DE1059914B

DE1059914B - Process for the production of peptides

Info

Publication number: DE1059914B
Application number: DEF23579A
Authority: DE
Inventors: Dr Friedrich Weygand; Dipl-Ing Wolfgang Steglich
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1957-07-25
Filing date: 1957-07-25
Publication date: 1959-06-25

Description

Verfahren zur Herstellung von Peptiden Zur Synthese von definierten, optisch aktiven Peptiden hat sich die Umsetzung von Aminosäureaziden oder Peptidaziden, deren Aminogruppen in geeigneter Weise geschützt sind, mit den Estern oder Salzen von Aminosäuren bzw. Peptiden insofern besonders bewährt, weil dabei praktisch keine Racemisierung eintreten kann. Solche Azide wurden entweder aus den Estern durch Umsetzung mit Hydrazin und Behandlung der zunächst entstehenden Hydrazide mit salpetriger Säure oder aus den Säurechloriden durch Umsetzung mit Natriumazid oder Dicyclohexylammoniumazid erhalten. K. Hofmann und Mitarbeiter (J. Am. Chem. Soc., 74 [19521_ S. 470) gewannen Hydrazide von Phthalyl-, Carbobenzoxy-, p-Toluolsulfonyl- und Benzoyl-aminosäuren auch aus den Carbobenzoxyhydraziden durch reduktive Abspaltung des Carbobenzoxyrestes.Process for the production of peptides For the synthesis of defined, optically active peptides, the implementation of amino acid azides or peptide azides, whose amino groups are suitably protected with the esters or salts of amino acids or peptides to the extent that it is particularly effective because there are practically none Racemization can occur. Such azides were made either from the esters Reaction with hydrazine and treatment of the hydrazides initially formed with nitrous Acid or from the acid chlorides by reaction with sodium azide or dicyclohexylammonium azide obtain. K. Hofmann et al. (J. Am. Chem. Soc., 74 [19521_ p. 470) won Hydrazides of phthalyl, carbobenzoxy, p-toluenesulfonyl and benzoyl amino acids also from the carbobenzoxyhydrazides by reductive cleavage of the carbobenzoxy radical.

Es wurde nun gefunden, daß man Peptide ohne Gefahr einer Racemisierung und mit sehr guten Ausbeuten erhält, wenn man Verbindungen der allgemeinen Formel R-NH-X-COOH (I) worin R eine bei Peptidsynthesen gebräuchliche Schutzgruppe, vorzugsweise den Trifluoracetylrest, darstellt oder deren reaktionsfähige Derivate, vorzugsweise entsprechende Azide, mit Verbindungen der allgemeinen Formel HZN-X-CO-NH-NH-C (C,HS)3 (II) zur Umsetzung bringt, wobei in beiden Formeln X für eine beliebige Aminosäure- oder Peptidgruppierung steht. Vorteilhaft stellt man die als Ausgangsstoffe verwendeten Verbindungen der Formel (1I) in der Weise her, daß man Verbindungen der allgemeinen Formel CF3-CO-NH-X-COOH (III) mit Tritylhydrazin in Gegenwart eines Kondensationsmittels, wie Dicyclohexylcarbodiimid, umsetzt und anschließend die erhaltenen Tritylhydrazide zur Abspaltung des Trifluoracetylrestes mit alkoholischen Laugen behandelt.It has now been found that peptides can be obtained without the risk of racemization and obtained in very good yields when compounds of the general formula R-NH-X-COOH (I) in which R is a protective group customary in peptide syntheses, preferably represents the trifluoroacetyl radical, or their reactive derivatives, preferably corresponding azides, with compounds of the general formula HZN-X-CO-NH-NH-C (C, HS) 3 (II) brings to implementation, where in both formulas X stands for any amino acid or peptide moiety. It is advantageous to provide those used as starting materials Compounds of the formula (1I) prepared in such a way that compounds of the general Formula CF3-CO-NH-X-COOH (III) with tritylhydrazine in the presence of a condensing agent, such as dicyclohexylcarbodiimide, and then the tritylhydrazides obtained treated with alcoholic alkalis to split off the trifluoroacetyl radical.

Die erfolgreiche Durchführung von Peptidsynthesen ist bekanntlich von der Wahl geeigneter Schutzgruppen für die Aminogruppen einerseits und die Carboxylgruppen andererseits abhängig. Nach dem Verfahren gemäß der Erfindung können zur vorübergehenden Blockierung der Aminogruppe die zu diesem Zweck gebräuchlichen Gruppierungen, wie die Carbobenzoxygruppe, Phthalylgruppe oder der Tosylrest, verwendet werden. Mit besonderem Vorteil verwendet man jedoch den in einfacher Weise wieder zu eliminierenden Trifluoracetylrest. Zur vorübergehenden Blockierung der Carboxylgruppe wird nach dem Verfahren gemäß der Erfindung der Tritylhydrazinrest verwendet, der einerseits sehr leicht abspaltbar und andererseits auch in einfacher Weise in die Azidgruppierung überführbar ist.It is well known that peptide syntheses can be carried out successfully on the choice of suitable protective groups for the amino groups on the one hand and the carboxyl groups on the other hand dependent. According to the method according to the invention can be used for temporary Blocking of the amino group, the groupings customary for this purpose, such as the carbobenzoxy group, phthalyl group or the tosyl group can be used. With However, it is particularly advantageous to use that which can be eliminated again in a simple manner Trifluoroacetyl radical. For the temporary blocking of the carboxyl group is after the method according to the invention of the tritylhydrazine used, the one hand very easily split off and, on the other hand, also in a simple manner into the azide group is transferable.

Man kann von den durch Umsetzung von Verbindungen der Formel (III) mit Tritylhydrazin erhältlichen Verbindungen der allgemeinen Formel CF3-CO-N H-X-CO-NH-NH-C(C,H5)3 (IV) ausgehen. Diese können einerseits mit Hilfe von Säuren in das entsprechende N-Trifluoracetyl-aminosäurehydrazidsalz und dieses mit salpetriger Säure in N-Trifluoracetylaminosäureazid (V) und andererseits mit Hilfe verdünnter Laugen unter Abspaltung des Trifluoracetylrestes in das entsprechende Aminosäuretritylhydrazid (II) übergeführt werden. Die in dieser Weise erhältlichen Verbindungen der allgemeinen Formel CF3-CO-NH-X-CO-N3 (V) und der Formel (II) werden nunmehr vereinigt, wobei nach längerem Stehenlassen bei Zimmertemperatur oder mäßig erniedrigter Temperatur Kondensation zu den entsprechenden N-Trifluoracetyl-peptid-tritylhydrazinen erfolgt. Man kann auf die erhaltene Verbindung die vorstehend beschriebenen Reaktionen, also einerseits die Säurebehandlung mit anschließender Überführung des Tritylhydrazidsalzes in das entsprechende Azid, andererseits die basische Behandlung zur Abspaltung des Trifluoracetylrestes und die Kondensation der nach beiden Wegen erhältlichen Verbindungen beliebig oft anwenden.One can of the reaction of compounds of the formula (III) Compounds of the general formula CF3-CO-N H-X-CO-NH-NH-C (C, H5) 3 obtainable with tritylhydrazine (IV) go out. These can on the one hand with the help of acids in the appropriate N-trifluoroacetylamino acid hydrazide salt and this with nitrous acid in N-trifluoroacetylamino acid azide (V) and on the other hand with the aid of dilute alkalis with elimination of the trifluoroacetyl radical be converted into the corresponding amino acid trityl hydrazide (II). The one in this Compounds of the general formula CF3-CO-NH-X-CO-N3 (V) and of formula (II) are now combined, after prolonged standing at room temperature or moderately reduced temperature condensation to the corresponding N-trifluoroacetyl-peptide-tritylhydrazines he follows. The reactions described above can be applied to the compound obtained, So on the one hand the acid treatment with subsequent conversion of the trityl hydrazide salt in the corresponding azide, on the other hand the basic treatment to split off the Trifluoroacetyl radical and the condensation of the compounds obtainable by both routes use as often as you like.

Die vorstehend beschriebene Ausführungsform des Verfahrens gemäß der Erfindung beruht also darauf, daß durch Säurebehandlung von N-Trifluoracetyl-aminosäure- bzw. -peptid-tritylhydraziden nur der Tritylrest abgespalten und das entsprechende Hydrazidsalz erhalten wird, welches in üblicher Weise in das entsprechende Azid überführbar ist. Der Tritylhydrazinrest erfüllt also einen doppelten Zweck, indem er nicht nur an Stelle der bisher üblichen Estergruppe zur vorübergehenden Blockierung der Carboxylgruppe dient, sondern auch besonders leicht über die Hydrazidgruppe zur Einführung der Azidgruppe geeignet ist. Durch Behandeln mit verdünnten Laugen wird aus den N-Trifluoracetylaminosäure-tritylhydraziden nur der Trifluoracetylrest leicht abgespalten, wobei die freien Aminosäuretritylhydrazide entstehen, die an Stelle der sonst bei Peptidsynthesen üblichen Aminosäureester eingesetzt werden.The above-described embodiment of the method according to Invention is based on the fact that by acid treatment of N-trifluoroacetyl-amino acid- or peptide tritylhydrazides only split off the trityl residue and the corresponding one Hydrazide salt is obtained, which in the usual manner in the corresponding Azide is transferable. The tritylhydrazine residue thus serves a double purpose in that it not only replaces the previously customary ester group for temporary blocking the carboxyl group, but also particularly easily via the hydrazide group is suitable for introducing the azide group. By treating with diluted alkalis the N-trifluoroacetylamino acid tritylhydrazides only becomes the trifluoroacetyl radical easily split off, forming the free amino acid tritylhydrazides, which at Instead of the amino acid esters usually used in peptide syntheses.

Nach einer weiteren Ausführungsform des Verfahrens gemäß der Erfindung kann man die durch Behandeln mit Laugen aus den N-Trifluoracetyl-aminosäure-tritylhydraziden erhaltenen freien Aminosäuretritylhydrazide auch direkt mit N-Trifluoracetyl-aminosäuren oder deren anderen reaktionsfähigen Derivaten als Azide zur Umsetzung bringen. Man vereinigt die Reaktionskomponenten zweckmäßig in Gegenwart eines Kondensationsmittels, wie Dicyclohexylcarbodiimid oder Äthylenchlorphosphit, und läßt das Reaktionsgemisch längere Zeit bei Zimmertemperatur oder bei mäßig erniedrigter Temperatur stehen. Man erhält auf diese Weise ebenfalls wieder das entsprechende Dipeptid, dessen Aminogruppe durch den Trifluoracetylrest und dessen Carboxylgruppe durch den Tritylhydrazinrest blockiert ist. Durch weitere Umsetzung dieses Dipeptids, aus dem zunächst - wie vorstehend beschrieben - durch Behandeln mit Laugen wieder die Trifluoracetylgruppe abgespalten wird, mit anderen Aminosäuren oder Peptiden, deren Aminogruppe trifluoracetyliert ist, lassen sich durch geeignete Kombination je nach Wunsch höhenmolekulare Peptide aus gleichen oder verschiedenen Aminosäuren oder Peptiden aufbauen.According to a further embodiment of the method according to the invention can be obtained by treating with alkalis from the N-trifluoroacetyl-amino acid tritylhydrazides obtained free amino acid tritylhydrazide also directly with N-trifluoroacetylamino acids or bring their other reactive derivatives to the reaction as azides. Man conveniently combines the reaction components in the presence of a condensing agent, such as dicyclohexylcarbodiimide or ethylene chlorophosphite, and leaves the reaction mixture stand for a long time at room temperature or at a moderately reduced temperature. In this way, the corresponding dipeptide and its amino group are likewise obtained again through the trifluoroacetyl radical and its carboxyl group through the tritylhydrazine radical is blocked. By further implementation of this dipeptide, from which initially - how described above - again the trifluoroacetyl group by treatment with alkalis is split off, with other amino acids or peptides, the amino group of which is trifluoroacetylated high molecular weight peptides can be obtained by suitable combination as required from the same or different amino acids or peptides.

Soll eine Peptidsynthese beendet werden, so setzt man zweckmäßigerweise zuletzt ein N-Trifluoracetyl-peptidazid mit einem Aminosäure- oder Peptidester um und spaltet schließlich den Trifluoracetylrest mit verdünnten Laugen ab, wobei gleichzeitig auch die Estergruppe verseift wird.If a peptide synthesis is to be ended, it is expedient to use finally an N-trifluoroacetyl peptide azide with an amino acid or peptide ester and finally cleaves the trifluoroacetyl radical with dilute alkalis, and at the same time the ester group is also saponified.

Das Verfahren gemäß der Erfindung läßt sich also zur Synthese von beliebig aufgebauten Peptiden der sogenannten neutralen Aminosäuren einschließlich Asparagin und Glutamin ohne weiteres verwenden. Sollen sogenannte saure oder basische Aminosäuren in die Peptidkette eingebaut werden, so hat man durch Wahl der üblichen Gruppen die Möglichkeit, diese trifunktionellen Aminosäuren durch Blockierung einer funktionellen Gruppe bifunktionell zu gestalten, so daß sie als neutrale Aminosäuren für die Peptidsynthese vorliegen.The method according to the invention can thus be used for the synthesis of Peptides of the so-called neutral amino acids with any structure, including Use asparagine and glutamine without further ado. Shall so-called acidic or basic Amino acids are built into the peptide chain, so one has by choosing the usual Groups the possibility of these trifunctional amino acids by blocking one functional group bifunctional, so that they can be used as neutral amino acids for peptide synthesis are available.

Bei der Wahl der Blockierungsgruppen für die dritte funktionelle Gruppe ist lediglich darauf zu achten, daß sie durch verdünnte Laugen oder durch milde Säureeinwirkung nicht abgespalten werden. Zahlreiche solcher Gruppen, die nach beendeter Peptidsynthese wieder abgespalten werden können, ohne daß die Peptidbindung angegriffen wird, sind bekannt. So kann eine Carboxylgruppe von Asparaginsäure oder Glutaminsäure mit Benzylalkohol verestert werden, die (o-ständige Aminogruppe von Lysin oder Ornithin kann tosyliert werden. Arginin kann in Form von Nitroarginin eingesetzt werden, und Cystein kann als S-Benzylcystein verwendet werden.When choosing the blocking groups for the third functional group you just have to make sure that they are washed with diluted alkaline solutions or with mild Exposure to acids cannot be split off. Numerous such groups that after ended Peptide synthesis can be split off again without the peptide bond being attacked is known. So can be a carboxyl group of aspartic acid or glutamic acid esterified with benzyl alcohol, the (o-position amino group of lysine or ornithine can be tosylated. Arginine can be used in the form of nitroarginine, and cysteine can be used as S-benzylcysteine.

Bei den vorstehenden Ausführungen wurde als vorteilhaftes Beispiel für die Blockierung der Aminogruppe der Trifluoracetylrest angegeben-. Selbstverständlich können auch die anderen obenerwähnten, für Peptidsynthesen gebräuchlichen Schutzgruppen an dessen Stelle treten, soweit sie unter Bedingungen abspaltbar sind, unter denen der Tritylhydrazinrest erhalten bleibt, bzw. unter Bedingungen, unter denen die jeweilige Schutzgruppe nicht verändert und der Tritylhydrazinrest abgespalten wird.In the above, as an advantageous example for the blocking of the amino group, the trifluoroacetyl radical is indicated. Of course can also use the other protective groups mentioned above which are customary for peptide syntheses take their place, insofar as they can be split off under conditions under which the tritylhydrazine residue is retained, or under conditions under which the respective protecting group is not changed and the tritylhydrazine residue is split off.

I. Herstellung der als Ausgangsstoffe verwendeten N-Trifluoracetyl-aminosäure-tritylhydrazide Allgemeine Vorschrift 10 mMol N-Trifluoracetyl-aminosäure werden zu einer Lösung von 12 mMol Tritylhydrazin, erhalten durch Umsetzung von Tritylhydrazin-hydrochlorid mit der berechneten Menge Triäthylamin in Tetrahydrofuran und Abfiltrieren des gebildeten Triäthylammoniumchlorids, in 30 ccm Tetrahydrofuran gegeben und mit 12 mMol Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Die Lösung wird 2 bis mehrere Tage bei Zimmertemperatur, zuletzt einige Stunden im Eisschrank stehengelassen, worauf der ausgeschiedene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert wird. Nach Waschen mit etwas Tetrahydrofuran werden die vereinigten Filtrate im Vakuum vom Lösungsmittel befreit; der Rückstand wird in Essigester aufgenommen. Dabei, eventuell auch erst beim darauffolgenden Waschen, scheidet sich meist noch eine kleine Menge Dicyclohexylharnstoff ab. Die Lösung wird mit Wasser, 3°/oiger Natriumbicarbonatlösung, 0,5 n-Salzsäure und Wasser gewaschen und mit Magnesiumsulfat oder Natriumsulfat getrocknet. Beim Verdampfen bleibt ein in vielen Fällen kristallisierender Rückstand, das gesuchte N-Trifluoracetyl-aminosäure-tritylhydrazid, zurück, der durch Umkristallisieren aus Benzol-Petroläther gereinigt wird. Die rohen N-Trifluoracetyl-aminosäure-tritylhydrazide enthalten in manchen Fällen größere Mengen Triphenylcarbinol als Verunreinigung, besonders dann, wenn man von ungereinigten N-Trifluoracetyl-aminosäuren ausgeht, die aber bei der weiteren Peptidsynthese nicht stören. Die Verbindungen schmelzen meist unter Zersetzung.I. Preparation of the N-trifluoroacetylamino acid tritylhydrazide used as starting materials General instructions 10 mmol of N-trifluoroacetyl-amino acid become a solution of 12 mmol of tritylhydrazine, obtained by reacting tritylhydrazine hydrochloride with the calculated amount of triethylamine in tetrahydrofuran and filtering off the formed Triethylammonium chloride, given in 30 cc of tetrahydrofuran and with 12 mmol of dicyclohexylcarbodiimide offset. The solution is 2 to several days at room temperature, last some Left to stand in the refrigerator for hours, whereupon the excreted dicyclohexylurea is filtered off. After washing with a little tetrahydrofuran, the combined are The filtrates are freed from the solvent in vacuo; the residue is taken up in ethyl acetate. In doing so, possibly not until the next wash, they usually divorce a small amount of dicyclohexylurea. The solution is diluted with water, 3% Sodium bicarbonate solution, 0.5N hydrochloric acid and water and washed with magnesium sulfate or dried sodium sulfate. During evaporation, in many cases one which crystallizes remains Residue, the sought-after N-trifluoroacetyl-amino acid-tritylhydrazide, back that is purified by recrystallization from benzene petroleum ether. The crude N-trifluoroacetyl amino acid trityl hydrazide in some cases contain larger amounts of triphenylcarbinol as an impurity, especially if you start from unpurified N-trifluoroacetyl-amino acids, but which do not interfere with the further peptide synthesis. The connections melt mostly with decomposition.

a) N-Trifluoracetyl-glycin-tritylhydrazid 1,71 g N-Trifluoracetyl-glycin, 3,72 g Tritylhydrazinhydrochlorid, 1,67 ccm Triäthylamin und 2,48 g Dicyclohexylcarbodiimid werden nach der vorstehenden Vorschrift umgesetzt. Der Rückstand kristallisiert nach Abdestillieren des Essigesters sofort. Die Ausbeute an Rohprodukt beträgt 3,11 g (730/, der Theorie) ; Schmelzpunkt 154 bis 157° C, nach Umkristallisieren aus Benzol-Petroläther 178 bis 180° C (Zersetzung).a) N-Trifluoroacetyl-glycine-tritylhydrazide 1.71 g of N-trifluoroacetyl-glycine, 3.72 g of tritylhydrazine hydrochloride, 1.67 ccm of triethylamine and 2.48 g of dicyclohexylcarbodiimide are reacted according to the above procedure. The residue crystallizes immediately after the ethyl acetate has been distilled off. The yield of crude product is 3.11 g (730% of theory); Melting point 154 to 157 ° C, after recrystallization from benzene petroleum ether 178 to 180 ° C (decomposition).

C23H2002N3F3 (427,4) Berechnet ..... C6,1,63, H4,71, N 9,82; gefunden ..... C64,68, H5,15, N10,00. b) N-Trifluoracetyl-L-valin-tritylhydrazid 3,37 g N-Trifluoracetyl-L-valin, 5,90 g Tritylhydrazinhydrochlorid, 2,64 ccm Triäthylamin und 3,92 g Dicyclohexylcarbodiimid werden nach der vorstehenden Vorschrift umgesetzt. Der Rückstand kristallisiert bereits nach dem Verdampfen des Tetrahydrofurans. Die Ausbeute an Rohprodukt beträgt 6,64 g (88 °/o der Theorie) ; Schmelzpunkt 144 bis 145° C. Umkristallisieren aus Benzol-Petroläther ergibt 3,82 g (510/, der Theorie) reines N-Trifluoracetyl-L-valin-tritylhydrazid in Form langer Nadeln vom Schmelzpunkt 174° C (sintern bei 170° C) ; [a]D = -36,0° (c = 1,5 in Äthanol).C23H2002N3F3 (427.4) Calculated ..... C6.1.63, H4.71, N 9.82; found ..... C64.68, H5.15, N10.00. b) N-trifluoroacetyl-L-valine-tritylhydrazide 3.37 g of N-trifluoroacetyl-L-valine, 5.90 g of tritylhydrazine hydrochloride, 2.64 cc of triethylamine and 3.92 g of dicyclohexylcarbodiimide are reacted according to the above procedure. The residue already crystallizes after the tetrahydrofuran has evaporated. The yield of crude product is 6.64 g (88% of theory); Melting point 144 to 145 ° C. Recrystallization from benzene petroleum ether gives 3.82 g (510 /, of theory) of pure N-trifluoroacetyl-L-valine trityl hydrazide in the form of long needles with a melting point of 174 ° C (sinter at 170 ° C) ; [a] D = -36.0 ° (c = 1.5 in ethanol).

C2sH2,02N#.F3 (469,5) Berechnet ..... C66,49, H5,58, N8,95; gefunden ..... C66,59, H5,55, N9,04. C2sH2.02N # .F3 (469.5) Calculated ..... C66.49, H5.58, N8.95; found ..... C66.59, H5.55, N9.04.

c) N-Trifluoracetyl-L-leucin-tritylhydrazid 1,13 g N-Trifluoracetyl-L-leucin (Rohprodukt), 1,86 g Tritylhydrazin-hydrochlorid, 0,84 ccm Triäthylamin und 1,24 g Dicyclohexylcarbodümid werden nach der vorstehenden Vorschrift umgesetzt. Der Rückstand kristallisiert nach dem Abdampfen des Essigesters. Aus Benzol-Petroläther umkristallisiert erhält man 1 g (40 0/6 der Theorie) reines N-Trifluoracetyl-L-leucin-tritylhydrazid in Form langer, seidig glänzender Nadeln vom Schmelzpunkt 162 bis 163° C. Nach nochmaligem Umkristallisieren beträgt der Schmelzpunkt 170 bis 171° C (unter Zersetzung); [a]10 = -34,0° (c = 1,5 in Äthanol).c) N-trifluoroacetyl-L-leucine trityl hydrazide 1.13 g of N-trifluoroacetyl-L-leucine (Crude product), 1.86 g of tritylhydrazine hydrochloride, 0.84 ccm of triethylamine and 1.24 g of dicyclohexylcarbodiimide are reacted according to the above procedure. Of the The residue crystallizes after the ethyl acetate has been evaporated off. From benzene petroleum ether recrystallized, 1 g (40% of theory) of pure N-trifluoroacetyl-L-leucine tritylhydrazide is obtained in the form of long, silky shiny needles with a melting point of 162 to 163 ° C. After another When recrystallized, the melting point is 170 to 171 ° C (with decomposition); [a] 10 = -34.0 ° (c = 1.5 in ethanol).

C27H2802N3F3 (483,5) Berechnet ..... C67,06, H5,80, N8,69; gefunden ..... C66,92, H5,84, N9,09. C27H2802N3F3 (483.5) Calculated ..... C67.06, H5.80, N8.69; found ..... C66.92, H5.84, N9.09.

d) N-Trifluoracetyl-L-prolin-tritylhydrazid 1,26 g N-Trifluoracetyl-L-prolin (6,1 mMol), 1,02 ccm Triäthylamin (7,3 mMol) und 1,51 g Dicyclohexylcarbodümid werden in 20 ccm Tetrahydrofuran nach der vorstehenden Vorschrift umgesetzt. Nach dem Abdampfen des Tetrahydrofurans wird der Rückstand in Aceton gelöst und mit Wasser versetzt, bis das gebildete Acetontritylhydrazon vom Schmelzpunkt 122° C ausfällt. Es wird abfiltriert, worauf die Lösung im Vakuum, zuletzt unter Zusatz von etwas Benzol, eingedampft wird. Der Rückstand wird in Diisopropyläther aufgenommen, wobei das N-Trifluoracetyl-L-prolin-tritylhydrazid in einer Ausbeute von 65 bis 706/o der Theorie auskristallisiert. Nach mehrmaligem Umkristallisieren aus Benzol-Petroläther lange N ädelchen vom Schmelzpunkt 171 bis 171,5° C; [all' = -46,0° (c = 3 in Tetrahydrofuran). C26H2402N3F3 (467,5) Berechnet ..... C66,82, H5,19, N8,99; gefunden ..... C66,56, H5,31, N9,12. d) N-Trifluoroacetyl-L-proline-tritylhydrazide 1.26 g of N-trifluoroacetyl-L-proline (6.1 mmol), 1.02 ccm of triethylamine (7.3 mmol) and 1.51 g of dicyclohexylcarbodiimide are in 20 ccm Tetrahydrofuran implemented according to the above procedure. After the tetrahydrofuran has evaporated, the residue is dissolved in acetone and water is added until the acetone tritylhydrazone formed, melting at 122 ° C., precipitates. It is filtered off, whereupon the solution is evaporated in vacuo, finally with the addition of a little benzene. The residue is taken up in diisopropyl ether, the N-trifluoroacetyl-L-proline-tritylhydrazide crystallizing out in a yield of 65 to 706% of theory. After repeated recrystallization from benzene petroleum ether, long needles with a melting point of 171 to 171.5 ° C .; [all '= -46.0 ° (c = 3 in tetrahydrofuran). C26H2402N3F3 (467.5) Calculated ..... C66.82, H5.19, N8.99; found ..... C66.56, H5.31, N9.12.

e) a-N-Trifluoracetyl-E-N'-tosyl-L-lysin-tritylhydrazid 3,25g a-N-Trifluoracetyl-s-N'-tosyl-L-lysin, 2,8g Tritylhydrazin-hydrochlorid, 1,24 ccm Triäthylamin und 1,87 g Dicyclohexylcarbodümid werden in 30 ccm Tetrahydrofuran nach der vorstehenden Vorschrift umgesetzt. Nach dem Abdampfen des Essigesters beträgt die Rohausbeute 4,1 g (766/6 der Theorie). Nach dreimaligem Umfällen aus Benzol-Petroläther liegt der Schmelzpunkt bei 98 bis 103° C (unter Zersetzung). Die Verbindung ist nicht analysenrein, kann aber ohne weiteres zu Peptidsynthesen eingesetzt werden; [a;10 = - 20,4° (c = 1,1 in Äthanol).e) a-N-Trifluoroacetyl-E-N'-tosyl-L-lysine-tritylhydrazide 3.25g a-N-Trifluoroacetyl-s-N'-tosyl-L-lysine, 2.8 g of tritylhydrazine hydrochloride, 1.24 cc of triethylamine and 1.87 g of dicyclohexylcarbodiimide are reacted in 30 cc of tetrahydrofuran according to the above procedure. To After evaporation of the ethyl acetate, the crude yield is 4.1 g (766/6 of theory). After three reprecipitations from benzene petroleum ether, the melting point is 98 bis 103 ° C (with decomposition). The connection is not analytically pure, but can do without it can also be used for peptide syntheses; [a; 10 = -20.4 ° (c = 1.1 in ethanol).

f) N-Trifluoracetyl-DL-alanin-tritylhydrazid 3,7 g N-Trifluoracetyl-DL-alanin (20 mMol) werden mit 6,21 g Tritylhydrazin-hydrochlorid (20 mMol) vermischt und in 20 ccm Diäthylphosphit suspendiert. Nach Zugabe von 6,6 ccm Triäthylamin (48 mMol) wird die Lösung 30 Minuten gut gerührt. Nach Versetzen mit 2,23 ccm Äthylenchlorphosphit (22 mMol) wird 30 Minuten unter Rühren auf dem `'Wasserbad erhitzt. Nach Zugabe von etwa 150 ccm Wasser zu der abgekühlten Lösung scheidet sich ein wachsartiger, gelblicher Niederschlag ab, der mit 5°/jger Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen und bei 60° C getrocknet wird. Die Ausbeute an Rohprodukt beträgt 5,1 g (58"/, der Theorie) ; Schmelzpunkt nach zweimaligem Umkristallisieren aus Äthanol-Wasser 181° C (unter Zersetzung).f) N-trifluoroacetyl-DL-alanine-tritylhydrazide 3.7 g of N-trifluoroacetyl-DL-alanine (20 mmol) are mixed with 6.21 g of tritylhydrazine hydrochloride (20 mmol) and suspended in 20 cc of diethyl phosphite. After adding 6.6 cc of triethylamine (48 mmol) the solution is stirred well for 30 minutes. After adding 2.23 ccm of ethylene chlorophosphite (22 mmol) is heated on the '' water bath for 30 minutes while stirring. After adding from about 150 ccm of water to the cooled solution, a waxy, yellowish precipitate, which was washed with 5% sodium bicarbonate solution and water and dried at 60 ° C. The yield of crude product is 5.1 g (58 "/, der Theory); Melting point after recrystallization twice from ethanol-water 181 ° C (with decomposition).

C24H2202N3F3 (441,4) Berechnet ..... N 9,52; gefunden ..... N 9,42. II. Herstellung von Dipeptiden Beispiel 1 N-Trifluoracetyl-glycyl-DL-alanin-tritylhydrazid 0,627g (1,42 mMol) N-Trifluoracetyl-DL-alanin-tritylhydrazid, erhalten nach der unter I, f) angegebenen Vorschrift, werden mit 5 ccm Äthanol und 1 ccm 2n-Natronlauge versetzt und 20 Minuten auf 50° C erwärmt. Nach Zugabe von wenig Wasser wird die Lösung dreimal mit insgesamt 70 ccm Äther-Essigester ausgeschüttelt. Nach dem Trocknen mit Natriumsulfat werden die Lösungsmittel im Vakuum verdampft. Es hinterbleibt ein zäher Sirup. Dieser wird in 2 ccm Diäthylphosphit gelöst und nacheinander mit 0,206 g (1,2 mMol) N-Trifluoracetylglycin, 0,216 ccm Triäthylamin und 0,134 ccm Äthylenchlorphosphit versetzt. Nach 1stündigem Erhitzen auf dem Wasserbad werden zur abgekühlten Lösung 30 ccm Wasser gegeben, wobei auf 0° C gekühlt wird. Es scheidet sich eine gelbliche, wachsartige Masse ab, die nach Waschen mit 36/jger Natriumbicarbonatlösung kristallisiert. Die Ausbeute beträgt 0,501 g (710/, der Theorie). Zur Analyse «drd zweimal aus Essigester-n-Hexan umkristallisiert; Schmelzpunkt 198 bis 200° C (unter Zersetzung).C24H2202N3F3 (441.4) Calculated ..... N 9.52; found ..... N 9.42. II. Preparation of dipeptides Example 1 N-trifluoroacetyl-glycyl-DL-alanine-tritylhydrazide 0.627 g (1.42 mmol) of N-trifluoroacetyl-DL-alanine-tritylhydrazide, obtained according to the instructions given under I, f), are given with 5 cc of ethanol and 1 cc of 2N sodium hydroxide solution are added and the mixture is heated to 50 ° C for 20 minutes. After adding a little water, the solution is extracted three times with a total of 70 ccm of ether-ethyl acetate. After drying with sodium sulfate, the solvents are evaporated in vacuo. A viscous syrup remains. This is dissolved in 2 cc of diethyl phosphite and 0.206 g (1.2 mmol) of N-trifluoroacetylglycine, 0.216 cc of triethylamine and 0.134 cc of ethylene chlorophosphite are added one after the other. After heating for 1 hour on the water bath, 30 cc of water are added to the cooled solution, cooling to 0 ° C. A yellowish, waxy mass separates out, which crystallizes after washing with 36% sodium bicarbonate solution. The yield is 0.501 g (710 /, of theory). For analysis, it was recrystallized twice from ethyl acetate-n-hexane; Melting point 198 to 200 ° C (with decomposition).

CS6H2503N4F3 (498,5) Berechnet ..... C 62,64, H 5,05, N 11,24; gefunden ..... C 62,18, H 5,18, N 10,96. Beispiel 2 N-Trifluoracetyl-glycyl-(s-N'-tosyl-L-lysin-tritylhydrazid) 2,511 g (4 mMol) a-N-Trifluoracetyl-(s-N'-tosyl L-lysintritylhydrazid), hergestellt nach der unter I, e) angegebenen Vorschrift, werden mit 25 ccm 2n-Natronlauge versetzt und 10 Minuten auf 50° C erwärmt. Dabei scheidet sich allmählich eine sirupöse Masse aus. Die Lösung wird noch 30 Minuten bei Zimmertemperatur stehengelassen und anschließend mit 60 ccm Essigester in drei Anteilen ausgeschüttelt. Die vereinigten Extrakte werden mit Wasser gewaschen und mit Magnesiumsulfat getrocknet. Beim Verdampfen des Lösungsmittels hinterbleibt ein schaumig erstarrender, Ninhydrinpositiv und alkalisch reagierender Rückstand, das s-N'-Tosyl-L-lysintritylhydrazid. Dieser wird in 20 ccm Tetrahydrofuran gelöst, mit 0,634 g (3,7 mMol) N-Trifluoracetylglycin und 0,910 g Dicyclohexylcarbodümid versetzt und 3 Tage bei Zimmertemperatur stehengelassen. Nach dem Abtrennen des ausgefallenen Dicyclohexylharnstoffs und Abdestillieren des Lösungsmittels wird aus Benzol-Petroläther umkristallisiert. Die Ausbeute beträgt 1,88 g (66,66/6 der Theorie, bezogen auf das eingesetzte Lysinderivat) ; Schmelzpunkt 106° C. Durch Umkristallisieren kann der Schmelzpunkt bis auf 114 bis 115° C (unter Zersetzung) gesteigert werden.CS6H2503N4F3 (498.5) Calculated ..... C 62.64, H 5.05, N 11.24; Found ..... C 62.18, H 5.18, N 10.96. Example 2 N-trifluoroacetyl-glycyl- (s-N'-tosyl-L-lysine-tritylhydrazide) 2.511 g (4 mmol) of aN-trifluoroacetyl- (s-N'-tosyl L-lysine trityl hydrazide), prepared according to the under I, e) specified instructions, 25 ccm of 2N sodium hydroxide solution are added and the mixture is heated to 50 ° C. for 10 minutes. A syrupy mass gradually separates out. The solution is left to stand for a further 30 minutes at room temperature and then shaken out in three parts with 60 cc of ethyl acetate. The combined extracts are washed with water and dried with magnesium sulfate. When the solvent evaporates, a foamy, solidifying, ninhydrin-positive and alkaline-reacting residue remains, the s-N'-tosyl-L-lysine trityl hydrazide. This is dissolved in 20 cc of tetrahydrofuran, 0.634 g (3.7 mmol) of N-trifluoroacetylglycine and 0.910 g of dicyclohexylcarbodiimide are added and the mixture is left to stand for 3 days at room temperature. After the precipitated dicyclohexylurea has been separated off and the solvent has been distilled off, it is recrystallized from benzene petroleum ether. The yield is 1.88 g (66.66 / 6 of theory, based on the lysine derivative used); Melting point 106 ° C. The melting point can be increased to 114 to 115 ° C. (with decomposition) by recrystallization.

Beispiel 3 N-Trifluoracetyl-L-prolyl-L-valin-tritylhydrazid 2,59g (5,5 mMol) N-Trifluoracetyl-L-valin-tritylhydrazid, hergestellt nach der unter I, b) angegebenen Vorschrift, werden in 20 ccm Äthanol gelöst und mit 11 ccm 1 n-Natronlauge versetzt. Die klare Lösung wird 30 Minuten auf 50° C erwärmt und anschließend noch 1 Stunde bei Zimmertemperatur stehengelassen. Nach dem Abdampfen des Äthanols wird mit Essigester ausgeschüttelt, die Essigesterlösung wird mit Wasser gewaschen und mit Natriumsulfat getrocknet. Der nach dem Verdampfen des Essigesters erhaltene Rückstand wird in 40 ccm Tetrahydrofuran gelöst und mit 1,055 g N-Trifluoracetyl-L-prolin (5 mMol) und 1,24 g Dicyclohexylcarbodümid versetzt und 3 Tage bei Zimmertemperatur und dann noch 1 Tag im Eisschrank stehengelassen. Nach üblicher Aufarbeitung erhält man das N-Trifluoracetylprolyl-L-valin-tritylhydrazid in einer Ausbeute von 2,66 g (93 °/o der Theorie). Nach Umkristallisieren aus Benzol-Petroläther beträgt der Schmelzpunkt 139 bis 140° C; [a]ZDS _ -48,8° (c = 0,96 in Äthanol).Example 3 N-Trifluoroacetyl-L-prolyl-L-valine-tritylhydrazide 2.59g (5.5 mmol) N-trifluoroacetyl-L-valine-tritylhydrazide, prepared according to the under I, b) specified regulation, are dissolved in 20 cc of ethanol and 11 cc of 1 N sodium hydroxide solution offset. The clear solution is heated to 50 ° C. for 30 minutes and then still Left to stand at room temperature for 1 hour. After the ethanol has evaporated extracted with ethyl acetate, the ethyl acetate solution is washed with water and dried with sodium sulfate. The one obtained after evaporation of the ethyl acetate The residue is dissolved in 40 cc of tetrahydrofuran and treated with 1.055 g of N-trifluoroacetyl-L-proline (5 mmol) and 1.24 g of dicyclohexylcarbodiimide offset and 3 days at Room temperature and then left to stand in the refrigerator for another day. According to the usual Work-up gives the N-trifluoroacetylprolyl-L-valine-tritylhydrazide in one Yield of 2.66 g (93% of theory). After recrystallization from benzene petroleum ether the melting point is 139 to 140 ° C; [a] ZDS _ -48.8 ° (c = 0.96 in ethanol).

C31H33031"T4F3 (566,2) Berechnet ..... C 65,76, H 5,87, N 9,90; gefunden ..... C 65,45, H 6,03, N 9,93. III. Herstellung von Tetrapeptiden Beispiel 4 N -Trifluoracetylglycyl-(a-N'-tosy l-L-lysyl)-L-prolyl-L-valin-tritylhydrazid Das Tetrapeptidderivat wird aufgebaut aus N-Trifluoracetylglycyl-(e-N'-tosyl-L-lysyl-azid), nachstehend unter a) beschrieben, sowie L-Prolyl-L-valin-tritylhydrazid, nachstehend unter ß) beschrieben. Die Vereinigung zum Tetrapeptidderivat ist unter y) aufgeführt.C31H33031 "T4F3 (566.2) Calculated ..... C 65.76, H 5.87, N 9.90; found ..... C 65.45, H 6.03, N 9.93. III.Preparation of Tetrapeptides Example 4 N -trifluoroacetylglycyl- (a-N'-tosy IL-lysyl) -L-prolyl-L-valine-tritylhydrazide The tetrapeptide derivative is built up from N-trifluoroacetylglycyl- (e-N'-tosyl-L -lysyl azide), described below under a), and L-prolyl-L-valine-tritylhydrazide, described below under β) The association to the tetrapeptide derivative is listed under y).

a) 1,28 g (1,8 mMol) N-Trifluoracetyl-glycyl-(s-N'-tosyl-L-lysin-tritylhydrazid), erhalten nach der im Beispiel- angegebenen Vorschrift, werden in 11 ccm 0,5n absoluter äthanolischer Salzsäure gelöst und 90 Minuten auf 70° C erwärmt. Das Äthanol wird im Vakuum verdampft, und der Rückstand wird mit Äther digeriert. Das hygroskopische Pulver wird in einer Mischung aus 9 ccm Wasser, 0,30 ccm 10n-Salzsäure und 0,81 ccm Eisessig gelöst. Dabei bleiben bräunliche Flocken ungelöst, von denen abfiltriert wird. Die farblose Lösung wird unter Eiskühlung und unter kräftigem Rühren mit 30 ccm Essigester versetzt und allmählich mit einer eiskalten Lösung von 0,137 g Natriumnitrit in 5 ccm Wasser versetzt. Nach 15 Minuten wird der Essigester abgetrennt, die wäBrige Phase wird nochmals mit Essigester ausgeschüttelt. Die vereinigten Essigesterlösungen werden mit 3°/oiger Natriumbicarbonatlösung gewaschen und mit Natriumsulfat im Eisschrank getrocknet.a) 1.28 g (1.8 mmol) of N-trifluoroacetyl-glycyl- (s-N'-tosyl-L-lysine-tritylhydrazide), obtained according to the instructions given in the example, in 11 ccm it becomes 0.5N more absolute Dissolved ethanolic hydrochloric acid and heated to 70 ° C for 90 minutes. The ethanol will evaporated in vacuo and the residue is digested with ether. The hygroscopic Powder is in a mixture of 9 ccm of water, 0.30 ccm of 10N hydrochloric acid and 0.81 ccm of glacial acetic acid dissolved. Brownish flakes remain undissolved, from which they are filtered off will. The colorless solution is cooled with ice and with vigorous stirring at 30 ccm of ethyl acetate are added and gradually an ice-cold solution of 0.137 g of sodium nitrite is added added to 5 cc of water. After 15 minutes, the ethyl acetate is separated off, the aqueous Phase is extracted again with ethyl acetate. The combined ethyl acetate solutions are washed with 3% sodium bicarbonate solution and with sodium sulfate in the refrigerator dried.

ß) 1,02 g (1,8 mMol) N-Trifluoracetyl-L-prolyl-L-valintritylhydrazid, erhalten nach der im Beispiel 3 angegebenen Vorschrift, werden in 8 ccm Äthanol gelöst, und nach Zugabe von 3,6 ccm 1 n-Natronlauge wird 30 Minuten auf 50° C erhitzt. Nach Verdampfen des Äthanols im Vakuum wird dreimal mit je 20 ccm Essigester ausgeschüttelt. Die Extrakte werden mit Magnesiumsulfat getrocknet.ß) 1.02 g (1.8 mmol) N-trifluoroacetyl-L-prolyl-L-valintritylhydrazide, obtained according to the instructions given in Example 3, in 8 ccm of ethanol dissolved, and after adding 3.6 ccm of 1N sodium hydroxide solution, the mixture is heated to 50 ° C. for 30 minutes. After the ethanol has evaporated in vacuo, it is extracted three times with 20 cc of ethyl acetate each time. The extracts are dried with magnesium sulfate.

y) Die nach a) und ß) erhaltenen Lösungen werden nach Abkühlen auf 0° C vereinigt und 3 Tage im Eisschrank sowie 1 Tag bei Zimmertemperatur stehengelassen. Dann wird nacheinander mit gesättigter Natriumchloridlösung, gesättigter 0,5n-Salzsäure, 3°!jger Natriumbicarbonatlösung und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen über Natriumsulfat wird der Essigester verdampft. Die Ausbeute beträgt 1,30 g (79,5 °/o der Theorie, bezogen auf die eingesetzten Tritylhydrazide). Zur Analyse wird einmal aus Benzol-Petroläther umkristallisiert; Schmelzpunkt 116 bis 120° C (unter Zersetzung); [a]ö = -21,8° (c --- 1,6 in Äthanol).y) The solutions obtained according to a) and ß) are after cooling on 0 ° C combined and left to stand for 3 days in the refrigerator and 1 day at room temperature. Then one after the other with saturated sodium chloride solution, saturated 0.5N hydrochloric acid, Washed 3 °! Jger sodium bicarbonate solution and saturated sodium chloride solution. After drying over sodium sulfate, the ethyl acetate is evaporated. The yield is 1.30 g (79.5% of theory, based on the trityl hydrazides used). For analysis, it is recrystallized once from benzene petroleum ether; Melting point 116 up to 120 ° C (with decomposition); [a] δ = -21.8 ° (c --- 1.6 in ethanol).

C46H5407X-7F3S (906,0) Berechnet ..... C 60,98, H 6,01, N 10,82; gefunden ..... C 60,67, H 6,22, N 10,97.C46H5407X-7F3S (906.0) Calculated ..... C 60.98, H 6.01, N 10.82; Found ..... C 60.67, H 6.22, N 10.97.

Eine Probe des Tetrapeptidderivates wird mit 10n-Salzsäure bei 110°C hydrolysiert. Im Papierchromatogramm waren Glycin, Lysin, Prolin, Valin und daneben noch e-Tosyllysin nachweisbar. Beispiel s N-Trifluoracetyl-L-prolyl-L-valyl-L-prolyl-L-valin-tritylhydrazid Nach der im Beispiel 4 a) angegebenen Vorschrift wird einerseits von N-Tri.fluoracetyl-L-prolyl-L-valin-tritylhydrazid,erhalten nach derim Beispie13 angegebenen Vorschrift, der Tritylrest abgespalten und das resultierende N-Trifluoracetyl-L-prolyl-L-valin-hydrazid-hydrochlorid mit Natriumnitrit in das Azid verwandelt. Andererseits wird das N-Trifluoracetyl-L-prolyl-L-valin-tritylhydräzid mit verdünnter Lauge durch Erwärmen auf 50° C zum L-Prolyl-L-valin-tritylhydrazid enttrifluoracetyliert. Die beiden Komponenten werden in Essigesterlösung einige Tage lang stehengelassen. Nach üblicher Aufarbeitung wird das N-Trifluoracetyl-L-prolyl-L-valyl-L-prolyl-L-valin-tritylhydrazid aus Benzol-Petroläther umkristallisiert. Die Ausbeute beträgt etwa 80 °/o der Theorie.A sample of the tetrapeptide derivative is treated with 10N hydrochloric acid at 110 ° C hydrolyzed. In the paper chromatogram there were glycine, lysine, proline, valine and next to it e-Tosyllysine still detectable. Example s N-Trifluoroacetyl-L-prolyl-L-valyl-L-prolyl-L-valine-tritylhydrazide According to the procedure given in Example 4 a), N-tri.fluoroacetyl-L-prolyl-L-valine-tritylhydrazide is obtained on the one hand according to the instructions given in the example, the trityl residue is split off and that resulting N-trifluoroacetyl-L-prolyl-L-valine hydrazide hydrochloride with sodium nitrite converted to the azide. On the other hand, the N-trifluoroacetyl-L-prolyl-L-valine trityl hydrazide with dilute lye by heating to 50 ° C to form L-prolyl-L-valine-tritylhydrazide de-trifluoroacetylated. The two components are some in ethyl acetate solution Left for days. After the usual work-up, the N-trifluoroacetyl-L-prolyl-L-valyl-L-prolyl-L-valine-tritylhydrazide recrystallized from benzene petroleum ether. The yield is about 80% of theory.

IV. AbschluB der Peptidsynthese Beispiel 6 (a-N-Trifluoracetyl-e-N'-tosyl-L-lysyl)-(e-N'-tosyl-L-lysinäthylester) 0,321 g a-N-Trifluoracetyl-a-N'-tosyl-L-lysin-hydrazidhydrochlorid, erhalten durch Behandeln von a-N-Trifluoracetyl-a-N'-tosyl-L-lysin-tritylhydrazid mit äthanolischer Salzsäure, wird mit Natriumnitrit in Eisessig und verdünnter Salzsäure in das entsprechende Azid verwandelt und mit a-N'-Tosyl-L -lysin-äthylester in Essigester 2 Tage stehengelassen. Die übliche Aufarbeitung liefert den (a-N-Trifluoracetyl-e-N'-tosyl-L-lysyl)-(s-N'-tosyl-L-lysinäthylester) vom Schmelzpunkt 148° C; [a]zö3 = -11,3° (c = 1,5 in absolutem Äthanol). Der Mischschmelzpunkt mit einer aus a-N-Trifluoracetyl-e-N'-tosyl-L-lysin und a-N'-Tosyl-lysinäthylester mittels Dicyclohexylcarbodiimid oder nach der Phosphitmethode dargestellten Vergleichsprobe vom Schmelzpunkt 153° C zeigt keine Erniedrigung.IV. Completion of the peptide synthesis Example 6 (a-N-Trifluoroacetyl-e-N'-tosyl-L-lysyl) - (e-N'-tosyl-L-lysine ethyl ester) 0.321 g of a-N-trifluoroacetyl-a-N'-tosyl-L-lysine hydrazide hydrochloride obtained by Treating a-N-Trifluoroacetyl-a-N'-tosyl-L-lysine tritylhydrazide with ethanol Hydrochloric acid, is made with sodium nitrite in glacial acetic acid and dilute hydrochloric acid in the corresponding Converted azide and left to stand for 2 days with a-N'-tosyl-L-lysine ethyl ester in ethyl acetate. The usual work-up gives the (a-N-Trifluoroacetyl-e-N'-tosyl-L-lysyl) - (s-N'-tosyl-L-lysine ethyl ester) of melting point 148 ° C; [a] zo3 = -11.3 ° (c = 1.5 in absolute ethanol). The mixed melting point with one of a-N-trifluoroacetyl-e-N'-tosyl-L-lysine and a-N'-tosyl-lysine ethyl ester comparative sample prepared by means of dicyclohexylcarbodiimide or by the phosphite method from melting point 153 ° C shows no decrease.

Die Abspaltung des Trifluoracetylrestes aus der erhaltenen Verbindung wird mit verdünnter Natronlauge vorgenommen, wobei gleichzeitig auch die Estergruppe verseift wird.The cleavage of the trifluoroacetyl radical from the compound obtained is carried out with dilute sodium hydroxide solution, with the ester group at the same time is saponified.

Claims

PATENT CLAIMS 1. Process for the preparation of peptides, thereby characterized that compounds of the general formula R-NH-X-COOH (I), vorm R is a protective group commonly used in peptide syntheses, preferably the trifluoroacetyl radical, means or their reactive derivatives, preferably azides, with compounds of the general formula HZN-X-CO-NH-NH-C (CBHS) 3 (II), in both formulas X is any amino acid or peptide moiety.

2nd embodiment of the method according to claim 1, characterized in that the starting materials of the formula (II) compounds used, which are obtained by reacting a compound of the general formula CF3-CO-NH-X-COOH (III) with tritylhydrazine in the presence of a Condensing agent, such as dicyclohexylcarbodiimide, and subsequent cleavage of the trifluoroacetyl radical can be obtained with alcoholic alkalis.