DE102019214130A1 - Chromatograph and quantitative determination method using chromatography - Google Patents

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Masahito Ito
Naoki Sugimoto
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Abstract

[Problem]Bereitstellung eines Chromatographen und eines quantitativen Bestimmungsverfahren mittels Chromatographie, bei dem der Arbeitsgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz hinzuzufügen, nicht erforderlich ist, auch wenn eine auf der Methode mit internem Standard basierende Kalibrierungskurve verwendet wird, und das gleichzeitig die Messung vereinfacht und eine Abnahme der quantitativen Genauigkeit verhindert.[Mittel zur Lösung der Probleme]Der Chromatograph 100 zur quantitativen Bestimmung eines bestimmten Messobjekts X, der mit einer Steuereinheit 9 und einer Speichereinheit 8 ausgerüstet ist, wobei die Speichereinheit die Daten der Kalibrierungskurve CAL1 und CAL2 basierend auf der Methode mit internem Standard speichert, die das Intensitätsverhältnis der Intensität des Messobjekts und der Intensität des oben genannten internen Standards enthalten, wobei die internen Standards a und b in bestimmten Konzentrationen zu dem Messobjekt zugegeben werden müssen, und die Steuereinheit, wenn die Chromatogramme CRa, CRb und CRc der QC-Probe, die den internen Standard in bestimmter Konzentration enthält, und das Chromatogramm der unbekannten Probe, die das Messobjekt X in nicht bekannter Konzentration enthält aber keinen Standard enthält, gemessen worden sind, aus der Intensität des internen Standards der QC-Probe und der Intensität des Messobjekts der unbekannten Probe die Intensitätsverhältnisse Xn/a und Xn/b berechnet und auf der Grundlage der Kalibrierungskurven die quantitative Bestimmung des Messobjekts in der unbekannten Probe durchführt.[Problem] Provision of a chromatograph and a quantitative determination method by means of chromatography, in which the operation of adding a standard substance to the unknown sample is not required, even if a calibration curve based on the method with internal standard is used, and at the same time simplifies the measurement and prevents a decrease in the quantitative accuracy [means for solving the problems] The chromatograph 100 for the quantitative determination of a specific measurement object X, which is equipped with a control unit 9 and a storage unit 8, the storage unit storing the data of the calibration curve CAL1 and CAL2 based on the Internal standard method stores which contain the intensity ratio of the intensity of the measurement object and the intensity of the above-mentioned internal standard, the internal standards a and b having to be added to the measurement object in certain concentrations, and di e control unit, if the chromatograms CRa, CRb and CRc of the QC sample, which contains the internal standard in a certain concentration, and the chromatogram of the unknown sample, which contains the measurement object X in unknown concentration but does not contain a standard, have been measured, the intensity ratios Xn / a and Xn / b are calculated from the intensity of the internal standard of the QC sample and the intensity of the measurement object of the unknown sample and the quantitative determination of the measurement object in the unknown sample is carried out on the basis of the calibration curves.

Description

[Technisches Gebiet][Technical field]

Die vorliegende Erfindung betrifft Chromatographen wie Flüssigchromatographen und Gaschromatographen sowie quantitative Bestimmungsmethoden mittels Chromatographie.The present invention relates to chromatographs such as liquid chromatographs and gas chromatographs as well as quantitative methods of determination by means of chromatography.

[Stand der Technik][State of the art]

Bislang sind für die quantitative Analyse mittels Chromatographie wie Flüssigchromatographie (HPLC) usw. Verfahren mit externem Standard und Verfahren mit internem Standard bekannt. Von diesen verhindert das Verfahren mit internem Standard Fehler, die aufgrund täglicher Änderungen der chromatographischen Empfindlichkeit und der Bedingungen, Schwankungen der Probeninjektionsmenge, Verflüchtigung des Lösungsmittels und dergleichen auftreten können, und weist eine höhere Messgenauigkeit als das Verfahren mit externem Standard auf.So far, methods with an external standard and methods with an internal standard have been known for quantitative analysis by means of chromatography, such as liquid chromatography (HPLC), etc. Of these, the internal standard method prevents errors that may occur due to daily changes in the chromatographic sensitivity and conditions, fluctuations in the sample injection amount, volatilization of the solvent, and the like, and has a higher measurement accuracy than the external standard method.

Darüber hinaus definiert JISK0214:2013 Begriffe, die im Zusammenhang mit der Chromatographie stehen.JISK0214: 2013 also defines terms related to chromatography.

Bei diesem Verfahren mit internem Standard wird eine Probe, die eine Eichsubstanz mit bekannter Konzentration und eine (interne) Standardsubstanz in einer bestimmten Konzentration enthält, bei verschiedenen Konzentrationen der Eichsubstanz gemessen und aus dem Verhältnis zwischen der Intensität der Eichsubstanz und der Intensität des internen Standards eine Kalibrierungskurve erhalten, die den Zusammenhang mit der Konzentration der Eichsubstanz als lineare Funktion zeigt, und mit dieser Kalibrierungskurve wird eine quantitative Bestimmung der unbekannten Probe durchgeführt. (Patentdokument 1).In this internal standard method, a sample containing a calibration substance with a known concentration and an (internal) standard substance in a certain concentration is measured at different concentrations of the calibration substance and one is calculated from the ratio between the intensity of the calibration substance and the intensity of the internal standard Obtain a calibration curve which shows the relationship with the concentration of the calibration substance as a linear function, and a quantitative determination of the unknown sample is carried out with this calibration curve. (Patent document 1).

[Literatur zum Stand der Technik][Literature related to the prior art]

[Patentdokumente][Patent documents]

[Patentdokument 1] JP S 61-52301 [Patent Document 1] JP S 61-52301

[Zusammenfassung der Erfindung]SUMMARY OF THE INVENTION

[Durch die Erfindung zu lösende Probleme]Problems to be Solved by the Invention

Es ist übrigens bei dem Verfahren mit internem Standard erforderlich, der Probe auch bei der Messung einer unbekannten Probe eine Standardsubstanz einer bestimmten Konzentration zuzusetzen, dabei besteht jedoch das Problem, dass das Abwiegen einer Standardsubstanz in einer bestimmten Konzentration umständlich ist und Geschicklichkeit erfordert, und dass ungenaues Abwiegen der Standardsubstanz die Genauigkeit der Gehaltsbestimmung verringert.Incidentally, in the method with an internal standard, it is necessary to add a standard substance of a certain concentration to the sample even when measuring an unknown sample, but there is a problem that weighing a standard substance in a certain concentration is cumbersome and requires skill, and that inaccurate weighing of the standard substance reduces the accuracy of the salary determination.

Daher ist es das Ziel der vorliegenden Erfindung, die oben genannten Probleme zu lösen und einen Chromatographen und eine quantitative Bestimmungsmethode mittels Chromatographie bereitzustellen, bei denen der Arbeitsvorgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zuzusetzen, nicht erforderlich ist, auch wenn eine auf der Methode mit internem Standard basierende Kalibrierungskurve verwendet wird, und die eine vereinfachte Messung möglich macht und verhindert, dass die Messgenauigkeit abnimmt.Therefore, it is the object of the present invention to solve the above-mentioned problems and to provide a chromatograph and a quantitative determination method by means of chromatography, in which the operation of adding a standard substance to the unknown sample is not necessary, even if one is based on the method with internal Standard-based calibration curve is used, which enables a simplified measurement and prevents the measurement accuracy from decreasing.

[Mittel zur Lösung der Probleme][Means to Solve the Problems]

Um das oben genannte Ziel zu erreichen, ist der Chromatograph der vorliegenden Erfindung, der zur quantitativen Bestimmung bestimmter Messobjekte eingesetzt wird, mit einer Steuereinheit und einer Speichereinheit ausgerüstet, wobei die oben genannte Speichereinheit die Daten einer Kalibrierungskurve speichert, die auf der Methode mit internem Standard basieren und die das Intensitätsverhältnis der Intensität der oben genannten Messobjekte und der Intensität des oben genannten internen Standards enthalten, wobei der oben genannte interne Standard in bestimmten Konzentrationen zu dem oben genannten Messobjekt zugegeben werden muss, und wenn ein Chromatogramm einer QC-Probe, die die oben genannte bestimmte Konzentration des oben genannten internen Standard enthält und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die das oben genannte Messobjekt in unbekannter Konzentration und keinen internen Standard enthält, gemessen worden ist, berechnet die oben genannte Steuereinheit aus der Intensität des oben genannten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe das Intensitätsverhältnis und führt eine quantitative Bestimmung des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe auf Basis der oben genannten Kalibrierungskurve durch.In order to achieve the above object, the chromatograph of the present invention, which is used for the quantitative determination of certain measurement objects, is equipped with a control unit and a storage unit, the above-mentioned storage unit storing the data of a calibration curve based on the internal standard method and which contain the intensity ratio of the intensity of the above-mentioned measurement objects and the intensity of the above-mentioned internal standard, the above-mentioned internal standard having to be added to the above-mentioned measurement object in certain concentrations, and if a chromatogram of a QC sample which contains the above-mentioned specific concentration of the above-mentioned internal standard and a chromatogram of an unknown sample, which contains the above-mentioned measurement object in an unknown concentration and no internal standard, has been calculated by the above-mentioned control unit from the int ity of the above-mentioned internal standard of the above-mentioned QC sample and the intensity of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample, the intensity ratio and carries out a quantitative determination of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample on the basis of the above-mentioned calibration curve.

Mit diesem Chromatographen ist es möglich, eine quantitative Bestimmung durchzuführen, ohne dass der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zugegeben wird, auch wenn eine auf der Methode mit internem Standard basierende Kalibrierungskurve verwendet wird. Aus diesem Grund ist ein komplizierter und Geschicklichkeit erfordernder Vorgang zum Abwiegen einer bestimmten Konzentration der Standardsubstanz für die unbekannte Probe nicht erforderlich, und es kann verhindert werden, dass Fehler beim Abwiegen der Standardsubstanz die Genauigkeit der Gehaltsbestimmung verringern. Und dadurch, dass der Arbeitsvorgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zuzusetzen, nicht erforderlich ist, kann die Messung vereinfacht und eine Abnahme der quantitativen Genauigkeit verhindert werden.With this chromatograph it is possible to carry out a quantitative determination without adding a standard substance to the unknown sample, even if a calibration curve based on the method with internal standard is used. For this reason, a complicated and skillful procedure for weighing a certain concentration of the standard substance for the unknown sample is not required, and errors in weighing the standard substance can be prevented from lowering the accuracy of the content determination. And because the process of adding a standard substance to the unknown sample is not If necessary, the measurement can be simplified and a decrease in the quantitative accuracy can be prevented.

In dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung speichert die oben genannte Speichereinheit die Diagnosekriterien, die auf der Wellenform oder der Intensität eines Standardchromatogramms basieren, das den oben genannten internen Standard in der oben genannten bestimmten Konzentration enthält, und die oben genannte Steuereinheit kann basierend auf den oben genannten Diagnosekriterien in Bezug auf die Wellenform oder Intensität des Chromatogramms der oben genannten QC-Probe beurteilen, ob die oben genannte unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht.In the chromatograph of the present invention, the above-mentioned storage unit stores the diagnostic criteria based on the waveform or the intensity of a standard chromatogram containing the above-mentioned internal standard in the above-mentioned certain concentration, and the above-mentioned control unit can be based on the above-mentioned Diagnostic criteria related to the waveform or intensity of the chromatogram of the above QC sample judge whether or not the above unknown sample can be measured.

Die Durchführung der quantitativen Bestimmung einer unbekannten Probe ohne Zugabe einer Standardsubstanz basiert auf der Voraussetzung, dass die Streuung der Messwerte bei normaler Kontrolle und Wartung in einem kleinen Bereich liegt. Daher wird vor der Messung der unbekannten Probe das Chromatogramm einer QC-Probe angefertigt, und man betrachtet die Intensität ihres internen Standards als dieselbe wie die Intensität des internen Standards in der unbekannten Probe in dem Fall, dass man angenommen hat, dass der interne Standard zu der unbekannten Probe zugegeben wurde. Demzufolge erhält man falsche Messergebnisse, wenn man dieses Verfahren in dem Fall verwendet, dass sich der Zustand des Chromatographen verschlechtert hat und die Streuung der Messwerte größer geworden ist.
Daher ist es bei diesem Chromatographen möglich, fehlerhafte Messungen zu verhindern, indem der Zustand des Chromatographen im Voraus diagnostiziert und die quantitative Bestimmung der unbekannten Probe dann durchgeführt wird, wenn der Gerätezustand als normal angesehen wird.The quantitative determination of an unknown sample without the addition of a standard substance is based on the assumption that the scatter of the measured values lies in a small range with normal control and maintenance. Therefore, before measuring the unknown sample, a QC sample is chromatographed and the intensity of its internal standard is considered to be the same as the intensity of the internal standard in the unknown sample in the event that the internal standard is assumed to be was added to the unknown sample. As a result, incorrect measurement results are obtained if this method is used in the event that the condition of the chromatograph has deteriorated and the spread of the measurement values has increased.
Therefore, with this chromatograph, it is possible to prevent erroneous measurements by diagnosing the condition of the chromatograph in advance and performing quantitative determination of the unknown sample when the device condition is considered normal.

In dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung speichert die oben genannte Speichereinheit die Daten einer zusätzlichen Kalibrierungskurve basierend auf der Methode mit internem Standard, für die man einem zusätzlichen Messobjekt, das sich von dem oben genannten Messobjekt unterscheidet, den oben genannten internen Standard in der oben genannten bestimmten Konzentration zugeben muss, und die das Intensitätsverhältnis der Intensität des oben genannten zusätzlichen Messobjekts und der Intensität des oben genannten internen Standards enthält, wobei bei den Daten der Kalibrierungskurve die Intensität des oben genannten internen Standards in den Daten der oben genannten zusätzlichen Kalibrierungskurve durch das Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1) aus der Intensität A2 des oben genannten internen Standards in der oben genannten bestimmten Konzentration, wenn das oben genannte zusätzliche Messobjekt gleichzeitig anwesend ist, und der Intensität A1 des oben genannten internen Standards der oben genannten Konzentration, wenn das oben genannte Messobjekt in der gleichen Konzentration wie das oben genannte zusätzliche Messobjekt gleichzeitig anwesend ist, korrigiert worden ist, und die oben genannte QC-Probe enthält außerdem das oben genannte Messobjekt in bekannter Konzentration, und im Fall, dass das oben genannte zusätzliche Messobjekt quantitativ bestimmt wird, wird das Chromatogramm der oben genannten QC-Probe gemessen, und wenn die oben genannte Steuereinheit auf Basis der oben genannten Diagnosekriterien die Messung der oben genannten unbekannten Probe freigegeben hat, kann die oben genannte Steuereinheit basierend auf den Daten der oben genannten korrigierten Kalibrierungskurve das oben genannte zusätzliche Messobjekt in einer zweiten unbekannten Probe, die das zusätzliche Messobjekt in unbekannter Konzentration enthält und den internen Standard nicht enthält, quantitativ bestimmen.In the chromatograph of the present invention, the above-mentioned storage unit stores the data of an additional calibration curve based on the internal standard method for which an above-mentioned measurement object other than the above-mentioned measurement object is determined in the above-mentioned internal standard Concentration must admit, and which contains the intensity ratio of the intensity of the above-mentioned additional measurement object and the intensity of the above-mentioned internal standard, with the data of the calibration curve the intensity of the above-mentioned internal standard in the data of the above-mentioned additional calibration curve by the intensity ratio of internal standards ( A2 / A1 ) from the intensity A2 the above-mentioned internal standard in the above-mentioned specific concentration, if the above-mentioned additional measurement object is present at the same time, and the intensity A1 the above-mentioned internal standard of the above-mentioned concentration when the above-mentioned measurement object is present in the same concentration as the above-mentioned additional measurement object at the same time, and the above-mentioned QC sample also contains the above-mentioned measurement object in known concentration, and in the event that the above-mentioned additional measurement object is determined quantitatively, the chromatogram of the above-mentioned QC sample is measured, and if the above-mentioned control unit has released the measurement of the above-mentioned unknown sample based on the above-mentioned diagnostic criteria, the above The control unit named, based on the data from the above-mentioned corrected calibration curve, quantitatively determine the above-mentioned additional measurement object in a second unknown sample which contains the additional measurement object in an unknown concentration and does not contain the internal standard.

Wenn ein zusätzliches Messobjekt quantitativ bestimmt wird, das sich vom Messobjekt unterscheidet, kann dies normalerweise auf die gleiche Weise erfolgen wie das Messen des Chromatogramms der QC-Probe und des Chromatogramms der unbekannten Probe, wenn eine Kalibrierungskurve ähnlich der des Messobjekts gespeichert wird.When quantitatively determining an additional measurement object that differs from the measurement object, this can usually be done in the same way as measuring the chromatogram of the QC sample and the chromatogram of the unknown sample when a calibration curve similar to that of the measurement object is saved.

Andererseits verbessert sich die Untersuchungsgenauigkeit des Chromatographen, wenn QC-Proben, die das Messobjekt enthalten, bei der quantitativen Bestimmung des Messobjekts als QC-Proben verwendet werden, wenn jedoch diese QC-Proben auch für die quantitative Bestimmung des zusätzlichen Messobjekts verwendet werden, kann die Messgenauigkeit des zusätzlichen Messobjekts abnehmen. Aber es besteht der Wunsch, die QC-Proben, die das Messobjekt enthalten, für alle Messungen (Messung der zusätzlichen Messobjekte) zu verwenden, weil die Verarbeitbarkeit abnimmt, wenn man für jedes zusätzliche Messobjekt eine QC-Probe vorbereitet.On the other hand, the examination accuracy of the chromatograph improves if QC samples containing the measurement object are used as QC samples in the quantitative determination of the measurement object, but if these QC samples are also used for the quantitative determination of the additional measurement object, the Decrease the measuring accuracy of the additional measuring object. But there is a desire to use the QC samples that contain the measurement object for all measurements (measurement of the additional measurement objects) because the processability decreases if a QC sample is prepared for each additional measurement object.

Daher werden die Daten der Kalibrierungskurven basierend auf der Methode mit internem Standard für die zusätzlichen Messobjekte, die mit dem Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1) korrigiert worden sind, als Daten einer zusätzlichen Kalibrierungskurve gespeichert. Auf diese Weise kann durch quantitative Bestimmung des zusätzlichen Messobjekts unter Verwendung der Daten dieser korrigierten Kalibrierungskurve das zusätzliche Messobjekt genau quantitativ bestimmt werden, selbst wenn die QC-Probe, die das Messobjekt enthält, auch bei der quantitativen Bestimmung des zusätzlichen Messobjekts verwendet wird.Therefore, the data of the calibration curves based on the method with the internal standard for the additional measurement objects, which are related to the intensity ratio of the internal standards ( A2 / A1 ) have been corrected as data from an additional calibration curve. In this way, by quantitatively determining the additional measurement object using the data of this corrected calibration curve, the additional measurement object can be precisely quantified, even if the QC sample that contains the measurement object is also used in the quantitative determination of the additional measurement object.

Bei dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung umfasst der interne Standard mindestens zwei Arten, den ersten internen Standard und den zweiten internen Standard, deren Peaks im Chromatogramm vor und nach dem Peak des oben genannten Messobjekts erscheinen. Die oben genannten Daten der Kalibrierungskurven enthalten mindestens die Daten der ersten Kalibrierungskurve und die Daten der zweiten Kalibrierungskurve, die jeweils dem ersten internen Standard und dem zweiten internen Standard entsprechen, und die oben genannte Steuereinheit kann, wenn das oben genannte Messobjekt der oben genannten unbekannten Probe quantitativ bestimmt wird, aus dem Intensitätsverhältnis des ersten internen Standards und dem Intensitätsverhältnis des zweiten internen Standards, das aus der Intensität des oben genannten ersten internen Standards und des oben genannten zweiten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe berechnet worden ist, unter Bezug auf die Daten der oben genannten ersten Kalibrierungskurve und die Daten der oben genannten zweiten Kalibrierungskurve die oben genannten Messobjekte separat quantitativ bestimmen und den Mittelwert dieser quantitativen Werte ermitteln. In the chromatograph of the present invention, the internal standard includes at least two kinds, the first internal standard and the second internal standard, the peaks of which appear in the chromatogram before and after the peak of the above-mentioned measurement object. The above-mentioned data of the calibration curves contain at least the data of the first calibration curve and the data of the second calibration curve, which respectively correspond to the first internal standard and the second internal standard, and the above-mentioned control unit can, if the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample is quantitatively determined from the intensity ratio of the first internal standard and the intensity ratio of the second internal standard, which is the intensity of the above-mentioned first internal standard and the above-mentioned second internal standard of the above-mentioned QC sample and the intensity of the above-mentioned measurement object above-mentioned unknown sample has been calculated, with reference to the data of the above-mentioned first calibration curve and the data of the above-mentioned second calibration curve, separately quantitatively determine the above-mentioned measurement objects and the mean value of this quantitative W determine the results.

Gemäß diesem Chromatographen wird die Messgenauigkeit erhöht, weil der interne Standard mindestens zwei Arten, den ersten internen Standard und den zweiten internen Standard, umfasst, deren Peaks im Chromatogramm jeweils vor und nach dem Peak des oben genannten Messobjekts erscheinen.According to this chromatograph, the measurement accuracy is increased because the internal standard comprises at least two types, the first internal standard and the second internal standard, the peaks of which appear in the chromatogram before and after the peak of the measurement object mentioned above.

In dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung enthalten die oben genannten Diagnosekriterien den ersten Schwellenwert der Verbreiterung der Wellenform des oben genannten Standardchromatogramms, und die oben genannte Steuereinheit kann beurteilen, dass die Messung der oben genannten unbekannten Probe nicht möglich ist, wenn die Verbreiterung der Wellenform der oben genannten QC-Probe den oben genannten ersten Schwellenwert überschreitet.In the chromatograph of the present invention, the above-mentioned diagnostic criteria include the first threshold of broadening the waveform of the above standard chromatogram, and the above control unit can judge that measurement of the above unknown sample is not possible if the broadening of the waveform of the above QC sample exceeds the first threshold mentioned above.

Gemäß diesem Chromatographen kann auf der Grundlage der Verbreiterung der Wellenform im Chromatogramm der QC-Probe genau beurteilt werden, ob die Messung der unbekannten Probe möglich ist oder nicht.According to this chromatograph, based on the broadening of the waveform in the chromatogram of the QC sample, it can be judged exactly whether the measurement of the unknown sample is possible or not.

In dem Chromatographen der vorliegenden Erfindung enthalten die oben genannten Diagnosekriterien einen zweiten Schwellenwert der Intensität des oben genannten Standardchromatographen, und die oben genannte Steuereinheit kann beurteilen, ob die Messung der oben genannten unbekannten Probe möglich ist oder nicht, wenn die Intensität des Chromatogramms der oben genannten QC-Probe unterhalb des oben genannten zweiten Schwellenwertes liegt.In the chromatograph of the present invention, the above diagnostic criteria include a second threshold of the intensity of the above standard chromatograph, and the above control unit can judge whether or not the measurement of the above unknown sample is possible if the intensity of the chromatogram of the above QC sample is below the second threshold mentioned above.

Bei diesem Chromatographen kann auf der Grundlage der Intensität des Standardchromatogramms genau beurteilt werden, ob die Messung der unbekannten Probe möglich ist oder nicht.This chromatograph can be used to precisely assess whether the measurement of the unknown sample is possible or not, based on the intensity of the standard chromatogram.

Bei der quantitativen Bestimmungsmethode mittels Chromatographie der vorliegenden Erfindung handelt es sich um ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung mittels Chromatographie, bei dem ein bestimmtes Messobjekt quantitativ bestimmt wird, wobei vorab die Daten einer Kalibrierungskurve basierend auf der Methode mit internem Standard, die das Intensitätsverhältnis der Intensität der oben genannten Messobjekte und der Intensität des oben genannten internen Standards enthalten, gespeichert werden, wobei der oben genannte interne Standard in bestimmten Konzentrationen zu dem oben genannten Messobjekt zugegeben werden muss, und wenn ein Chromatogramm einer QC-Probe, die die oben genannte bestimmte Konzentration des oben genannten internen Standards enthält, und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die das oben genannte Messobjekt in unbekannter Konzentration und keinen internen Standard enthält, gemessen worden ist, wird aus der Intensität des oben genannten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe das Intensitätsverhältnis berechnet und eine quantitative Bestimmung des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe auf Basis der oben genannten Kalibrierungskurve durchgeführt.The quantitative determination method by means of chromatography of the present invention is a method for quantitative determination by means of chromatography, in which a specific measurement object is determined quantitatively, with the data of a calibration curve based on the method having an internal standard, which shows the intensity ratio of the intensity of the above-mentioned measurement objects and the intensity of the above-mentioned internal standard can be stored, the above-mentioned internal standard having to be added in certain concentrations to the above-mentioned measurement object, and if a chromatogram of a QC sample which has the above-mentioned specific concentration of the contains the above-mentioned internal standards, and a chromatogram of an unknown sample, which contains the above-mentioned measurement object in an unknown concentration and contains no internal standard, is obtained from the intensity of the above-mentioned internal standard of the above-mentioned QC sample and the intensity of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample, the intensity ratio is calculated and a quantitative determination of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample is carried out on the basis of the above-mentioned calibration curve.

[Wirkung der Erfindung]Effect of the Invention

Bei der vorliegenden Erfindung ist mit der quantitativen Bestimmungsmethode mittels Chromatographie der Arbeitsvorgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zuzusetzen, nicht erforderlich, auch wenn eine Kalibrierungskurve basierend auf der Methode mit internem Standard verwendet wird, und sie macht eine vereinfachte Messung möglich und kann verhindern, dass die Messgenauigkeit abnimmt.In the present invention, with the quantitative determination method by chromatography, the operation of adding a standard substance to the unknown sample is not required even if a calibration curve based on the internal standard method is used, and it enables a simplified measurement and can prevent that the measurement accuracy decreases.

FigurenlisteFigure list

  • [ ] zeigt den Aufbau eines Flüssigchromatographen (Gerät) gemäß der Ausführungsform der vorliegenden Erfindung.[ ] shows the structure of a liquid chromatograph (device) according to the embodiment of the present invention.
  • [ ] zeigt die Aufbereitung der auf der Methode mit internem Standard basierenden Daten der Kalibrierungskurven[ ] shows the preparation of the calibration curve data based on the method with internal standard
  • [ ] zeigt die auf der Methode mit internem Standard basierenden Daten der Kalibrierungskurven[ ] shows the data of the calibration curves based on the method with internal standard
  • [ ] zeigt ein Chromatogramm einer QC-Probe, die einen internen Standard enthält, und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die ein Messobjekt in unbekannter Konzentration aber keinen internen Standard enthält [ ] shows a chromatogram of a QC sample that contains an internal standard and a chromatogram of an unknown sample that contains a measurement object in an unknown concentration but no internal standard
  • [ ] zeigt das Verfahren zur quantitativen Bestimmung des Messobjekts in der unbekannten Probe an Hand der Daten der Kalibrierungskurven[ ] shows the procedure for the quantitative determination of the measuring object in the unknown sample based on the data of the calibration curves
  • [ ] zeigt ein Standardchromatogramm für die Diagnosekriterien und ein Chromatogramm einer QC-Probe[ ] shows a standard chromatogram for the diagnostic criteria and a chromatogram of a QC sample
  • [ ] zeigt die Diagnosekriterien (Tabelle)[ ] shows the diagnostic criteria (table)
  • [ ] zeigt den Zustand, bei dem sich die Peakintensität des internen Standards geändert hat, als das Messobjekt Y zusammen mit dem internen Standard vorlag[ ] shows the state where the peak intensity of the internal standard has changed as the measurement object Y together with the internal standard
  • [ ] zeigt die Daten der Kalibrierungskurven, die mittels des Intensitätsverhältnisses des internen Standards korrigiert wurden[ ] shows the data of the calibration curves, which were corrected using the intensity ratio of the internal standard

[Ausführungsart der Erfindung]EMBODIMENT OF THE INVENTION

Nachfolgend werden Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung unter Bezugnahme auf die Zeichnungen beschrieben.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described with reference to the drawings.

zeigt den Aufbau des Flüssigchromatographen 100 gemäß der Ausführungsform der vorliegenden Erfindung. shows the structure of the liquid chromatograph 100 according to the embodiment of the present invention.

Der Flüssigchromatograph 100 dient zur quantitativen Bestimmung bestimmter Messobjekte. Er enthält ein Datenverarbeitungsgerät (Steuereinheit) 7 zur Steuerung des gesamten Gerätes, eine mobile Phase (eine Mischung aus Eluent und Lösungsmittel) 1, eine Pumpe 2 für die Zuführung der mobilen Phase 1, einen Autosampler 3 zum Injizieren der Proben, eine Säule 4 zur Trennung der Komponenten, einen Säulenofen 5, der die Säule 4 auf einer konstanten Temperatur hält, einen Detektor 6 zum Erfassen der getrennten Komponenten und eine Anzeigeeinheit 10.The liquid chromatograph 100 is used for the quantitative determination of certain measuring objects. It contains a data processing device (control unit) 7 to control the entire device, a mobile phase (a mixture of eluent and solvent) 1 , a pump 2nd for feeding the mobile phase 1 , an autosampler 3rd for injecting the samples, a column 4th to separate the components, a column oven 5 who is the pillar 4th maintains a constant temperature, a detector 6 for detecting the separated components and a display unit 10th .

Die Datenverarbeitungseinheit 7 besteht aus einem Computer, der eine Steuereinheit (CPU) 9, die die Analyse ausführt und die Analyseergebnisse analysiert, und eine Speichereinheit 8 (Festplatte oder dergleichen) enthält, die die Analysenergebnisse speichert. Die Anzeigeeinheit 10 (Monitor) zeigt die Analysenergebnisse an.The data processing unit 7 consists of a computer which is a control unit (CPU) 9 which performs the analysis and analyzes the analysis results, and a storage unit 8th (Hard disk or the like) that stores the analysis results. The display unit 10th (Monitor) shows the analysis results.

Der Detektor 6 ist ein dreidimensionaler Detektor mit mehreren Komponenten zum Erfassen der Signalintensität und er ist in der Lage, gleichzeitig die Signalintensität in Bezug auf die Zeit bei mehreren Wellenlängen zu erfassen.The detector 6 is a three-dimensional detector with multiple components for detecting the signal intensity and is able to simultaneously detect the signal intensity in relation to time at several wavelengths.

Die Probe wird von einem Injektor (hier nicht abgebildet) des Autosamplers 3 injiziert, durchläuft die Säule 4 zusammen mit der mobilen Phase 1, die von der Pumpe 2 zugeführt wird, und wird in die verschiedenen in der Probe enthaltenen Komponenten aufgetrennt.The sample is taken from an injector (not shown here) of the autosampler 3rd injected, passes through the column 4th along with the mobile phase 1 by the pump 2nd is fed, and is separated into the various components contained in the sample.

Die in Komponenten aufgetrennte Probe wird vom Detektor 6 detektiert. Das Signal des Detektors 6 wird zur Verarbeitung der Daten an die Datenverarbeitungseinrichtung 7 gesendet.The sample separated into components is removed from the detector 6 detected. The signal from the detector 6 is used to process the data to the data processing device 7 sent.

Die Säule 4 ist ein Gerät, das allgemein als Trenneinheit verwendet wird, um die in der mobilen Phase 1 vorhandenen Bestandteile der Probe zu trennen. Sie umfassen zum Beispiel gepackte Säulen oder Monolithsäulen und andere. Als Packmittel für die Säule 4 können Stoffe verschiedenen Typs wie solche vom Adsorptionstyp, Verteilungstyp und lonenaustauschtyp verwendet werden. Die Säule 4 sollte in einem Säulenofen 5 installiert sein, damit die Säule 4 auf einer konstanten Temperatur gehalten und die Probe reproduzierbar getrennt werden kann.The pillar 4th is a device that is commonly used as a separation unit to help in the mobile phase 1 separate existing components of the sample. For example, they include packed columns or monolith columns and others. As packaging for the column 4th substances of various types such as adsorption type, distribution type and ion exchange type can be used. The pillar 4th should be in a column oven 5 installed so the column 4th kept at a constant temperature and the sample can be reproducibly separated.

Um das Messobjekt quantitativ zu bestimmen, speichert die Speichereinheit 8 die auf der Methode mit internem Standard basierenden Daten der Kalibrierungskurve, die das Intensitätsverhältnis der Intensität der Messobjekte und der Intensität des internen Standards enthalten. Die Daten der Kalibrierungskurven können durch die übliche Methode mit internem Standard erhalten werden, wie es zum Beispiel in den und gezeigt ist.In order to determine the measurement object quantitatively, the storage unit stores 8th the data of the calibration curve based on the method with internal standard, which contain the intensity ratio of the intensity of the measurement objects and the intensity of the internal standard. The data of the calibration curves can be obtained by the usual method with an internal standard, as for example in the and is shown.

Zunächst wird, wie in gezeigt, das Messobjekt mit einer bekannten Konzentration durch STD-X (Standardprobe) wiedergegeben, wenn X das Messobjekt ist. Dann werden die internen Standards a und b in bestimmter Konzentration zu STD-X hinzugefügt und die Chromatogramme angefertigt. Dabei wird die Konzentration des Messobjekts X verändert und mit den verschiedenen Konzentrationen X1 , X2 , X3 jeweils ein Chromatogramm angefertigt.First, as in shown the measurement object with a known concentration STD-X (Standard sample) reproduced if X is the measurement object. Then the internal standards a and b in a certain concentration STD-X added and the chromatograms made. The concentration of the measurement object X changed and with the different concentrations X 1 , X 2 , X 3 each made a chromatogram.

Dabei erscheinen die Peaks der internen Standards a und b jeweils vor und nach dem Peak im Chromatogramm des Messobjekts X. Die internen Standards a und b entsprechen in den Patentansprüchen jeweils dem „ersten internen Standard“ und dem „zweiten internen Standard“.The peaks of the internal standards appear a and b before and after the peak in the chromatogram of the measurement object X . The internal standards a and b correspond in each case to the "first internal standard" and the "second internal standard" in the patent claims.

Als nächstes wird, wie in dargestellt ist, das Intensitätsverhältnis (STD/a) jeder Intensität der Messobjekte STD-X1 , STD-X2 und STD-X3 , deren Konzentration bekannt ist, und der Intensität des internen Standards a an der vertikalen Achse in Abhängigkeit von dem internen Standard a abgetragen. Alle Konzentrationen Conc der Messobjekte STD-X1 , STD-X2 und STD-X3 werden an der horizontalen Achse abgetragen und so die Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL1, die die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts X darstellen, in Form einer linearen Funktion erhalten.Next, as in the intensity ratio (STD / a) of each intensity of the measurement objects is shown STD-X 1 , STD-X 2 and STD-X 3 whose concentration is known and the intensity of the internal standard a on the vertical axis depending on the internal standard a worn away. All concentrations conc of the measurement objects STD-X 1 , STD-X 2 and STD-X 3 are plotted on the horizontal axis and thus the data of the first calibration curve CAL1 , which is the relationship between the intensity ratio and the concentration of the measurement object X represent, obtained in the form of a linear function.

Auf die gleiche Weise werden für den internen Standard b, wie in dargestellt ist, das Intensitätsverhältnis (STD/b) jeder Intensität der Messobjekte STD-X1 , STD-X2 und STD-X3 , deren Konzentration bekannt ist, und der Intensität des internen Standards b an der vertikalen Achse abgetragen. Alle Konzentrationen Conc der Messobjekte STD-X1 , STD-X2 und STD-X3 werden an der horizontalen Achse abgetragen und so die Daten der zweiten Kalibrierungskurve CAL2, die die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts X darstellen, in Form einer linearen Funktion erhalten.The same way for the internal standard b , as in is shown, the intensity ratio ( STD / b ) each intensity of the measurement objects STD-X 1 , STD-X 2 and STD-X 3 whose concentration is known and the intensity of the internal standard b worn on the vertical axis. All concentrations conc of the measurement objects STD-X 1 , STD-X 2 and STD-X 3 are plotted on the horizontal axis and thus the data of the second calibration curve CAL2 , which is the relationship between the intensity ratio and the concentration of the measurement object X represent, obtained in the form of a linear function.

Dabei ist zu beachten, dass die Daten der Kalibrierungskurven nicht auf eine lineare Funktion beschränkt sind, sondern auch eine Tabelle, eine angenäherte Kurve oder dergleichen sein können, solange sie die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts wiedergeben.It should be noted that the data of the calibration curves are not limited to a linear function, but can also be a table, an approximate curve or the like, as long as they reflect the relationship between the intensity ratio and the concentration of the measurement object.

Als nächstes wird ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung eines Messobjekts durch Anfertigung eines Chromatogramms einer unbekannten Probe, die das Messobjekt in einer unbekannten Konzentration enthält, unter Bezugnahme auf die und erläutert.Next, a method of quantitatively determining a measurement object by taking a chromatogram of an unknown sample containing the measurement object in an unknown concentration will be described with reference to FIG and explained.

Zunächst wird, wie in dargestellt ist, ein Chromatogramm der QC-Probe angefertigt, das die gleichen Konzentrationen der internen Standards a und b enthält wie die internen Standards a und b bei der Erstellung der Daten der Kalibrierungskurven (Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL1 und Daten der zweiten Kalibrierungskurve CAL2) in den und .First, as in is shown, a chromatogram of the QC sample is prepared that has the same concentrations of internal standards a and b contains like the internal standards a and b when creating the data of the calibration curves (data of the first calibration curve CAL1 and data of the second calibration curve CAL2 ) in the and .

Als nächstes wird, wie in gezeigt, ein Chromatogramm einer unbekannten Probe angefertigt, die das Messobjekt Xn in unbekannter Konzentration, die internen Standards a und b jedoch nicht enthält.Next, as in shown, a chromatogram of an unknown sample was made, which is the measurement object Xn in unknown concentration, the internal standards a and b but does not contain.

Dann berechnet die Steuereinheit 9, wie in dargestellt ist, aus der Intensität des ersten internen Standards a der QC-Probe und der Intensität des Messobjekts Xn der unbekannten Probe das erste Intensitätsverhältnis Xn/a, und ermittelt aus dem ersten Intensitätsverhältnis Xn/a basierend auf den Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL1 die Konzentration Conc1 des Messobjekts Xn. Auf die gleiche Weise berechnet die Steuereinheit 9 aus der Intensität des zweiten internen Standards b der QC-Probe und der Intensität des Messobjekts Xn der unbekannten Probe das zweite Intensitätsverhältnis Xn/b, und ermittelt aus dem zweiten Intensitätsverhältnis Xn/b basierend auf den Daten der zweiten Kalibrierungskurve CAL2 die Konzentration Conc2 des Messobjekts Xn.Then the control unit calculates 9 , as in is shown from the intensity of the first internal standard a the QC sample and the intensity of the measurement object Xn the unknown sample the first intensity ratio Xn / a , and determined from the first intensity ratio Xn / a based on the data from the first calibration curve CAL1 the concentration Conc1 of the measurement object Xn . The control unit calculates in the same way 9 from the intensity of the second internal standard b the QC sample and the intensity of the measurement object Xn the second intensity ratio of the unknown sample Xn / b , and determined from the second intensity ratio Xn / b based on the data from the second calibration curve CAL2 the concentration Conc2 of the measurement object Xn .

Als Nächstes ermittelt die Steuereinheit 9 aus den Konzentrationen Conc1 und Conc2 den Mittelwert Conc Xn = (Conc1 + Conc2) / 2, um die Konzentration des Messobjekts Xn zu bestimmen. Auf diese Weise führt die Steuereinheit 9 die quantitative Bestimmung des Messobjekts Xn der unbekannten Probe durch.The control unit next determines 9 from the Conc1 and Conc2 concentrations the mean value Conc Xn = (Conc1 + Conc2) / 2, around the concentration of the measurement object Xn to determine. In this way, the control unit performs 9 the quantitative determination of the measurement object Xn of the unknown sample.

Idealerweise ist Conc1 = Conc2, weil aber aufgrund des Einflusses verschiedener Verunreinigungen und dergleichen Conc1 und Conc2, die durch die Kalibrierungskurve berechnet wurden, möglicherweise nicht gleich sind, wird die Genauigkeit der quantitativen Bestimmung verbessert, wenn man den Mittelwert Conc Xn ermittelt.Ideally, Conc1 = Conc2, but because of the influence of various impurities and the like Conc1 and Conc2 that may have been calculated by the calibration curve may not be the same, the accuracy of the quantitative determination is improved by taking the mean Conc Xn determined.

Der Mittelwert Conc Xn wird dann verwendet, wenn zwei oder mehr interne Standards vorhanden sind. Wenn nur ein interner Standard vorhanden ist, ist keine Mittelwertbildung erforderlich, und es kann auf eine einzelne Kalibrierungskurve Bezug genommen werden.The mean Conc Xn is used when there are two or more internal standards. If there is only one internal standard, no averaging is required and a single calibration curve can be referenced.

Auf diese Weise kann auch dann, wenn eine auf der Methode mit internem Standard basierende Kalibrierungskurve verwendet wird, eine quantitative Bestimmung durchgeführt werden, ohne dass der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zugesetzt wird. Aus diesem Grund ist ein komplizierter und Geschicklichkeit erfordernder Vorgang zum Abwiegen einer bestimmten Konzentration der Standardsubstanz für die unbekannte Probe nicht erforderlich, so dass verhindert werden kann, dass Fehler beim Abwiegen der Standardsubstanz die Genauigkeit der Gehaltsbestimmung verringert. Und dadurch, dass der Arbeitsgang, der unbekannten Probe eine Standardsubstanz zuzusetzen, nicht erforderlich ist, kann die Messung vereinfacht und eine Abnahme der quantitativen Genauigkeit verhindert werden.In this way, even if a calibration curve based on the method with an internal standard is used, a quantitative determination can be carried out without adding a standard substance to the unknown sample. For this reason, a complicated and skillful procedure for weighing a certain concentration of the standard substance is not required for the unknown sample, so that errors in weighing the standard substance can be prevented from lowering the accuracy of the content determination. And because the process of adding a standard substance to the unknown sample is not necessary, the measurement can be simplified and a decrease in the quantitative accuracy can be prevented.

Die Durchführung der quantitativen Bestimmung einer unbekannten Probe ohne Zugabe einer Standardsubstanz basiert auf der Voraussetzung, dass aufgrund der Fortschritte in der Flüssigkeitschromatographie die Streuung der Messungen bei normaler Kontrolle und Wartung in einem kleinen Bereich liegt. Daher wird vor der Messung der unbekannten Probe das Chromatogramm der in gezeigten QC-Probe angefertigt, und man betrachtet die Intensität ihres internen Standards als dieselbe wie die Intensität des internen Standards in der unbekannten Probe in dem Fall, dass man angenommen hat, dass der interne Standard zu der unbekannten Probe hinzugefügt wurde.The quantitative determination of an unknown sample without the addition of a standard substance is based on the premise that, due to the progress in liquid chromatography, the scatter of the measurements lies in a small range with normal control and maintenance. Therefore, before measuring the unknown sample, the chromatogram of the in QC sample shown, and the intensity of its internal standard is considered to be the same as the intensity of the internal standard in the unknown sample in the case where it was assumed that the internal standard was added to the unknown sample.

Demzufolge erhält man falsche Messergebnisse, wenn man dieses Verfahren in dem Fall verwendet, dass sich der Zustand des Flüssigchromatographen verschlechtert hat und die Streuung der Messwerte größer geworden ist. As a result, incorrect measurement results are obtained if this method is used in the event that the condition of the liquid chromatograph has deteriorated and the spread of the measurement values has increased.

Daher ist es bevorzugt, dass der Zustand des Flüssigkeitschromatographen 100 im Voraus diagnostiziert wird und die quantitative Bestimmung der unbekannten Probe dann durchgeführt wird, wenn der Gerätezustand als normal angesehen wird.Therefore, it is preferred that the state of the liquid chromatograph 100 is diagnosed in advance and the quantitative determination of the unknown sample is performed when the device condition is considered normal.

Diese Diagnose kann beispielsweise wie in den und angegeben durchgeführt werden. Zunächst speichert die Speichereinheit 8 die Diagnosekriterien, die auf der Wellenform oder Intensität eines Standardchromatogramms basieren, das den internen Standard mindestens in der gleichen Konzentration wie die QC-Probe enthält.This diagnosis can, for example, as in the and specified. First, the storage unit saves 8th the diagnostic criteria based on the waveform or intensity of a standard chromatogram containing the internal standard at least at the same concentration as the QC sample.

Beispiele dieser Diagnosekriterien umfassen, wie in gezeigt, Wellenformdaten eines Chromatogramms (Standardchromatogramm) CR, das ein Messobjekt X in einer bekannten Konzentration X1 und die internen Standards a und b enthält. In diesem Beispiel ist das Standardchromatogramm CR dasselbe wie das Chromatogramm, das zur Erstellung der in gezeigten Kalibrierungskurve der Konzentration X1 des Messobjekts X benutzt wird.Examples of these diagnostic criteria include, as in shown, waveform data of a chromatogram (standard chromatogram) CR which is a measurement object X in a known concentration X 1 and the internal standards a and b contains. In this example, the standard chromatogram is CR the same as the chromatogram used to create the in shown calibration curve of the concentration X 1 of the measurement object X is used.

Die Diagnosekriterien enthalten jedoch möglicherweise nicht den Peak des Messobjekts X, falls diese auf der Wellenform oder Intensität des Chromatogramms basieren, das die internen Standards a und b in der gleichen Konzentration enthält wie die QC-Probe. Dann beurteilt die Steuereinheit 9 basierend auf den Diagnosekriterien hinsichtlich der Wellenform oder Intensität des Chromatogramms der QC-Probe, ob die unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht.However, the diagnostic criteria may not include the peak of the device under test X if based on the waveform or intensity of the chromatogram that complies with the internal standards a and b in the same concentration as the QC sample. Then the control unit judges 9 based on the diagnostic criteria regarding the waveform or intensity of the chromatogram of the QC sample, whether or not the unknown sample can be measured.

Die QC-Probe kann, wie zeigt, die internen Standards a und b enthalten, wenn jedoch, wie in den Chromatogrammen CRa, CRb und CRc von gezeigt wird, das Messobjekt X die internen Standards a und b in bekannter Konzentration enthält, kann die Diagnosegenauigkeit verbessert werden, weil die Diagnose unter Verwendung des Peaks des Messobjekts X durchgeführt wird,.The QC sample can be like shows the internal standards a and b included, however, as in the chromatograms CRa , CRb and CRc of is shown, the measurement object X the internal standards a and b contains in known concentration, the diagnostic accuracy can be improved because the diagnosis using the peak of the measurement object X is carried out,.

In der folgenden Beschreibung wird angenommen, dass die Diagnosekriterien und die QC-Probe auch das Messobjekt X mit einer bekannten Konzentration X1 enthalten, es ist jedoch auch selbstverständlich, dass die Diagnosekriterien und die QC-Probe das Messobjekt X nicht enthalten können.In the following description it is assumed that the diagnostic criteria and the QC sample are also the measurement object X with a known concentration X 1 included, but it is also a matter of course that the diagnostic criteria and the QC sample are the measurement object X cannot contain.

zeigt ein Standardchromatogramm CR und die Chromatogramme CRa, CRb und CRc der QC-Probe. Wie in zu sehen ist, enthält das Standardchromatogramm CR den Peak S0 des Messobjekts X sowie die Peaks S1 und S2 des ersten internen Standards a und b auf, die jeweils vor und nach der Retentionszeit von Peak S0 auftauchen. shows a standard chromatogram CR and the chromatograms CRa , CRb and CRc the QC sample. As in can be seen contains the standard chromatogram CR the peak S0 of the measurement object X as well as the peaks S1 and S2 of the first internal standard a and b on, before and after the retention time of peak S0 Pop up.

Für jeden der Peaks S0, S1 und S2 wird die Halbwertsbreite (Peakbreite) durch W0, W1 und W2, und die Intensität (zum Beispiel die Peakfläche) durch A0, A1 und A2 dargestellt.For each of the peaks S0 , S1 and S2 is the full width at half maximum (peak width) W0 , W1 and W2 , and the intensity (for example the peak area) A0 , A1 and A2 shown.

zeigt ein Beispiel der in der Speichereinheit 8 gespeicherten Diagnosekriterien (Tabelle) J1. Diese Diagnosekriterien J1 basieren auf dem Standardchromatogramm CR und für jeden der Peaks S0, S1 und S2 sind die ersten Schwellenwerte der Halbwertsbreite Wx, Wy und Wz und die zweiten Schwellenwerte der Intensität (Peakfläche) Ax, Ay und Az gespeichert. shows an example of the in the storage unit 8th stored diagnostic criteria (table) J1 . These diagnostic criteria J1 are based on the standard chromatogram CR and for each of the peaks S0 , S1 and S2 are the first thresholds of the full width at half maximum Wx , Wy and Wz and the second threshold values of intensity (peak area) Ax , Ay and Az saved.

Die Steuereinheit 9 führt eine Diagnose basierend auf den Diagnosekriterien J1 durch und beurteilt, ob eine unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht.The control unit 9 carries out a diagnosis based on the diagnostic criteria J1 and judges whether an unknown sample can be measured or not.

Zum Beispiel wird angenommen, dass, wie in gezeigt, das Chromatogramm CRa der QC-Probe erhalten wurde. Die Steuereinheit 9 ermittelt die Halbwertsbreite und Intensität jedes Peaks S0 bis S2 aus dem Chromatogramm CRa der QC-Probe, und wenn beispielsweise die Halbwertsbreiten W0a und W2a der Peaks S0 und S2 jeweils die ersten Schwellenwerte Wx bzw. Wz überschreiten, urteilt sie, dass die unbekannte Probe nicht gemessen werden kann.For example, it is assumed that, as in shown the chromatogram CRa the QC sample was obtained. The control unit 9 determines the half width and intensity of each peak S0 to S2 from the chromatogram CRa the QC sample, and if, for example, the half-widths W0a and W2a of the peaks S0 and S2 the first threshold values in each case Wx respectively. Wz , it judges that the unknown sample cannot be measured.

Wenn die Halbwertsbreiten W0a und W1 jeweils die ersten Schwellenwerte Wx bzw. Wz überschreiten, wird ein Defekt der stationären Phase (Säule 4) angenommen.If the half-widths W0a and W1 If the first threshold values Wx or Wz are exceeded, the stationary phase (column 4th ) accepted.

Ferner wird, wie in gezeigt, angenommen, dass ein Chromatogramm CRb einer anderen QC-Probe erhalten wurde. Die Steuereinheit 9 ermittelt die Halbwertsbreite und die Intensität jedes Peaks S0 bis S2 aus dem Chromatogramm CRb der QC-Probe, und wenn beispielsweise die Intensität A1b des Peaks S1 kleiner als der zweite Schwellenwert Ay ist, urteilt sie, dass die unbekannte Probe nicht gemessen werden kann. Furthermore, as in shown, assumed that a chromatogram CRb another QC sample was obtained. The control unit 9 determines the full width at half maximum and the intensity of each peak S0 to S2 from the chromatogram CRb the QC sample, and if for example the intensity A1b of the peak S1 is smaller than the second threshold Ay, she judges that the unknown sample cannot be measured.

Im Fall, dass die Intensität A1b kleiner ist als der zweite Schwellenwert Ay, wird ein Defekt des Detektors angenommen (zum Beispiel kann ein Lampenwechsel des Detektors erforderlich sein).In the event that the intensity A1b is less than the second threshold Ay , a defect in the detector is assumed (for example, the detector may need to be replaced).

Weiterhin wird, wie in gezeigt, angenommen, dass ein weiteres Chromatogramm CRc einer anderen QC-Probe erhalten wurde. Die Steuereinheit 9 ermittelt die Halbwertsbreite und die Intensität jedes Peaks S0 bis S2 aus dem Chromatogramm CRb der QC-Probe, und wenn beispielsweise mindestens eine der Halbwertsbreiten W1c und W2c der Peaks S1 oder S2 den ersten Schwellenwert Wy oder Wz überschritten haben, urteilt sie, dass die unbekannte Probe nicht gemessen werden kann.Furthermore, as in shown, assumed that another chromatogram CRc another QC sample was obtained. The control unit 9 determines the full width at half maximum and the intensity of each peak S0 to S2 from the chromatogram CRb the QC sample, and if, for example, at least one of the half-widths W1c and W2c of the peaks S1 or S2 the first threshold Wy or Wz exceeded, she judges that the unknown sample can not be measured.

Im Fall, dass mindestens eine der Halbwertsbreiten W1c und W2c höher ist als der zweite Schwellenwert Ay, wird angenommen, dass eine Störung bei der mobilen Phase vorliegt.In the event that at least one of the half-value widths W1c and W2c is higher than the second threshold value Ay, it is assumed that there is a fault in the mobile phase.

In dem Beispiel des Chromatogramms CRb der QC-Probe von wurde bestimmt, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist, wenn die Intensität A1b des Peaks S1 kleiner ist als der zweite Schwellenwert Ay, aber auch im Fall, dass alle Intensitäten A0b bis A2b der Peaks S0 bis S2 jeweils kleiner als der zweite Schwellenwert sind oder wenn zwei oder mehr von diesen Intensitäten v kleiner als der zweite Schwellenwert sind oder wenn irgendeine der Intensitäten A0b bis A2b kleiner als der zweite Schwellenwert ist, kann entschieden werden, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist.In the example of the chromatogram CRb the QC sample from it was determined that the measurement of the unknown sample is not possible if the intensity A1b of the peak S1 is less than the second threshold Ay, but also in the event that all intensities A0b to A2b of the peaks S0 to S2 are each less than the second threshold or if two or more of these intensities v are less than the second threshold or if any of the intensities A0b to A2b is smaller than the second threshold value, it can be decided that the measurement of the unknown sample is not possible.

Ferner wurde in dem Beispiel des Chromatogramms CRc der QC-Probe von festgestellt, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist, wenn wenigstens eine der Halbwertsbreiten W1c und W2c den Schwellenwert Wy oder Wz überschritten hat, aber auch im Fall, dass alle Halbwertsbreiten W0c bis W2c der Peaks S0 bis S2 jeweils den ersten Schwellenwert überschritten haben oder wenn zwei oder mehr dieser Halbwertsbreiten W0c bis W2c den ersten Schwellenwert überschritten haben oder wenn irgendeine der Halbwertsbreiten W0c bis W2c den ersten Schwellenwert überschritten haben, kann entschieden werden, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist.Furthermore, in the example of the chromatogram CRc the QC sample from found that the measurement of the unknown sample is not possible if at least one of the half-widths W1c and W2c the threshold Wy or Wz has exceeded, but also in the event that all half-widths W0c to W2c of the peaks S0 to S2 each have exceeded the first threshold or if two or more of these half-value widths W0c to W2c have exceeded the first threshold or if any of the half-value widths W0c to W2c have exceeded the first threshold value, it can be decided that the measurement of the unknown sample is not possible.

Wenn entschieden worden ist, dass die Messung der unbekannten Probe nicht möglich ist, kann die Steuereinheit 9 dieses auf der Anzeigeeinheit 10 anzeigen, oder es kann eine Stimme ertönen, die die Bedienungsperson darauf aufmerksam macht, und sie kann den Flüssigkeitschromatographen 100 so steuern, dass die Messung nicht durchgeführt werden kann. Diese Steuerung kann die Messung physikalisch verhindern, aber es ist einfacher, die Software so zu steuern, dass das Computerprogramm zum Ausführen der Messung nicht weiterläuft.If it has been decided that the measurement of the unknown sample is not possible, the control unit can 9 this on the display unit 10th display, or a voice may sound to alert the operator and the liquid chromatograph 100 Control so that the measurement cannot be carried out. This controller can physically prevent the measurement, but it is easier to control the software so that the computer program does not continue to run the measurement.

Wenn die Messung der unbekannten Probe zugelassen worden ist, kann die Steuereinheit 9 dieses auf der Anzeigeeinheit 10 anzeigen, oder es kann eine Stimme ertönen, die die Bedienungsperson darauf aufmerksam macht, und sie kann den Flüssigkeitschromatographen 100 so steuern, dass die Messung durchgeführt werden kann. Diese Steuerung kann zum Beispiel ein Computerprogramm zur Durchführung der Messung automatisch voranschreiten lassen und die Steuerung einfach per Software durchführen.If the measurement of the unknown sample has been allowed, the control unit can 9 this on the display unit 10th display, or a voice may sound to alert the operator and the liquid chromatograph 100 control so that the measurement can be carried out. This control can, for example, automatically let a computer program for performing the measurement proceed and the control can be carried out simply by software.

Wenn ein zusätzliches Messobjekt Y quantitativ bestimmt wird, das sich von dem Messobjekt X unterscheidet, kann normalerweise auf die gleiche Art wie in gezeigt das Chromatogramm der QC-Probe und das Chromatogramm der unbekannten Probe auf die gleiche Weise gemessen werden, wenn die gleiche Kalibrierungskurve wie bei dem Messobjekt X gespeichert ist.If an additional measurement object Y is determined quantitatively, which is different from the measurement object X can usually be done in the same way as in shown the chromatogram of the QC sample and the chromatogram of the unknown sample can be measured in the same way if the same calibration curve as for the measurement object X is saved.

Wenn man andererseits als QC-Probe bei der quantitativen Bestimmung von Messobjekt X, eine QC-Probe verwendet, die wie in der oben genannten das Messobjekt X enthält, nimmt zwar die Messgenauigkeit des Flüssigkeitschromatographen 100 zu, wenn diese QC-Probe jedoch auch zur quantitativen Bestimmung des Messobjekts Y verwendet wird, kann die Genauigkeit bei der Bestimmung des Messobjekts Y abnehmen.If, on the other hand, as a QC sample in the quantitative determination of the measurement object X , used a QC sample as in the above the measurement object X contains, takes the measurement accuracy of the liquid chromatograph 100 if this QC sample is also used for the quantitative determination of the measurement object Y accuracy can be used when determining the measurement object Y lose weight.

Wie in gezeigt ist, variieren selbst dann, wenn die internen Standards a und b in der QC-Probe jeweils die gleichen Substanzen sind und in der gleichen Konzentration vorliegen, die Peakintensitäten der internen Standards a und b, wenn das Messobjekt Y und die internen Standards a und b zusammen vorliegen, was daran liegt, dass es vorkommt, dass die Peakintensität der internen Standards a und b der QC-Probe, die das Messobjekt X enthält, unterschiedlich ist. Übrigens wird im Beispiel der die Peakintensität der internen Standards a und b größer, wenn das Messobjekt Y enthalten ist.As in is shown vary even if the internal standards a and b the QC sample contains the same substances and the same concentration, the peak intensities of the internal standards a and b when the measurement object Y and the internal standards a and b exist together, which is because it happens that the peak intensity of the internal standards a and b the QC sample that is the measurement object X contains, is different. Incidentally, in the example the the peak intensity of the internal standards a and b larger if the measurement object Y is included.

Andererseits besteht der Wunsch, dass für jedes weitere Messobjekt Y die QC-Probe, die das Messobjekt X enthält, bei allen Messungen verwendet werden kann, weil die Verarbeitbarkeit abnimmt, wenn man für jedes zusätzliche Messobjekt Y eine QC-Probe vorbereitet, die das Messobjekt X enthält.On the other hand, there is a wish for each additional measurement object Y the QC sample which is the measurement object X contains, can be used in all measurements because the processability decreases if one for each additional measurement object Y prepared a QC sample that the measurement object X contains.

Daher werden als zusätzliche Daten der Kalibrierungskurve von Messobjekt Y basierend auf der Methode mit internen Standard in der Speichereinheit 8 die Daten der Kalibrierungskurve gespeichert, die mit dem folgenden Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1) korrigiert wurden.Therefore, as additional data the calibration curve of the measurement object Y based on the internal standard method in the storage unit 8th the data of the calibration curve are saved, which are compared with the following intensity ratio of the internal standards ( A2 / A1 ) have been corrected.

Dann kann durch die quantitative Bestimmung von Messobjekt Y unter Verwendung dieser korrigierten Daten der Kalibrierungskurve das Messobjekt Y mit großer Genauigkeit quantitativ analysiert werden, selbst wenn bei der quantitativen Bestimmung des Messobjekts Y auch die QC-Probe verwendet wird, die das Messobjekt X enthält.Then the quantitative determination of the measurement object Y the measurement object using this corrected data of the calibration curve Y can be analyzed quantitatively with great accuracy, even if in the quantitative determination of the measurement object Y also the QC sample is used which is the measurement object X contains.

Konkret werden, wie in gezeigt, die Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL3 und der zweiten Kalibrierungskurve CAL4 für das Messobjekt Y auf die gleiche Weise wie im Fall des Messobjekts X von und erstellt.Be specific, as in shown the data of the first calibration curve CAL3 and the second calibration curve CAL4 for the measurement object Y in the same way as in the case of the measurement object X of and created.

Wie in gezeigt ist, erhält man die erste Kalibrierungskurve CAL3, indem man für den internen Standard a das Intensitätsverhältnis (STD/a) der Intensität jedes der Messobjekte STD-Y1 , STD-Y2 und STD-Y3 , deren Konzentration bekannt ist, und der Intensität des internen Standards a an der vertikalen Achse abträgt und alle Konzentrationen Conc der Messobjekte STD-Y1 , STD-Y2 und STD-Y3 an der horizontalen Achse abträgt, in Form einer linearen Funktion, die die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts X zeigt.As in is shown, the first calibration curve is obtained CAL3 by going for the internal standard a the intensity ratio (STD / a) of the intensity of each of the measurement objects STD-Y 1 , STD-Y 2 and STD-Y 3 whose concentration is known and the intensity of the internal standard a on the vertical axis and all conc concentrations of the measurement objects STD-Y 1 , STD-Y 2 and STD-Y 3 on the horizontal axis, in the form of a linear function that defines the relationship between the intensity ratio and the concentration of the measurement object X shows.

Die zweite Kalibrierungskurve CAL4 erhält man, indem man auf die gleiche Weise für den internen Standard b, wie in gezeigt ist, das Intensitätsverhältnis (STD/b) der Intensität jedes der Messobjekte STD-Y1 , STD-Y2 und STD-Y3 , deren Konzentration bekannt ist, und der Intensität des internen Standards b an der vertikalen Achse abträgt und alle Konzentrationen Conc der Messobjekte STD-Y1 , STD-Y2 und STD-Y3 an der horizontalen Achse abträgt, in Form einer linearen Funktion, die die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts X zeigt.The second calibration curve CAL4 is obtained by doing the same for the internal standard b , as in the intensity ratio (STD / b) of the intensity of each of the measurement objects is shown STD-Y 1 , STD-Y 2 and STD-Y 3 whose concentration is known and the intensity of the internal standard b on the vertical axis and all conc concentrations of the measurement objects STD-Y 1 , STD-Y 2 and STD-Y 3 on the horizontal axis, in the form of a linear function that defines the relationship between the intensity ratio and the concentration of the measurement object X shows.

Als nächstes wird, wie in gezeigt, das Intensitätsverhältnis (A2/A1) der internen Standards aus der Intensität A2 der internen Standards a, b mit der gleichen Konzentration wie bei der QC-Probe, als das Messobjekt Y gleichzeitig vorhanden war, und der Intensität A1 der internen Standards a, b mit der gleichen Konzentration wie bei der QC-Probe, als das Messobjekt X in der gleichen Konzentration wie das Messobjekt Y vorhanden war, ermittelt.Next, as in shown the intensity ratio ( A2 / A1 ) the internal standards from the intensity A2 of internal standards a , b with the same concentration as the QC sample as the measurement object Y was present at the same time, and the intensity A1 of internal standards a , b with the same concentration as the QC sample as the measurement object X in the same concentration as the measurement object Y was present.

Das Intensitätsverhältnis (A2/A1) der internen Standards wird für jeden internen Standard a und b berechnet, zum Beispiel beträgt es für den internen Standard a (A2/A1) = (ay/ax) und für den internen Standard b (A2/A1) = (by/bx).The intensity ratio ( A2 / A1 ) of internal standards is for each internal standard a and b calculated, for example, for the internal standard a (A2 / A1) = (ay / ax) and for the internal standard b (A2 / A1) = (by / bx).

Wie in gezeigt, speichert die Speichereinheit 8 die Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6, bei denen die Intensität der internen Standards in den Daten der ersten Kalibrierungskurve CAL3 und der zweiten Kalibrierungskurve CAL4 mit dem Intensitätsverhältnis (A2/A1) der internen Standards korrigiert worden sind.As in shown, stores the storage unit 8th the data of the calibration curves CAL5 and CAL6 where the intensity of the internal standards in the data of the first calibration curve CAL3 and the second calibration curve CAL4 with the intensity ratio ( A2 / A1 ) the internal standards have been corrected.

Bei dieser Korrektur wird der Wert des Nenners a des Intensitätsverhältnis (STD/a) der Intensität jedes der Messobjekte STD-Y1 , STD-Y2 und STD-Y3 auf der horizontalen Achse der ersten Kalibrierungskurve CAL 3 und der Intensität des internen Standards mit (ay/ax) multipliziert. Das heißt, das Intensitätsverhältnis wird = STD/{a x (ay/ax)} nach der Korrektur.With this correction, the value of the denominator a the intensity ratio (STD / a) of the intensity of each of the measurement objects STD-Y 1 , STD-Y 2 and STD-Y 3 multiplied on the horizontal axis of the first calibration curve CAL 3 and the intensity of the internal standard by (ay / ax). That is, the intensity ratio becomes = STD / {ax (ay / ax)} after the correction.

Da in diesem Beispiel ay > ax ist, wird, wie zeigt, das Intensitätsverhältnis nach der Korrektur kleiner, und, wie zeigt, die Steigung bei den Daten der Kalibrierungskurve CAL5 nach der Korrektur kleiner als die der ersten Kalibrierungskurve CAL 3. In gleicher Weise haben die Daten der korrigierten Kalibrierungskurven CAL6 eine geringere Steigung als die zweite Kalibrierungskurve CAL4.Since ay> ax in this example, how shows the intensity ratio after correction smaller, and how shows the slope in the data of the calibration curve CAL5 after correction smaller than that of the first calibration curve CAL 3rd . In the same way, the data have the corrected calibration curves CAL6 a smaller slope than the second calibration curve CAL4 .

Die Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 entsprechen den „Daten der korrigierten (zusätzlichen) Kalibrierungskurven“ in den Ansprüchen.The data of the calibration curves CAL5 and CAL6 correspond to the "data of the corrected (additional) calibration curves" in the claims.

Dabei ist zu beachten, dass die Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 nicht auf eine lineare Funktion beschränkt sind, sondern auch eine Tabelle, eine angenäherte Kurve oder dergleichen sein können, sofern sie die Beziehung zwischen dem Intensitätsverhältnis und der Konzentration des Messobjekts darstellen.It should be noted that the data of the calibration curves CAL5 and CAL6 are not limited to a linear function, but can also be a table, an approximate curve or the like, provided that they represent the relationship between the intensity ratio and the concentration of the measurement object.

Als nächstes wird, wie oben beschrieben, das Chromatogramm einer QC-Probe gemessen, die das Messobjekt X in einer bekannten Konzentration und die internen Standards a und b in einer vorbestimmten Konzentration enthält.Next, as described above, the chromatogram of a QC sample is measured, which is the measurement object X in a known concentration and internal standards a and b contains in a predetermined concentration.

Dann beurteilt die Steuereinheit 9 auf der Grundlage der oben genannten Diagnosekriterien und des Chromatogramms der QC-Probe, ob, wie oben beschrieben, die unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht. Wenn die Messung zugelassen wird, führt die Steuereinheit 9 unter Bezugnahme auf die Daten der korrigierten Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 eine quantitative Bestimmung des Messobjekts Y der unbekannten Probe durch. Das Verfahren zur quantitativen Bestimmung ist das gleiche wie das für das Messobjekt X, und die Konzentrationen des Messobjekts Y werden aus den Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 jeweils auf die gleiche Weise wie in erhalten und gemittelt. Then the control unit judges 9 based on the above diagnostic criteria and the chromatogram of the QC sample, whether or not the unknown sample can be measured as described above. If the measurement is allowed, the control unit performs 9 with reference to the data of the corrected calibration curves CAL5 and CAL6 a quantitative determination of the measurement object Y of the unknown sample. The method for quantitative determination is the same as that for the measurement object X , and the concentrations of the measurement object Y are from the data of the calibration curves CAL5 and CAL6 each in the same way as in preserved and averaged.

Auf diese Weise kann unter Verwendung der Daten der korrigierten Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6, ohne Zugabe von Standardsubstanz zur unbekannten Probe die quantitative Bestimmung des Testobjekts Y mit großer Genauigkeit durchgeführt werden, selbst wenn bei der quantitativen Bestimmung des Messobjekts Y auch die QC-Probe verwendet wird, die das Messobjekt X enthält.In this way, using the data of the corrected calibration curves CAL5 and CAL6 , without adding standard substance to the unknown sample, the quantitative determination of the test object Y be carried out with great accuracy, even if in the quantitative determination of the measurement object Y also the QC sample is used which is the measurement object X contains.

Es ist selbstverständlich, dass die vorliegende Erfindung nicht auf die oben beschriebene Ausführungsform beschränkt ist, sondern sich auf verschiedene Modifikationen und Äquivalente erstreckt, die im Geist und Umfang der vorliegenden Erfindung enthalten sind. Die Anzahl der internen Standards ist nicht auf mehrere beschränkt, auch einer ist möglich. Vorzugsweise enthält der interne Standard jedoch mindestens zwei Arten, einen ersten internen Standard und einen zweiten internen Standard, deren Peaks im Chromatogramm des Messobjekts jeweils vor und nach dessen Peak auftreten, da so die Messgenauigkeit verbessert wird.It goes without saying that the present invention is not limited to the embodiment described above, but extends to various modifications and equivalents that are included in the spirit and scope of the present invention. The number of internal standards is not limited to several, one is also possible. However, the internal standard preferably contains at least two types, a first internal standard and a second internal standard, the peaks of which appear in the chromatogram of the measurement object before and after its peak, since the measurement accuracy is improved in this way.

Die korrigierten (zusätzlichen) Daten der Kalibrierungskurven CAL5 und CAL6 können zum Zeitpunkt des Versands des Chromatographiegerätes 100 im Voraus in der Speichereinheit 8 gespeichert werden, oder die Bedienungsperson fertigt später die QC-Probe, die das Messobjekt Y und die internen Standards a und b enthält nur einmal an und erstellt das Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1), das er danach in der Speichereinheit 8 speichern kann.The corrected (additional) data of the calibration curves CAL5 and CAL6 can at the time of shipping the chromatography device 100 in advance in the storage unit 8th can be stored, or the operator later manufactures the QC sample, which is the measurement object Y and the internal standards a and b contains only once and creates the intensity ratio of the internal standards ( A2 / A1 ), which he then stores in the storage unit 8th can save.

BezugszeichenlisteReference list

88th
SpeichereinheitStorage unit
99
SteuereinheitControl unit
1010th
SpeichereinheitStorage unit
100100
(Flüssigkeits)Chromatograph(Liquid) chromatograph
CRCR
StandardchromatogrammStandard chromatogram
CR1 bis CR3CR1 to CR3
Chromatogramm der QC-ProbeChromatogram of the QC sample
J1J1
DiagnosekriterienDiagnostic criteria
W0 bis W2W0 to W2
Wellenform des StandardchromatogrammsStandard chromatogram waveform
A0 bis A2A0 to A2
Intensität des StandardchromatogrammsIntensity of the standard chromatogram
W0a, W0c bis W2cW0a, W0c to W2c
Wellenform des Chromatogramms der QC-ProbeQC sample chromatogram waveform
A0b bis A2bA0b to A2b
Intensität des Chromatogramms der QC-ProbeIntensity of the chromatogram of the QC sample
Wx bis WzWx to Wz
erster Schwellenwertfirst threshold
Ax bis AzAx to Az
zweiter Schwellenwertsecond threshold
X, XnX, Xn
MessobjekteMeasurement objects
aa
erster interner Standardfirst internal standard
bb
zweiter interner Standardsecond internal standard
CAL1CAL1
Daten der ersten KalibrierungskurveData of the first calibration curve
CAL2CAL2
Daten der zweiten KalibrierungskurveData of the second calibration curve
CRCR
StandardchromatogrammStandard chromatogram
CRa, CRb, CRcCRa, CRb, CRc
Chromatogramme der QC-ProbenChromatograms of the QC samples
YY
zusätzliches Messobjektadditional measurement object
CAL5, CAL6CAL5, CAL6
Daten der korrigierten KalibrierungskurvenCorrected calibration curve data
Xn/aXn / a
erstes Intensitätsverhältnisfirst intensity ratio
Xn/bXn / b
zweites Intensitätsverhältnissecond intensity ratio

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Zitierte PatentliteraturPatent literature cited

  • JP 61052301 [0005]JP 61052301 [0005]

Claims (7)

Ein Chromatograph zur quantitativen Bestimmung eines bestimmten Messobjekts, der mit einer Steuereinheit und einer Speichereinheit ausgerüstet ist, wobei bei diesem Chromatographen die oben genannte Speichereinheit die Daten einer Kalibrierungskurve speichert, die auf der Methode mit internem Standard basiert, und die das Intensitätsverhältnis der Intensität des oben genannten Messobjekts und der Intensität des oben genannten internen Standards enthält, wobei der oben genannte interne Standard in bestimmten Konzentrationen zu dem oben genannten Messobjekt zugegeben werden muss, und bei dem die oben genannte Steuereinheit, wenn ein Chromatogramm einer QC-Probe, die die oben genannte bestimmte Konzentration des oben genannten internen Standard enthält und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die das oben genannte Messobjekt in unbekannter Konzentration und keinen internen Standard enthält, gemessen worden ist, aus der Intensität des oben genannten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe das Intensitätsverhältnis berechnet und eine quantitative Bestimmung des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe auf Basis der oben genannten Kalibrierungskurve durchführt.A chromatograph for the quantitative determination of a specific measurement object, which is equipped with a control unit and a storage unit, in which chromatograph the above-mentioned storage unit stores the data of a calibration curve which is based on the internal standard method and which shows the intensity ratio of the intensity of the above contains the above-mentioned measurement object and the intensity of the above-mentioned internal standard, the above-mentioned internal standard having to be added in certain concentrations to the above-mentioned measurement object, and in which the above-mentioned control unit, if a chromatogram of a QC sample that meets the above contains a certain concentration of the above-mentioned internal standard and a chromatogram of an unknown sample which contains the above-mentioned measurement object in an unknown concentration and no internal standard has been measured from the intensity of the above-mentioned internal standard of the above The above-mentioned QC sample and the intensity of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample, the intensity ratio is calculated and a quantitative determination of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample is carried out on the basis of the above-mentioned calibration curve. Ein Chromatograph wie Anspruch 1 beschrieben, wobei die oben genannte Speichereinheit auf Basis der Wellenform und Intensität eines Standardchromatogramms, das den oben genannten internen Standard in der oben genannten bestimmten Konzentration enthält, die Diagnosekriterien erstellt, und die oben genannte Steuereinheit basierend auf den oben genannten Diagnosekriterien in Bezug auf die Wellenform oder Intensität des Chromatogramms der oben genannten QC-Probe beurteilt, ob die oben genannte unbekannte Probe gemessen werden kann oder nicht.A chromatograph like Claim 1 described, wherein the above-mentioned storage unit generates the diagnosis criteria based on the waveform and intensity of a standard chromatogram containing the above-mentioned internal standard in the above-mentioned specific concentration, and the above-mentioned control unit based on the above-mentioned diagnosis criteria relating to the waveform or intensity of the chromatogram of the above QC sample judges whether or not the above unknown sample can be measured. Ein Chromatograph wie Anspruch 2 beschrieben, wobei die oben genannte Speichereinheit die Daten einer zusätzlichen Kalibrierungskurve basierend auf der Methode mit internem Standard speichert, für die man einem zusätzlichen Messobjekt, das sich von dem oben genannten Messobjekt unterscheidet, den oben genannten internen Standard in der oben genannten bestimmten Konzentration zugeben muss, und die das Intensitätsverhältnis der Intensität des oben genannten zusätzlichen Messobjekts und der Intensität des oben genannten internen Standards enthält, wobei bei den Daten der Kalibrierungskurve die Intensität des oben genannten internen Standards in den Daten der oben genannten zusätzlichen Kalibrierungskurve durch das Intensitätsverhältnis der internen Standards (A2/A1) aus der Intensität A2 des oben genannten internen Standards in der oben genannten bestimmten Konzentration, wenn das oben genannte zusätzliche Messobjekt gleichzeitig anwesend ist, und der Intensität A1 des oben genannten internen Standards der oben genannten Konzentration, wenn das oben genannte Messobjekt in der gleichen Konzentration wie das oben genannte zusätzliche Messobjekt gleichzeitig anwesend ist, korrigiert worden ist, und wobei die oben genannte QC-Probe außerdem das oben genannte Messobjekt in bekannter Konzentration enthält, und im Fall, dass das oben genannte zusätzliche Messobjekt quantitativ bestimmt wird, das Chromatogramm der oben genannten QC-Probe gemessen wird, und wenn die oben genannte Steuereinheit auf Basis der oben genannten Diagnosekriterien die Messung der oben genannten unbekannten Probe freigegeben hat, die oben gennannte Steuereinheit basierend auf den oben genannten Daten der korrigierten Kalibrierungskurve das oben genannte zusätzliche Messobjekt in einer zweiten unbekannten Probe, die das zusätzliche Messobjekt in unbekannter Konzentration enthält und den internen Standard nicht enthält, quantitativ bestimmen kann.A chromatograph like Claim 2 described, wherein the above-mentioned storage unit stores the data of an additional calibration curve based on the internal standard method, for which one has to add the above-mentioned internal standard in the above-mentioned specific concentration to an additional measurement object that differs from the above-mentioned measurement object , and which contains the intensity ratio of the intensity of the above-mentioned additional measurement object and the intensity of the above-mentioned internal standard, with the data of the calibration curve the intensity of the above-mentioned internal standard in the data of the above-mentioned additional calibration curve by the intensity ratio of the internal standards ( A2 / A1) from the intensity A2 of the above-mentioned internal standard in the above-mentioned specific concentration, if the above-mentioned additional measurement object is present at the same time, and the intensity A1 of the above-mentioned internal standard de r the above-mentioned concentration has been corrected if the above-mentioned measurement object is simultaneously present in the same concentration as the above-mentioned additional measurement object, and the above-mentioned QC sample also contains the above-mentioned measurement object in known concentration, and in the case that the above-mentioned additional measurement object is determined quantitatively, the chromatogram of the above-mentioned QC sample is measured, and if the above-mentioned control unit has released the measurement of the above-mentioned unknown sample based on the above-mentioned diagnostic criteria, the above-mentioned control unit is based on the Above-mentioned data of the corrected calibration curve can quantitatively determine the above-mentioned additional measurement object in a second unknown sample, which contains the additional measurement object in an unknown concentration and does not contain the internal standard. Ein Chromatograph wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 beschrieben, wobei der interne Standard mindestens zwei Arten umfasst, den ersten internen Standard und den zweiten internen Standard, deren Peaks im Chromatogramm vor und nach dem Peak des oben genannten Messobjekts erscheinen, die oben genannten Daten der Kalibrierungskurven mindestens die Daten der ersten Kalibrierungskurve und die Daten der zweiten Kalibrierungskurve, die jeweils dem ersten internen Standard und dem zweiten internen Standard entsprechen, enthalten, und die oben genannte Steuereinheit, wenn das oben genannte Messobjekt der oben genannten unbekannten Probe quantitativ bestimmt wird, aus dem Intensitätsverhältnis des ersten internen Standards und dem Intensitätsverhältnis des zweiten internen Standards, das aus der Intensität des oben genannten ersten internen Standards und des oben genannten zweiten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe berechnet worden ist, unter Bezug auf die Daten der oben genannten ersten Kalibrierungskurve und die Daten der oben genannten zweiten Kalibrierungskurve die oben genannten Messobjekte separat quantitativ bestimmen und den Mittelwert dieser quantitativen Werte ermitteln kann.A chromatograph like in one of the Claims 1 to 3rd described, the internal standard comprising at least two types, the first internal standard and the second internal standard, the peaks of which appear in the chromatogram before and after the peak of the above-mentioned measurement object, the above-mentioned data of the calibration curves at least the data of the first calibration curve and the Data of the second calibration curve, which correspond to the first internal standard and the second internal standard, respectively, and the above-mentioned control unit, when the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample is quantified, from the intensity ratio of the first internal standard and the intensity ratio the second internal standard, which has been calculated from the intensity of the above-mentioned first internal standard and the above-mentioned second internal standard of the above-mentioned QC sample and the intensity of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample, under Be train on the data of the above-mentioned first calibration curve and the data of the above-mentioned second calibration curve can separately quantitatively determine the above-mentioned measurement objects and determine the mean value of these quantitative values. Ein Chromatograph wie in einem der Ansprüche 1 bis 4 beschrieben, wobei die oben genannten Diagnosekriterien den ersten Schwellenwert der Verbreiterung der Wellenform des oben genannten Standardchromatogramms enthalten, und die oben genannte Steuereinheit beurteilen kann, dass die Messung der oben genannten unbekannten Probe nicht möglich ist, wenn die Verbreiterung der Wellenform der oben genannten QC-Probe den oben genannten ersten Schwellenwert überschreitet.A chromatograph like in one of the Claims 1 to 4th wherein the above diagnostic criteria include the first threshold broadening of the waveform of the above standard chromatogram, and the above controller can judge that the Measurement of the above unknown sample is not possible if the broadening of the waveform of the above QC sample exceeds the above first threshold. Ein Chromatograph wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 beschrieben, wobei die oben genannten Diagnosekriterien einen zweiten Schwellenwert der Intensität des oben genannten Standardchromatographen enthalten, und die oben genannte Steuereinheit beurteilen kann, ob die Messung der oben genannten unbekannten Probe möglich ist oder nicht, wenn die Intensität des Chromatogramms der oben genannten QC-Probe unterhalb des oben genannten zweiten Schwellenwertes liegt.A chromatograph like in one of the Claims 1 to 5 wherein the above diagnostic criteria include a second threshold of the intensity of the above standard chromatograph, and the above control unit can judge whether the measurement of the above unknown sample is possible or not if the intensity of the chromatogram of the above QC sample is below the second threshold mentioned above. Ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung mittels Chromatographie, bei dem ein bestimmtes Messobjekt quantitativ bestimmt wird, wobei vorab die Daten der Kalibrierungskurve, die auf der Methode mit internem Standard basieren und die das Intensitätsverhältnis der Intensität der oben genannten Messobjekte und der Intensität des oben genannten internen Standards enthalten, gespeichert werden, wobei der oben genannte interne Standard in bestimmten Konzentrationen zu dem oben genannten Messobjekt zugegeben werden muss, und wenn ein Chromatogramm einer QC-Probe, die die oben genannte bestimmte Konzentration des oben genannten internen Standard enthält und ein Chromatogramm einer unbekannten Probe, die das oben genannte Messobjekt in unbekannter Konzentration und keinen internen Standard enthält, gemessen worden ist, aus der Intensität des oben genannten internen Standards der oben genannten QC-Probe und der Intensität des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe das Intensitätsverhältnis berechnet wird und eine quantitative Bestimmung des oben genannten Messobjekts der oben genannten unbekannten Probe auf Basis der oben genannten Kalibrierungskurve durchgeführt wird.A method for quantitative determination by means of chromatography, in which a specific measurement object is determined quantitatively, the data of the calibration curve, which are based on the internal standard method and which contain the intensity ratio of the intensity of the above-mentioned measurement objects and the intensity of the above-mentioned internal standard, are stored beforehand, the above-mentioned internal standard in certain concentrations to the above mentioned measurement object must be added, and when a chromatogram of a QC sample containing the above-mentioned determined concentration of the above-mentioned internal standard and a chromatogram of an unknown sample containing the above-mentioned measurement object in an unknown concentration and no internal standard has been measured from the intensity of the above-mentioned internal standards of the above-mentioned QC sample and the intensity of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample, the intensity ratio is calculated and a quantitative determination of the above-mentioned measurement object of the above-mentioned unknown sample is carried out on the basis of the above-mentioned calibration curve.
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