DE10262157B4 - Plate for use in cryogenic storage of biological specimens has wells, into which specimens are placed, fits into cover in same way as drawer of matchbox, and is held in position by e.g. studs and recesses - Google Patents
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Abstract
Description
Die Erfindung betrifft Kryo-Probenträger zur modularen Kryospeiche rung für eine Vielzahl von Kryoproben.The The invention relates to cryo-sample carriers for modular cryo storage for a variety of cryoprobes.
Es
ist allgemein bekannt, biologische Proben zur Lagerung (Speicherung)
und/oder zur Bearbeitung in einen gefrorenen Zustand zu überführen (Kryokonservierung).
Für makroskopische
Proben, wie z. B. Blut oder Gewebe, sind zahlreiche Techniken zur Probenlagerung
bei tiefen Temperaturen entwickelt worden. In der modernen Medizin,
Gentechnik und Biologie besteht die Tendenz, zunehmend kleine Proben
einer Kryokonservierung zu unterziehen. Es werden bspw. kleine Suspensionsvolumina
(ml oder darunter) mit suspendierten Zellen oder Zellgruppen eingefroren.
Aus der
Ein wichtiger Vorteil der Tieftemperaturlagerung (Kryokonservierung) mikroskopisch kleiner Proben besteht in der Möglichkeit einer hohen Lagerungsdichte. Damit kann nicht nur Platz gespart werden. Es ist auch möglich, eine Vielzahl verschiedener Proben unter identischen Bedingungen zu lagern. Allerdings kann bei der Kryokonservierung ein Identifizierungsproblem auftreten. Es besteht bspw. ein Bedarf, einzelne Proben fehlerfrei zu identifizieren, um Mess- oder Präparationsdaten zuordnen zu können. Es wurden für die Kryokonservierung Probenträger (Kryosubstrate) entwickelt, auf denen Probenreservoire mit einer vorbestimmten geometrischen Anordnung gebildet sind. Von jedem Probenreservoir kann eine Kryoprobe aufgenommen werden. Die Identifizierung der Probe ist bspw. aus der geometrischen Position des Probenreservoirs möglich.One important advantage of cryogenic storage (cryopreservation) Microscopic samples have the possibility of high storage density. This not only saves space. It is also possible to have one Store a variety of different samples under identical conditions. However, cryopreservation can be an identifying problem occur. There is, for example, a need, individual samples without errors to identify to assign measurement or preparation data to can. It were for the cryopreservation sample carrier (cryosubstrate) developed on which sample reservoirs with a predetermined geometric Arrangement are formed. From each sample reservoir can be a cryoprobe be recorded. The identification of the sample is, for example, from the geometric position of the sample reservoir possible.
Typischerweise ist ein Kryosubstrat zur Array-artigen Aufnahme einer Vielzahl von Proben ausgelegt, um eine hohe Lagerungsdichte zu erzielen. Zur Identifizierung und/oder Datenspeicherung kann ein Kryosubstrat mit einer Datenspeichereinrichtung ausgestattet sein. Bei vielen Anwendungen erfolgt die Kryokonservierung derart, dass die auf dem Kryosubstrat verfügbaren Probenreservoire mit Proben belegt und die zugehörigen Daten gespeichert werden. Anschließend erfolgt die Überführung des Kryosubstrats in den tiefgekühlten Zustand, z. B. durch Einführung in ein flüssiges oder gasförmiges Kühlmedium.typically, is a cryosubstrate for array-like recording of a variety of Samples designed to achieve a high storage density. to Identification and / or data storage may be a cryosubstrate be equipped with a data storage device. In many Cryopreservation is done in such a way that applications on the Cryosubstrate available Reservoirs are filled with samples and the associated data is stored. Subsequently the transfer of the Cryosubstrate in the frozen State, z. B. by introduction in a liquid or gaseous Cooling medium.
Es gibt jedoch in der Praxis Kryokonservierungsprozeduren, bei denen diese Technik nachteilig ist. Falls bspw. nur wenige Proben konserviert werden sollen, mit denen nicht alle Probenreservoire des Kryosubstrats befüllbar wären, so kann das Kryosubstrat nur mit begrenzter Effektivität benutzt werden. Ein nachträgliches Beschicken eines unvollständig belegten Kryosubstrats würde dessen Überführung in Raumtemperaturbedingungen erfordern. Eine definierte Einstellung der Lagerungsbedingungen der einzelnen Proben könnte nicht sichergestellt werden. Eine unvollständige Belegung von Kryosubstraten würde auch zu einer verminderten Effektivität von Kryoanlagen führen, in denen eine Vielzahl von Kryosubstraten gelagert werden. Die Effektivität bisher entwickelter Beschickungs- und Einfrierprozeduren und die Nutzung der hohen Lagerungsdichte ist bisher auf die vollständig belegten Kryosubstrate beschränkt.It However, in practice, there are cryopreservation procedures in which this technique is disadvantageous. If, for example, only a few samples preserved with which not all sample reservoirs of the cryosubstrate fillable would, so the cryosubstrate can only be used with limited effectiveness become. An afterthought Loading an incomplete occupied Cryosubstrate would its transfer into Require room temperature conditions. A defined setting the storage conditions of the individual samples could not be ensured. A incomplete Occupancy of cryosubstrates would also lead to a reduced effectiveness of cryogenic plants, in where a plurality of cryosubstrates are stored. The effectiveness of previously developed Loading and freezing procedures and the use of high storage density is so far on the complete limited cryosubstrates.
Ein weiterer Nachteil herkömmlicher Kryosubstrate betrifft den Schutz der Probe im kryokonservierten Zustand. Einerseits sollte ein Verdunstungs- und Sublimationsschutz gegeben sein. Des Weiteren sind die Proben vor Verunreinigungen, wie z. B. Fremdstoffkontaminationen oder Fremdorganismen zu schützen. In der Regel soll die Probe nicht mit dem Kühlmedium in direktem Kontakt stehen. Herkömmliche Kryosubstrate sind nur beschränkt geeignet, diese Anforderungen zu erfüllen. Zum Schutz von Proben müssen häufig zusätzliche Maßnahmen, wie z.B. die Belegung von Proben mit Schutzschichten vorgesehen sein.One Another disadvantage of conventional Cryosubstrate concerns the protection of the sample in the cryopreserved Status. On the one hand should be an evaporation and sublimation protection be given. Furthermore, the samples are contaminants, such as B. foreign substance contamination or foreign organisms to protect. In As a rule, the sample should not be in direct contact with the cooling medium stand. conventional Cryosubstrate are limited suitable to meet these requirements. For the protection of samples have to often additional Measures, like e.g. the assignment of samples with protective layers should be provided.
Weitere
Probenträger,
insbesondere für
biologische Proben sind aus
Die Aufgabe der Erfindung ist es, einen verbesserten Probenträger für die Kryokonservierung bereitzustellen, mit dem Nachteile der herkömmlichen Kryosubstrate überwunden werden und der einen erweiterten Anwendungsbereich besitzt. Der erfindungsgemäße Probenträger soll insbesondere eine hohe Flexibilität bei der Probenbeschickung besitzen.The The object of the invention is to provide an improved sample holder for cryopreservation, with the disadvantages of the conventional Cryosubstrate overcome and has an extended scope. Of the Sample carrier according to the invention is intended in particular a high flexibility in sample loading have.
Diese Aufgabe wird mit einem Kryo-Probenträger mit den Merkmalen gemäß Patentanspruch 1 gelöst. Vorteilhafte Ausführungsformen ergeben sich aus den abhängigen Ansprüchen.These Task is with a cryo-sample carrier with the features according to claim 1 solved. Advantageous embodiments arise from the dependent ones Claims.
Erfindungsgemäß besteht der Kryo-Probenträger insbesondere aus mindestens zwei Komponenten, nämlich einem Basisteil und mindestens einem Substratteil. Das mindestens eine Substratteil erfüllt wie herkömmliche Kryosubstrate die Funktion einer Probenaufnahme. Es ist mit mindestens einem Probenreservoir und mindestens einem Verbindungselement ausgestattet. Das Basisteil stellt einen plattenförmigen Träger für das mindestens eine Substratteil dar und ist mit einer Vielzahl von Verankerungselementen ausgestattet. Jeweils ein Verankerungselement und ein Verbindungselement der Basis- und Substratteile können lösbar miteinander verbunden werden. Ein oder mehrere Substratteile können am Basisteil an vorbestimmten Positionen durch Zusammenfügen von Verankerungs- und Verbindungselementen angeordnet werden. Der Probenträger besitzt den Vorteil eines modularen Aufbaus. Je nach Aufgabenstellung und/oder Zahl der vorliegenden Proben kann ein Substratteil mit geeigneter Größe beschickt und auf dem Basisteil angebracht werden. In Abhängigkeit von der Zahl und Anordnung unbesetzter Verankerungselemente können zur Kryospeicherung weitere Substratteile auf dem Basisteil befestigt werden. Dies kann zeitgleich mit der Erstbeschickung oder zeitlich getrennt während verschiedener Phasen einer Kryokonservierung erfolgen. Wegen der modularen Anbringung von einem oder mehreren Substratteilen am Basisteil wird die Verwendung des Probenträgers hier als modulare Kryokonservierung bezeichnet.According to the invention, the cryo-sample carrier consists in particular of at least two components, namely a base part and at least one substrate part. The at least one substrate part fulfills the function of a sample receptacle like conventional cryosubstrates. It is equipped with at least one sample reservoir and at least one connecting element. The base part constitutes a plate-shaped support for the at least one sub stratteil and is equipped with a variety of anchoring elements. In each case an anchoring element and a connecting element of the base and substrate parts can be detachably connected to each other. One or more substrate parts may be arranged on the base part at predetermined positions by joining anchoring and connecting elements. The sample carrier has the advantage of a modular structure. Depending on the task and / or number of samples present, a substrate part of suitable size can be charged and attached to the base part. Depending on the number and arrangement of unoccupied anchoring elements, further substrate parts can be attached to the base part for cryosorption. This can be done simultaneously with the initial charge or separated in time during various stages of cryopreservation. Because of the modular attachment of one or more substrate parts to the base part, the use of the sample carrier is referred to herein as modular cryopreservation.
Im Unterschied zur nachträglichen Beschickung herkömmlicher Kryosubstrate können beim modularen Aufbau verschiedene Substratteile zu verschiedenen Zeitpunkten und/oder unter verschiedenen Bedingungen beschickt, in den gefrorenen Zustand überführt und am Basisteil verankert werden. Die bereits konservierten Proben bleiben unbeeinflusst. Die Kapazitäten des Probenträgers und der Kryoanlage können effektiver genutzt werden, als dies mit herkömmlichen Kryosubstraten der Fall war.in the Difference to the later Loading conventional Cryosubstrate can the modular structure different substrate parts to different Times and / or under different conditions, transferred to the frozen state and anchored to the base part. The already preserved samples stay unaffected. The capacities of the sample holder and the cryogenic plant can be used more effectively than with conventional cryosubstrates of Case was.
Der Probenträger stellt vorteilhafterweise ein autonomes Verbundbauteil dar, dass mit herkömmlichen Kryokonservierungstechniken kompatibel ist. Der Probenträger ist bspw. wie ein herkömmliches Kryosubstrat in einer Kryoanlage manipulierbar.Of the sample carrier represents advantageously an autonomous composite component that with conventional Cryopreservation techniques is compatible. The sample carrier is for example, like a conventional cryosubstrate Can be manipulated in a cryogenic plant.
Ein besonderer Vorteil der Erfindung besteht in der Einführung einer Modularität bei der Probenablage. Bei herkömmlichen Kryosubstraten war gegebenenfalls eine Modularität vorgesehen, die auf die Anordnung der Kryosubstrate in einer Kryoanlage beschränkt war. Damit war aber nicht die Flexibilität und Effektivität der Probenbeschickung erreichbar, die mit erfindungsgemäßen Probenträgern erstmalig ermöglicht wird. Der modulare Aufbau von Probenträgern, die typische Dimensionen im mm- bis cm-Bereich besitzen, eröffnet eine neue Dimension bei der Gestaltung von Substratchips. Modulare Komponenten können charakteristische Dimensionen im Bereich von 1 bis 500 μm, insbesondere 10 bis 100 μm, besitzen. Die Erfinder konnten zeigen, dass überraschenderweise kleinste Probenträgermodule reproduzierbar und kostengünstig hergestellt werden können und ihre Funktion selbst unter Kryokonservierungsbedingungen erhalten.One particular advantage of the invention is the introduction of a modularity during sample storage. In conventional Cryosubstrates was possibly a modularity provided on the arrangement the cryosubstrate was confined in a cryogenic plant. But that was not the flexibility and effectiveness reach the sample loading, which is made possible for the first time with sample carriers according to the invention. The modular structure of sample carriers, which have typical dimensions in the mm to cm range, opens one new dimension in the design of substrate chips. Modular components can characteristic dimensions in the range of 1 to 500 microns, in particular 10 to 100 μm, have. The inventors were able to show that, surprisingly, the smallest Sample carrier modules reproducible and cost-effective can be produced and maintain their function even under cryopreservation conditions.
Gemäß bevorzugten Ausführungsformen des Kryo-Probenträgers werden die Verankerungselemente durch Vertiefungen oder durch Vorsprünge am Basisteil gebildet, auf die die Verbindungselemente von Substratteilen aufschiebbar sind. Die Verankerungs- und Verbindungselemente besitzen Formen, die relativ zueinander komplementär sind. Ihre Innen- oder Außenformen sind vorzugsweise formschlüssig gestaltet. Durch die Aufschiebbarkeit der Elemente wird die Verwendbarkeit des Probenträgers vorteilhafterweise vereinfacht. Substratteile können automatisiert auch unter Kryobedingungen mit einfachen mechanischen Werkzeugen am Basisteil befestigt oder von diesem gelöst werden.According to preferred Embodiments of Cryogenic sample carrier The anchoring elements by depressions or projections on the base part formed, on which the connecting elements of substrate parts pushed are. The anchoring and connecting elements have shapes, which are complementary to each other. Your interior or exterior shapes are preferably form-fitting designed. By Aufschiebbarkeit the elements becomes the usability of the sample carrier advantageously simplified. Substrate parts can also be automated under Cryogenic conditions attached to the base part with simple mechanical tools or solved by this become.
Werden die Verankerungs- und Verbindungselemente durch Kombinationen aus Führungsnuten und Führungsschienen gebildet, so ergibt sich ein Vorteil für das gegenseitige Zusammenfügen der Elemente. Beispielsweise kann ein Substratteil durch einen eindimensionalen Schubvorgang am Basisteil befestigt werden.Become the anchoring and connecting elements by combinations of guide and guide rails formed, so there is an advantage for the mutual joining of the elements. For example, a substrate part may be formed by a one-dimensional Pushing be attached to the base part.
Das Basisteil umfasst eine Trägerplatte, an der die Verankerungselemente angeordnet sind. Die Trägerplatte ist vorzugsweise eben, was für eine raumsparende Anordnung einer Vielzahl von Probenträgern von Vorteil ist. Die Verankerungselemente sind je nach Aufbau des Probenträgers auf der ebenen Oberfläche der Trägerplatte und/oder an deren lateralem Rand vorgesehen. Ver ankerungselemente auf der Oberfläche der Trägerplatte besitzen den Vorteil, dass mit dem Basisteil eine definierte Grundfläche bereitgestellt wird, auf der ein oder mehrere Substratteile angeordnet werden können. Die Anordnung von Verankerungselementen am Rand der Trägerplatte ermöglicht hingegen einen Steckaufbau mit einer hohen Gestaltungsflexibilität. Basis- und Substratteile können an ihren Rändern mit zueinander komplimentären Verankerungs- und Verbindungselementen zweidimensional zu flächigen Verbunden und/oder dreidimensional zu Stapeln zusammengesetzt werden.The Base part comprises a support plate, where the anchoring elements are arranged. The carrier plate is preferably just what, for a space-saving arrangement of a variety of sample carriers of Advantage is. The anchoring elements are depending on the structure of the sample carrier the flat surface the carrier plate and / or provided at the lateral edge. Anchoring elements on the surface the carrier plate have the advantage that provided with the base part of a defined footprint is on which one or more substrate parts can be arranged. The Arrangement of anchoring elements on the edge of the carrier plate allows however, a plug-in structure with a high degree of design flexibility. Base- and substrate parts can at their edges with each other complimentary Anchoring and connecting elements two-dimensional to flat Connected and / or be assembled three-dimensionally into stacks.
Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist das Basisteil und/oder das mindestens eine Substratteil mit mindestens einer Datenspeichereinrichtung ausgestattet. Vorteilhafterweise können parallel zur Anbringung von Substratteilen auf dem Basisteil zugehörige Probendaten in der-Datenspeichereinrichtung abgelegt werden. According to one another preferred embodiment is the base part and / or the at least one substrate part with equipped at least one data storage device. advantageously, can be parallel associated sample data for mounting substrate parts on the base part stored in the data storage device.
Der Probenträger ist mit einer Abdeckeinrichtung ausgestattet, mit der Probenreservoire am mindestens einen Substratteil verschlossen werden. Mit der Abdeckeinrichtung wird die Kontaminationsgefahr ausgeschlossen. Die Ausstattung des Basisteils mit einer Abdeckplatte besitzt den Vorteil, dass das Basisteil mit der Form einer Kassette gebildet werden kann. Die Anbringung von Substratteilen erfolgt durch eine Kassettenöffnung, deren Fläche erheblich kleiner als die von den Probenreservoiren eingenommene Fläche ist und die einfach mit einer zusätzlichen Dichtung verschlossen werden kann. Die Verwendung einer zusätzlichen Abdeckfolie besitzt den Vorteil einer hohen Flexibilität, da die Abdeckeinrichtung an die jeweils verwendeten Substratteile angepasst werden kann.The sample carrier is equipped with a covering device, with which the sample reservoirs are closed on at least one substrate part. With the covering the risk of contamination is excluded. The equipment of the base part with a cover plate has the advantage that the base part can be formed in the form of a cassette. The attachment of substrate parts he follows through a cassette opening whose area is considerably smaller than the area occupied by the sample reservoirs and which can be easily closed with an additional seal. The use of an additional covering film has the advantage of high flexibility, since the covering device can be adapted to the substrate parts used in each case.
Weitere vorteilhafte Ausführungsformen betreffen die Formgebung des Substratteils, das insbesondere mit einem Griff ausgestattet sein und/oder Sollbruchstellen aufweisen kann, wodurch die Handhabbarkeit des Substratteils verbessert wird. Vorteilhafterweise können die Probenreservoire eine vorbestimmte geometrische Anordnung besitzen, z. B. eine gerade Reihe oder eine Matrix bilden, um bei der Kryokonservierung an eine gegebene Technik der Probenbeschickung oder verfügbare Formate von Mikro- oder Nanotiterplatten angepasst zu sein.Further advantageous embodiments relate to the shape of the substrate part, in particular with be equipped with a handle and / or can have predetermined breaking points, whereby the handling of the substrate part is improved. advantageously, can the sample reservoirs have a predetermined geometric arrangement, z. B. form a straight row or a matrix to in the cryopreservation to a given technique of sample loading or available formats be adapted from micro or nano-plates.
Weitere Vorteile und Einzelheiten des Kryo-Probenträgers werden aus der folgenden Beschreibung der beigefügten Zeichnungen ersichtlich. Es zeigen:Further Benefits and details of the cryosampler will be outlined below Description of the attached Drawings visible. Show it:
Die
Das
Basisteil
Gemäß einer
vorteilhaften Ausführungsform kann
das Basisteil
Das
Substratteil
An
einer Kante der Substratplatte
Die
Abdeckeinrichtung
Vorteilhafterweise
bildet der Probenträger gemäß den
Auf
der Oberseite der Substratplatte
Der
Probenträger
Die
Kassettenform des Probenträgers
Die
Flexibilität
der Anwendung erfindungsgemäßer Probenträger wird
erhöht,
falls die Substratteile mit Sollbruchstellen ausgestattet sind,
wie dies beispielhaft in
Die
Sollbruchstellen
Claims (8)
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