DE102021114585A1

DE102021114585A1 - Microtiter plate, components therefor, sample stage, microscope and related method

Info

Publication number: DE102021114585A1
Application number: DE102021114585.6A
Authority: DE
Inventors: Falk Schlaudraff
Original assignee: Leica Microsystems CMS GmbH
Current assignee: Leica Microsystems CMS GmbH
Priority date: 2021-06-07
Filing date: 2021-06-07
Publication date: 2022-12-08

Abstract

Die Erfindung betrifft eine Mikrotiterplatte (100) für eine mikroskopische Untersuchung oder Bearbeitung von Proben (150), aufweisend eine Bodenkomponente (110) und eine Rahmenkomponente (130), die mit der Bodenkomponente (110) lösbar verbunden ist, wobei die Bodenkomponente (110) einen oder mehrere Probenaufnahmebereiche (112) aufweist, die jeweils einen Probenaufnahmeboden (114) aufweisen und zur Aufnahme einer Probe (150) eingerichtet sind, wobei die Rahmenkomponente (130) eine oder mehrere Durchgangsöffnungen (132) aufweist, die jeweils einem der Probenaufnahmebereiche (112) der Bodenkomponente (110) zugeordnet sind und in verbundenem Zustand den entsprechenden Probenaufnahmebereich (112) erweitern und damit eine Probenkammer (120) bilden. Die Erfindung betrifft eine solche Bodenkomponente (110), eine solche Rahmenkomponente (130), einen Probentisch und ein Mikroskop hierfür sowie ein entsprechendes Verfahren.The invention relates to a microtiter plate (100) for microscopic examination or processing of samples (150), having a base component (110) and a frame component (130) which is detachably connected to the base component (110), the base component (110) has one or more sample receiving areas (112), which each have a sample receiving floor (114) and are set up to receive a sample (150), wherein the frame component (130) has one or more through-openings (132), each of which corresponds to one of the sample receiving areas (112 ) are assigned to the base component (110) and in the connected state expand the corresponding sample receiving area (112) and thus form a sample chamber (120). The invention relates to such a base component (110), such a frame component (130), a sample table and a microscope for this, and a corresponding method.

Description

Technischer BereichTechnical part

Die vorliegende Erfindung betrifft eine Mikrotiterplatte für eine mikroskopische Untersuchung oder Bearbeitung von Proben, insbesondere in der Lasermikrodissektion, Komponenten hierfür, einen Probentisch, ein Mikroskop sowie ein entsprechendes Verfahren.The present invention relates to a microtiter plate for a microscopic examination or processing of samples, in particular in laser microdissection, components therefor, a sample table, a microscope and a corresponding method.

Hintergrundbackground

Bei der mikroskopischen Untersuchung oder Bearbeitung von Proben, insbesondere biologischen Proben wie z.B. Zellen, bevorzugt auch bei der Lasermikrodissektion, kommen sog. Mikrotiterplatten (auch als Multiwellplatten bezeichnet) zum Einsatz. Dabei handelt es sich um plattenförmige Vorrichtungen, die eine Vielzahl von kleinen Aufnahmebereichen bzw. Probenkammern (meist zylinderförmige Ausnehmungen) aufweisen, in die jeweils Proben eingebracht werden können. Auf diese Weise können mehrere (auch verschiedene) Proben einfach und schnell hintereinander untersucht oder bearbeitet werden. Solche Mikrotiterplatten und deren Verwendung sind z.B. in der EP 2 069 749 B1 offenbart.So-called microtiter plates (also referred to as multiwell plates) are used in the microscopic examination or processing of samples, in particular biological samples such as cells, preferably also in laser microdissection. These are plate-shaped devices that have a large number of small receiving areas or sample chambers (usually cylindrical recesses) into which samples can be introduced. In this way, several (even different) samples can be examined or processed quickly and easily one after the other. Such microtiter plates and their use are, for example, in EP 2 069 749 B1 disclosed.

Eine Mikrotiterplatte wird zum Zwecke der Untersuchung bzw. Bearbeitung der Proben typischerweise auf einen Probentisch des Mikroskops aufgelegt. Aufgrund der Anordnung der Proben in solchen Probenkammern kann es allerdings dazu kommen, dass ein Objektiv eines Mikroskops nur unzureichend nahe an die Proben herankommt.A microtiter plate is typically placed on a sample table of the microscope for the purpose of examining or processing the samples. Due to the arrangement of the samples in such sample chambers, however, it can happen that an objective of a microscope does not come close enough to the samples.

Offenbarungepiphany

Vor diesem Hintergrund besteht Bedarf nach verbesserter Handhabung von Proben im Zusammenhang mit Mikrotiterplatten. Gemäß Ausführungsformen der Erfindung werden eine Mikrotiterplatte, eine Boden- und eine Rahmenkomponente hierfür, ein Probentisch, ein Mikroskop sowie ein entsprechendes Verfahren mit den Merkmalen der unabhängigen Patentansprüche vorgeschlagen. Vorteilhafte Ausgestaltungen sind Gegenstand der Unteransprüche sowie der nachfolgenden Beschreibung.Against this background, there is a need for improved sample handling in connection with microtiter plates. According to embodiments of the invention, a microtiter plate, a base and a frame component therefor, a sample table, a microscope and a corresponding method with the features of the independent patent claims are proposed. Advantageous configurations are the subject of the dependent claims and the following description.

Eine Ausführungsform der Erfindung betrifft eine Mikrotiterplatte für eine mikroskopische Untersuchung oder Bearbeitung von Proben. Als Untersuchung kommt z.B. die Beobachtung oder (fotografische) Aufnahme in Betracht, als Bearbeitung insbesondere die sog. Lasermikrodissektion. Hierbei werden bestimmte Bereiche aus den Proben, die in Probenkammern der Mikrotiterplatte eingebracht sind, unter Verwendung eines Lasers und unter Beobachtung im Mikroskop ausgeschnitten. Hierzu ist typischerweise eine zusätzliche Auffangebene (oder ggf. auch eine Auffangplatte) vorgesehen, in der die ausgeschnittenen Bereiche aufgefangen werden können. Für nähere Details zur Lasermikrodissektion sei auch auf die noch folgenden Ausführungen verwiesen.One embodiment of the invention relates to a microtiter plate for microscopic examination or processing of samples. Observation or (photographic) recording, for example, can be considered as an examination, and so-called laser microdissection in particular as a treatment. In this case, specific areas are cut out of the samples that are placed in the sample chambers of the microtiter plate using a laser and under observation under a microscope. For this purpose, an additional collecting level (or possibly also a collecting plate) is typically provided, in which the cut-out areas can be collected. For more details on laser microdissection, please refer to the following statements.

Bei einer typischen Mikrotiterplatte sind, wie erwähnt, mehrere Probenkammern vorgesehen. Bei einer solchen Probenkammer handelt es sich um Aufnahmeöffnungen mit Boden, die in der Platte angeordnet sind. Mit andere Worten können in die Oberfläche der Platte Vertiefungen eingebracht sein, die diese Probenkammern bilden. Ein solche typische Mikrotiterplatte kann z.B. aus einem Kunststoff geformt oder gegossen sein; üblich sind auch spezielle Membranen als Boden der Probenkammern. Proben, die darin typischerweise eingebracht und dann untersucht oder bearbeiten werden, sind, wie schon erwähnt, z.B. Zellen oder andere biologische oder organische Proben, insbesondere auch lebende Proben. Insofern muss in der Regel auch ein Nährmedium (oder sonstiges Fluid oder Medium) mit in die Probenkammer eingebracht werden. Dies erfordert eine gewisse Höhe der Probenkammern und damit der Mikrotiterplatten. Die Höhe ist in diesem Sinne in eine Richtung senkrecht zu dem Boden der Probenkammern definiert; außerdem ist diese Richtung dann - bei Anordnung der Mikrotiterplatte im Mikroskop bzw. auf einem Probentisch dort - auch parallel zur optischen Achse des Mikroskops.As mentioned, in a typical microtiter plate, several sample chambers are provided. Such a sample chamber involves bottomed receiving openings arranged in the plate. In other words, depressions that form these sample chambers can be introduced into the surface of the plate. For example, such a typical microtiter plate may be molded or cast from a plastic; Special membranes are also common as the bottom of the sample chambers. Samples that are typically introduced therein and then examined or processed are, as already mentioned, e.g. cells or other biological or organic samples, in particular also living samples. In this respect, a nutrient medium (or other fluid or medium) must generally also be introduced into the sample chamber. This requires the sample chambers and thus the microtiter plates to be of a certain height. The height is defined in this sense in a direction perpendicular to the bottom of the sample chambers; moreover, this direction is then—when the microtiter plate is arranged in the microscope or on a sample table there—also parallel to the optical axis of the microscope.

Ein gewisses Problem bei solchen Mikrotiterplatten ist dabei, wie sich herausgestellt hat, die Höhe der Probenkammern, die insbesondere bei aufrechten Stativen (von verwendeten Mikroskopen) das Fokussieren auf den Boden der Probenkammern (auch als Wellboden bezeichnet) erschwert, jedenfalls ohne die Mikrotiterplatte umzudrehen und das Fluid oder Nährmedium zu verschütten; somit sind in der Regel nur geringe Vergrößerungen möglich. Bei inversen Mikroskopen können die Proben zwar von unten her, d.h. von Seiten des Bodens der Probenkammern, beobachtet und ggf. auch dissektiert werden, die Höhe der Probenkammern limitiert dann jedoch das Auffangen der Proben. Typische Probenkammern sind dafür schlichtweg zu hoch.A certain problem with such microtiter plates, as has been found, is the height of the sample chambers, which makes it difficult to focus on the bottom of the sample chambers (also known as the well bottom), especially with upright stands (of the microscopes used), at least without turning the microtiter plate around and spill the fluid or culture medium; thus only small enlargements are usually possible. With inverted microscopes, the samples can be observed from below, i.e. from the side of the bottom of the sample chambers, and possibly also dissected, but the height of the sample chambers then limits the collection of the samples. Typical sample chambers are simply too high for this.

Vor diesem Hintergrund wird, in einer Ausführungsform der Erfindung, vorgeschlagen, dass die Mikrotiterplatte eine Bodenkomponente und eine Rahmenkomponente, die mit der Bodenkomponente lösbar verbunden ist, aufweist. Eine solche lösbare Verbindung kann z.B. magnetisch ausgebildet sein. Die Bodenkomponente wiederum weist einen oder mehrere Probenaufnahmebereiche auf, die jeweils einen Probenaufnahmeboden aufweisen und zur Aufnahme einer Probe eingerichtet sind. Die die Rahmenkomponente weist eine oder mehrere Durchgangsöffnungen auf, die jeweils einem der Probenaufnahmebereiche der Bodenkomponente zugeordnet sind und in verbundenem Zustand den entsprechenden Probenaufnahmebereich erweitern und damit eine Probenkammer bilden. In verbundenem Zustand erweitern dabei aber die eine oder die mehreren Durchgangsöffnungen insbesondere jeweils den entsprechenden Probenaufnahmebereich um zumindest einen Teil eines durch die jeweilige Durchgangsöffnung definierten Volumens. Unter einer lösbaren Verbindung von Bodenkomponente und Rahmenkomponente ist dabei insbesondere zu verstehen, dass beide Komponenten z.B. von Hand zusammengesteckt werden können und dann insbesondere auch fluiddicht sind. Ebenso können beide Komponenten dann aber z.B. von Hand wieder auseinandergenommen werden. Dies kann z.B. durch eine passgenaue Abstimmung des Durchmessers der Durchgangsöffnungen und dem Gegenstück in der Bodenkomponente erreicht werden. Ein etwaiges Spiel sollte insofern zweckmäßigerweise nicht vorhanden sein. Grundsätzlich denkbar ist aber auch eine zusätzliche Verbindungseinrichtung wie z.B. Klips-Verbindungen.Against this background, it is proposed in one embodiment of the invention that the microtiter plate has a base component and a frame component that is detachably connected to the base component. Such a detachable connection can, for example, be designed magnetically. The base component in turn has one or more sample receiving areas, each of which has a sample receiving base and is set up to receive a sample. The frame component has one or more through openings, each with a are associated with the sample receiving areas of the soil component and extend the corresponding sample receiving area in the connected state and thus form a sample chamber. In the connected state, however, the one or more through-openings expand in particular the respective sample receiving area by at least part of a volume defined by the respective through-opening. A detachable connection of floor component and frame component is to be understood in particular in that both components can be plugged together, for example by hand, and are then in particular also fluid-tight. Likewise, both components can then be taken apart again, for example by hand. This can be achieved, for example, by precisely matching the diameter of the through-openings and the counterpart in the base component. A possible play should expediently not be present in this respect. In principle, however, an additional connection device such as clip connections is also conceivable.

Auf diese Weise werden also Probenkammern wie bisher gebildet und können auch entsprechend verwendet werden (z.B. durch entsprechende Roboter), durch die zwei Komponenten - Bodenkomponente und Rahmenkomponente - ist es aber möglich, die Rahmenkomponente nach Einbringen der Proben zu entfernen. Damit wird die verbleibende Höhe der Probenkammern - oder dann nur noch die Aufnahmebereiche mit ggf. niedrigem Rand - deutlich reduziert. Dies erleichtert die Untersuchung sowie Bearbeitung erheblich, insbesondere kann ein Objektiv deutlich näher an die Probe herangebracht werden als bei üblichen Mikrotiterplatten. Sofern ein Fluid wie Nährmedium in die Probenkammer eingebracht ist, so kann dies vor der Untersuchung ggf. auch zumindest zum Teil entfernt werden, insbesondere bevor die Rahmenkomponente vor der Untersuchung bzw. Bearbeitung abgenommen wird. Bei der vorgeschlagenen Mikrotiterplatte handelt es sich damit zum eine zweiteilige Mikrotiterplatte.In this way, sample chambers are formed as before and can also be used accordingly (e.g. by appropriate robots), but due to the two components - base component and frame component - it is possible to remove the frame component after the samples have been introduced. This significantly reduces the remaining height of the sample chambers - or then only the receiving areas with possibly a low edge. This considerably simplifies the examination and processing; in particular, a lens can be brought much closer to the sample than with conventional microtiter plates. If a fluid such as a nutrient medium is introduced into the sample chamber, this can also be at least partially removed before the examination, in particular before the frame component is removed before the examination or processing. The proposed microtiter plate is therefore a two-part microtiter plate.

Vorzugsweise weisen die eine oder die mehreren Probenkammern jeweils eine Grundfläche und eine Höhe auf, wobei die Grundfläche jeweils durch den jeweiligen Probenaufnahmebereich definiert ist. Die Höhe der Probenkammer, gemessen senkrecht zur Oberfläche der Probenaufnahmeböden, entspricht dann jeweils einer gemeinsamen Höhe der Bodenkomponente und der Rahmenkomponente in verbundenem Zustand. Mit anderen Worten ist die (gemeinsame) Höhe in verbundenem Zustand höher bzw. größer als nur die Höhe der (separaten) Bodenkomponente. Besonders bevorzugt ist die Höhe der Bodenkomponente, gemessen senkrecht zur Oberfläche der Probenaufnahmeböden, geringer ist als die Höhe der Probenkammern, insbesondere beträgt sie weniger als die Hälfte. Denkbar ist aber auch, dass die Höhe der Bodenkomponente zumindest geringer ist als ein Viertel oder Dreiviertel der Höhe der Probenkammern.Preferably, the one or more sample chambers each have a base area and a height, with the base area being defined by the respective sample receiving area. The height of the sample chamber, measured perpendicularly to the surface of the sample receiving base, then corresponds to a common height of the base component and the frame component in the connected state. In other words, the (common) height when connected is higher than just the height of the (separate) floor component. The height of the base component, measured perpendicularly to the surface of the sample receiving bases, is particularly preferably less than the height of the sample chambers, in particular it is less than half. However, it is also conceivable that the height of the floor component is at least less than a quarter or three-quarters of the height of the sample chambers.

Insbesondere ist es zweckmäßig, wenn die Höhe der Bodenkomponente derart gewählt ist, dass auch beim minimalen Abstand, den ein gewünschtes Objektiv vom Probentisch bzw. von dessen Oberfläche haben kann (bei entsprechender Fokussierung), diese Bodenkomponente noch zwischen Probentisch und Objektiv eingebracht sein kann. Wenn dieser minimale Abstand z.B. 0,25 mm beträgt (dies ist z.B. bei typischen Objektiven der Anmelderin zur Lasermikrodissektion mit 150-facher Vergrößerung der Fall), so kann die Höhe der Bodenkomponente z.B. 0,24 mm betragen. Ein typisches Objektiv der Anmelderin zur Lasermikrodissektion mit 63-facher Vergrößerung hat z.B. einen minimalen Abstand von 2,6 mm. Hier kann die Höhe der Bodenkomponente z.B. 2,5 mm betragen. Bei einer Höhe der Bodenkomponente von 2,5 mm können in der Praxis in der Regel bereits 99% der Anwendungsfälle abgedeckt werden. Diese Beispiele zeigen, dass durch diese vorgeschlagene zweiteilige Mikrotiterplatte deutlich bereitere bzw. mehr Anwendungsfälle ermöglicht werden als mit herkömmlichen (einteiligen) Mikrotiterplatten. Die konkrete Höhe kann grundsätzlich aber auch nach gewünschter Verwendung mit bestimmten Mikroskopen und Objektiven ausgerichtet sein. Eine geringe Höhe der Bodenkomponente erlaubt jedenfalls aber sehr breite und vielfältige Anwendungsmöglichkeiten, insbesondere im Vergleich zu üblichen Mikrotiterplatten mit einer Höhe von mehreren Millimeter, z.B. 10 mm oder mehr.In particular, it is expedient if the height of the base component is selected in such a way that even at the minimum distance that a desired objective can have from the sample table or its surface (with appropriate focusing), this base component can still be introduced between the sample table and the objective. If this minimum distance is, for example, 0.25 mm (this is the case, for example, with the applicant's typical lenses for laser microdissection with a magnification of 150x), then the height of the bottom component can be, for example, 0.24 mm. For example, Applicant's typical lens for laser microdissection with a magnification of 63x has a minimum distance of 2.6 mm. Here the height of the base component can be 2.5 mm, for example. With a base component height of 2.5 mm, 99% of applications can usually be covered in practice. These examples show that this proposed two-piece microtiter plate enables significantly more or more applications than with conventional (one-piece) microtiter plates. In principle, however, the specific height can also be adjusted according to the desired use with specific microscopes and lenses. In any case, a low height of the bottom component allows for very broad and varied possible applications, in particular in comparison to conventional microtiter plates with a height of several millimeters, e.g. 10 mm or more.

Ein Durchmesser und damit auch das Volumen der einzelnen Probenkammern richtet sich dann typischerweise nach der Anzahl an Probenkammern in der Mikrotiterplatte. Je mehr Probenkammern, desto geringer werden in der Regel Durchmesser und Volumen einer einzelnen Probenkammer sein. Trotzdem lässt sich im verbundenen Zustand bei der vorgeschlagenen Mikrotiterplatte ein vergleichbares Volumen der einzelnen Probenkammern bei vergleichbarer Anzahl an Probenkammern wie bei herkömmlichen Mikrotiterplatten erzielen und die zusammengesteckte Mikrotiterplatte entsprechend herkömmlichen Mikrotiterplatten verwenden, z.B. bei Verwendung mit oder durch Laborautomationsroboter und/oder Pipettierroboter.A diameter and thus also the volume of the individual sample chambers then typically depends on the number of sample chambers in the microtiter plate. As a rule, the more sample chambers, the smaller the diameter and volume of an individual sample chamber will be. Nevertheless, in the connected state with the proposed microtiter plate, a comparable volume of the individual sample chambers with a comparable number of sample chambers can be achieved as with conventional microtiter plates and the assembled microtiter plate can be used in accordance with conventional microtiter plates, e.g. when used with or by laboratory automation robots and/or pipetting robots.

Zweckmäßig ist es, wenn die Mikrotiterplatte mehrere Probenkammern und damit mehrere Probenaufnahmebereiche in der Bodenplatte und entsprechend mehrere Durchgangsöffnungen in der Rahmenkomponente aufweist. Bevorzugt sind dabei 96, 384 oder 1536 Probenaufnahmen bzw. Durchgangsöffnungen. Die Anordnung ist zweckmäßigerweise in Form einer Matrix, also z.B. acht Reihen zu je zwölf Probenaufnahmen bzw. Durchgangsöffnungen (für den Fall von 96 insgesamt). Dies erlaubt eine gewisse Standardisierung (entsprechend Laborstandards).It is expedient if the microtiter plate has a number of sample chambers and thus a number of sample receiving areas in the base plate and correspondingly a number of through-openings in the frame component. 96, 384 or 1536 sample holders or passage openings are preferred. The arrangement is conveniently in Form of a matrix, ie, for example, eight rows of twelve sample receptacles or passage openings (in the case of 96 in total). This allows some standardization (according to laboratory standards).

Vorteilhafterweise sind der eine oder die mehreren Probenaufnahmeböden der Bodenkomponente jeweils durch eine Membran gebildet. Diese Membran ist dabei an einer Halterung angebracht, die jeweils zur Verbindung mit der zugeordneten Durchgangsöffnung der Rahmenkomponente eingerichtet ist. Eine solche Halterung dient dabei zur insbesondere fluiddichten Verbindung des betreffenden Probenaufnahmebodens mit der zugehörigen Durchgangsöffnung bzw. deren Umrahmung in der Rahmenkomponente. Zudem kann eine solche Halterung zugleich selbst einen gewissen Rand für den betreffenden Probenaufnahmebereich - bei abgenommener Rahmenkomponente - bilden. Insbesondere erlaubt eine solche Halterung aber eine Befestigung der Membran. Wenn die Bodenkomponente mehrere Probenaufnahmebereiche aufweist, sind die mehreren Probenaufnahmeböden zweckmäßigerweise durch eine gemeinsame Membran gebildet. Insbesondere ist dann jedem Probenaufnahmebereich eine Halterung zugeordnet, wobei die mehreren Halterungen dann miteinander verbunden sind. Dies kann z.B. in Form einer dünnen Platte mit Öffnungen erreicht werden, auf welche Platte eine Membran aufgebracht und befestigt ist. Diese Öffnungen bilden zusammen mit der Membran (bzw. dem Teil der Membran, der sich im Bereich der Öffnung befindet) die Probenaufnahme, die Platte mit Öffnungen bildet die Halterungen.Advantageously, the one or more sample receiving bases of the base component are each formed by a membrane. In this case, this membrane is attached to a holder which is set up in each case for connection to the associated through-opening of the frame component. Such a holder is used for the particularly fluid-tight connection of the sample receiving base in question to the associated through-opening or its frame in the frame component. In addition, such a holder can at the same time itself form a certain edge for the sample receiving area in question—when the frame component is removed. In particular, however, such a holder allows the membrane to be fastened. If the floor component has several sample receiving areas, the several sample receiving floors are expediently formed by a common membrane. In particular, each sample receiving area is then assigned a holder, with the plurality of holders then being connected to one another. This can be achieved, for example, in the form of a thin plate with apertures, to which plate a membrane is applied and attached. Together with the membrane (or the part of the membrane that is located in the area of the opening), these openings form the sample holder, the plate with openings forms the holders.

Die Membran ist bevorzugt zur Verwendung in der Lasermikrodissektion geeignet oder eingerichtet, d.h. sie ist laserschneidbar ausgebildet. Darunter ist insbesondere zu verstehen, dass die Membran (insbesondere problemlos) von einem Laser, wie er bei der Lasermikrodissektion verwendet wird, schneidbar ist. Außerdem sollte die Membran keine Veränderungen der (insbesondere biologischen bzw. lebenden) Proben hervorrufen, insbesondere keine Veränderungen der Morphologie der Proben (Zellkulturen). Besonders zweckmäßig ist es, wenn die Membran wenigstens ein Material aufweist oder daraus besteht, das ausgewählt ist aus der Gruppe: Polyethylennaphthalat (PEN), Polyethylenterephthalat (PET), Polyphenylensulfid (PPS), Polyester und Fluorpolymer (Fluorkunststoff, also Polymere auf Basis von Fluorcarbonen). Insbesondere, aber nicht nur, PEN verändert die angesprochene Morphologie der Proben z.B. nicht.The membrane is preferably suitable or set up for use in laser microdissection, i.e. it is designed to be laser-cuttable. This is to be understood in particular as meaning that the membrane can be cut (in particular without any problems) by a laser such as is used in laser microdissection. In addition, the membrane should not cause any changes in the (in particular biological or living) samples, in particular no changes in the morphology of the samples (cell cultures). It is particularly expedient if the membrane has or consists of at least one material selected from the group: polyethylene naphthalate (PEN), polyethylene terephthalate (PET), polyphenylene sulfide (PPS), polyester and fluoropolymer (fluoroplastic, i.e. polymers based on fluorocarbons). ). In particular, but not only, PEN does not change the morphology of the samples mentioned, for example.

Die erwähnte Halterung bzw. die mehreren Halterungen weisen vorzugweise wenigstens eines von Metall und Kunststoff auf, bestehen insbesondere sogar daraus. Besonders bevorzugt bestehen sie aus mit Kunststoff ummanteltem Metall. Für die Rahmenkomponente gilt insbesondere das gleiche, d.h. diese weist vorzugweise wenigstens eines von Metall und Kunststoff auf, besteht insbesondere sogar daraus. Besonders bevorzugt besteht auch sie aus mit Kunststoff ummanteltem Metall. Insbesondere bei der Rahmenkomponente erlaubt die Verwendung von Metall z.B., dass eine Temperatur der Rahmenkomponente (und damit der Probenkammern) länger erhalten bleibt, wenn die Mikrotiterplatte z.B. aus einer Inkubationskammer mit gewünschter Temperatur entnommen wird. Weiterhin erlaubt Metall das Verwenden von Magneten, um ein einfaches, positionsgenaues Zusammenstecken und Auseinandernehmen der Komponenten zu erleichtern. Insofern weist z.B. die Rahmenkomponente Metall auf und die Bodenkomponente einen oder mehrere Magnete, sodass beide Komponenten lösbar miteinander verbindbar sind. Dies kann auch anders herum sein, ebenso können beide Komponenten Metall aufweisen und eine oder beide können dann Magnete aufweisen.The holder mentioned or the plurality of holders preferably have at least one of metal and plastic, in particular even consist of it. They particularly preferably consist of metal coated with plastic. The same applies in particular to the frame component, i.e. it preferably has at least one of metal and plastic, in particular even consists of it. Particularly preferably, it also consists of metal encased in plastic. In the case of the frame component in particular, the use of metal allows, for example, a temperature of the frame component (and thus of the sample chambers) to be maintained for longer when the microtiter plate is removed, for example, from an incubation chamber with the desired temperature. Furthermore, metal allows the use of magnets to facilitate easy, precisely positioned mating and disassembling of the components. In this respect, for example, the frame component has metal and the base component has one or more magnets, so that both components can be connected to one another in a detachable manner. This can also be the other way around, just as both components can have metal and one or both can then have magnets.

Neben der Mikrotiterplatte betreffen Ausführungsformen der Erfindung auch sowohl eine Bodenkomponente zur Verwendung mit einer Rahmenkomponente als Mikrotiterplatte, als auch eine Rahmenkomponente zur Verwendung mit einer Bodenkomponente als Mikrotiterplatte.In addition to the microtiter plate, embodiments of the invention also relate to both a base component for use with a frame component as a microtiter plate and a frame component for use with a base component as a microtiter plate.

Die Bodenkomponente weist dann insbesondere einen oder mehrere Probenaufnahmebereiche auf, die jeweils einen Probenaufnahmeboden (aufweisen und zur Aufnahme einer Probe eingerichtet sind. Zudem ist die Bodenkomponente zur lösbaren Verbindung mit der Rahmenkomponente eingerichtet, z.B. durch eine entsprechende Halterung. Der eine oder die mehreren Probenaufnahmebereiche sind jeweils einer Durchgangsöffnung der Rahmenkomponente zuordenbar, sodass in verbundenem Zustand der entsprechende Probenaufnahmebereich erweitert und damit eine Probenkammer gebildet wird.The floor component then has in particular one or more sample receiving areas, each of which has a sample receiving floor (and is set up to hold a sample. In addition, the floor component is set up for detachable connection to the frame component, e.g. by means of a corresponding holder. The one or more sample receiving areas are can each be assigned to a passage opening of the frame component, so that in the connected state the corresponding sample receiving area is expanded and a sample chamber is thus formed.

Die Rahmenkomponente ist insbesondere zur lösbaren Verbindung mit der Bodenkomponente eingerichtet, z.B. durch entsprechende Form der Durchgangsöffnungen, die mit Halterungen der Bodenkomponente zusammenwirken, ggf. magnetisch unterstützt. Die Rahmenkomponente weist eine oder mehrere Durchgangsöffnungen auf, die jeweils einem Probenaufnahmebereich der Bodenkomponente zuordenbar sind, sodass in verbundenem Zustand der entsprechende Probenaufnahmebereich erweitert und damit eine Probenkammer gebildet wird.The frame component is designed in particular for a detachable connection to the floor component, e.g. by means of a corresponding shape of the through-openings, which interact with holders of the floor component, possibly supported magnetically. The frame component has one or more through openings, each of which can be assigned to a sample receiving area of the base component, so that the corresponding sample receiving area is expanded in the connected state and a sample chamber is thus formed.

Hinsichtlich näherer Erläuterungen sowie insbesondere bevorzugter Ausführungsformen von Bodenkomponente und Rahmenkomponente sei auf die vorstehenden Ausführungen zur Mikrotiterplatte verwiesen, die hier entsprechend gelten, zumal die Mikrotiterplatte Bodenkomponente und Rahmenkomponente umfasst.With regard to more detailed explanations and particularly preferred embodiments of the floor component and frame component referred to the above statements on the microtiter plate, which apply here accordingly, especially since the microtiter plate comprises a base component and a frame component.

Ausführungsformen der Erfindung betreffen außerdem einen Probentisch für ein Mikroskop sowie ein Mikroskop mit einem solchen Probentisch. Bei dem Mikroskop handelt es sich insbesondere um eines, das zur Lasermikrodissektion eingerichtet ist, also insbesondere einen entsprechenden Laser aufweist. Für nähere Erläuterungen zu einem beispielhaften Mikroskop zur Lasermikrodissektion sowie dessen grundlegenden Aufbau (ggf. abgesehen vom konkreten Probentisch) sei an dieser Stelle auch auf die EP 2 069 749 B1 oder die DE 100 18 253 C2 verwiesen.Embodiments of the invention also relate to a sample table for a microscope and a microscope with such a sample table. The microscope is in particular one that is set up for laser microdissection, ie in particular has a corresponding laser. For more detailed explanations of an exemplary microscope for laser microdissection and its basic structure (possibly apart from the specific sample table), please also refer to the EP 2 069 749 B1 or the DE 100 18 253 C2 referred.

Der erwähnte Probentisch ist zur Aufnahme von zumindest einer Bodenkomponente der vorgeschlagenen Mikrotiterplatte bzw. der vorgeschlagenen Bodenkomponente eingerichtet. Dabei weist der Probentisch einen Positionierungsmechanismus auf, der derart ausgebildet ist, dass die Bodenkomponente horizontal bewegbar ist, und zwar insbesondere derart, dass jeder einzelne Probenaufnahmebereich der Bodenkomponente zur Untersuchung oder Bearbeitung unter oder oberhalb bzw. vor einem Objektiv des Mikroskops positionierbar ist. Dies erfordert z.B. eine Verschiebbarkeit der Bodenkomponente in zwei zueinander senkrechten Richtungen (beide lateral zur optischen Achse des Mikroskops bzw. auf einer Ebene des Probentischs) um die jeweilige Abmessung der Bodenkomponente (Verfahrbereich des Mikroskop- bzw. Probentisches der Probenebene).The sample table mentioned is set up to accommodate at least one base component of the proposed microtiter plate or the proposed base component. The sample table has a positioning mechanism that is designed in such a way that the base component can be moved horizontally, in particular in such a way that each individual sample receiving area of the base component can be positioned below or above or in front of an objective of the microscope for examination or processing. This requires, for example, the ability to move the bottom component in two mutually perpendicular directions (both lateral to the optical axis of the microscope and on a plane of the sample table) by the respective dimension of the bottom component (moving range of the microscope or sample table of the sample plane).

Eine typische Mikrotiterplatte hat z.B. Maße von 128 mm auf 86 mm. Dies gilt dann insbesondere auch für die Bodenkomponente (wobei auch geringe Abweichungen möglich sind). Der Positionierungsmechanismus oder der Probentisch ist dann insbesondere derart eingerichtet ist, dass die Bodenkomponente lateral (gesehen relativ zur optischen Achse des Mikroskops bzw. horizontal auf dem Probentisch) und insbesondere auch vertikal fixierbar ist. Um die genannten Abmessungen (oder ggf. etwas weniger) sollte die Bodenkomponente durch den Positionierungsmechanismus dann verschiebbar sein. Dabei versteht sich, dass die genannten Abmessungen nur beispielhaft sind. Insbesondere ist der Probentisch aber dazu eingerichtet, in vertikaler Richtung eine Bodenkomponente mit einer Höhe von z.B. zwischen 0,25 mm und 2,5 mm oder auch genau eines davon (oder allgemein mit einer Höhe von bis zu 3 mm) zu fixieren. Dies gilt insbesondere auch dann, wenn die Bodenkomponente auf dem Probentisch im Mikroskop aufgebracht/fixiert ist und ein Objektiv des Mikroskops in gewünschtem Abstand von z.B. 0,25 mm oder 3 mm zur Oberfläche des Probentisches positioniert ist.For example, a typical microtiter plate has dimensions of 128 mm by 86 mm. This also applies in particular to the soil component (although small deviations are also possible). The positioning mechanism or the sample table is then set up in particular in such a way that the base component can be fixed laterally (seen relative to the optical axis of the microscope or horizontally on the sample table) and in particular also vertically. The base component should then be displaceable by the stated dimensions (or possibly a little less) by the positioning mechanism. It goes without saying that the dimensions mentioned are only examples. In particular, however, the sample table is set up to fix a base component with a height of, for example, between 0.25 mm and 2.5 mm or exactly one of them (or generally with a height of up to 3 mm) in the vertical direction. This also applies in particular when the bottom component is applied/fixed to the sample table in the microscope and an objective of the microscope is positioned at the desired distance of e.g. 0.25 mm or 3 mm from the surface of the sample table.

In diesem Zusammenhang sei auch erwähnt, dass mit einem solchen Probentisch übliche Mikrotiterplatten nicht verwendet werden können, jedenfalls nicht mit der erwähnten Position des Objektivs mit geringem Abstand.In this context it should also be mentioned that conventional microtiter plates cannot be used with such a sample table, at least not with the mentioned position of the objective with a small distance.

Eine Ausführungsform der Erfindung betrifft außerdem eine Verwendung einer Mikrotiterplatte, wie erwähnt, zur Lasermikrodissektion als eine Bearbeitung der Proben.An embodiment of the invention also relates to the use of a microtiter plate, as mentioned, for laser microdissection as a processing of the samples.

Eine weitere Ausführungsform der Erfindung betrifft außerdem ein Verfahren zur mikroskopischen Untersuchung oder Bearbeitung von Proben unter Verwendung einer Mikrotiterplatte wie vorstehend in verschiedenen Ausführungsformen beschrieben. Insbesondere kommt als Bearbeitung dabei die Lasermikrodissektion in Betracht. Grundsätzlich werden Proben zunächst je nach Wunsch oder Experiment in die Probenkammern eingebracht, insbesondere auch zusätzlich ein Fluid wie Nährmedium. Die Proben werden dann z.B. kultiviert. Es wird dann, wenn eine oder mehrere Proben in die durch die Probenaufnahmebereiche gebildeten Probenkammern eingebracht sind, vor der Untersuchung oder Bearbeitung die Rahmenkomponente entfernt. Wenn in den Probekammern ein Fluid wie Nährmedium oder Nährflüssigkeit, eingebracht ist, wird dieses Fluid vor der Entfernung der Rahmenkomponente jeweils wenigstens zum Teil aus der Probenkammer entfernt. Dies kann z.B. durch gezieltes Abschütten oder auch durch Verwendung einer Pipette oder einer ähnlichen Vorrichtung erfolgen. Grundsätzlich kann, auch bei der Lasermikrodissektion aber auch eine gewisse Menge an Fluid oder Nährmedium in der Probenkammer - und nach Entfernen der Rahmenkomponente dann in dem Probenaufnahmebereich der Bodenkomponente - verbleiben. Wie sich gezeigt hat, wird durch eine geringe Menge an Fluid die Probe auf der Membran gehalten (durch Oberflächenspannungen), ein Ausschneiden ist dann möglich (vgl. hierzu z.B. „O. Podgorny, Live cell isolation by laser microdissection with gravity Transfer, Journal of Biomedical Optics 18(5), 055002, May 2013).A further embodiment of the invention also relates to a method for the microscopic examination or processing of samples using a microtiter plate as described above in various embodiments. In particular, laser microdissection can be considered as processing. In principle, samples are initially introduced into the sample chambers, depending on the request or experiment, in particular a fluid such as a nutrient medium is also added. The samples are then cultured, for example. When one or more samples are placed in the sample chambers formed by the sample receiving areas, the frame component is removed prior to examination or processing. If a fluid such as a nutrient medium or nutrient liquid is introduced into the sample chambers, this fluid is in each case at least partially removed from the sample chamber before the frame component is removed. This can be done, for example, by deliberately pouring it off or by using a pipette or a similar device. Basically, even with laser microdissection, a certain amount of fluid or nutrient medium can remain in the sample chamber—and then in the sample receiving area of the base component after the frame component has been removed. As has been shown, the sample is held on the membrane by a small amount of fluid (by surface tension), cutting out is then possible (cf. e.g. "O. Podgorny, Live cell isolation by laser microdissection with gravity transfer, Journal of Biomedical Optics 18(5), 055002, May 2013).

Wie schon eingangs erwähnt, kann bei der Lasermikrodissektion eine Auffangebene verwendet werden, um ausgeschnittene Teile der Proben auffangen zu können. In diesem Sinne wird die Bodenkomponente der Mikrotiterplatte anliegend an einer Auffangebene mit einem oder mehreren Auffangbereichen angeordnet, sodass der eine oder die mehreren Probenaufnahmeböden jeweils in Schwerkraftrichtung mit einem Auffangbereich ausgerichtet sind, sodass beim Ausschneiden eines Teils einer in einer Probenaufnahme angeordneten Probe dieser Teil in den Auffangbereich befördert wird.As already mentioned at the beginning, a collecting plane can be used in laser microdissection in order to be able to collect cut-out parts of the samples. In this sense, the bottom component of the microtiter plate is arranged adjacent to a collecting plane with one or more collecting areas, so that the one or more sample receiving floors are each aligned in the direction of gravity with a collecting area, so that when a part of a sample arranged in a sample receiver is cut out, this part falls into the catchment area is conveyed.

Hierbei können insbesondere zwei bevorzugte Vorgehensweise unterschieden werden. Die Bodenkomponente der Mikrotiterplatte kann in Schwerkraftrichtung gesehen oberhalb der Auffangplatte angeordnet werden, sodass der eine oder die mehreren Probenaufnahmeböden jeweils über einem Auffangbereich angeordnet sind. Beim Ausschneiden kann der ausgeschnittene Teil (das sog. Dissektat) dann z.B. unter Einwirkung der Schwerkraft nach unten in den entsprechenden Auffangbereich fallen. Diese Variante ist dann zweckmäßig, wenn ein aufrechtes Mikroskop verwendet wird.In particular, two preferred procedures can be distinguished here. The bottom component of the microtiter plate can be arranged above the collecting plate, viewed in the direction of gravity, so that the one or more sample receiving floors are each arranged above a collecting area. When cutting out, the cut-out part (the so-called dissectate) can then fall down into the corresponding collection area under the influence of gravity, for example. This variant is useful when an upright microscope is used.

Die Bodenkomponente der Mikrotiterplatte kann aber auch in Schwerkraftrichtung gesehen unterhalb der Auffangebene angeordnet werden, sodass der eine oder die mehreren Probenaufnahmeböden jeweils unter einem Auffangbereich angeordnet sind. Hierzu kann die Bodenkomponente insbesondere um 180° um eine Achse senkrecht zur Schwerkraftrichtung gedreht werden. Die Proben sind ohnehin meist adhäsiv an der Membran bzw. dem Probenaufnahmeboden angeordnet, sodass diese nicht herunterfallen. Beim Ausschneiden kann der ausgeschnittene Teil dann z.B. unter Verwendung eines Laserpulses nach oben (und entgegen der Schwerkraftwirkung) in den entsprechenden Auffangbereich befördert werden. Alternativ kann die ausgeschnittene Probe an einen Probenaufnahmeboden passiv geklebt (Adhäsionskräfte) oder aktiv mittels eines IR-Lasers geklebt werden. Diese Varianten sind dann zweckmäßig, wenn ein inverses Mikroskop verwendet wird. Hier kommt insbesondere auch zum Tragen, dass nur die Bodenkomponente mit geringer Höhe verwendet wird, da hiermit der Abstand des Dissektats zum Laser und/oder zum Auffangbereich gegenüber der Verwendung üblicher Mikrotiterplatten entsprechend reduziert ist.However, the base component of the microtiter plate can also be arranged below the collection plane, viewed in the direction of gravity, so that the one or more sample receiving bases are each arranged below a collection area. For this purpose, the floor component can be rotated in particular by 180° about an axis perpendicular to the direction of gravity. In any case, the samples are usually arranged adhesively on the membrane or the sample receiving base so that they do not fall off. When cutting out, the cut-out part can then be transported upwards (and against the effect of gravity) into the corresponding collection area, e.g. using a laser pulse. Alternatively, the sample that has been cut out can be passively glued to a sample receiving base (adhesion forces) or actively glued using an IR laser. These variants are useful when an inverted microscope is used. Here it is particularly important that only the base component with a low height is used, since the distance of the dissectate from the laser and/or from the collection area is correspondingly reduced compared to the use of conventional microtiter plates.

Weitere Vorteile und Ausgestaltungen der Erfindung ergeben sich aus der Beschreibung und der beiliegenden Zeichnung.Further advantages and refinements of the invention result from the description and the attached drawing.

Es versteht sich, dass die vorstehend genannten und die nachstehend noch zu erläuternden Merkmale nicht nur in der jeweils angegebenen Kombination, sondern auch in anderen Kombinationen oder in Alleinstellung verwendbar sind, ohne den Rahmen der vorliegenden Erfindung zu verlassen.It goes without saying that the features mentioned above and those still to be explained below can be used not only in the combination specified in each case, but also in other combinations or on their own, without departing from the scope of the present invention.

Die Erfindung ist anhand eines Ausführungsbeispieles in der Zeichnung schematisch dargestellt und wird im Folgenden unter Bezugnahme auf die Zeichnung beschrieben.The invention is shown schematically in the drawing using an exemplary embodiment and is described below with reference to the drawing.

Figurenlistecharacter list

1a and 1b schematically show a microtiter plate according to the invention in a preferred embodiment in different views.
2 shows schematically a microtiter plate according to the invention in a further preferred embodiment.
3 shows schematically a microtiter plate according to the invention in a further preferred embodiment.
4 shows schematically a microscope according to the invention in a further preferred embodiment to explain a method according to the invention in a preferred embodiment.
5 shows schematically a sequence of a method according to the invention in a preferred embodiment.

Ausführliche BeschreibungDetailed description

In den 1a und 1b ist schematisch eine erfindungsgemäße Mikrotiterplatte 100 in einer bevorzugten Ausführungsform in verschiedenen Ansichten dargestellt, und zwar insbesondere in einer perspektivischen Ansicht mit Schnitt. Die Mikrotiterplatte 100 weist eine Bodenkomponente 110 sowie eine Rahmenkomponente 130 auf, die lösbar miteinander verbindbar sind. In 1a sind die Bodenkomponente 110 und die Rahmenkomponente 130 miteinander verbunden, in 1b hingegen voneinander gelöst. Es sei angemerkt, dass in den 1a und 1b jeweils nur Ausschnitte einer vollständigen Mikrotiterplatte gezeigt sind.In the 1a and 1b a microtiter plate 100 according to the invention is shown schematically in a preferred embodiment in various views, in particular in a perspective view with a section. The microtiter plate 100 has a base component 110 and a frame component 130 which can be connected to one another in a detachable manner. In 1a the floor component 110 and the frame component 130 are connected to each other, in 1b however, separated from each other. It should be noted that in the 1a and 1b only excerpts of a complete microtiter plate are shown.

Die Bodenkomponente 110 weist beispielhaft mehrere Probenaufnahmebereiche 112 aufweist, die jeweils einen Probenaufnahmeboden 114 aufweisen und zur Aufnahme einer Probe 150 eingerichtet sind. Die Probenaufnahmeböden 114 werden dabei durch eine (einzige) Membran 118 gebildet, die von der Unterseite (gemäß 1a, 1b) auf Halterungen 116, die hier in Art eines Gestells ausgebildet sind, aufgebracht ist, insbesondere angeklebt oder anderweitig befestigt.The floor component 110 has, for example, a plurality of sample receiving areas 112 which each have a sample receiving floor 114 and are set up to receive a sample 150 . The sample receiving bases 114 are formed by a (single) membrane 118 which extends from the underside (according to 1a , 1b) is applied to holders 116, which are designed here in the form of a frame, in particular glued or otherwise attached.

Die Rahmenkomponente 130 weist beispielhaft mehrere Durchgangsöffnungen 132 auf, die jeweils einem der Probenaufnahmebereiche 112 der Bodenkomponente 110 zugeordnet sind und in verbundenem Zustand (vgl. 1a) den entsprechenden Probenaufnahmebereich 112 erweitern und damit eine Probenkammer 120 bilden. Die Rahmenkomponente 130 ist hier beispielhaft als eine Platte bzw. in Form einer Platte ausgebildet, in die die Durchgangsöffnungen 132 eingebracht sind. Es versteht sich, dass hierzu kein Vollmaterial verwendet werden muss, es kommt letztlich nur darauf an, die Durchgangsöffnungen, z.B. in Form eines Zylinders zu bilden. Beispielsweise könnten auch zylindermantelförmige Rahmen durch ein Gestell oder ähnliches miteinander verbunden sein.The frame component 130 has, for example, a plurality of through-openings 132 which are each associated with one of the sample receiving areas 112 of the base component 110 and which are in the connected state (cf. 1a) expand the corresponding sample receiving area 112 and thus form a sample chamber 120 . The frame component 130 is designed here, for example, as a plate or in the form of a plate, in which the through-openings 132 are made. It goes without saying that solid material does not have to be used for this purpose, it is ultimately only important to form the through-openings, for example in the form of a cylinder. For example, zylinderman be connected to each other by a frame or the like.

An der Unterseite der Rahmenkomponente 130 sind im gezeigten Beispiel Fortsätze um die Durchgangsöffnungen 132 vorgesehen, die in entsprechende Nuten der Halterungen 116 der Bodenkomponente eingreifen bzw. eingebracht werden können. Die entsprechenden, inneren ringförmigen Bestandteile der Halterungen 116 können z.B. auch durch geeignete Verstrebungen mit dem Rest (bzw. der Platte) der Bodenkomponente 110 verbunden sein.On the underside of the frame component 130, in the example shown, extensions are provided around the through-openings 132, which can engage or be introduced into corresponding grooves in the holders 116 of the floor component. The corresponding inner annular components of the brackets 116 can also be connected to the remainder (or the plate) of the floor component 110 by suitable struts, for example.

In verbundenem Zustand (vgl. 1b) wird somit eine insbesondere fluid-dichte Probenkammer 120 gebildet, in die z.B. auch ein Fluid 152 wie z.B. ein Nährmedium eingebracht werden kann. Hierzu sei angemerkt, dass die Abmessungen, insbesondere Durchmesser, der Halterungen 116 und der Durchgangsöffnungen 132 derart aufeinander abgestimmt sein sollten, dass diese stabil miteinander verbunden bleiben, wenn sie zusammengesteckt worden sind, ebenso aber wieder auseinandergenommen werden können.When connected (cf. 1b) a particularly fluid-tight sample chamber 120 is thus formed, into which, for example, a fluid 152 such as a nutrient medium can also be introduced. It should be noted here that the dimensions, in particular diameters, of the holders 116 and the through-openings 132 should be matched to one another in such a way that they remain stably connected to one another when they have been plugged together, but can also be disassembled again.

Bei Verwendung der Mikrotiterplatte 110 können somit gewünschte Proben 150 mit einem Nährmedium 152 in den einzelnen Probenkammern vorgesehen, insbesondere kultiviert werden. Insbesondere zum sicheren Einbringen der Proben sowie des Nährmediums ist dabei die Höhe h₂ der Probenkammern und das dadurch gebildete Volumen (wie bei einer üblichen Mikrotiterplatte) zweckdienlich.When using the microtiter plate 110, desired samples 150 with a nutrient medium 152 can thus be provided in the individual sample chambers, in particular cultivated. The height h ₂ of the sample chambers and the volume formed thereby (as with a conventional microtiter plate) is expedient in particular for the reliable introduction of the samples and the nutrient medium.

Bei der weiteren Verwendung, d.h. wenn die Proben 150 untersucht oder bearbeitet werden sollen, insbesondere z.B. im Rahmen der Lasermikrodissektion, dann kann zunächst das Fluid bzw. das Nährmedium 152 aus den einzelnen Probenkammern, jedenfalls zum Teil, entfernt werden. Dies kann z.B. mittels einer Pipette, oder aber auch durch Abgießen erfolgen. Zweckmäßigerweise wird hierbei so viel an Fluid entfernt, dass die Füllhöhe des Fluids 152 die Höhe h₁ der Bodenkomponente 110 nicht mehr übersteigt. Anschließend kann die Rahmenkomponente 130 von der Bodenkomponente 110 abgenommen bzw. gelöst werden.During further use, ie if the samples 150 are to be examined or processed, in particular for example in the context of laser microdissection, the fluid or the nutrient medium 152 can first be removed from the individual sample chambers, at least in part. This can be done, for example, by means of a pipette, or else by pouring off. Expediently, so much fluid is removed here that the fill level of the fluid 152 no longer exceeds the height h ₁ of the base component 110 . The frame component 130 can then be removed or detached from the floor component 110 .

Anhand des Beispiels in den 1a und 1b ist zu sehen, dass nach Abnahme der Rahmenkomponente 130 die verbleibende Höhe h₁ deutlich geringer ist als die vorherige, gesamte Höhe h₂. Dies erlaubt es, ein Objektiv eines Mikroskops bei der Untersuchung bzw. Bearbeitung besonders nahe an die Probe 150 selbst heranzufahren, und so z.B. auch bei hoher Vergrößerung zu fokussieren. Hierzu sei auch auf 4 sowie die zugehörigen Ausführungen verwiesen.Using the example in the 1a and 1b it can be seen that after removing the frame component 130, the remaining height h ₁ is significantly less than the previous total height h ₂ . This allows an objective of a microscope to be moved particularly close to the sample 150 itself during the examination or processing, and thus to focus, for example, even at high magnification. For this also be up 4 as well as the associated explanations.

In 2 ist schematisch eine erfindungsgemäße Mikrotiterplatte 200 in einer weiteren bevorzugten Ausführungsform dargestellt, und zwar in einer Schnittansicht. Diese Schnittansicht entspricht dabei im Grunde des auch in 1a enthaltenen Schnitts.In 2 a microtiter plate 200 according to the invention is shown schematically in a further preferred embodiment, specifically in a sectional view. This sectional view basically corresponds to that also in 1a included section.

Wie auch die Mikrotiterplatte 100 weist die Mikrotiterplatte 200 eine Bodenkomponente 210 mit Halterungen 216 und einer Membran 218 auf, wodurch Probenaufnahmebereiche 212 mit einem Probenaufnahmeboden 214 gebildet werden. Darin kann eine Probe 150 eingebracht werden. Ebenso weist die Mikrotiterplatte 200 eine Rahmenkomponente 230 auf, die wiederum mehrere Durchgangsöffnungen 232 aufweist, die entsprechenden Probenaufnahmebereichen 212 zugeordnet sind.Like the microtiter plate 100, the microtiter plate 200 has a base component 210 with holders 216 and a membrane 218, whereby sample receiving areas 212 with a sample receiving base 214 are formed. A sample 150 can be introduced therein. Likewise, the microtiter plate 200 has a frame component 230 which in turn has a plurality of through-openings 232 which are assigned to corresponding sample receiving areas 212 .

Die Rahmenkomponente 230 kann auch hier lösbar mit der Bodenkomponente 210 verbunden werden, sodass Probenkammern 220 gebildet werden. Im Unterschied zu der Mikrotiterplatte 100 gemäß 1a, 1b sind sowohl die Bodenkomponenten 210 als auch die Rahmenkomponente 230 filigraner ausgebildet, nicht aus einem Vollmaterial, in das lediglich Öffnungen eingebracht sind. Damit kann Gewicht und Material eingespart werden.Here too, the frame component 230 can be detachably connected to the base component 210 so that sample chambers 220 are formed. In contrast to the microtiter plate 100 according to FIG 1a , 1b Both the floor components 210 and the frame component 230 are made more filigree, not from a solid material in which only openings are made. This saves weight and material.

In 3 ist schematisch eine erfindungsgemäße Mikrotiterplatte 300 in einer weiteren bevorzugten Ausführungsform dargestellt, und zwar in einer perspektivischen Ansicht von oben. Es sind somit nur die Durchgangsöffnungen 332 in der Rahmenkomponente 330 zu sehen, die Bodenkomponente ist nicht sichtbar.In 3 a microtiter plate 300 according to the invention is shown schematically in a further preferred embodiment, specifically in a perspective view from above. Thus, only the through openings 332 in the frame component 330 can be seen, the floor component is not visible.

Beispielhaft weist die Mikrotiterplatte 300 insgesamt 96 Durchgangsöffnungen 332 - und damit 96 Probenkammern 320 - auf, die in Form einer Matrix mit acht Reihen von je zwölf Durchgangsöffnungen angeordnet sind. Die Mikrotiterplatte 300 weist eine Länge l und eine Breite b auf, mögliche Werte hierfür sind z.B. l=128 mm und b=86 mm. Hierzu sei angemerkt, dass die Abmessungen für Länge und Breite bei Boden- und Rahmenkomponente nicht notwendigerweise identisch sein müssen, wie z.B. anhand der 1a, 1b ersichtlich ist. Beispielsweise kann die Bodenkomponente etwas größere Abmessungen aufweisen als die Rahmenkomponente, ebenso kann es umgekehrt sein.For example, the microtiter plate 300 has a total of 96 through openings 332—and thus 96 sample chambers 320—which are arranged in the form of a matrix with eight rows of twelve through openings each. The microtiter plate 300 has a length l and a width b, possible values for this are, for example, l=128 mm and b=86 mm. It should be noted that the length and width dimensions of the base and frame components do not necessarily have to be identical, as can be seen, for example, in FIG 1a , 1b is evident. For example, the floor component may have slightly larger dimensions than the frame component, as well as vice versa.

In 4 ist grob schematisch ein erfindungsgemäßes Mikroskop 400 in einer weiteren bevorzugten Ausführungsform zur Erläuterung eines erfindungsgemäßen Verfahrens in einer bevorzugten Ausführungsform dargestellt. Bei dem Mikroskop 400 handelt es sich um ein aufrechtes Mikroskop mit Stativ 402, Beleuchtungsoptik 404 und Objektiv 406. Objektiv 406 und Beleuchtungsoptik 404 definieren eine optische Achse A, entlang welcher oder parallel zu welcher insbesondere auch ein Laser bzw. Laserstrahl 410 geführt werden kann, der zur Lasermikrodissektion dient. In 4 a microscope 400 according to the invention is shown roughly schematically in a further preferred embodiment to explain a method according to the invention in a preferred embodiment. The microscope 400 is an upright microscope with a stand 402, illumination optics 404 and lens 406. Lens 406 and illumination optics 404 define an optical axis A, along which or parallel to which, in particular, a laser or laser beam 410 can also be guided, which is used for laser microdissection.

Zudem ist ein Probentisch 430 vorgesehen, bei dem es sich insbesondere um einen erfindungsgemäßen Probentisch in bevorzugter Ausführungsform handeln kann. Der Probentisch 430 weist eine Öffnung im Bereich der optischen Achse A auf und umfasst einen Positionierungsmechanismus 432 auf. Auf dem Positionierungsmechanismus 432 und damit auf dem Probentisch 430 ist die Bodenkomponente 110 der Mikrotiterplatte aus den 1a, 1b angeordnet, und zwar liegt diese dabei auf einer Auffangebene 450 an bzw. auf (in Schwerkraftrichtung g gesehen oberhalb).In addition, a sample table 430 is provided, which can in particular be a sample table according to the invention in a preferred embodiment. The sample table 430 has an opening in the area of the optical axis A and includes a positioning mechanism 432 . On the positioning mechanism 432 and thus on the sample table 430, the bottom component 110 of the microtiter plate from the 1a , 1b arranged, namely this is on a collecting plane 450 or on (seen in the direction of gravity g above).

Diese Auffangebene 450 weist mehrere Auffangbereiche 452 auf, die jeweils einer der Probenaufnahmebereiche der Bodenkomponente 110, in der Proben 150 angeordnet sind, zugeordnet sind. Wenn nun mittels des Lasers 410 ein Teil 154 einer Probe 150 ausgeschnitten wird, so fällt dieser Teil 154, das sog. Dissektat, in Schwerkraftrichtung g nach unten (also unter Einwirkung der Schwerkraft) in den darunterliegenden Auffangbereich 452.This collection plane 450 has a plurality of collection areas 452, each of which is assigned to one of the sample receiving areas of the soil component 110 in which the samples 150 are arranged. If a part 154 of a sample 150 is now cut out by means of the laser 410, this part 154, the so-called dissectate, falls down in the direction of gravity g (i.e. under the influence of gravity) into the collection area 452 below.

Durch den Positionierungsmechanismus 432 ist es zudem möglich, die Bodenkomponente 110 (zusammenmit der Auffangebene 450) horizontal, d.h. in einer Ebene senkrecht zur optischen Achse A, zu bewegen. Beispielhaft ist hier eine horizontale Richtung x eingezeichnet. Dabei kann die Bodenkomponente 110 horizontal so weit bewegt werden, dass jeder der Probenaufnahmebereiche und damit jede Probe 150 unterhalb des Objektivs 406 positioniert werden kann, sodass eine Untersuchung und insbesondere Bearbeitung mittels des Lasers 410 möglich ist. Dies erfordertz.B. eine Bewegung in zwei zueinander senkrechten, horizontalen Richtungen (x-Richtung und senkrecht hierzu) um die Länge l und die Breite b gemäß 3, oder zumindest um den maximalen mittleren Abstand der in Länge bzw. Breite am weitesten voneinander entfernten Probenaufnahmebereichen.The positioning mechanism 432 also makes it possible to move the base component 110 (together with the capture plane 450) horizontally, ie in a plane perpendicular to the optical axis A. A horizontal direction x is shown here as an example. In this case, the base component 110 can be moved horizontally to such an extent that each of the sample receiving areas and thus each sample 150 can be positioned below the objective 406 so that an examination and in particular processing using the laser 410 is possible. This requires e.g. a movement in two mutually perpendicular, horizontal directions (x-direction and perpendicular thereto) by the length l and the width b according to 3 , or at least by the maximum mean distance of the sample receiving areas that are furthest apart in length or width.

In 5 ist der Ablauf des bereits in Zusammenhang mit 4 erwähnte erfindungsgemäßen Verfahrens in bevorzugten Ausführungsform nochmals zusammengefasst. In einem Schritt 500 werden zunächst in der Mikrotiterplatte (mit verbundener Boden- und Rahmenkomponente) Proben in die Probenkammern eingebracht, insbesondere zusammen mit Nährmedium, und kultiviert.In 5 is the expiry of the already associated with 4 mentioned method according to the invention summarized again in preferred embodiment. In a step 500, samples are first introduced into the sample chambers in the microtiter plate (with connected bottom and frame components), in particular together with nutrient medium, and cultivated.

In einem Schritt 502 wird dann das Nährmedium aus den Probenkammern weitestgehend entfernt, z.B. mittels einer Pipette bzw. einer Pipettiervorrichtung. In einem Schritt 504 wird dann die Rahmenkomponente von der Bodenkomponente abgenommen. Die Bodenkomponente wird in einem Schritt 506 dann auf die Auffangebene aufgelegt und zusammen damit auf den Probentisch aufgebracht, wie es in 4 gezeigt ist.In a step 502, the nutrient medium is then largely removed from the sample chambers, for example by means of a pipette or a pipetting device. In a step 504, the frame component is then detached from the floor component. In a step 506, the bottom component is then placed on the collection plane and placed on the sample table together with it, as is shown in 4 is shown.

In einem Schritt 508 werden die einzelnen Proben dann durch Verfahren mittels der Positioniereinrichtung unterhalb des Objektivs positioniert und mittels des Lasers ausgeschnitten. In einem Schritt 510 kann dann die Auffangebene mit den Dissektaten vom Probentisch abgenommen und zur weiteren Verwendung gegeben werden.In a step 508, the individual samples are then positioned below the objective by moving using the positioning device and are cut out using the laser. In a step 510, the collecting plane with the dissectates can then be removed from the sample table and given for further use.

Der Begriff „und/oder“ umfasst alle Kombinationen von einem oder mehreren der zugehörigen aufgeführten Elemente und kann mit „/“ abgekürzt werden.The term "and/or" includes any combination of one or more of the associated listed items and may be abbreviated to "/".

Obwohl einige Aspekte im Rahmen einer Vorrichtung beschrieben wurden, ist es klar, dass diese Aspekte auch eine Beschreibung des entsprechenden Verfahrens darstellen, wobei ein Block oder eine Vorrichtung einem Verfahrensschritt oder einer Funktion eines Verfahrensschritts entspricht. Analog dazu stellen Aspekte, die im Rahmen eines Verfahrensschritts beschrieben werden, auch eine Beschreibung eines entsprechenden Blocks oder Elements oder einer Eigenschaft einer entsprechenden Vorrichtung dar.Although some aspects have been described in terms of a device, it is clear that these aspects also represent a description of the corresponding method, where a block or a device corresponds to a method step or a function of a method step. Analogously, aspects that are described as part of a method step also represent a description of a corresponding block or element or a property of a corresponding device.

BezugszeichenlisteReference List

100, 200, 300100, 200, 300: Mikrotiterplattemicroplate
110,210110,210: Bodenkomponentesoil component
112,212112,212: Probenaufnahmebereichsample receiving area
114,214114,214: Probenaufnahmebodensample receiving floor
116,216116,216: Halterungbracket
118,218118,218: Membranmembrane
120, 220, 320120, 220, 320: Probenkammersample chamber
130, 230, 330130, 230, 330: Rahmenkomponenteframe component
132, 232, 332132, 232, 332: Durchgangsöffnungpassage opening
150150: Probesample
152152: FluidFluid
154154: Teil der Probe part of the sample
400400: Mikroskopmicroscope
402402: Stativtripod
404404: Beleuchtungsoptiklighting optics
406406: Objektivlens
410410: Laserlaser
430430: Probentischrehearsal table
432432: Positionierungsmechanismuspositioning mechanism
450450: Auffangebenecatchment level
452452: Auffangbereich containment area
500-510500-510: Verfahrensschritte process steps
h1h1: Höhe der BodenkomponenteHeight of the floor component
h2h2: Höhe der MikrotiterplatteMicroplate height
ll: Länge der Mikrotiterplattelength of the microplate
bb: Breite der MikrotiterplatteWidth of the microplate
xx: horizontale Richtunghorizontal direction
gG: Schwerkraftrichtungdirection of gravity
AA: optische Achseoptical axis

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNGQUOTES INCLUDED IN DESCRIPTION

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Zitierte PatentliteraturPatent Literature Cited

EP 2069749 B1 [0002, 0021]
DE 10018253 C2 [0021]

Claims

Microtiter plate (100, 200, 300) for microscopic examination or processing of samples (150), having a base component (110, 210) and a frame component (130, 230, 330) which is detachably connected to the base component (110, 210). is, wherein the floor component (110, 210) has one or more sample receiving areas (112, 212), which each have a sample receiving floor (114, 214) and are set up to receive a sample (150), wherein the frame component (130, 230, 330) has one or more through openings (132, 232, 332), which are each associated with one of the sample receiving areas (112, 212) of the base component (110, 210) and in the connected state the corresponding sample receiving area ( 112, 212) and thus form a sample chamber (120, 220, 320).

Microplate (100, 200, 300) according to claim 1 , wherein the one or more sample receiving floors (114, 214) of the floor component (110, 210) are each formed by a membrane (118, 218) which is attached to a holder (116, 216), the holder (116, 216) is set up in each case for connection to the associated through-opening (132, 232, 332) of the frame component (130, 230, 330).

Microplate (100, 200, 300) according to claim 2 , wherein the bottom component (110, 210) has a plurality of sample receiving areas (112, 212), and wherein the plurality of sample receiving floors (114, 214) are formed by a common membrane (118, 218).

Microplate (100, 200, 300) according to claim 3 , wherein each sample receiving area (114, 214) is assigned a holder (116, 216), and wherein the plurality of holders (116, 216) are connected to one another.

Microtiter plate (100, 200, 300) according to one of claims 2 until 4 , wherein the membrane (118, 218) is designed to be laser-cuttable.

Microtiter plate (100, 200, 300) according to one of claims 2 until 5 , wherein the membrane (118, 218) comprises or consists of at least one material selected from the group: polyethylene naphthalate, polyethylene terephthalate, polyphenylene sulfide, polyester and fluoropolymer.

Microtiter plate (100, 200, 300) according to one of claims 2 until 6 , wherein the holder (116, 216) or the plurality of holders (116, 216) have at least one of metal and plastic, in particular consist of metal and more particularly consist of plastic-coated metal.

Microtiter plate (100, 200, 300) according to one of the preceding claims, wherein the frame component (130, 230, 330) has at least one of metal and plastic, in particular consists of it, further in particular consists of plastic-coated metal.

Microtiter plate (100, 200, 300) according to one of the preceding claims, wherein at least one of the base component (110, 210) and frame component (130, 230, 330) comprises or consists of a metal, and wherein at least the other of the base component (110, 210) and frame component (130, 230, 330) has one or more magnets, so that the base component (110, 210) and frame component (130, 230, 330) can be connected to one another in a magnetically detachable manner.

Microtiter plate (100, 200, 300) according to one of the preceding claims, wherein the one or more through-openings (132, 232, 332) in the connected state each extend the corresponding sample receiving area (112, 212) by at least part of a through-opening ( 132, 232, 332) defined volume.

Microtiter plate (100, 200, 300) according to one of the preceding claims, wherein the one or more sample chambers (120, 220, 320) each have a base area and a height (h ₂ ), the base area being defined by the respective sample receiving area (112 , 212) is defined, and wherein the height (h ₂ ) of the sample chamber, measured perpendicular to the surface of the sample receiving floors (114, 214), in each case a common height of the floor component (110) and the frame component (130, 230, 330) in connected state corresponds.

Microplate (100, 200, 300) according to claim 11 , wherein a height (h ₁ ) of the base component (110, 210), measured perpendicular to the surface of the sample receiving bases (114, 214), is less than the height (h ₂ ) of the sample chambers (120, 220, 320), in particular less than is half.

Microtiter plate (100, 200, 300) according to any one of the preceding claims, wherein the bottom component 96, 384 or 1536 sample receptacles (112, 212), and the frame component 96, 384 or 1536 through openings (132, 232, 332), each in are arranged in the form of a matrix.

Floor component (110, 210) for use with a frame component (130, 230, 330) as a microtiter plate (100, 200, 300) for the microscopic examination or processing of samples (150), the floor component (110, 210) one or more Has sample receiving areas (112, 212), which each have a sample receiving base (114, 214) and are set up for receiving a sample (150), wherein the base component (110, 210) for detachable connection with the frame component (130, 230, 330) is set up, and wherein the one or more sample receiving areas (112, 212) can each be assigned to a passage opening (132, 232, 332) of the frame component (130, 230, 330), so that in the connected state the corresponding sample receiving area (112, 212) expanded and thus a sample chamber (120, 220, 320) is formed.

Frame component (130, 230, 330) for use with a base component (110, 210) as a microtiter plate (100, 200, 300) for the microscopic examination or processing of samples (150), wherein the frame component (130, 230, 330) is adapted for releasable connection to the floor component (110, 210), and wherein the frame component (130, 230, 330) has one or more through openings (132, 232, 332), each of which can be assigned to a sample receiving area (112, 212) of the base component (110, 210), so that in the connected state the corresponding sample receiving area ( 112, 212) and thus a sample chamber (120, 220, 320) is formed.

Sample table (430) for a microscope (400) for receiving at least the base component (110, 210) of a microtiter plate (100, 200, 300) according to one of Claims 1 until 13 , or a floor component (110, 210). Claim 14 is set up, having a positioning mechanism (432) which is designed such that the floor component (110, 210) is horizontally movable.

Sample table (430) after Claim 16 , which is set up in such a way that the floor component (110, 210) can be fixed thereon in a horizontal and vertical direction, in particular up to a maximum height of the floor component (110, 210) of 3 mm.

Microscope (400) with a sample table (430). Claim 16 or 17 .

Microscope (400) after Claim 18 , which is set up for laser microdissection.

Use of a microtiter plate (100, 200, 300) according to one of Claims 1 until 13 , for laser microdissection as processing of the samples (150).

Method for the microscopic examination or processing of samples (150) using a microtiter plate (100, 200, 300) according to one of Claims 1 until 13 , wherein when one or more samples (150) are placed in the sample chambers (120, 220, 320) formed by the sample receiving areas (112, 212), the frame component (130, 230, 330) is removed prior to examination or processing.

procedure after Claim 21 , wherein if a fluid (152), in particular nutrient medium, is introduced into the sample chambers (120, 220, 320), the fluid (152) is at least partially removed from the sample chamber before the frame component (130, 230, 330) is removed (120, 220, 320) is removed.

procedure after Claim 21 or 22 , wherein the one or more samples (150) are processed by means of laser microdissection.

procedure after Claim 23 , wherein the base component (110, 210) of the microtiter plate (100, 200, 300) is arranged adjacent to a collection plane (450) with one or more collection areas (452), so that the one or more sample receiving floors (114, 214) each in Direction of gravity (g) are aligned with a collecting area (452), so that when a part (154) of a sample (150) arranged in a sample holder (112, 212) is cut out, this part (154) is conveyed into the collecting area (452).

procedure after Claim 24 , wherein the base component (110) of the microtiter plate (100, 200, 300) is arranged above the collection plane (450) as seen in the direction of gravity (g), so that the one or more sample receiving bases (114, 214) each have a collection area (452) are arranged.

procedure after Claim 24 , wherein the base component (110) of the microtiter plate (100, 200, 300) is arranged below the collection plane as seen in the direction of gravity (g), so that the one or more sample receiving bases (114) are each arranged below a collection area, for which purpose the base component (110 ) is rotated in particular by 180 ° about an axis perpendicular to the direction of gravity.