DE10337952A1 - DNA-mediated representation of chromosomal bands, useful e.g. for detecting chromosomal anomalies, using set of probes for fluorescent in situ hybridization that are matched for efficiency in a single test - Google Patents

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Abstract

In a method for DNA-mediated representation of chromosomal bands by multicolor banding that uses a set of 24-color FISH (= fluorescent in situ hybridization) probes, the new feature is that the individual probes are matched to each other as regards hybridization efficiency. Method for DNA-mediated representation of chromosomes bands by multicolor banding, particularly for differentiation of chromosome-specific bands and for recognizing chromosomal anomalies, uses DNA probes (I), specific for chromosomal regions, for computer-assisted representation and color evaluation of the bands by pseudo-coloring, with simultaneous use of a 24-color FISH (= fluorescent in situ hybridization) probe set. The new feature is that the individual probes are matched to each other, as regards their hybridization efficiency, in just one test batch, and the probes preferably allow representation of all chromosomes of a species by hybridization, with results evaluated under a microscope.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur DNA-vermittelten Darstellung der Banden von Chromosomen. Es wird nachfolgend als M-MCB (multiplex multicolor banding) bezeichnet. Dieses Verfahren kann zur differenzierten molekularzytogenetischen Analyse der Struktur von Chromosomen eingesetzt werden. Es basiert auf dem gemeinsamen Einsatz aller chromosomenspezifischer multicolorbanding Sonden (MCB) für die verschiedenen Chromosomen (Chudoba, I., Plesch, A., Lörch, T., Lemke, J., Claussen, U., Senger, G.: High resolution multicolor-banding: a new technique for refined FISH analysis of human chromosomes. Cytogenet Cell Genet 84, 1999, 156–160); DE 189 06 303 ) einer Spezies, beispielsweise des Menschen, parallel zueinander (zu einem gemeinsamen Hybridisierungseinsatz gemischt) in Verbindung mit einem Sondensatz, der eine differenzierte Farbdarstellung aller seiner Chromosomen in separaten Farben ermöglicht (z. B. beim Menschen der Sondensatz für das 24-Farben-FISH unter Verwendung von Ganz-Chromosomen-Sonden; Speicher, M., Gwyn Ballard, S., Ward, D.C.: Karyotyping human chromosomes by combinatorial multi-fluor FISH, Nat Genet 12, 1996, 368–375; Schröck, E., du Manoir, S., Veldman, T., Schoell, B., Wienberg, J., Ferguson-Smith, M., Ning, Y., Ledbetter, D., Bar-Am, I., Soenksen, D., Garini, Y., Ried, T.: Multicolor spectral karyotyping of human chromosomes, Science 273, 1996, 494–497).The invention relates to a method for DNA-mediated representation of the bands of chromosomes. It is hereinafter referred to as M-MCB (multiplex multicolor banding). This method can be used for differentiated molecular cytogenetic analysis of the structure of chromosomes. It is based on the joint use of all chromosome-specific multicolorbanding probes (MCB) for the different chromosomes (Chudoba, I., Plesch, A., Lörch, T., Lemke, J., Claussen, U., Senger, G .: High resolution multicolor banding: a new technique for refined FISH analysis of human chromosomes, Cytogenet Cell Genet 84, 1999, 156-160); DE 189 06 303 ) of a species, for example, of humans, parallel to each other (mixed for a common hybridization application) in conjunction with a probe set that allows for a differentiated color representation of all of its chromosomes in separate colors (eg, in humans the probe set for the 24-color FISH Speicher, M., Gwyn Ballard, S., Ward, DC: Karyotyping human chromosomes by combinatorial multi-fluor FISH, Nat Genet 12, 1996, 368-375; Schröck, E., du Manoir, S., Veldman, T., Schoell, B., Wienberg, J., Ferguson-Smith, M., Ning, Y., Ledbetter, D., Bar-Am, I., Soenksen, D., Garini , Y., Ried, T .: Multicolor spectral karyotyping of human chromosomes, Science 273, 1996, 494-497).

Die Verbindung aller MCB-Sonden zusammen mit den 24-Farben-Sonden kann dabei in zwei, oder idealer Weise in einer einzigen Hybridisierung zu diagnostischen Zwecken als M-MCB eingesetzt werden.The Connection of all MCB probes together with the 24-color probes can doing so in two, or ideally, in a single hybridization too diagnostic purposes as M-MCB.

Auf der Grundlage von 5 verschiedenen Fluorochromen können computergestützt für die Bänderung theoretisch bis zu 31 verschiedene chromosomen-regionspezifische Pseudofarben erzielt werden (2n – 1, wobei n die Zahl der eingesetzten Fluorochrome darstellt), mit denen dann auch feinere Chromosomenanomalien erkannt werden können.On the basis of 5 different fluorochromes, theoretically up to 31 different chromosome-region-specific pseudo-colors can be obtained for the banding (2 n - 1, where n represents the number of fluorochromes used), with which even finer chromosome anomalies can be detected.

Diese DNA-vermittelte Darstellung und Auswertung der Banden von Chromosomen ist in Wissenschaft und Technik vielfältig einsetzbar. So ist beispielsweise die Verwendung zum Nachweis von Änderungen in Biopolymeren ( DE 198 06 303 C2 ) bekannt geworden. Die Falschfarben reichen jedoch lediglich für ein einzelnes Chromosom (ggf. auch zwei) aus.This DNA-mediated presentation and evaluation of the bands of chromosomes can be used in many ways in science and technology. For example, the use for detecting changes in biopolymers ( DE 198 06 303 C2 ) known. However, the false colors are sufficient only for a single chromosome (possibly two).

Um bei der Vielzahl der erforderlichen Farbdarstellungen der Banden von allen Einzelchromosomen über die besagten chromosomen-regionspezifischen Pseudofarben eine eindeutige Farbauswertung und damit eine korrekte und unmissverständliche Erkennung der gebänderten Einzelchromosomen zu gewährleisten, ist es jedoch nach dem derzeitigen Stand der Technik erforderlich, für alle zu untersuchenden bzw. zu unterscheidenden Chromosomen einzeln das sog. multicolor banding (MCB) anzuwenden und jeweils eine separate Farbauswertung durchzuführen und auszuwerten. Dies bedeutet für die Analyse aller Chromosomen einer Person in der Praxis jedoch die verfahrensaufwendige und zeitraubende Durchführung einer Vielzahl von Hybridisierungsschritten (bis zu 24) mit Untersuchung der chromosomen-regionspezifischen Einzelprobensätze, was die Effizienz dieser Methode sehr wesentlich einschränkt.Around in the large number of required color representations of the bands from all single chromosomes via the said chromosomal region-specific pseudocolors a unique Color evaluation and thus a correct and unmistakable Detection of the banded To ensure single chromosomes However, it is necessary in the current state of the art, for all the chromosomes to be examined or distinguished individually so-called multicolor banding (MCB) and each one separate Perform color evaluation and evaluate. This means for the analysis of all the chromosomes of a person in practice, however the time-consuming and time-consuming implementation of a variety of hybridization steps (up to 24) with investigation of chromosomal region-specific Single sample sets which greatly limits the efficiency of this method.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, den Aufwand für die Darstellung der Banden von Chromosomen zum Zweck deren Unterscheidung sowie zur Erkennung von Chromosomenanomalien wesentlich zu verringern und die Auswertung im Idealfall auf eine Hybridisierung zu reduzieren und damit so zu vereinfachen, dass einem routinemäßigen Einsatz in all den Fällen nichts mehr im Wege steht, in denen bisher eine Darstellung der Chromosomenbanden auf herkömmliche Art indiziert war.Of the Invention is the object of the effort for the presentation the bands of chromosomes for the purpose of distinguishing them as well to significantly reduce the detection of chromosomal abnormalities and ideally to reduce the evaluation to hybridization and thus to simplify that routine use in all cases nothing stands in the way, in which so far a representation of the Chromosome bands on conventional Art was indexed.

Beispielhaft für den Menschen wurde entwickelt, dass eine Zusammenfassung aller Einzelchromosom-spezifischen MCB-Sonden zu einer einzigen multicolor banding-Sonde (= multitude multicolor banding = mMCB) für alle vorhandenen Chromosome bzw. einer Verknüpfung dieses Sondenmixes mit einem 24 Farben FISH Sondenset (= multiplex multicolor banding; M-MCB) möglich und praktikabel ist. Damit wird in einem Zwei- oder sogar Einstufenverfahren eine eindeutige Farbmustererkennung chromosomaler Banden aller Chromosomen durchführbar, ohne dass für jedes Einzelchrorosom eine separate MCB-Darstellung durchgeführt werden muss. Die DNA-Sonden aller zu untersuchenden bzw. zu unterscheidender Chromosomen werden somit erfindungsgemäß zu einer einzigen Probe zusammengefasst und mit einem an sich bekannten 24-Vielfarben-FISH zur Darstellung ganzer Chromosomen kombiniert zur Hybridisierung und anschließend zur gemeinsamen vergleichenden Farbauswertung gebracht. Basierend auf beispielsweise 6 bis 7 eingesetzten Fluorochromen für den gesamten menschlichen Karyotyp (siehe Tabellen in 1 und 2) sind mögliche Markierungs-Schemata für das M-MCB dargestellt.By way of example, it has been developed for humans that a summary of all single-chromosome-specific MCB probes into a single multicolor banding probe (= multinitial banding = mMCB) for all existing chromosomes or a combination of this probe mix with a 24-color FISH probe set (= multiplex multicolor banding; M-MCB) is possible and practicable. Thus, in a two- or even one-step procedure, a unique color pattern recognition chromosomal bands of all chromosomes feasible without the need for a separate MCB representation must be performed for each individual. The DNA probes of all chromosomes to be examined or discriminated are thus combined according to the invention into a single sample and combined with a known 24-multicharget FISH for the preparation of whole chromosomes for hybridization and then for a common comparative color evaluation. Based on, for example, 6 to 7 fluorochromes used for the entire human karyotype (see tables in 1 and 2 ) shows possible labeling schemes for the M-MCB.

Zeigt sich bei dieser Farbauswertung, dass sich jedes Chromosom einheitlich nur in seiner eigenen Farbe darstellt, also zwischen den verschiedenen Chromosomen kein Austausch von chromosomalem Material stattgefunden hat, können die auf den einzelnen Chromosomen entstandenen Pseudofarben nur zu den Chromosomen gehören, auf denen sie sichtbar geworden sind. Nur durch die kombinierte Anwendung der beiden Verfahren ist diese qualitative diagnostische Erweiterung möglich. Ist bekannt, zwischen welchen Chromosomen Austausche stattgefunden haben, so sind die entstandenen MCB Bandenmuster eindeutig zuzuordnen und genaue Bruchpunktfestlegungen unter zu Hilfenahme der Fluoreszenzprofile möglich. Einzelne Chromosomen aus diesem komplexen Ansatz können ebenso detailliert analysiert werden, wie solche in einzelnen MCB-Sondenmixen, d. h. auf einer flexiblen Bandenauflösung von 400–800 Banden pro haploiden Karyotyp.It turns out in this color evaluation that each chromosome is uniform only in its own If there is no exchange of chromosomal material between the different chromosomes, the pseudo-colors produced on the individual chromosomes can only belong to the chromosomes on which they have become visible. Only by the combined application of the two methods, this qualitative diagnostic extension is possible. If it is known between which chromosomes exchanges have taken place, then the resulting MCB band patterns can be clearly assigned and exact breakpoint definitions with the aid of fluorescence profiles possible. Single chromosomes from this complex approach can be analyzed in as much detail as those in single MCB probe mixes, ie at a flexible band resolution of 400-800 bands per haploid karyotype.

Damit können chromosomale Veränderungen molekularzytogenetisch auf hohem Niveau sowie vergleichsweise mit niedrigem Aufwand und in kürzester Zeit und im Idealfall nach nur einer einzigen Hybridisierung erkannt werden.In order to can chromosomal changes Molecular cytogenetic at a high level and comparatively with low effort and in the shortest possible time Time and, ideally, detected after only a single hybridization become.

Die Erfindung soll nachstehend anhand von in der Zeichnung dargestellten Ausführungsbeispielen näher erläutert werden.The Invention will be described below with reference to the drawing embodiments be explained in more detail.

Es zeigen:It demonstrate:

1: Mögliches Markierungs-Schema für das Multiplex-multicolor-banding (mMCB) unter Verwendung von 7 Fluorochromen 1 : Possible labeling scheme for multiplex multicolor banding (mMCB) using 7 fluorochromes

2: Mögliches Markierungs-Schema für das Multiplex-multicolor-banding (mMCB) unter Verwendung von 6 Fluorochromen 2 : Possible labeling scheme for multiplex multicolor banding (mMCB) using 6 fluorochromes

3: Multitude multicolor chromosome banding (mMCB) an einer unauffälligen männlichen Metaphaseplatte (2 Teilbilder) 3 : Multitude multicolor chromosomal banding (mMCB) on an inconspicuous male metaphase plate (2 fields)

4: Molekularzytogenetische Studien an der humanen Brustepithel Zellline MCF-10A (3 Teilbilder) 4 : Molecular Cytogenetic Studies on the Human Breast Epithelium Cellline MCF-10A (3 fields)

5: mMCB an nicht-humanen Zellen; Charakterisierung der Chromosomen von Gorilla gorilla mittels mMCB 5 : mMCB on non-human cells; Characterization of gorilla gorilla chromosomes using mMCB

In 1 ist ein mögliches Markierungs-Schema für das Multiplex-multicolor-banding (mMCB) unter Verwendung von beispielsweise 7 Fluorochromen (stellvertretend für viele andere) dargestellt. In der Tabelle bedeuten:

MCB
= chromosomen-spezifisches Multicolor banding Sondenset;
M-FISH
= Ganzchromosomensonde fürs entsprechende Chromosom;
–
= eine Sonde im entsprechenden Fluorochrom markiert;
+
= DAPI-Gegenfärbung.
In 1 For example, one possible labeling scheme for multiplex multicolor banding (mMCB) is shown using, for example, 7 fluorochromes (representative of many others). In the table mean:
MCB
= chromosome-specific multicolor banding probe set;
M-FISH
= Whole chromosome probe for the corresponding chromosome;
-
a probe is labeled in the corresponding fluorochrome;
+
= DAPI counterstain.

In gleicher Weise zeigt 2 ein mögliches Markierungs-Schema für das Multiplex-multicolor-banding (mMCB) unter Verwendung von beispielsweise 6 Fluorochromen (wiederum stellvertretend für viele andere). Auch hier bedeuten in der Tabelle:

MCB
= chromosomen-spezifisches Multicolor banding Sondenset;
M-FISH
= Ganzchromosomensonde fürs entsprechende Chromosom;
–
= eine Sonde im entsprechenden Fluorochrom markiert;
+
= DAPI-Gegenfärbung.
In the same way shows 2 a possible labeling scheme for multiplex multicolor banding (mMCB) using, for example, 6 fluorochromes (again representative of many others). Again, in the table, mean:
MCB
= chromosome-specific multicolor banding probe set;
M-FISH
= Whole chromosome probe for the corresponding chromosome;
-
a probe is labeled in the corresponding fluorochrome;
+
= DAPI counterstain.

3 zeigt das Multitude multicolor chromosome banding (mMCB) an einer unauffälligen männlichen Metaphaseplatte mit Teilbild 3A als „Echtfarben"-Darstellung – d. h. drei (SpectrumGreen, SpectrumOrange, Diethylaminocoumarin) der fünf verwendeten Fluorochrome sind überlagert dargestellt (nicht abgebildet: DAPI, TexasRed) sowie mit Teilbild 3B als mMCB-Karyogramm derselben Metaphaseplatte in Falschfarben-Darstellung auf einem 370 Bandenniveau. 3 Figure 3 shows the Multitude multicolor chromosome banding (mMCB) on an unremarkable male metaphase plate with panel 3A as a "true color" representation - ie three (SpectrumGreen, SpectrumOrange, Diethylaminocoumarin) of the five fluorochromes used are superimposed (not shown: DAPI, TexasRed) and with Partial image 3B as mMCB karyogram of the same metaphase plate in false color representation on a 370 band level.

4 stellt molekularzytogenetische Studien an der humanen Brustepithel Zellline MCF-10A dar. Derivative Chromosomen sind mit Pfeilspitzen in den Teilbildern 4A und 4B markiert. In Teilbild 4A ist ein 24-Farben-FISH-Bild zu sehen – hieraus ergab sich für einen konkret untersuchten Fall zusammen mit dem invertierten DAPI-Bild folgender Karyotyp: 47,XX,del(1)(?q),+i(1)(q10),der(3)t(3;5),i(8)(g10),der(9)t(9;3;5)[cp11]. Heterochromatische Regionen sind mit "H" markiert. Die chromosomenspezifischen Pseudofarben sind unter dem Karyogramm zu sehen. Nach M-MCB (Teilbild 4B) konnte der Karyotyp von MCF-10 folgendermaßen verbessert angegeben werden: 47,XX,der(1)del(1)(q11)inv(p21;q11),+i(1)(g10),der(3)t(3;5)(5qter->5q34::3p14->3qter), der(8)(qter->8q22::8p22->8qter),der(9)t(9;3;5)(9qter->9q21::3p12->3p21::5q22->5qter). 4 represents molecular cytogenetic studies on the human mammary epithelium cellline MCF-10A. Derivative chromosomes are marked with arrowheads in panels 4A and 4B. In sub-picture 4A, a 24-color FISH picture is shown - resulting in a concrete case with the inverted DAPI picture: 47, XX, del (1) (? Q), + i (1 ) (q10), which (3) t (3; 5), i (8) (g10) of the (9), t (9; 3; 5) [cp11]. Heterochromatic regions are marked with "H". The chromosome-specific pseudocolors can be seen below the karyogram. After M-MCB (panel 4B), the karyotype of MCF-10 was improved as follows: 47, XX, the (1) del (1) (q11) inv (p21, q11), + i (1) (g10) , which is (3) t (3; 5) (5qter-> 5q34 :: 3p14-> 3qter), the (8) (qter-> 8q22 :: 8p22-> 8qter), the (9) t (9; 3 ; 5) (9qter-> 9q21 :: 3p12-> 3p21 :: 5q22-> 5qter).

Die Auswertung von mMCB kann entweder mittels der Falschfarben erfolgen oder indem die Fluoreszenzprofile genutzt werden. Im oberen Teilbild 4C von 4 sind Chromosom 1 und seine Derivate in der Zellline MCF-10A gezeigt mit einer mMCB Falschfarben-Auflösung von 21 Banden (entspricht 370 Banden pro haploiden Karyotyp) sowie das invertierte DAPI-Banding. Im unteren Teilbild 4B sind dieselben Chromosomen gezeigt mit einer höheren mMCB Auflösung von 27 Banden (entspricht 400 Banden). Eine weitere Möglichkeit zur Analyse von chromosomalen Rearrangements ist die Analyse der Fluoreszenzprofile, die hier für Chromosom 1 {chr1}, Iso-Chromosom 1q {i(1q)} und für der(1)del(1)(q11)inv(p21;q11) {del/inv(1)} gezeigt sind.The evaluation of mMCB can either be done by means of the false colors or by using the fluorescence profiles. In the upper part of the picture 4C of 4 are Chromosome 1 and its derivatives in the cell line MCF-10A shown with a mMCB false-color resolution of 21 bands (equivalent to 370 bands per haploid karyotype) and the in inverted DAPI banding. Lower panel 4B shows the same chromosomes with a higher mMCB resolution of 27 bands (equivalent to 400 bands). Another possibility for the analysis of chromosomal rearrangements is the analysis of the fluorescence profiles, here for chromosome 1 {chr1}, iso-chromosome 1q {i (1q)} and for the (1) del (1) (q11) inv (p21; q11) {del / inv (1)} are shown.

Die Region, welche im letztgenannten Derivativchromosom invertiert ist, ist mit kleinen Pfeilspitzen markiert.The Region inverted in the latter derivative chromosome, is marked with small arrowheads.

Multitude multicolor chromosome banding (mMCB) kann auch an nicht-humanen Zellen erfolgreich angewendet werden. In 5 wurden die Chromosomen von Gorilla gorilla mittels mMCB charakterisiert. Fertige mMCB Bilder sehen identisch aus, zeigen aber nach Umschaltung auf den 24 Farbmodus alle Chromosomen lediglich in einer Farbe. Sollte sich hierbei ein Chromosom in mehr als einer Farbe präsentieren, so weist dies auf ein chromosomales Rearrangement, das durch eine Translokation oder Insertion bedingt sein kann.Multitude multicolor chromosomal banding (mMCB) can also be successfully applied to non-human cells. In 5 the chromosomes of Gorilla gorilla were characterized by mMCB. Finished mMCB images look identical but show all chromosomes in one color after switching to 24 color mode. Should a chromosome present itself in more than one color, this indicates a chromosomal rearrangement, which may be due to a translocation or insertion.

Claims (7)

Verfahren zur DNA-vermittelten Darstellung der Banden von Chromosomen mittels multicolor banding (MCB), insbesondere zur Unterscheidung von chromosomenspezifischen Banden sowie zur Erkennung von Chromosomenanomalien, unter Verwendung einer Vielzahl von chromosomen-regionspezifischen DNA-Sonden zur rechnergestützten Darstellung und Farbauswertung der Banden über Pseudofarben sowie gleichzeitiger (zu einem Probensatz zusammengestellter) Verwendung eines 24-color-FISH-Probensatzes, dadurch gekennzeichnet, dass die für das multicolor banding der zu unterscheidenden Chromosomen benötigten DNA-Sonden mengenmäßig im Hinblick auf die Hybridisierungseffizienz aufeinander abgestimmt in lediglich einem Versuchsansatz (eine einzige erforderliche Hybridisierung) eingesetzt und mit den DNA-Proben zur Darstellung vorzugsweise aller Chromosomen einer Spezies (24-color-FISH beim Menschen) hybridisiert und unter dem Mikroskop ausgewertet werden.Method for DNA-mediated presentation of the bands of chromosomes by means of multicolor banding (MCB), in particular for distinguishing chromosome-specific bands and for detecting chromosomal abnormalities, using a plurality of chromosome region-specific DNA probes for computer-aided display and color evaluation of the bands via pseudo-colors and simultaneous (assembled to a set of samples) use of a 24-color FISH sample set, characterized in that the DNA probes required for the multicolor banding of the chromosomes to be distinguished coordinated in terms of hybridization efficiency in a single trial approach (a single required Hybridization) are used and hybridized with the DNA samples to represent preferably all chromosomes of a species (24-color FISH in humans) and evaluated under a microscope. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die für das multicolor banding der zu unterscheidenden Chromosomen benötigten DNA-Sonden gemeinsam mit den DNA-Proben zur Darstellung der Chromosomen einer Spezies hybridisiert und ausgewertet werden.Method according to claim 1, characterized in that that for the multicolor banding of the chromosomes to be differentiated requires DNA probes together with the DNA samples to represent the chromosomes of a Species hybridized and evaluated. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die für das multicolor banding der zu unterscheidenden Chromosomen benötigten DNA-Sonden getrennt mit den DNA-Proben zur Darstellung der Chromosomen einer Spezies hybridisiert und ausgewertet werden.Method according to claim 1, characterized in that that for the multicolor banding of the chromosomes to be differentiated requires DNA probes separated with the DNA samples to represent the chromosomes of a Species hybridized and evaluated. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die für das multicolor banding aller zu unterscheidenden Chromosomen benötigten DNA-Sonden verwendet werden.Method according to claim 1, characterized in that that for the multicolor banding of all chromosomes to be differentiated requires DNA probes be used. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass für das multicolor banding nicht aller zu unterscheidenden Chromosomen lediglich die dafür erforderlichen DNA-Sonden zum Einsatz kommen.Method according to claim 1, characterized in that that for multicolor banding of not all chromosomes to be distinguished only the one for it required DNA probes be used. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass für das multicolor banding aller zu unterscheidenden Chromosomen benötigten DNA-Sonden gemeinsam mit allen DNA-Proben zur Darstellung ganzer Chromosomen hybridisiert und ausgewertet werden.Method according to claim 1, characterized in that that for the multicolor banding of all chromosomes to be differentiated requires DNA probes together with all DNA samples to represent whole chromosomes be hybridized and evaluated. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass für das multicolor banding aller zu unterscheidenden Chromosomen benötigten DNA-Sonden gemeinsam mit lediglich einer Auswahl von den zur Darstellung ganzer Chromosomen erforderlichen DNA-Proben hybridisiert und ausgewertet werden.Method according to claim 1, characterized in that that for the multicolor banding of all chromosomes to be differentiated requires DNA probes together with just a selection of the whole presentation Chromosomes required DNA samples hybridized and evaluated become.
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