DE102015121035A1 - Method for the detection of coliform bacteria - Google Patents

Method for the detection of coliform bacteria Download PDF

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Abstract

Zum Schaffen eines schnellen Nachweises coliformer Keime schafft die Erfindung ein Verfahren zur Detektion coliformer Keime in einem flüssigen Medium, umfassend: a) Verwenden eines Mikrofilters zum Anreichern der Keime auf der Filteroberfläche, b) Nachweisen der Enzyme β-Galaktosidase und/oder β-D-Glucuronidase in den Keimen mittels Fluoreszenz-Detektion oder Chemolumineszenz-Detektion.To provide rapid detection of coliforms, the invention provides a method of detecting coliforms in a liquid medium comprising: a) using a microfilter to enrich the seeds on the filter surface, b) detecting the enzymes β-galactosidase and / or β-D Glucuronidase in the germs by fluorescence detection or chemiluminescence detection.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Detektion coliformer Keime.The invention relates to a method for detecting coliform bacteria.

Mit der Erfindung soll insbesondere der Nachweis coliformer Keime in einem schnellen und automatisierbaren Verfahren durchgeführt werden.The invention is intended in particular to detect coliform bacteria in a rapid and automatable process.

Zum Nachweis coliformer Keime sind auf dem Markt Detektionskits, wie beispielsweise das kommerziell verfügbare Colilert-18 erhältlich. Als Nachteil ist insbesondere die lange Wartezeit von ca. 18 Stunden zu nennen, bis das Ergebnis verfügbar ist. Klassische mikrobiologische Methoden, wie Ausplattieren und Inkubieren auf entsprechenden Agarplatten dauern sogar mehrere Tage, bis das Ergebnis sichtbar ist.Detection kits such as the commercially available Colilert-18 are available on the market to detect coliform bacteria. The disadvantage is in particular the long waiting time of about 18 hours until the result is available. Classic microbiological methods, such as plating and incubation on appropriate agar plates take even several days until the result is visible.

Es gibt somit den Bedarf an Schnelltests zum Nachweis coliformer Keime.There is thus a need for rapid tests for the detection of coliform bacteria.

Dafür schlägt die Erfindung ein Verfahren gemäß Anspruch 1 vor.For this, the invention proposes a method according to claim 1.

Vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung sind Gegenstand der Unteransprüche.Advantageous embodiments of the invention are the subject of the dependent claims.

Gemäß einem Aspekt schafft die Erfindung ein Verfahren zur Detektion coliformer Keime in einem flüssigen Medium, umfassend:

  • a) Verwenden eines Mikrofilters zum Anreichern der Keime auf der Filteroberfläche,
  • b) Nachweisen der Enzyme β-Galaktosidase und/oder β-D-Glucuronidase in den Keimen mittels Fluoreszenz-Detektion oder Chemolumineszenz-Detektion.
In one aspect, the invention provides a method for detecting coliform bacteria in a liquid medium comprising:
  • a) using a microfilter to enrich the germs on the filter surface,
  • b) Detecting the enzymes β-galactosidase and / or β-D-glucuronidase in the germs by means of fluorescence detection or chemiluminescence detection.

Unter dem Begriff „coliforme Keime“ werden insbesondere coliforme Bakterien verstanden. Eine Idee der Erfindung nutzt den Nachweis von für coliforme Bakterien charakteristischen Enzymen in den durch ein Mikrofilter angereicherten Bakterien.The term "coliform bacteria" is understood in particular to mean coliform bacteria. One idea of the invention utilizes the detection of enzymes characteristic of coliform bacteria in the microfilter-enriched bacteria.

Es ist bevorzugt, dass Schritt b) enthält:

  • b1) Zugeben eines fluoreszenten Enzym-Substrats zu den auf der Filteroberfläche angereicherten Keimen.
It is preferred that step b) contains:
  • b1) adding a fluorescent enzyme substrate to the germs enriched on the filter surface.

Es ist bevorzugt, dass Schritt b) enthält:

  • b2) Zugeben eines chemolumineszenten Enzym-Substrats zu den auf der Filteroberfläche angereicherten Keimen.
It is preferred that step b) contains:
  • b2) adding a chemiluminescent enzyme substrate to the germs enriched on the filter surface.

Es ist bevorzugt, dass Schritt b) enthält:

  • b3) Beleuchten mit Licht geeigneter Wellenlänge zum Anregen der Fluoreszenz.
It is preferred that step b) contains:
  • b3) Illuminate with light of suitable wavelength to excite the fluorescence.

Es ist bevorzugt, dass Schritt b) enthält:

  • b4) Detektieren der coliformen Keime oder E.coli auf Einzelzellen-Niveau mittels eines Mikroskops (bei Chemilumineszenz-Detektion) oder eines Fluoreszenzmikroskops (bei Fluoreszenzdetektion).
It is preferred that step b) contains:
  • b4) Detecting the coliform bacteria or E. coli at the single cell level by means of a microscope (in chemiluminescence detection) or a fluorescence microscope (in fluorescence detection).

Es ist bevorzugt, dass Schritt b) enthält:

  • b5) Zählen der coliformen Keime oder E.coli.
It is preferred that step b) contains:
  • b5) Count coliforms or E.coli.

Es ist bevorzugt, dass in Schritt b1) β-Galactopyranoside zugegeben werden, bei denen bei Spaltung durch β-Galaktosidase ein Fluorophor entsteht oder frei wird, und/oder β-D-Glucuronide zugegeben werden, bei denen bei Spaltung durch β-D-Glucuronidase ein Fluorophor entsteht oder frei wird.It is preferred that in step b1) β-galactopyranosides are added in which, on cleavage by β-galactosidase, a fluorophore is formed or liberated, and / or β-D-glucuronides are added in which, when cleaved by β-D- Glucuronidase a fluorophore is formed or is released.

Es ist bevorzugt, dass das fluoreszente Enzym-Substrat ausgewählt ist aus der Gruppe, die Fluorescein-di-Galactopyranoside, Fluorescein-di-β-D-Glucuronide, Galactopyranoside und/oder Glucuronide mit 4-Methylumbelliferon als Marker, Galactopyranoside und/oder Glucuronide mit Resorufin als Marker und Galactopyranoside und/oder Glucuronide mit 6-Chloro-2-(5-chloro-2-hydroxyphenyl)-4(3H)-Quinazolinone als Marker enthält. 6-Chloro-2-(5-chloro-2-hydroxyphenyl)-4(3H)-Quinazolinone ist unter dem Handelsnamen ELF®-97 im Handel erhältlich.It is preferred that the fluorescent enzyme substrate is selected from the group comprising fluorescein-di-galactopyranosides, fluorescein-di-β-D-glucuronides, galactopyranosides and / or glucuronides with 4-methylumbelliferone as markers, galactopyranosides and / or glucuronides with resorufin as a marker and galactopyranosides and / or glucuronides with 6-chloro-2- (5-chloro-2-hydroxyphenyl) -4 (3H) -quinazolinone as a marker. 6-chloro-2- (5-chloro-2-hydroxyphenyl) -4 (3H) -Quinazolinone is available under the trade name ELF ® -97 commercially.

Es ist bevorzugt, dass das Verfahren in einer automatisierten Detektionsvorrichtung automatisch durchgeführt wird.It is preferred that the method be carried out automatically in an automated detection device.

Es ist bevorzugt, dass Schritt a) enthält:

  • a1) Immobilisieren von Bindungspartikeln, die zur speziellen Bindung an die nachzuweisenden coliformen Keime fähig sind, zumindest im Bereich von Poren des Mikrofilters.
It is preferred that step a) contains:
  • a1) immobilizing binding particles capable of binding specifically to the coliforms to be detected, at least in the region of pores of the microfilter.

Es ist bevorzugt, dass Schritt a) enthält:

  • a2) Anreichern der coliformen Keime auf der Filteroberfläche durch Bindung an die immobilisierten Bindungspartikel.
It is preferred that step a) contains:
  • a2) Enriching the coliforms on the filter surface by binding to the immobilized binding particles.

Es ist bevorzugt, dass als Bindungspartikel Phagen oder Phagenproteine verwendet werden.It is preferred that phage or phage proteins are used as binding particles.

Gemäß einer Idee erfolgt eine Anreicherung von Bakterien auf Mikrofiltern und ein Nachweis der β-Galaktosidase coliformer Keime direkt auf diesen Mikrofiltern.According to one idea, an accumulation of bacteria on microfilters and detection of β-galactosidase of coliform germs takes place directly on these microfilters.

Damit ist ein schneller Nachweis coliformer Keime möglich.This allows a quick detection of coliform germs.

Insbesondere ist mit einer Ausgestaltung der Erfindung ein schneller Nachweis von Escherichia coli und coliformer Keime möglich.In particular, with one embodiment of the invention, rapid detection of Escherichia coli and coliform bacteria is possible.

Im Folgenden werden Ausführungsbeispiele der Erfindung näher erläutert.In the following, embodiments of the invention are explained in detail.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel werden Mikrofilter verwendet, um Bakterien in einem Medium, z.B. Trinkwasser, auf der Filteroberfläche anzureichern. Anschließend wird das für coliforme Keime charakteristische Enzym β-Galaktosidase – siehe die Definition coliformer Keime nach prISO 9308-1: 2012 – bzw. das für E.coli charakteristische Enzym β-D-Glucuronidase in den Bakterien nachgewiesen. According to one embodiment, microfilters are used to enrich bacteria in a medium, eg drinking water, on the filter surface. Subsequently, the enzyme characteristic of coliform bacteria β-galactosidase - see the definition of coliform bacteria after prISO 9308-1: 2012 - or the characteristic of E. coli enzyme β-D-glucuronidase detected in the bacteria.

Eine nähere Beschreibung zur Verwendung von Mikrofiltern und zugehörigen Systemen zur Bakteriendetektion findet sich in den Druckschriften DE 10 2006 026 559 A1 , DE 10 2007 021 387 A1 und DE 10 2008 035 770 A1 . Es wird für weitere Einzelheiten ausdrücklich auf diese Druckschriften verwiesen. Insbesondere ist in der DE 10 2008 035 770 A1 beschrieben, wie Bakterien auf den Filtern visualisiert und gezählt werden können. Mit der nun beschriebenen Idee ist es ohne Einsatz von Antikörpern oder ähnlichen Verfahren zur spezifischen Detektion möglich, coliforme Bakterien bzw. E.coli auf Einzelzellen-Niveau zu detektieren.A more detailed description of the use of microfilters and related bacterial detection systems can be found in the references DE 10 2006 026 559 A1 . DE 10 2007 021 387 A1 and DE 10 2008 035 770 A1 , Reference is expressly made to these documents for further details. In particular, in the DE 10 2008 035 770 A1 describes how bacteria on the filters can be visualized and counted. With the idea now described, it is possible without the use of antibodies or similar methods for specific detection to detect coliform bacteria or E. coli at the single cell level.

Dies erfolgt insbesondere mittels Fluoreszenz-Detektion oder Chemilumineszenz-Detektion.This is done in particular by means of fluorescence detection or chemiluminescence detection.

Im Folgenden wird zunächst das Ausführungsbeispiel unter Verwendung von Fluoreszenz-Detektion näher erläutert.The exemplary embodiment using fluorescence detection will first be explained in more detail below.

Nach dem Anreichern der Bakterien auf der Filteroberfläche wird ein fluoreszentes Enzym-Substrat wie z.B. FDG (Fluorescein-di-galactopyranoside) bzw. FDGIcU (Fluorescein di-β-D-glucuronide) zugegeben. Das zunächst nicht-fluoreszierende Substrat dringt in die Bakterien ein und wird dort durch β-Galaktosidase bzw. β-D-Glucuronidase gespalten, so dass Fluorescein frei wird. Dieses kann durch Anregungslicht geeigneter Wellenlänge zum Fluoreszieren gebracht werden, so dass die entsprechenden Bakterien als leuchtende Zellen sichtbar werden. Auf diese Weise ist es möglich, coliforme Bakterien bzw. E.coli mit einem Fluoreszenzmikroskop zu detektieren. Mit einem System, das vom Grundsatz her aufgebaut ist wie das in der DE 10 2008 035 770 A1 beschriebene System, ist es möglich, die Bakterien in einem automatisierten System anzureichern und zu zählen.After enriching the bacteria on the filter surface, a fluorescent enzyme substrate such as FDG (fluorescein-di-galactopyranoside) or FDGIcU (fluorescein di-β-D-glucuronide) is added. The initially non-fluorescent substrate penetrates into the bacteria and is cleaved there by β-galactosidase or β-D-glucuronidase, so that fluorescein is released. This can be made to fluoresce by excitation light of a suitable wavelength so that the corresponding bacteria become visible as luminous cells. In this way it is possible to detect coliform bacteria or E. coli with a fluorescence microscope. With a system that is basically built like the one in the DE 10 2008 035 770 A1 described system, it is possible to enrich and count the bacteria in an automated system.

Anstatt Fluorescein können auch andere Fluorophore, wie z.B. 4-Methylumbelliferon, Resorufin oder ELFTM-97, verwendet werden. Die optischen Komponenten – wie insbesondere Anregungslicht und/oder optische Filter – einer in dem System verwendeten Detektionseinheit müssen dann entsprechend angepasst werden.Instead of fluorescein, other fluorophores such as 4-methylumbelliferone, resorufin or ELF ™ -97 may also be used. The optical components - such as in particular excitation light and / or optical filters - a detection unit used in the system must then be adjusted accordingly.

Im Folgenden wird ein weiteres Ausführungsbeispiel des Verfahrens unter Verwendung einer Chemilumineszenz-Detektion näher erläutert.In the following, a further embodiment of the method using a chemiluminescent detection is explained in more detail.

Eine wesentliche Vereinfachung gegenüber der Fluoreszenz-Detektion ist möglich, wenn die Fluoreszenz-Markierung der Enzym-Substrate durch eine Chemilumineszenz-Markierung ersetzt wird. Da die Markierungsmoleküle selbst leuchten und nicht von außen zum Leuchten angeregt werden müssen, entfallen Anregungslichtquellen und eventuelle optische Filter. Das optische System wird dadurch kostengünstiger und weniger aufwändig. Gleichzeitig wird ausgeschlossen, dass ein falsch-positives Signal durch mögliche autofluoreszierende Partikel detektiert wird.Substantial simplification over fluorescence detection is possible if the fluorescence label of the enzyme substrates is replaced by a chemiluminescent label. Since the marker molecules are self-illuminating and do not have to be excited from outside to illuminate, eliminating excitation light sources and any optical filters. The optical system is thereby cheaper and less expensive. At the same time it is excluded that a false-positive signal is detected by possible autofluorescent particles.

Wie bei der Fluoreszenz-Detektion wird nach der Anreicherung der Bakterien auf der Filteroberfläche das zunächst nicht leuchtende Substrat zugegeben. Dieses dringt in die Bakterien ein, wo es durch die Enzyme β-Galaktosidase – bei coliformen Keimen – bzw. β-D-Glucuronidase – bei E.coli – gespalten und die chemilumineszente Komponente frei wird. Die Bakterien fangen dadurch an zu leuchten und können mittels üblicher optischer Komponenten – wie z.B. Mikroskop oder CCD-Kamera – detektiert werden.As with fluorescence detection, after the bacteria have accumulated on the filter surface, the initially non-luminous substrate is added. This penetrates into the bacteria, where it is cleaved by the enzymes β-galactosidase - in coliform bacteria - or β-D-glucuronidase - in E. coli - and the chemiluminescent component is released. The bacteria thereby start to glow and can be detected by means of conventional optical components - e.g. Microscope or CCD camera - to be detected.

Als Enzymsubstrate können 1,2 Dioxetane-Derivate eingesetzt werden, wie z.B. AMPGD (3-(4-methoxyspiro [1,2-dioxetane-3,2‘-tricyclo-[3.3.1. 1(3,7)]decan]-4-yl) phenyl-beta-D-galactopyranoside) zum Nachweis von coliformen Keimen. Andere Dioexetan-Derivate zum Nachweis der β-Galaktosidase (also für coliforme Keime) werden unter den Handelsnamen Galacton, Galacton-Plus, Galacton-Star und Sβ-Gal vertrieben.As the enzyme substrates, 1,2-dioxetane derivatives, e.g. AMPGD (3- (4-methoxyspiro [1,2-dioxetane-3,2'-tricyclo [3.3.1.1 (3,7)] decan] -4-yl) phenyl-beta-D-galactopyranoside) Detection of coliform bacteria. Other dioxetane derivatives for the detection of β-galactosidase (ie for coliforms) are sold under the trade names Galacton, Galacton-Plus, Galacton-Star and Sβ-Gal.

Analog dazu sind für den Nachweis der Glucuronidase (also für E.coli) Substrate mit dem Handelsnamen Glucuron, GusLux und Sβ-Glucor erhältlich.Similarly, for the detection of glucuronidase (ie for E. coli) substrates with the trade name Glucuron, GusLux and Sβ-glucor available.

Besonders vorteilhaft erfolgt eine Anreicherung der Keime auf der Filteroberfläche mittels für die Keime selektiver Bindungspartikel, die auf der Filteroberfläche und insbesondere im Bereich von Poren immobilisiert werden. Als Beispiele sind hierzu Phagen oder Phagenproteine zu nennen. Nähere Einzelheiten zum selektiven Anbinden von Zielorganismen mittels Phagen oder Phagenproteine finden sich in den Dokumenten DE 100 36 931 B4 , DE 10 2006 009 709 A1 und DE 10 2013 106 462 B3 .An enrichment of the germs on the filter surface takes place particularly advantageously by means of binding particles which are selective for the germs and which are immobilized on the filter surface and in particular in the region of pores. Examples include phages or phage proteins. Further details on the selective binding of target organisms by means of phages or phage proteins can be found in the documents DE 100 36 931 B4 . DE 10 2006 009 709 A1 and DE 10 2013 106 462 B3 ,

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Zitierte PatentliteraturCited patent literature

  • DE 102006026559 A1 [0025] DE 102006026559 A1 [0025]
  • DE 102007021387 A1 [0025] DE 102007021387 A1 [0025]
  • DE 102008035770 A1 [0025, 0025, 0028] DE 102008035770 A1 [0025, 0025, 0028]
  • DE 10036931 B4 [0035] DE 10036931 B4 [0035]
  • DE 102006009709 A1 [0035] DE 102006009709 A1 [0035]
  • DE 102013106462 B3 [0035] DE 102013106462 B3 [0035]

Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature

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Claims (8)

Verfahren zur Detektion coliformer Keime in einem flüssigen Medium, umfassend: a) Verwenden eines Mikrofilters zum Anreichern der Keime auf der Filteroberfläche, b) Nachweisen der Enzyme β-Galaktosidase und/oder β-D-Glucuronidase in den Keimen mittels Fluoreszenz-Detektion oder Chemolumineszenz-Detektion.Method for detecting coliform bacteria in a liquid medium, comprising: a) using a microfilter to enrich the germs on the filter surface, b) Detecting the enzymes β-galactosidase and / or β-D-glucuronidase in the germs by means of fluorescence detection or chemiluminescence detection. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass Schritt b) wenigstens einen der Schritte enthält: b1) Zugeben eines fluoreszenten Enzym-Substrats zu den auf der Filteroberfläche angereicherten Keimen und/oder b2) Zugeben eines chemolumineszenten Enzym-Substrats zu den auf der Filteroberfläche angereicherten Keimen.A method according to claim 1, characterized in that step b) comprises at least one of the steps: b1) adding a fluorescent enzyme substrate to the germs enriched on the filter surface and / or b2) adding a chemiluminescent enzyme substrate to those enriched on the filter surface Germinate. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass in Schritt b1) β-Galactopyranoside zugegeben werden, bei denen bei Spaltung durch β-Galaktosidase ein Fluorophor entsteht oder frei wird, und/oder β-D-Glucorinide zugegeben werden, bei denen bei Spaltung durch β-D-Glucuronidase ein Fluorophor entsteht oder frei wird.A method according to claim 2, characterized in that β-galactopyranosides are added in step b1) in which when cleaved by β-galactosidase, a fluorophore is formed or is released, and / or β-D-glucorinides are added, in which by cleavage β-D-glucuronidase a fluorophore is formed or released. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, dass das fluoreszente Enzym-Substrat ausgewählt ist aus der Gruppe, die Fluorescein-di-Galactopyranoside, Fluorescein-di-β-D-Glucuronide, Galactopyranoside und/oder Glucuronide mit 4-Methylumbelliferon als Marker, Galactopyranoside und/oder Glucuronide mit Resorufin als Marker und Galactopyranoside und/oder Glucuronide mit 6-Chloro-2-(5-chloro-2-hydroxyphenyl)-4(3H)-Quinazolinone als Marker enthält.A method according to claim 2 or 3, characterized in that the fluorescent enzyme substrate is selected from the group, the fluorescein di-galactopyranosides, fluorescein di-β-D-glucuronides, galactopyranosides and / or glucuronides with 4-methylumbelliferone as a marker , Galactopyranosides and / or glucuronides with resorufin as markers and galactopyranosides and / or glucuronides with 6-chloro-2- (5-chloro-2-hydroxyphenyl) -4 (3H) -quinazolinone as marker. Verfahren nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass Schritt b) wenigstens einen der folgenden Schritte enthält: b3) Beleuchten mit Licht geeigneter Wellenlänge zum Anregen der Fluoreszenz; b4) Detektieren der coliformen Keime oder E.coli auf Einzelzellen-Niveau mittels eines Mikroskops bzw. Fluoreszenzmikroskops; b5) Zählen der coliformen Keime oder E.coli.Method according to one of the preceding claims, characterized in that step b) comprises at least one of the following steps: b3) illuminating with light of suitable wavelength for exciting the fluorescence; b4) detecting the coliform bacteria or E. coli at the single-cell level by means of a microscope or fluorescence microscope; b5) Count coliforms or E.coli. Verfahren nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Verfahren in einer automatisierten Detektionsvorrichtung automatisch durchgeführt wird.Method according to one of the preceding claims, characterized in that the method is carried out automatically in an automated detection device. Verfahren nach einem der voranstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass Schritt a) wenigstens einen der Schritte enthält: a1) Immobilisieren von Bindungspartikeln, die zur speziellen Bindung an die nachzuweisenden coliformen Keime fähig sind, zumindest im Bereich von Poren des Mikrofilters, a2) Anreichern der coliformen Keime auf der Filteroberfläche durch Bindung an die immobilisierten Bindungspartikel.Method according to one of the preceding claims, characterized in that step a) comprises at least one of the steps: a1) immobilizing binding particles which are capable of specific binding to the coliforms to be detected, at least in the region of pores of the microfilter, a2) enriching the coliform bacteria on the filter surface by binding to the immobilized binding particles. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass als Bindungspartikel Phagen oder Phagenproteine verwendet werden.A method according to claim 7, characterized in that phage or phage proteins are used as binding particles.
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002061117A1 (en) * 2001-02-01 2002-08-08 Profos Ag Detection and identification of groups of bacteria
DE10036931B4 (en) 1999-07-30 2004-06-03 Profos Ag Detection and identification of bacterial strains
DE102006009709A1 (en) 2006-03-02 2006-10-12 Müller, Merold, Dr. Method for detecting microorganisms without a culturing step, useful particularly for detecting potential germ warfare agents, uses a cantilever coated with specific binding material for the target organism
DE102006026559A1 (en) 2006-06-06 2007-12-20 Eads Deutschland Gmbh Micromechanical filter for microparticles, in particular for pathogenic bacteria and viruses, and method for its production
DE102007021387A1 (en) 2007-05-04 2008-11-06 Eads Deutschland Gmbh Detection device for the detection of biological microparticles such as bacteria, viruses, spores, pollen or biological toxins, and detection methods
DE102008035770A1 (en) 2008-07-31 2010-02-18 Eads Deutschland Gmbh Optical particle detector and detection method
DE102013106462B3 (en) 2013-06-20 2014-10-09 Airbus Defence and Space GmbH Detection method for the detection of bacteria, methods for the production of fusion proteins and fusion protein

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10036931B4 (en) 1999-07-30 2004-06-03 Profos Ag Detection and identification of bacterial strains
WO2002061117A1 (en) * 2001-02-01 2002-08-08 Profos Ag Detection and identification of groups of bacteria
DE102006009709A1 (en) 2006-03-02 2006-10-12 Müller, Merold, Dr. Method for detecting microorganisms without a culturing step, useful particularly for detecting potential germ warfare agents, uses a cantilever coated with specific binding material for the target organism
DE102006026559A1 (en) 2006-06-06 2007-12-20 Eads Deutschland Gmbh Micromechanical filter for microparticles, in particular for pathogenic bacteria and viruses, and method for its production
DE102007021387A1 (en) 2007-05-04 2008-11-06 Eads Deutschland Gmbh Detection device for the detection of biological microparticles such as bacteria, viruses, spores, pollen or biological toxins, and detection methods
DE102008035770A1 (en) 2008-07-31 2010-02-18 Eads Deutschland Gmbh Optical particle detector and detection method
DE102013106462B3 (en) 2013-06-20 2014-10-09 Airbus Defence and Space GmbH Detection method for the detection of bacteria, methods for the production of fusion proteins and fusion protein

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
prISO 9308-1: 2012

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