidinsäure je Milliliter Kulturmedium gefunden.The activity was filtered throughout the fermentation period Culture samples by measuring the zone of inhibition against Staphylococcus aureus in the agar cup method certainly. After the fermentation had ended, an activity corresponding to 150 tg Fusidic acid found per milliliter of culture medium.

Wurden 16 0001 Kulturmedium der Zusammensetzung: Maisquellwasser, 50 °/o . . . . . . . . . . . 2,5 g/1 Sojabohnenmehl oder Fleischmehl . . 10,0 g/1 Saccharose ...................... 30,0 g/1 Glycerin ........................ 7,5 g/1 NaC1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4,0 g/1 KH2PO4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,5 g/1 M9S04. 7 11,0 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,5 g/1 auf einen pH-Wert von 6,80 gebracht, im Fermentationsgefäß 0,5 Stunden bei 120°C sterilisiert, nach dem Abkühlen mit dem obenerwähnten Impfmaterial geimpft und die Fermentation 100 Stunden fortgeführt, so fand man nach dem Agarbecherverfahren eine Fusidinsäurekonzentration von 260 p.g je Milliliter Kulturmedium. Wurden 16 0001 Kulturmedium der Zusammen- setzung: Saccharose ...................... 60,0 g/1 Maisquellwasser, 50 °/o . . . . . . . . . . . . 20,0g/1 KH2P04 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10,0 g/1 MgS04 - 7 H20 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,5g/1 auf einen pH-Wert von 6,8 gebracht, im Fermentationskessel 0,5 Stunden bei 120°C sterilisiert, nach dem Abkühlen mit dem obenerwähnten Impfmaterial geimpft und 100 Stunden unter den oben beschriebenen Bedingungen fermentiert, so betrug die Ausbeute 250 t,g Fusidinsäure je Milliliter Kulturmedium.Were 16 0001 culture medium of the composition: Corn steep water, 50 per cent. . . . . . . . . . . 2.5 g / 1 Soybean meal or meat meal. . 10.0 g / 1 Sucrose ...................... 30.0 g / 1 Glycerine ........................ 7.5 g / 1 NaC1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.0 g / 1 KH2PO4. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.5 g / 1 M9S04. 7 11.0. . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.5 g / 1 brought to a pH value of 6.80, sterilized in the fermentation vessel for 0.5 hours at 120 ° C, inoculated after cooling with the above-mentioned inoculum and the fermentation continued for 100 hours, a fusidic acid concentration of 260 pg each was found by the agar cup method Milliliters of culture medium. Were 16 0001 culture medium from the setting: Sucrose ...................... 60.0 g / 1 Corn steep water, 50 per cent. . . . . . . . . . . . 20.0g / 1 KH2P04. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10.0 g / 1 MgS04 - 7 H20. . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.5g / 1 brought to a pH of 6.8, sterilized in the fermentation kettle for 0.5 hours at 120 ° C, inoculated after cooling with the above-mentioned inoculum and fermented for 100 hours under the conditions described above, the yield was 250 t, g of fusidic acid per milliliter of culture medium.

Claims

Claim: Process for the production of the new antibiotic ZN-6 (fusidic acid), d a d u r c h g e -k e n n n z e i c h n c t that one fusidium coccineum Fuck (K. Tubaki), strain ATCC 14 700, cultivates in the usual biological way and the fusidic acid formed is isolated from the culture medium.