DE1059906B

DE1059906B - Process for the production of 1,4-pregnadienes

Info

Publication number: DE1059906B
Application number: DESCH18481A
Authority: DE
Inventors: William Charney; David Huntington Gould; Hershel Leon Herzog; Arthur Nobile; Eugene Paul Oliveto; David Sutter
Original assignee: Scherico Ltd
Current assignee: Scherico Ltd
Priority date: 1954-10-05
Filing date: 1955-08-06
Publication date: 1959-06-25

Description

Verfahren zur Herstellung von 1, 4-Pregnadienen Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 1,4-Pregnadien-3,20-dionen, die zusätzlich Sauerstoffunktionen in 11-, 17a- und/oder 21-Stellung sowie ein 9a-Halogenatom enthalten können, und von Zwischenprodukten, die in solche 1,4-Pregnadienderivate umgewandelt werden können.Process for the preparation of 1,4-pregnadienes The present invention relates to a process for the production of 1,4-pregnadiene-3,20-dione, which additionally Contain oxygen functions in the 11-, 17a and / or 21-position and a 9a-halogen atom can, and of intermediates that are converted into such 1,4-pregnadiene derivatives can be.

Es wurde gefunden, daß die neuen Verbindungen, insbesondere 1-Dehydro-cortison und 1-Dehydro-cortisol (1-Dehydro-hydrocortison) sowie deren 21-Ester, große therapeutische Bedeutung besitzen. Im Formelschema I sind einige der wichtigsten neuen 1,4-Pregnadienderivate aufgezeichnet. Die Formeln bedeuten: I. Pregnan-Skelett mit Bezifferung der C-Atome, II. 1-Dehydro-cortison und seine 21-Ester, III. 1-Dehydro-cortisol und seine 21-Ester, IV. 9a-Halogen-l-dehydro-cortison und seine 21-Ester, V. 9a-Halogen-l-dehydro-cortisol und seine 21-Ester, VI. Allgemeine Formel für Verbindungen II bis V, VII. 11-epi-l-Dehydro-cortisol und seine 21-Ester.It has been found that the new compounds, especially 1-dehydrocortisone and 1-dehydro-cortisol (1-dehydro-hydrocortisone) and its 21-ester, great therapeutic Have meaning. In formula scheme I are some of the most important new 1,4-pregnadiene derivatives recorded. The formulas mean: I. Pregnan skeleton with numbering of the C atoms, II. 1-dehydrocortisone and its 21-esters, III. 1-dehydro-cortisol and its 21-esters, IV. 9a-halogen-1-dehydro-cortisone and its 21-esters, V. 9a-halogen-1-dehydro-cortisol and its 21-ester, VI. General formula for compounds II to V, VII. 11-epi-l-dehydrocortisol and its 21-ester.

Ferner wurde gefunden, daß man die neuen Verbindungen aus den verschiedensten gesättigten und ungesättigten Pregnanderivaten herstellen kann. Je nach der Natur des verwendeten Ausgangssteroids werden nach der Erfindung eines oder mehrere der folgenden Merkmale in das als Ausgangsmaterial verwendete Pregnanderivat eingeführt a) die 1,2-Doppelbindung, b) die 4,5-Doppelbindung, c) eine 11-Sauerstoffunktion, d) eine 17a-Sauerstoffunktion, e) eine 21-Sauerstoffunktion, f) ein 9a-Halogenatom. Die Methoden, mit denen es gelingt, die obigen Merkmale a) bis e) in das Ausgangssteroid einzuführen, können chemische oder mikrobiologische oder Kombinationen von chemischen und mikrobiologischen Verfahren sein.It has also been found that the new compounds can be made from a wide variety of Can produce saturated and unsaturated pregnane derivatives. Depending on nature of the starting steroid used, according to the invention, one or more of the The following features were introduced into the pregnane derivative used as the starting material a) the 1,2-double bond, b) the 4,5-double bond, c) an 11-oxygen function, d) a 17a-oxygen function, e) a 21-oxygen function, f) a 9a-halogen atom. The methods with which it succeeds in the above features a) to e) in the starting steroid Can introduce chemical or microbiological or combinations of chemical and microbiological processes.

Ein wesentliches Erfindungsmerkmal ist die Einführung einer 1,2-Doppelbindung in ein Pregnanderivat mit Hilfe dehydrierend wirkender Mikroorganismen. Die nach der Erfindung verwendeten Mikroorganismen besitzen die spezifische Eigenschaft, eine 1,2-Doppelbindung in ein Pregnanderivat einzuführen, ohne dabei gleichzeitig das Pregnan-Kohlenstoff-Skelett anzugreifen (z. B. durch Abspaltung der 17-Seitenkette oder Offnung des D-Ringes). Außerdem sind diese Mikroorganismen fähig, Estergruppen zu hydrolysieren, gewöhnlich in 3- und 21-Stellung; darüber hinaus bewirken sie mit verschiedener Geschwindigkeit und Vollständigkeit die Oxydation von in 3- und/oder 20-Stellung befindlichen Hydroxylgruppen. In besonders hoher Ausbeute führen die dehydrierend wirkenden Mikroorganismen nach der Erfindung die 1,2-Doppelbindung in solche Pregnanderivate ein, die bereits eine Doppelbindung in 4,5- oder 5,6-Stellung besitzen.An essential feature of the invention is the introduction of a 1,2 double bond into a pregnane derivative with the help of dehydrating microorganisms. The after The microorganisms used in the invention have the specific property to introduce a 1,2 double bond into a pregnane derivative without doing so at the same time attacking the pregnane carbon skeleton (e.g. by splitting off the 17 side chain or opening of the D-ring). In addition, these microorganisms are capable of creating ester groups to hydrolyze, usually in the 3- and 21-positions; in addition, they effect with different speed and completeness the oxidation of in 3- and / or 20-position hydroxyl groups. The lead in particularly high yield dehydrating microorganisms according to the invention, the 1,2 double bond in those pregnane derivatives which already have a double bond in the 4,5 or 5,6 position own.

Gegenstand der Erfindung ist dementsprechend ein Verfahren zur Herstellung von Pregnadienen der allzemeinen Formel worin X = O oder H (a oder ß), OH oder H (a oder ß), Acyloxy, R = H oder Acyl und W = H, F, Cl oder Br ist, welches darin besteht, daß man ein im Ring A gesättigtes Pregnanderivat mit Sauerstoffunktionen in 3- und 20-Stellung durch Behandlung mit dehydrierenden Mikroorganismen oder bekannten chemischen Dehydrierungsmitteln in das entsprechende 1,4-Pregnadien überführt und gegebenenfalls in dieses in bekannter Weise eine 11-X- und/oder 17a-OH- und/oder 21-OR-und/oder 9a-`@'-Gruppe einführt und zusätzlich, soweit das Ausgangssteroid außerhalb des Ringes A Doppelbindungen aufweist, diese nach bekannten Methoden in gesättigte Bindungen überführt, oder daß man ein in 1- und/oder 4-Stellung ungesättigtes Steroid der Pregnanreihe in entsprechender Weise behandelt.The invention accordingly relates to a process for the preparation of pregnadienes of the general formula where X = O or H (a or ß), OH or H (a or ß), acyloxy, R = H or acyl and W = H, F, Cl or Br, which consists in having one in the ring A Saturated pregnane derivative with oxygen functions in the 3- and 20-positions is converted into the corresponding 1,4-pregnadiene by treatment with dehydrating microorganisms or known chemical dehydrating agents and, if necessary, an 11-X- and / or 17a-OH and / or 21-OR and / or 9a-`@ 'group and, in addition, if the starting steroid has double bonds outside the ring A, these are converted into saturated bonds by known methods, or one in 1- and / or 4- Position unsaturated steroid of the Pregnan range treated in a corresponding manner.

Zweckmäßigerweise verwendet man als Ausgangsmaterial ein Steroid, welches eine Doppelbindung an zumindest einer, aber nicht mehr als drei der 1-, 4-, 6-, 9(11)- und 16-Stellungen besitzt.It is advisable to use a steroid as the starting material, which has a double bond on at least one, but not more than three of the 1-, 4, 6, 9 (11) and 16 positions.

Als Ausgangsmaterial verwendbar sind auch solche Pregnanderivate, die bereits in 11- und/oder 17a- und/ oder 21-Stellung eine Sauerstoffunktion besitzen.Pregnane derivatives can also be used as starting material, which already have an oxygen function in the 11- and / or 17a and / or 21-position.

Die Dehydrierung in 1,2-Stellung kann außer auf mikrobiologischem Wege auch rein chemisch durch Einführung einer Sauerstoffunktion in Stellung 1 oder 2 und nachträgliche Abspaltung dieser Sauerstoffunktion vorgenommen «-erden.The dehydration in 1,2-position can be microbiological in addition to Paths also purely chemical by introducing an oxygen function in position 1 or 2 and subsequent splitting off of this oxygen function carried out «-erden.

Man kann zur Dehydrierung in 1,2- und/oder 4,5-Stellung auch 1 oder 2 Bromatome in den Ring A einführen und im weiteren Verlauf der Synthese die Bromatome in Form von HBr wieder abspalten.For dehydrogenation in the 1,2- and / or 4,5-position, 1 or Introduce 2 bromine atoms into ring A and, in the further course of the synthesis, the bromine atoms split off again in the form of HBr.

Als in 1,2-Stellung dehydrierend wirkende Mikroorganismen kann man z. B. Corynebacterien, wie z. B. Corynebacterium simpler oder Corynebakterium hoagii oder auch Bazillus sphaericus var. fusiformis, verwenden.As a dehydrating microorganisms in the 1,2-position one can z. B. Corynebacteria such. B. Corynebacterium simpler or Corynebacterium hoagii or also use Bacillus sphaericus var. fusiformis.

Eine spezielle Ausführungsform der Erfindung ist beispielsweise die Hydroxylierung von Progesteron in 11-, 17a- und 21-Stellung mit folgender Dehydrierung in 1,2-Stellung.A special embodiment of the invention is, for example, the Hydroxylation of progesterone in the 11, 17 and 21 positions with subsequent dehydration in the 1,2 position.

Eine weitere Variante des Verfahrens nach der Erfindung besteht darin, daß ein 16,17-ungesättigtes Pregnadien oder Pregnatrien mit einer Persäure oder mit Wasserstoffperoxyd umgesetzt wird unter Bildung eines 16,17-Oxidoderivates, das anschließend hydrolysiert wird.Another variant of the method according to the invention consists in that a 16,17-unsaturated Pregnadiene or Pregnatrien with a peracid or is reacted with hydrogen peroxide to form a 16,17-oxo derivative, which is then hydrolyzed.

Zur Herstellung der neuen therapeutisch wirksamen Pregnadienderivate gibt es somit eine Vielzahl möglicher Kombinationen einzelner Verfahrensschritte, von denen einzelne Verfahrensstufen sich an sich bekannter Methoden bedienen. So kann man z. B. Pregnan-11a,17a-21-triol-3,20-dion-21-acetat mit Brom umsetzen, das gebildete 2,4-Dibromid dehydrobromieren und in der erhaltenen 1,4-Pregnadienverbindung die 11a-Hydroxylgruppe zur 11-Ketogruppe oxydieren. (Man erhält auf diese Weise 1-Dehydro-cortison.) Die Einführung eines Fluor-, Chlor- oder Bromatoms in die 9a-Stellung der 1,4-Pregnadiene nach der Erfindung oder der zur Herstellung der letzteren benötigten Zwischenprodukte gelingt z. B. durch Epoxydation eines in 9,11-Stellung ungesättigten Pregnanderivates mit folgender Behandlung mit Halogenwasserstoff, vorzugsweise Fluorwasserstoff, unter Bildung der entsprechenden 9a-Halogen-llß-OH-Verbindung. Die Tatsache, daß Epoxyde immer trans-ständig aufgespalten werden, bedingt, daß bei den nach dem Verfahren der Erfindung erhaltenen Verbindungen die Hydroxylfunktion in 11-Stellung stets ß-ständig ist, sofern sich in der 9a-Stellung ein Halogenatom befindet.For the production of the new therapeutically effective pregnadene derivatives there are therefore a large number of possible combinations of individual process steps, of which individual process steps make use of methods known per se. So you can z. B. Pregnan-11a, 17a-21-triol-3,20-dione-21-acetate with bromine, the 2,4-dibromide formed and dehydrobrominate in the resulting 1,4-pregnadiene compound oxidize the 11a-hydroxyl group to the 11-keto group. (One gets in this way 1-Dehydro-cortisone.) The introduction of a fluorine, chlorine or bromine atom in the 9a-position the 1,4-pregnadienes according to the invention or those required for the production of the latter Intermediate products succeed z. B. by epoxidation of one unsaturated in the 9,11-position Pregnan derivatives with the following treatment with hydrogen halide, preferably hydrogen fluoride, with formation of the corresponding 9α-halogen-11β-OH compound. The fact that Epoxides are always split up in a trans-constant manner, which means that in the case of the process Compounds obtained according to the invention always have the hydroxyl function in the 11-position is ß-position, provided there is a halogen atom in the 9a-position.

Die 1,4-Pregnadienderivate nach der Erfindung zeigen nach klinischem Test eine außerordentlich verbesserte physiologische Wirkung gegenüber den entsprechenden, einfach ungesättigten Verbindungen. Sie besitzen die mehrfache Wirksamkeit der entsprechenden bekannten Hormone, wie Cortison und Hydrocortison, in der Behandlung von rheumatischer Arthritis. Darüber hinaus treten die unerwünschten Nebenwirkungen der bekannten Hormone in verringertem Maße bei Benutzung der neuen Verbindungen auf; die Intensität dieser Nebenwirkungen wird noch weiter dadurch reduziert, daß viel geringere Dosen der neuen Verbindungen im Vergleich zu den entsprechenden, einfach ungesättigten, bekannten Verbindungen angewendet werden können. Sowohl die Anfangsdosen als auch die dauernde Dosierung bei der Behandlung von rheumatischer Arthritis kann stark durch die Verwendung der neuen Substanzen reduziert werden. Selbst bei den verringerten Dosen ist bei den neuen Verbindungen die gleichzeitige Benutzung von Codein oder anderen Analgetika nicht erforderlich, während j a solche Analgetika häufig zusammen mit den bisherbekannten Chemotherapeutika benutzt worden sind.The 1,4-pregnadiene derivatives according to the invention show after clinical Test an extraordinarily improved physiological effect compared to the corresponding, monounsaturated compounds. They have the multiple effectiveness of the corresponding known hormones, such as cortisone and hydrocortisone, used in the treatment of rheumatic Arthritis. In addition, the undesirable side effects of the known occur Hormones to a lesser extent when using the new compounds; the intensity these side effects are reduced even further by taking much lower doses of the new compounds compared to the corresponding, monounsaturated, known compounds can be applied. Both the starting doses and the sustained dosage in the treatment of rheumatoid arthritis can be severe can be reduced by using the new substances. Even with the diminished Doses in the new compounds is the simultaneous use of codeine or Other analgesics are not required, while such analgesics are often used together have been used with the previously known chemotherapeutic agents.

Die therapeutisch wirksamen Diene nach vorliegender Erfindung werden vorzugsweise per os in Form von Tabletten gegeben, die eine ganze Tagesdosis, z. B. 50 mg, oder ein kleineres Vielfaches solcher Dosis, z. B. 25 oder 20 mg oder selbst 10 mg, in Gemisch mit einem festen pharmazeutischen Träger enthalten, der eine oder mehr der üblichen Beimischungen, wie Stärke, Zucker, Gummi, Ton u. ä., enthält. Sie können auch durch intravenöse und intramuskuläre Injektionen gegeben werden, gelöst oder suspendiert in einem geeigneten, nichttoxischen, flüssigen Träger. Oder sie können in fester Form durch subkutane Implantation oder in Form von Zäpfchen gegeben werden, gelöst oder suspendiert in einem Fett- oder Wachsträger, der bei nahezu Körpertemperatur schmilzt. Die neuen 1,4-Pregnadiene können örtlich gegeben werden in der Form einer Salbe oder einer Creme, gelöst in einer Salben- oder Cremegrundlage von bekannter Zusammensetzung.The therapeutically effective dienes of the present invention are preferably given orally in the form of tablets that contain a whole daily dose, e.g. B. 50 mg, or a smaller multiple of such dose, e.g. B. 25 or 20 mg or even 10 mg, in admixture with a solid pharmaceutical carrier containing the one or more of the usual admixtures, such as starch, sugar, gum, clay, etc., contains. They can also be given by intravenous and intramuscular injections , dissolved or suspended in a suitable, non-toxic, liquid carrier. Or they can be in solid form by subcutaneous implantation or in the form of suppositories be given, dissolved or suspended in a fat or wax carrier, which is with almost body temperature melts. The new 1,4-Pregnadiene can be given locally are in the form of an ointment or cream, dissolved in an ointment or cream base of known composition.

Die Einführung einer zweiten Doppelbindung in einfach ungesättigte Zwischenprodukte mit bekannter therapeutischer Wirksamkeit hat ebenfalls Verbindungen ergeben, deren physiologische Aktivität gegenüber den einfach ungesättigten Verbindungen (wie z. B. Corticosteron und 11-Dehydro-corticosteron) gesteigert ist.The introduction of a second double bond in monounsaturated Intermediates with known therapeutic efficacy also has compounds reveal their physiological activity towards the monounsaturated compounds (such as corticosterone and 11-dehydro-corticosterone) is increased.

Die eingangs kurz geschilderten Verfahren nach der Erfindung werden im folgenden detaillierter erklärt: A.The method according to the invention briefly outlined at the beginning will be explained in more detail below: A.

Einführung einer 1,2-Doppelbindung mit einer Kultur eines dehydrierenden Mikroorganismus Ein wesentlicher Kern der Erfindung ist die mikrobiologische Einführung einer 1,2-Doppelbindung in ein vorzugsweise bereits ungesättigtes Pregnenderivat durch Inkubation oder Fermentation des Ausgangssteroids mit einem Kulturmedium, das einen dehydrierenden Mikroorganismus enthält, der die Ausgangsverbindung nicht gleichzeitig angreift oder spaltet. Geeignete Mikroorganismen dieses Typs gehören zur Familie Corynebacteriaceae, wobei die Spezies Corynebacterium simpler (amerikanische Kultur Typensammlung 6946) und Corynebacterium hoagii (ATCC 7005) sehr befriedigende Ergebnisse geliefert haben. Das erste dieser Bakterien ist ein Bodenbakterium, während das zweite in der menschlichen Kehle gefunden wird (wo es offenbar keine pathologischen Verhältnisse bewirkt) und manchmal als Bestandteil von der Luft ausgesetzten Kulturen. (Sein wirklicher und ihm gemäßer Aufenthalt ist nicht bekannt.) Die Ausgangsverbindungen können Hydroxyl-, Keto-, Halogen- und Estergruppen in verschiedener Stellung von Kern oder Seitenkette besitzen. So können Hydroxylgruppen in einer oder mehreren der 3-, 11-, 17-, 20- und 21-Stellungen vorliegen. Ketogruppen können eine oder mehrere der 3-, 11- und 20-Stellung einnehmen, während Halogen, wie Fluor oder Brom, am 9-Kohlenstoff oder an anderen Stellen des Kernes oder der Seitenkette stehen können. Die Gegenwart einer freien Hydroxylgruppe beschleunigt offenbar die chemische Umwandlung. Estergruppen von großer Verschiedenheit und vorzugsweise die Ester der Säuren, die gewöhnlich bei Steroidsynthesen und besonders bei der Herstellung von Steroidhormonen für therapeutische Zwecke angewandt werden, insbesondere die der niedrigen Alkansäuren, wie das Acetat, können in einer oder mehreren der 3-, 11-, 17-, 20- und 21-Stellungen stehen. Der spezielle Charakter der Ester ist bei dem Verfahren der Erfindung nicht entscheidend, sondern es können auch andere Ester organischer und anorganischer Säuren benutzt werden, wie z. B. Cyclopentyl- und Cyclohexylacetate, Propionate, Butyrate, Phosphate, Polyphosphate und Sulfate. Es ist nur notwendig, daß die Ester gegenüber dem Mikroorganismus nicht toxisch sind. Die hydroxylierten Produkte des erfindungsgemäßen Verfahrens können gegebenenfalls nach bekannten Verfahren in die entsprechenden Ester umgewandelt werden, beispielsweise in die niederen Acyl- und insbesondere in die Essigsäureester. Die Hydroxylgruppen in den 3- und 11-Stellungen können a- oder ß-ständig sein. Wie im nachfolgenden beschrieben, kann besonders der Ester in 21-Stellung einen solchen Säurerest enthalten, der die Dauer der therapeutischen Wirksamkeit der Verbindungen verlängert.Introduction of a 1,2 double bond with a culture of a dehydrating one Microorganism An essential core of the invention is the microbiological introduction a 1,2-double bond in a preferably already unsaturated Pregnene derivative by incubation or fermentation of the parent steroid with a culture medium, that contains a dehydrating microorganism that is not the parent compound attacks or splits at the same time. Suitable microorganisms of this type include to the family Corynebacteriaceae, whereby the species Corynebacterium simpler (American Culture type collection 6946) and Corynebacterium hoagii (ATCC 7005) very satisfactory Have delivered results. The first of these bacteria is a soil bacterium while the second is found in the human throat (where there is apparently no pathological Conditions) and sometimes as part of airborne cultures. (His real and proper whereabouts are not known.) The initial connections can hydroxyl, keto, halogen and ester groups in different positions of Have core or side chain. So can hydroxyl groups in one or more of the 3, 11, 17, 20 and 21 positions. Keto groups can be one or take several of the 3-, 11- and 20-positions, while halogen, such as fluorine or bromine, am 9-carbon or at other points of the core or the side chain can stand. The presence of a free hydroxyl group apparently accelerates the chemical conversion. Ester groups of great diversity and preferably those Esters of acids commonly used in steroid synthesis and especially in manufacture of steroid hormones are used for therapeutic purposes, especially the the lower alkanoic acids, such as the acetate, can be in one or more of the 3-, 11, 17, 20 and 21 positions. The special character of the ester is at Not critical to the process of the invention, other esters can be used organic and inorganic acids are used, such as. B. Cyclopentyl and Cyclohexyl acetates, propionates, butyrates, phosphates, polyphosphates and sulfates. It it is only necessary that the esters are not toxic to the microorganism. The hydroxylated products of the process according to the invention can optionally converted into the corresponding esters by known methods, for example in the lower acyl and especially in the acetic acid esters. The hydroxyl groups in the 3 and 11 positions can be a or ß position. As in the following described, especially the ester in the 21-position can contain such an acid residue, which extends the duration of the therapeutic effectiveness of the compounds.

Bei Benutzung eines dehydrierenden Mikroorganismus nach der Erfindung kann man beispielsweise folgende Umwandlungen erreichen 4-Pregnen-17a,21-diol-3,11,20-trion (Cortison) in 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,11,20-trion (1-Dehydro-cortison) ; 4-Pregnen-11ß,17a,21-triol-3,20-dion (Hydrocortison oder Cortisol) in 1,4-Pregnadien-11ß,17a,21-triol-3,20-dion (1-Dehydro-cortisol) ; 4-Pregnen-17a,21-diol-3,20-dion (Reichsteins-Substanz-S) in 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dionund 1,4-Pregnadien-17a,20ß,21-triol-3-on; 5-Pregnen-3ß,20-diol in 1,4-Pregnadien-3,20-dion; 4-Pregnen-llß,21-diol-3,20-dion (Corticosteron) in 1,4-Pregnadien-11ß,21-diol-3,20-dion ; 4-Pregnen-21-ol-3,20-dion (Desoxycorticosteron) in 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dion; 4 - Pregnen - 21- o1 - 3,11,20 - trion (Kendalls Verbindung A) in 1,4-Pregnadien-21-ol-3,11,20-trion; 9a-Fluor-4-pregnen-llß,17a,21-triol-3,20-dion (Fluorverbindung F) in 9a-Fluor-1,4-pregnadienl lß,17a,21-triol-3,20-dion; 5-Pregnen-3ß,17a,21-triol-20-on-3,21-diacetat in 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion und 4-Pregnen-17a,21-diol-3,20-dion-21-acetat; 4-Pregnen-20-ol-3-on in 1,4-Pregnadien-3,20-dion; 5-Pregnen-3,17a,20,21-tetrol-11-on und seine 3- und/ oder 21-Ester in 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,11,20-trion und seine 21-Ester; 5-Pregnen-3,11a,17a,20,21-pentol und seine 3- und/ oder 21-Ester in 1,4-Pregnadien-11a,17a,21-triol-3,20-dion und seine 21-Ester.When using a dehydrating microorganism according to the invention the following conversions can be achieved, for example, 4-pregnen-17a, 21-diol-3,11,20-trione (Cortisone) in 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,11,20-trione (1-dehydrocortisone); 4-pregnen-11β, 17a, 21-triol-3,20-dione (Hydrocortisone or cortisol) in 1,4-pregnadiene-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione (1-dehydro-cortisol) ; 4-Pregnen-17a, 21-diol-3,20-dione (Reichsteins-Substance-S) in 1,4-Pregnen-17a, 21-diol-3,20-dione and 1,4-pregnadiene-17a, 20β, 21-triol-3-one; 5-pregnen-3β, 20-diol in 1,4-pregnadiene-3,20-dione; 4-Pregnen-11ß, 21-diol-3,20-dione (corticosterone) in 1,4-pregnadiene-11ß, 21-diol-3,20-dione ; 4-pregnen-21-ol-3,20-dione (deoxycorticosterone) in 1,4-pregnadien-21-ol-3,20-dione; 4 - Pregnen-21-01-3.11.20-trione (Kendall's Compound A) in 1,4-pregnadien-21-ol-3,11,20-trione; 9a-fluoro-4-pregnen-llß, 17a, 21-triol-3,20-dione (fluorine compound F) in 9a-fluoro-1,4-pregnadiene1 lß, 17a, 21-triol-3,20-dione; 5-pregnen-3β, 17a, 21-triol-20-one-3,21-diacetate in 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione and 4-pregnen-17a, 21-diol-3,20-dione-21-acetate; 4-pregnen-20-ol-3-one in 1,4-pregnadien-3,20-dione; 5-pregnen-3,17a, 20,21-tetrol-11-one and its 3- and / or 21-esters in 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,11,20-trione and its 21-esters; 5-pregnen-3,11a, 17a, 20,21-pentole and its 3- and / or 21-esters in 1,4-pregnadiene-11a, 17a, 21-triol-3,20-dione and its 21-esters.

An Stelle der 3-Keto -Ausgangsverbindungen können die entsprechenden 3-Hydroxyverbindungen und ihre 3-Ester benutzt werden, wie 5-Pregnen-3,11ß,17a,21-tetrol-20-on und 5-Pregnen-3,17a,21-triol-11,20-dion und ihre 3-Acetate oder 3,21-Diacetate, um die gleichen 3-Keto-1,4-dien-Endprodukte herzustellen, wobei die 3-Estergruppe hydrolysiert wird und die gebildete 3-Hydroxylgruppe zum Ketonsauerstoff oxydiert wird. Estergruppen in den 11- und 17-Stellungen werden im allgemeinen nicht hydrolysiert, zum mindesten nicht in bedeutendem Umfang, während eine Estergruppe in der 21-Stellung je nach den Reaktionsbedingungen hydrolysiert oder nicht hydrolysiert werden kann. Wenn daher die Ausgangsverbindung ein 3,21-Diester ist, kann das Reaktionsprodukt eine 3-Keto-21-esterverbindung oder eine 3-Keto-21-hydroxyverbindung sein. Ein 20-Hydroxyl wird häufig zusammen mit 3-Hydroxyl zu einer Ketogruppe oxydiert. Es ist daraus ersichtlich, daß die dehydrierenden Mikroorganismen nach vorliegender Erfindung praktisch nur in 3- und 20-Stellung oxydierend wirken; im Gegensatz dazu kann die Hydrolyse auf die 3-Estergruppen beschränkt werden.Instead of the 3-keto starting compounds, the corresponding 3-Hydroxy compounds and their 3-esters can be used, such as 5-pregnen-3,11ß, 17a, 21-tetrol-20-one and 5-pregnen-3,17a, 21-triol-11,20-dione and their 3-acetates or 3,21-diacetates, to produce the same 3-keto-1,4-diene end products, with the 3-ester group is hydrolyzed and the 3-hydroxyl group formed is oxidized to the ketone oxygen will. Ester groups in the 11 and 17 positions are generally not hydrolyzed, at least not to a significant extent, while an ester group is in the 21-position can be hydrolyzed or not hydrolyzed depending on the reaction conditions. Therefore, if the starting compound is a 3,21-diester, the reaction product can a 3-keto-21-ester compound or a 3-keto-21-hydroxy compound. A 20-hydroxyl is often oxidized to a keto group together with 3-hydroxyl. It's out of it can be seen that the dehydrating microorganisms of the present invention practically only have an oxidizing effect in the 3- and 20-position; in contrast, the Hydrolysis can be restricted to the 3-ester groups.

Das Verfahren nach der Erfindung ist auch auf lla-Hydroxyepimere der obenerwähnten 11ß-Hydroxysteroide anwendbar, wie z. B. auf 4-Pregnen-11a,17a,21-triol-3,20-dion, 4-Pregnen-11a,17a,20,21-tetrol-3-on, 5 - Pregnen - 3,11a,17a,21- tetrol - 20 - on, 5 - Pregnen-3,11a,17a,20,21-pentol und ihre Mono- und Polyester, wie z. B. die 3-Acetate, 3,21-Diacetate und 3,17a,21-Triacetate, wobei aus diesen Ausgangsprodukten 1,4-Pregnadien-11a,17a,21-triol-3,20-dion oder deren Ester entstehen. Das lla-Epimere von 1-Dehydro-cortisol sowie dessen Ester können in 1-Dehydro-cortison und dessen Ester durch Oxydation der 11a-Hydroxylgruppe in bekannter Weise umgewandelt werden, z. B. mit Chromsäure (mit oder ohne Pyridin oder Essigsäure und bei Zimmertemperatur oder darunter [5 bis 15°C]), vorzugsweise nachdem gegebenenfalls die 21-Hydroxylgruppe verestert worden ist. Die 11a-Hydroxy-Ausgangsverbindungen können relativ leicht in hoher Ausbeute erhalten werden, wie aus der Literatur bekannt ist, und stellen daher erwünschte Ausgangsprodukte zur Herstellung des 1-Dehydro-cortisons und des 1-Dehydrocortisols dar.The method according to the invention is also applicable to Ila-hydroxyepimers Above mentioned 11ß-hydroxysteroids applicable, such as. B. on 4-pregnen-11a, 17a, 21-triol-3,20-dione, 4-pregnen-11a, 17a, 20,21-tetrol-3-on, 5 - pregnen - 3,11a, 17a, 21-tetrol - 20 - on, 5 - Pregnen-3,11a, 17a, 20,21-pentol and their mono- and polyesters, such as e.g. B. the 3-acetates, 3,21-diacetate and 3,17a, 21-triacetate, 1,4-pregnadiene-11a, 17a, 21-triol-3,20-dione from these starting materials or their esters are formed. The lla epimer of 1-dehydrocortisol and its Esters can be converted into 1-dehydrocortisone and its esters by oxidation of the 11a-hydroxyl group be converted in a known manner, e.g. B. with chromic acid (with or without pyridine or acetic acid and at room temperature or below [5 to 15 ° C]), preferably after optionally esterifying the 21-hydroxyl group. The starting 11a-hydroxy compounds can be obtained relatively easily in high yield, as known from the literature is, and are therefore desirable starting products for the production of 1-dehydrocortisone and 1-dehydrocortisol.

Zusätzlich umfassen die Umwandlungen, die mit den dehydrierenden Mikroorganismen durchgeführt werden können, die Überführung von 5-Pregnen-3,17a,21-triol-20-on-3,21-diacetat in eine Mischung von 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dionund4-Pregnen-17a,21-diol-3,20-dion-21-acetat. Durch Änderung des Fermentationsmediums kann aus Reichsteins-Substanz-S nicht nur 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion, sondern auch 1,4-Pregnadien-17a,20ß,21-triol-3-on hergestellt werden. (Die 20-Ketogruppe wird reduziert.) Wie bereits angegeben, können die Mikroorganismen auch die Oxydation einer 20sekundären Hydroxylgruppe bewirken, z. B. bei der Umwandlung von 5-Pregnen-3,20-diol in 1,4-Pregnadien-3,20-dion.Additionally, the conversions involve those with the dehydrating microorganisms can be carried out, the conversion of 5-pregnen-3,17a, 21-triol-20-one-3,21-diacetate into a mixture of 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione and 4-pregnen-17a, 21-diol-3,20-dione-21-acetate. By changing the fermentation medium, Reichsteins-Substance-S can not only 1,4-pregnadien-17a, 21-diol-3,20-dione, but also 1,4-pregnadien-17a, 20β, 21-triol-3-one getting produced. (The 20-keto group is reduced.) As stated earlier, you can the microorganisms also cause the oxidation of a 20-secondary hydroxyl group, z. B. in the conversion of 5-pregnene-3,20-diol into 1,4-pregnadiene-3,20-dione.

Das Verfahren nach der Erfindung ist auch auf 9a-Fluor-, 9a-Chlor- und 9a-Bromsteroide anwendbar. Verschiedene diesbezügliche Umwandlungen sind durch die Gleichungen (1), (2) und (3) des Formelschemas I dargestellt.The method according to the invention is also applicable to 9a-fluorine, 9a-chlorine- and 9a-bromo steroids are applicable. Various related conversions are through the equations (1), (2) and (3) of the formula scheme I are shown.

Um das Wachsen der dehydrierenden Mikroorganismen wie Corynebacterium simplex und C. hoagii zu erreichen, wird ein Nährmedium verwendet, das Kohlenhydrat, organischen Stickstoff, natürliche Wachstumsfaktoren und anorganische Salze enthält. Es ist möglich, das Kohlenhydrat wegzulassen, ohne daß das Wachstum des Organismus beeinträchtigt wird. Nach Kultivierung des Mikroorganismus im Nährmedium kann die Zellmasse durch Zentrifugierung der Nährbrühe gesammelt werden, die darüber befindliche Flüssigkeit dekantiert und die Zellmasse in einer Salzlösung suspendiert werden. Ein bestimmtes Volumen der Zensuspension wird dann in einem geeigneten Nährmedium zur Unterstützung des Wachstums des Mikroorganismus ausgesät. Das benutzte Nährmedium kann ein Hefeextrakt (bekannt unter dem Handelsnamen »Difco«), Kaseinhydrolysat (bekannt unter dem Handelsnamen »N-Z-Anvn, Typ B Sheffield;), Kornkeimflüssigkeit, ein Wasserextrakt von Sojabohnenmehl-Öl, Lactalbuminhydrolysat (bekannt unter dem Handelsnamen vEdamine-Sheffield Enzymatic,. ), Fischlösungen u. ä. sein.To the growth of dehydrating microorganisms like Corynebacterium simplex and C. hoagii, a nutrient medium is used that contains carbohydrate, contains organic nitrogen, natural growth factors and inorganic salts. It is possible to omit the carbohydrate without affecting the growth of the organism is affected. After the microorganism has been cultivated in the nutrient medium, the Cell mass can be collected by centrifugation of the nutrient broth located above it Liquid can be decanted and the cell mass suspended in a saline solution. A certain volume of the Zensuspension is then in a suitable nutrient medium sown to support the growth of the microorganism. The nutrient medium used can be a yeast extract (known under the trade name "Difco"), casein hydrolyzate (known under the trade name »N-Z-Anvn, Type B Sheffield;), grain germ, a water extract from soybean meal oil, lactalbumin hydrolyzate (known under the Trade names vEdamine-Sheffield Enzymatic ,. ), Fish solutions and the like.

Die Steroidverbindung wird unter sterilen Bedingungen fest, gelöst oder in Äthanol, Aceton oder anderen mit Wasser mischbaren physiologisch unbedenklichen Lösungsmitteln suspendiert zu dem kultivierten Mikroorganismus in der Nährbrühe gegeben. Diese Kultur wird dann geschüttelt, belüftet oder gleichzeitig belüftet und gerührt, um das Wachstum des Mikroorganismus und die biochemische Umwandlung des Steroidsubstrates zu beschleunigen. Das Steroid kann der Nährbrühe zugegeben werden und dann mit dem Bakterium geimpft werden, oder der kultivierte :Mikroorganismus kann dem Steroid in der Nährbrühe zugesetzt werden. In gewissen Fällen kann es günstiger sein, vor dem Zusatz des Steroids das maximale Wachstum des Mikroorganismus zu erreichen. Wahlweise können auch in bekannter Weise erhaltene Enzympräparate aus Kulturen der Mikroorganismen benutzt werden.The steroid compound is solid, dissolved under sterile conditions or in ethanol, acetone or other water-miscible physiologically harmless substances Solvents suspended to the cultivated microorganism in the nutrient broth given. This culture is then shaken, aerated, or aerated at the same time and stirred to the growth of the microorganism and the biochemical conversion of the steroid substrate to accelerate. The steroid can be added to the nutrient broth and then vaccinated with the bacterium, or the cultured: microorganism can be added to the steroid in the nutrient broth. In certain cases it can be cheaper be to achieve maximum growth of the microorganism prior to the addition of the steroid. Optionally, enzyme preparations obtained in a known manner from cultures of the Microorganisms are used.

Die Benutzung anorganischer Salze ist erwünscht, um in dem Reaktionsmedium einen pH-Wert zwischen 6,8 und 7,2 aufrechtzuerhalten, sie kann aber auch unterbleiben. Wenn anorganische Salze fortgelassen werden, steigt der p11-Wert von einem anfänglichen Wert von 6,8 auf etwa 7,7 bis 8, wobei jedoch noch die Bildung der Endprodukte nach der Erfindung möglich ist. Die optimale Temperatur für das Wachstum der Mikroorganismen ist 37'C. Gegebenenfalls können die Temperaturen zwischen 25 und 37'C und sogar zwischen 20 und 40'C variieren. Die Reaktionszeit kann von 3 bis 48 Stunden variieren, je nachdem, welches Steroid umgesetzt werden soll. Jedes mit '\V asser mischbare Lösungsmittel, das für den Organismus nicht toxisch ist, kann zur Lösung oder Suspendierung der 1,4-Pregnadienverbindungen nach der Erfindung benutzt werden. Die Anwendung von Äthanol oder Aceton wird in solchen Mengen bevorzugt, daß die Endkonzentration dieser Lösungsmittel in der Reaktionsmischung nicht mehr als etwa 7 °'° beträgt.The use of inorganic salts is desirable in the reaction medium maintain a pH value between 6.8 and 7.2, but it can also be omitted. If inorganic salts are omitted, the p11 value increases from an initial one Value from 6.8 to about 7.7 to 8, but with the formation of the end products after the invention is possible. The optimal temperature for the growth of microorganisms is 37'C. If necessary, the temperatures can range between 25 and 37'C and even vary between 20 and 40'C. The reaction time can vary from 3 to 48 hours, depending on which steroid is to be implemented. Each can be mixed with '\ V ater Solvents that are not toxic to the organism can be used for solution or suspension of the 1,4-pregnadiene compounds can be used according to the invention. The application of ethanol or acetone is preferred in amounts such that the final concentration this solvent in the reaction mixture is no more than about 7 °.

Im Verlauf des Oxydations- oder Dehydrierungsprozesses, der von teilweiser oder vollständiger Hydrolyse begleitet werden kann, können die Reaktionsprodukte aus der Mischung durch Extraktion mit einem geeigneten, mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, durch Filtration, durch Adsorption an einem geeigneten Adsorptionsmittel oder durch beliebige andere, allgemein benutzte Prozesse gewonnen werden. Zur Extraktion sind chlorierte, niedere Kohlenwasserstoffe, Ketone und Alkohole geeignet, wie z. B. Chloroform, Methylenchlorid, Tricbloräthan, Äthylendichlorid, Butanol, Diäthylketon. Zur Isolierung der Steroidprodukte eignet sich vorzugsweise die Extraktion. Im Anschluß an diese können die Produkte durch Einengen der Extrakte, gegebenenfalls bis zur Trockne, isoliert werden. Die Reinigung der Rückstände kann durch Umkristallisation aus einem Lösungsmittel oder einer Lösungsmittelmischung, wie Aceton, Methylenchlorid, Äthanol, Aceton-Hexan, lIethylenchlorid-Hexan usw., durchgeführt werden, wobei die erwünschten 1,4-Pregnadienderivate in ausgezeichneter Ausbeute und hohem Reinheitsgrad gewonnen werden.In the course of the oxidation or dehydration process, which is caused by partial or complete hydrolysis can be accompanied, the reaction products can from the mixture by extraction with a suitable, water-immiscible Solvent, by filtration, by adsorption on a suitable adsorbent or by any other commonly used process. For extraction are chlorinated, lower hydrocarbons, ketones and alcohols suitable, such as. B. chloroform, methylene chloride, tricbloroethane, ethylene dichloride, butanol, diethyl ketone. Extraction is preferably suitable for isolating the steroid products. In connection to this, the products can by concentrating the extracts, optionally up to Dry to be isolated. The residues can be cleaned by recrystallization from a solvent or a solvent mixture, such as acetone, methylene chloride, Ethanol, acetone-hexane, LIethylene chloride-hexane, etc., are carried out, the desired 1,4-pregnadiene derivatives in excellent yield and high degree of purity be won.

Die chemischen Umwandlungen, die durch die deliydrierenden -Mikroorganismen auf die verschiedenen Pregnene bewirkt werden, sind somit von sehr verschiedener Art und können einzeln, gleichzeitig oder hintereinander erfolgen. Die Reaktionen werden offenbar durch andere Substituenten im Steroidkern oder in der Seitenkette nicht beeinflußt. Aus dem Vorhergehenden ist ersichtlich, daß es nicht wesentlich ist, daß das Ausgangsprodukt eine Doppelbindung in der 4-Stellung des A-Ringes hat. Es kann auch eine Doppelbindung in 5-Stellung besitzen. Das Ausgangsprodukt kann auch mehr als eine Doppelbindung besitzen. So können 4,6-Pregnadiene dehydriert bzw. anderweitig, wie oben beschrieben, umgewandelt werden unter Bildung von 1,4,6-Pregnatrienen, die leicht nach üblichen Methoden zu 1,4-Pregnadienen reduziert werden können. Beispielsweise kann 4,6-Pregnadien-17a,21-diol-3,11-,20-trion-21-acetat in 1,4,6-Pregnatrien-17a,21-diol-3,11,20-trion oder seine 21-Ester umgewandelt werden. Die entsprechenden lla-oder 11ß-Hydroxylverbindungen können in ähnlicher Weise in die 1,4,6-Triene umgewandelt werden. Die Triene können nach an sich bekannten Methoden zu 1-Dehydro-cortison oder 1-Dehydro-cortisol oder analogen Verbindungen reduziert werden. Die Ausgangsverbindung kann auch eine Doppelbindung in der 16-Stellung oder in der 9(11)-Stellung besitzen.The chemical transformations brought about by the deliydrating microorganisms on the different pregnenes are thus very different Kind and can be done individually, simultaneously or one after the other. The reactions are evidenced by other substituents in the steroid nucleus or in the side chain unaffected. From the foregoing it can be seen that it is not essential is that the starting product has a double bond in the 4-position of the A-ring. It can also have a double bond in the 5-position. The starting product can also have more than one double bond. This is how 4,6-pregnadienes can become dehydrated or otherwise, as described above, converted to form 1,4,6-pregnatrienes, which can easily be reduced to 1,4-pregnadienes by conventional methods. For example can convert 4,6-pregnadiene-17a, 21-diol-3,11-, 20-trione-21-acetate into 1,4,6-pregnatriene-17a, 21-diol-3,11,20-trione or its 21-ester can be converted. The corresponding IIIa or 11β-hydroxyl compounds can be converted to the 1,4,6-trienes in a similar manner. The Triene can according to methods known per se to 1-dehydrocortisone or 1-dehydrocortisol or analog connections are reduced. The starting compound can also have a double bond in the 16 position or in the 9 (11) position.

Die obenerwähnten Fischlösungen sind als Extrakt von Hering, Maifisch und als Mischungen, die einer enzymatischen Hydrolyse unterworfen wurden, im Handel verfügbar. Dieses Material kann der Kulturbrühe direkt als Nährmaterial zugeführt werden. Fischlösungen (5007, Gehalt an Feststoffen), die keiner enzymatischen Hydrolyse unterworfen wurden, werden mit Wasser verdünnt, etwa 10 Minuten bei 90°C gedämpft und anschließend filtriert.The above-mentioned fish solutions are commercially available as extracts from herring, allis shad and as mixtures which have been subjected to enzymatic hydrolysis. This material can be added directly to the culture broth as nutrient material. Fish solutions (5007, content of solids) that have not been subjected to enzymatic hydrolysis are diluted with water, steamed for about 10 minutes at 90 ° C and then filtered.

Ein weiteres Beispiel eines dehydrierenden Mikroorganismus, dernach derErfindung die oben beschriebenen Reaktionen durchführt, ist Bacillus sphaericus var. fusiformis (amerikanische Typenkultur-Sammlung 7055), der ebenfalls eine Doppelbindung in den A-Ring einführt, ohne die 17-Seitenkette anzugreifen oder den D-Ring aufzuspalten. Die entstehenden, im A-Ring ungesättigten Steroide sind in einer Kultur dieses Mikroorganismus sehr stabil, und es sind keine speziellen Vorsichtsmaßnahmen erforderlich, um eine Zersetzung der gebildeten Endprodukte zu verhindern. Die Inkubationszeit kann 96 Stunden betragen. Die Ausbeuten sind hoch und häufig fast quantitativ.Another example of a dehydrating microorganism, according to the invention performs the reactions described above is Bacillus sphaericus var. fusiformis (American type culture collection 7055), which also has a double bond into the A-ring without attacking the 17-side chain or splitting the D-ring. The resulting steroids, unsaturated in the A-ring, are in a culture of this microorganism very stable, and no special precautions are required to operate a To prevent decomposition of the end products formed. The incubation period can be 96 Hours. The yields are high and often almost quantitative.

Wie bei den anderen, obengenannten dehydrierenden Mikroorganismen können an Stelle einer wachsenden Kultur von B. sphaericus var. fusiformis die abgetrennten Enzyme oder der enzymatische Extrakt einer solchen Kultur benutzt werden. Die Ausgangssteroide können in gleicher Weise sehr verschieden sein, aber vorzugsweise wird Ausgangsmaterial benutzt, das eine Doppelbindung entweder am C-4- oder C-5-Atom besitzt.As with the other dehydrating microorganisms mentioned above can instead of a growing culture of B. sphaericus var. fusiformis the separated Enzymes or the enzymatic extract of such a culture can be used. The starting steroids can be very different in the same way, but is preferably starting material used, which has a double bond on either the C-4 or C-5 atom.

Im allgemeinen bewirkt B. sphaericusv ar. fusiformisdie gleiche chemische Umwandlung in den genannten Steroidverbindungen wie die Corynebacterien, außer daß es eine 3-Estergruppe nicht so schnell und in einigen Fällen überhaupt nicht hydrolysiert; es ist daher zweckmäßig, daß mit diesem Organismus 3-Keto- und 3-Hy droxysteroide und nicht die entsprechenden 3-Ester verarbeitet werden. Die Steroidsubstrate können Kerndoppelbindungen zusätzlich zu der am C-4- oder C-5-Atom besitzen, und solche zusätzlichen Doppelbindungen können mit Halogen oder Halogenwasserstoff oder durch Bildung von Addukten mit Dienophilen wie Maleinsäure und Maleinsäureanhydrid gesättigt werden.In general, B. sphaericusv ar. fusiformis the same chemical Conversion into the named steroid compounds like the Corynebacteria, except that it does not hydrolyze a 3-ester group as quickly and in some cases not at all; it is therefore appropriate that this organism 3-keto and 3-Hy droxysteroide and not the corresponding 3-esters are processed. The steroid substrates can Have nuclear double bonds in addition to that on the C-4 or C-5 atom, and such additional double bonds can be with halogen or hydrogen halide or by Formation of adducts with dienophiles such as maleic acid and saturated maleic anhydride will.

Die Art der Kultivierung von B.sphaericus var. fusiformis und die Methode des Inokulierens des \Tährmediums, die Natur des Nährmediums, die Art des Zusammenbringens von Steroidsubstrat mit der wachsenden Kultur des Mikroorganismus kann die gleiche sein wie bei der Corynebacteriumspezies, außer daß die Inkubationszeit länger sein kann und im allgemeinen etwa 24 bis 96 Stunden beträgt. In allen Fällen empfiehlt es sich, die Steroid enthaltende Kultur zu rühren und zu belüften.The type of cultivation of B.sphaericus var. Fusiformis and the Method of inoculating the culture medium, the nature of the culture medium, the type of Bringing the steroid substrate into contact with the growing culture of the microorganism can be the same as for the Corynebacterium species except that the incubation time can be longer and is generally about 24 to 96 hours. In all cases recommends it is enough to stir the steroid-containing culture and to ventilate.

Zusätzlich zu den oben angegebenen Nährmedien können auch Protopeptone benutzt werden. Das Wachstum des Mikroorganismus wird vorzugsweise bei einem p$ von etwa 6,6 bis 7,2 in Gang gesetzt. Die optimalen Temperaturen für das Wachstum des B. sphaericus var. fusiformis sind etwa 28°C, aber die Temperatur kann zwischen 19 und 32°C variieren.In addition to the nutrient media given above, protopeptones can also be used to be used. The growth of the microorganism is preferably at a p $ from about 6.6 to 7.2 started. The optimal temperatures for growth des B. sphaericus var. fusiformis are around 28 ° C, but the temperature can range between 19 and 32 ° C vary.

Die Steroidendprodukte werden vorzugsweise durch Extraktion mit den Lösungsmitteln und in der oben beschriebenen Weise gewonnen; jedoch kann jede andere geeignete, dem Chemiker bekannte Methode angewendet werden.The final steroid products are preferably obtained by extraction with the Solvents and obtained in the manner described above; however, each other can a suitable method known to the chemist can be used.

An Stelle der oben beschriebenen dehydrierenden Mikroorganismen können auch ihre Mutanten benutzt benutzt werden.Instead of the dehydrating microorganisms described above, you can use also their mutants are used.

B. Kombination der mikrobiologischen 1,2-Dehydrierung mit 11- und 21-Hydroxylierung und 11-Oxydation Die Dehydrierung des A-Ringes mit Hilfe der dehydrierenden Mikroorganismen kann kombiniert «.erden mit anderen mikrobiologischen Umwandlungen, die im einzelnen allgemein bekannt sind, und mit einem chemischen Oxydationsschritt, der z. B. durchgeführt werden kann, um ein 17a-Hydroxy-progesteron oder 5-Pregnen-3,17a-diol-20-on in 1-Dehydro-cortison oder 1-Dehydro-cortisolumzuwandeln. DieOperationen können in verschiedener Reihenfolge angewandt werden mit der Einschränkung, daB der chemische Oxydationsschritt auf die mikrobiologische 11-Hydroxylierung folgen muB. Die mikrobiologischen Prozesse gliedern sich in drei Typen (1) Einführung einer 1,2-Doppelbindung unter gleichzeitiger Oxydation eines 3-Hydroxyls durch Einwirkung eines dehydrierenden Mikroorganismus unter Bildung des 3-Keto-1,4-pregnadiensystems. (2) Einführung einer 11a- oder einer 11ß-Hydroxylgruppe durch die Einwirkung eines 11-hydroxylierenden Mikroorganismus, z. B. des Rhizopus-nigricans- oder Curvularia-lunata-Typs.B. Combination of microbiological 1,2-dehydration with 11- and 21-hydroxylation and 11-oxidation The dehydration of the A-ring with the help of the dehydrating Microorganisms can be combined with other microbiological transformations, which are well known in detail, and with a chemical oxidation step, the z. B. can be carried out to a 17a-hydroxy-progesterone or 5-pregnen-3,17a-diol-20-one to convert to 1-dehydro-cortisone or 1-dehydro-cortisol. The operations can can be applied in different order with the restriction that the chemical The oxidation step must follow the microbiological 11-hydroxylation. The microbiological Processes are divided into three types (1) Introduction of a 1,2 double bond simultaneous oxidation of a 3-hydroxyl by the action of a dehydrating one Microorganism with formation of the 3-keto-1,4-pregnadiene system. (2) Introduction of a 11a- or a 11ß-hydroxyl group by the action of an 11-hydroxylating Microorganism, e.g. B. of the Rhizopus nigricans or Curvularia lunata type.

(3) Einführung einer 21-Hydroxylgruppe durch Einwirkung eines Mikroorganismus der Art Ophiobolus. Die Reihenfolge dieser drei mikrobiologischen Umwandlungen kann abgewandelt werden und z. B. sein: (1), (2), (3); (2), (1), (3); (1), (3), (2) oder (3), (1), (2). Wenn z. B. 1-Dehydro-cortison hergestellt werden soll, wird zunächst nach Einführung der 11a-Hydroxylgruppe das gebildete Zwischenprodukt oxydiert, z. B. mit Chromsäure in Pyridin unter Bildung der 11-Ketogruppe.(3) Introduction of a 21-hydroxyl group by the action of a microorganism of the species Ophiobolus. The order of these three microbiological conversions can be be modified and z. B. be: (1), (2), (3); (2), (1), (3); (1), (3), (2) or (3), (1), (2). If z. B. 1-dehydro-cortisone is to be produced initially after the introduction of the 11a-hydroxyl group, the intermediate product formed is oxidized, e.g. B. with chromic acid in pyridine to form the 11-keto group.

Die Einführung eines 11a-Hydroxyls wird vorzugsweise durch die Einwirkung einer Kultur (oder des abgetrennten enzymatischen Materials) von Rhizopus nicricans durchgeführt in der Weise, wie in der USA.-Patentschrift 2 602 769 beschrieben; die Einführung einer 11ß-Hydroxylgruppe wird vorzugsweise mit einer Kultur (oder dem abgetrennten enzymatischen Material einer Kultur) von Curvularia lunata, wie in der USA.-Patentschrift 2 658 023 beschrieben, durchgeführt. Jedoch können auch andere 11a-hydroxyherende Organismen, wie z. B. Aspergillus niger, Rhizopus arrhizus u. ä., benutzt werden. Auch können andere ß-hydroxylierende Mikroorganismen, wie z. B. Cunninghamella blakesleeana u. ä., benutzt werden.The introduction of a 11a-hydroxyl is preferred by the action a culture (or the separated enzymatic material) of Rhizopus nicricans performed in the manner described in U.S. Patent 2,602,769; the introduction of a 11β-hydroxyl group is preferably carried out with a culture (or the separated enzymatic material from a culture) of Curvularia lunata, such as in U.S. Patent 2,658,023. However, you can also other 11a-hydroxy-derived organisms, such as e.g. B. Aspergillus niger, Rhizopus arrhizus and the like. Other ß-hydroxylating microorganisms, such as z. B. Cunninghamella blakesleeana and the like, can be used.

Die 21-Hydroxylgruppe wird in das Steroidmolekül durch einen hydroxylierenden Organismus der Art Ophiobolus, vorzugsweise 0. herbotrichus, in der Weise eingeführt, wie von Meystre und Mitarbeiter in Helvetica Chimica Acta, Bd. 37 (1954), S. 1548, beschrieben.The 21-hydroxyl group is made into the steroid molecule through a hydroxylating agent Organism of the species Ophiobolus, preferably 0. herbotrichus, introduced in such a way as by Meystre and co-workers in Helvetica Chimica Acta, Vol. 37 (1954), p. 1548, described.

Die 1,2-Doppelbindungkann durcheinendehydrierenden Organismus in das Ausgangsmaterial oder in irgendeine der anfallenden Zwischenverbindungen eingeführt werden.The 1,2 double bond can enter the Starting material or introduced into any of the resulting intermediate compounds will.

Die verschiedenen Reaktionen können durch die folgenden Gleichungen dargestellt werden: Weg A 1,4-Pregnadien- 1,4-Pregnadien- 17a-Hydroxyprogesteron 11a,17a-diol-3,20-dion 11a,17a,21-triol-3,20-dion Ie IIIC VIIa 1 4-Pregnadien- 1,4-Pregnadien- 1,4-Pregnadien- 17a-ol-3,20-dion - 17a-ol-3,11,20-trion 17a,21-diol-3,11-20-trion IIC Vc Ha, T T T 5-Pregnen- 1,4-Pregnadien- 1,4-Pregnadien- 3,17a-diol-20-on 11ß,17a-diol-3,20-dion @@ 11ß,17a,21-triol-3,20-dion I'c IVc IIIa Weg B 4-Pregnen-11a,17a-diol-3,20-dion 3, IIIC VIIa VIc I c - 4-Pregnen-17a-ol-3,11-20-trion --D V c --3- 1I a VIII c T 4-Pregnen-11ß,17a-diol-3,20-dion > IVc D, IIIa VIIc In der ersten Reaktionsfolge (Weg A) wird 17a-Hydroxy-progesteron (I c) oder 5-Pregnen-3,17a-diol-20-on (I'c) durch die Einwirkung von Corynebacterium simplex oder C. hoagii direkt in 1,4-Pregnadien-17a-ol-3,20-dion (11c) übergeführt. Durch die Hydroxylierung von IIc mit Rhizopus nigricans (in der in der USA.-Patentschrift 2 602 769 beschriebenen Weise) wird Verbindung III c erhalten. Andererseits entsteht durch Hydroxylierung von IIc mit Curvularia lunata (nach dem in der USA.-Patentschrift 2 658 023 angegebenen Verfahren) Verbindung IVc.The different reactions can be represented by the following equations: Way a 1,4-Pregnadiene 1,4-Pregnadiene 17a-hydroxyprogesterone 11a, 17a-diol-3,20-dione 11a, 17a, 21-triol-3,20-dione Ie IIIC VIIa 1 4-Pregnadia 1.4-Pregnadia 1.4-Pregnadia 17a-ol-3,20-dione - 17a-ol-3,11,20-trione 17a, 21-diol-3,11-20-trione IIC Vc Ha, TTT 5-pregnen- 1,4-pregnadiene- 1,4-pregnadiene- 3,17a-diol-20-one 11β, 17a-diol-3,20-dione @@ 11β, 17a, 21-triol-3,20-dione I'c IVc IIIa Way B 4-pregnen-11a, 17a-diol-3,20-dione 3, IIIC VIIa VIc I c - 4-pregnen-17a-ol-3,11-20-trione --D V c - 3- 1I a VIII c T 4-pregnen-11β, 17a-diol-3,20-dione > IVc D, IIIa VIIc In the first reaction sequence (route A), 17a-hydroxy-progesterone (I c) or 5-pregnen-3,17a-diol-20-one (I'c) is directly converted into 1 by the action of Corynebacterium simplex or C. hoagii , 4-Pregnadien-17a-ol-3,20-dione (11c) converted. Hydroxylation of IIc with Rhizopus nigricans (in the manner described in U.S. Patent 2,602,769) gives compound IIIc. On the other hand, hydroxylation of IIc with Curvularia lunata (according to the method given in US Pat. No. 2,658,023) produces compound IVc.

Auch andere 11a-hydroxylierende Organismen, wie z. B. Aspergillus niger, Rhizopus arrhizus, wandeln IIc in III c um. Für die Überführung von 1I c in IV c können weitere llß-hydrox-ylierende Organismen, wie z. B. Cunninghamella blakesleeana, benutzt werden. IIIc bzw. IV e kann zu V c und VII a bzw. III a kann zu Il a durch Einwirkung eines milden Oxydationsmittels, wie z. B. Pyridin-Chromsäure, oxydiert werden. Vorzugsweise verwendet man die 21-Acylate, z. B. 21-Acetate von IIIc, IV c, VII a und III a. Durch Kochen mit alkoholischem Kaliumcarbonat können die 21-Estergruppen anschließend verseift werden.Other 11a-hydroxylating organisms, such as. B. Aspergillus niger, Rhizopus arrhizus, convert IIc to IIIc. For the transfer of 1I c in IV c can other 11ß-hydroxylating organisms such. B. Cunninghamella blakesleeana. IIIc or IV e can become V c and VII a or III a can to Il a by the action of a mild oxidizing agent, such as. B. pyridine chromic acid, are oxidized. The 21-acylates are preferably used, e.g. B. 21-acetates from IIIc, IV c, VII a and III a. By cooking with alcoholic potassium carbonate you can the 21-ester groups are then saponified.

Die Hydroxylierung von III c, IV c oderV c in 21-Stellung kann z. B. mit Ophiobolus herbotrichus durchgeführt werden, wobei VII a, III a oder II a (s. Formelschema I) entstehen.The hydroxylation of III c, IV c or V c in the 21-position can, for. B. be carried out with Ophiobolus herbotrichus, VII a, III a or II a (see formula scheme I) arise.

Nach Weg B wird erst 11-hydroxyliert und dann oxydiert. Man erhält so die neuen Zwischenprodukte VIc, VIIc und VIIIc. Die Endprodukte sind die gleichen wie bei Weg A. Kombination der mikrobiologischen 1,2-Dehydrierung mit einer 11- und 17a-Hydroxylierung Die bevorzugten Endprodukte, insbesondere 1-Dehydrocortison und 1-Dehydro-cortisol und deren Ester, können z. B. aus Desoxy-corticosteron oder aus 5-Pregnan-3,21-diol-20-on und deren Estern durch Kombination der mikrobiologischen 1,2-Dehydrierung mit einer 11- und 17a-Hydroxylierung erhalten werden. Die mikrobiologischen Umwandlungen sind die folgenden (1) Einführung einer 1,2-Doppelbindung bei gleichzeitiger Oxydation eines 3-Hydroxyls bzw. bei gleichzeitiger Hydrolyse eines 3-Esters und anschließender Oxydation des entstandenen 3-Hydroxyls durch Einwirkung eines dehydrierenden Mikroorganismus.Route B is first 11-hydroxylated and then oxidized. You get so the new intermediates VIc, VIIc and VIIIc. The end products are the same as for route A. Combination of microbiological 1,2-dehydration with an 11- and 17a-hydroxylation. The preferred end products, especially 1-dehydrocortisone and 1-dehydrocortisol and their esters, e.g. B. from deoxy-corticosterone or from 5-pregnan-3,21-diol-20-one and their esters by combining the microbiological 1,2-dehydrogenation can be obtained with an 11- and 17a-hydroxylation. The microbiological Conversions are the following (1) Introduction of a 1,2 double bond at the same time Oxidation of a 3-hydroxyl or with simultaneous hydrolysis of a 3-ester and subsequent oxidation of the 3-hydroxyl formed by the action of a dehydrating agent Microorganism.

(2) Einführung einer 11a- oder llß-Hydroxylgruppe durch Behandlung mit einem Organismus z. B. des Typs Rhizopus nigricans oder Curvularia lunata.(2) Introduction of a 11a- or 11ß-hydroxyl group by treatment with an organism e.g. B. of the type Rhizopus nigricans or Curvularia lunata.

(3) Einführung einer 17a-Hydroxylgrnppe durch Einwirkung einer Kultur eines hydroxylierenden Mikroorganismus z. B. aus der Art Trichothecium.(3) Introduction of a 17a-hydroxyl group by the action of a culture a hydroxylating microorganism e.g. B. from the species Trichothecium.

Die Reihenfolge dieser drei mikrobiologischen Umwandlungen kann folgendermaßen sein: (1), (2), (3) oder (2), (1), (3) oder (1), (3), (2) oder (3), (1), (2). Falls 1-Dehydro-cortison oder dessen Ester hergestellt werden sollen, wird in irgendeiner Stufe nach Einführung der 11-Hydroxylgruppe das Zwischenprodukt oxydiert, vorzugsweise in der Form seines 21-Esters z. B. mit Chromtrioxyd bei niederen Temperaturen. Diese Oxydation einer 11-Hydroxylgruppe zur 11-Ketogruppe führt man zweckmäßigerweise nur dann durch, wenn die 11-Hydroxylgruppe a-Konfiguration hat, da die ß-Konfiguration die therapeutisch wirksame Form darstellt.The order of these three microbiological conversions can be as follows be: (1), (2), (3) or (2), (1), (3) or (1), (3), (2) or (3), (1), (2). If 1-Dehydro-cortisone or its ester is to be produced in any Step after the introduction of the 11-hydroxyl group, the intermediate is oxidized, preferably in the form of its 21-ester e.g. B. with chromium trioxide at low temperatures. These Oxidation of an 11-hydroxyl group to form the 11-keto group is expediently carried out only through if the 11-hydroxyl group has a-configuration, since the ß-configuration represents the therapeutically effective form.

Die 17a-Hydroxylgruppe wird in der Weise und mit der Apparatur eingeführt, wie von Meystre und Mitarbeiter beschrieben in Helvetica Chimica Acta, Bd. 37 (1954), S.1548. Ein geeigneter Organismus für diese 17a-Hydroxylierung ist z. B. Trichothecium roseum.The 17a-hydroxyl group is introduced in the manner and with the apparatus as described by Meystre and co-workers in Helvetica Chimica Acta, Vol. 37 (1954), P.1548. A suitable organism for this 17α-hydroxylation is e.g. B. Trichothecium roseum.

Nach erfolgter Dehydrierung des Ringes A, die von einer Hydrolyse begleitet sein kann (wenn Mono- oder Polyester benutzt werden), können die Reaktionsprodukte durch Extraktion, Filtration, Adsorption oder jede andere bekannte Arbeitsweise aus der Mischung gewonnen werden. Gegebenenfalls können die Endprodukte nach bekannten Verfahren in ihre Ester umgewandelt werden, z. B. in ihre niedern Alkan- und insbesondere in ihre Essigsäureester.After dehydration of ring A, the result of hydrolysis can be accompanied (if mono- or polyester are used), the reaction products can by extraction, filtration, adsorption or any other known method of operation can be obtained from the mixture. The end products can optionally be prepared according to known methods Processes to be converted to their esters, e.g. B. in their lower alkane and in particular in their acetic acid esters.

Das folgende Schema erläutert die verschiedenen Reaktionsfolgen Weg C 1,4-Pregnadien- 1,4-Pregnadien- 4-Pregnen-21-ol-3,20-dion 11a-,21-diol-3,20-dion 11a,17a,21-triol-3,20-dion Id IIId VIIa y y 1,4-Pregnadien- 1,4-Pregnadien- 1,4-Pregnadien- 21-ol-3,20-dion - 21-ol-3,11,20-trion 17a,21-diol-3,11,20-trion IId Vd Ha T T T 1,4-Pregnadien- 1,4-Pregnadien- 5-Pregnen-3,21-diol-20-on llß-,21-diol-3,20-dion 11ß,17a,21-triol-3,20-dion I'd IVd IIIa 4-Pregnen-11a,21-diol-3,20-dion IIId -@ VIIa VId y I d - 4-Pregnen-21-ol-3,11-20-trion > V d > Ha VIIId T 4-Pregnen-l lß,21-diol-3,20-dion > IV d D, III a VIId Im obigen Schema wurden aus Gründen der Einfachheit die Verbindungen III d, IV d, VI d, VII d, III a und VII a als freie 21-Alkohole angegeben. In der Praxis ist es jedoch vorteilhaft, die 21-OH-Gruppe vor der Oxydation z. B. mit einem niederen alkanoylierenden Agens zu verestern. Die Estergruppe wird dann später wieder hydrolysiert. Bei den Verbindungen VId und VIId kann die Hydrolyse gleichzeitig mit der Einführung der 1,2-Doppelbindung durch Corynebacterium oder einen anderen dehydrierenden Mikroorganismus erzielt werden.The following scheme illustrates the various reaction sequences Way C 1,4-Pregnadiene 1,4-Pregnadiene 4-pregnen-21-ol-3,20-dione 11a, 21-diol-3,20-dione 11a, 17a, 21-triol-3,20-dione Id IIId VIIa yy 1,4-Pregnadiene- 1,4-Pregnadiene- 1,4-Pregnadiene- 21-ol-3,20-dione - 21-ol-3,11,20-trione 17a, 21-diol-3,11,20-trione IId Vd Ha TTT 1,4-Pregnadiene 1,4-Pregnadiene 5-pregnen-3,21-diol-20-one 11ß-, 21-diol-3,20-dione 11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione I'd IVd IIIa 4-pregnen-11a, 21-diol-3,20-dione IIId - @ VIIa VId y I d - 4-pregnen-21-ol-3,11-20-trione> V d> Ha VIIId T 4-Pregnen-lß, 21-diol-3,20-dione > IV d D, III a VIId In the above scheme, the compounds III d, IV d, VI d, VII d, III a and VII a have been given as free 21-alcohols for the sake of simplicity. In practice, however, it is advantageous to remove the 21-OH group prior to oxidation, e.g. B. to esterify with a lower alkanoylating agent. The ester group is then hydrolyzed again later. In the case of compounds VId and VIId, the hydrolysis can be achieved simultaneously with the introduction of the 1,2 double bond by Corynebacterium or another dehydrating microorganism.

In der ersten Folge wird Desoxy-corticosteron (Id) durch Behandlung mit Corynebacterium simpler in 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dion übergeführt (IId), das auch durch analoge Behandlung von 5-Pregnen-3,21-diol-20-on (I'd) gebildet wird. Die Hydroxylierung von II d durch Rhizopus nigricans liefert III d, während die Hydroxylierung von IId mit Curvularia iunata IVd liefert. Diese Hydroxylierungsprozesse sind leicht durchführbar.In the first episode, deoxy-corticosterone (Id) is given by treatment with Corynebacterium simpler converted into 1,4-pregnadien-21-ol-3,20-dione (IId), which is also formed by the analogous treatment of 5-Pregnen-3,21-diol-20-one (I'd). The hydroxylation of II d by Rhizopus nigricans yields III d, while the Hydroxylation of IId with Curvularia iunata IVd yields. These hydroxylation processes are easy to do.

Andere 11a- bzw. l lß-hydroxylierende Organismen, wie z. B. Aspergillus niger, Rhizopus arrhizus usw. (11a) oder Cunninghamella blakesleeana (11ß), bewirken die gleichen Umwandlungen. IIId oder IVd oder vorzugsweise ihre 21-Acetate können zu V d oder seinen entsprechenden Estern durch Behandlung mit einem milden Oxydationsmittel, wie z. B. Pyridin-Chromsäure, oxydiert werden.Other 11a or lß-hydroxylating organisms, such as. B. Aspergillus niger, Rhizopus arrhizus etc. (11a) or Cunninghamella blakesleeana (11ß) the same conversions. IIId or IVd or, preferably, their 21-acetates to V d or its corresponding esters by treatment with a mild oxidizing agent, such as B. pyridine chromic acid, are oxidized.

Die 17a-Hydroxylierung von III d, IV d oder V d, z. B. mit Trichothecium roseum durchgeführt, liefert VIIa, IIIa oder IIa. Sowohl VIIa als auch IIIa (oder vorzugsweise ihre 21-Acetate) können durch milde Oxydation (Pyridin-Chromsäure) in II a umgewandelt werden.The 17a-hydroxylation of III d, IV d or V d, e.g. B. carried out with Trichothecium roseum, gives VIIa, IIIa or IIa. Both VIIa and IIIa (or preferably their 21-acetates) can be converted to IIa by mild oxidation (pyridine-chromic acid).

Nach der zweiten Reaktionsfolge wird I d zunächst 11-hydroxyliert und dann im A-Ring dehydriert, wobei drei neue Zwischenprodukte (VId, VIId und VIIId) entstehen, während die erhaltenen Endprodukte die gleichen sind. Verwendung eines 16,17-ungesättigten Pregnenderivats als Ausgangsmaterial Nach der Erfindung ist es möglich, ein 16,17-ungesättigtes Pregnenderivat als Ausgangsmaterial zu verwenden. Zum Beispiel kann man das relativ billige 16-Dehydro-pregnenolon (I e) und dessen Ester oder 16-Dehydro-progesteron (IIIe) in 1-Dehydro-cortisol und 1-Dehydro-cortison und deren Ester umwandeln. Die notwendigen Operationen sind die folgenden: (a) Umwandlung des 3-Hydroxy-5-pregnensystems in das 3-Keto-4-pregnensystem bei Verwendung von 16-Dehydro-pregnenolon.After the second reaction sequence, I d is first 11-hydroxylated and then dehydrated in the A ring, with three new intermediates (VId, VIId and VIIId) arise while the final products obtained are the same. Using a 16,17-unsaturated Pregnene derivative as a starting material According to the invention it is possible to use a 16,17-unsaturated Pregnene derivative as a starting material. For example, you can use the relatively cheap 16-dehydro-pregnenolon (I e) and its Ester or 16-dehydro-progesterone (IIIe) in 1-dehydro-cortisol and 1-dehydro-cortisone and convert their esters. The operations required are as follows: (a) Conversion of the 3-hydroxy-5-pregnancy system to the 3-keto-4-pregnancy system when using 16-dehydro-pregnenolone.

(b) Einführung eines 17a-Hydroxyls über das 16,17-Epoxyd.(b) Introduction of a 17a-hydroxyl via the 16,17-epoxy.

(c) Einführung einer 21-Hydroxylgruppe durch Einwirkung eines :Mikroorganismus der Art Ophiobolus, beispielsweise 0. herbotrichus.(c) Introduction of a 21-hydroxyl group by the action of a: microorganism of the species Ophiobolus, for example 0. herbotrichus.

(d) Einführung einer 11a- oder llß-Hydroxylgruppe durch Einwirkung eines 11-hydroxylierenden Mikroorganismus, wie oben beschrieben, und (e) Einführung der 1,2-Doppelbindung mit Hilfe von Corynebacterium simpler oder anderen analog dehydrierenden Mikroorganismen. Die Oxydation der 3-Hydroxylgruppe des 16-Dehydro-pregnenolons (Ie) kann nach der Oppenauer-Reaktion oder durch Oxydation mit Chromsäure (etwa bei Zimmertemperatur) durchgeführt werden. Es ist vorteilhaft, diese Oxydation gleichzeitig mit der Einführung der 1,2-Doppelbindung durch Behandlung mit einer Kultur eines dehydrierenden Mikroorganismus oder mit einem enzymatischen Extrakt solcher Kultur durchzuführen, wie es im vorangegangenen ausführlicher beschrieben wurde; jedoch sollte auf diese Behandlung die Einführung einer Hydroxylgruppe in einer oder mehreren der 11-, 17- und 21-Stellung folgen, da sonst die Ausbeuten gering sind. Falls erwünscht, können Ester des 16-Dehydro-pregnenolons als Ausgangsmaterial benutzt werden. Die Einführung der 17a-Hydroxylgruppe kann auch durch Behandlung mit einer Persäure (z. B. Monoperphthalsäure oder Benzopersäure) durchgeführt werden, wobei das 16,17-Epoxyd als Zwischenprodukt entsteht. Das letztere wird dann z. B. der Einwirkung von jod`vasserstoff-Eisessig-Essigsäureanhydrid unterworfen, wobei die 16-Jod-17a-Hydroxyverbindung entsteht. Das Jodatom kann durch Kochen der Verbindung in einem niederen aliphatischen Alkohol (z. B. Äthanol), der eine geringe Menge einer organischen Säure, wie z. B. Essigsäure, enthält und in Gegenwart von Raneynickel entfernt werden.(d) Introduction of a 11a or 11ß hydroxyl group by action an 11-hydroxylating microorganism as described above and (e) introduction the 1,2-double bond with the help of Corynebacterium simpler or other analogues dehydrating microorganisms. The oxidation of the 3-hydroxyl group of 16-dehydro-pregnenolons (Ie) can after the Oppenauer reaction or by oxidation with chromic acid (approx at room temperature). It is beneficial to have this oxidation at the same time with the introduction of the 1,2 double bond by treatment with a culture of a dehydrating microorganism or with an enzymatic extract of such culture perform as described in more detail above; However should on this treatment the introduction of a hydroxyl group in one or more follow the 11-, 17- and 21-positions, otherwise the yields are low. If desired, Esters of 16-dehydro-pregnenolone can be used as starting material. the Introduction of the 17a-hydroxyl group can also be achieved by treatment with a peracid (e.g. monoperphthalic acid or benzoperic acid), with the 16,17-epoxy arises as an intermediate product. The latter is then z. B. the action of hydrogen iodine-glacial acetic anhydride subjected, whereby the 16-iodine-17a-hydroxy compound is formed. The iodine atom can through Cooking the compound in a lower aliphatic alcohol (e.g. ethanol), the a small amount of an organic acid, such as. B. acetic acid, contains and in Presence of Raney nickel can be removed.

Die21-Hydroxylgruppewirdin derbereitsbeschriebenen Weise durch Behandlung der 21-Methylverbindung mit einer Kultur der Art Ophiobolus geführt; die Einführung der 11a- oder 11ß-Hydroxylgruppe wird, wie oben beschrieben, durchgeführt. Die llß-Hydroxylgruppe kann auch in 1,16- und 1,4-Pregnadiene sowie 1,4,16-Pregnatriene eingeführt werden; in 1,4-Pregnadiene kann auch das 11a-Hydroxyl eingeführt werden, ohne daß eine der Doppelbindungen angegriffen wird.The 21-hydroxyl group is treated in the manner previously described the 21-methyl compound carried out with a culture of the species Ophiobolus; the introduction the 11a- or 11β-hydroxyl group is carried out as described above. The llß-hydroxyl group can also be introduced in 1,16- and 1,4-pregnadienes as well as 1,4,16-pregnatrienes; in 1,4-pregnadienes the 11a-hydroxyl can also be introduced without any of the Double bonds is attacked.

Die Einführung der 1,2-Doppelbindung erfolgt ebenfalls, wie oben beschrieben, vorzugsweise nach der Hydroxylierungsreaktion. Die 1,2-dehydrierenden Mikroorganismen sind fähig, eine 1,2-Doppelbindung auch in solche Steroide einzuführen, die bereits Doppelbindungen am C-16-Atom und am C-S-Atom besitzen. Bei der gleichzeitig erfolgenden Oxydation einer 3-Hydroxylgruppe verschiebt sich eine in 5,6-Stellung vorhandene Doppelbindung in die 4,5-Stellung. Unter gewissen Bedingungen kann eine Oxydation einer 20-Hydroxylgruppe zu einer 20-Ketogruppe erfolgen.The introduction of the 1,2 double bond also takes place as described above, preferably after the hydroxylation reaction. The 1,2-dehydrating microorganisms are able to introduce a 1,2 double bond even into those steroids that are already Have double bonds on the C-16 atom and on the C-S atom. At the same time Oxidation of a 3-hydroxyl group shifts one present in the 5,6-position Double bond in the 4,5 position. Oxidation can occur under certain conditions from a 20-hydroxyl group to a 20-keto group.

Falls 1-Dehydro-cortison hergestellt werden soll, ist es zweckmäßig, eine 11a-OH-Gruppe einzuführen, da diese im allgemeinen leichter eingeführt und zur 11-Ketogruppe oxydiert werden kann.If 1-dehydrocortisone is to be produced, it is advisable to to introduce a 11a-OH group, since this is generally more easily introduced and can be oxidized to the 11-keto group.

Die Zwischenprodukte haben die Formeln VIII und IX (Formelschema II). In diesen Formeln ist X = H,H oder 0 oder H, OH (a oder ß), während R an Stelle von H, OH oder OAcyl steht, wobei die Acylgruppe den Rest einer organischen Carbonsäure bedeutet, wie z. B. Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Buttersäure, Valeriansäure oder Capronsäure. Aber auch andere Säuren, wie z. B. substituierte Alkan- und aromatische Säure, wie Cyclohexylessigsäure, Cyclopentyl-propionsäure und Benzoesäure, sind verwendbar.The intermediate products have the formulas VIII and IX (formula scheme II). In these formulas, X = H, H or 0 or H, OH (a or ß), while R is in place of H, OH or OAcyl, the acyl group being the residue of an organic carboxylic acid means, such as B. formic acid, acetic acid, propionic acid, butyric acid, valeric acid or caproic acid. But also other acids, such as. B. substituted alkane and aromatic Acid such as cyclohexylacetic acid, cyclopentyl propionic acid and benzoic acid usable.

Verbindungen, in denen X Hydroxyl und R eine Acylgruppe darstellt, werden hergestellt durch 21-Veresterung von 16,17-Oxido-1,4-pregnadien-11,21-diol-3,20-dion und folgende Aufspaltung des Oxidorings mit H J oder HBr unter Bildung des entsprechenden Halogenhydrins, das anschließend mit Raneynickel oder mit Wasserstoff in Gegenwart von Palladiumkohle vom Halogen befreit wird.Compounds in which X is hydroxyl and R is an acyl group, are prepared by the 21-esterification of 16,17-oxido-1,4-pregnadiene-11,21-diol-3,20-dione and subsequent cleavage of the oxidizing ring with H J or HBr to form the corresponding one Halohydrins, which are then mixed with Raney nickel or with hydrogen in the presence is freed from the halogen by palladium carbon.

Das folgende Schema zeigt die wichtigsten Reaktionen dieses Syntheseweges Weg D Xe 5-Pregnen- 3,11,17a,21-tetrol-20-on T XIIIe IXe T T 16,17-Oxido-5-pregnen- 16,17-Oxido-4-pregnen- 3,11,21-triol-20-on 11,21-diol-3,20-dion XII e XV e T T 16,17-Oxido-5-pregnen- 16,17-Oxido-4-pregnen- 3,11-diol-20-on 11-ol-3,20-dion XI e XIV e T T 16-Dehydro-pregnenolon 16,17-Oxido-5-pregnen- > 16,17-Oxido-4-pregnen- 17a-Hydroxy- - 3-ol-20-on 3,20-dion progesteron Ie He IVe VIIe y 16-Dehydro-progesteron - 16,17-Oxido-1,4-pregna- dien-3,20-dion IIIe VIe 16,17-Oxido-1,4-pregna- 1,4-Pregnadien- dien-21-ol-3,20-dion 17a,21-diol-3,20-dion y 1-Dehydro-cortison -E 1,4-Pregnadien- 4-Pregnen- 4-Pregnen- 11,17a-21-triol-3,20-dion 11,17a,21-triol-3,20-dion 17a,21-diol-3,20-dion IIa Xe Ixe VIIIe Die meisten dieser Reaktionen sind vollständig unabhängig voneinander, so daß die Reihenfolge der Operationen verschieden sein kann. E. 11-Hydroxylierung und folgende 11-Oxydation an 1,4-Pregnadienderivaten Ein Beispiel für die Verwendung eines Ausgangsmaterials, das bereits die 3-Keto-1,4-pregnadien-Struktur besitzt, ist 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion (1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S), das aus Reichsteins-Substanz-Sentweder chemisch (s. USA.-Patentschrift 2 579 479) oder nach der Erfindung durch Behandlung mit einem 1,2-dehydrierenden Mikroorganismus hergestellt werden kann.The following scheme shows the most important reactions of this synthetic route Way D Xe 5 pregnen 3,11,17a, 21-tetrol-20-on T XIIIe IXe TT 16,17-Oxido-5-pregnen- 16,17-Oxido-4-pregnen- 3,11,21-triol-20-one, 11,21-diol-3,20-dione XII e XV e TT 16,17-Oxido-5-pregnen- 16,17-Oxido-4-pregnen- 3,11-diol-20-one 11-ol-3,20-dione XI e XIV e TT 16-dehydro-pregnenolone 16,17-oxido-5-pregnen-> 16,17-oxido-4-pregnen- 17a-hydroxy- - 3-ol-20-one 3,20-dione progesterone Ie He IVe VIIe y 16-dehydro-progesterone - 16,17-oxido-1,4-pregna- diene-3,20-dione IIIe VIe 16,17-oxido-1,4-pregna- 1,4-pregnadiene- dien-21-ol-3,20-dione 17a, 21-diol-3,20-dione y 1-Dehydro-cortisone -E 1,4-Pregnadiene- 4-Pregnen- 4-Pregnen- 11,17a-21-triol-3,20-dione 11,17a, 21-triol-3,20-dione 17a, 21-diol-3,20-dione IIa Xe Ixe VIIIe Most of these reactions are completely independent of one another, so that the order of the operations can be different. E. 11-hydroxylation and subsequent 11-oxidation on 1,4-pregnadiene derivatives. An example of the use of a starting material which already has the 3-keto-1,4-pregnadiene structure is 1,4-pregnadiene-17a, 21 -diol-3,20-dione (1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S), which from Reichsteins-Substance-Sentweder chemically (see US Pat. No. 2,579,479) or according to the invention by treatment with a 1,2 -dehydrating microorganism can be produced.

Es wurde gefunden, daß 11-hydroxylierende Mikroorganismen fähig sind, eine 11-Hydroxylgruppe auch in 1,4-Pregnadiene einzuführen, ohne daß das konjugierte Doppelbindungssystem im A-Ring durch solche Mikroorganismen angegriffen wird. 1-Dehydro-cortison und 1-Dehydro-cortisol können somit z. B. in einfacher Weise aus 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-Shergestellt werden.It has been found that 11-hydroxylating microorganisms are capable to introduce an 11-hydroxyl group in 1,4-pregnadienes without affecting the conjugated Double bond system in the A-ring is attacked by such microorganisms. 1-dehydrocortisone and 1-dehydro-cortisol can thus z. B. made in a simple manner from 1-dehydro-Reichsteins substance Sher will.

Verbindungen mit 3-Keto-1,4-pregnadien-Struktur (z. B. l f) können z. B. mit folgenden Mikroorganismen 11a-hydroxyliert werden: Rhizopus arrhizus, Rhizopus delmar, Rhizopus nigricans, Rhizopus reflexus, Aspergillus niger, Phycomyces blakesleeanus usw. l lß-Hydroxylierung kann z. B. erfolgen durch Einwirkung von Cunninghamella-blakesleeana, Curvularia lunata oder einem anderen bekannten, in 11ß-Stellung hydroxylierenden Mikroorganismus.Compounds with a 3-keto-1,4-pregnadiene structure (e.g. lf) can e.g. B. with the following microorganisms 11a-hydroxylated: Rhizopus arrhizus, Rhizopus delmar, Rhizopus nigricans, Rhizopus reflexus, Aspergillus niger, Phycomyces blakesleeanus, etc. lß-hydroxylation can, for. B. are carried out by the action of Cunninghamella blakesleeana, Curvularia lunata or another known microorganism which hydroxylates in the 11β-position.

IM kann, vorzugsweise in Form seines 21-Acetats, in üblicher Weise (Cr03/Pyridin) zu IIb oxydiert werden, das dann leicht zu 1-Dehydro-cortison (IIa) hydrolysiert werden kann. Die 11ß-Hydroxylierung liefert den 21-Ester des 1-Dehydro-cortisols (IIIb), das gegebenenfalls auch zum 21-Ester des 1-Dehydro-cortisons oxydiert und anschließend zum freien 1-Dehydro-cortison hydrolysiert werden kann. Weg E 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion 1,4-Pregnadien-11a,17a,21-triol-3,20-dion oder 21-Ester oder 21-Ester If IIf 1,4-Pregnadien-llß-17a,21-triol-3,20-dion 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,11,20-trion oder 21-Ester oder 21-Ester Ma oder IIIb Ha oder IIb Wenn If als 21-Alkohol vorliegt, wird es nach der 11-Hydroxylierung in 21-Stellung verestert und erst dann in 11-Stellung oxydiert. Das Acylradikal ist vorzugsweise der Essigsäurerest, es kann jedoch ebenfalls der Rest einer anderen niederen Fettsäure, wie z. B. Ameisensäure, Propionsäure, Buttersäure, Valeriansäure oder Bernsteinsäure, oder von aromatischen Säuren, wie Benzoesäure, Salizylsäure, Phthalsäure und Veratrumsäure, §ein. Wenn zweibasische Säuren--zur Veresterung benutzt werden, so entstehen meistens die Halbester der 1,4-Pregnadienderivate. F. , Herstellung des 1,4-ungesättigten A-Ringes durch chemische :Mittel Die 21-Ester des Pregnan-17a,21-diol-3,11,20-trions (Ig, s. unten) und ebenso der 21-Ester und die 11,21-Diester des Pregnan-11 (a oder ß), 17a,21-triol-3,20-dions (II g, l 1ß-0 H-Verbindung) können an den 2- und 4-Stellungen durch Behandlung mit einem Halogen, das ein höheres Atomgewicht besitzt als das von Fluor, halogeniert werden unter Bildung der entsprechenden 2,4-Dihalogenide. Die Veresterung insbesondere des 11ß-Hydroxyls verbessert die Ausbeute. Die Halogenierung in den beiden Stellungen kann in einer oder zwei Stufen durchgeführt werden, und im letzteren Falle können verschiedene Halogene wie Chlor und Brom benutzt werden. Das Dihalogenid wird dann mit einem halogenwasserstoffabspaltenden Reagens behandelt, wobei die 1,2- und 4,5-Doppelbindung eingeführt wird (IIb, IIIb [21-Ester oder 11,21-Diesterl oder VIIb [Fofinelschemä IJ). Die Ester können in bekannter Weise hydrolysiert werden (IIa, IIIa oder VIIa).IM can, preferably in the form of its 21-acetate, be oxidized in the usual way (CrO3 / pyridine) to IIb, which can then easily be hydrolyzed to 1-dehydrocortisone (IIa). The 11β-hydroxylation yields the 21-ester of 1-dehydrocortisone (IIIb), which can optionally also be oxidized to the 21-ester of 1-dehydrocortisone and then hydrolyzed to the free 1-dehydrocortisone. Ways 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione 1,4-pregnadiene-11a, 17a, 21-triol-3,20-dione or 21-ester or 21-ester If IIf 1,4-pregnadiene-11ß-17a, 21-triol-3,20-dione 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,11,20-trione or 21-ester or 21-ester Ma or IIIb Ha or IIb If If is in the form of a 21-alcohol, it is esterified in the 21-position after the 11-hydroxylation and only then oxidized in the 11-position. The acyl radical is preferably the acetic acid residue, but it can also be the residue of another lower fatty acid such as e.g. B. formic acid, propionic acid, butyric acid, valeric acid or succinic acid, or aromatic acids such as benzoic acid, salicylic acid, phthalic acid and veratric acid. If dibasic acids - are used for esterification, the half-esters of the 1,4-pregnadene derivatives are usually formed. F., Production of the 1,4-unsaturated A-ring by chemical: means The 21-ester of pregnan-17a, 21-diol-3,11,20-trione (Ig, see below) and also the 21-ester and the 11,21-diesters of pregnane-11 (a or ß), 17a, 21-triol-3,20-dione (II g, l 1ß-0 H compound) can pass through at the 2 and 4 positions Treatment with a halogen which has a higher atomic weight than that of fluorine can be halogenated to form the corresponding 2,4-dihalides. The esterification of 11β-hydroxyl in particular improves the yield. The halogenation in the two positions can be carried out in one or two stages, and in the latter case various halogens such as chlorine and bromine can be used. The dihalide is then treated with a hydrogen splitting reagent, whereby the 1,2 and 4,5 double bonds are introduced (IIb, IIIb [21-ester or 11,21-diester1 or VIIb [Fofinel scheme IJ). The esters can be hydrolyzed in a known manner (IIa, IIIa or VIIa).

Als halogenierendes Agens eignet sich vorzugsweise Brom, wobei die 2,4-Dibromide der 21-Ester von Pregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion bzw. von Pregnan-11,17a;21-triol-3,20-dion erhalten werden.- Die Abspaltung von Bromwasserstoff-kann durch Behandlung mit Collidin am-Rückflußkühler durchgeführt werden. An Stelle von Collidin können andere, hochsiedende, organische Basen wie Chinaldin und Dimethylanilin benutzt werden.A suitable halogenating agent is preferably bromine, the 2,4-dibromides of the 21-esters of pregnan-17a, 21-diol-3,11,20-trione or of pregnan-11,17a; 21-triol-3,20-dione - The elimination of hydrogen bromide can be obtained by treatment with collidine be carried out on the reflux condenser. Instead of collidine, other, high-boiling, organic bases such as quinaldine and dimethylaniline can be used.

Das Verfahren ist sowohl auf Allo- als auch auf normale Pregnane anwendbar. Durch- doppelte Bromierung von Allo-pregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-acetat bzw, von Allo-pregnan-lIß,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat bilden sich die Dibromide III g bzw. III' g, die nach Dehydrobromierung die 21-Acetate der Diene II und III ergeben.The procedure can be applied to both allo- and normal pregnans. By double bromination of allo-pregnane-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21-acetate or from allo-pregnan-lIß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate, the dibromides are formed III g or III 'g, which after dehydrobromination, the 21-acetates of dienes II and III result.

Die Diene der in 11a-Stellung hydroxylierten Steroide können in gleicher Weise hergestellt werden. Doppelte Bromierung von Pregnan-11a,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat ergibt das 2,4-Dibromid IVg, das nach Dehydrobromierung 1,4-Pregnadien-11a,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat VIIb liefert. Die Oxydation von VIIb liefert in guter Ausbeute II b (R = Acetyl). Hydrolyse von II b liefert II a.The dienes of the steroids hydroxylated in the 11a-position can be in the same way Way to be made. Double bromination of pregnan-11a, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate gives the 2,4-dibromide IVg, which after dehydrobromination 1,4-pregnadiene-11a, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate VIIb delivers. The oxidation of VIIb gives IIb in good yield (R = acetyl). Hydrolysis of II b gives II a.

Die Reaktionen werden durch die folgenden Gleichungen wiedergegeben Weg F1 Pregnan-17a,21-diol- Brr, 2,4-Dibrom-Verbindung --@ 1,4-Pregnadien-17a,21-diol- -> Ha (1) 3,11,20-trion-21-ester 3,11,20-trion-21-ester Ig IIb Pregnan-11ß,17a,21-triol- Brz 1,4-Pregnadien- . 3,20-dion-21-ester #i 2,4-Dibrom-Verbindung -- > 11ß,17a,21-triol-3,20-dion- @ IIIa (2) 21-ester IIg IIIb 2,4-Dibrom-allo-pregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-ester > IIb (3) IIIg 2,4-Dibrom-allo-pregnan-llß,17a,21-triol-3,20-dion-21-ester IIIb (4) III'g 2,4-Dibrom-pregnan-11a,17a,21-triol-@ 1,4-Pregnadien-lla,17a,21-triol-3,20-dion- C IIb IIa 3,20-dion-21-ester 21-ester (5) IVg VIIb Die obengenanntenZwzschenprodukte werden durch die Formel XI (Formelschema II) miedergegeben, worin X = 0 oder H, O H (a oder ß) und R = H oder einen niederen Alkanoy lrest darstellt. Der Pregnankern kann entweder die normale oder die allo-Konfiguration besitzen.The responses are represented by the following equations Way F1 Pregnan-17a, 21-diol- Brr, 2,4-dibromo compound - @ 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol- - > Ha (1) 3,11,20-trion-21-ester 3,11,20-trion-21-ester Ig IIb Pregnan-11ß, 17a, 21-triol- Brz 1,4-pregnadiene-. 3,20-dione-21-ester #i 2,4-dibromo compound - > 11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione- @ IIIa (2) 21-ester IIg IIIb 2,4-dibromo-allo-pregnane-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21-ester> IIb (3) IIIg 2,4-dibromo-allo-pregnan-llß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-ester IIIb (4) III'g 2,4-dibromo-pregnan-11a, 17a, 21-triol- @ 1,4-pregnadiene-lla, 17a, 21-triol-3,20-dione- C IIb IIa 3,20-dione-21-ester 21 -ester (5) IVg VIIb The above-mentioned intermediate products are represented by the formula XI (formula scheme II), in which X = 0 or H, OH (a or β) and R = H or a lower alkanol radical. The precursor core can either have the normal or the allo configuration.

Die Bromierung wird in Essigsäure oder einem anderen, wasserfreien Lösungsmittel durchgeführt. Es ist nicht notwendig, das Dibromid vor der Dehydrobromierung zu reinigen. Der gebildete 1,4-Pregnadienester kann, wie bereits beschrieben, hydrolysiert werden.The bromination is carried out in acetic acid or another anhydrous Solvent carried out. It is not necessary to use the dibromide prior to dehydrobromination to clean. The 1,4-pregnadiene ester formed can, as already described, hydrolyzed will.

Die 11a- und 11ß-Hydroxyle können zum Ketonsauerstoff, wie oben beschrieben, oxydiert werden.The 11a- and 11ß-hydroxyls can form the ketone oxygen, as described above, are oxidized.

Die chemische Einführung der 1,2-Doppelbindung in 4-Pregnen-3-on kann z. B. folgendermaßen erfolgen 6-Brom-4-pregnen-17a,21-diol-3,11,20-trion (Kendall und Mitarbeiter, Journal of the Biological Chemistry, Bd. 197 [1952], S.261) bzw. 6-Brom-4-pregnen-llß,17a, 21-triol-3,20-dion-11-formiat-21-acetat (durchBromierung nach Kendall von 4-Pregnen-11ß,17a,21-triol-3,20-dion-11-formiat-21-acetat erhalten) wird mit einem Alkalisalz einer niederen Alkansäure, vorzugsweise Natriumacetat oder Kaliumacetat, behandelt, und die erhaltenen 2-A1-kansäuresalze werden durch milde Hydrolyse, z. B. mit wäßrigen oder alkoholischen Säuren oder Basen, in die 2-Hydroxysteroide umgewandelt. Durch Wasserabspaltung (2-Hydroxyl zusammen mit dem Wasserstoff am 1-C-Atom) bildet sich die 1,2-Doppelbindung.The chemical introduction of the 1,2 double bond in 4-pregnen-3-one can, for. B. 6-bromo-4-pregnen-17a, 21-diol-3,11,20-trione (Kendall and coworkers, Journal of the Biological Chemistry, Vol. 197 [1952 ] , p.261) and 6 -Bromo-4-pregnen-llß, 17a, 21-triol-3,20-dione-11-formate-21-acetate (by bromination according to Kendall of 4-pregnen-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione -11-formate-21-acetate obtained) is treated with an alkali salt of a lower alkanoic acid, preferably sodium acetate or potassium acetate, and the 2-A1-kanoic acid salts obtained are treated by mild hydrolysis, e.g. B. with aqueous or alcoholic acids or bases, converted into the 2-hydroxysteroids. The 1,2-double bond is formed by splitting off water (2-hydroxyl together with the hydrogen on the 1-carbon atom).

Die beschriebenen Reaktionen werden mit folgenden Gleichungen wiedergegeben 6-Brom-4-pregnen- 4-Pregnen-2,17a,21-triol- 4-Pregnen-2,17a,21-triol- IIa (1) 17a,21-diol-3,11,20-trion- -> 3,11,20-trion-2,21-diester > 3,11,20-trion > 21-ester Ih IIh IIIh 6-Brom-4-pregnen- 4-Pregnen- 4-Pregnen- 11ß,17a,21-triol-3,20-dion- @2,llß,17a,21-tetrol-3,20-dion-> 2 llß,17a,21-tetrol-3,20-dion IIIa (2) 11-formiat-21-alkanoat 11-formiat-21-alkanoat IVh Vh VIh Die Formeln von IIIh und VIh sind (im Formelschema II) mit XII und XIII bezeichnet. R bedeutet Wasserstoff oder ein niederes Alkansäureradikal. In XIII kann die 11ß-0 H-Gruppe durch O R ersetzt sein.The reactions described are reproduced with the following equations 6-bromo-4-pregnen- 4-pregnen-2,17a, 21-triol- 4-pregnen-2,17a, 21-triol- IIa (1) 17a, 21-diol-3,11,20-trione- ->3,11,20-trione-2,21-diester> 3,11,20-trione > 21-ester Ih IIh IIIh 6-bromo-4-pregnen- 4-pregnen- 4-pregnen- 11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione- @ 2, 11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione- > 2 llß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione IIIa (2) 11-formate-21-alkanoate 11-formate-21-alkanoate IVh Vh VIh The formulas of IIIh and VIh are designated (in formula scheme II) with XII and XIII. R represents hydrogen or a lower alkanoic acid radical. In XIII, the 11β-0 H group can be replaced by OR.

An Stelle der Dehydratisierung von IIIh oder VIh können die 2,21-Diester der Einwirkung des dehydratisierenden Mittels unterworfen werden. Durch Behandlung des 2,21-Diacetats von IIIh mit Bromwasserstoff-Eisessig erhält man so 1-Dehydro-cortison-21-acetat. Die 1,2-Doppelbindung kann auch über einen Hydroxy-oder Acyloxysubstituenten am C-Atom 1 (z. B. des Cortison- oder Hydrocortison-21-acetats) eingeführt werden. Die Verbindungen sind im Formelschema II unter XIV gezeigt. X bedeutet = 0 oder H, O H und Y = O H oder 0 Acyl.Instead of the dehydration of IIIh or VIh, the 2,21-diesters be subjected to the action of the dehydrating agent. Through treatment of the 2,21-diacetate of IIIh with hydrogen bromide-glacial acetic acid, 1-dehydrocortisone-21-acetate is obtained. The 1,2 double bond can also be via a hydroxy or acyloxy substituent on C-atom 1 (e.g. cortisone or hydrocortisone-21-acetate) are introduced. The compounds are shown in formula scheme II under XIV. X means = 0 or H, O H and Y = O H or O acyl.

Die Umsetzungen werden durch folgende Gleichungen charakterisiert Weg F3* 1-Pregnen-11 X-17a,21-diol-3,20-dion-21-ester 1,2-Oxido-11 X-pregnan-17a,21-diol- 3,20-dion-21-ester Ii IIi 2-Brom-pregnan-11 X-1,17a,21-triol- > Pregnan-11 X-1,17,21-triol-3,20-dion-21-ester 3,20-dion-21-ester IIIi IVi Pregnan-11 X-1,17a,21-triol- 4-Brom-pregnan-11 X-1,17a,21-triol- 3,20-dion-1,21-diester 3,20-dion-1,21-diester Vi VIi 4-Pregnen-11 X-1,17a,21-triol- II oder III 3,20-dion-1,21-diester VII i Die Estergruppen in den obigen Gleichungen sind vorzugsweise niedere Alkanoylradikale. Als Epoxydierungsmittel verwendet man z. B. Benzopersäure, Monoperphthalsäure, Peressigsäure usw. Die Oxidoverbindung (IIi) wird z. B. mit Bromwasserstoff behandelt und das so hergestellte Halogenhydrin (IIIi) mit Raneynickel oder mit Wasserstoff und Palladium-Calciumcarbonat zu IV i dehalogeniert. IV i kann wie üblich zu V i acyliert werden. Vi kann auch durch die obige Operation in veränderter Reihenfolge hergestellt werden. Durch Bromierung und Dehydrobromierung von Vi entsteht VIIi. Die Bromierung wird vorzugsweise mit Brom in Gegenwart von Natriumacetat durchgeführt. Üblicherweise wird die Dehydrobromierung mit Hilfe von Semicarbazid durchgeführt; das dabei entstehende Semicarbazon wird durch Behandlung mit Brenztraubensäure in VIIi umgewandelt.The conversions are characterized by the following equations Path F3 * 1-pregnen-11 X-17a, 21-diol-3,20-dione-21-ester 1,2-oxido-11 X-pregnan-17a, 21-diol- 3,20-dione-21-ester Ii IIi 2-bromo-pregnan-11 X-1,17a, 21-triol- > pregnan-11 X-1,17,21-triol-3,20-dione-21-ester 3,20-dione-21-ester IIIi IVi Pregnan-11 X-1,17a, 21-triol- 4-bromo-pregnan-11 X-1,17a, 21-triol- 3,20-dione-1,21-diester 3,20-dione-1,21-diester Vi VIi 4-Pregnen-11 X-1,17a, 21-triol- II or III 3,20-dione-1,21-diester VII i The ester groups in the above equations are preferably lower alkanoyl radicals. The epoxidizing agent used is, for. B. benzoperic acid, monoperphthalic acid, peracetic acid, etc. The oxido compound (IIi) is z. B. treated with hydrogen bromide and dehalogenated the halohydrin (IIIi) thus prepared with Raney nickel or with hydrogen and palladium-calcium carbonate to IV i. IV i can be acylated to V i as usual. Vi can also be produced in a different order by the above operation. The bromination and dehydrobromination of Vi produces VIIi. The bromination is preferably carried out with bromine in the presence of sodium acetate. The dehydrobromination is usually carried out with the aid of semicarbazide; the resulting semicarbazone is converted into VIIi by treatment with pyruvic acid.

In ähnlicher Weise läßt sich IVi in VIIIi umwandeln (ohne Acylierung). Bromierung in Gegenwart von Xatriumacetat und anschließende Dehydrobromierung ergibt die gewünschte Umwandlung.Similarly, IVi can be converted to VIIIi (without acylation). Bromination in the presence of sodium acetate and subsequent dehydrobromination results the conversion you want.

Die entsprechenden l lß-Hydroxyverbindungen werden in gleicher Weise, ausgehend von 1-Pregnen-1lß,17a, 21-triol-3,"0-dion-21-acetat, hergestellt.The corresponding l lß-hydroxy compounds are produced in the same way, starting from 1-pregnen-1lß, 17a, 21-triol-3, "0-dione-21-acetate.

Zur Abspaltung der 1-Sauerstoffunktion können die Verbindungen mit einer Säure oder Base wie Aluminiumoxyd, Triton B (Tetramethylammoniumhydroxyd) u. ä. behandelt werden, wobei sich (z. B. aus VIIi) die antiarthritisch wirkenden Substanzen II und IIl (Formelschema I) bilden. G. Einführung von Halogen in der 9a-Stellung Für die Herstellung von IV und V ist es nicht notwendig, daß die Ausgangsverbindungen das 9a-Halogenatom (Fluor, Chlor oder Brom) enthalten, dieses kann vielmehr in das Steroidmolekül nach der Dehydrierung des A-Ringes eingeführt werden. Man geht z. B. von einer 11(a oder ß)-Hydroxy-1,4-pregnadienverbindung aus, wandelt diese in 1,4,9(11)-Pregnatrien um (z. B. durch Dehydratisierung) und führt in diese Verbindung gleichzeitig ein 9a-Halogen und ein 11ß-Hydroxyl ein. Das 11-Hydroxyl kann unter milden Bedingungen zur 11-Ketogruppe oxydiert werden (z. B. zu 9a-Halogen-l-dehydrocortison).To split off the 1-oxygen function, the compounds can with an acid or base such as aluminum oxide, Triton B (tetramethylammonium hydroxide) and the like, with the anti-arthritic effects (e.g. from VIIi) Form substances II and IIl (formula scheme I). G. Introduction of halogen in the 9a position For the preparation of IV and V it is not necessary that the starting compounds contain the 9a-halogen atom (fluorine, chlorine or bromine), this can rather be in the Steroid molecule to be introduced after the dehydration of the A-ring. One goes z. B. from a 11 (a or ß) -hydroxy-1,4-pregnadiene compound, converts this into 1,4,9 (11) -Pregnatriene um (e.g. by dehydration) and leads to this compound a 9α-halogen and a 11β-hydroxyl at the same time. The 11-hydroxyl can be found under oxidized to the 11-keto group (e.g. to 9a-halo-l-dehydrocortisone).

Als Ausgangsmaterial benutzt man z. B. 1,4-Pregnadien-11ß,17a,21-triol-3,20-dion (III) oder die entsprechende lla-Hydroxyverbindung (VII) oder deren 21-Ester. Die Ausgangsverbindung wird zunächst in der 21-Stellung verestert (IIIb) (z. B. mit Säureanhydrid-Pyridin oder mit Säurechlorid) unter Bildung der üblichen 21-Ester, z. B. des 21-Acetats, -Propionats, -Cyclopentylpropionats oder -Önanthats.The starting material used is z. B. 1,4-pregnadiene-11β, 17a, 21-triol-3,20-dione (III) or the corresponding IIIa-hydroxy compound (VII) or its 21-ester. the The starting compound is first esterified in the 21-position (IIIb) (e.g. with Acid anhydride-pyridine or with acid chloride) with formation of the usual 21-esters, z. B. of 21-acetate, propionate, cyclopentyl propionate or oenanthate.

Die Dehydratisierung (Einführung der 9,11-Doppelbindung) kann z. B. durch Einwirkung von Phosphoroxychlorid in Pyridin erzielt werden. Vorzugsweise stellt man jedoch das 1,4,9(11)-Trien durch Behandlung des 21-Estersderlla-Hydroxyverbindung(VIIb) mit p-Toluolsulfochlorid in Pyridin dar. Das gebildete lla-Tosylat (Ij) kann durch Behandlung mit einer basisch wirkenden Verbindung wie Natriumacetat in Essigsäure (oder mit Kaliumacetat, Lithiumpropionat und ähnlichem) in die 9,11-ungesättigte Verbindung übergeführt werden. An Stelle des p-Toluolsulfonats kann auch das entsprechende Methansulfonät, -Benzolsulfonät oder andere ähnliche Sulfonsäureester hergestellt werden.The dehydration (introduction of the 9,11 double bond) can, for. B. can be achieved by the action of phosphorus oxychloride in pyridine. Preferably However, the 1,4,9 (11) -triene is prepared by treating the 21-ester derlla-hydroxy compound (VIIb) with p-toluenesulfonyl chloride in pyridine. The lla-tosylate (Ij) formed can by Treatment with a basic one Compound like sodium acetate in acetic acid (or with potassium acetate, lithium propionate and the like) into the 9,11-unsaturated Connection to be transferred. Instead of the p-toluenesulfonate, the corresponding Methanesulfonät, -Benzolsulfonät or other similar sulfonic acid esters produced will.

Die Reaktionen sind im folgenden Schema angegeben: Essigsäure- - anhydrid POCl3 1,4,9(11)-Pregnatrien- 1-Dehydro-cortisol 21-Acetat 17a,21-diol-3,20-dion-21-acetat III a Pyr?din III b Pyndin II j p-Toluol- 1,4-Pregnadien- sulfochlorid Ila-p-Toluolsulfonat- Wärme lla,17a,21-triol-3,20-dion@ 21-Acetat 21-acetat VIIa VIIb Pyridin I Na00CCH3 CH,COOH Die Struktur der 1,4,9(11)-Pregnatriene, wie z. B. IIj, ist in Formel XV (Formelschema II) angegeben, worin R = H oder Acyl, vorzugsweise niederes Alkanoyl, bedeutet.The reactions are given in the following scheme: Acetic acid - anhydride POCl3 1,4,9 (11) -Pregnatriene- 1-dehydro-cortisol 21-acetate 17a, 21-diol-3,20-dione-21-acetate III a Pyr? Din III b Pyndin II j p-toluene 1,4-pregnadiene sulfochloride Ila-p-toluenesulfonate heat lla, 17a, 21-triol-3,20-dione @ 21-acetate 21-acetate VIIa VIIb pyridine I Na00CCH3 CH, COOH The structure of 1,4,9 (11) -pregnatrienes, e.g. B. IIj is given in formula XV (formula scheme II), in which R = H or acyl, preferably lower alkanoyl.

Das Trien (II j) wird jetzt mit einem ionogenen Bromierungsmittel wie N-Bromacetamid oder N-Bromsuccinimid in Perchlorsäure oder einer anderen starken Säure, wie Schwefelsäure, behandelt. Man erhält so das 9a-Bromderivat (III j ).The triene (II j) is now with an ionic brominating agent like N-bromoacetamide or N-bromosuccinimide in perchloric acid or another strong one Acid, such as sulfuric acid. The 9a-bromo derivative (III j) is obtained in this way.

Wenn es erwünscht ist, Fluor oder Chlor in die 9a-Stellung einzuführen, wird die 9a-Bromverbindung (das Bromhydrin IIIj) dehalogeniert durch Einwirkung einer schwachen Base wie Kalium- oder Natriumacetät, wobei das Epoxyd IVj entsteht. Das letztere wird der Einwirkung von wasserfreiem Fluorwasserstoff unterworfen, wobei der Epoxydring geöffnet und ein 9a-Fluoratom zusammen mit einer 11ß-Hydroxylgruppe eingeführt wird. (Verbindung V, Z = F.) Bei Verwendung von wasserfreiem Chlorwasserstoff bildet sich das 9a-Chloranaloge. Letzteres kann zur Abspaltung der 21-Acylgruppe wie üblich hydrolysiert werden.If it is desired to introduce fluorine or chlorine into the 9a position, the 9a-bromine compound (the bromohydrin IIIj) is dehalogenated by action a weak base such as potassium or sodium acetate, whereby the epoxy IVj is formed. The latter is subjected to the action of anhydrous hydrogen fluoride, with the epoxy ring opened and a 9α-fluorine atom together with an 11β-hydroxyl group is introduced. (Compound V, Z = F.) When using anhydrous hydrogen chloride the 9a-chlorine analog is formed. The latter can split off the 21-acyl group hydrolyzed as usual.

Die 9a-Fluor-llß-hydroxylverbindung kann durch milde Oxydation (Chromsäure-Pyridin) in die 9a-Fluor-11-ketoverbindung (IVb) übergeführt werden, die ebenfalls unter Abspaltung der 21-Acylgruppe hydrolysiert werden kann unter Bildung von 9a-Fluor-l-dehydrocortison.The 9a-fluoro-11ß-hydroxyl compound can by mild oxidation (chromic acid-pyridine) are converted into the 9a-fluoro-11-keto compound (IVb), which is also under Cleavage of the 21-acyl group can be hydrolyzed to form 9a-fluoro-l-dehydrocortisone.

Vorzugsweise wird 1,4-Pregnadien-11a,17a,21-triol-3,20-dion für die entsprechende 11ß-Hydroxyverbindung als Ausgangsmaterial benutzt. Es ist wichtig, daB vor der Behandlung mit p-Toluolsulfochlorid das 21-Hydroxyl geschützt wird. Falls die 21-Hydroxylgruppe nicht verestert wird, entstehen schwierig zu trennende Substanzgemische. Darüber hinaus ist es vorteilhaft, bei der Veresterung der 21-OH-Gruppe ein relativ mildes acylierendes Mittel, wie z. B. die vorbeschriebenen Anhydride, zu verwenden, weil dadurch eine wirkliche Selektivität erreicht wird, so daB das 11-Hydroxyl unverestert bleibt. H.1,4-Pregnadiene-11a, 17a, 21-triol-3,20-dione is preferred for the corresponding 11ß-hydroxy compound used as starting material. It is important, that the 21-hydroxyl is protected before treatment with p-toluenesulfonyl chloride. If the 21-hydroxyl group is not esterified, difficult-to-separate ones result Mixtures of substances. In addition, it is advantageous in the esterification of the 21-OH group a relatively mild acylating agent such as. B. the anhydrides described above, to be used, because a real selectivity is achieved thereby, so that the 11-hydroxyl remains unesterified. H.

Herstellung von Estern mit erhöhter Wirkungsdauer Die Erfindung berücksichtigt auch die Herstellung solcher 21-Ester der Verbindungen II bis V, die im Körper nicht so schnell umgewandelt werden wie die freien 21-OH-Verbindungen, so daß die physiologische Wirksamkeit der Verbindungen für eine längere Zeitdauer aufrechterhalten wird und die Häufigkeit der Injektion dadurch stark reduziert wird.Production of esters with increased duration of action The invention takes into account also the production of those 21-esters of the compounds II to V, which are not in the body are converted as quickly as the free 21-OH compounds, so that the physiological Effectiveness of the compounds is maintained for a longer period of time and the frequency of the injection is thereby greatly reduced.

Die Säuren, von denen gefunden wurde, daB ihre 21-Ester eine länger anhaltende Wirksamkeit besitzen, sind Cyclohexancarboxylsäure, 4-Methylcyclohexancarboxylsäure, 3-Äthylcyclohexylessigsäure, Cyclohexylpropionsäure, Cyclopentylpropionsäure, Phenylessigsäure, Trimethylessigsäure, tert.-Butylessigsäure, Butoxybuttersäure, Äthoxycaprönsäure, Methylthiovaleriansäure, Isopropylthioessigsäure, Phenylthioessigsäure, Capronsäure; Isobuttersäure, Önanthsäure, Isocaprylsäure, Cyclohexylcapronsäure, Undecylensäure, 2-Äthylbuttersäure, Tohryl:-säure und Äthoxybenzoesäure: Insbesondere wurde gefunden, daB Säuren der Aryloxyälkanoid- und Furansäuregruppe eine hervorragend längere Wirksamkeit der Hormonaktivität bewirken und dadurch eine wirksamere, günstige und nützliche Therapie ermöglichen, verglichen mit den ursprünglichen Hormonen. Typisch anwendbare Säuren dieser Gruppen sind: Phenoxyessigsäure, p-Chlorphenoxyessigsäure, 2;4-Dichlorphenoxyessigsäure, 2,4,5-Trichlorphenoxyessigsäure, 5-Chlorfuransäure, 5-Methylfuransäure, 5-BromfÜransäure, 4-Bromphenoxyessigsäure, 4-Methylphenoxyessigsäure, 4-Methoxyphenoxyessigsäure, 4-tert.-Butylphenoxyessigsäure, 5-tert.-Butylfuransäure, Furansäure und Phenoxypropionsäure.The acids of which their 21-esters have been found to be longer have lasting effectiveness are cyclohexanecarboxylic acid, 4-methylcyclohexanecarboxylic acid, 3-ethylcyclohexyl acetic acid, cyclohexylpropionic acid, cyclopentylpropionic acid, phenylacetic acid, Trimethyl acetic acid, tert-butyl acetic acid, butoxybutyric acid, ethoxycaproic acid, Methylthiovaleric acid, isopropylthioacetic acid, phenylthioacetic acid, caproic acid; Isobutyric acid, enanthic acid, isocaprylic acid, cyclohexylcaproic acid, undecylenic acid, 2-ethylbutyric acid, tohryl: acid and ethoxybenzoic acid: In particular, it was found that acids of the aryloxyalkanoid and furanic acid group have an outstandingly longer effectiveness cause the hormonal activity and thereby a more effective, cheap and useful Enable therapy compared to the original hormones. Typically applicable Acids of this group are: phenoxyacetic acid, p-chlorophenoxyacetic acid, 2; 4-dichlorophenoxyacetic acid, 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid, 5-chlorofuranic acid, 5-methylfuranic acid, 5-bromofuranic acid, 4-bromophenoxyacetic acid, 4-methylphenoxyacetic acid, 4-methoxyphenoxyacetic acid, 4-tert-butylphenoxyacetic acid, 5-tert-butylfuranic acid, furanic acid and phenoxypropionic acid.

Die Ester der obengenannten Säuren verlängern, wie gefunden wurde, die Wirkungsdauer nicht nur von 1-Dehydro-cortison, 1-Dehydro-cortisol, 1-Dehydro-9a-halogen-cortison und 1-Dehydro-9a-halogen-cortisol (wobei das Halogenatom Chlor oder Brom ist), sondern auch die der physiologisch wirksamen Zwischenprodukte wie 1-Dehydro-corticosteron, 1-Dehydro-ll-desoxy-corticosteron, 1- Dehydro -11- desoxycortison, 1- Dehydro-17-desoxycortison und 1-Dehydro-aldosteron.The esters of the above acids lengthen, as has been found the duration of action not only of 1-dehydro-cortisone, 1-dehydro-cortisol, 1-dehydro-9a-halogen-cortisone and 1-dehydro-9a-halogen-cortisol (where the halogen atom is chlorine or bromine) but also those of the physiologically active intermediate products such as 1-dehydro-corticosterone, 1-dehydro-II-deoxy-corticosterone, 1- dehydro-11-deoxycortisone, 1- dehydro-17-deoxycortisone and 1-dehydro-aldosterone.

Als Beispiel für die erhöhte Wirkungsdauer wurde gefunden, daB bei Mäusen mit herausgeschnittener Nebenniere eine Injektion von 0,25 mg 1-Dehydro-cortison oder 1-Dehydro-cortisol oder ihrer Acetate eine Eosinopenie von etwa 2 bis 4 Tagen bewirkt. Eine gleiche Injektion von 1-Dehydro-cortison-21-(2',4'-dichlorphenoxy=acetat) hält 12 bis 20 Tage an. Das 21-(5'-Brömfuranät) des 1-Dehydro-cortisons wirkt 10 bis 18 Tage, das 21-Furänat von 1-Dehydro-cortisol wirkt 10 bis 16 Tage, und dessen 21-(4'-tert.-Butylphenoxyacetat) wirkt 14 bis 20 Tage.As an example of the increased duration of action, it was found that with Mice with an excised adrenal gland received an injection of 0.25 mg of 1-dehydrocortisone or 1-dehydrocortisol or its acetates cause eosinopenia for about 2 to 4 days causes. An equal injection of 1-dehydro-cortisone-21- (2 ', 4'-dichlorophenoxy = acetate) lasts for 12 to 20 days. The 21- (5'-Brömfuranät) of 1-dehydrocortisone acts 10 up to 18 days, the 21-furenate of 1-dehydro-cortisol works for 10 to 16 days, and its 21- (4'-tert-butylphenoxyacetate) works for 14 to 20 days.

Bei einem anderen Test verringerte eine Injektion von 1-Dehydro-cortison-21-(5'-chlorofuranat) bei Ratten das Gewicht der Thymusdrüse für 5- bis 8mal längere Zeit als das freie Hormon; demgegenüber bewirkte 1-Dehydrocortisol-21-(4'-tert.-butylphenoxyacetät) eine Rückbildung des Thymus für 4- bis 6mal längere Zeit als das freie Hormon. Diese Teste sind Standardangaben von glucocortischer (d. h. antiarthritischer) Aktivität. In gleicher Weise kann die mineralocortische Aktivität der Hormone durch Veresterung mit diesen Säuren erhöht werden. So erhält 1-Dehydro-11-desoxy-corticosteron-21-(4'-chlorophenoxyacetat) das Leben von Mäusen mit herausgeschnittener Nebenniere 5- bis 7mal länger als das freie Hormon und 1-Dehydro-aldosteron-21-furanat 6- bis 10mal länger als das entsprechende Hormon. Analoge. Ergebnisse werden in der Humantherapie erzielt. So ersetzen eine bis zwei Injektionen pro Woche von 1-Dehydro-cortison 21-furanat oder 1-Dehydro-cortisol 21-(4'-tert.-butylphenoxyacetat) sieben tägliche Medikamentgaben von freiem Hormon. In gleicher Weise haben 50 bis 100 mg Injektionen von 1-Dehydro-cortisol-21-(5'-tert.-butylfuranat) oder 1-Dehydro-cortison-21-(4'-chlorophenoxyacetat) eine 7- bis 10tägige Wirksamkeit im Vergleich mit -der Wirksamkeit von nur 1 Tag des freien Hormons.In another test, an injection of 1-dehydrocortisone-21- (5'-chlorofuranate) decreased in rats the weight of the thymus gland for 5 to 8 times longer than the free time Hormone; in contrast, 1-dehydrocortisol-21- (4'-tert-butylphenoxyacetate) regression of the thymus for 4 to 6 times longer than the free hormone. These Tests are standard indications of glucocortic (i.e., anti-arthritic) activity. In the same way, the mineralocortic activity of the hormones can be influenced by esterification be increased with these acids. This gives 1-dehydro-11-deoxy-corticosterone-21- (4'-chlorophenoxyacetate) the life of mice with the adrenal gland excised 5 to 7 times longer than that free hormone and 1-dehydro-aldosterone-21-furanate 6 to 10 times longer than the corresponding one Hormone. Analog. Results are achieved in human therapy. One to two injections of 1-dehydro-cortisone replace 21-furanate per week or 1-dehydro-cortisol 21- (4'-tert-butylphenoxyacetate) seven daily drug doses of free hormone. In the same way, 50 to 100 mg injections of 1-dehydro-cortisol-21- (5'-tert-butylfuranate) or 1-dehydro-cortisone-21- (4'-chlorophenoxyacetate) a 7-10 day effectiveness in comparison with the effectiveness of only 1 day of the free hormone.

Typische Beispiele der 21-Ester von 9a-Halogenderivaten von 1-Dehydro-cortison und 1-Dehydro-cortisol sind das 21-(2'-Furanat), 21-[(5'-tert.-Butyl)-2'-furanat], 21- Phenoxyacetat und - 21- (2',4',5' -Trichlorphenoxyacetat) .Typical examples of the 21-esters of 9a-halogen derivatives of 1-dehydrocortisone and 1-dehydrocortisol are 21- (2'-furanate), 21 - [(5'-tert-butyl) -2'-furanate], 21- phenoxyacetate and - 21- (2 ', 4', 5 '-trichlorophenoxyacetate).

Die Ester können in der bei cortischen Hormonen üblichen Weise gegeben werden. Sie können in Tabletten mit inertem Material zur oralen oder sublingualen Gabe verabreicht werden. Eine andere übliche Form ist die Salbe oder Lösung für örtlichen Gebrauch. Im allgemeinen ist die wirksamste Art der Gabe die intramuskuläre, subcutane oder intraartikuläre Injektion von öligen oder wäßrigen Lösungen oder Suspensionen. Die Ester können auf verschiedene Weise hergestellt werden, wobei es am einfachsten ist, die entsprechenden freien Hormone zu verestern., beispielsweise durch Behandlung des Hydroxysteröids mit dem entsprechenden Säureanhydrid oder Chlorid in Gegenwart oder Abwesenheit einer Base oder durch Behandlung des Hydroxysteroids mit der freien Säure in Gegenwart eines sauren Katalysators unter dehydratisierenden Bedingungen.The esters can be given in the usual manner for cortic hormones will. They can be in tablets with inert material for oral or sublingual Given. Another common form is the ointment or solution for local use. In general, the most effective route of administration is intramuscular, subcutaneous or intra-articular injection of oily or aqueous solutions or Suspensions. The esters can be prepared in several ways, wherein it is easiest to esterify the corresponding free hormones., for example by treating the hydroxy steroid with the appropriate acid anhydride or chloride in the presence or absence of a base or by treating the hydroxysteroids with the free acid in the presence of an acidic catalyst under dehydrating Conditions.

Die Ester können auch durch Veresterung von Zwischenprodukten bei der Herstellung der Hormone dargestellt werden, wobei diese Ester, wie das Acetat, als schützende Gruppe verwendet werden können. So kann bei der Herstellung von 1-Dehydro-cortison und 1-Dehydro-cortisol durch die oben beschriebenen chemischen Methoden der protrahierend wirkende 21-Ester des Zwischenprodukts gebildet werden, bevor das Halogen (gewöhnlich Brom) in der 2- und 4-Stellung eingeführt wird. Dieses Verfahren wird üblicherweise durch Umsatz der 21-Bromverbindung des Steroids mit einem Metallsalz der Säure durchgeführt. In der folgenden Gleichung ist diese Reaktion wiedergegeben, wobei die Ausgangspregnanverbindung normale oder allo-Konfiguration haben kann: 21-Brom-pregnan-11X- Pregnan-11X-17a,21-diol- 1,4-Pregnadien-11X- 17a-ol-3,20-dion 3,20-dion-21-ester . #- 2,4-Dibromderivat -> 17a,21-diol-3,20-dion-21-ester In dieser Gleichung bedeutet X = O oder H, OH. Beispiele 1. Umwandlung von Cortison in 1-Dehydro-cortison Aus einer Lösung von 30 g Hefeextrakt (»Difco«) in 3,01 Leitungswasser, die 13,2 g Kaliumdihydrogenphosphat und 26,4 g Dinatriumhydrogenphosphat (pH der Lösung 6,9)' enthält, werden 27 Teile von je 100 ml abgetrennt, in Erlenmeyerkolben von 300 ml Inhalt gebracht und im Autoklav 15 Minuten lang bei 776 Torr Dampfdruck (120°C) sterilisiert. Nach Behandlung im Autoklav und Abkühlung der Bouillon wird 1 ml einer Suspension von Corynebacterium simplex (ATCC 6946) in jeden Kolben gegeben. Die Kolben werden dann auf einem Schütteltisch bei 220 Stößen pro Minute und 28°C 24 Stunden lang geschüttelt.The esters can also be prepared by esterification of intermediates in the manufacture of the hormones, which esters, like the acetate, can be used as a protective group. Thus, in the production of 1-dehydrocortisone and 1-dehydrocortisol, the protracting 21-ester of the intermediate product can be formed by the chemical methods described above, before the halogen (usually bromine) is introduced in the 2- and 4-positions will. This process is usually carried out by reacting the 21-bromo compound of the steroid with a metal salt of the acid. This reaction is shown in the following equation, where the starting pregnane compound can have a normal or allo configuration: 21-bromo-pregnane-11X- pregnane-11X-17a, 21-diol- 1,4-pregnadiene-11X- 17a-ol-3,20-dione 3,20-dione-21-ester . # - 2,4-dibromo derivative -> 17a, 21-diol-3,20-dione-21-ester In this equation, X = O or H, OH. EXAMPLES 1. Conversion of cortisone into 1-dehydrocortisone From a solution of 30 g of yeast extract ("Difco") in 3.0 l of tap water containing 13.2 g of potassium dihydrogen phosphate and 26.4 g of disodium hydrogen phosphate (pH of the solution 6.9) 'Contains 27 parts of 100 ml each, placed in 300 ml Erlenmeyer flasks and sterilized in an autoclave for 15 minutes at 776 Torr steam pressure (120 ° C). After treatment in the autoclave and cooling of the broth, 1 ml of a suspension of Corynebacterium simplex (ATCC 6946) is added to each flask. The flasks are then shaken on a shaker table at 220 strokes per minute and 28 ° C for 24 hours.

In jeden der 27 Erlenmeyerkolben werden 150 mg Cortison gebracht. Anschließend wird 15 Minuten bei 776 Torr Dampfdruck (120°C) sterilisiert. jedem Kolben werden dann 5,0 ml Äthanol zugegeben. Die 24-Stunden-Bakterienkultur wird hierauf aseptisch übertragen und die entstehenden Suspensionen auf einem Schütteltisch bei 220 Stößen pro Minute und 28°C 48 Stunden geschüttelt. Der p1,-Wert beträgt am Ende 7,2. Der Inhalt aller Kolben wird vereinigt und mit einer Gesamtmenge von 9,01 Chloroform in drei gleichen Anteilen extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden zu einem Rückstand konzentriert, der aus Aceton-Hexan kristallisiert. Dabei entsteht 1,1 g von 1-Dehydro-cortison. Fp. @ 210 bis 215`C (Zersetzung). Durch weitere Umkristallisationen erhöht sich der Schmelzpunkt auf 230 bis 232°C (Zersetzung) ; [ä,205 = -f- 175,3 (Dioxan) ; e238 = 15,400 (Methanol). Analyse: C"H2605.150 mg of cortisone are placed in each of the 27 Erlenmeyer flasks. It is then sterilized for 15 minutes at 776 torr steam pressure (120 ° C.). 5.0 ml of ethanol are then added to each flask. The 24-hour bacterial culture is then aseptically transferred and the resulting suspensions are shaken on a shaking table at 220 strokes per minute and 28 ° C. for 48 hours. The p1, value is 7.2 at the end. The contents of all flasks are combined and extracted with a total of 9.01 chloroform in three equal portions. The combined extracts are concentrated to a residue which crystallizes from acetone-hexane. This produces 1.1 g of 1-dehydrocortisone. Mp @ 210 to 215 ° C (decomposition). Further recrystallization increases the melting point to 230 to 232 ° C (decomposition); [ä, 205 = -f- 175.3 (dioxane); e238 = 15,400 (methanol). Analysis: C "H2605.

Berechr et . . . . . . . . C 70,37, H 7,31; gefunde=i . . . . . . . . . C 70,38, H 7,67. 21-Acetylierung von 1-Dehydro-cortison Einer Lösung von 0,5 g 1-Dehydro-cortison in 5 ml wasserfreiem Pyridin werden 3 ml Essigsäurea^hyarid zugefügt. Man läßt die Reaktionsmischung über Nacht bei Zimmertemperatur stehen und verdünnt sie dann mit Eis und Wasser. Die entstehende Fällung wird filtriert und aus Aceton-Hexan umkristallisiert. Es werden 0,35 g von 1-Dehydro-cortison-21-acetat erhalten. Fp. = 227 bis 228°C. Nach verschiedenen Umkristallisationen aus Aceton-Hexan schmilzt die Verbindung bei 233 bis 236°C (Zersetzung).Calcr et. . . . . . . . C 70.37, H 7.31; found = i. . . . . . . . . C 70.38, H 7.67. 21-acetylation of 1-dehydrocortisone a solution of 0.5 g of 1-dehydro-cortisone in 5 ml of anhydrous pyridine are 3 ml of acetic acid a ^ hyarid added. The reaction mixture is left to stand at room temperature overnight and then dilute them with ice and water. The resulting precipitate is filtered and recrystallized from acetone-hexane. There are 0.35 g of 1-dehydrocortisone-21-acetate obtain. Mp = 227-228 ° C. After various recrystallizations from acetone-hexane the compound melts at 233 to 236 ° C (decomposition).

2. Umwandlung von Cortisol in 1-Dehydro-cortisol je 150 mg Cortisol (4-Pregnen-11ß,17a,21-triol-3,20-dion) werden in 27 Erlenmeyerkolben, wie im Beispiel 1 beschrieben, behandelt. Der pH-Wert am Ende des Schüttelvorgangs beträgt 7,0. Der Inhalt aller Kolben wird vereinigt und mit einer Gesamtmenge von 9,01 Chloroform in drei gleichen Anteilen extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden dann zu einem Rückstand eingeengt, der 3,75 g wiegt. Der Schmelzpunkt des Rückstandes ist 227 bis 232°C. Nach dem Aufschlämmen mit 50 ml Aceton und Abkühlung werden aus 2,75 g dieses Rohmaterials bei Filtration 1,35 g 1-Dehydro-cortisol vom Fp. = 237 bis 239°C gewonnen. Weiteres Produkt kann aus der Mutterlösung gewonnen werden. Durch Umkristallisation aus Aceton erhöht sich der Schmelzpunkt auf 239 bis 241'C (Zersetzung) ; [a] öS 107° (Dioxan) ; e 243 = 14,600 (Methanol).2. Conversion of cortisol into 1-dehydrocortisol each 150 mg of cortisol (4-pregnen-11β, 17a, 21-triol-3,20-dione) are treated as described in Example 1 in 27 Erlenmeyer flasks. The pH at the end of the shaking process is 7.0. The contents of all flasks are combined and extracted with a total of 9.01 chloroform in three equal portions. The combined extracts are then concentrated to a residue that weighs 3.75 g. The melting point of the residue is 227 to 232 ° C. After suspension with 50 ml of acetone and cooling, 1.35 g of 1-dehydrocortisol with a melting point of 237 to 239 ° C. are obtained from 2.75 g of this raw material by filtration. Further product can be obtained from the mother liquor. Recrystallization from acetone increases the melting point to 239 to 241 ° C (decomposition); [a] δ 107 ° (dioxane); e 243 = 14,600 (methanol).

Analyse: C"H"05.Analysis: C "H" 05.

Berechnet .... C 69,97, H 7,83; gefunden . . . . . C 70,24, H 8,13.Calculated .... C 69.97, H 7.83; found . . . . . C 70.24, H 8.13.

21 Acetylierung von 1-Dehydro-cortisol Einer Lösung von 0,85 g von 1-Dehydro-cortisol in 5 ml Pyridin werden 3 ml Essigsäureanhydrid zugefügt. Man läßt die Reaktionsmischung über Nacht bei Zimmertemperatur stehen und verdünnt sie dann mit Eiswasser. Die entstehende Fällung wird aus der Mischung abfiltriert und aus Aceton-Hexan umkristallisiert. Es wird 0,45 g von 1,4-Pregnadien-llß,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat (1-Dehydro-cortisol-21-acetat) gewonnen. Fp. = 235 bis 239°C. Bei der Umkristallisation steigt der Schmelzpunkt auf 237 bis 239'C; [a] ö5 = -f-116° (Dioxan) ; E 243 =15,000 (Methanol).21 Acetylation of 1-dehydro-cortisol A solution of 0.85 g of 1-dehydrocortisol in 5 ml of pyridine is added to 3 ml of acetic anhydride. Man leave the reaction mixture to stand overnight at room temperature and dilute it then with ice water. The resulting precipitate is filtered off from the mixture and recrystallized from acetone-hexane. 0.45 g of 1,4-pregnadiene-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate is obtained (1-dehydro-cortisol-21-acetate) obtained. Mp = 235-239 ° C. During recrystallization the melting point rises at 237 to 239 ° C; [a] ö5 = -f-116 ° (dioxane) ; E 243 = 15,000 (methanol).

Analyse: C"Hao0s.Analysis: C "Hao0s.

Berechnet .... C 68,63, H 7,51; gefunden ..... C 68,62, H 7,78.Calculated .... C 68.63, H 7.51; found ..... C 68.62, H 7.78.

3. Umwandlung von Reichsteins-Substanz-S in 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S 100 ml eines 1 °/oigen Hefeextraktkonzentrates zusammen mit 9,0 ml von 0,2m KH,P04 Lösung und 9,0 ml von 0,2 m Nag H P 04 Lösung werden, wie vorher angegeben, sterilisiert und mit einer 1,0°/oigen Suspension von Corynebacterium simplex (ATCC 6946) einer 24-Stunden-Bouillonkultur geimpft. Die neu angesetzte Kultur wird irrkubiert und 24 Stunden bei 28° C geschüttelt (Schütteltisch). Nach der Inkubation wird die Bouillonkultur aseptisch in einen zweiten sterilen 300-ml-Erlenmeyerkolben übertragen, der 150,0 mg der sterilen Reichsteins-Substanz-S in 5,0 ml Äthanol oder Aceton enthält. Der pH-Wert der Reaktionsmischung ist 7,0. Die Bakterienkultur, die Steroid und Lösungsmittel enthält, wird irrkubiert und 48 Stunden bei 28°C geschüttelt. Der Endwert des pn der Reaktionsmischung ist 7,2 bis 7,4. Die Kultur wird dann mit Chloroform extrahiert. Die Extrakte werden gesammelt und auf einem Dampfbad zur Trockne eingedampft (196,0 mg.) Der rohe Extrakt wird mit Methanol aufgeschlämmt. Es werden 80 mg Kristalle vom Fp. = 246 bis 250° C erhalten. Nach zweimaliger Kristallisation aus Aceton ist der Fp. = 246 bis 249° C (Zersetzung) ; [a] ö = + 76° (C H Cl,); s 245 = 15,500 (C,11, OH). Analyse: C21 Heg 04. 3. Conversion of Reichsteins-Substance-S into 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S 100 ml of a 1% yeast extract concentrate together with 9.0 ml of 0.2m KH, PO4 solution and 9.0 ml of 0.2 The Nag HP 04 solution is sterilized as previously indicated and inoculated with a 1.0% suspension of Corynebacterium simplex (ATCC 6946) from a 24-hour broth culture. The newly set up culture is incubated and shaken for 24 hours at 28 ° C. (shaking table). After the incubation, the broth culture is aseptically transferred to a second sterile 300 ml Erlenmeyer flask containing 150.0 mg of the sterile Reichsteins substance-S in 5.0 ml of ethanol or acetone. The pH of the reaction mixture is 7.0. The bacterial culture, which contains steroid and solvent, is incubated and shaken for 48 hours at 28 ° C. The final value of the pn of the reaction mixture is 7.2 to 7.4. The culture is then extracted with chloroform. The extracts are collected and evaporated to dryness on a steam bath (196.0 mg.) The crude extract is slurried with methanol. 80 mg of crystals with a melting point of 246 to 250 ° C. are obtained. After two crystallizations from acetone, the melting point is from 246 to 249 ° C. (decomposition); [α] δ = + 76 ° (CH Cl,); s 245 = 15,500 (C, 11, OH). Analysis: C21 Heg 04.

Berechnet .... C 73,22, H 8,19; gefunden ..... C 73,56, H 8,40. IR-Spektrum und Analyse besagen, daß das Produkt 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion ist. 21-Acetylierung von 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S Zu einer Lösung von 0,25 g von 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S in 2 ml Pyridin wird 1 ml Essigsäureanhydrid gegeben. Man läßt die Reaktionsmischung über Nacht bei Zimmertemperatur stehen und verdünnt sie dann. mit Eis und Wasser. Die entstehende Fällung wird filtriert und aus Methylenchlorid-Hexan umkristallisiert, wobei 0,20 g von 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion-21-acetat mit einem Schmelzpunkt von 226,5 bis 228° C erhalten werden. 4. Umwandlung von Reichsteins-Substanz-S in 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S und 1,4-Pregnadien-17a,20,21-triol-3-on. 100m1 eines Nährmediums aus 10/, Fischlösungen, 0,10 ,7a Hefeextrakt, 9,0 ml einer 0,2m KH2P04Lösung und 9,0 ml einer 0,2m Na2HP04 Lösung werden, wie oben beschrieben, sterilisiert und mit einer Suspension von Corynebacterium simplex aus einer 24-Stunden-Kultur geimpft. Die neu angesetzte Kultur wird irrkubiert und 20 Stunden bei 28° C geschüttelt. Nach der Inkubation wird die Bouillonkultur aseptisch in einen zweiten sterilen 300-ml-Erlenmeyerkolben übertragen, der 150 mg sterile Reichsteins-Substanz-S in 5,0 ml Äthanol enthält. Der pH-Wert der Mischung beträgt 6,9. Die Steroid und Lösungsmittel enthaltende Bakterienkultur wird irrkubiert und 48 Stunden bei 28° C geschüttelt. Am Ende beträgt der pH-Wert 7,3. Die Kultur wird mit 21 Chloroform in fünf gleichen Anteilen extrahiert, die Extrakte werden gesammelt und die Gesamtmenge auf einem Dampfbad konzentriert. Der rohe Rückstand wird in Methylenchlorid aufgenommen und über Magnesiumsilikat (bekannt unter dem Handelsnamen Florisil) chromatographiert. Aus dem Chromatogramm werden Ausgangsmaterial (15 mg), 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S (30 mg) und 1,4-Pregnadien-17a,20,21-triol-3-on (90 mg) isoliert. Letzteres wird aus Aceton-Hexan umkristallisiert und schmilzt bei 195 bis 196° C; [a] ö5 = -f-33° (Methanol). Analyse: C21 H30 04. Calculated .... C 73.22, H 8.19; found ..... C 73.56, H 8.40. IR spectrum and analysis indicate that the product is 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione. 21-Acetylation of 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S 1 ml of acetic anhydride is added to a solution of 0.25 g of 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S in 2 ml of pyridine. The reaction mixture is left to stand at room temperature overnight and then diluted. with ice and water. The resulting precipitate is filtered and recrystallized from methylene chloride-hexane, whereby 0.20 g of 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione-21-acetate with a melting point of 226.5 to 228 ° C. can be obtained. 4. Conversion of Reichsteins-Substance-S into 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S and 1,4-Pregnadien-17a, 20,21-triol-3-one. 100 ml of a nutrient medium consisting of 10 /, fish solutions, 0.10 , 7a yeast extract, 9.0 ml of a 0.2m KH2P04 solution and 9.0 ml of a 0.2m Na2HP04 solution are sterilized as described above and with a suspension of Corynebacterium simplex inoculated from a 24 hour culture. The newly set up culture is incubated and shaken at 28 ° C. for 20 hours. After the incubation, the broth culture is aseptically transferred to a second sterile 300 ml Erlenmeyer flask containing 150 mg of sterile Reichsteins-Substance-S in 5.0 ml of ethanol. The pH of the mixture is 6.9. The bacterial culture containing steroid and solvent is incubated and shaken at 28 ° C. for 48 hours. At the end the pH is 7.3. The culture is extracted with 21% chloroform in five equal portions, the extracts are collected and the total is concentrated on a steam bath. The crude residue is taken up in methylene chloride and chromatographed over magnesium silicate (known under the trade name Florisil). Starting material (15 mg), 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S (30 mg) and 1,4-Pregnadien-17a, 20,21-triol-3-one (90 mg) are isolated from the chromatogram. The latter is recrystallized from acetone-hexane and melts at 195 to 196 ° C; [a] δ5 = -f-33 ° (methanol). Analysis: C21 H30 04.

Berechnet .... C 72,80, H 8,73; gefunden ..... C 72,79, H 9,08. An Stelle von Äthanol können andere wasserlösliche organische Lösungsmittel benutzt werden, die auf den Mikroorganismus nicht toxisch wirken, wie Aceton, Mischungen von Äthanol und Aceton u. ä. 5. Umsetzung von 5-Pregnen-3ß,20-diol 100 ml eines 0,1°/oigen Hefeextraktkonzentrates, enthaltend 9,0 ml einer 0,2 m K H2 P 04 Lösung und 9,0 ml einer 0,2 m Nag H P 04 Lösung, werden in einem 300-ml-Erlenmeyerkolben 15 Minuten im Autoklav bei 776 Torr (120° C) gehalten. Anschließend läßt man den Kolben auf Zimmertemperatur abkühlen. In dem Kolben wird dann eine Suspension von Corynebacterium simplex angesetzt. Der angesetzte Kolben wird irrkubiert und 24 Stunden bei 28° C geschüttelt (Schütteltisch). Ein zweiter 300-ml-Erlenmeyerkolben, der 150 mg 5-Pregnen-3ß,20-diol (oder 5-Pregnea-3a,20-diol) enthält, wird 15 Minuten bei 776 Torr (120° C) in einem Autoklav sterilisiert. In diesen Kolben werden dann 5,0 ml Aceton oder Äthanol zugegeben. Die 24-Stunden-Wachstumskultur von Corynebacterium simplex wird aseptisch in den Kolben übertragen, der das Steroid enthält, und die Reaktionsmischung wird 36 Stunden bei 28- C geschüttelt (Schütteltisch). Am Ende der Umsetzungszeit beträgt der pH-Wert 7,1 bis 7,2. Die Reaktionsmischung wird dann sorgfältig mit Chloroform extrahie: t, die Chloroformextrakte werden gesammelt und die entstehende Lösung bis auf einen Rückstand (0,20 g) konzentriert. Der rohe Extrakt kristallisiert aus Äther in langen Prismen aus, Fp. = 135 bis 138"C. Nach zweimaliger Umkristallisation aus Methylenchlorid-Hexar entsteht 0,06 g 1,4-Pregnadien-3,20-dion mit einem Fp. = 152 bis 153° C; [a] 2s = -f-122° (CH C13), a 245 = 15,000 (C2115011). Das IR-Spektrum zeigt die Anwesenheit eines 1,4-Dien-3-on-s-ystems, eines weiteren Carbonyls (sechsgliedriger Ring oder Seitenkette) sowie die Abwesenheit von Hydroxyl an.Calculated .... C 72.80, H 8.73; found ..... C 72.79, H 9.08. Instead of ethanol, other water-soluble organic solvents that are non-toxic to the microorganism can be used, such as acetone, mixtures of ethanol and acetone and the like. 1% yeast extract concentrate containing 9.0 ml of a 0.2 M K H2 P 04 solution and 9.0 ml of a 0.2 M Nag HP 04 solution are placed in a 300 ml Erlenmeyer flask in an autoclave at 776 for 15 minutes Torr (120 ° C) held. The flask is then allowed to cool to room temperature. A suspension of Corynebacterium simplex is then made up in the flask. The attached flask is incubated and shaken for 24 hours at 28 ° C. (shaking table). A second 300 ml Erlenmeyer flask containing 150 mg of 5-Pregnen-3β, 20-diol (or 5-Pregnea-3a, 20-diol) is sterilized in an autoclave at 776 Torr (120 ° C.) for 15 minutes. 5.0 ml of acetone or ethanol are then added to this flask. The 24 hour growth culture of Corynebacterium simplex is aseptically transferred to the flask containing the steroid and the reaction mixture is shaken (shaker table) for 36 hours at 28 ° C. At the end of the conversion time, the pH is 7.1 to 7.2. The reaction mixture is then carefully extracted with chloroform, the chloroform extracts are collected and the resulting solution is concentrated to a residue (0.20 g). The crude extract crystallizes out of ether in long prisms, m.p. = 135 to 138 "C. After two recrystallizations from methylene chloride-hexar, 0.06 g of 1,4-pregnadiene-3,20-dione with a m.p. = 152 to results 153 ° C; [a] 2s = -f-122 ° (CH C13), a 245 = 15,000 (C2115011). The IR spectrum shows the presence of a 1,4-dien-3-one-s-ysteme, a further carbonyls (six-membered ring or side chain) and the absence of hydroxyl.

6. Herstellung von 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S Eine 100-mI-Bouillonkultur aus einem 0,1 "/oigen Hefeextraktkonzentrat,enthaltend 9,0 ml ein er 0,2 m K H2 P04-Lösung und 9,0 ml einer 0,2m Na. HP0,-Lösung, wird mit 1 ml einer 24-Stunden-Bouillonkultur von Corynebacterium simplex angesetzt. Der Kolben wird 24 Stunden bei 28° C irrkubiert. Ferner werden 150 ml steriles 5-Pregnen-3ß,17a,21-triol-20-on-3,21-diacetat in 50 ml Aceton in einem 300-rnl-Erlenmeyerkolben mit einer 24-Stundenkultur von Corvnebacterium simplex geimpft und bei 28 bis 30°C 48 Stunden lang irrkubiert. Die Produkte werden mit Chloroform extrahiert und die Chloroformextrakte auf ein kleines Volumen eingeengt und an »Florisil« (Magnesiumsilikat) chromatographiert. Die Reihenfolge der Elutionist: Ausgangsmaterial (75 mg), Reichsteins-Substanz-S-21-acetat (15 mg), 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S (30 mg).6. Production of 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S A 100 ml broth culture from a 0.1% yeast extract concentrate containing 9.0 ml of a 0.2 ml K H2 PO4 solution and 9.0 ml a 0.2m Na. HP0 solution is,-hour broth culture of Corynebacterium 24 attached simplex 1 ml of a. The flask is irrkubiert 24 hours at 28 ° C. Further, 150 ml of sterile 5-pregnene-3.beta., 17a, 21-triol-20-one-3,21-diacetate in 50 ml of acetone in a 300 ml Erlenmeyer flask is inoculated with a 24-hour culture of Corvnebacterium simplex and incubated for 48 hours at 28 to 30 ° C. The products are incubated with chloroform extracted and the chloroform extracts concentrated to a small volume and chromatographed on "Florisil" (magnesium silicate). The order of elution is: starting material (75 mg), Reichsteins substance S-21 acetate (15 mg), 1-dehydro-Reichsteins- Substance-S (30 mg).

Unter Benutzung des gleichen Reaktionsmediums und des gleichen Mikroorganismus wie im Beispiel 6 und mit der gleichen Steroidkonzentration wird Corticosteron in kristallines 1-Dehydro-corticosteron umgewandelt. In ähnlicher '\Veise erhält man aus Desoxycorticosteron kristallines 1-Dehydro-desoxy-corticosteron und aus 4-Pregnen-21-ol-3,11,20-trion (11-Dehydro-corticosteron) kristallines 1,4-Pregnadien-21-ol-3,11,20-trion.Using the same reaction medium and the same microorganism as in Example 6 and with the same steroid concentration, corticosterone is in crystalline 1-dehydro-corticosterone converted. Desoxycorticosterone is obtained in a similar way crystalline 1-dehydro-deoxy-corticosterone and from 4-pregnen-21-ol-3,11,20-trione (11-Dehydro-corticosterone) crystalline 1,4-pregnadien-21-ol-3,11,20-trione.

Analog der Acetylierung der Diene, wie in den Beispielen 1, 2 und 3 beschrieben, können auch andere Ester der Dienverbindungen hergestellt werden. Durch Reaktion des entsprechenden Säureanhydrids oder -chlorids können z. B. die Formiate, Propionate, Butyrate oder Valerianate sowie die Ester anderer nichttoxischer Säuren, wie die Benzoate, und ebenso die neutralen und sauren Ester der mehrbasischen Säuren, wie Bernsteinsäure, Maleinsäure, Malonsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Phthalsäure, und Hexahydrophthalsäure, hergestellt werden. Die Metallsalze, z. B. die Alkali- oder Erdalkalisalze der sauren Ester, können in üblicher Weise durch Reaktion mit dem entsprechenden Hydroxyd, Carbonat oder Hydrogencarbonat hergestellt werden.Analogously to the acetylation of the dienes, as in Examples 1, 2 and 3, other esters of the diene compounds can also be prepared. By reaction of the corresponding acid anhydride or chloride, z. B. the Formates, propionates, butyrates or valerianates as well as the esters of other non-toxic substances Acids, such as the benzoates, and also the neutral and acidic esters of the polybasic Acids such as succinic acid, maleic acid, malonic acid, citric acid, tartaric acid, phthalic acid, and hexahydrophthalic acid. The metal salts, e.g. B. the alkali or alkaline earth salts of the acidic esters can be prepared in the usual way by reaction with the corresponding hydroxide, carbonate or hydrogen carbonate.

Es können auch die Ester des Cortisons und Hydrocortisons (Cortisol) sowie ihre Zwischenprodukte dem 1-Dehydrierungsprozeß der vorliegenden Erfindung unterworfen werden. So kann im Beispiel l Cortison durch seinen 21-Ester oder seinen 17a,21-Diester oder durch 5-Pregnen-3,17a,21-triol-11,20-dion-21-acetat oder dessen 17a,21-Diacetat oder dessen 3,17a,21-Triacetat oder andere Ester ersetzt werden. Ebenso kann im Beispiel 2 Cortisol durch sein 21-Acetat oder 17a,21-Diacetat oder llß,17a,21-Triacetat oder durch 5-Pregnen-3,11f,17a, 21-tetrol-20-o.^.-3,21-diacetat, dessen 3,17a,21-Triacetat oder dessen 3,11ß,17a,21-Tetraacetat ersetzt werden. Die letzte Gruppe der Verbindungen kann durch die entsprechenden lla-Hydroxyepimeren ersetzt werden. Man erhält so 11-epi-l-Dehy dro-cortisol sowie dessen 21-Ester oder 17a,21-Diester. Die Polyester können in allen Fällen gemischte Ester, wie z. B. 3-Propionat-21-acetat, sein. Zum Beispiel kann Cortisol in 1-Dehydro-cortisol (Beispiel 2), das Cortisol-21-acetat in 1-Dehydro-cortisol oder sein 21-Acetat umgewandelt werden. Aus 1,0 g Cortisol-21-acetat wird 0,22 g 1-Dehydro-cortisol (IIIa), Fp. = 239 bis 241' C (Zersetzung), erhalten.The esters of cortisone and hydrocortisone (cortisol) can also be used. as well as their intermediates in the 1-dehydrogenation process of the present invention be subjected. Thus, in example l, cortisone can be replaced by its 21-ester or its 17a, 21-diester or by 5-pregnen-3,17a, 21-triol-11,20-dione-21-acetate or its 17a, 21-diacetate or its 3,17a, 21-triacetate or other esters are replaced. Likewise, in example 2 cortisol can be by 21-acetate or 17a, 21-diacetate or llß, 17a, 21-triacetate or by 5-pregnen-3,11f, 17a, 21-tetrol-20-o. ^ .- 3,21-diacetate, its 3,17a, 21-triacetate or its 3,11ß, 17a, 21-tetraacetate are replaced. the The last group of compounds can be replaced by the corresponding IIIa-hydroxyepimers be replaced. This gives 11-epi-l-dehydro-cortisol and its 21-ester or 17a, 21-diester. The polyesters can in all cases be mixed esters such as e.g. B. 3-propionate-21-acetate. For example, cortisol can be converted into 1-dehydro-cortisol (example 2), the cortisol-21-acetate is converted into 1-dehydro-cortisol or its 21-acetate will. From 1.0 g of cortisol-21-acetate, 0.22 g of 1-dehydro-cortisol (IIIa), m.p. = 239 to 241 'C (decomposition).

Wenn es erwünscht ist, die Verseifung in 21-Stellung zu vermeiden, wird die Temperatur der Umgebung während des Wachstums des Mikroorganismus und während der Reaktion auf 36° C erhöht. Das Produkt wird in der üblichen Weise isoliert. Aus 1,0 g des Cortisol-21-acetats entsteht dann 0,13 g 1-Dehydro-cortisol-21-acetat (IIIb), Fp. = 237 bis 239° C (Zersetzung).If it is desired to avoid saponification in the 21 position, is the temperature of the environment during and during the growth of the microorganism the reaction increased to 36 ° C. The product is isolated in the usual way. From 1.0 g of the cortisol-21-acetate then 0.13 g of 1-dehydro-cortisol-21-acetate is formed (IIIb), m.p. = 237-239 ° C (decomposition).

In ähnlicher «'eise wird wie im Beispiel 1 1,0 g Cortison-21-acetat in 1-Dehydro-cortison umgewandelt, von dem 0,17 g isoliert werden, Fp. = 230 bis 232° C. Wenn die Temperatur der Umgebung während des Wachstums des Mikroorganismus und während der Reaktion auf 36° C erhöht wird, entsteht aus 1,0 g Cortison-21-acetat 0,11 g 1-Dehydro-cortison-21-acetat, Fp. = 230 bis 233° C (Zersetzung).In a similar way as in Example 1, 1.0 g of cortisone-21-acetate is obtained converted into 1-dehydrocortisone, of which 0.17 g are isolated, m.p. = 230 bis 232 ° C. When the temperature of the environment during the growth of the microorganism and is increased to 36 ° C. during the reaction, 1.0 g of cortisone-21-acetate is formed 0.11 g of 1-dehydrocortisone-21-acetate, melting point = 230 to 233 ° C. (decomposition).

7. Umwandlung von Cortisol in 1-Dehydro-cortisol Aus einer Lösung von 1 g Hefeextrakt (»Difco") in 1,01 Leitungswasser, die 4,4g Kaliumdihydrogenphosphat und 8,8 g Dinatriumhydrogenphosphat (pH der Lösung 6,9) enthält, werden 10 Arteile von je 100 ml abgezogen, in 300-ml-Erlenmeyerkolben gebracht und im Autoklav 15 Minuten bei 776 Torr Dampfdruck (120° C) sterilisiert. Nach der Behandlung im Autoklav und Abkühlung der Bouillon wird 1 ml einer Suspension von Corynebacterium hoagii (American Type Culture Collection 7005) in jeden Kolben gebracht. Die Kolben werden dann auf einem Schütteltisch bei 220 Stößen pro Minute und 28° C 161;2 Stunde geschüttelt. In jeden der zehn Erlenmeyerkolben werden 50 mg Cortisol, in 1 ml 90°/oigem Methanol gelöst, aseptisch zugegeben. Die Kolben werden wieder in die Schüttelmaschine gegeben und 7 Stunden inkubiert. Der pH-Wert am Ende der Schüttelperiode beträgt 6,82. Der Inhalt aller Kolben wird vereinigt und mit einer Gesamtmenge von 31 Chloroform in drei gleichen Anteilen extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden zu einem Rückstand von 425 mg eingeengt. Die Kristallisation des Rückstandes aus Aceton liefert 248 mg 1-Dehydro-cortisol.7. Conversion of cortisol into 1-dehydro-cortisol From a solution of 1 g yeast extract ("Difco") in 1.01 tap water, the 4.4 g potassium dihydrogen phosphate and 8.8 g of disodium hydrogen phosphate (pH of the solution 6.9) contains 10 parts of 100 ml each, placed in 300 ml Erlenmeyer flasks and placed in the autoclave 15 Sterilized for minutes at 776 torr steam pressure (120 ° C). After treatment in the autoclave and cooling the broth becomes 1 ml of a suspension of Corynebacterium hoagii (American Type Culture Collection 7005) placed in each flask. The pistons will then shaken on a shaking table at 220 strokes per minute and 28 ° C 161; 2 hours. 50 mg of cortisol in 1 ml of 90% methanol are placed in each of the ten Erlenmeyer flasks dissolved, added aseptically. The flasks are returned to the shaker and incubated for 7 hours. The pH at the end of the shaking period is 6.82. Of the The contents of all flasks are combined and mixed with a total of 31 in chloroform extracted three equal proportions. The combined extracts become a residue concentrated by 425 mg. Crystallization of the residue from acetone yields 248 mg of 1-dehydrocortisol.

B. Umwandlung von Cortisol in 1-Dehydro-cortisol Aus einer Lösung von 0,5 g der Lösung des getrockneten wasserlöslichen Teiles eines Hefeautotysates,beknnnt unter demHandelsnamenBasaminBusch (Anheuser-Busch) in 1 1 Leitungswasser werden 10 Teile von j e 100 ml abgezogen, in 300-ml-Erlenmeyerkolben gebracht und durch Behandlung im Autoldav von 15 Minuten Dauer bei 776 Torr Dampfdruck (120° C) sterilisiert. Nach Behandlung im Autoklav und Abkühlen der Bouillon wird 1 ml einer Suspension von Corynebacterium simplex in jeden Kolben gegeben. Die Kolben werden dann auf einem Schütteltisch bei 220 Stößen pro Minute und 28° C für 24 Stunden geschüttelt. Jedem der zehn Erlenmeyerkolben werden 50 mg Cortisol, gelöst in 0,8 ml absolutem Alkohol, aseptisch zugesetzt. Die Kolben werden auf den Schütteltisch gebracht und für weitere 4 bis 7 Stunden inkubiert. Der pH-Wert am Ende der Schüttelperiode beträgt 7,2 bis 7,6. Der Inhalt aller Kolben wird vereinigt und mit einer Gesamtmenge von 31 Chloroform in drei gleichen Anteilen extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden zu einem Rückstand von 490 mg konzentriert. Die Kristallisation des Rückstandes aus Aceton liefert 403 mg 1-Dehydro-cortisol. Fp. = 238 bis 240° C (Zersetzung) ; [a]-D5= -f-105° (Dioxan) ; s 243 = 14,500 (Methanol).B. Conversion of cortisol to 1-dehydro-cortisol From a solution of 0.5 g of the solution of the dried, water-soluble part of a yeast autotysate, known under the trade name BasaminBusch (Anheuser-Busch) in 1 1 tap water 10 parts of 100 ml each are withdrawn, placed in 300 ml Erlenmeyer flasks and poured through Treatment in Autoldav for 15 minutes, sterilized at 776 Torr steam pressure (120 ° C). After treatment in the autoclave and cooling the broth becomes 1 ml of a suspension of Corynebacterium simplex was added to each flask. The pistons will then open shaken on a shaker table at 220 strokes per minute and 28 ° C for 24 hours. Each of the ten Erlenmeyer flasks is given 50 mg of cortisol, dissolved in 0.8 ml of absolute Alcohol, added aseptically. The flasks are placed on the shaker table and incubated for an additional 4 to 7 hours. The pH at the end of the shaking period is 7.2 to 7.6. The contents of all flasks are combined and made up for a total of 31 chloroform extracted in three equal proportions. The combined extracts are concentrated to a residue of 490 mg. The crystallization of the residue from acetone gives 403 mg of 1-dehydrocortisol. Mp. = 238 to 240 ° C (decomposition) ; [a] -D5 = -f -105 ° (dioxane); s 243 = 14,500 (methanol).

Bei Benutzung von Cortison an Stelle von Cortisol und bei erhöhter Umsetzungszeit von 6 bis 12 Stunden wird das rohe 1-Dehydro-cortison in einer Ausbeute von 85 °,1o erhalten.When using cortisone instead of cortisol and with increased Reaction time of 6 to 12 hours is the crude 1-dehydrocortisone in one yield of 85 °, 1o obtained.

Aus diesem Beispiel ist ersichtlich, daß sich die Ausbeute bei verringerter Konzentration des Ausgangsproduktes erhöht. Die anderen im obigen genannten 4-Pregnenverbindungen können in analoger Weise behandelt werden. Wie bei den vorstehenden Beispielen können die 21-Ester als Ausgangsverbindungen und in gleicher Weise die 5-Pregnen-3-hydroxy-Analoga benutzt werden. 9. Umwandlung von Cortison in 1-Dehydro-cortison Bacillus sphaericus var. fusiformis (ATCC 7055) wird auf ein Nähr-Agar aus einem unter dem Handelsnamen »Bacto-Beef-Extrakt« bekannten Fleischextrakt (3 g), Pepton, z. B. dem unter dem Handelsnamen »Bactopepton" bekannten Produkt (5 g), Na Cl (8 g), Agar (15 g) und 1 1 Leitungswasser für 24 Stunden bei 28'C inkubiert. Zu 100 ml einer sterilen Nährbouillon (aus Bacto-Beef-Extrakt [3 g], Bactopepton [5 g], mit Leitungswasser auf 11 aufgefüllt), wird in einem 300-ml-Kolben eine mit einer Platindrahtschlinge entnommene Menge der inkubierten Kultur zugesetzt und die Bouillonmischung dann weitere 24 Stunden bei 28°C auf einer Schüttelmaschine unter aeroben Bedingungen inkubiert. Die so erhaltene Bouillonkultur wird als Impfmittel in 1%iger Lösung benutzt. Zu jedem der zehn Kolben, die 100 ml sterile Nährlösung enthalten, wird 1 ml des Impfmittels hinzugesetzt. Die Kolben werden auf einer rotierenden Schüttelmaschine aerob 8 Stunden lang bei 28°C und 240 Stößen pro Minute gerührt. Nach dieser Wachstumsperiode wird eine Lösung von 25 mg Cortison in 0,5 ml Methanol aseptisch jedem Kolben zugeführt, der wiederum geschüttelt und für weitere 24 Stunden inkubiert wird. Am Ende ist der pH-Wert etwa 7,8. Der Inhalt der Kolben wird vereinigt, mit Chloroform extrahiert und in üblicher Weise behandelt, wobei 1-Dehydro-cortison entsteht. An Stelle von Cortison können als Ausgangsmaterial 5-Pregnen-3,17a,21-triol-11,20-dion, 5-Pregnen-3,17a,20,21-tetrol-11-on oder deren 3-Acetate oder andere Ester benutzt werden, die dem Mikroorganismus gegenüber nicht toxisch oder seinem Enzym gegenüber nicht verzögernd wirken. Ebenso können an Stelle von Cortisol 5-Pregnen-3,11ß,17a,21-tetrol-20-on, 5-Pregnen-3,llß,17a,20,21-pentol oder deren 3-Acetate oder andere Ester benutzt werden. Wie oben angegeben, wird die 20-Hydroxygruppe zu einer Ketogruppe oxydiert.From this example it can be seen that the yield is reduced when the Concentration of the starting product increased. The other 4-pregnene compounds mentioned above can be treated in an analogous way. As with the previous examples, you can the 21-esters as starting compounds and, in the same way, the 5-pregnen-3-hydroxy analogs to be used. 9. Conversion of cortisone to 1-dehydrocortisone Bacillus sphaericus var. fusiformis (ATCC 7055) is produced on a nutrient agar from a under the trade name "Bacto-Beef-Extrakt" known meat extract (3 g), peptone, z. B. the one under the Trade names "Bactopepton" known product (5 g), Na Cl (8 g), agar (15 g) and 1 1 tap water incubated for 24 hours at 28'C. For 100 ml of a sterile nutrient broth (from Bacto-Beef extract [3 g], Bactopeptone [5 g], made up to 11 with tap water), an amount withdrawn with a platinum wire loop is placed in a 300 ml flask added to the incubated culture and then the broth mixture for a further 24 hours incubated at 28 ° C on a shaker under aerobic conditions. The so The resulting broth culture is used as an inoculant in a 1% solution. To each of the ten flasks containing 100 ml of sterile nutrient solution becomes 1 ml of the inoculant added. The flasks are aerobic on a rotating shaker for 8 hours stirred for a long time at 28 ° C and 240 strokes per minute. After this growing season will a solution of 25 mg of cortisone in 0.5 ml of methanol aseptically each Flask is supplied, which in turn is shaken and incubated for a further 24 hours will. In the end, the pH is around 7.8. The contents of the flask are combined with Chloroform extracted and treated in the usual way, using 1-dehydro-cortisone arises. Instead of cortisone, 5-pregnen-3,17a, 21-triol-11,20-dione, 5-Pregnen-3,17a, 20,21-tetrol-11-one or their 3-acetates or other esters are used which are non-toxic to the microorganism or to its enzyme do not act delaying. 5-Pregnen-3,11ß, 17a, 21-tetrol-20-one, 5-Pregnen-3, 11ß, 17a, 20,21-pentol or their 3-acetates or other esters are used will. As indicated above, the 20-hydroxy group is oxidized to a keto group.

10. Umwandlung von Cortisol in 1-Dehydro-cortisol Das Wachstumsmedium wird aus 30 g kondensierter Fischlösung behandelt, 4,49 g K HZ P 04 und 8,83 g Nag H P 0, - 7 HZ O hergestellt und alles mit Leitungswasser auf 1 1 aufgefüllt. Der pH-Wert dieses Mediums ist etwa 6,8. In jeden der zehn 300-ml-Kolben werden 100 ml des Wachstumsmediums gebracht und die Kolben mit Inhalt 15 Minuten bei 776 Torr Dampfdruck im Autoklav behandelt. Jedem abgekühlten Kolben werden dann 1 ml des im Beispiel 9 beschriebenen Impfmittels zugegeben und das Wachstum 12 Stunden zugelassen.10. Conversion of cortisol into 1-dehydro-cortisol The growth medium is treated from 30 g of condensed fish solution, 4.49 g of K HZ P 04 and 8.83 g of Nag HP 0, - 7 HZ O and everything with tap water to 1 1 filled up. The pH of this medium is around 6.8. 100 ml of the growth medium are placed in each of the ten 300 ml flasks and the flasks and their contents are autoclaved for 15 minutes at 776 Torr vapor pressure. 1 ml of the inoculant described in Example 9 is then added to each cooled flask and growth is allowed for 12 hours.

In jeden Kolben werden dann aseptisch 25 mg Cortisol zugegeben und die aerobe Inkubation weitere 24 Stunden lang durchgeführt. Die Fermentationsmischung wird dann, wie oben beschrieben, unter Gewinnung von 1-Dehydro-cortisol aufgearbeitet. Die Umwandlungen nach den Beispielen 9 und 10 können durch Benutzung von 1°/@gem Hefeextrakt (»Difco<<) in Leitungswasser als Nährmedium abgewandelt werden.25 mg of cortisol are then aseptically added to each flask and aerobic incubation continued for an additional 24 hours. The fermentation mix is then worked up as described above to obtain 1-dehydrocortisol. The conversions according to Examples 9 and 10 can acc. To using 1 ° / @ Yeast extract ("Difco") can be converted into tap water as a nutrient medium.

11. Umwandlung von 6-Dehydro-cortison-21-acetat in 1-Dehydro-cortison 0,85 g 4,6-Pregnadien-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-acetat (6-Dehydro-cortison-21-acetat), das in der in Journal of the Biological Chemistry, Bd. 197 (1952), S. 261, beschriebenen Weise erhalten wurde, wird in 1,4,6-Pregnatrien-17a,21-diol-3,11,20-trion in der oben beschriebenen Weise durch Einwirkung der Enzyme einer Kultur von Corynebacterium simplex in einer Ausbeute von etwa 180/, umgewandelt. Dieses neue Trien besitzt adrenocortische Hormoneigenschaften und kann partiell zu dem entsprechenden 1,4-Dien durch Reduktion unter relativ milden Bedingungen hydriert werden, z. B. durch Zink, Essig- und Ascorbinsäure, wie in der angeführten Veröffentlichung beschrieben. In analoger Weise können andere 1,4,6-Pregnatriene aus Ausgangsprodukten mit einem System konjugierter Doppelbindungen, die im A- und B-Ring verteilt sind, hergestellt werden, und solche Pregnatriene können in gleicher Weise partiell zu den entsprechenden 1,4-Pregnadienen hydriert werden. Der Substituent in 3-Stellung kann eine OH-Gruppe sein; in diesem Fall befinden sich die konjugierten Doppelbindungen meistens an den 5,6- und 7,8-C-Atomen. Der Substituent in 11-Stellung kann ein a- oder ß-Hydroxyl sein oder kann überhaupt fehlen, und in 21-Stellung kann Methyl- an Stelle von Hydroxymethyl- oder Acyloxymethyl- sein. So kann 6-Dehydro-cortisol und 5,7-Pregnadien-3,11ß,17a,21-tetrol-20-on durch Einwirkung der obengenannten Kulturen in 1,6-bis-Dehydrocortisol umgewandelt werden. Weiterhin kann 6-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S in 1,4,6-Pregnatrien-17a, 21-diol-3,20-dion umgewandelt werden. In jedem Falle kann der 21-Ester benutzt werden, der hydrolysiert oder nicht hydrolysiert werden kann. Durch partielle Hydrierung werden, wie oben beschrieben, die entsprechenden 1,4-Pregnadiene erhalten.11. Conversion of 6-dehydro-cortisone-21-acetate into 1-dehydro-cortisone 0.85 g 4,6-pregnadiene-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21-acetate (6-dehydro -cortisone-21-acetate), which was obtained in the manner described in Journal of the Biological Chemistry, Vol. 197 (1952), p. 261, is in 1,4,6-Pregnatrien-17a, 21-diol- 3,11,20-trione converted in the manner described above by the action of the enzymes of a culture of Corynebacterium simplex in a yield of about 180 %. This new triene has adrenocortic hormone properties and can be partially hydrogenated to the corresponding 1,4-diene by reduction under relatively mild conditions, e.g. B. by zinc, acetic and ascorbic acid, as described in the cited publication. In an analogous manner, other 1,4,6-pregnatrienes can be prepared from starting products with a system of conjugated double bonds which are distributed in the A and B rings, and such pregnatrienes can be partially converted in the same way to the corresponding 1,4-pregnadienes be hydrogenated. The 3-position substituent can be an OH group; in this case the conjugated double bonds are mostly on the 5,6 and 7,8 carbon atoms. The substituent in the 11-position can be α- or β-hydroxyl or can be absent at all, and in the 21-position can be methyl instead of hydroxymethyl or acyloxymethyl. For example, 6-dehydrocortisol and 5,7-pregnadiene-3,11β, 17a, 21-tetrol-20-one can be converted into 1,6-bis-dehydrocortisol by the action of the cultures mentioned above. Furthermore, 6-dehydro-Reichsteins-Substance-S can be converted into 1,4,6-pregnatriene-17a, 21-diol-3,20-dione. In either case, the 21-ester, which may or may not be hydrolyzed, can be used. As described above, the corresponding 1,4-pregnadienes are obtained by partial hydrogenation.

12. Umwandlungvon4-Pregnen-lla,17a,21-triol-3,20-dion in 11-epi-l-Dehydro-cortisol Die Reaktion wird genau, wie für die Umwandlung von Cortisol in das entsprechende Dien beschrieben, durchgeführt und das Produkt durch Extraktion mit Chloroform isoliert und aus- Aceton-Hexan kristallisiert. Von 1,0 g des 11-epi-Cortisolswerden 0,25 g von 11-epi-l-Dehydro-cortisol in kristalliner Form isoliert. Fp. = 245 bis 246°C (Zersetzung).12. Conversion of 4-pregnen-Ila, 17a, 21-triol-3,20-dione to 11-epi-1-dehydro-cortisol The response will be exactly as for the conversion of cortisol into the appropriate one Diene described, carried out and the product isolated by extraction with chloroform and crystallized from acetone-hexane. Of 1.0 g of the 11-epi-cortisol becomes 0.25 g of 11-epi-l-dehydrocortisol isolated in crystalline form. Mp = 245 to 246 ° C (Decomposition).

Die Acetylierung von 11-epi-l-Dehydro-cortisol (1,0 g) wird durch Lösen in 15 ml wasserfreiem Pyridin und anschließendem Zusatz von 0,3g Essigsäureanhydrid durchgeführt. Man läßt die Reaktionsmischung über Nacht bei Zimmertemperatur stehen und gießt sie dann in Eiswasser. Die entstehende Fällung von 11-epi-l-Dehydrocortisol-21-acetat wird durch Filtration abgetrennt und aus Aceton-Hexan umkristallisiert.The acetylation of 11-epi-l-dehydro-cortisol (1.0 g) is carried out by Dissolve in 15 ml of anhydrous pyridine and then add 0.3 g of acetic anhydride carried out. The reaction mixture is left to stand at room temperature overnight and then pour them into ice water. The resulting precipitation of 11-epi-l-dehydrocortisol-21-acetate is separated off by filtration and recrystallized from acetone-hexane.

13. 1,4-Pregnadien-9a,fluor-21-ol-3,11,20-trion In einen 300-ml-Erlenmeyerkolben werden 100m1 eines 0,1°/oigen Hefeextraktes (»Difco«), der 9,0 m1 einer 0,2 m Kaliumdihydrogenphosphatlösung und 9,0 ml einer 0,2 m Dinatriumhydrogenphosphatlösung enthält, gegeben. Der Kolben mit Inhalt wird durch Behandlung im Autoklav 15 Minuten lang bei 120°C sterilisiert, und dem sterilen Medium wird 1 ml einer 1 °/jgen Suspension von Corynebacterium simplex zugegeben. Anschließend wird der Kolben mit Inhalt 24 Stunden bei 28°C inkubiert. In einen zweiten 300-ml-Erlenmeyerkolben werden 2 ml Äthanol und 25 mg 9a-Fluor-11-dehydro-corticosteron gegeben. Die Kultur wird nach 24stündigem Wachstum aseptisch in den Kolben, der das Steroid enthält, übertragen, und die Mischung wird bei 28°C inkubiert und 10 Stunden geschüttelt. Danach wird die Mischung mit Chloroform extrahiert und der Chloroformextrakt eingeengt. Der Rückstand wird aus Aceton-Hexan kristallisiert und liefert 4 mg 9a-Fluor-1,4-pregnadien-21-ol-3,11,20-trion. Das 21-Acetat dieser Verbindung wird durch Umsatz von 1 g dieses 21-Alkohols, in 20 ml abs. Pyridin mit 0,3 g Essigsäureanhydrid (über Nacht bei Zimmertemperatur stehengelassen) und anschließende Verdünnung mit Eiswasser hergestellt.13. 1,4-Pregnadiene-9a, fluoro-21-ol-3,11,20-trione In a 300 ml Erlenmeyer flask 100 ml of a 0.1% yeast extract ("Difco"), the 9.0 ml of a 0.2 m potassium dihydrogen phosphate solution and containing 9.0 ml of a 0.2 M disodium hydrogen phosphate solution. The piston the contents are sterilized by treatment in an autoclave for 15 minutes at 120 ° C, and the sterile medium is 1 ml of a 1% suspension of Corynebacterium simplex admitted. The flask and its contents are then incubated at 28 ° C. for 24 hours. 2 ml of ethanol and 25 mg of 9a-fluoro-11-dehydro-corticosterone are placed in a second 300 ml Erlenmeyer flask given. After 24 hours of growth, the culture is aseptically transferred to the flask, the containing the steroid, transferred and the mixture incubated at 28 ° C and 10 Shaken for hours. Thereafter, the mixture is extracted with chloroform and the Concentrated chloroform extract. The residue is crystallized from acetone-hexane and provides 4 mg of 9a-fluoro-1,4-pregnadien-21-ol-3,11,20-trione. The 21 acetate of this Compound is made by converting 1 g of this 21-alcohol in 20 ml of abs. Pyridine with 0.3 g of acetic anhydride (left to stand overnight at room temperature) and then Dilution made with ice water.

In ähnlicher Weise wird 9a-Fluor-1,4-pregnadien-11ß, 21-diol-3,20-dion in einer Ausbeute von 5 mg aus 25 mg einfach ungesättigtem Ausgangsprodukt erhalten. Das 21-Acetat wird durch die übliche Acetylierung erhalten.Similarly, 9a-fluoro-1,4-pregnadiene-11β, 21-diol-3,20-dione obtained in a yield of 5 mg from 25 mg of monounsaturated starting material. The 21-acetate is obtained by the usual acetylation.

Durch Benutzung einer 1%igen Suspension von Corynebacterium hoagii an Stelle des Corynebacterium simplex werden bei sonst gleichen Bedingungen 25 mg von 9a-Chlor-corticosteron in 9a-Chlor-1,4-pregnadien-1lß, 21-diol-3,20-dion in einer Ausbeute von 7 mg umgewandelt. Das Produkt kann durch Umsatz mit Propionsäureanhydrid in das 21-Propionat umgewandelt werden. Ebenfalls mit Corynebacterium hoagii wird 9a-Bromcorticosteron-21-acetat in 9a-Brom-1,4-pregnadien-11ß, 21-diol-3,20-dion umgewandelt. Analog, jedoch bei einer Inkubationszeit von 48 Stunden (28 bis 30°C), wird 9a-Fluor-cortisol in 9a-Fluor-l-dehydro-cortisol umgewandelt. Entsprechend können 9a-Fluor-, 9a-Chlor- und 9a-Brom-cortison in 9a-Fluor-, 9a-Chlor- und 9a-Brom-1-dehydro-cortison umgewandelt werden. 9a-Chlor- und 9a-Brom-cortisol können analog zu 9a-Chlor- und 9a-Brom-l-dehydro-cortisol umgesetzt werden.Using a 1% suspension of Corynebacterium hoagii instead of Corynebacterium simplex, all other things being equal, 25 mg of 9a-chloro-corticosterone in 9a-chloro-1,4-pregnadiene-1lß, 21-diol-3,20-dione in converted to a yield of 7 mg. The product can be obtained by reacting with propionic anhydride be converted into the 21-propionate. Also with Corynebacterium hoagii is 9a-bromocorticosterone-21-acetate in 9a-bromo-1,4-pregnadiene-11β, 21-diol-3,20-dione converted. Analogous, but with an incubation time of 48 hours (28 to 30 ° C), 9a-fluoro-cortisol is converted into 9a-fluoro-l-dehydro-cortisol. Corresponding 9a-fluorine, 9a-chlorine and 9a-bromocortisone can be converted into 9a-fluorine, 9a-chlorine and 9a-bromo-1-dehydro-cortisone being transformed. 9a-chloro and 9a-bromocortisol can be used analogously to 9a-chloro and 9a-bromo-1-dehydro-cortisol are implemented.

Die 17-Desoxyverbindungen können in die entsprechenden 17a-Hydroxyverbindungen (9a-Halogenderivate von 1-Dehydro-cortisol und 1-Dehydro-cortison) durch Einwirkung einer Kultur von Trichothecium roseum, wie unten beschrieben, umgesetzt werden.The 17-deoxy compounds can be converted into the corresponding 17a-hydroxy compounds (9a-halogen derivatives of 1-dehydrocortisol and 1-dehydrocortisone) by Exposure to a culture of Trichothecium roseum, as described below, implemented will.

14. 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S Je 1 ml einer Bouillonkultur, die als Impfmittel (10/0) nach Beispiel 9 hergestellt wird, wird in zehn Kolben gebracht, die 100 ml des sterilen Nährmediums enthalten, wie oben beschrieben. Die Kolben werden auf einer rotierenden Schüttelmaschine 8 Stunden bei 28'C und 240 Stößen pro Minute gerührt. Nach dieser Wachstumsperiode wird jedem Kolben eine Lösung von 25 mg Reichsteins-Substanz-S in 0,5 ml Methanol aseptisch zugegeben, der dann wiederum geschüttelt und weitere 24 Stunden inkubiert wird. Der pH-Wert beträgt am Ende 7,8. Der Inhalt der Kolben wird dann vereinigt und dreimal mit 21 Chloroform pro Extraktion extrahiert. Die vereinigten Chloroformextrakte werden zur Trockne eingedampft, wobei 310 mg des Rohproduktes anfallen. Das rohe Steroid wird durch Chromatographie nach der Methode von G. M. Shull (Abstracts of Papers of the 126th Meeting of the American Chemical Society, December 12-17, 1954, S. 9 a) gereinigt. Die chromatographische Auswertung zeigt eine quantitative Umwandlung des Ausgangsmaterials in das 1,4-Dien. Das Rohprodukt kann aus Aceton umkristallisiert werden und liefert 225 mg 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S. Fp. = 246 bis 248°C. 15. 1-Dehydro-cortisol Aus einer Lösung von 1°'oigem Hefeextrakt (,#>Difco") in Leitungswasser werden 10 Anteile von j e 100 ml abgezogen, in 300-ml-Kolben gebracht und durch Behandlung im Autoklav 15 Minuten bei 776 Torr Dampfdruck sterilisiert. Nach Behandlung im Autoklav und Abkühlung der Bouillon wird 1 ml einer geschüttelten Kultur von Bacillus sphaericus war. fusiformis, die in einer \ährbouillon, wie im Beispiel 14 beschrieben, gewachsen ist, in jeden Kolben gebracht. Die Kolben werden dann auf einem Schütteltisch 12 Stunden bei 28°C und 240 Stößen pro Minute geschüttelt. In jeden Kolben wird aseptisch eine Lösung von 25 mg Cortisol in 0,5 ml Methanol zugefügt und die Kolben mit Inhalt geschüttelt und weitere 8 Stunden inkubiert. Nach Vereinigung des Inhalts aller Kolben und Extraktion mit Chloroform, wie im Beispiel 14 beschrieben, werden 304 mg des rohen 1,4-Diens erhalten. Die Reinigung wird durch Umkristallisation aus Aceton durchgeführt unter Benutzung von entfärbender Kohle, worauf 230 mg von 1-Dehydro-cortisol erhalten werden. Fp. = 240 bis 241°C.14. 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S 1 ml each of a broth culture, which is prepared as inoculant (10/0) according to Example 9, is in ten flasks brought containing 100 ml of sterile nutrient medium as described above. the Flasks are on a rotating shaker for 8 hours at 28'C and 240 Stirred pulses per minute. After this growing period, each flask becomes a solution of 25 mg of Reichsteins substance S in 0.5 ml of methanol was added aseptically, which then shaken again and incubated for a further 24 hours. The pH is at the end of 7.8. The contents of the flasks are then combined and washed three times with 21% chloroform extracted per extraction. The combined chloroform extracts become dry evaporated, resulting in 310 mg of the crude product. The raw steroid is through Chromatography according to the method of G. M. Shull (Abstracts of Papers of the 126th Meeting of the American Chemical Society, December 12-17, 1954, p. 9 a). The chromatographic evaluation shows a quantitative conversion of the starting material into the 1,4-diene. The crude product can be recrystallized from acetone and yields 225 mg 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S. Mp = 246 to 248 ° C. 15. 1-Dehydro-cortisol A solution of 1% yeast extract ("#> Difco") in tap water becomes 10 Portions of 100 ml each are withdrawn, placed in 300 ml flasks and treated by treatment sterilized in an autoclave for 15 minutes at 776 Torr steam pressure. After treatment in Autoclave and cool the broth is 1 ml of a shaken culture of Bacillus sphaericus was. fusiformis, in a broth as described in Example 14, has grown, brought into each flask. The flasks are then placed on a shaker table Shaken for 12 hours at 28 ° C and 240 strokes per minute. In each flask will Aseptically added a solution of 25 mg of cortisol in 0.5 ml of methanol and the flask shaken with contents and incubated for a further 8 hours. After unifying the content all flasks and extraction with chloroform as described in Example 14 304 mg of the crude 1,4-diene obtained. Purification is by recrystallization from acetone carried out using decolorizing charcoal, whereupon 230 mg of 1-dehydro-cortisol can be obtained. Mp = 240 to 241 ° C.

Bei Verwendung von 250 mg Cortisol-21-acetat als Ausgangsmaterial werden 220 mg von 1-Dehydro-cortisol-21-acetat erhalten. Fp. = 237 bis 239°C (Aceton-Hexan). 16. 1-Dehydro-cortison Ein Wachstumsmedium wird aus 30g kondensierter Fischlösung (enzymbehandelt), 4,49g KHZP04 und 8,83 g Na, H P 04 - 7 H2 O und Verdünnung mit Leitungswasser auf 1 1 hergestellt (pH-Wert etwa 6,8). In jeden von zehn 300-ml-Kolben werden 100 ml des Wachstumsmediums gebracht und die Kolben mit Inhalt 15 Minuten bei 776 Torr Dampfdruck im Autoklav behandelt. Jeder Kolben wird mit 1 ml von Bacillus sphaericus war. fusiformis wie im Beispiel 15 geimpft und das Wachstum 12 Stunden lang zugelassen. Jedem Kolben wird dann aseptisch eine Lösung von 50 mg Cortison in 1 ml Methanol zugesetzt und das Schütteln und die Inkubation weitere 24 Stunden fortgesetzt. Der Inhalt der Kolben wird vereinigt und, wie im Beispiel 14 beschrieben, mit Chloroform extrahiert, wobei 630 mg des rohen 1-Dehydro-cortisons erhalten werden. Die Reinigung wird durch Kristallisation aus Aceton in Gegenwart von Aktivkohle durchgeführt, worauf 420 mg 1-Dehydrocortison erhalten werden. Fp. = 233 bis 235°C.When using 250 mg of cortisol-21-acetate as starting material 220 mg of 1-dehydro-cortisol-21-acetate are obtained. Mp = 237-239 ° C (acetone-hexane). 16. 1-Dehydro-cortisone A growth medium is made from 30g of condensed fish solution (enzyme treated), 4.49 g KHZP04 and 8.83 g Na, H P 04 - 7 H2 O and dilution with Tap water prepared to 1 liter (pH about 6.8). In each of ten 300 ml flasks 100 ml of the growth medium are brought and the flasks with contents 15 minutes Autoclaved at 776 Torr vapor pressure. Each flask is filled with 1 ml of Bacillus sphaericus was. fusiformis vaccinated as in Example 15 and growth 12 hours long approved. A solution of 50 mg of cortisone is then aseptically placed on each flask in 1 ml of methanol and shaking and incubation for a further 24 hours continued. The contents of the flasks are combined and, as described in Example 14, extracted with chloroform to obtain 630 mg of the crude 1-dehydrocortisone. The purification is done by crystallization from acetone in the presence of activated charcoal carried out, whereupon 420 mg of 1-dehydrocortisone are obtained. Mp = 233-235 ° C.

Analog wird Corticosteron in 1-Dehydro-corticosteron umgewandelt. Nach Beispiel 14 wird 9a-Fluor-cortisol in 9a-Fluor-l-dehydro-cortisol umgewandelt, das als kristalliner Körper erhalten wird.Analogously, corticosterone is converted into 1-dehydro-corticosterone. According to Example 14, 9a-fluoro-cortisol is converted into 9a-fluoro-1-dehydro-cortisol, which is obtained as a crystalline body.

Nach Beispiel 16 wird 5-Pregnen-3ß,20-diol in 1,4-Pregnadien-3,20-dion umgewandelt, Fp. = 152 bis 153'C nach Extraktion mit Chloroform, Verdampfung und Umkristallisation des Rückstandes aus Äther.According to Example 16, 5-pregnen-3ß, 20-diol is converted into 1,4-pregnadiene-3,20-dione converted, m.p. = 152 to 153'C after extraction with chloroform, evaporation and Recrystallization of the residue from ether.

Desoxycorticosteron kann nach Beispiel 14 in 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dion umgewandelt werden.According to Example 14, deoxycorticosterone can be converted into 1,4-pregnadien-21-ol-3,20-dione being transformed.

Die dehydrierenden Mikroorganismen bewirken somit die Einführung einer Doppelbindung in der 4,5-Stellung unter gleichzeitiger Oxydation der 3-Hydroxylgruppe der 3-Hydroxy-5-pregnene und gleichzeitiger Dehydrierung in 1,2-Stellung. Obwohl Kulturen der dehydrierenden Mikroorganismen auf 3-Hydroxy- oder 3-Keto-l-pregnene einwirken können, ist es vorteilhaft, als Ausgangsmaterial Verbindungen zu benutzen, die eine Doppelbindung am 5-C-Atom besitzen.The dehydrating microorganisms thus cause the introduction of a Double bond in the 4,5-position with simultaneous oxidation of the 3-hydroxyl group the 3-hydroxy-5-pregnene and simultaneous dehydration in the 1,2-position. Even though Cultures of the dehydrating microorganisms on 3-hydroxy- or 3-keto-l-pregnene can act, it is advantageous to use compounds as starting material, which have a double bond on the 5-carbon atom.

Die Beispiele 17 bis 19 zeigen verschiedene Kombinationen der mikrobiologischen 1,2-Dehydrierung in Verbindung mit anderen mikrobiologischen Umwandlungen. 17. A. 1,4-Pregnadien-17a-ol-3,20-dion (11c) Mit Hilfe der im Beispiel 3 beschriebenen Kultur ,werden 150,0 mg steriles 4-Pregnen-17a-ol-3,20-dion (17a-hy droxy-progesteron) (I c) in 5,0 ml Äthanol dehydriert. Der rohe Extrakt wiegt 178 mg. Das Rohprodukt wird aus Aceton-Hexan kristallisiert und liefert reine Kristalle von 1,4-Pregnadien-17a-ol-3,20-dion (IIc).Examples 17 to 19 show various combinations of the microbiological 1,2-dehydration associated with other microbiological conversions. 17. A. 1,4-Pregnadien-17a-ol-3,20-dione (11c) Using those described in Example 3 Culture, 150.0 mg of sterile 4-pregnen-17a-ol-3,20-dione (17a-hydroxy-progesterone) (I c) dehydrated in 5.0 ml of ethanol. The raw extract weighs 178 mg. The raw product is crystallized from acetone-hexane and gives pure crystals of 1,4-pregnadien-17a-ol-3,20-dione (IIc).

B. 1,4-Pregnadien-11a,17a-diol-3,20-dion (111c) Diese Umwandlung wird mit Hilfe einer Kultur von Rhizopus nigricans in der im einzelnen im Journal of the American Chemical Society, Bd. 74 (1952), S. 5933, beschriebenen Weise durchgeführt. Zu 61 einer 24-Stunden-Wachstumskultur von Rhizopus nigricans wird 1,0 g von 11c in 200 mI Äthanol zugefügt. Nach einer 48stündigen Umwandlungsperiode in der Anordnung und dem Medium, wie in der obigen Veröffentlichung beschrieben, wird die Kultur mit Methylenchlorid extrahiert, das Lösungsmittel abgedampft. Der rohe kristalline Rückstand liefert aus Aceton-Hexan umkristallisiert kristallines 1,4-Pregnadien-lla,17a-diol-3,20-dion (IIIc). C. 1,4-Pregnadien-17a-ol-3,11,20-trion (Vc) Eine Lösung von 3,0 g von IIIc in 30 ml Pyridin wird langsam zu einer Aufschlämmung von 1,5 g Chromsäure in 15 ml Pyridin gegeben (Poos und Mitarbeiter, Journal of the American Chemical Society, Bd. 75 -1953j, S. 422) und die entstehende Mischung wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt. Zu der Reaktionsmischung werden dann 4,5g Natriumsulfit in 45 ml Wasser zugefügt und weitere 2 Stunden gerührt. Die Mischung wird in 600 ml Wasser eingegossen und die entstehende Lösung mit Methylenchlorid extrahiert. Die Extrakte werden mit verdünnter Schwefelsäure, wäßrigem Natriumcarbonat und Wasser neutral gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach Konzentration der getrockneten Lösung und Kristallisation des Rückstandes aus Aceton-Hexan entsteht kristallines 1,4-Pregnadien-17a-ol-3,11,20-trion (Vc).B. 1,4-Pregnadiene-11a, 17a-diol-3,20-dione (111c) This conversion will using a culture of Rhizopus nigricans in the details in the Journal of the American Chemical Society, 74: 5933 (1952). 1.0 g of 11c is added to a 24-hour growth culture of Rhizopus nigricans added in 200 ml of ethanol. After a 48 hour conversion period in the arrangement and the medium as described in the above publication is the culture extracted with methylene chloride, the solvent evaporated. The raw crystalline The residue gives crystalline 1,4-pregnadiene-IIIa, 17a-diol-3,20-dione, recrystallized from acetone-hexane (IIIc). C. 1,4-Pregnadien-17a-ol-3,11,20-trione (Vc) A solution of 3.0 g of IIIc in 30 ml of pyridine slowly becomes a slurry of 1.5 g of chromic acid in 15 ml of pyridine (Poos et al, Journal of the American Chemical Society, Vol. 75-1953j, p. 422) and the resulting mixture is overnight at room temperature touched. 4.5 g of sodium sulfite in 45 ml of water are then added to the reaction mixture added and stirred for a further 2 hours. The mixture is poured into 600 ml of water and the resulting solution extracted with methylene chloride. The extracts are made with washed neutral with dilute sulfuric acid, aqueous sodium carbonate and water and dried over magnesium sulfate. After concentrating the dried solution and crystallization of the residue from acetone-hexane results in crystalline 1,4-pregnadien-17a-ol-3,11,20-trione (Vc).

D. 1-Dehydro-cortison (II a) 41 eines 1o/oigen Hefeextraktes (@,Difco") werden in einem Schüttelkolben sterilisiert und mit einer Gattung von Ophiobolus herbotrichus geimpft. Die Kultur wird 3 Tage lang unter Schütteln bei 27°C inkubiert. Dann wird 1,0 g von Vc in 25 ml Aceton (steril) aseptisch dem Schüttelkolben zugesetzt und das Schütteln weitere 3 Tage bei 27°C fortgeführt. Das Myzel wird von der Reaktionsmischung abgetrennt und ebenso wie das wäßrige Filtrat mit 3 Anteilen von Chloroform vollständig extrahiert. Die Extrakte werden vereinigt, mit Wasser gewaschen und konzentriert. Die konzentrierte Lösung wird über >>FlorisiL, (Magnesiumsilikat) (30 g) chromatographiert und die Säule mit Methylenchlorid gewaschen. Mit 0,5 °j', und 1,0 % Methanol enthaltendem Methylenchlorid wird das 1-Dehydro-cortison eluiert und aus Äceton-Hexan umkristallisiert. 18. A. Herstellung von 1,4-Pregnadien-llß,17-diol-3,20-dion (IV c) aus II c Eine Kultur von Curvularia lunata (Identifizierung nach »United States Quartermaster Corps.,, Philadelphia) läßt man in Kolben wachsen, die das gleiche Medium, wie im Beispiel 17 beschrieben, enthalten (s. auch USA.-Patentschrift 2 658 023). 100 ml dieses Impfmittels werden unter sterilen Bedingungen in 21 eines wäßrigen Mediums gegeben, das die folgenden Bestandteile enthält: Rohrzucker ........................ 1 Difco trypton ...................... 1 Natriumnitrat . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,2 Dikaliumhydrogenphosphat .......... 0,1 Magnesiumsulfat-Heptahydrat . . . . . . . . 0,05 Kaliumchlorid...................... 0,05 Ferrosulfat-Heptahydrat . . . . . . . . . . . . . 0,001 Diese Mischung wird auf p$ 7 mit Schwefelsäure gebracht und, ehe die Mischung sterilisiert wird, wird 0,25 °/o Calciumcarbonat zugesetzt. Das geimpfte Medium wird 24 Stunden bei 27 bis 28°C belüftet, und zwar pro Minute mit etwa 1i'2 bis 1 Volumen Luft pro Volumen Lösung. Während dieser Zeit wird die Mischung mit einem Rührer, der mit etwa 1700 Umdrehungen pro Minute rotiert, gerührt. 1/2 g von 1,4-Pregnadien-17a-ol-3,20-dion (II c) wird in 20 ml 95°/@gem Äthanol gelöst. Die Lösung wird der Fermentationsmischung unter sterilen Bedingungen zugefügt. Die Reaktion -wird dann weitere 24 Stunden unter den gleichen Bedingungen fortgesetzt.D. 1-dehydrocortisone (II a) 41 of a 10% yeast extract (@, Difco ") are sterilized in a shake flask and with a genus from Ophiobolus herbotrichus inoculated. The culture is kept with shaking for 3 days Incubated at 27 ° C. Then 1.0 g of Vc in 25 ml of acetone (sterile) is aseptically added to the shake flask added and shaking continued for a further 3 days at 27 ° C. The mycelium will separated from the reaction mixture and, like the aqueous filtrate, in 3 parts completely extracted from chloroform. The extracts are combined with water washed and concentrated. The concentrated solution is poured over >> FlorisiL, (magnesium silicate) (30 g) and the column washed with methylene chloride. With 0.5 ° j ', and methylene chloride containing 1.0% methanol, the 1-dehydrocortisone is eluted and recrystallized from acetone-hexane. 18. A. Preparation of 1,4-pregnadiene-llß, 17-diol-3,20-dione (IV c) from II c A culture of Curvularia lunata (identification according to »United States Quartermaster Corps. ,, Philadelphia) is grown in cobs that contain the the same medium as described in Example 17 contain (see also USA patent 2 658 023). 100 ml of this inoculant are poured into 21 of a given to an aqueous medium containing the following components: Cane sugar ........................ 1 Difco trypton ...................... 1 sodium nitrate. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0.2 dipotassium hydrogen phosphate .......... 0.1 magnesium sulfate heptahydrate . . . . . . . . 0.05 Potassium Chloride ...................... 0.05 Ferrous Sulphate Heptahydrate . . . . . . . . . . . . . 0.001 This mixture is brought to p $ 7 with sulfuric acid and, before the mixture is sterilized, 0.25% calcium carbonate is added. The inoculated medium is aerated for 24 hours at 27 to 28 ° C, every minute with about 1/2 to 1 volume of air per volume of solution. During this time, the Mixture with a stirrer rotating at about 1700 revolutions per minute, stirred. 1/2 g of 1,4-pregnadien-17a-ol-3,20-dione (II c) is dissolved in 20 ml of 95% ethanol solved. The solution is added to the fermentation mixture under sterile conditions. The reaction is then continued for a further 24 hours under the same conditions.

Die Fermentationsmischung wird mit 3 Teilen Methylenchlorid extrahiert, die vereinigten Extrakte werden über Magnesiumsulfat getrocknet und auf ein kleines Volumen eingeengt. Die konzentrierte Lösung wird einer Säule von Florisil (Magnesiumsilikat) (30 g) zugeführt, die mit Heran beschickt wird, und wird anschließend mit Heran, das Äther in wechselnden Mengen (zwischen 1 und 99 °/,) enthält, eluiert. Das erwünschte Produkt wird aus den am stärksten voneinander entfernten Flutionen (25 °/o Äther -+- 99 °/o Äther) gesammelt und aus Aceton-Hexan umkristallisiert, wobei kristallines 1,4-Pregnadien-11ß,17a-diol-3,20-dion (IVc) erhalten wird. B. Herstellung von V c aus IV c Diese Reaktion -wird genau wie die Umwandlung von 1I1 c in V c durchgeführt. Das Produkt wird dann in Ha in der oben beschriebenen Weise umgewandelt.The fermentation mixture is extracted with 3 parts of methylene chloride, the combined extracts are dried over magnesium sulfate and reduced to a small Volume constricted. The concentrated solution is placed on a column of Florisil (magnesium silicate) (30 g), which is loaded with Heran, and is then fed with Heran, the ether in varying amounts (between 1 and 99%) is eluted. The desired The product is made up of the most distant flutes (25% ether - + - 99% ether) collected and recrystallized from acetone-hexane, whereby crystalline 1,4-pregnadiene-11β, 17a-diol-3,20-dione (IVc) is obtained. B. Manufacture of V c from IV c This reaction is carried out exactly like the conversion of 11 c to V c. The product is then converted to Ha in the manner described above.

19. Herstellung von 11-epi-l-Dehydro-cortisol (VIIa) aus IIIc Das gleiche Verfahren wie bei der Umwandlung von V c in Il a wird angewendet. Als Ausgangsmaterial wird III c verwendet. VIIa wird durch Chromatographie über Florisil (Magnesiumsilikat) isoliert. (Flution durch 1 bis 20/, Methanol enthaltendes Methylenchlorid.) Die Umkristallisation von VIIa aus Aceton ergibt ein kristallines Produkt. Fp. = 243 bis 245°C.19. Production of 11-epi-l-dehydrocortisol (VIIa) from IIIc Das the same procedure as for converting V c to Il a is used. As a starting material III c is used. VIIa is determined by chromatography over Florisil (magnesium silicate) isolated. (Elution through 1 to 20% methanol-containing methylene chloride.) The Recrystallization of VIIa from acetone gives a crystalline product. M.p. = 243 up to 245 ° C.

Analog der Umwandlung von V c in Ha wird IV c in III a umgewandelt. Die Umkristallisation von III a aus Aceton ergibt Kristalle mit einem Fp. = 238 bis 240°C.IV c is converted into III a analogously to the conversion of V c to Ha. Recrystallization of III a from acetone gives crystals with a melting point = 238 up to 240 ° C.

Die Oxydation von III a oder VII a, vorzugsweise in Form der 21-Acetate oder anderer niederer Alkanoylester (IIIb und VIIb), wird nach dem Verfahren, wie zur Umwandlung von III c in V c beschrieben, durchgeführt. Die 21 Acetatgruppe wird mit Kaliumhydrogencarbonat in wäßrigem Methanol hydrolysiert (Herstellung von IIa).The oxidation of III a or VII a, preferably in the form of the 21-acetates or other lower alkanoyl esters (IIIb and VIIb), according to the method such as described for the conversion of III c in V c, carried out. The 21 acetate group will hydrolyzed with potassium hydrogen carbonate in aqueous methanol (preparation of IIa).

Die Umwandlung von I c in 4-Pregnen-11a,17a-diol-3,20-dion (VIc) (Weg B) wird durch dieselbe Umwandlung durchgeführt, wie sie bei der Umwandlung von IIc in IIIc angewandt wurde (Beispiel 17, B).The conversion of I c to 4-pregnene-11a, 17a-diol-3,20-dione (VIc) (route B) is carried out by the same conversion as in the conversion of IIc was applied in IIIc (Example 17, B).

4-Pregnen-11ß,17a-diol-3,20-dion (VIIc) wird aus Ic -wie IV c aus Il c hergestellt. Die Verbindungen VI c und VIIc werden beide zu 4-Pregnen-17a-ol-3,11,20-trion (VIII c) oxydiert, analog der Umsetzung von III c und IVc zu Vc.4-Pregnen-11ß, 17a-diol-3,20-dione (VIIc) becomes from Ic - like IV c from Il c produced. Compounds VIc and VIIc both become 4-pregnen-17a-ol-3,11,20-trione (VIII c) oxidizes, analogously to the conversion of III c and IVc to Vc.

Die noch verbleibenden Umwandlungen nach Weg B folgen in gleicher Weise auf die Reaktionen des Weges A. So wird Verbindung V I c in III c und Verbindung VIII c in V c umgewandelt, während Verbindung VII c in I V c umgewandelt wird in gleicher Weise, wie I c in II c umgewandelt wurde, d. h. durch Behandlung mit einer Kultur oder einem enzymatischen Extrakt einer Kultur von Corynebacterium simpler oder hoagii. In diesem Falle sind die Umwandlungen die gleichen wie in Weg A. 20. A. 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dion (II d) 150,0 mg steriles 4-Pregnen-21-ol-3,20-dion (1d) in 5,0 ml Äthanol werden der Fermentation in dem gleichen Medium, mit dem gleichen Mikroorganismus und in gleicher Weise, wie im Beispiel 17,A beschrieben, unterworfen, wobei ein roher Extrakt gewonnen wird, der 137 mg wiegt. Das Rohprodukt wird aus Aceton-Hexan umkristallisiert und liefert kristallines 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dion (Il d). B. 1,4-Pregnadien-l la,21-diol-3,2Q-dion (III d) 1,0 g 1I d in 200 ml Äthanol wird in einer Kultur von Rhizopus nigricans in der im Beispiel 17, B beschriebenen Weise behandelt. Der rohe kristalline Rückstand wird aus Aceton-Hexan umkristallisiert und liefert kristallines 1,4-Pregnadien-lla,21-diol-3,20-dion (IIId). C. 1,4-Pregnadien-21-ol-3,11, 20-trion (V d) Eine Lösung von 3,0 g III d in 30 ml Pyridin wird in der im Beispiel 17, C beschriebenen Weise oxydiert. Die Verdampfung des getrockneten Methylenchloridextraktes und Kristallisation des Rückstandes aus Aceton-Hexan liefert kristallines 1,4-Pregnadien-21-ol-3,11,20-trion (Vd). D. 1-Dehydro-cortison (Il a) 21 von Czapek-Dox-Medium wird in einem Schüttelkolben sterilisiert und mit einer Gattung von Trichothecium roseum geimpft. Nach 3tägigem Schütteln bei 27°C werden der Kultur aseptisch 500 mg 1,4-Pregnadien-21-ol-3,11,20-trion (Vd) in 15 ml Aceton zugefügt. Das Schütteln wird 60 Stunden bei 27°C fortgeführt. Das Myzel wird abgetrennt und ebenso wie das wäßrige Filtrat mit Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden gut mit Wasser gewaschen, getrocknet und konzentriert. Die konzentrierte Lösung wird über »Florisila (Magnesiumsilikat) chromatographiert und 1-Dehydrocortison (IIa) wird in den 0,5 und 1,0 °/o Methanol erthaltenden Methylenchloridfraktionen eluiert und anschhe- Bend mit Methylenchlorid aus der Säule gewaschen. Die Umkristallisation der angegebenen Fraktionen ausAceton liefert Kristalle von Ha, Fp. 226 bis 229°C (Zersetzung).The remaining conversions according to route B follow the reactions of route A in the same way. Thus, compound VI c is converted into III c and compound VIII c is converted into V c, while compound VII c is converted into IV c in the same way as I c has been converted to II c, ie by treatment with a culture or an enzymatic extract of a culture of Corynebacterium simpler or hoagii. In this case the conversions are the same as in Route A. 20. A. 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dione (II d) 150.0 mg of sterile 4-pregnen-21-ol-3 , 20-dione (1d) in 5.0 ml of ethanol are subjected to fermentation in the same medium, with the same microorganism and in the same manner as described in Example 17, A, a crude extract containing 137 mg weighs. The crude product is recrystallized from acetone-hexane and gives crystalline 1,4-pregnadien-21-ol-3,20-dione (II d). B. 1,4-Pregnadiene-l la, 21-diol-3,2Q-dione (III d) 1.0 g of 1I d in 200 ml of ethanol is used in a culture of Rhizopus nigricans in the manner described in Example 17, B. treated. The crude crystalline residue is recrystallized from acetone-hexane and gives crystalline 1,4-pregnadiene-IIIa, 21-diol-3,20-dione (IIId). C. 1,4-Pregnadien-21-ol-3,11,20-trione (V d) A solution of 3.0 g of III d in 30 ml of pyridine is oxidized in the manner described in Example 17, C. Evaporation of the dried methylene chloride extract and crystallization of the residue from acetone-hexane yields crystalline 1,4-pregnadien-21-ol-3,11,20-trione (Vd). D. 1-dehydrocortisone (II a) 21 from Czapek-Dox medium is sterilized in a shake flask and inoculated with a genus of Trichothecium roseum. After 3 days of shaking at 27 ° C., 500 mg of 1,4-pregnadien-21-ol-3,11,20-trione (Vd) in 15 ml of acetone are aseptically added to the culture. Shaking is continued for 60 hours at 27 ° C. The mycelium is separated off and, like the aqueous filtrate, extracted with methylene chloride. The combined extracts are washed well with water, dried and concentrated. The concentrated solution is chromatographed over Florisila (magnesium silicate) and 1-dehydrocortisone (IIa) is eluted in the methylene chloride fractions containing 0.5 and 1.0% methanol and then washed from the column with methylene chloride. Recrystallization of the specified fractions from acetone gives crystals of Ha, melting point 226 to 229 ° C (decomposition).

21. A. 1,4-Pregnadien-llß,21-diol-3,20-dion (IVd) Man läßt eine Kultur von Curvularia lunata (Identifizierung nach -United Stetes Quartermaster Corps«, Philadelphia) in Kolben wachsen, die das gleiche Medium, wie im Beispiel 1 der USA.-Patentschrift 2 658 023 beschrieben, enthält und benutzt sie wie im Beispiel 18, A für die Umwandlung von 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dion (Il d). Aus den am meisten voneinander entfernten Eluaten (25 °,1p Äther -+- 99 0, 1, Äther) wird 1,4-Pregnadienllß,21-diol-3,20-dion (IVd) erhalten, das aus Aceton-Hexan umkristallisiert wird. B. Herstellung von 1,4-Pregnadien-21-ol-3,11,20-trion (Vd) Diese Reaktion wird analog der Umwandlung von IIId in Vd durchgeführt. Als Ausgangsmaterial wird IVd verwendet.21. A. 1,4-Pregnadien-llß, 21-diol-3,20-dione (IVd) A culture of Curvularia lunata (identified by United Stetes Quartermaster Corps, Philadelphia) is grown in flasks which are the same Medium, as described in Example 1 of US Pat. No. 2,658,023, contains and uses it as in Example 18, A for the conversion of 1,4-pregnadien-21-ol-3,20-dione (II d). From the most remote from each other eluates (25 °, 1p ether - + - 99 0, 1, ether) is 1,4-Pregnadienllß obtained 21-diol-3,20-dione (IVd), which was recrystallized from acetone-hexane will. B. Preparation of 1,4-pregnadien-21-ol-3,11,20-trione (Vd) This reaction is carried out analogously to the conversion of IIId into Vd. IVd is used as the starting material.

Verbindung III wird in 11-epi-l-Dehydro-cortisol (VIIa) analog der Umwandlung von V d in Ha, übergeführt. Das Produkt wird chromatographisch über »Florisil« (Mag:iesiumsilikat) durch 1 und 2 °,'o Methanol enthaltendes Methylenchlorid eluiert. Die Umkristallisation von VII a aus Aceton ergibt das Produkt in kristallierter Form; Fp. = 243 bis 245'C.Compound III is in 11-epi-l-dehydro-cortisol (VIIa) analogously to Conversion of V d into Ha. The product is chromatographed on »Florisil« (Mag: iesiumsilikat) eluted by methylene chloride containing 1 and 2 °, 'o methanol. Recrystallization of VII a from acetone gives the product in crystallized form Shape; Mp = 243 to 245 ° C.

In gleicher Weise wird das zur Umwandlung von IV d in I I I a angewandte Verfahren benutzt, um V d in I I a überzuführen. III a wird durch Chromatographie über -FlorisiL (Magnesiumsilikat), wie oben beschrieben, isoliert. Die Umkristallisation von III a aus Aceton ergibt ein kristallines Produkt; Fp. = 238 bis 240` C.The same is used to convert IV d to I I I a Method used to convert V d to I I a. III a is determined by chromatography isolated via -FlorisiL (magnesium silicate) as described above. The recrystallization III a from acetone gives a crystalline product; Fp. = 238 to 240` C.

Die Oxydation von III a oder VII a, vorzugsweise als 21-Acetat, wird entsprechend der Umsetzung von IIId zu Vd durchgeführt. Die 21Acetatgruppe wird durch Erhitzen mit Kaliumhydrogencarbonat in wäßrigem Methanol hydrolvsiert unter Bildung von Ha.The oxidation of III a or VII a, preferably as 21-acetate, is carried out according to the conversion from IIId to Vd. The 21 acetate group becomes hydrolyzed by heating with potassium hydrogen carbonate in aqueous methanol Formation of ha.

Die Umwandlung von 4-Pregnen-11a,21-diol-3,20-dion (V1 d) , 4-Pregnen-1 lß,21-diol-3,20-dion (VII d) und 4-Pregnen-21-ol-3,11,20-trion (VIIId) zu IIId, IVd und Vd wird entsprechend der Umwandlung von I d in II d durchgeführt.The conversion of 4-pregnen-11a, 21-diol-3,20-dione (V1 d), 4-pregnen-1 lß, 21-diol-3,20-dione (VII d) and 4-pregnen-21-ol-3,11,20-trione (VIIId) to IIId, IVd and Vd is carried out according to the conversion of I d to II d.

In analoger Weise folgt die Umwandlung von I d in die Zwischenprodukte VId und VIId analog der Umwandlung von Il d in III d bzw. IV d. Die Verbindungen VI d und VIId werden unter milden oxydierenden Bedingungen, wie oben beschrieben, in VIII d übergeführt.In an analogous manner, the conversion of I d into the intermediates VId and VIId follows analogously to the conversion of II d into III d or IV d. The compounds VI d and VIId are converted into VIII d under mild oxidizing conditions, as described above.

Wie im vorangegangenen beschrieben, können an Stelle von Desoxycorticosteron und seinen Estern 5-Pregnen-3,21-diol-20-on und seine 21-Ester, wie das Acetat und andere, niedere Alkanoylester, als Ausgangsprodukte benutzt werden. Man kann so 5-Pregnen-3,21-diol-20-on und seine 21-Ester in Il a und seine 21-Ester überführen.As described above, deoxycorticosterone can be used in place of and its esters 5-pregnen-3,21-diol-20-one and its 21-esters, such as the acetate and other, lower alkanoyl esters can be used as starting materials. You can do that Convert 5-pregnen-3,21-diol-20-one and its 21-ester into II a and its 21-ester.

Bessere Ausbeuten bei der Oxydation von lla-OH und 11ß-0 H-Verbindungen zu den entsprechenden 11-Ketoverbindungen «-erden im allgemeinen unter weniger schwierigen Umständen erhalten, wenn das 21-Hydroxyl zunächst in der in Beispielen 20,C und 21, B beschriebenen Weise verestert wird (anschließend eventuell Hydrolyse).Better yields in the oxidation of Ila-OH and 11ß-0 H compounds to the corresponding 11-keto compounds «earths in general among less difficult ones Circumstances obtained when the 21-hydroxyl initially in the in Examples 20, C and 21, B described manner is esterified (then possibly hydrolysis).

Das 21 .,1cetat von Vd kann durch die Oxydation des 11-Hydroxyls der 21-Acetate von IIId und IVd mit Chromsäure in Pvridin erhalten werden. Der 21-Ester von V d wird durch Behandlung am Rückfluß mit Kaliumcarbo iat in wägrigem Metha-iol leicht hydrolysiert.The 21st, 1 acetate of Vd can be obtained by the oxidation of the 11-hydroxyl of the 21-acetates of IIId and IVd can be obtained with chromic acid in pvridine. The 21 ester of V d is iate by treatment under reflux with potassium carbonate in aqueous metha-iol easily hydrolyzed.

Verbindungen. VId und VIId lassen sich in ihre 21-Acetate in gleicher Weise wie IIId und IVd umwandeln. Die Oxydation von VId-21Acetat und VIId-21-Acetat zu VIIId-21-Acetat erfolgt analog der Oxydation von III d-21-Acetat zu V d-21-Acetat.Links. VId and VIId can be converted into their 21-acetates in the same way Convert way like IIId and IVd. The oxidation of VId-21 acetate and VIId-21 acetate to VIIId-21 acetate takes place analogously to the oxidation of III d-21 acetate to V d-21 acetate.

Im Formelschema für Weg D wird die Umwandlung von 16-Dehydro-pregnenolon (Ie) und 16-Dehydro-progesteron (III e) in 1-Dehydro-cortison (II a) über die 16,17-Epoxyde gezeigt. Diese Wege umfassen ebenfalls die Anlagerung eines 11(a oder ß) -Hydroxyls, die Anlagerung eines 21-Hydroxyls, die Einführung eines 17a-Hydroxyls durch Öffnung des 16,17-Oxidoringes, die Einführung der 1,2-Doppelbindung und die Oxydation des 11-Hydroxyls zu Ketosauerstoff. Während die Ordnung dieser Reaktionen innerhalb gewisser Grenzen abgeändert werden kann (beispielsweise muß der Oxydationsschritt auf die Einführung des 11-Hydroxyls folgen), ist es vorteilhaft, die Behandlung mit dem dehydrierenden Mikroorganismus nach der Anlagerung einer Hydroxylgruppe zum mindesten in einer der 11,17a- und 21-Stellungen oder nach der Bildung des 16,17-Epoxyds durchzuführen. 22. 1-Dehydro-cortison 1 g von 16-Dehydro-progesteron (III e), in 25 ml Chloroform gelöst, wird bei Zimmertemperatur etwa 15 Stunden lang mit der äquivalenten Menge von Benzopersäure, in Chloroform gelöst, umgesetzt. Der Reaktionsmischung wird dann Wasser zugesetzt, die organische Schicht zunächst mit Natriumsulfitlösung, dann mit Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen und dann über Natriumsulfit getrocknet. Das Chloroform wird abgedampft und der Rückstand aus einer Mischung von Aceton und Heran kristallisiert, wobei 16,17-Oxido-4-pregnen-3,20-dion (IV e) entsteht.In the formula scheme for route D is the conversion of 16-dehydro-pregnenolone (Ie) and 16-dehydro-progesterone (III e) in 1-dehydro-cortisone (II a) via the 16,17-epoxides shown. These pathways also include the addition of an 11 (a or ß) -hydroxyl, the addition of a 21-hydroxyl, the introduction of a 17a-hydroxyl through opening of the 16,17-Oxidoringes, the introduction of the 1,2-double bond and the oxidation of the 11-hydroxyls to keto oxygen. While the order of these reactions within can be modified within certain limits (for example, the oxidation step following the introduction of the 11-hydroxyl), it is beneficial to the treatment with the dehydrating microorganism after the addition of a hydroxyl group at least in one of the 11,17a and 21 positions or after the formation of the 16,17 epoxy perform. 22. 1-Dehydro-cortisone 1 g of 16-Dehydro-progesterone (III e), in Dissolve 25 ml of chloroform at room temperature for about 15 hours with the equivalent amount of benzoperic acid, dissolved in chloroform, reacted. The reaction mixture then water is added, the organic layer first with sodium sulfite solution, then washed with sodium hydrogen carbonate solution and water and then over sodium sulfite dried. The chloroform is evaporated and the residue from a mixture crystallized from acetone and Heran, whereby 16,17-oxido-4-pregnen-3,20-dione (IV e) arises.

Eine Suspension von 1 g von 16,17-Epoxyd in 10 ml Eisessig wird mit einer Lösung von 1,1 g 47°;'oigem wäßrigem Jodwasserstoff, 10 ml Essigsäure und 4,1 g Essigsäureanhydrid gemischt. Die Temperatur wird bei etwa 15 bis 20'C während der Anlagerung und einer weiteren halben Stunde gehalten. Die ;Mischung wird dann in 5 Volumina Wasser gegossen, filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Das Rohprodukt ist 16-Jod-4-pregnen-17a-ol-3,20-dion und wird in 100 ml Äthanol und 1 ml Essigsäure gelöst und etwa 6 Stunden mit 2,5 g Raneynickel am Rückfluß behandelt. Der Katalysator wird dann durch Filtration entfernt, das Filtrat konzentriert und dann nach Zusatz von Wasser eine Fällung von 17a-Hydroxy-progesteron (VII e) erhalten.A suspension of 1 g of 16,17 epoxy in 10 ml of glacial acetic acid is added a solution of 1.1 g of 47 °; 'oigem aqueous hydrogen iodide, 10 ml of acetic acid and 4.1 g acetic anhydride mixed. The temperature is around 15 to 20'C during the deposit and held for another half an hour. The; mixture is then Poured into 5 volumes of water, filtered, washed with water and dried. That The crude product is 16-iodine-4-pregnen-17a-ol-3,20-dione and is dissolved in 100 ml of ethanol and Dissolved 1 ml of acetic acid and refluxed with 2.5 g of Raney nickel for about 6 hours. The catalyst is then removed by filtration, the filtrate concentrated and then, after adding water, a precipitation of 17a-hydroxy-progesterone (VII e) is obtained.

41 eines 1°/oigen Hefeextraktes (»Difco«) werden im Schüttelkolben sterilisiert und mit Ophiobolus herbotrichus geimpft. Die Kultur wird 3 Tage unter Schütteln bei 27°C inkubiert, dann wird 1,0 g 17a-Hydroxyprogesteron in 25 ml Aceton (steril) aseptisch zugesetzt und weitere 3 Tage bei 27°C geschüttelt. Das Myzel wird abgetrennt und ebenso wie das wäßrige Filtrat mit 3 Anteilen Chloroform extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit Wasser gewaschen, getrocknet, konzentriert und an Florisil (Magnesiumsilikat) chromatographiert. Das bei der Elution z. B. mit 0,5 bis 1,5 °/p Methanol enthaltendem Methylenchlorid erhaltene Material wird aus Aceton-Hexan kristallisiert und ergibt Reichsteins-Substanz-S- (VIIIe).41 of a 1% yeast extract ("Difco") are placed in a shake flask sterilized and inoculated with Ophiobolus herbotrichus. The culture will take 3 days Shaking incubated at 27 ° C, then 1.0 g of 17a-hydroxyprogesterone in 25 ml of acetone (sterile) added aseptically and shaken for a further 3 days at 27 ° C. The mycelium is separated off and, like the aqueous filtrate, extracted with 3 parts of chloroform. The combined extracts are washed with water, dried, concentrated and chromatographed on Florisil (magnesium silicate). That in the elution z. B. with 0.5 to 1.5% / p methanol-containing methylene chloride material obtained is made from Acetone-hexane crystallizes and gives Reichsteins-Substance-S- (VIIIe).

Eine Lösung von 1,0 g VIII e in 150 ml Äthanol wird 1 1 einer 24-Stunden-Wachstumskultur von Rhizopus nigricans zugesetzt. Nach 48stündiger Inkubation wird die Mischung mit Methylenchlorid extrahiert und der organische Extrakt zur Trockne eingedampft. Das Rohprodukt wird aus Aceton-Hexan kristallisiert und ergibt 4-Pregnen-11a,17a,21-triol-3,20-dion (IXe).A solution of 1.0 g of VIII e in 150 ml of ethanol becomes 1 liter of a 24-hour growth culture added by Rhizopus nigricans. After 48 hours of incubation, the mixture becomes extracted with methylene chloride and the organic extract evaporated to dryness. The crude product is crystallized from acetone-hexane and gives 4-pregnen-11a, 17a, 21-triol-3,20-dione (IXe).

Die Verbindung IXe wird nun der Einwirkung einer Kultur eines dehydrierenden Mikroorganismus, wie z. B. Corynebacterium simpler, unterworfen. Nach etwa 48stündiger Inkubation bei 28°C wird 11-epi-l-Dehydrocortisol (Xe, VIIa) erhalten. Diese Verbindung wird dann, wie oben beschrieben, zu 1-Dehydro-cortison (IIa) oxydiert.The compound IXe is now exposed to a culture of a dehydrating Microorganism such as B. Corynebacterium simpler. After about 48 hours Incubation at 28 ° C becomes 11-epi-l-dehydrocortisol (Xe, VIIa) obtained. This compound is then, as described above, oxidized to 1-dehydrocortisone (IIa).

Durch Verwendung einer Kultur von Curvularia lunata (Identifizierung nach »United States Quartermaster Corps«, Philadelphia) wird nach Beispiel 18, A aus IXe IIIa erhalten, das analog zu 1-Dehydro-cortison oxydiert werden kann. 23. 1-Dehydro-cortison 16-Dehydro-pregnenolon wird in das 16,17-Epoxyd durch Behandlung mit Perphthalsäure übergeführt. Das 16,17-Oxido-5-pregnen-3-ol-20-on (IIe) wird dann in das lla-Hydroxyderivat (XIe) durch Behandlung mit einer Kultur von Rhizopus nigricans umgewandelt. XI e wird der Einwirkung einer Kultur von Ophiobolus herbotrichus unterworfen unter Bildung von 16,17-Oxido-5-pregnen-3,lla,21-triol-20-on (XIIe). Der Epoxydring wird mit H J geöffnet, wobei 5-Pregnen-3,lla,17a,21-tetrol-20-on (XIII e) entsteht. Aus XIII e bildet sich durch Einwirkung einer Kultur eines dehydrierenden Mikroorganismus 11-epi-l-Dehydro-cortisol (Xe), daszu 1-Dehydro-cortison oxydiert werden kann.Using a culture of Curvularia lunata (identification according to "United States Quartermaster Corps", Philadelphia) according to Example 18, A obtained from IXe IIIa, which can be oxidized analogously to 1-dehydrocortisone. 23 1-dehydro-cortisone 16-dehydro-pregnenolone is converted into the 16,17-epoxide by treatment transferred with perphthalic acid. The 16,17-oxido-5-pregnen-3-ol-20-one (IIe) is then into the Ila-hydroxy derivative (XIe) by treatment with a culture of Rhizopus nigricans converted. XI e is exposed to a culture of Ophiobolus herbotrichus subjected to the formation of 16,17-oxido-5-pregnen-3, lla, 21-triol-20-one (XIIe). The epoxy ring is opened with H J, with 5-pregnen-3, 11a, 17a, 21-tetrol-20-one (XIII e) arises. A dehydrating one is formed from XIII e by the action of a culture Microorganism 11-epi-l-dehydrocortisol (Xe), which oxidizes to 1-dehydrocortisone can be.

16-Dehydro-pregnenolon kann auch zunächst mit einer Kultur von Ophiobolus herbotrichus behandelt werden unter Bildung von 5,16-Pregnadien-3,21-diol-20-on, das in an sich bekannter Weise zum 3,21-Diacetat acetyliert wird. Bei Behandlung mit einem dehydrierenden Mikroorganismus wird dieses Diacetat in 1,4,16-Pregnatrien-21-ol-3,20-dion umgewandelt, das, wie oben beschrieben, in das 16,17-Epoxyd übergeführt wird, das, wie ebenfalls oben beschrieben, durch Spaltung und Reduktion in 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion übergeführt werden kann. Letzteres kann durch Behandlung mit einer Kultur Curvularia lunata in 1-Dehydro-cortisol übergeführt werden.16-Dehydro-pregnenolone can also be started with a culture of Ophiobolus herbotrichus are treated with the formation of 5,16-pregnadien-3,21-diol-20-one, which is acetylated in a manner known per se to give 3,21-diacetate. With treatment with a dehydrating microorganism, this diacetate is converted into 1,4,16-pregnatrien-21-ol-3,20-dione converted, which, as described above, is converted into the 16,17-epoxy, which, as also described above, by cleavage and reduction in 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione can be transferred. The latter can be achieved by treating with a Curvularia culture lunata can be converted into 1-dehydro-cortisol.

An Stelle der Persäuren kann zur Bildung des Oxidoringes Wasserstoffperoxyd zusammen mit einer Alkalimetallbase (Na0 H; K 0 H) benutzt werden. Diese Mischung kann einen Alkohol, wie z. B. Methanol oder tert.-Butanol, enthalten, um die Lösung der Steroidkomponente zu unterstützen; aber ein solcher Alkohol ist im allgemeinen nicht unbedingt notwendig.In place of the peracids, hydrogen peroxide can be used to form the oxidizing ring can be used together with an alkali metal base (Na0 H; K 0 H). This mixture can use an alcohol such as B. methanol or tert-butanol, contained in the solution to assist the steroid component; but such alcohol is in general not absolutely necessary.

Zusätzliche Ausgangsprodukte sind 5,16-Pregnadien-3,11-diol-20-on und seine 3-Ester, 5,16-Pregnadien-3,21-diol-20-on und seine 3- und 21-Ester 5,16-Pregnadien-3,11,21-triol-20-on und seine 3- und 21-Ester und 4,16-Pregnadien-21-ol-3,11,20-trion und seine 21-Ester, die in beliebiger Reihenfolge der Einwirkung der Kultur eines dehydrierenden Mikroorganismus und der Behandlung mit einer Persäure oder mit Wasserstoffperoxyd unterworfen werden können. 24. A. 11-epi-l-Dehydro-cortisol (VII a) Entsprechend der in Journal of the American Chemical Society, Bd. 74 (1952), S. 5933, beschriebenen Verfahrensweise wird zu 61 einer 24-Stunden-Wachstumskultur von Rhizopus nigricans 1,0 g von 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S in 200 ml Äthanol gegeben. Nach 48stündiger Inkubation in der Anordnung und dem Medium, wie in der vorgenannten Veröffentlichung beschrieben, wird mit Methylenchlorid extrahiert und der rohe, kristalline, feste Rückstand dreimal mit 5 ml Anteilen von eiskaltem Chloroform gewaschen. Die Ausbeute an Verbindung VII a beträgt 0,9 g. Das Produkt wird aus Aceton-Hexan umkristallisiert.Additional starting products are 5,16-pregnadien-3,11-diol-20-one and its 3-esters, 5,16-pregnadien-3,21-diol-20-one and its 3- and 21-esters 5,16-pregnadien-3,11,21-triol-20-one and its 3- and 21-esters and 4,16-pregnadien-21-ol-3,11,20-trione and its 21-esters, those in any order of exposure to the culture of a dehydrating microorganism and subjected to treatment with a peracid or with hydrogen peroxide can. 24. A. 11-epi-l-dehydro-cortisol (VII a) According to the in Journal of the American Chemical Society, 74: 5933 (1952) becomes 1.0 g of 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S for a 24-hour growth culture of Rhizopus nigricans given in 200 ml of ethanol. After 48 hours of incubation in the assembly and the Medium, as described in the aforementioned publication, is with methylene chloride extracted and the crude, crystalline, solid residue three times with 5 ml portions washed by ice cold chloroform. The yield of compound VII a is 0.9 G. The product is recrystallized from acetone-hexane.

B. 1-Dehydro-cortison (II a) Einer Lösung von 0,4g VIIa in 10m1 wasserfreiem Pyridin wird 0,11 g Essigsäureanhydrid zugesetzt. Man läßt die Reaktionsmischung bei Zimmertemperatur über Nacht stehen und gibt sie dann in eine Mischung von 0,15 g Chromtrioxyd in 15 ml Pyridin (das Chromtrioxyd-Pyridin-Reagens wird nach P o o s und Mitarbeiter, Journal of the American Chemical Society, Bd. 75 [1953], S. 422) hergestellt. Man läßt die entstehende Mischung über Nacht bei Zimmertemperatur stehen und gießt sie dann in 5 Volumina Wasser. Das Produkt wird mit Methylenchlorid extrahiert und wie üblich aufgearbeitet. Die Kristallisation des 21-Acetats von Ha wird mit Aceton-Hexan durchgeführt und liefert 0,21 g feste Kristalle (IIb).B. 1-Dehydro-cortisone (II a) A solution of 0.4 g of VIIa in 10 ml of anhydrous 0.11 g acetic anhydride is added to pyridine. The reaction mixture is left stand at room temperature overnight and then add them to a mixture of 0.15 g of chromium trioxide in 15 ml of pyridine (the chromium trioxide-pyridine reagent is according to P o o s et al., Journal of the American Chemical Society, Vol. 75 [1953], pp. 422). The resulting mixture is left at room temperature overnight stand and then pour them into 5 volumes of water. The product is made with methylene chloride extracted and worked up as usual. The crystallization of the 21-acetate of Ha is carried out with acetone-hexane and gives 0.21 g of solid crystals (IIb).

Zu einer Lösung von 0,12 g des 21-Acetats von Ha in 3,3 ml Methanol wird 0,0315 g Kaliumhydrogencarbonat in 0,5 ml Wasser zugesetzt. Die Mischung wird 3 Minuten am Rückfluß behandelt und schnell abgekühlt. Sie wird dann mit Wasser verdünnt, mit verdünnter Salzsäure neutralisiert und mit Methylenchlorid extrahiert. Die Extrakte werden getrocknet und eingedampft. DerRückstand wird aus Aceton-Hexan kristallisiert und liefert 0,051 g 1-Dehydro-cortison (IIa). 25. A. 1-Dehydro-cortisol (III a) 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion (0,5 g) wird mit einer Kultur von Curvularia lunata (Identifizierung nach »United States Quartermaster Corps«, Philadelphia) behandelt, die in der folgenden Weise hergestellt wurde: Man läßt Curvularia lunata 2 Tage in Schüttelkolben bei 28°C auf einem Malz-Rohr-Zucker-Salze-Mediumwachsen. 100 ml dieser Kultur werden benutzt, um 2000 ml des gleichen Mediums, das in einem mit einem untergetauchten Belüfter versehenen Fermenter enthalten ist, zu beimpfen. Das geimpfte Medium wird bei 1700 Drehungen pro Minute gerührt und 22 Stunden bei 28°C belüftet mit 0,5 Volumen Luft pro Volumen Medium. 50 g des durch Filtration der so hergestellten Bouillon erhaltenen feuchten Myzels werden in 2000 ml Wasser mit dem vorgenannten Steroid in einen Fermenter gegeben. Nachdem die Myzel-Steroid-Suspension, wie oben beschrieben, 22 Stunden gerührt wurde, wird sie mit Chloroform extrahiert. Die Chloroformextrakte werden getrocknet, eingeengt und an »Florisil« (Magnesiumsilikat) chromatographiert. Die Florisilsäule wird mit Hexan beschickt, die Steroidmischung in Methylenchloridlösung zugegeben und die Elution mit Methylenchlorid und Methylenchlorid-Methanol-Mischungen durchgeführt. Nicht umgewandeltes Ausgangsprodukt wird mit 0,5 °/o Methanol enthaltendem Methylenchlorid eluiert und das erwünschte Produkt III a in 1 bis 2 °/o Methanol enthaltendem Methylenchlorid eluiert. Aus 0,5 g 1-Dehydro-Reichsteins-Substanz-S werden 0,17 g IIIa als kristalliner Körper erhalten; Fp. = 237 bis 239°C. B. 1-Dehydro-cortison (II a) Verbindung III a wird in Verbindung Ha analog der Umwandlung von VII a in Ha übergeführt. Aus 0,400 g III a werden 0,205 g II a erhalten. 26. 1-Dehydro-cortison (IIa) Eine Lösung von 1 g Uopregnan-17a,21-diol-3,11, 20-trion-21-acetat in 15 ml Essigsäure wird durch Zusatz von 0,80 g Brom in 10 ml Essigsäure bromiert. Durch Zusatz von Wasser fällt das 2,4-Dibrom-allopregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-acetat aus. Ohne Reinigung wird das Dibromid (1,5 g) in 50 ml Collidin 1 Stunde am Rückfluß behandelt. Chloroform und Wasser werden zugesetzt, der organische Extrakt mit verdünnter Schwefelsäure und dann mit Wasser gewaschen, getrocknet und eingedampft. Das Rohprodukt wird an nFlorisil« (Magnesiumsilikat) chromatographiert und ergibt 1-Dehydro-cortison-21-acetat (Ib, R = Acetyl); Fp. = 232 bis 235°C (Zersetzung).To a solution of 0.12 g of the 21-acetate of Ha in 3.3 ml of methanol 0.0315 g of potassium hydrogen carbonate in 0.5 ml of water is added. The mix will Refluxed for 3 minutes and rapidly cooled. She is then treated with water diluted, neutralized with dilute hydrochloric acid and extracted with methylene chloride. The extracts are dried and evaporated. The residue becomes from acetone-hexane crystallizes and gives 0.051 g of 1-dehydrocortisone (IIa). 25. A. 1-Dehydrocortisol (III a) 1,4-Pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione (0.5 g) is mixed with a culture of Curvularia lunata (identification according to "United States Quartermaster Corps", Philadelphia) treated, which was prepared in the following manner: Curvularia lunata Grow for 2 days in shake flasks at 28 ° C on a malt-cane-sugar-salts medium. 100 ml of this culture are used to make 2000 ml of the same medium that is in a fermenter equipped with a submerged aerator is included. The inoculated medium is stirred at 1700 revolutions per minute and for 22 hours at 28 ° C aerated with 0.5 volume of air per volume of medium. 50 g of the by filtration the moist mycelium obtained in this way is dissolved in 2000 ml of water put in a fermenter with the aforementioned steroid. After the mycelial steroid suspension, was stirred as described above for 22 hours, it is extracted with chloroform. The chloroform extracts are dried, concentrated and added to »Florisil« (magnesium silicate) chromatographed. The Florisil column is charged with hexane, the steroid mixture added in methylene chloride solution and the elution with methylene chloride and methylene chloride-methanol mixtures carried out. Unconverted starting product is mixed with 0.5% methanol containing Methylene chloride eluted and the desired product III a in 1 to 2% methanol containing methylene chloride eluted. From 0.5 g of 1-Dehydro-Reichsteins-Substance-S 0.17 g of IIIa are obtained as a crystalline body; Mp = 237-239 ° C. B. 1-dehydrocortisone (II a) Compound III a in compound Ha is analogous to the conversion of VII a into Ha convicted. From 0.400 g of III a, 0.205 g of II a are obtained. 26. 1-dehydrocortisone (IIa) A solution of 1 g uropregnan-17a, 21-diol-3,11, 20-trione-21-acetate in 15 ml Acetic acid is brominated by adding 0.80 g of bromine in 10 ml of acetic acid. By Addition of water precipitates the 2,4-dibromo-allopregnan-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21-acetate the end. Without purification, the dibromide (1.5 g) is refluxed in 50 ml of collidine for 1 hour treated. Chloroform and water are added, the organic extract with diluted sulfuric acid and then washed with water, dried and evaporated. The crude product is on nFlorisil «(magnesium silicate) is chromatographed and yields 1-dehydrocortisone-21-acetate (Ib, R = acetyl); Mp = 232 to 235 ° C (decomposition).

In gleicher Weise wird durch Bromierung von Pregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-acetat mit 2 Äquivalenten Brom und Dehydrobromierung mit Hilfe von Collidin das 1-Dehydro-cortison-21-acetat erhalten.In the same way, by bromination of pregnan-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21-acetate with 2 equivalents of bromine and dehydrobromination with the help of collidine 1-dehydro-cortisone-21-acetate obtain.

Durch 2,4-Bromierung von Allopregnan-llß,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat und anschließende Dehydrobromierung mit Collidin wird das 1-Dehydro-cortisol-21-acetat erhalten.By 2,4-bromination of allopregnan-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate and subsequent dehydrobromination with collidine produces 1-dehydro-cortisol-21-acetate obtain.

Analog liefert die Bromierung von Pregnan-11ß,17a, 21-triol-3,20-dion-21-acetat mit 2 Mol Brom und anschließende Dehydrobromierung mit Collidin das 1-Dehydro-cortisol-21-acetat.Analogously, the bromination of pregnane-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate gives 1-dehydro-cortisol-21-acetate with 2 moles of bromine and subsequent dehydrobromination with collidine.

Allopregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-acetat kann durch Hydrierung von 2,00 g Cortison-21-acetat in 200 ml Äthylacetat mit Wasserstoff bei Atmosphärendruck und Zimmertemperatur hergestellt werden, wobei 0,20 g von 5 °/o Palladium an Kohle als Katalysator benutzt werden. Man läßt die Reaktion über Nacht fortschreiten, entfernt den Katalysator durch Filtration und verdampft das Filtrat unter vermindertem Druck. Die Allopregnanverbindung wird aus Aceton umkristallisiert. Ebenso kann Allopregnan-llß,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat durch Hydrierung von 5,0 g Cortison-21-acetat in 750 ml Äthylacetat mit Wasserstoff in Gegenwart von 0,5 g 5°/oiger Palladiumkohle gewonnen werden.Allopregnan-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21-acetate can be produced by hydrogenation of 2.00 g of cortisone-21-acetate in 200 ml of ethyl acetate with hydrogen at atmospheric pressure and room temperature, with 0.20 g of 5% palladium on carbon be used as a catalyst. The reaction is allowed to proceed overnight, removed the catalyst by filtration and evaporated the filtrate under reduced pressure Pressure. The allopregnan compound is recrystallized from acetone. Allopregnan-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate can also be used by hydrogenation of 5.0 g of cortisone-21-acetate in 750 ml of ethyl acetate with hydrogen be obtained in the presence of 0.5 g of 5% palladium carbon.

II a 21-Acetat und III a-21-Acetat können durch Behandlung am Rückfluß mit Hydrogencarbonat in wäßrigem Methanol hydrolysiert werden unter Bildung der entsprechenden freien Alkohole. 27. 11-epi-l-Dehydro-cortisol-21-acetat Eine Lösung von 2,0 g Pregnan-lla,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat in 25 ml Essigsäure wird in den Stellungen 2 und 4 durch Anlagerung von 1,60 g Brom in 15 ml Essigsäure bromiert. Das rohe 2,4-Dibrompregnanlla,17a,21-triol-3,20-dion 21-acetat wird durch Zusatz von Wasser gefällt. Die 1stündige Dehydrobromierung mit 100 ml Collidin ergibt nach Chromatographie 11-epi-1-Dehydro-cortisol-21-acetat (VIIb). Die Hydrolyse mit Kaliumhydrogencarbonat in wäßrigem Methanol durch 10 Minuten lange Behandlung am Rückfluß ergibt 11-epi-1-Dehydro-cortisol (VIIa). Die Oxydation des Acetats mit Cr03, N-Bromacetamid oder N-Bromsuccinimid ergibt I I b. 28. A. 4-Pregnen-2,17a,21-triol-3,11,20-trion-2,21-diacetat (IIh) Eine Lösung von 2,0 g 6-Brom-4-pregnen-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-acetat in 100 ml Eisessig wird unter Rückfluß in einer Stickstoffatmosphäre mit 10 g wasserfreiem Kaliumacetat 4 Stunden erhitzt. Die Reaktionsmischung wird dann mit Wasser verdünnt und mit Äthylacetat extrahiert. Die Extrakte werden getrocknet, im Vakuum eingeengt und der Rückstand in einem kleinen Volumen von Methylenchlorid aufgenommen. Die entstehende Lösung wird an 2#Florisil" (Magnesiumsilikat) chromatographiert und das feste Material, das mit 50°/oigem Äther-Hexan eluiert wird, mehrere Male aus Aceton-Hexan umkristallisiert. Man erhält 4-Pregnen-2,17a,21-triol-3,11,20-trion-2,21-diacetat; Fp. = 210 bis 215°C. @,nax = 238 (s = 14,700). (Alkohol.) B. 4-Pregnen-2,17a,21-triol-3,11,20-trion (IIIh) Zu einer Lösung von 1,0 g IIh in 100 ml Methanol werden unter Stickstoff 0,45 g Kaliumhydrogencarbonat, in 10 ml Wasser gelöst, bei Kochen am Rückfluß zugesetzt. Die Mischung wird 3 bis 5 Minuten am Rückflu13 gekocht und der pH-Wert auf 6,8 bis 7,0 durch Zusatz von Essigsäure eingestellt. Die entstehende Mischung wird dann im Vakuum bis auf einen festen Rückstand eingeengt, der Rückstand mit Äthylacetat extrahiert, und die Extrakte werden konzentriert. Die Rückstände werden aus Aceton-Hexan kristallisiert und liefern 4-Pregnen-2,17a,21-triol-3,11,20-trion. 29. A. 6-Brom-cortisol-11-formiat-21-acetat (IVh) Zu 160 ml Chlorbenzol werden 1,6 g 4-Pregnen-11ß,17a,21-triol-3,20-dion-11-formiat-21-acetat zugesetzt und die Mischung bis zur vollständigen Lösung des Steroids erwärmt. Hierauf werden 180 ml trockner Tetra-Chlorkohlenstoff zugesetzt und die Mischung gekocht, um das Wasser zu entfernen. Dann werden 4,2 ml einer 10°/jgen Lösung von Pyridin in Tetrachlorkohlenstoff und 0,79 g N-Bromsuccinimid zugesetzt, Kohlendioxyd durch die Mischung geleitet, wobei die Mischung mit einer 50-Watt-Glühbirne mit mattierter Oberfläche, die vor den Kolben gebracht wird, erleuchtet wird, und die Reaktionsmischung schnell zum Sieden erhitzt. Nach 10 bis 20 Minuten Erhitzen hat sich das N-Bromsuccinimid vollständig umgesetzt. Die Lösung wird abgekühlt, mit Wasser gewaschen und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand kann aus Methylenchlorid-Hexan kristallisiert werden, wobei die kristalline Verbindung IVh erhalten wird. B. 4-Pregnen-2,11ß,17a,21-tetrol-3,20-dion-11-formiat-2,21-diacetat Die Reaktion wird, wie im Beispiel 28 beschrieben, durchgeführt. Ausgangssteroid ist IVh. Das obengenannte Produkt wird über »Florisil« (Magnesiumsilikat) chromatographiert, und die Kristallfraktionen (501/, Äther-Hexan und 100 °/o Äther) werden gesammelt und aus Aceton-Hexan umkristallisiert. C. 4-Pregnen-2,11ß,17a,21-tetrol-3,20-dion (VIh) Eine Lösung von 0,5 g des Triesters in 50 ml Methanol wird mit einer Lösung von 0,165 g Natriumhydroxyd in 5 ml Wasser unter einer Argonatmosphäre behandelt. Man läßt die Reaktionsmischung bei Zimmertemperatur über Nacht stehen und neutralisiert sie dann mit Essigsäure. Die Lösung wird im Vakuum konzentriert und der Rückstand vollständig mit Äthylacetat extrahiert. Die Extrakte werden eingeengt und der Rückstand aus Aceton-Hexan kristallisiert, wobei kristallines 4-Pregnen-2,llß,17a,21-tetrol-3,20-dion (VIh) entsteht. 30. A. 1,2-Oxidopregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-acetat (IIi) Zu einer Lösung von 0,4g 1-Pregnen-17a,21-diol-3,11,20-trio_n=21-äcetat (Ii) in 100 ml Chloroform werden bei 5'£ 0,14 g Benzopersäure in 25 ml Chloroform zugesetzt. Man läßt die Mischung bei 5'C über Nacht stehen und wäscht sie dann mit verdünntem, wäßrigem Natriumhydrogencarbonat. Die Chloroformlösung wird getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird aus Aceton-Hexan kristallisiert und liefert die kristalline Verbindung IIi.II a 21-acetate and III a-21-acetate can be treated under reflux hydrolyzed with hydrogen carbonate in aqueous methanol to form the corresponding free alcohols. 27. 11-epi-1-dehydro-cortisol-21-acetate A solution of 2.0 g of Pregnan-IIIa, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate in 25 ml of acetic acid brominated in positions 2 and 4 by the addition of 1.60 g of bromine in 15 ml of acetic acid. The crude 2,4-Dibrompregnanlla, 17a, 21-triol-3,20-dione 21-acetate is made by adding felled by water. Dehydrobromination for 1 hour with 100 ml of collidine yields Chromatography 11-epi-1-dehydro-cortisol-21-acetate (VIIb). The hydrolysis with potassium hydrogen carbonate in aqueous methanol by refluxing for 10 minutes gives 11-epi-1-dehydrocortisol (VIIa). The oxidation of the acetate with Cr03, N-bromoacetamide or N-bromosuccinimide results in I I b. 28. A. 4-Pregnen-2,17a, 21-triol-3,11,20-trione-2,21-diacetate (IIh) A solution of 2.0 g of 6-bromo-4-pregnen-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21-acetate in 100 ml of glacial acetic acid is refluxed in a nitrogen atmosphere with 10 g of anhydrous Potassium acetate heated for 4 hours. The reaction mixture is then diluted with water and extracted with ethyl acetate. The extracts are dried and concentrated in vacuo and the residue taken up in a small volume of methylene chloride. the The resulting solution is chromatographed on 2 # Florisil "(magnesium silicate) and the solid material, which is eluted with 50% ether-hexane, several times Recrystallized acetone-hexane. 4-Pregnen-2,17a, 21-triol-3,11,20-trione-2,21-diacetate is obtained; Mp = 210 to 215 ° C. @, nax = 238 (s = 14,700). (Alcohol.) B. 4-Pregnen-2,17a, 21-triol-3,11,20-trione (IIIh) To a solution of 1.0 g of IIh in 100 ml of methanol are added under nitrogen 0.45 g of potassium hydrogen carbonate, dissolved in 10 ml of water, added while refluxing. The mixture is refluxed for 3 to 5 minutes and the pH to 6.8 to 7.0 adjusted by adding acetic acid. The resulting mixture is then concentrated in vacuo to a solid residue, the residue with ethyl acetate extracted, and the extracts are concentrated. The residues are made from acetone-hexane crystallizes and gives 4-pregnen-2,17a, 21-triol-3,11,20-trione. 29. A. 6-Bromo-cortisol-11-formate-21-acetate (IVh) 1.6 g of 4-pregnen-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-11-formate-21-acetate are added to 160 ml of chlorobenzene added and the mixture heated until the steroid is completely dissolved. On that 180 ml of dry carbon tetra is added and the mixture is boiled, to remove the water. Then 4.2 ml of a 10% solution of pyridine in carbon tetrachloride and 0.79 g of N-bromosuccinimide added, carbon dioxide through Passed the mixture, using a 50 watt lightbulb with a frosted finish Surface, which is brought in front of the flask, is illuminated, and the reaction mixture quickly heated to the boil. After 10 to 20 minutes of heating, the N-bromosuccinimide has become fully implemented. The solution is cooled, washed with water and in vacuo concentrated. The residue can be crystallized from methylene chloride-hexane, whereby the crystalline compound IVh is obtained. B. 4-pregnen-2,11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-11-formate-2,21-diacetate The reaction is carried out as described in Example 28. Starting steroid is IVh. The above product is chromatographed over »Florisil« (magnesium silicate), and the crystal fractions (50/1, ether-hexane and 100% ether) are collected and recrystallized from acetone-hexane. C. 4-pregnen-2,11β, 17a, 21-tetrol-3,20-dione (VIh) A solution of 0.5 g of the Trieste in 50 ml of methanol is combined with a solution treated of 0.165 g of sodium hydroxide in 5 ml of water under an argon atmosphere. The reaction mixture is left to stand at room temperature overnight and neutralized then with acetic acid. The solution is concentrated in vacuo and the residue extracted completely with ethyl acetate. The extracts are concentrated and the residue crystallized from acetone-hexane, with crystalline 4-pregnen-2, 11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione (VIh) arises. 30. A. 1,2-Oxidopregnan-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21-acetate (IIi) To a solution of 0.4 g of 1-pregnen-17a, 21-diol-3,11,20-trio_n = 21-acetate (Ii) in 0.14 g of benzoperic acid in 25 ml of chloroform are added to 100 ml of chloroform at 5%. The mixture is left to stand at 5'C overnight and then washed with diluted, aqueous sodium hydrogen carbonate. The chloroform solution is dried and in vacuo constricted. The residue is crystallized from acetone-hexane and gives the crystalline Compound IIi.

B. 2-Brompregnan-17a,21-triol-3,11,20-trion-21-acetat (IIIi) Zu einer Lösung von 0,42 g IIi in 100 ml Chloroform bei 5'C werden 0,08g wasserfreier Bromwasserstoff, in 100m1 Chloroform gelöst, zugesetzt. Man läßt die Mischung bei 5'C 1 Stunde stehen und engt sie dann im Vakuum ein. Der Rückstand wird aus Methylenchlorid-Hexan kristallisiert und ergibt das kristalline Produkt IIIi.B. 2-bromopregnane-17a, 21-triol-3,11,20-trione-21-acetate (IIIi) to a Solution of 0.42 g of IIi in 100 ml of chloroform at 5'C are 0.08 g of anhydrous hydrogen bromide, dissolved in 100 ml of chloroform, added. You let them Mixture at Stand 5'C for 1 hour and then concentrate them in a vacuum. The residue is made from methylene chloride-hexane crystallizes and gives the crystalline product IIIi.

C. Pregnan-1,17a,21-triol-3,11,20-trion-21-acetat (IVi) Eine Lösung von 1 g IIIi in 100 ml Methanol wird mit 10 g 100/jgem Palladium-Calciumcarbonat-Katalysator in einer Wasserstoffatmosphäre bei Normaldruck geschüttelt. Nach Aufnahme eines Äquivalents Wasserstoff (nach mehrstündigem Schütteln) wird vom Katalysator abfiltriert und das Filtrat im Vakuum bis auf einen festen Rückstand (IVi) eingeengt.C. Pregnan-1,17a, 21-triol-3,11,20-trione-21-acetate (IVi) A solution 1 g of IIIi in 100 ml of methanol is mixed with 10 g of 100 / jgem palladium-calcium carbonate catalyst shaken in a hydrogen atmosphere at normal pressure. After recording a Equivalents of hydrogen (after several hours of shaking) are filtered off from the catalyst and the filtrate was concentrated in vacuo to a solid residue (IVi).

D. Pregnan-1,17a,21-triol-3,11,20-trion-1,21-diacetat(Vi) Das Rohprodukt IVi wird in einer Mischung von 0,5 mI Essigsäureanhy drid und 5 ml Pyridin gelöst. Man läßt die Reaktion über Nacht fortschreiten und verdünnt die Lösung mit Eiswasser. Die entstehende Fällung wird filtriert und aus Methylenchlorid-Hexan umkristallisiert und liefert kristallines Pregnan-1,17a,21-triol-3,11,20-trion-1,21-diacetat (Vi).D. Pregnan-1,17a, 21-triol-3,11,20-trione-1,21-diacetate (Vi) The crude product IVi is dissolved in a mixture of 0.5 ml acetic anhydride and 5 ml pyridine. The reaction is allowed to proceed overnight and the solution is diluted with ice water. The resulting precipitate is filtered and recrystallized from methylene chloride-hexane and yields crystalline pregnane-1,17a, 21-triol-3,11,20-trione-1,21-diacetate (Vi).

E. 4-Brompregnan-1,17a,21-triol-3,11,20-trion-1,21-diacetat (VIi) Zu einer Lösung von 0,46 g Vi in 50 ml Eisessig wird 0,5m1 von 0,28 n-Bromwasserstoff in Essigsäure zugegeben. Dann wird unter guter Rührung eine Lösung von 0,16 g Brom, 0,08g Natriumacetat und 15 ml Eisessig in solcher Geschwindigkeit tropfenweise zugesetzt, daß jeder Tropfen die Möglichkeit hat, zu reagieren, ehe einweiterer zugesetzt wird. Nach vollständigem Zusatz wird die Reaktionsmischung mit 5 Volumina Wasser verdünnt und die gefällte Verbindung VIi durch Filtration gesammelt.E. 4-bromopregnane-1,17a, 21-triol-3,11,20-trione-1,21-diacetate (VIi) To a solution of 0.46 g Vi in 50 ml glacial acetic acid, 0.5 ml of 0.28 n-hydrogen bromide is added added in acetic acid. Then a solution of 0.16 g of bromine, 0.08 g of sodium acetate and 15 ml of glacial acetic acid are added dropwise at such a rate that that every drop has the opportunity to react before another is added. When the addition is complete, the reaction mixture is diluted with 5 volumes of water and the precipitated compound VIi was collected by filtration.

F. 4-Pregnen-1,17a,21-triol-3,11,20-trion-1,21-diacetat (VIIi) Einer Lösung von 0,54 g VIi in 50 ml Eisessig wird unter einer C02 Atmosphäre eine Lösung aus 0,25 g Semicarbazid-hydrochlorid, 180 mg wasserfreiem Natriumacetat, 10 ml Wasser und 10 ml Eisessig zugesetzt. Die Mischung wird 10 Minuten gerührt, dann werden 20 ml einer 1 n-Natriumacetat-Eisessig-Lösung zugesetzt. Das Rühren wird weitere 10 Minuten fortgesetzt, 2 ml Brenztraubensäure zugesetzt und die Mischung 10 Minuten am Rückfluß gekocht. Die abgekühlte Lösung wird mitWasser verdünnt, mit Methylenchlorid extrahiert, die Extrakte werden mit Wasser neutral gewaschen und die Lösung über Magnesiumsulfat getrocknet. Beim Einengen der trocknen Lösung und nach Zusatz von Hexan kristallisiert VIIi.F. 4-Pregnen-1,17a, 21-triol-3,11,20-trione-1,21-diacetate (VIIi) one A solution of 0.54 g VIi in 50 ml glacial acetic acid becomes a solution under a CO 2 atmosphere from 0.25 g of semicarbazide hydrochloride, 180 mg of anhydrous sodium acetate, 10 ml of water and added 10 ml of glacial acetic acid. The mixture is stirred for 10 minutes, then be 20 ml of a 1 N sodium acetate-glacial acetic acid solution were added. The stirring will continue Continued for 10 minutes, added 2 ml of pyruvic acid and the mixture for 10 minutes refluxed. The cooled solution is diluted with water, with methylene chloride extracted, the extracts are washed neutral with water and the solution over Dried magnesium sulfate. When concentrating the dry solution and after adding Hexane crystallizes VIIi.

Pregnan-1,17a,21-triol-3,11,20-trion-21-acetat kann bromiert und dehydrobromiert werden durch das Verfahren nach den Beispielen 30, E und F unter Bildung von kristallinem 4-Pregnen-1,17a,21-triol-3,11,20-trion-21-acetat.Pregnan-1,17a, 21-triol-3,11,20-trione-21-acetate can be brominated and dehydrobrominated are by the procedure of Examples 30, E and F to produce crystalline 4-pregnen-1,17a, 21-triol-3,11,20-trione-21-acetate.

31. Umwandlung von 1-Pregnen-11ß,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat in 4-Pregnen-1,11ß,17a,21-tetrol-3,20-dion-1,21-diacetat Wie in den Beispielen 30, A bis F wird 1-Pregnen-11ß,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat über 1,2-Oxido-pregnan-llß,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat, 2-Brompregnan-1,llß,17a,21-tetrol-3,20-dion-21-acetat, Pregnan-1,11ß, 17a,21-tetrol-3,20-dion-21-acetat, Pregnan-1,11ß,17a,21-tetrol-3,20-dion-1,21-diacetat und 4-Brompregnan-1,llß, 17a,21-tetrol-3,20-dion-1,21-diacetat in 4-Pregnen-1,11ß, 17a,21-tetrol-3,20-dion-1,21-diacetat umgewandelt. Ebenso kann Pregnan-1,11ß,17a,21-tetrol-3,20-dion-21-acetat bromiert und dehydrobromiert werden unter Bildung von 4-Pregnen-1,11ß,17a,21-tetrol-3,20-dion-21-acetat.31. Conversion of 1-pregnen-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate in 4-Pregnen-1,11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-1,21-diacetate As in Examples 30, A to F becomes 1-pregnen-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate over 1,2-oxido-pregnan-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21- acetate, 2-bromopregnan-1, llß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-21-acetate, pregnan-1,11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-21-acetate, Pregnan-1,11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-1,21-diacetate and 4-bromopregnan-1, 11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-1,21-diacetate converted to 4-pregnene-1,11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-1,21-diacetate. Likewise can Pregnan-1,11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-21-acetate can be brominated and dehydrobrominated with formation of 4-pregnene-1,11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-21-acetate.

32. Entfernung der 1-Hydroxylgruppemit Aluminiumoxyd A.EineLösungvon0,1 g4-Pregnen-1,11ß,17a,21-tetrol-3,20-dion-21-acetat in 100 ml Chloroform wird über eine aktivierte Aluminiumoxydsäule (30 g von 100 bis 200 Maschen) geleitet und die Säule dann mit Methanol gewaschen. Die vereinigten Eluate werden eingeengt. Der Rückstand, der aus Aceton kristallisiert, besteht aus 1-Dehydro-cortisol-21-acetat.32. Removal of the 1-hydroxyl group with alumina A. A solution of 0.1 g4-Pregnen-1,11ß, 17a, 21-tetrol-3,20-dione-21-acetate in 100 ml of chloroform is over an activated alumina column (30 g of 100 to 200 mesh) passed and the Column then washed with methanol. The combined eluates are concentrated. Of the The residue, which crystallizes from acetone, consists of 1-dehydro-cortisol-21-acetate.

B. Eine Lösung von 0,1 g 4-Pregnen-1,17a;21-triol-3,11,20-trion-21-acetat in 100 ml Chloroform wird in gleicher Weise über eine aktivierte Aluminiumoxydsäule (30 g von 100 bis 200 Maschen) geleitet und die Säule dann mit Methanol ausgewaschen. Die vereinigten Eluate werden eingeengt und der Rückstand aus Aceton kristallisiert. Das erhaltene Produkt ist 1-Dehydrocortison-21-acetat.B. A solution of 0.1 g of 4-pregnen-1,17a; 21-triol-3,11,20-trione-21-acetate in 100 ml of chloroform is in the same way over an activated aluminum oxide column (30 g of 100 to 200 mesh) and then washed the column with methanol. The combined eluates are concentrated and the residue is crystallized from acetone. The product obtained is 1-dehydrocortisone-21-acetate.

33. 1,4,9 (11)-Pregnatrien-17a,21-diol-3,20-dion-21-acetat (IIj) 1-Dehydro-cortisol (III a) wird mit Essigsäure in Pyridin acetyliert. Zu 1,22 g 1-Dehydro-cortisol-21-acetat, gelöst in Pyridin und mit Eis gekühlt, werden 0,30 ml Phosphoroxychlorid gegeben und die Reaktionsmischung über Nacht bei Zimmertemperatur stehengelassen. Danach wird die Lösung im Vakuum bei 25'C auf ein Volumen von 5 ml konzentriert und 50 ml Wasser zugesetzt. Das sich abscheidende 0I wird in Äthylacetat aufgenommen, und die Extrakte werden einmal mit Wasser, dann mit 1 n-Salzsäure von Pyridin freigewaschen und anschließend erneut mit Wasser und dann mit 5°/oiger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Die Äthylacetatlösung wird getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird mit Äther verrieben, wobei 1,4,9 (11)-Pregnatrien-17a,21-diol-3,20-dion-21-acetat auskristallisiert. 34. 9a-Fluor-l-dehydro-cortisol 11-epi-l-Dehydro-cortisol (VIIa) wird in 21-Stellung acetyliert. Zu einer Lösung von 1,0 g des Acetats in 15 ml wasserfreiem Pyridin bei 0°C wird 1,0 g p-Toluolsulfochlorid zugesetzt und die Reaktionsmischung über Nacht bei Zimmertemperatur stehengelassen. Sie wird dann mit Eiswasser verdünnt, und die entstehende Fällung des 1la-p-Toluolsulfonat-21-acetats (Ij) wird aus der Lösung abfiltriert.33. 1,4,9 (11) -Pregnatriene-17a, 21-diol-3,20-dione-21-acetate (IIj) 1-dehydrocortisol (III a) is acetylated with acetic acid in pyridine. To 1.22 g of 1-dehydro-cortisol-21-acetate, dissolved in pyridine and cooled with ice, 0.30 ml of phosphorus oxychloride are added and the reaction mixture was allowed to stand overnight at room temperature. Thereafter the solution is concentrated in vacuo at 25'C to a volume of 5 ml and 50 ml of water added. The OI which separates out is taken up in ethyl acetate, and the extracts are washed to remove pyridine once with water and then with 1N hydrochloric acid and then again with water and then with 5% sodium hydrogen carbonate solution washed. The ethyl acetate solution is dried and concentrated in vacuo. Of the The residue is triturated with ether, 1,4,9 (11) -Pregnatriene-17a, 21-diol-3,20-dione-21-acetate crystallized out. 34.9a-fluoro-l-dehydro-cortisol 11-epi-l-dehydro-cortisol (VIIa) is acetylated in the 21-position. To a solution of 1.0 g of the acetate in 15 ml of anhydrous 1.0 g of p-toluenesulfonyl chloride is added to pyridine at 0 ° C. and the reaction mixture is added left overnight at room temperature. It is then diluted with ice water, and the resulting precipitation of 1la-p-toluenesulfonate-21-acetate (Ij) is from the Solution filtered off.

Eine Lösung von 1,0 g Ij in 25 ml Essigsäure, die 2,0 g Natriumacetat enthält, wird 45 Minuten am Rückfluß behandelt. Die entstehende Lösung wird im Vakuum eingeengt und der Rückstand mit Methylenchlorid aufgenommen. Der Methylenchloridextraktwird mit Wasser essigsäure frei gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Die trockene Lösung wird eingeengt und der Rückstand mit Äther verrieben. Das Produkt (IIj ) wird aus Aceton-Hexan kristallisiert.A solution of 1.0 g of Ij in 25 ml of acetic acid containing 2.0 g of sodium acetate contains is refluxed for 45 minutes. The resulting solution is in vacuo concentrated and the residue taken up with methylene chloride. The methylene chloride extract is washed free of acetic acid with water and dried over anhydrous magnesium sulfate. The dry solution is concentrated and the residue is triturated with ether. The product (IIj) is crystallized from acetone-hexane.

Zu einer Suspension von 2,0 g feinverteiltem II j in 200 ml gereinigtem Dioxan und 20 ml Wasser wird 1,0 g N-Bromacetamid und 10 ml wäßrige 1 n-Perchlorsäure zugesetzt. Die Mischung wird gelegentlich gerührt, bis der suspendierte Festkörper in Lösung gegangen ist. Nach einer Stunde wird wäßriges Natriumsulfit zugesetzt, um den Überschuß an N-Bromacetamid zu zersetzen. Die entstehende Lösung wird mit Methylenchlorid extrahiert und der Extrakt mit Wasser säurefrei gewaschen. Nach Trocknung über Magnesiumsulfat wird die Lösung im Vakuum eingeengt und der Rückstand aus Aceton umkristallisiert. Man erhält 9a-Brom-l-dehydro-cortisol-21-acetat in kristalliner Form.To a suspension of 2.0 g of finely divided II j in 200 ml of purified Dioxane and 20 ml of water becomes 1.0 g of N-bromoacetamide and 10 ml of aqueous 1N-perchloric acid added. The mixture is stirred occasionally until the solid is suspended has gone into solution. After one hour, aqueous sodium sulfite is added, to decompose the excess of N-bromoacetamide. The resulting solution is with Extracted methylene chloride and the extract washed acid-free with water. To Drying over magnesium sulfate, the solution is concentrated in vacuo and the residue recrystallized from acetone. 9a-Bromo-1-dehydro-cortisol-21-acetate is obtained in crystalline form.

Eine Lösung von 1,0 g der 9a-Bromverbindung in 100 ml Methanol, die 2 g wasserfreies Kaliumacetat enthält, wird 1 Stunde am Rückfluß behandelt und dann bis auf einen Rückstand eingeengt. Der Festkörper wird vollständig mit Methylenchlorid extrahiert und die Extrakte gut mit Wasser gewaschen. Nach Trocknung werden die Extrakte konzentriert und aus Aceton-Hexan kristallisiert. Man erhält 9,11-Oxido-1,4-pregnadien-17a,21-diol-3,20-dion-21-acetat.A solution of 1.0 g of the 9a-bromine compound in 100 ml of methanol, the Contains 2 g of anhydrous potassium acetate, is refluxed for 1 hour and then concentrated to a residue. The solid becomes completely with methylene chloride extracted and the extracts washed well with water. After drying, the Concentrated extracts and crystallized from acetone-hexane. 9,11-oxido-1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,20-dione-21-acetate is obtained.

Eine Lösung von 1,0 g der Oxidoverbindung in 50 ml Chloroform wird mit wasserfreiem Fluorwasserstoff bei 0°C gesättigt. Man hält die Lösung 5 Stunden bei dieser Temperatur, entfernt den Überschuß an H F und Lösungsmittel im Vakuum bei 0° C, kristallisiert den Rückstand aus Aceton-Hexan und erhält kristallines 9a-Fluor-1-dehydro-cortisol-21-acetat. Letzteres wird in Methanol-Chloroform mit wäßriger Salzsäure bei 20 bis 25°C während etwa 48 Stunden hydrolysiert und liefert 9a-Fluor-l-dehydro-cortisol, das aus Aceton-Hexan umkristallisiert wird.A solution of 1.0 g of the oxido compound in 50 ml of chloroform becomes saturated with anhydrous hydrogen fluoride at 0 ° C. The solution is kept for 5 hours at this temperature, removed the excess of H F and solvent in vacuo at 0 ° C, the residue crystallized from acetone-hexane and obtained crystalline 9a-fluoro-1-dehydro-cortisol-21-acetate. The latter is made with methanol-chloroform aqueous hydrochloric acid hydrolyzed at 20 to 25 ° C for about 48 hours and gives 9a-fluoro-1-dehydro-cortisol, which is recrystallized from acetone-hexane.

9a-Fluor-l-dehydro-cortisol-21-acetatkann zu 9a-Fluor-1-dehydro-cortison-21-acetat oxydiert werden, indem man tropfenweise eine Lösung von 30 mg Chromtrioxyd in 0,5 ml Wasser und 2 ml Eisessig zu einer Lösung von 162 mg 9a-Fluor-l-dehydro-cortisol-21-acetat in 10m1 Eisessig zusetzt. Nach 6 Stunden wird die grüne Lösung mit 2 ml Methanol verdünnt und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird mit Methylenchlorid extrahiert, und die Extrakte werden über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Beim Einengen der trockenen Lösung entsteht kristallines 9a-Fluor-l-dehy dro-cortison-21-acetat, das leicht zum freien 9a-Fluor-l-dehydro-cortison hydrolysiert werden kann (IV, Z = F). 35. 9a-Chlor-l-dehydro-cortisol Eine Lösung von 1,0 g 9,11-Oxido-1,4-pregnadiea-17a, 21-diol-3,20-dion-21-acetat in 50 ml alkoholfreiem Chloroform wird mit wasserfreier Salzsäure bei 0°C gesättigt. Nachdem man die Lösung 5 Stunden bei dieser Temperatur gehalten hat, wird der überschüssige Chlorwasserstoff und das Lösungsmittel im Vakuum bei 0°C entfernt und der Rückstand aus Aceton-Hexan kristallisiert, wobei kristallines 9a-Chlor-l-dehydro-cortisol-21-acetat entsteht. Letzteres wird hydrolysiert und ergibt die freie 21-OH-Verbindung.9a-fluoro-1-dehydro-cortisol-21-acetate can be converted to 9a-fluoro-1-dehydro-cortisone-21-acetate be oxidized by adding dropwise a solution of 30 mg of chromium trioxide in 0.5 ml of water and 2 ml of glacial acetic acid to a solution of 162 mg of 9a-fluoro-1-dehydro-cortisol-21-acetate in 10m1 glacial acetic acid added. After 6 hours the green solution is mixed with 2 ml of methanol diluted and concentrated in vacuo. The residue is extracted with methylene chloride, and the extracts are dried over anhydrous magnesium sulfate. When constricting the dry solution produces crystalline 9a-fluoro-l-dehydro-cortisone-21-acetate, which can easily be hydrolyzed to the free 9a-fluoro-l-dehydrocortisone (IV, Z = F). 35.9a-chloro-l-dehydro-cortisol A solution of 1.0 g of 9,11-oxido-1,4-pregnadiea-17a, 21-diol-3,20-dione-21-acetate in 50 ml of alcohol-free chloroform is mixed with anhydrous Hydrochloric acid saturated at 0 ° C. After keeping the solution at this temperature for 5 hours Has held, the excess hydrogen chloride and the solvent in vacuo removed at 0 ° C and the residue crystallized from acetone-hexane, with crystalline 9a-chloro-l-dehydro-cortisol-21-acetate is formed. The latter is hydrolyzed and gives the free 21-OH compound.

Durch Oxydation des 21-Acetats, wie im Beispiel34 beschrieben, wird das 21-Acetat von 9a-Chlor-l-dehydrocortison erhalten, das dann zur freien 21 -GH-Verbindung hydrolysiert werden kann.By oxidation of the 21-acetate, as described in Example 34, is the 21-acetate obtained from 9a-chloro-l-dehydrocortisone, which then becomes the free 21 -GH compound can be hydrolyzed.

Der Ester der nach Beispiel 33 hergestellten Verbindung kann durch Behandlung einer Mischung von 1,0 g des Esters in 10 ml Methanol unter Stickstoff und Zusatz von 0,22 g Natriumhydrogencarbonat in 1 ml Wasser am Rückfluß hydrolysiert werden. Die Behandlung am Rückfluß wird 10 Minuten fortgesetzt und dann die Reaktionsmischung mit Essigsäure neutralisiert. Die Lösungsmittel werden im Vakuum entfernt, der Rückstand mit Methylenchlorid extrahiert und die Kristallisation des freien 21 -Alkohols durch Zusatz von Hexan zu der konzentrierten Methylenchloridlösung eingeleitet.The ester of the compound prepared according to Example 33 can be hydrolyzed by refluxing a mixture of 1.0 g of the ester in 10 ml of methanol and adding 0.22 g of sodium hydrogen carbonate in 1 ml of water. The reflux treatment is continued for 10 minutes and then the reaction mixture is neutralized with acetic acid. The solvents are removed in vacuo, the residue is extracted with methylene chloride and the crystallization of the free 21-alcohol is initiated by adding hexane to the concentrated methylene chloride solution.

36. 1-Dehydro-cortisol-21-(5'-tert.-butylfuroat) 1 g 1-Dehydro-cortisol wird in 10 ml Pyridin gelöst, eisgekühlt und mit 0,6g 5-tert.-Butylfuroylchlorid behandelt. Nach Rühren über Nacht wird die Mischung in verdünnte Schwefelsäure eingegossen und der Festkörper mit Äther extrahiert. Das Rohprodukt wird aus einer Benzol-Methanol-Mischung kristallisiert und ergibt das reine Produkt, das unter Zersetzung bei etwa 237 bis 239°C schmilzt.36. 1-dehydro-cortisol-21- (5'-tert-butyl furoate) 1 g of 1-dehydro-cortisol is dissolved in 10 ml of pyridine, ice-cooled and washed with 0.6 g of 5-tert-butylfuroyl chloride treated. After stirring overnight, the mixture is poured into dilute sulfuric acid and the solid extracted with ether. The crude product is made from a benzene-methanol mixture crystallizes and gives the pure product, which decomposes at about 237 to Melts 239 ° C.

37. A. Pregnan-3a,17a,21-triol-11,20-dion-21-(2',4'-dichlorophenoxyacetat) 100g Pregnan-3a-17a-diol-11,20-dion werden in 1 1 Chloroform, das 10/, Äthanol enthält, gelöst und die Mischung auf 10°C gekühlt und mit 12 g gasförmigem Bromwasserstoff behandelt. Nach Abkühlung auf -20° C und bei einer Temperatur von unterhalb -10°C wird die Mischung mit einer Lösung von 48 g Brom in 650 ml Chloroform innerhalb von 3 Stunden behandelt. Die Reaktionsmischung wird dann auf 250 ml im Vakuum unterhalb von 25°C konzentriert. Zu der Lösung werden 800 ml Aceton zugesetzt sowie anschließend 200 g Kalium-2,4-dichlorophenoxyacetat (erhalten durch Vakuumverdampfung einer Methanollösung von 2,4-Dichlorophenoxyessigsäure, neutralisiert mit Kaliumcarbonat). Die Mischung wird mit 200 ml Wasser versetzt und 16 Stunden am Rückfluß erwärmt. Das Lösungsmittel wird dann durch Dampfdestillation nach Zusatz von 500 ml Wasser entfernt und die Mischung 30 Minuten auf 100°C erhitzt. Das Produkt wird durch Filtration gesammelt, dreimal mit heißem Wasser gewaschen und aus wäßrigem Methanol umkristallisiert. Man erhält Pregnan-3a,17a,21- triol -11,20 - dion -21- (2',4'- dichlorophenoxyacetat). B. Pregnan-17a,21-diol-3,11-20-trion-21-(2',4'-dichlorophenoxyacetat) Der rohe, feuchte, nach Beispiel 37, A erhaltene Rückstand wird in 1170 ml Aceton und 100 ml Wasser gelöst. Die Lösung wird auf -5°C gekühlt und der pH-Wert auf 2,4 mit 6 n-Salzsäure (0,2 bis 1,0 ml) eingestellt. Unter Lichtabschluß werden 89,8g N-Bromsuccinimid zugesetzt und die Mischung 1 Stunde lang bei -5°C gehalten. Zu der roten Lösung wird so viel Natriumsulfitlösung zugesetzt (123 g Natriumsulfit in 670 ml Wasser), bis der pH-Wert auf 4,5 bis 5,0 gestiegen ist. Anschließend wird die Mischung dampfdestilliert (1 Stundelang). Das Produkt wird abfiltriert und dreimal mit heißem Wasser gewaschen und getrocknet. Das rohe Pregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-(2',4'-dichlorophenoxyacetat) wirddurchKristallisation aus einer Aceton-Methanol-Mischung gereinigt. C. 2,4-Dibrompregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-(2',4'-dichlorophenoxyacetat) 10 g des nach Beispiel 37, B erhaltenen Produkts werden in 250 ml Eisessig gelöst, gerührt und tropfenweise mit einer Lösung von 5,85 g Brom in 50 ml Essigsäure in dem Maße versetzt; wie die Farbe verschwindet (etwa 30 Minuten). Durch Zusatz von Wasser fällt das rohe Dibromid aus, das abfiltriert wird. Kristallisation aus Aceton-Methanol ergibt reines 2,4-Dibrompregnan-17a,21-diol-3,11,20-trion-21-(2',4'-dichlorophenoxyacetat). D. 1-Dehydro-cortison-21-(2',4'-dichlorophenoxyacetat) 5 g des nach Beispiel 37, C erhaltenen Produkts werden in 25 ml Chinaldin gelöst und 16 Stunden auf 95 bis 100'C gehalten. Die Mischung wird dann dampfdestilliert, und der Ester wird mit Äther extrahiert. Die Lösung wird mit verdünnter Schwefelsäure und Wasser gewaschen, getrocknet und bis auf einen Rückstand abgedampft. Chromatographie aus Benzol an aktiviertem Magnesiumsilikat ergibt das reine 1,4-Pregnadien-17a,21-diol-3,11, 20-trion-(2',4'-dichlorophenoxyacetat), das mit Benzol eluiert wird und eine Drehung von etwa [a] D = 116 (Dioxan) hat.37. A. Pregnan-3a, 17a, 21-triol-11,20-dione-21- (2 ', 4'-dichlorophenoxyacetate) 100g of pregnan-3a-17a-diol-11,20-dione are dissolved in 1 l of chloroform , which contains 10 /, ethanol, dissolved and the mixture cooled to 10 ° C and treated with 12 g of gaseous hydrogen bromide. After cooling to -20 ° C. and at a temperature below -10 ° C., the mixture is treated with a solution of 48 g of bromine in 650 ml of chloroform over the course of 3 hours. The reaction mixture is then concentrated to 250 ml in vacuo below 25 ° C. 800 ml of acetone are added to the solution and then 200 g of potassium 2,4-dichlorophenoxyacetate (obtained by vacuum evaporation of a methanol solution of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, neutralized with potassium carbonate). The mixture is mixed with 200 ml of water and heated under reflux for 16 hours. The solvent is then removed by steam distillation after adding 500 ml of water and the mixture is heated to 100 ° C. for 30 minutes. The product is collected by filtration, washed three times with hot water and recrystallized from aqueous methanol. Pregnan-3a, 17a, 21-triol -11,20-dione -21- (2 ', 4'-dichlorophenoxyacetate) is obtained. B. Pregnan-17a, 21-diol-3,11-20-trione-21- (2 ', 4'-dichlorophenoxyacetate) The crude, moist residue obtained according to Example 37, A is dissolved in 1170 ml of acetone and 100 ml of water solved. The solution is cooled to -5 ° C. and the pH is adjusted to 2.4 with 6N hydrochloric acid (0.2 to 1.0 ml). 89.8 g of N-bromosuccinimide are added in the absence of light and the mixture is kept at -5 ° C. for 1 hour. Sufficient sodium sulfite solution is added to the red solution (123 g of sodium sulfite in 670 ml of water) until the pH has risen to 4.5 to 5.0. The mixture is then steam distilled (for 1 hour). The product is filtered off and washed three times with hot water and dried. The crude pregnane-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21- (2 ', 4'-dichlorophenoxyacetate) is purified by crystallization from an acetone-methanol mixture. C. 2,4-Dibromopregnane-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21- (2 ', 4'-dichlorophenoxyacetate) 10 g of the product obtained according to Example 37, B are dissolved in 250 ml of glacial acetic acid, stirred and a solution of 5.85 g of bromine in 50 ml of acetic acid was added dropwise at the same rate; as the color disappears (about 30 minutes). When water is added, the crude dibromide precipitates and is filtered off. Crystallization from acetone-methanol gives pure 2,4-dibromopregnane-17a, 21-diol-3,11,20-trione-21- (2 ', 4'-dichlorophenoxyacetate). D. 1-Dehydrocortisone-21- (2 ', 4'-dichlorophenoxyacetate) 5 g of the product obtained according to Example 37, C are dissolved in 25 ml of quinaldine and kept at 95 to 100 ° C for 16 hours. The mixture is then steam distilled and the ester is extracted with ether. The solution is washed with dilute sulfuric acid and water, dried and evaporated to a residue. Chromatography from benzene on activated magnesium silicate gives the pure 1,4-pregnadiene-17a, 21-diol-3,11, 20-trione- (2 ', 4'-dichlorophenoxyacetate), which is eluted with benzene and a rotation of about [ a] D = 116 (dioxane).

38. A. Pregnan-11ß,17a,21-triol-3,20-dion-21-(4'-chlorophenoxyacetat) In gleicher Weise wie im Beispiel 36 werden 2 g Pregnan-11ß,17a,21-triol-3,20-dion mit 1,40 g 4-Chlorophenoxyacetylchlorid behandelt. Das Rohprodukt wird in Methanol gelöst und eingeengt und ergibt kristallines Pregnan-11ß,17a,21-triol-3,20-dion-21-(4'-chlorophenoxyacetat) . B. 1-Dehydro-cortisol-21-(4'-chlorophenoxyacetat) 1 g des nach Beispiel 38, A erhaltenen Produkts wird, wie im Beispiel 37, A, mit 0,62 g Brom in Essigsäure bromiert. Das rohe, wassergefällte Dibromid wird getrocknet und in 10 ml Toluol und 5 ml 2,4,6-Collidin gelöst. Die Mischung wird 16 Stunden am RückfluB behandelt und dampfdestilliert, um die Lösungsmittel zu entfernen. Das rohe Produkt wird aufgearbeitet und wie im Beispiel 37, D chromatographiert, und das Benzoleluat wird aus Methanol kristallisiert und ergibt 1,4-Pregnadienl lß,17a,21-triol-3,20-dion-21- (4'-chlorophenoxyacetat), Fp. = 184 bis 186°C. 39. A. Allopregnan-l1ß,17a,21-triol-3,20-dion-21-(4'-chlorophenoxyacetat) 10 g von Cortisol werden, wie im Beispiel 36, mit 7,0 g 4-Chlorophenoxyacetylchlorid verestert. Das rohe Produkt wird aus 95°/oigem Äthanol umkristallisiert und liefert reines Cortisol-21-(4'-chlorophenoxyacetat). 5 g dieses Esters werden in 150 ml Äthylacetat suspendiert und 2 g 5 °/o Palladiumkohle zugesetzt. Die Mischung wird mit Wasserstoff geschüttelt, bis ein Äquivalent (231 cm3 bei 25°C) absorbiert ist und die Aufnahme aufhört. Die Mischung wird filtriert und auf 25 ml konzentriert. Das auskristallisierende Produkt wird abfiltriert und getrocknet. Es kann weiterhin aus Aceton umkristallisiert werden und ergibt Allopregnan-1lß,17a,21-triol-3,20-dion-21-(4'-chlorophenoxyacetat). Dieser Ester kann ebenfalls durch Hydrolyse von Allopregnan-llß,17a,21-triol-3,20-dion-21-acetat und erneute Veresterung hergestellt werden. 10 g des 21-Acetats werden in 200 ml Methanol gelöst und mit einer Lösung von 2,95 g Kaliumhydrogencarbonat in 25 ml Wasser behandelt. Die Mischung wird 24 Stunden durch langsam durchströmenden Stickstoff gerührt. Essigsäure wird dann bis zum Neutralpunkt zugesetzt, 50 ml Wasser zugesetzt und die Mischung im Vakuum auf 125 ml eingeengt. Die Fällung wird gesammelt, mit Wasser gewaschen und aus verdünntem Methanol kristallisiert und ergibt Allopregnan-11ß,17a,21-triol-3,20-dion. 5 g des letzteren werden wie im Beispiel 36 mit 3,5 g 4-Chlorophenoxyacetylchlorid verestert. Das Produkt wird aus Benzol-Methanol kristallisiert und ergibt Allopregnani lß,17a,21-triol-3,20-dion-21- (4' -chlorophenoxyacetat) . B. 1-Dehydro-cortisol-21-(4'-clilorophenoxyacetat) 2 g des nach Beispiel 39, A erhaltenen Produkts werden mit 25 ml Eisessig bedeckt, gerührt und tropfenweise mit 1,25 g Brom in 5 ml Essigsäure behandelt. Nachdem die Farbe verschwunden ist, wird Wasser zugesetzt und das rohe Dibromid abfiltriert und getrocknet.38. A. Pregnan-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21- (4'-chlorophenoxyacetate) In the same way as in Example 36, 2 g of Pregnan-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione treated with 1.40 g of 4-chlorophenoxyacetyl chloride. The crude product is in methanol dissolved and concentrated and gives crystalline pregnan-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21- (4'-chlorophenoxyacetate) . B. 1-Dehydro-cortisol-21- (4'-chlorophenoxyacetate) 1 g of the according to Example 38, A The product obtained is, as in Example 37, A, brominated with 0.62 g of bromine in acetic acid. The crude, water-precipitated dibromide is dried and dissolved in 10 ml of toluene and 5 ml of 2,4,6-collidine solved. The mixture is refluxed for 16 hours and steam distilled. to remove the solvents. The raw product is worked up and as in Example 37, D is chromatographed and the benzene eluate is crystallized from methanol and gives 1,4-pregnadiene lß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21- (4'-chlorophenoxyacetate), Mp = 184 to 186 ° C. 39. A. Allopregnan-l1ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21- (4'-chlorophenoxyacetate) As in Example 36, 10 g of cortisol are mixed with 7.0 g of 4-chlorophenoxyacetyl chloride esterified. The crude product is recrystallized from 95% ethanol and yields pure cortisol-21- (4'-chlorophenoxyacetate). 5 g of this ester are in 150 ml Suspended ethyl acetate and added 2 g of 5% palladium carbon. The mix will shaken with hydrogen until an equivalent (231 cm3 at 25 ° C) is absorbed and the recording stops. The mixture is filtered and concentrated to 25 ml. The product which crystallizes out is filtered off and dried. It can continue are recrystallized from acetone and gives allopregnan-1lß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21- (4'-chlorophenoxyacetate). This ester can also be obtained by hydrolysis of allopregnan-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate and re-esterification can be made. 10 g of the 21-acetate are in 200 ml Dissolved methanol and with a solution of 2.95 g of potassium hydrogen carbonate in 25 ml Treated water. The mixture is stirred for 24 hours by slowly flowing nitrogen touched. Acetic acid is then added until neutral, 50 ml of water are added and the mixture concentrated in vacuo to 125 ml. The precipitate is collected with Washed with water and crystallized from dilute methanol to give allopregnan-11ß, 17a, 21-triol-3,20-dione. 5 g of the latter are as in Example 36 with 3.5 g of 4-chlorophenoxyacetyl chloride esterified. The product is crystallized from benzene-methanol to give Allopregnani lβ, 17a, 21-triol-3,20-dione-21- (4'-chlorophenoxyacetate). B. 1-dehydro-cortisol-21- (4'-clilorophenoxyacetate) 2 g of the product obtained according to Example 39, A are covered with 25 ml of glacial acetic acid, stirred and treated dropwise with 1.25 g of bromine in 5 ml of acetic acid. after the Color has disappeared, water is added and the crude dibromide is filtered off and dried.

1 g des Dibromids wird in 5 ml Diäthylanilin suspendiert und auf 95 bis 100° C auf dem Dampfbad unter Rühren 6 Stunden lang erwärmt. Die Mischung wird dann in verdünnte Schwefelsäure eingegossen und mit Methylenchlorid extrahiert. Die Lösung wird getrocknet und abgedampft und der Rückstand dreimal aus Methanol-Aceton umkristallisiert. Man erhält 1-Dehydro-cortisol-21-(4'-chlorophenoxyacetat), Fp. = 184 bis 186° C. 40. 9 a-Fluor-l-dehydro-cörtison-21-(2'-furoat) 1,0g von 9a-Fluor-l-dehydro-cortison wird in 20m1 trocknem Pyridin gelöst und die entstehende Lösung auf 0° C abgekühlt. Zu der gerührten Lösung wird tropfenweise 0,45 g 2-Furoylchlorid zugesetzt. Man läBt die Reaktionsmischung sich langsam auf Zimmertemperatur erwärmen und rührt sie über Nacht. Die Mischung wird dann in 200 ml kalte 10°/oige Schwefelsäure eingegossen. Die entstehende Fällung wird filtriert und anteilweise mit Wasser, wäßrigem Natriumhydrogencaxbonat und Wasser gewaschen. Bei der Kristallisation aus Methanol-Wasser entsteht der 21-(2'-Furoat)-ester als kristalline Substanz.1 g of the dibromide is suspended in 5 ml of diethylaniline and adjusted to 95 Heated to 100 ° C on the steam bath with stirring for 6 hours. The mix will then poured into dilute sulfuric acid and extracted with methylene chloride. The solution is dried and evaporated and the residue three times from methanol-acetone recrystallized. 1-Dehydro-cortisol-21- (4'-chlorophenoxyacetate), mp. = 184 to 186 ° C. 40. 9 a-fluoro-1-dehydro-cortisone-21- (2'-furoate) 1.0 g of 9a-fluoro-1-dehydro-cortisone is dissolved in 20 ml of dry pyridine and the resulting solution is cooled to 0 ° C. To the stirred solution is added dropwise 0.45 g of 2-furoyl chloride. Man Allow the reaction mixture to slowly warm to room temperature and stir them overnight. The mixture is then poured into 200 ml of cold 10% sulfuric acid. The resulting precipitate is filtered and partially washed with water and aqueous sodium hydrogen carbonate and washed water. The 21- (2'-furoate) ester is formed during crystallization from methanol-water as a crystalline substance.

In gleicher Weise kann der 21-(2'-Furoat)-ester des 9a-Fluor-l-dehydro-cortisols und des 9a-Chlor-analogons beider Verbindungen erhalten werden. Bei Benutzung von 5-tert.-Butyl-2-furoyl-chlorid, Phenoxyacetylchlorid und 2,4,5-Trichlorophenoxyacetylchlorid werden 21-[(5'-tert.-Butyl)-2'-furoat], 21-Phenoxyacetat und 21-(2',4',5'-Trichlorophenoxyacetat) der 9a-Fluor- und 9a-Chlorderivate von 1-Dehydro-cortisol und von 1-Dehydro-cortison erhalten.The 21- (2'-furoate) ester of 9a-fluoro-1-dehydro-cortisol can be used in the same way and the 9a-chlorine analogue of both compounds can be obtained. When using 5-tert-butyl-2-furoyl chloride, phenoxyacetyl chloride and 2,4,5-trichlorophenoxyacetyl chloride 21 - [(5'-tert-butyl) -2'-furoate], 21-phenoxyacetate and 21- (2 ', 4', 5'-trichlorophenoxyacetate) of the 9a-fluoro and 9a-chloro derivatives of 1-dehydrocortisol and of 1-dehydrocortisone obtain.

Durch Umsatz des entsprechenden freien 21-Alkohols mit dem Chlorid der Säure werden zusätzlich folgende Ester erhalten: 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dion-21-(5'-bromfuroat) ; 1-Dehydro-cortisol-21-furoat, Fp. = 240 bis 242° C (unter Zersetzung) ; 1,4-Pregnadien-11 ß,21-diol-3,20-dion-21-(4'-methylphenoxyacetat) ; 1-Dehydro-cortisol-21-(5'-chlorfuroat) ; 1-Dehydro-cortisol-21-(4'-tert.-butyl-phenoxyacetat), Fp. = 203 bis 206° C (unter Zersetzung) ; 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dion-21-phenoxyacetat; 1-Dehydro-cortison-21-(4'-chlorophenoxyacetat), Fp. = 180 bis 182° C ; 1-Dehydro-cortison-21-(4'-methoxy-phenoxyacetat), Fp. = 130 bis 135° C (unter Verlust des Solvats) ; 1-Dehydro-cortison-21-(5'-bromfuroat) ; 1-Dehydro-cortisol-21-phenoxyacetat, Fp. = 196 bis 199° C; 1-Dehydro-cortisol-21-(4'-bromophenoxyacetat) ; 1-Dehydro-cortison-21-furoat, in zwei Formen, Fp. = 233 bis 235 und 251 bis 254° C; 1-Dehydro-cortison-21-(4'-tert.-butylphenoxyacetat), Fp. = 130 bis 135° C (unter Verlust des Solvats) ; 1-Dehydro-cortison-21-phenoxyacetat, Fp. = 205 bis 207° C und 1-Dehydro-cortison-21-(5'-tert.-butylfuroat), Fp. = 241 bis 243° C: Diese Ester können, wie eingangs beschrieben, verabreicht werden.By reacting the corresponding free 21-alcohol with the chloride The following esters are also obtained from the acid: 1,4-Pregnadien-21-ol-3,20-dione-21- (5'-bromofuroate) ; 1-dehydro-cortisol-21-furoate, melting point = 240 to 242 ° C. (with decomposition); 1,4-Pregnadia-11 β, 21-diol-3,20-dione-21- (4'-methylphenoxyacetate); 1-dehydro-cortisol-21- (5'-chlorofuroate) ; 1-Dehydro-cortisol-21- (4'-tert-butyl-phenoxyacetate), melting point = 203 to 206 ° C (below Decomposition); 1,4-pregnadien-21-ol-3,20-dione-21-phenoxyacetate; 1-dehydro-cortisone-21- (4'-chlorophenoxyacetate), Mp = 180 to 182 ° C; 1-dehydrocortisone-21- (4'-methoxyphenoxyacetate), m.p. = 130 up to 135 ° C (with loss of the solvate); 1-dehydrocortisone 21- (5'-bromofuroate); 1-dehydro-cortisol-21-phenoxyacetate, mp = 196-199 ° C; 1-dehydro-cortisol-21- (4'-bromophenoxyacetate) ; 1-Dehydro-cortisone-21-furoate, in two forms, m.p. = 233 to 235 and 251 to 254 ° C; 1-Dehydro-cortisone-21- (4'-tert-butylphenoxyacetate), melting point = 130 to 135 ° C (below Loss of solvate); 1-dehydrocortisone-21-phenoxyacetate, m.p. = 205-207 ° C and 1-dehydro-cortisone-21- (5'-tert-butyl furoate), m.p. = 241 to 243 ° C: these esters can be administered as described at the beginning.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Process for the preparation of pregnadienes of the general formula where X = 0 or H (a or ß), 0 H or H (a or ß) acyloxy, R = H or acyl and W = H, F, Cl or Brist, characterized in that one in the ring A saturated pregnane derivative with Oxygen functions in the 3- and 20-positions are converted into the corresponding 1,4-pregnadiene by treatment with dehydrating microorganisms or known chemical dehydrating agents and, if necessary, an 11-X- and / or 17a-OH- and (or 21- 0 R and (or 9 a - '# V group introduces and in addition, if the starting steroid has double bonds outside the ring A, these are converted into saturated bonds by known methods, or that one in 1- and / or 4- Position unsaturated steroid of the Pregnan range treated in a corresponding manner.

2. The method according to claim 1, characterized in that that the starting compound has a double bond on at least one, but no more than three of the 1, 4, 6, 9 (11) and 16 positions.

3. Procedure according to the Claims 1 and 2, characterized in that the starting compound has an oxygen function in the 11- and / or 17a and / or 21-position.

4. The method according to the claims 1 to 3, characterized in that the dehydration by introducing a Oxygen function in position 1 or 2 and subsequent splitting off of the oxygen function causes the 1,2 double bond to be formed.

5. The method according to claims 1 to 3, characterized in that the dehydrogenation is carried out in the 1,2- and (or 4,5-position Introduces 1 or 2 bromine atoms into ring A and splits off HBr.

6. Procedure according to the Claims 1 to 5, characterized in that there is a double bond, preferably the permanent double bond into the A-ring by treating a corresponding one Starting compound with a culture of a dehydrating microorganism that is not attacks other parts of the molecule at the same time, or with the separated enzyme material such a culture; introduces.

7. Process according to claims 1 to 6, characterized in that a Corynebacterium, such as Corynebacterium simplex or Corynebacterium hoagii, is used as the microorganism. $. Process according to Claims 1 to 7, characterized in that progesterone is hydroxylated in the 11, 17 and 21 positions and dehydrated in the 1,2 position. 9. The method according to claims 1 to 3, characterized in that a 16,17-unsaturated pregnadiene or pregnatriene is reacted with a peracid or with hydrogen peroxide to form a 16,17-oxido derivative which is then hydrolyzed. 10. The method according to claims 1, 3 and 5, characterized in that pregnane-11 a, 17a, 21-triol-3,20-dione-21-acetate is reacted with bromine, the 2,4-dibromide formed is dehydrobrominated and in the 1,4-pregnadiene compound obtained, the 11a-hydroxyl group is oxidized to a keto group. 11. The method according to claims 1 to 7 and 9, characterized in that a 9a-halogen atom is introduced into a 1,4-pregnadiene or 1,4,9 (11) -pregnatriene by epoxidation and treatment with hydrogen halide, preferably hydrogen fluoride . Formula scheme I. In equations 1 to 3, R = lower alkanoyl, R '= lower alkyl, W = H, F, Cl or Br, X = H, H or 0 or H, 0 H (a or ß), Y and Y '= -COCH, OH, -COCH20COR' or -CHOHCH, OH; Y 'can also be -CHOHCH3 mean, Z ' = OH or H.

Formula scheme II R = H, OH or acyl, R '= H or acyl, X = O, H, HH, OH (a or ß), Y = OH or OAcyl.