DE1032479B

DE1032479B - Process for the production of an antigen-containing urine preparation suitable for injection purposes

Info

Publication number: DE1032479B
Application number: DEK28766A
Authority: DE
Inventors: Dipl-Chem Fritz Corcilius; Dr Phil Gustav Klein; Dr Med Erwin Schlueren
Original assignee: Gustav Klein Dr GmbH
Current assignee: Gustav Klein Dr GmbH
Priority date: 1956-05-05
Filing date: 1956-05-05
Publication date: 1958-06-19

Description

Verfahren zur Herstellung eines für Injektionszwecke geeigneten antigenhaltigen Harnpräparates Es ist seit langem bekannt, daß der menschliche und tierische Organismus beim Vorhandensein von körperfremden Stoffen, insbesondere Eiweißstoffen, spezifisch gegen diese Stoffe gerichtete Antikörper bildet. Die eine Antikörperbildung verursachenden körperfremden Stoffe können im menschlichen oder tierischen Organismus beispielsweise als Tumorgewebe oder als deren pathologische Stoffwechsel-und Zerfallsprodukte selbst entstanden sein oder in diesen von außen, beispielsweise durch Infektion, hereingebracht worden sein. Solche die Antikörperbildung auslösende Stoffe werden Antigene genannt. Sie lassen sich in manchen Fällen in relativ reiner Form isolieren; so z. B. lassen sie sich aus carzinomateusem Gewebe in Form eines Extraktes gewinnen, mit dessen Hilfe z. B. durch subkutane Injektion in einem fremden Organismus spezifisch gegen dieses zur Extraktgewinnung dienende Carzinom gerichtete Antikörper erzeugt werden.Process for the preparation of an antigen-containing compound suitable for injection purposes Urinary preparations It has long been known that the human and animal organism in the presence of exogenous substances, especially proteins, specifically forms antibodies directed against these substances. Those that cause antibody formation exogenous substances can be found in the human or animal organism, for example as tumor tissue or as their pathological metabolic and decay products themselves originated or brought in from outside, for example through infection have been. Such substances that trigger antibody formation are called antigens. In some cases they can be isolated in a relatively pure form; so z. B. let they are obtained from carcinomateusem tissue in the form of an extract with which Help z. B. specifically against by subcutaneous injection in a foreign organism this carcinoma-directed antibodies can be generated.

Es hat sich jedoch gezeigt, daß auf diesem Wege gewonnene Extrakte nicht den therapeutischen Effekt ergaben, den man sich auf Grund der wissenschaftlichen Forschung versprach, wenn auch, beispielsweise bei der Krebsbehandlung, mit solchen aus carzinornatetrsen Extrakten gewonnenen Antigenen eine aktive Immunisierung beobachtet wurde.However, it has been shown that extracts obtained in this way did not produce the therapeutic effect that one would expect on the basis of the scientific Research promised, albeit, for example in cancer treatment, with such Active immunization was observed in antigens obtained from carcinomate extracts became.

Einer weitgehenden Anwendung dieser Präparate steht darüber hinaus noch die Tatsache hinderlich im Wege, daß für die Herstellung dieser Präparate das Ausgangsmaterial nicht in ausreichenden Mengen zur Verfügung steht.Extensive use of these preparations is also possible nor the fact that the Starting material is not available in sufficient quantities.

Es wurde nun festgestellt, daß die in einem lebenden Organismus befindlichen, im Blutserum nachweisbaren Antigene, gleichgültig, ob sie beispielsweise von einem manifesten Tumorgewebe herrühren oder von außen her in den Organismus, z. B. durch Infektion, gebracht worden sind, durch den Harn zusammen mit vielen anderen Stoffen, unter anderem Antikörpern und so-4.-Yenannten Abwehrfermenten, zur Ausscheidung gelangen. ohne dabei an Wirksamkeit zu verlieren. Es wurde des weiteren festgestellt, daß die durch den Harn ausgeschiedenen Antigene mit dein Antigen der betreffenden Krankheit übereinstimmen.It has now been established that those in a living organism Antigens detectable in the blood serum, regardless of whether they come from, for example manifest tumor tissue or from the outside into the organism, z. B. by Infection brought about by urine along with many other substances including antibodies and so-called defense ferments, for excretion reach. without losing any of its effectiveness. It was also found that that the antigens excreted in the urine with your antigen of the relevant Disease match.

Untersuchungen, die zum Zwecke der Gewinnung der Antigene aus antigenhaltigen Harnen angestellt wurden, zeigten nun, daß die Antigene im Harn und im Blutserum ausschließlich in der Fraktion der Globuline, insbesondere der a.-Globuline, anzutreffen sind und dali die spätere therapeutische Verwertbarkeit der gewonnenen Präparate ganz ausschließlich von deren Reinheitsgrad abhängig ist. Unter Antigenen werden in diesem Zusammenhang spezifisch gerichtete Antigene verstanden, die die gegen eine bestimmte Erkrankung spezifisch gerichteten Antikörper erzeugen. Wenn der Anteil der nicht als Antigene wirksarnen Stoffe im gewonnenen Präparat zu groß ist, lassen diese Präparate sich wegen der bei ihrer Anw endungauftretenden anaphylaktischenErscheinungen nicht mehr in einer für eine erfolgversprechende "Therapie ausreichenden Menge anwenden.Investigations for the purpose of obtaining the antigens from antigen-containing Urines were made now that the antigens in the urine and in the blood serum to be found exclusively in the group of globulins, in particular the a.-globulins are and dali the later therapeutic usability of the obtained preparations depends entirely on their degree of purity. Are under antigens in this context specifically directed antigens understood that the against produce antibodies that are specific to a particular disease. When the stake the substances that are not effective as antigens in the obtained preparation are too large these preparations are different because of the anaphylactic phenomena associated with their use no longer use in an amount sufficient for a promising "therapy".

Erfindungsgemäß werden daher zur Herstellung eines therapeutisch verwertbaren Harnpräparates aus antigenhaltigem Harn mit Hilfe an sich bekannter Maßnahmen ausschließlich Globuline, vorzugsweise a.,-Glol>uline, isoliert, die dann, beispielsweise in physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen, als Therapeutikum Verwendung zur Heilung solcher Krankheiten finden, durch die der Antigengehalt des Harnes bedingt ist.According to the invention, therefore, for the production of a therapeutically usable one Urine preparation from urine containing antigen with the help of known measures exclusively Globulins, preferably a., - Glol> uline, isolated, which then, for example in physiological Saline solution added, used as a therapeutic agent for curing such diseases which determine the antigen content of the urine.

Als Ausgangsmaterial zur Herstellung des erfindungsgemäßen Harnpräparates werden vorzugsweise @1Iischharne verwendet. Hierbei soll unter »Mischharir« ein Gemisch von Harnen verstanden werden, die von verschiedenen mit der gleichen Krankheit behafteten Individuen herrühren. Es hat sich nämlich gezeigt, daß die Wirksamkeit dann geringer ist, wenn ein Individuum mit einem nur aus seinem eigenen Harn hergestellten Harnpräparat behandelt wird. Umgekehrt und in Übereinstimmung damit ist die Wirksamkeit im allgemeinen um so größer, je größer die Zahl der Individuen ist, die den als Ausgangsmaterial dienenden Harn lieferten, weil in einem solchen Mischharn nicht nur eine einzelne Antigenart, sondern verschiedene »konkurrierende« Antigene enthalten sind, so daß jedes für sich allein als gesondertes spezifisches Stimulans für das RES bei der Antikörperbildung wirksam wird. Vorzugsweise wird hei der Herstellung des erfindungsgemäßen Harnpräparates zur Isolierung der Globuline, vorzugsweise des a2 Globulinanteiles, die Elektrophorese angewandt. Zur Durchführung der Elektrophorese können die für diesen Zweck bekannten Puffer mit der hierbei üblichen Konzentration verwendet werden, und das zur Elektrophorese kommende antigenhaltige Ausgangsprodukt kann entsprechend dem verwendeten Puffergemisch sauer, neutral oder basisch sein. Besonders im basischen Bereich, -insbesondere in dem p11-Bereich um 8,6, läßt sich eine vorteilhafte Isolierung erzielen.As a starting material for the production of the urine preparation according to the invention @ 1Iischharne are preferably used. Here under "Mishharir" a Mixture of urines are understood to be those of different people with the same disease afflicted individuals. It has been shown that the effectiveness then is less if an individual has one made only from his own urine Urine preparation is treated. Conversely, and in accordance with it, is the effectiveness in general, the greater the number of individuals who have the as Urine that served as the starting material was supplied because it was not in such a mixed urine Contain only a single type of antigen, but various "competing" antigens are, so that each on its own as a separate specific stimulant for the RES becomes effective in antibody formation. Preferably hot is used in manufacture of the urine preparation according to the invention to isolate the globulins, preferably of the a2 globulin component, electrophoresis is used. To carry out electrophoresis, the buffers known for this purpose can be mixed with the here usual concentration can be used, and the antigen-containing one used for electrophoresis The starting product can be acidic, neutral or, depending on the buffer mixture used be basic. Especially in the basic range, especially in the p11 range 8.6, an advantageous insulation can be achieved.

Das zur Elektrophorese gelangende antigenhaltige Ausgangsmaterial kann ein einzelner Harn oder Mischharn sein, es kann aber auch ein Konzentrat aus einem Harn oder Mischharn sein, das durch Fällen mittels eines Eiweißfällungsmittels und Wiederauflösen z. B. in einer Pufferlösung gewonnen wurde.The antigen-containing starting material used for electrophoresis can be a single urine or mixed urine, but it can also be a concentrate a urine or mixed urine, which is precipitated by means of a protein precipitant and re-dissolving z. B. was obtained in a buffer solution.

Es ist an sich bekannt, durch Fällen von Harn, beispielsweise mittels Aceton und/oder Salzen zu Harnpräparaten zu gelangen, die unter anderem schon zur therapeutischen Verwertung vorgeschlagen wurden, jedoch handelt es sich hierbei nicht um die Gewinnung der im Harn vorhandenen Antigene, sondern um die Gewinnung von sogenannten Abwehrfermenten. Diese finden sich nicht wie die Antigene in der Globulinfraktion des Harnes, sondern im Albuminanteil desselben.It is known per se by precipitating urine, for example by means of Acetone and / or salts to get to urine preparations, which, among other things, are already used therapeutic utilization have been proposed, but this is what it is not about obtaining the antigens present in the urine, but about obtaining it of so-called defense ferments. Like the antigens, these are not found in the Globulin fraction of the urine, but in the albumin portion of the same.

Zum Zwecke der Entsalzung kann vorzugsweise in der Mitte oder am Ende der beschriebenen Reinigungs-und Konzentrierungsoperationen das antigenhaltige Material dialysiert oder vorzugsweise durch Ionenaustauscher filtriert werden.For the purpose of desalination, preferably in the middle or at the end the cleaning and concentration operations described, the antigen-containing material dialyzed or preferably filtered through ion exchangers.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Process for the manufacture of an injection device suitable antigen-containing urine preparation, characterized in that from preferably urine containing competing antigens according to known methods exclusively or almost exclusively globulins, preferably x-globulins, isolated and these by means of known measures, for example by repeated electrophoresis, be purified and concentrated.

2. The method according to claim 1, characterized in that that the isolation of the globulins in the basic range, especially in the pH range at 8.6.

3. The method according to claims 1 and 2, characterized in that that mixed urine is used as the starting material.

4. The method according to the claims 1 to 3, characterized in that the antigen-containing solution before and / or after the electrophoresis finite a protein precipitant to precipitate the or the Antigens is used.

5. The method according to any one of claims 1 to 4, "thereby characterized in that the antigen-containing solution is desalted by ion exchangers.