DE102008047689A1 - New xanthene derivative useful as a dye in the detection of biomolecules in a sample, preferably useful in the bioanalysis and diagnosis purposes - Google Patents

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Abstract

Xanthene derivative (I) is new. Xanthene derivative of formula (I) is new. R 1-R 4A; A : alkyl or (hetero) aryl (both optionally substituted), alkoxy, cyano, hydroxy, halo, isocyanate, carboxy, sulfonyl or its derivative or H; R 5-R 10 : A, polyethylene or jeffamine; X : T; T : nucleofugal leaving group, which is sulfonate, sulfate, phosphate or phosphonate or biomolecule; and Y 1T, jeffamine, polyethylene or alcohol or amine (both optionally substituted). Independent claims are also included for: (1) the preparation of the xanthene derivative (I); (2) a xanthan conjugate obtained by reacting the xanthan derivative with a biomolecule; and (3) a kit comprising the xanthan derivative (I) and optionally at least one auxiliary material. [Image].

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neuartige reaktive Leuko-Fluoreszenzfarbstoffe und reaktive Fluoreszenzfarbstoffe, sowie deren Konjugate und Verfahren zur Herstellung derselben unter besonders milden Bedingungen. Desweiteren betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung der erfindungsgemäßen Stoffe in der Bioanalytik.The The present invention relates to novel reactive leuco-fluorescent dyes and reactive fluorescent dyes, and their conjugates and methods for producing the same under particularly mild conditions. Furthermore The present invention relates to the use of the invention Substances in bioanalytics.

Fluoreszenzfarbstoffe sind besonders für biologische Anwendungen geeignet, in denen ein hochempfindliches Nachweisreagenz erwünscht ist. Leuko-Fluoreszenzfarbstoffe sind reaktive Vorläufermoleküle von Fluoreszenzfarbstoffen, deren Farbe und Fluoreszenz erst nach Reaktion mit einem weiteren Molekül erscheinen.fluorescent dyes are particularly suitable for biological applications, in where a highly sensitive detection reagent is desired. Leuco fluorescent dyes are reactive precursor molecules of fluorescent dyes, their color and fluorescence only after reaction with another Molecule appear.

Typische Vertreter solcher Fluoreszenzfarbstoffe sind Verbindungen, welche auf Xanthen als Grundgerüst basieren. Beispiele für Farbstoffe auf Xanthenbasis sind Fluoresceinderivate, Rhodolderivate und Rhodaminderivate. 3',6'-Diacetylfluorescein ist ein bekanntes Beispiel für einen Leuko-Fluoreszenzfarbstoff, der nach einer Reaktion, die zum Abspalten mindestens einer Acetylgruppe führt farbig und fluoreszierend wird.typical Representatives of such fluorescent dyes are compounds which based on xanthene as a backbone. examples for Xanthene-based dyes are fluorescein derivatives, rhodol derivatives and rhodamine derivatives. 3 ', 6'-Diacetylfluorescein is a known Example of a leuco fluorescent dye after a reaction leading to the removal of at least one acetyl group leads to becoming colored and fluorescent.

Zu den Fluoresceinfarbstoffen gehören Derivate von 3H-Xanthen-6-ol-3-on, die an der 9-Position mit einer derivatisierten Phenylgruppe, z. B. 2-Carboxyphenylgruppe substituiert sind, während zu „Rhodolfarbstoffen” Derivate von 6-Amino-3H-xanthen-3-on gehören und Rhodaminderivate von 6-Amino-3H-xanthen-3-imin abgeleitet sind. Fluoresceine, Rhodole und Rhodamine sind typischerweise an der 1-Position mit einer funktionellen Gruppe substituiert, welche in der Lage ist, einen 5- oder 6-gliedrigen Lacton- oder Lactamring zu bilden. Sie können demnach in einer chinoiden Form oder in einer Lactonform vorliegen. 1 zeigt die chinoiden Formen und die Lactonformen von Flurorescein, Rhodol und Rhodamin. Die Lactonform wird auch als Fluoran bezeichnet. Die vorliegende Erfindung umfasst beide Grundstrukturen.The fluorescein dyes include derivatives of 3H-xanthen-6-ol-3-one which are attached at the 9-position with a derivatized phenyl group, e.g. For example, 2-carboxyphenyl group is substituted while "rhodolene dyes" include derivatives of 6-amino-3H-xanthen-3-one and rhodamine derivatives of 6-amino-3H-xanthen-3-imine are derived. Fluoresceins, rhodopes and rhodamines are typically substituted at the 1-position with a functional group capable of forming a 5- or 6-membered lactone or lactam ring. They can therefore be present in a quinoid form or in a lactone form. 1 shows the quinoid forms and the lactone forms of flurorescein, rhodol and rhodamine. The lactone form is also referred to as fluoran. The present invention includes both basic structures.

Der Großteil der im Markt verfügbaren Farbstoffe verändern bei kovalenter Bindung an ein Zielmolekül ihre Farbeigenschaften nur unwesentlich oder auf schwer vorhersagbare Weise, so dass sich diese Eigenschaft nicht zur Erfolgskontrolle einer Markierungsreaktion verwenden lässt.Of the Change most of the dyes available on the market upon covalent attachment to a target molecule, their color properties only insignificantly or in a way that is difficult to predict, so that this Property not for the success control of a labeling reaction can be used.

Von Fluorescein abgeleitete Leuko-Fluoreszenzfarbstoffe, die nach einer Konjugationsreaktion mit Thiolen Fluoreszenz zeigen, sind zwar ebenso beschrieben ( Griffin, B. A.; Adams, S. R.; Tsien, R. Y., Science 1998, 281, 269–272 ), wie deren Anwendungen in vivo ( Griffin BA, Adams SR, Jones J, Tsien RY. Methods Enzymol. 2000; 327: 565–78 ). Jedoch enthalten diese giftigen Leuko-Fluoreszenzfarbstoffe Arsen, was eine Anwendung in biologischen Systemen problematisch gestaltet. Darüber hinaus eignen sich diese Verbindungen nur bedingt zur Markierung von Biomolekülen und reagieren nur mit bestimmten Thiolen in Pepidmotiven.Fluorescein-derived leuco fluorescent dyes that exhibit fluorescence following a conjugation reaction with thiols have also been described ( Griffin, BA; Adams, SR; Tsien, RY, Science 1998, 281, 269-272 ), as their applications in vivo ( Griffin BA, Adams SR, Jones J, Tsien RY. Methods Enzymol. 2000; 327: 565-78 ). However, these toxic leuco fluorescent dyes contain arsenic, making their use in biological systems problematic. In addition, these compounds are only limited to the labeling of biomolecules and react only with certain thiols in peptide motifs.

Darüber hinaus ist der Großteil der bereits im Markt verfügbaren Farbstoffe unter milden Reaktionsbedingungen nur schwierig und in aufwendiger Weise an das entsprechende Zielmolekül zu binden. Eine hohe Reaktionsgeschwindigkeit und Stabilität des Farbstoffs unter biokompatiblen Bedingungen ist jedoch eine zwingende Voraussetzung beispielsweise für die routinemäßige Anwendung in Analytik und Diagnose.About that In addition, the majority of those already available in the market Dyes under mild reaction conditions only difficult and in consuming way to bind to the corresponding target molecule. A high reaction rate and stability of the dye However, under biocompatible conditions is a mandatory requirement for example, for the routine Application in analytics and diagnostics.

Reaktive Xanthenfarbstoffe, die unter milden Bedingungen durch Subsitution an der 3' bzw. 6' Position mit einem Zielmolekül koppeln sind nicht bekannt. Dies wird in einer Publikation von Albers et al, (Journal of the American Chemical Society (2006), 128(30), 9640–9641) klar, in der beschrieben wird, dass NHS-Derivate von 3',6'-Dibromfluoran unter gewissen Bedingungen mit Aminen gekoppelt werden können, ohne dass Substitution an der 3'- oder 6'-Position stattfindet. Aus dieser Arbeit wird klar, dass Halogene an der 3'- oder 6'-Position in Fluoranen unter weniger harschen Bedingungen nicht reaktiv sind, und sich daher nicht als reaktive Komponente zur Darstellung von Konjugaten mit Biomolekülen eignen.Reactive xanthene dyes that couple to a target molecule under mild conditions by substitution at the 3 'and 6' positions, respectively, are not known. This is stated in a publication by Albers et al, (Journal of the American Chemical Society (2006), 128 (30), 9640-9641) which discloses that NHS derivatives of 3 ', 6'-dibromofluoran can be coupled under certain conditions with amines without substitution at the 3' or 6 'position. From this work, it becomes clear that halogens at the 3 'or 6' position in fluorans are not reactive under less harsh conditions, and therefore are not suitable as a reactive component for the preparation of conjugates with biomolecules.

Xanthenfarbstoffe werden typischerweise durch Kondensation von zwei Äquivalenten 1,3-Resorcinolen oder 1,3-Aminophenolen mit verschiedenen Derivaten von Benzoesäure, Phtalsäure oder Phtalsäureanhydrid oder Sulfobenzosäure oder Sulfobenzosäureanhydrid dargestellt, wie zum Beispiel in DE 6981765 und DE 69731179 beschrieben ist. Unsymmetrische Xanthenfarbstoffe, in denen die 3'- und 6'-Positionen unterschiedlich substituiert sind, wie zum beispielsweise Rhodole, können durch Einsatz je einen Äquivalents zweier unterschiedlicher Resorcinole oder 1,3-Aminophenole erhalten werden. In diesem Fall entstehen Stoffgemische, deren Auftrennung durch Chromatographie langwierig und technisch aufwendig ist. Alternativ können unsymmetrische Xanthenfarbstoffe auch stufenweise aufgebaut werden, wie zum Beispiel in DE 60005787 beschrieben ist. Dazu wird ein ausgewähltes 1,3-Resorcinol oder 1,3-Aminophenol mit einem Äquivalent des entsprechenden Benzoesäure- oder Phtalsäurederivates zu einem Benzophenon kondensiert, wonach es typischerweise isoliert und aufgereinigt werden muss, bevor es mit einem Äquivalent eines anderen 1,3-Resorcinol- oder 1,3-Aminophenolderivats zum Farbstoff kondensiert wird. Die obengenannten Verfahren erfordern hohe Temperaturbedingungen und Säurekatalyse, also Bedingungen, unter denen Biomoleküle zersetzt bzw. verändert werden oder unlöslich sind.Xanthene dyes are typically prepared by condensation of two equivalents of 1,3-resorcinols or 1,3-aminophenols with various derivatives of benzoic acid, phthalic acid or phthalic anhydride or sulfobenzoic acid or sulfobenzoic acid anhydride, as described, for example, in US Pat DE 6981765 and DE 69731179 is described. Unsymmetrical xanthene dyes in which the 3 'and 6' positions are substituted differently, such as for example rhodols, can be obtained by use of one equivalent each of two different resorcinols or 1,3-aminophenols. In this case, mixtures of substances arise whose separation by chromatography is lengthy and technically complicated. Alternatively, asymmetric xanthene dyes can also be built up stepwise, such as in DE 60005787 is described. For this purpose, a selected 1,3-resorcinol or 1,3-aminophenol is condensed with one equivalent of the corresponding benzoic or phthalic acid derivative to give a benzophenone, whereafter it must typically be isolated and purified before reacting with one equivalent of another 1,3-resorcinol - or 1,3-aminophenol derivative is condensed to dye. The above methods require high temperature conditions and acid catalysis, conditions under which Bio molecules are decomposed or altered or are insoluble.

Direkte Umwandlungsreaktionen von Fluoresceinen in Rhodole sind nicht bekannt. Fluorescein kann durch Umsetzung mit einem Chlorierungsreagenz wie Thionylchlorid oder Phosphorylchlorid in 3',6'-Dichlorfluoran überführt werden. Die Synthese von unsymmetrischen Rhodaminen ausgehend von 3',6'-Dichlorfluoran durch nukleophile Substitution der Halogenatome erfolgt in hochsiedenden Lösungsmitteln bei hoher Temperatur oder in der Gegenwart von Lewis-Säuren als Katalysator, also ebenfalls unter solchen Bedingungen, unter denen Biomoleküle zersetzt bzw. verändert werden oder unlöslich sind. US 20060293523 beschreibt die Synthese von unsymmetrischen Rhodaminen aus 3',6'-Dichlorfluoran bei 60°C in Sulfolan unter Verwendung von AlCl3 als Katalysator. Dabei müssen monosubstituierte Zwischenprodukte (6'-Chlor-3H-xanthen-3'-imine, die am 3'-imin-Stickstoff substituiert sind) aufwendig gereinigt werden.Direct conversion reactions of fluoresceins into rhodols are not known. Fluorescein can be converted to 3 ', 6'-dichlorofluoran by reaction with a chlorinating reagent such as thionyl chloride or phosphoryl chloride. The synthesis of unsymmetrical rhodamines starting from 3 ', 6'-dichlorofluoran by nucleophilic substitution of the halogen atoms takes place in high-boiling solvents at high temperature or in the presence of Lewis acids as a catalyst, ie also under such conditions under which decomposes or changes biomolecules become or are insoluble. US 20060293523 describes the synthesis of unsymmetrical rhodamines from 3 ', 6'-dichlorofluoran at 60 ° C in sulfolane using AlCl 3 as the catalyst. In this case, monosubstituted intermediates (6'-chloro-3H-xanthene-3'-imines which are substituted on the 3'-imine nitrogen) must be thoroughly purified.

In DE 19923168 werden Verfahren zur Synthese von Xanthenfarbstoffen beschrieben, die an mindestens einer der beiden Positionen 3' oder 6' mit einem aliphatischen elektronenziehenden Rest substituiert sind. Jedoch beinhalten die hier beschriebenen Verfahren zur Herstellung von Xanthenfarbstoffen, ausgehend von wenig reaktivem 3'-6'-Dichlorfluoran, das Arbeiten unter Schutzgasatmosphäre und wasserfreien Bedingungen. und eine äußerst aufwendige Isolation des Produkts.In DE 19923168 describes methods for the synthesis of xanthene dyes, which are substituted at at least one of the two positions 3 'or 6' with an aliphatic electron-withdrawing radical. However, the methods described herein for the preparation of xanthene dyes, starting from less reactive 3'-6'-dichlorofluoran include working under a protective gas atmosphere and anhydrous conditions. and a very elaborate isolation of the product.

Beispiele für typische bekannte reaktive Fluoreszenzfarbstoffe sind NHS-Derivate, Isothiocyanate, oder Säurechloride von Xanthenfarbstoffen, welche vielfältig eingesetzt werden, um kleine Moleküle, Makromoleküle und Biomoleküle zu markieren. Das Produkt dieser Markierung ist ein Konjugat aus Farbstoff und zu markierendem Molekül. Erwünscht ist eine Fluoreszenzmarkierung unter Bedingungen, welche die zu markierenden Moleküle nicht anderweitig chemisch verändern oder denaturieren. Fluoreszenzmarkierung wird besonders häufig verwendet, wenn mit geringen Stoffmengen solcher Moleküle umgegangen wird, typischerweise im Femtomol bis Nanomol Bereich. Wegen der geringen Stoffmengen ist die Erfolgskontrolle der Fluoreszenzmarkierung schwierig und häufig muss ein Teil der Reaktionsmischung zur Analyse geopfert werden. Eine Erfolgskontrolle z. B. durch leicht messbare Änderung der Farb- oder Fluoreszenzeigenschaften der Reaktivfarbstoffe ist höchst wünschenswert.Examples for typical known reactive fluorescent dyes NHS derivatives, isothiocyanates, or acid chlorides of xanthene dyes, which are widely used to small molecules, macromolecules and to mark biomolecules. The product of this mark is a conjugate of dye and molecule to be labeled. It is desirable to have a fluorescent label under conditions which the molecules to be labeled are not chemically otherwise change or denature. Fluorescence labeling is used especially frequently when using small amounts of substance such molecules are handled, typically in femtomol bis Nanomol range. Because of the small amounts of substance is the success control Fluorescent labeling is difficult and often requires Part of the reaction mixture are sacrificed for analysis. A success check z. B. by easily measurable change in color or fluorescence properties The reactive dyes are highly desirable.

Somit besteht ein hoher Bedarf an verbesserten reaktiven Leuko-Fluoreszenzfarbstoffen, welche unter einfacher Handhabung bei milden Bedingungen reagieren und durch die erfolgreiche Reaktion, z. B. mit einem nukleophilen Analyten, Farbe und Fluoreszenz erlangen. Es besteht weiterhin Bedarf an reaktiven Fluoreszenzfarbstoffen, die während einer solchen Markierungsreaktion eine Veränderung ihrer Farb- und Fluoreszenzeigenschaften erfahren, zum Beispiel in Form einer Verschiebung zu größeren Wellenlängen.Consequently there is a high demand for improved reactive leuco-fluorescent dyes, which react under easy handling in mild conditions and by the successful reaction, e.g. B. with a nucleophilic Obtain analytes, color and fluorescence. There is still a need for reactive fluorescent dyes during such Labeling reaction a change in their color and fluorescence properties experience, for example in the form of a shift to larger ones Wavelengths.

Der vorliegenden Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, reaktive Leuko-Fluoreszenzfarbstoffe und reaktive Fluoreszenzfarbstoffe bereitzustellen, welche unter milden Bedingungen mit Nukleophilen wie beispielsweise Aminogruppen reagieren, und welche bei dieser Reaktion Farbe und Fluoreszenz entwickeln, oder welche bei dieser Reaktion ihre vorhandenen Farb- bzw. Fluoreszenzeigenschaften verändern.Of the The present invention is therefore based on the object reactive To provide leuco fluorescent dyes and reactive fluorescent dyes, which under mild conditions with nucleophiles such as Amino groups react, and which in this reaction color and Develop fluorescence, or which are present in this reaction Change color or fluorescence properties.

Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, durch Umsetzung dieser reaktiven Leuko-Fluoreszenzfarbstoffe und reaktiven Fluoreszenzfarbstoffe Xanthenderivate zur Verfügung zu stellen, deren Substituenten an den 3'- und 6'-Positionen Makromoleküle und Biomoleküle sind.A Another object of the present invention is, by reaction these reactive leuco-fluorescent dyes and reactive fluorescent dyes xanthene derivatives be available whose substituents on the 3'- and 6'-positions macromolecules and biomolecules are.

Diese Aufgaben werden durch die in den Ansprüchen charakterisierten Ausführungsformen gelöst. Insbesondere wird ein Xanthenderivat nach Formel 1

Figure 00050001
Formel 1 bereitgestellt, wobei R1, R2, R3 und R4 unabhängig voneinander Wasserstoff, eine aminreaktive Gruppe, Alkyl, Aryl, Heteroaryl, Alkoxy, Cyano, Hydroxy, Halogen, Isocyanat, Carboxy, Sulfonyl, oder Derivate davon sind, R5, R6, R7, R8, R9 und R10 unabhängig voneinander Wasserstoff, Polyethylen, Jeffamine, substituiertes oder unsubstituiertes Alkyl, Aryl, Heteroaryl, oder Halogenid sind, X eine nukleofuge Abgangsgruppe oder ein Biomolekül ist, und Y eine nukleofuge Abgangsgruppe, ein elektronenziehender Rest, ein substituierter oder unsubsitutierter Alkohol, oder ein substituiertes oder unsubsitutiertes Amin, oder ein Biomolekül ist.These objects are achieved by the embodiments characterized in the claims. In particular, a xanthene derivative of formula 1
Figure 00050001
Formula 1 wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are independently hydrogen, an amine-reactive group, alkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, cyano, hydroxy, halogen, isocyanate, carboxy, sulfonyl, or derivatives thereof, R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently hydrogen, polyethylene, Jeffamine, substituted or unsubstituted alkyl, aryl, heteroaryl or halide, X is a nucleofuge leaving group or biomolecule, and Y is a nucleofuge Leaving group, an electron-withdrawing radical, a substituted or unsubstituted alcohol, or a substituted or unsubstituted amine, or a biomolecule.

Der Begriff „Xanthenderivat” wie hierin verwendet umfasst jedes Molekül, welches auf dem Xanthengrundkörper basiert. Darüber hinaus ist der Begriff „Xanthenderivat” nicht auf die eine wie in Formel 1 gezeigt Form beschränkt, sondern umfasst auch die jeweils möglichen Formen unterschiedlicher Isomere und Tautomere, wie beispielsweise in 1 dargestellt.The term "xanthene derivative" as used herein includes any molecule based on the parent xanthene body. Moreover, the term "xanthene derivative" is not limited to the one shown in Formula 1, but also encompasses the different possible forms Isomers and tautomers, such as in 1 shown.

Der Begriff „aminreaktive Gruppe” wie hierin verwendet umfasst funktionelle Gruppen, die mit Aminogruppen anderer Moleküle Konjugate durch kovalente Bindungen ausbilden. Bevorzugte aminreaktive Gruppen sind Säureester, Isothiocanat, Pentafluorophenol, Säureanhydrid, Säurehalogenid oder N-Hydroxysuccinimidester.Of the Term "amine-reactive group" as used herein includes functional groups that interact with amino groups of other molecules Form conjugates through covalent bonds. Preferred amine-reactive Groups are acid esters, isothiocanate, pentafluorophenol, Acid anhydride, acid halide or N-hydroxysuccinimide ester.

Der Begriff „Alkyl” umfasst sowohl lineare, als auch verzweigtkettige C1-C12 Alkylreste. Beispiele für erfindungsgemäße Alkylgruppen sind Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, Sec-butyl, tert-Butyl, Pentyl, Isopentyl, Hexyl, Heptyl, Octyl, Nonyl, Decyl, Undecyl, Dodecyl, Hexadecyl und Octadecyl. Bevorzugte Alkylgruppen weisen 1 bis 10 C-Atome, besonders bevorzugte Alkylgruppen weisen 1 bis 3 C-Atome auf.The term "alkyl" includes both linear and branched chain C 1 -C 12 alkyl radicals. Examples of alkyl groups according to the invention are methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, hexadecyl and octadecyl. Preferred alkyl groups have 1 to 10 C atoms, particularly preferred alkyl groups have 1 to 3 C atoms.

Darüber hinaus ist der Begriff „Alkyl” hier nicht auf gesättigte Verbindungen beschränkt, sondern umfasst auch zyklische Alkylgruppen, Alkenylgruppen und Alkinylgruppen und deren jeweils mögliche Strukturisomere.About that In addition, the term "alkyl" is not here but limited to saturated compounds also cyclic alkyl groups, alkenyl groups and alkynyl groups and their respective possible structural isomers.

Der Begriff „zyklische Alkylgruppe” bezeichnet von Cykloalkanen abgeleitete Substituenten, und beinhaltet auch solche Cykloalkanen, die weitere Alkylgruppen am Ring tragen. Beispiele für erfindungsgemäße zyklische Alkygruppen sind Cyclopropyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, 4-Methylcyclohexyl, 4-Tert-butylcyclohexyl und Cyclooctyl, wobei eine zyklische Alkylgruppe bevorzugt 3 bis 14 C-Atome und besonders bevorzugt 4 bis 8 C-Atome aufweist.Of the Term "cyclic alkyl group" refers to Cykloalkanes derived substituents, and includes such Cycloalkanes bearing additional alkyl groups on the ring. Examples for cyclic alkyl groups according to the invention are cyclopropyl, cyclopentyl, cyclohexyl, 4-methylcyclohexyl, 4-tert-butylcyclohexyl and cyclooctyl, wherein a cyclic alkyl group preferably 3 to 14 C atoms and particularly preferably 4 to 8 C atoms.

Der Begriff „Alkenyl” bzw. „Alkenylgruppe” umfasst Alkylgruppen, die eine oder mehrere Doppelbindungen enthalten.Of the Term "alkenyl" or "alkenyl group" includes Alkyl groups containing one or more double bonds.

Beispiel für Alkenylgruppen sind Vinyl, Ally, Crotyl, Tiglyl und Prenyl, wobei bevorzugte Alkenylgruppen 2 bis 10 Atome aufweisen, und besonders bevorzugte Alkenylgruppen 3 bis 6 C-Atome aufweisen.example alkenyl groups are vinyl, ally, crotyl, tiglyl and Prenyl, with preferred alkenyl groups having from 2 to 10 atoms, and particularly preferred alkenyl groups have 3 to 6 carbon atoms.

Der Begriff „Substitutiertes Alkyl” bzw. „Substitutierte Alkylgruppen” bezeichnet wie vorstehend definiert Alkylgruppen, in denen 1 bis 10, bevorzugt 1 bis 5 Wasserstoffatome durch Substituenten wie Cyanogruppen, Azide, Nitrogruppen, Halogene wie Fluor, Chlor, Brom, Jod und ähnliche, Alkylgruppen wie vorstehend definiert, Alkoxygruppen wie Methoxy, Ethoxy und ähnliche, oder Aminogruppen ersetzt sind.Of the Term "Substituted alkyl" or "Substituted Alkyl groups "denotes alkyl groups as defined above, in which 1 to 10, preferably 1 to 5 hydrogen atoms by substituents such as cyano groups, azides, nitro groups, halogens such as fluorine, chlorine, Bromine, iodine and the like, alkyl groups as defined above, Alkoxy groups such as methoxy, ethoxy and the like, or amino groups are replaced.

Beispiele für bevorzugte substituierte Alkyle sind Chloromethyl, 2-Chloroethan 3-Chloropropan, Trifluoromethan, 2,2,2-Trifluoroethansulfonat, 3,3,3-Trifluoropropan und Trichloromethan.Examples preferred alkyls are chloromethyl, 2-Chloroethane 3-chloropropane, trifluoromethane, 2,2,2-trifluoroethanesulfonate, 3,3,3-trifluoropropane and trichloromethane.

Der Begriff „Aryl” bzw. „Arylgruppe” umfasst sowohl monocyclische als auch multizyklische Aromaten, zum Beispiel Phenyl, Napthyl und Anthracenyl. Die Arylgruppe kann 1 bis 5, bevorzugt 1 bis 3 Substitutenten aufweisen, welche keine wesentliche Reaktivität gegenüber Sulfonylchloriden zeigen. Beispiele für solche Substituenten sind Cyanogruppen, Azide, Nitrogruppen, Halogene wie Fluor, Chlor, Brom, Jod und ähnliche, Alkylgruppen wie vorstehend definiert, Alkoxygruppen wie Methoxy, Ethoxy und ähnliche.Of the The term "aryl" or "aryl group" includes both monocyclic as well as multicyclic aromatics, for example phenyl, Napthyl and anthracenyl. The aryl group may be 1 to 5, preferably 1 to 3 substituents which have no significant reactivity towards sulfonyl chlorides. examples for such substituents are cyano groups, azides, nitro groups, halogens such as fluorine, chlorine, bromine, iodine and the like, alkyl groups as defined above, alkoxy groups such as methoxy, ethoxy and the like.

Beispiele für erfindungsgemäße substituierte Arylgruppen sind Tolyl, Xylyl, Methoxyphenyl, Methylthiophenyl, Methoxycarbonylphenyl, Chlorophenyl, Bromophenyl, Iodophenyl, Dimethylaminophenyl, Diethylaminophenyl, Cyanophenyl, Pentafluorophenyl, Tetrafluorophenyl, Trifluorphenyl, Fluoronitrophenyl, Azidophenyl. Bevorzugte Arylgruppen sind Nitrophenyl, Dinitrophenyl und Triinitrophenyl.Examples for substituted aryl groups according to the invention are tolyl, xylyl, methoxyphenyl, methylthiophenyl, methoxycarbonylphenyl, Chlorophenyl, bromophenyl, iodophenyl, dimethylaminophenyl, diethylaminophenyl, Cyanophenyl, pentafluorophenyl, tetrafluorophenyl, trifluorophenyl, Fluoronitrophenyl, azidophenyl. Preferred aryl groups are nitrophenyl, Dinitrophenyl and tri-nitrophenyl.

Der Begriff „Heteroaryl” bzw. „Heteroarylgruppe” umfasst monocylclische oder polycyclische aromatische Gruppen, die mindestens ein, bevorzugt ein bis drei Heteroatome, ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel, enthalten.Of the Term "heteroaryl" or "heteroaryl group" monocyclic or polycyclic aromatic groups which are at least one, preferably one to three heteroatoms selected from Nitrogen, oxygen and sulfur.

Beispiele für Heteroaryle sind 5- bis 6-gliedrige Monocyclen wie Furyl, Thiophenyl, Pyrrolyl, Pyridyl und ähnliche, und Polycyclen wie Benzofuryl, Xanthenyl, Coumarinyl, Dibenzofuryl, Thianthrenyl, Indolyl, Acridinyl und ähnliche. Die Heteroarylgruppe kann 1 bis 5, bevorzugt 1 bis 3 Substituenten, wie vorstehend für Arylgruppen definiert, aufweisen.Examples for heteroaryls are 5- to 6-membered monocycles such Furyl, thiophenyl, pyrrolyl, pyridyl and the like, and Polycycles such as benzofuryl, xanthenyl, coumarinyl, dibenzofuryl, Thianthrenyl, indolyl, acridinyl and the like. The heteroaryl group can 1 to 5, preferably 1 to 3 substituents, as above for Aryl groups defined.

Der Begriff „Polyethylen” umfasst hierin Oligomere oder Polymere von Ethylenoxid von der allgemeinen Formel HO-(CH2-CH2-O-)n-H, worin n die Anzahl der Ethylenoxideinheiten darstellt. Die Werte für n können zwischen 1 und 20, bevorzugt zwischen 2 und 10, und besonders bevorzugt zwischen 3 und 5 liegen.The term "polyethylene" herein includes oligomers or polymers of ethylene oxide of the general formula HO- (CH 2 -CH 2 -O-) n -H, wherein n represents the number of ethylene oxide units. The values for n can be between 1 and 20, preferably between 2 and 10, and particularly preferably between 3 and 5.

Der Begriff „Jeffamin” umfasst hierin Polyetheramine, bevorzugt primäre Diaminderivate von erfindungsgemäßen Polyethylenen mit der allgemeinen Formel H2N-(CH2-CH2-O-)n-CH2-CH2-NH2 , worin n die Anzahl der Ethylenoxideinheiten darstellt. Die Werte für n können zwischen 1 und 20, bevorzugt zwischen 2 und 10, und besonders bevorzugt zwischen 3 und 5 liegen.The term "Jeffamine" herein includes polyetheramines, preferably primary diamine derivatives of polyethylenes of the invention having the general formula H 2 N- (CH 2 -CH 2 -O-) n -CH 2 -CH 2 -NH 2 , where n is the number of ethylene oxide units represents. The values for n can be between 1 and 20, preferably between 2 and 10, and particularly preferably between 3 and 5.

Der Begriff „nukleofuge Abgangsgruppe” wie hierin verwendet umfasst Sulfonate, Sulfate, Phosphate, Phosphonate, und deren Derivate, sowie ähnliche elektronenziehende Gruppen. Bevorzugte nukleofuge Abgangsgruppen sind Sulfonate.Of the The term "nucleofuge leaving group" as used herein used includes sulfonates, sulfates, phosphates, phosphonates, and their derivatives, as well as similar electron-withdrawing groups. Preferred nucleofuge leaving groups are sulfonates.

Der Begriff „Sulfonat” umfasst Substituenten entsprechend der in Formel 2 gezeigten Struktur,

Figure 00080001
Formel 2 wobei R11 ein wie vorstehend definierter substituierter oder unsubstituierter Alkyl-, substituierter oder unsubstituierter Aryl-, substituierter oder unsubstituierter Alkylaryl, oder substituierter oder unsubstituierter Heteroarylrest ist.The term "sulfonate" includes substituents corresponding to the structure shown in Formula 2,
Figure 00080001
Formula 2 wherein R 11 is a substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted alkylaryl as defined above, or substituted or unsubstituted heteroaryl.

Bevorzugte Sulfonate sind Ethansulfonat, 1-Propansulfonat, 2-Propanesulfonat, 1-Butansulfonat, 2-Methyl-1-propansulfonat, Cyclopropansulfonat, Cyclobutansulfonat, Cyclopentansulfonat, Cyclohexansulfonat, 1-Octansulfonat, 1-Nonansulfonat, 1-Decansulfonat, 1-Dodecansulfonat, 1-Hexadecansulfonat, 1-Octadecansulfonat Chloromethansulfonat, 2-Chloroethanesulfonyl, 3-Chloropropansulfonyat, 1-Hexansulfonat, Trifluoromethansulfonat, 2,2,2-Trifluoroethansulfonat, 3,3,3-Trifluoropropan-1-sulfonat, Trichloromethansulfonat, Benzolsulfonat, o-Toluolsulfonat, Phenylmethansulfonat, 4-tert-Butylbenzolsulfonat, Pentamethylbenzolsulfonat, 2-Thiophenesulfonyl, 4-(Acetylamino benzolsulfonat, Benzolsulfonat, 4-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, Dansylsulfonat, Dabsylisulfonat, 9H-Fluoren-9-Sulfonat, 2-Oxo-2H-1-benzopyran-6-sulfonat, 1-Napthylsulfonat, 2-Napthylsulfonat, Anthracensulfonat, Biphenyl-4-sulfonat, 8-Chinolylsulfonat, 4- Acetylbenzenesulfonat, 2-Fluorobenzolsulfonat, 3-Fluorobenzolsulfonat, 4-Fluorobenzolsulfonat, 2-Cyanobenzolsulfonat, 3-Cyanobenzolsulfonat, 4-Cyanobenzolsulfonat, 2-Chlorobenzolsulfonat, 3-Chlorobenzolsulfonat, 4-Chlorobenzolsulfonat, 2-Bromobenzolsulfonat, 3-Bromobenzolsulfonat, 4-Bromobenzolsulfonat, 2-Iodobenzolsulfonat, 3-Iodobenzolsulfonat, 4-Iodobenzolsulfonat, (E)-2-Phenylethensulfonat, 4-Methylbenzolsulfonat, 4-Ethylbenzolsulfonat, 3,5-Dimethylbenzolsulfonat, 2-Methoxybenzolsulfonat, 3-Methoxybenzolsulfonat, 4-Methoxybenzolsulfonat, Fluoromethylbenzolsulfonat Chloromethylbenzolsulfonat Bromomethylbenzolsulfonat, Iodomethylbenzolsulfonat, Difluorobenzolsulfonat, Dichlorobenzolsulfonat, Dibromobenzolsulfonat, Dijodobenzolsulfonat, Chlorofluorobenzolsulfonat, Bromofluorobenzolsulfonat, Iodofluorobenzolsulfonat, Trifluorobenzolsulfonat, Tetrafluorobenzolsulfonat, Pentafluorobenzolsulfonat, 2-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, 3-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, 4-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, Chlorothiophenesulfonat, 4-Isocyanatobenzolsulfonat, 4-Propylbenzolsulfonat, 4-Isopropylbenzolsulfonat, 4-Fluoro-3-cyanobenzolsulfonat, 2-Nitrobenzolsulfonat, 3-Nitrobenzolsulfonat, 4-Nitrobenzolsulfonat, Dinitrobenzolsulfonat, Trinitrobenzolsulfonat, Methylnitrobenzolsulfonat, Methyldinitrobenzolsulfonat, Dimethoxybenzolsulfonat, (Difluoromethoxy)benzolsulfonat, (Triifluoromethoxy)benzolsulfonat, 2,4,6-Trimethylbenzolsulfonat, 4-(Phenylazo)benzolsulfonat, 4-Azidobenzolsulfonat, p-Toluolsulfonat und Methansulfonat.preferred Sulfonates are ethanesulfonate, 1-propanesulfonate, 2-propanesulfonate, 1-butanesulfonate, 2-methyl-1-propanesulfonate, cyclopropanesulfonate, Cyclobutanesulfonate, cyclopentanesulfonate, cyclohexanesulfonate, 1-octanesulfonate, 1-nonansulfonate, 1-decanesulfonate, 1-dodecane sulfonate, 1-hexadecanesulfonate, 1-octadecanesulfonate chloromethanesulfonate, 2-chloroethanesulfonyl, 3-chloropropanesulfonylate, 1-hexanesulfonate, trifluoromethanesulfonate, 2,2,2-trifluoroethanesulfonate, 3,3,3-trifluoropropane-1-sulfonate, trichloromethanesulfonate, benzenesulfonate, o-toluenesulfonate, phenylmethanesulfonate, 4-tert-butylbenzenesulfonate, Pentamethylbenzenesulfonate, 2-thiophenesulfonyl, 4- (acetylamino-benzenesulfonate, Benzenesulfonate, 4- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, dansylsulfonate, Dabsylisulfonate, 9H-fluorene-9-sulfonate, 2-oxo-2H-1-benzopyran-6-sulfonate, 1-naphthylsulfonate, 2-naphthylsulfonate, anthracenesulfonate, biphenyl-4-sulfonate, 8-quinolylsulfonate, 4-acetylbenzenesulfonate, 2-fluorobenzenesulfonate, 3-fluorobenzenesulfonate, 4-fluorobenzenesulfonate, 2-cyanobenzenesulfonate, 3-cyanobenzenesulfonate, 4-cyanobenzenesulfonate, 2-chlorobenzenesulfonate, 3-chlorobenzenesulfonate, 4-chlorobenzenesulfonate, 2-bromobenzenesulfonate, 3-bromobenzenesulfonate, 4-bromobenzenesulfonate, 2-iodobenzenesulfonate, 3-iodobenzenesulfonate, 4-iodobenzenesulfonate, (E) -2-phenylethensulfonate, 4-methylbenzenesulfonate, 4-ethylbenzenesulfonate, 3,5-dimethylbenzenesulfonate, 2-methoxybenzenesulfonate, 3-methoxybenzenesulfonate, 4-methoxybenzenesulfonate, fluoromethylbenzenesulfonate Chloromethylbenzenesulfonate bromomethylbenzenesulfonate, iodomethylbenzenesulfonate, Difluorobenzenesulfonate, dichlorobenzenesulfonate, dibromobenzenesulfonate, Diiodobenzenesulfonate, chlorofluorobenzenesulfonate, bromofluorobenzenesulfonate, Iodofluorobenzenesulfonate, trifluorobenzenesulfonate, tetrafluorobenzenesulfonate, pentafluorobenzenesulfonate, 2- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, 3- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, 4- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, Chlorothiophenesulfonate, 4-isocyanatobenzenesulfonate, 4-propylbenzenesulfonate, 4-isopropylbenzenesulfonate, 4-fluoro-3-cyanobenzenesulfonate, 2-nitrobenzenesulfonate, 3-nitrobenzenesulfonate, 4-nitrobenzenesulfonate, dinitrobenzenesulfonate, trinitrobenzenesulfonate, Methyl nitrobenzene sulfonate, methyl dinitrobenzene sulfonate, dimethoxy benzene sulfonate, (Difluoromethoxy) benzenesulfonate, (trifluoromethoxy) benzenesulfonate, 2,4,6-trimethylbenzenesulfonate, 4- (phenylazo) benzenesulfonate, 4-azidobenzenesulfonate, p-toluenesulfonate and methanesulfonate.

Besonders bevorzugte Sulfonate sind p-Toluolsulfonat und Methansulfonat.Especially preferred sulfonates are p-toluenesulfonate and methanesulfonate.

Der Begriff „Biomolekül” umfasst jedes Molekül, welches in lebenden Organismen vorkommt oder auf solchen basiert. Darüber hinaus ist der Begriff „Biomolekül” nicht auf Moleküle beschränkt, die in lebenden Organismen synthetisiert werden oder dort vorkommen, sondern umfasst auch Derivate davon, die durch chemische oder enzymatische Modifikation außerhalb lebender Organismen in vitro erzeugt werden, sowie gleiche oder ähnliche Moleküle und deren Derivate, die vollständig außerhalb lebender Organismen in vitro synthetisiert werden. Weiterhin ist der Begriff „Biomolekül”, wie hierin verwendet, nicht auf Moleküle beschränkt, von denen bekannt ist, dass sie in lebenden Organismen vorkommen, sondern umfasst weiterhin Moleküle, die zu Stoffklassen gehören, von denen bekannt ist, dass sie in lebenden Organismen vorkommen, sowie Derivate hiervon.Of the Term "biomolecule" includes any molecule, which occurs in or is based on living organisms. In addition, the term "biomolecule" is not limited to molecules found in living organisms be synthesized or occur there, but also includes derivatives thereof, by chemical or enzymatic modification outside living organisms are produced in vitro, as well as the same or similar Molecules and their derivatives that are completely outside living organisms are synthesized in vitro. Furthermore is the term "biomolecule" as used herein used, not limited to molecules of which are known to occur in living organisms, but also includes molecules that belong to substance classes, which are known to occur in living organisms, and derivatives thereof.

Beispiele für erfindungsgemäße Biomoleküle sind Haptene, Antigene, Antikörper, Proteine, Peptide, Nukleinsäuren, Mono- oder Oligo- oder Polynukleotide, Nukleoside, Oligosaccharide, Polysaccharide, Locked Nucleic Acids (LNA), Peptide Nucleic Acids (PNA).Examples for biomolecules according to the invention Haptens, antigens, antibodies, proteins, peptides, nucleic acids, Mono- or oligo- or polynucleotides, nucleosides, oligosaccharides, Polysaccharides, Locked Nucleic Acids (LNA), Peptide Nucleic Acids (PNA).

Der Begriff Nukleophil umfasst alle Moleküle, die mit den erfindungsgemäßen Xanthenderivaten unter Substitution einer Sulfonatgruppe reagieren können. Beispiel für Nukleophile sind primäre Amine, sekundäre Amine, Azidanion, Aniline, Hydrazine, Hydrazone, Hydroxyanionen, Alkoholate, Thiole, Thiolate, Mercaptane und ähnliche. Der Begriff Nukleophil umfasst nicht nur kleine Moleküle sondern auch Makromoleküle und auch Biomoleküle, welche mit den erfindungsgemäßen Xanthenderivaten unter Substitution einer Sulfonatgruppe reagieren können.Of the The term nucleophile includes all molecules that are involved with the invention Xanthenivaten can react with substitution of a sulfonate group. Example of nucleophiles are primary amines, secondary Amines, azidanion, anilines, hydrazines, hydrazones, hydroxyanions, Alcoholates, thiols, thiolates, mercaptans and the like. The term nucleophile does not just cover small molecules but also macromolecules and also biomolecules, which with the xanthene derivatives according to the invention can react with substitution of a sulfonate group.

Bevorzugte erfindungsgemäße Xanthenderivate sind in 3, 4 und 10 abgebildet, besonders bevorzugte erfindungsgemäße Xanthenderivate sind in den 3 und 4 gezeigt.Preferred xanthene derivatives according to the invention are in 3 . 4 and 10 Shown, particularly preferred xanthene derivatives according to the invention are in the 3 and 4 shown.

Eine weitere Ausführungsform betrifft ein Xanthenderivat wie vorstehend definiert, wobei mindestens einer der Reste R1 bis R10 eine aktivierbare Gruppe, ausgewählt aus einem Säureester, Isothiocanat, Pentafluorophenol, Säureanhydrid, Säurehalogenid oder N-Hydroxysuccinimidester ist.Another embodiment relates to a xanthene derivative as defined above, wherein at least one of R 1 to R 10 is an activatable group selected from an acid ester, isothiocanate, pentafluorophenol, acid anhydride, acid halide or N-hydroxysuccinimide ester.

Eine weitere Ausführungsform betrifft ein Xanthenderivat wie vorstehend definiert, wobei X und/oder Y ein wie vorstehend definiertes Sulfonat darstellt/darstellen.Another embodiment relates to a A xanthene derivative as defined above, wherein X and / or Y represents a sulfonate as defined above.

In einer bevorzugten Ausführungsform handelt es sich um ein Xanthenderivat wie vorstehend definiert, wobei X und/oder Y ausgewählt ist/sind aus Methansulfonat, Ethansulfonat, 1-Propansulfonat, 2-Propansulfonat, 1-Butansulfonat, 2-Methyl-1-propansulfonat, Cyclopropansulfonat, Cyclobutansulfonat, Cyclopentansulfonat, Cyclohexansulfonat, 1-Octansulfonat, 1-Nonansulfonat, 1-Decansulfonat, 1-Dodecansulfonat, 1-Hexadecansulfonat, 1-Octadecansulfonat Chloromethansulfonat, 2-Chloroethanesulfonat, 3-Chloropropansulfonat, 1-Hexansulfonat, Trifluoromethansulfonat, 2,2,2-Trifluoroethansulfonat, 3,3,3-Trifluoropropan-1-sulfonat, Trichloromethansulfonat, Benzolsulfonat, p-Toluolsulfonat, o-Toluolsulfonat, Phenylmethansulfonat, 4-tert-Butylbenzolsulfonat, Pentamethylbenzolsulfonat, 2-Thiophenesulfonyl, 4-(Acetylamino benzolsulfonat, Benzolsulfonat, 4-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, Dansylsulfonat, Dabsylsulfonat, 9H-Fluoren-9-Sulfonat, 2-Oxo-2H-1-benzopyran-6-sulfonat, 1-Napthylsulfonat, 2-Napthylsulfonat, Anthracensulfonat, Biphenyl-4-sulfonat, 8-Chinolylsulfonat, 4-Acetylbenzolsulfonat, 2-Fluorobenzolsulfonat, 3-Fluorobenzolsulfonat, 4-Fluorobenzolsulfonat, 2-Cyanobenzolsulfonat, 3-Cyanobenzolsulfonat, 4-Cyanobenzolsulfonat, 2-Chlorobenzolsulfonat, 3-Chlorobenzolsulfonat, 4-Chlorobenzolsulfonat, 2-Bromobenzolsulfonat, 3-Bromobenzolsulfonat, 4-Bromobenzolsulfonat, 2-Iodobenzolsulfonat, 3-Iodobenzoisulfonat, 4-Iodobenzolsulfonat, (E)-2-Phenylethensulfonat, 4-Methylbenzolsulfonat, 4-Ethylbenzolsulfonat, 3,5-Dimethylbenzolsulfonat, 2-Methoxybenzolsulfonat, 3-Methoxybenzolsulfonat, 4-Methoxybenzolsulfonat, Fluoromethylbenzolsulfonat Chloromethylbenzolsulfonat Bromomethylbenzolsulfonat, Iodomethylbenzolsulfonat, Difluorobenzolsulfonat, Dichlorobenzolsulfonat, Dibromobenzolsulfonat, Dijodobenzolsulfonat, Chlorofluorobenzolsulfonat, Bromofluorobenzolsulfonat, Iodofluorobenzolsulfonat, Trifluorobenzolsulfonat, Tetrafluorobenzolsulfonat, Pentafluorobenzolsulfonat, 2-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, 3-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, 4-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, Chlorothiophenesulfonat, 4-Isocyanatobenzolsulfonat, 4-Propylbenzolsulfonat, 4-Isopropylbenzolsulfonat, 4-Fluoro-3-cyanobenzolsulfonat, 2-Nitrobenzolsulfonat, 3-Nitrobenzolsulfonat, 4-Nitrobenzolsulfonat, Dinitrobenzolsulfonat, Trinitrobenzolsulfonat, Methylnitrobenzolsulfonat, Methyldinitrobenzolsulfonat, Dimethoxybenzolsulfonat, (Difluoromethoxy)benzolsulfonat, (Triifluoromethoxy)benzolsulfonat, 2,4,6-Trimethylbenzolsulfonat, 4-(Phenylazo)benzolsulfonat und 4-Azidobenzolsulfonat.In a preferred embodiment is a Xanthene derivative as defined above, wherein X and / or Y selected is / are from methanesulfonate, ethanesulfonate, 1-propanesulfonate, 2-propanesulfonate, 1-butanesulfonate, 2-methyl-1-propanesulfonate, cyclopropanesulfonate, Cyclobutanesulfonate, cyclopentanesulfonate, cyclohexanesulfonate, 1-octanesulfonate, 1-nonansulfonate, 1-decanesulfonate, 1-dodecane sulfonate, 1-hexadecanesulfonate, 1-octadecanesulfonate chloromethanesulfonate, 2-chloroethanesulfonate, 3-chloropropanesulfonate, 1-hexanesulfonate, trifluoromethanesulfonate, 2,2,2-trifluoroethanesulfonate, 3,3,3-trifluoropropane-1-sulfonate, Trichloromethanesulfonate, benzenesulfonate, p-toluenesulfonate, o-toluenesulfonate, Phenylmethanesulfonate, 4-tert-butylbenzenesulfonate, pentamethylbenzenesulfonate, 2-thiophenesulfonyl, 4- (acetylamino-benzenesulfonate, benzenesulfonate, 4- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, dansylsulfonate, dibasylsulfonate, 9H-fluorene-9-sulfonate, 2-oxo-2H-1-benzopyran-6-sulfonate, 1-naphthylsulfonate, 2-naphthylsulfonate, anthracenesulfonate, biphenyl-4-sulfonate, 8-quinolylsulfonate, 4-acetylbenzenesulfonate, 2-fluorobenzenesulfonate, 3-fluorobenzenesulfonate, 4-fluorobenzenesulfonate, 2-cyanobenzenesulfonate, 3-cyanobenzenesulfonate, 4-cyanobenzenesulfonate, 2-chlorobenzenesulfonate, 3-chlorobenzenesulfonate, 4-chlorobenzenesulfonate, 2-bromobenzenesulfonate, 3-bromobenzenesulfonate, 4-bromobenzenesulfonate, 2-iodobenzenesulfonate, 3-iodobenzoisulfonate, 4-iodobenzenesulfonate, (E) -2-phenylethensulfonate, 4-methylbenzenesulfonate, 4-ethylbenzenesulfonate, 3,5-dimethylbenzenesulfonate, 2-methoxybenzenesulfonate, 3-methoxybenzenesulfonate, 4-methoxybenzenesulfonate, Fluoromethylbenzenesulfonate chloromethylbenzenesulfonate bromomethylbenzenesulfonate, Iodomethylbenzenesulfonate, difluorobenzenesulfonate, dichlorobenzenesulfonate, dibromobenzenesulfonate, Diiodobenzenesulfonate, chlorofluorobenzenesulfonate, bromofluorobenzenesulfonate, iodofluorobenzenesulfonate, Trifluorobenzenesulfonate, tetrafluorobenzenesulfonate, pentafluorobenzenesulfonate, 2- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, 3- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, 4- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, chlorothiophenesulfonate, 4-isocyanatobenzenesulfonate, 4-propylbenzenesulfonate, 4-isopropylbenzenesulfonate, 4-fluoro-3-cyanobenzenesulfonate, 2-nitrobenzenesulfonate, 3-nitrobenzenesulfonate, 4-nitrobenzenesulfonate, Dinitrobenzenesulfonate, trinitrobenzenesulfonate, methylnitrobenzenesulfonate, Methyldinitrobenzenesulfonate, dimethoxybenzenesulfonate, (difluoromethoxy) benzenesulfonate, (Trifluoromethoxy) benzenesulfonate, 2,4,6-trimethylbenzenesulfonate, 4- (phenylazo) benzenesulfonate and 4-azidobenzenesulfonate.

In einer besonders bevorzugten Ausführungsform handelt es sich um ein Xanthenderivat wie vorstehend definiert, wobei X und/oder Y aus p-Toluolsulfonat und Methansulfonat ausgewählt ist/sind.In a particularly preferred embodiment is is a xanthene derivative as defined above, wherein X and / or Y is selected from p-toluenesulfonate and methanesulfonate.

Eine weitere Ausführungsform betrifft ein Xanthenderivat wie vorstehend definiert, wobei X und/oder Y ein Biomolekül darstellt/darstellen.A Another embodiment relates to a xanthene derivative such as as defined above, wherein X and / or Y is a biomolecule is / are.

Eine weitere Ausführungsform betrifft ein Xanthenderivat wie vorstehend definiert, wobei X ein Biomolekül und Y ein Sulfonat ist.A Another embodiment relates to a xanthene derivative such as as defined above, wherein X is a biomolecule and Y is a Sulfonate is.

Eine bevorzugte Ausführungsform betrifft ein Xanthenderivat wie vorstehend definiert, wobei das Biomolekül aus einer Nukleinsäure, einem Oligonukleotid, einem Nukleotid, einem Nukleosid, einem Peptid oder einem Protein ausgewählt ist.A preferred embodiment relates to a xanthene derivative as defined above, wherein the biomolecule of a Nucleic acid, an oligonucleotide, a nucleotide, a Nucleoside, a peptide or a protein is selected.

Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines wie vorstehend definierten Xanthenderivats, umfassend die Schritte: a) Auflösen eines Fluroesceinderivates in Pyrimidin und Umsetzen mit einem Sulfonylchlorid, b) Evaporieren von Lösungsmittel, c) Entfernung von residualem Sulfonylchlorid und d) Isolierung und Aufreinigung des Xanthenderivats.One Another aspect of the present invention relates to a method for the preparation of a xanthene derivative as defined above, comprising the steps of: a) dissolving a fluoroescein derivative in Pyrimidine and reacting with a sulfonyl chloride, b) evaporating solvent, c) removal of residual sulfonyl chloride and d) isolation and purification of the xanthene derivative.

Eine weitere Ausführungsform betrifft ein wie vorstehend definiertes Verfahren zur Herstellung eines wie vorstehend definierten Xanthenderivats, wobei das Verfahren weiter zwischen Schritt c) und d) den Schritt c') „Umsetzung unter milden Bedingungen mit einem Äquivalent eines Nukleophils” umfasst.A Another embodiment relates to a device as defined above Process for the preparation of a xanthene derivative as defined above, the method further comprising between step c) and d) the step c ') "Reaction under mild conditions with one equivalent of a nucleophile ".

Eine weitere Ausführungsform betrifft ein wie vorstehend definiertes Verfahren zur Herstellung eines wie vorstehend definierten Xanthenderivats, wobei das Verfahren weiter zwischen Schritt c) und d) den Schritt c') Umsetzung unter milden Bedingungen mit mindestens zwei Äquivalent eines Nukleophils umfasst.A Another embodiment relates to a device as defined above Process for the preparation of a xanthene derivative as defined above, the method further comprising between step c) and d) the step c ') Reaction under mild conditions with at least two equivalents of a nucleophile.

Eine weitere Ausführungsform betrifft ein wie vorstehend definiertes Verfahren, wobei das Nukleophil ein Biomolekül ist.A Another embodiment relates to a device as defined above A method wherein the nucleophile is a biomolecule.

Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft eine Verwendung des Xanthenderivats wie vorstehend definiert, zum Nachweis eines Biomoleküls in einer Probe.One Another aspect of the present invention relates to a use of the xanthene derivative as defined above, for the detection of a Biomolecule in a sample.

Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung betrifft eine Verwendung des Xanthenderivats wie vorstehend definiert, wobei das Biomolekül ein Protein oder eine Nukleinsäure ist.A Another embodiment of the present invention relates a use of the xanthene derivative as defined above, wherein the biomolecule is a protein or a nucleic acid is.

Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft ein Xanthenkonjugat, erhalten durch Umsetzung eines wie vorstehend definierten Xanthenderivats mit einem Biomolekül in einem wie vorstehend definierten Verfahren.One Another aspect of the present invention relates to a xanthene conjugate, obtained by reacting a xanthene derivative as defined above with a biomolecule in one as defined above Method.

Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft ein Kit, umfassend ein Xanthenderivat wie vorstehend definiert, und gegebenenfalls einen oder mehrere Hilfsstoffe.One Another aspect of the present invention relates to a kit comprising a xanthene derivative as defined above, and optionally one or more excipients.

Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung betrifft ein Kit wie vorstehend definiert, wobei der eine oder die mehreren Hilfsstoff(e) aus Lösungsmittel, Puffer oder Salzen, Konservierungsstoffen und Stabilisatoren ausgewählt sind.A Another embodiment of the present invention relates a kit as defined above, wherein the one or more Excipient (s) of solvent, buffer or salts, preservatives and stabilizers are selected.

Die Figuren zeigen:The Figures show:

1 zeigt die typischen Vertreter der Xanthenfarbstoffe: Fluorescein, Rhodol, Rhodamin, jeweils in der chinoiden und der Lactonform dargestellt. 1 shows the typical representatives of the xanthene dyes: fluorescein, rhodol, rhodamine, each represented in the quinoid and the lactone form.

2 zeigt verschiedene Isomere des Xanthengrundkörpers. 2 shows different isomers of the xanthene base body.

3 zeigt Synthese und Charakterisierung von Fluorescein-6'-sulfonsäureester nach Methode A wie in Beispiel 1. 3 shows synthesis and characterization of fluorescein-6'-sulfonic acid ester according to method A as in Example 1.

4 zeigt Synthese und Charakterisierung Synthese von Fluorescein-3',6'-disulfonsäureester nach Methode B wie in Beispiel 2. 4 shows synthesis and characterization Synthesis of fluorescein-3 ', 6'-disulfonic acid according to Method B as in Example 2.

5 zeigt Synthese und Charakterisierung von 3',6'-Di-Piperidinylrhodamin nach Methode C wie in Beispiel 3. 5 shows synthesis and characterization of 3 ', 6'-di-piperidinylrhodamine by Method C as in Example 3.

6 zeigt Synthese und Charakterisierung von Rhodol-3'-jeffamin-148 nach Methode C wie in Beispiel 3. 6 shows synthesis and characterization of Rhodol-3'-jeffamin-148 by Method C as in Example 3.

7 zeigt Synthese und Charakterisierung von 3',6'-Di-Piperidinylrhodamin nach Methode D wie in Beispiel 4. 7 shows synthesis and characterization of 3 ', 6'-di-piperidinyl rhodamine by Method D as in Example 4.

8 zeigt Synthese und Charakterisierung von 3'6'-Bis(jeffamin-154)-rhodamin nach Methode D wie in Beispiel 4. 8th shows synthesis and characterization of 3'6'-bis (jeffamine-154) -rhodamine by Method D as in Example 4.

9 zeigt Charakterisierung und Synthese von 3-Glycin-6'-(jeffamin 154)-rhodamin nach Methode E wie in Beispiel 5. 9 shows characterization and synthesis of 3-glycine-6 '- (jeffamine 154) -rhodamine according to Method E as in Example 5.

10 zeigt Synthese und Charakterisierung eines Fluoreszenzmarkierten Peptides nach Methode F wie in Beispiel 6. 10 shows synthesis and characterization of a fluorescence-labeled peptide according to Method F as in Example 6.

Die Xanthenderivate der vorliegenden Erfindung reagieren mit Biomolekülen und Nukleophilen unter überraschend milden Bedingungen unter Substitution der Sulfonatgruppen an den 3'- und 6'-Positionen. Bei der Reaktion mit Biomolekülen entstehen in ihren Eigenschaften vorteilhafte Xanthenkonjugate. Die spektralen Eigenschaften der erfindungsgemäßen Xanthenderivate verändern sich bei einer solchen Reaktion überraschend stark, zum Teil handelt es sich bei den erfindungsgemäßen Xanthenderivaten vorteilhafterweise um Leukofarbstoffe, die vor der Reaktion gar keine Farbe zeigen. Die erfindungsgemäßen Farbstoffe und Leukofarbstoffe sind unerwartet leicht zu synthetisieren und zu derivatisieren und ermöglichen so einen vorteilhaften Einsatz in der bioanalytischen Chemie, zum Beispiel überraschend sensitive Nachweise von Biomolekülen in einer Probe insbesondere unter milden Bedingungen.The Xanthene derivatives of the present invention react with biomolecules and nucleophiles under surprisingly mild conditions substituting the sulfonate groups at the 3 'and 6' positions. When reacting with biomolecules arise in their properties advantageous xanthene conjugates. The spectral properties of change xanthene derivatives according to the invention surprisingly strong in such a reaction, for Part is the invention Xanthenivaten advantageously to leuco dyes, the before show no color to the reaction. The invention Dyes and leuco dyes are unexpectedly easy to synthesize and to derivatize and thus enable a beneficial Use in bioanalytical chemistry, for example surprisingly sensitive Detection of biomolecules in a sample in particular under mild conditions.

BeispieleExamples

Beispiel 1: Synthese von Fluorescein-6'-sulfonsäureester (Methode A).Example 1: Synthesis of fluorescein 6'-sulfonic acid ester (Method A).

Zu einer 10% (w/v) Lösung von Fluorescein in Pyridin werden unter Rühren bei 0°C innerhalb 1 Stunde langsam 0,9 Moläquivalente eines Sulfonsäurechlorids gegeben. Nach weiteren 30 min bei 0°C wird die Reaktionsmischung bei Raumtemperatur noch 60 min weitergerührt. Das Pyridin wird im Vakuum abdestilliert.To of a 10% (w / v) solution of fluorescein in pyridine stirring slowly at 0 ° C within 1 hour Added 0.9 molar equivalents of a sulfonyl chloride. After a further 30 min at 0 ° C, the reaction mixture stirred at room temperature for a further 60 min. The pyridine is distilled off in vacuo.

Beispiel 2: Synthese von Fluorescein-3',6'-disulfonsäureester (Methode B).Example 2: Synthesis of fluorescein 3 ', 6'-disulfonic acid ester (Method B).

Zu einer 10% (w/v) Lösung von Fluorescein in Pyridin werden unter Rühren bei Raumtemperatur innerhalb 1 Stunde langsam 4 Moläquivalente eines Sulfonsäurechlorids gegeben. Es wird weitere 120 min bei Raumtemperatur weitergerührt. Pyridin und überschüssiges Sulfonsäurechlorid werden im Vakuum abdestilliert.To of a 10% (w / v) solution of fluorescein in pyridine while stirring at room temperature within 1 hour slowly 4 molar equivalents of a sulfonic acid chloride given. It is stirred for a further 120 min at room temperature. Pyridine and excess sulfonic acid chloride are distilled off in vacuo.

Beispiel 3: Umwandlung von Fluoresceinen in Rhodole (Methode C)Example 3: Conversion of fluoresceins in Rhodole (method C)

Zu einer 10% (w/v) Lösung von Fluorescein in Pyridin werden unter Rühren bei 0°C innerhalb 1 Stunde langsam 0,9 Moläquivalente eines Sulfonsäurechlorids gegeben. Die Reaktionsmischung wird bei Raumtemperatur noch 60 min weitergerührt. Dann wird auf 0°C gekühlt und Piperidin im Überschuss zugegeben. Nach weiteren 60 min Rühren bei 0°C wird die Reaktionsmischung im Vakuum bis zur Trockene eingeengt.To of a 10% (w / v) solution of fluorescein in pyridine stirring slowly at 0 ° C within 1 hour Added 0.9 molar equivalents of a sulfonyl chloride. The reaction mixture is stirred at room temperature for a further 60 min. Then is cooled to 0 ° C and piperidine in excess added. After a further 60 min stirring at 0 ° C. the reaction mixture is concentrated in vacuo to dryness.

Beispiel 4: Umwandlung von Fluoresceinen in symmetrische Rhodamine (Methode D)Example 4: Conversion of fluoresceins in symmetrical rhodamines (method D)

Zu einer 10% (w/v) Lösung von Fluorescein in Pyridin werden unter Rühren bei Raumtemperatur innerhalb 1 Stunde langsam 4 Moläquivalente eines Sulfonsäurechlorids gegeben. Es wird weitere 120 min bei Raumtemperatur weitergerührt. Dann wird die Reaktionsmischung im Vakuum zur Trockene eingeengt, um überschüssiges Sulfonsäurechlorid zu entfernen. Der Rückstand wird in Pyridin gelöst und nach Kühlen auf 0°C werden 6 Moläquivalente Amin in einer Portion zu gefügt und es wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird im Vakuum bis zur Trockene eingeengt.To a 10% (w / v) solution of fluorescein in pyridine, 4 molar equivalents of a sulfonyl chloride are added slowly with stirring at room temperature over 1 hour. It is stirred for a further 120 min at room temperature. Then the reaction mixture is concentrated to dryness in vacuo to remove excess sulfonic acid chloride. The residue is dissolved in pyridine and, after cooling to 0 ° C, 6 molar equivalents of amine added in one portion and it is stirred overnight at room temperature. The reaction mixture is concentrated in vacuo to dryness.

Beispiel 5: Umwandlung von Fluoresceinen in asymmetrische Rhodamine (Methode E).Example 5: Conversion of fluoresceins in asymmetric rhodamines (method E).

Zu einer 10% (w/v) Lösung von Fluorescein in Pyridin werden unter Rühren bei Raumtemperatur innerhalb 1 Stunde langsam 4 Moläquivalente eines Sulfonsäurechlorids gegeben. Es wird weitere 120 min bei Raumtemperatur weitergerührt. Dann wird die Reaktionsmischung im Vakuum zur Trockene eingeengt, um überschüssiges Sulfonsäurechlorid zu entfernen. Der Rückstand wird in Pyridin gelöst und eine 10%ige (w/v) Lösung von 1 Moläquivalent eines Amins in Ethanol wurde im Zeitraum von 60 Minuten unter Rühren bei 0° zugetropft. Die Mischung wird bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Danach werden 2,5 Moläquivalente eines anderen Amins zugegeben und weitere 2 Stunden gerührt.To of a 10% (w / v) solution of fluorescein in pyridine while stirring at room temperature within 1 hour slowly 4 molar equivalents of a sulfonic acid chloride given. It is stirred for a further 120 min at room temperature. Then the reaction mixture is concentrated to dryness in vacuo, to excess sulfonic acid chloride to remove. The residue is dissolved in pyridine and a 10% (w / v) solution of 1 molar equivalent an amine in ethanol was stirred for 60 minutes dropped at 0 °. The mixture is over at room temperature Night stirred. Thereafter, 2.5 molar equivalents added another amine and stirred for a further 2 hours.

Die Reaktionsmischung wird im Vakuum bis zur Trockene eingeengt.The Reaction mixture is concentrated in vacuo to dryness.

Beispiel 6: Fluoreszenzmarkierung von Peptiden auf der Festphase (Methode F)Example 6: Fluorescent labeling of Peptides on the solid phase (method F)

Oligopeptide werden nach Standardmethoden der Fmoc-Chemie in einer 2 ml Plastikspritze im 100 μmol Massstab entsprechend 175 mg Rink AM Harz (Firma Novabiochem) synthetisiert. Es wird eine Standardmethode angewendet, wie sie z. B. im Katalog der Firma Novabiochem zu finden ist. Zur N-terminalen Fluroeszenzmarkierung wird nach der Entfernung der letzten N-terminalen FMoc Schutzgruppe festes 3',6'-Dimesylfluoran (10 Moläquivalente) zum Harz in die Spritze gegeben und in 2 ml Pyridin gelöst. Die Spritze wird über Nacht geschüttelt. Der Fortgang der Reaktion lässt sich an einer orange-lila Färbung der Festphase erkennen. Die Reaktionsmischung wird von der Festphase entfernt, die Festphase mehrmals mit Dichlormethan gewaschen und dann getrocknet. Das Produkt wird mit einer Lösung von TFA in Dichlormethan (95 v/v) von der Festphase gespalten, filtriert und lyophilisiert.oligopeptides Be prepared by standard methods of Fmoc chemistry in a 2 ml plastic syringe in the 100 μmol scale corresponding to 175 mg Rink AM resin (company Novabiochem). A standard method is used as they are z. B. can be found in the catalog of the company Novabiochem. to N-terminal fluorescence labeling is after removal of the last N-terminal FMoc protecting group solid 3 ', 6'-dimesylfluoran (10 molar equivalents) are added to the resin in the syringe and dissolved in 2 ml of pyridine. The syringe is over Shaken tonight. The progress of the reaction leaves recognize by an orange-purple color of the solid phase. The reaction mixture is removed from the solid phase, the solid phase washed several times with dichloromethane and then dried. The product is treated with a solution of TFA in dichloromethane (95 v / v) cleaved from the solid phase, filtered and lyophilized.

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Claims (17)

Xanthenderivat nach Formel 1,
Figure 00170001
Formel 1 wobei R1, R2, R3 und R4 unabhängig voneinander aus Wasserstoff, substituiertem oder unsubstituiertem Alkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Aryl, substituiertem oder unsubstituiertem Heteroaryl, Alkoxy, Cyano, Hydroxy, Halogen, Isocyanat, Carboxy, Sulfonyl, oder Derivaten davon ausgewählt sind, R5, R6, R7, R8, R9 und R10 unabhängig voneinander aus Wasserstoff, substituiertem oder unsubstituiertem Alkyl, substituiertem oder unsubstituiertem Aryl, substituiertem oder unsubstituiertem Heteroaryl, Alkoxy, Cyano, Hydroxy, Halogen, Isocyanat, Carboxy, Sulfonyl, Polyethylen, Jeffamin oder Derivaten davon ausgewählt sind, X eine nukleofuge Abgangsgruppe, ausgewählt aus Sulfonat, Sulfat, Phosphat, und Phosphonat, oder ein Biomolekül ist, und Y eine nukleofuge Abgangsgruppe, ausgewählt aus Sulfonat, Sulfat, Phosphat, und Phosphonat, oder ein Jeffamin, ein Polyethylen, ein substituierter oder unsubstituierter Alkohol, ein substituiertes oder unsubstituiertes Amin, oder ein Biomolekül ist.Xanthene derivative according to formula 1,
Figure 00170001
Formula 1 wherein R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are independently selected from hydrogen, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted heteroaryl, alkoxy, cyano, hydroxy, halogen, isocyanate, carboxy, sulfonyl, or derivatives R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 and R 10 are independently selected from hydrogen, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted heteroaryl, alkoxy, cyano, hydroxy, halogen, isocyanate X is a nucleofugic leaving group selected from sulfonate, sulfate, phosphate, and phosphonate, or a biomolecule, and Y is a nucleofugic leaving group selected from sulfonate, sulfate, phosphate, and Phosphonate, or a Jeffamine, a polyethylene, a substituted or unsubstituted alcohol, a substituted or unsubstituted A min, or is a biomolecule. Xanthenderivat nach Anspruch 1, wobei mindestens einer der Reste R1 bis R10 eine aminreaktive Gruppe, ausgewählt aus einem Säureester, Isothiocanat, Pentafluorophenol, Säureanhydrid, Säurehalogenid oder N-Hydroxysuccinimidester ist.A xanthene derivative according to claim 1, wherein at least one of R 1 to R 10 is an amine reactive group selected from an acid ester, isothiocanate, pentafluorophenol, acid anhydride, acid halide or N-hydroxysuccinimide ester. Xanthenderivat nach Anspruch 1 oder 2, wobei X und/oder Y ein Sulfonat darstellt/darstellen.Xanthene derivative according to claim 1 or 2, wherein X and / or Y represents a sulfonate. Xanthenderivat nach Anspruch 3, wobei das Sulfonat ausgewählt ist oder die Sulfonate unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Methansulfonat, Ethansulfonat, 1-Propansulfonat, 2-Propansulfonat, 1-Butansulfonat, 2-Methyl-1-propansulfonat, Cyclopropansulfonat, Cyclobutansulfonat, Cyclopentansulfonat, Cyclohexansulfonat, 1-Octansulfonat, 1-Nonansulfonat, 1-Decansulfonat, 1-Dodecansulfonat, 1-Hexadecansulfonat, 1-Octadecansulfonat Chloromethansulfonat, 2-Chloroethanesulfonat, 3-Chloropropansulfonat, 1-Hexansulfonat, Trifluoromethansulfonat, 2,2,2-Trifluoroethansulfonat, 3,3,3-Trifluoropropan-1-sulfonat, Trichloromethansulfonat, Benzolsulfonat, p-Toluolsulfonat, o-Toluolsulfonat, Phenylmethansulfonat, 4-tert-Butylbenzolsulfonat, Pentamethylbenzolsulfonat, 2-Thiophenesulfonyl, 4-(Acetylamino benzolsulfonat, Benzolsulfonat, 4-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, Dansylsulfonat, Dabsylsulfonat, 9H-Fluoren-9-Sulfonat, 2-Oxo-2H-1-benzopyran-6-sulfonat, 1-Napthylsulfonat, 2-Napthylsulfonat, Anthracensulfonat, Biphenyl-4-sulfonat, 8-Chinolylsulfonat, 4-Acetylbenzolsulfonat, 2-Fluorobenzolsulfonat, 3-Fluorobenzolsulfonat, 4-Fluorobenzolsulfonat, 2-Cyanobenzolsulfonat, 3-Cyanobenzolsulfonat, 4-Cyanobenzolsulfonat, 2-Chlorobenzolsulfonat, 3-Chlorobenzolsulfonat, 4-Chlorobenzolsulfonat, 2-Bromobenzolsulfonat, 3-Bromobenzolsulfonat, 4-Bromobenzolsulfonat, 2-Iodobenzolsulfonat, 3-Iodobenzolsulfonat, 4-Iodobenzolsulfonat, (E)-2-Phenylethensulfonat, 4-Methylbenzolsulfonat, 4-Ethylbenzolsulfonat, 3,5-Dimethylbenzolsulfonat, 2-Methoxybenzolsulfonat, 3-Methoxybenzolsulfonat, 4-Methoxybenzolsulfonat, Fluoromethylbenzolsulfonat Chloromethylbenzolsulfonat Bromomethylbenzolsulfonat, Iodomethylbenzolsulfonat, Difluorobenzolsulfonat, Dichlorobenzolsulfonat, Dibromobenzolsulfonat, Dijodobenzolsulfonat, Chlorofluorobenzolsulfonat, Bromofluorobenzolsulfonat, Iodofluorobenzolsulfonat, Trifluorobenzolsulfonat, Tetrafluorobenzolsulfonat, Pentafluorobenzolsulfonat, 2-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, 3-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, 4-(Trifluoromethyl)benzolsulfonat, Chlorothiophenesulfonat, 4-Isocyanatobenzolsulfonat, 4-Propylbenzolsulfonat, 4-Isopropylbenzolsulfonat, 4- Fluoro-3-cyanobenzolsulfonat, 2-Nitrobenzolsulfonat, 3-Nitrobenzolsulfonat, 4-Nitrobenzolsulfonat, Dinitrobenzolsulfonat, Trinitrobenzolsulfonat, Methylnitrobenzolsulfonat, Methyldinitrobenzolsulfonat, Dimethoxybenzolsulfonat, (Difluoromethoxy)benzolsulfonat, (Triifluoromethoxy)benzolsulfonat, 2,4,6-Trimethylbenzolsulfonat, 4-(Phenylazo)benzolsulfonat und 4-Azidobenzolsulfonat.A xanthene derivative according to claim 3, wherein the sulfonate is selected or the sulfonates independently are selected from methanesulfonate, ethanesulfonate, 1-propanesulfonate, 2-propanesulfonate, 1-butanesulfonate, 2-methyl-1-propanesulfonate, cyclopropanesulfonate, Cyclobutanesulfonate, cyclopentanesulfonate, cyclohexanesulfonate, 1-octanesulfonate, 1-nonansulfonate, 1-decanesulfonate, 1-dodecane sulfonate, 1-hexadecanesulfonate, 1-octadecanesulfonate, chloromethanesulfonate, 2-chloroethanesulfonate, 3-chloropropanesulfonate, 1-hexanesulfonate, Trifluoromethanesulfonate, 2,2,2-trifluoroethanesulfonate, 3,3,3-trifluoropropane-1-sulfonate, Trichloromethanesulfonate, benzenesulfonate, p-toluenesulfonate, o-toluenesulfonate, Phenylmethanesulfonate, 4-tert-butylbenzenesulfonate, pentamethylbenzenesulfonate, 2-thiophenesulfonyl, 4- (acetylamino-benzenesulfonate, benzenesulfonate, 4- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, dansylsulfonate, dibasylsulfonate, 9H-fluorene-9-sulfonate, 2-oxo-2H-1-benzopyran-6-sulfonate, 1-naphthylsulfonate, 2-naphthylsulfonate, anthracenesulfonate, biphenyl-4-sulfonate, 8-quinolylsulfonate, 4-acetylbenzenesulfonate, 2-fluorobenzenesulfonate, 3-fluorobenzenesulfonate, 4-fluorobenzenesulfonate, 2-cyanobenzenesulfonate, 3-cyanobenzenesulfonate, 4-cyanobenzenesulfonate, 2-chlorobenzenesulfonate, 3-chlorobenzenesulfonate, 4-chlorobenzenesulfonate, 2-bromobenzenesulfonate, 3-bromobenzenesulfonate, 4-bromobenzenesulfonate, 2-iodobenzenesulfonate, 3-iodobenzenesulfonate, 4-iodobenzenesulfonate, (E) -2-phenylethensulfonate, 4-methylbenzenesulfonate, 4-ethylbenzenesulfonate, 3,5-dimethylbenzenesulfonate, 2-methoxybenzenesulfonate, 3-methoxybenzenesulfonate, 4-methoxybenzenesulfonate, Fluoromethylbenzenesulfonate chloromethylbenzenesulfonate bromomethylbenzenesulfonate, Iodomethylbenzenesulfonate, difluorobenzenesulfonate, dichlorobenzenesulfonate, dibromobenzenesulfonate, Diiodobenzenesulfonate, chlorofluorobenzenesulfonate, bromofluorobenzenesulfonate, iodofluorobenzenesulfonate, Trifluorobenzenesulfonate, tetrafluorobenzenesulfonate, pentafluorobenzenesulfonate, 2- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, 3- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, 4- (trifluoromethyl) benzenesulfonate, chlorothiophenesulfonate, 4-isocyanatobenzenesulfonate, 4-propylbenzenesulfonate, 4-isopropylbenzenesulfonate, 4-fluoro-3-cyanobenzenesulfonate, 2-nitrobenzenesulfonate, 3-nitrobenzenesulfonate, 4-nitrobenzenesulfonate, Dinitrobenzenesulfonate, trinitrobenzenesulfonate, methylnitrobenzenesulfonate, Methyldinitrobenzenesulfonate, dimethoxybenzenesulfonate, (difluoromethoxy) benzenesulfonate, (Trifluoromethoxy) benzenesulfonate, 2,4,6-trimethylbenzenesulfonate, 4- (phenylazo) benzenesulfonate and 4-azidobenzenesulfonate. Xanthenderivat nach Anspruch 3 oder 4, wobei das Sulfonat oder die Sulfonate unabhängig voneinander aus p-Toluolsulfonat und Methansulfonat ausgewählt ist/sind.A xanthene derivative according to claim 3 or 4, wherein said Sulfonate or the sulfonates independently p-toluenesulfonate and methanesulfonate is / are selected. Xanthenderivat nach Anspruch 1 oder 2, wobei X und/oder Y ein Biomolekül darstellt/darstellen.Xanthene derivative according to claim 1 or 2, wherein X and / or Y represents / represent a biomolecule. Xanthenderivat nach Anspruch 1 oder 2, wobei X ein Sulfonat und Y ein Biomolekül ist, oder wobei X ein Biomolekül und Y ein Sulfonat ist.A xanthene derivative according to claim 1 or 2, wherein X is a Sulfonate and Y is a biomolecule, or where X is a biomolecule and Y is a sulfonate. Xanthenderivat nach Anspruch 6 oder 7, wobei das Biomolekül aus einer Nukleinsäure, einem Oligonukleotid, einem Nukleotid, einem Nukleosid, einem Peptid oder einem Protein ausgewählt ist.Xanthene derivative according to claim 6 or 7, wherein the Biomolecule of a nucleic acid, an oligonucleotide, a nucleotide, a nucleoside, a peptide or a protein is selected. Verfahren zur Herstellung eines Xanthenderivats nach einem der Ansprüche 1 bis 8, umfassend die Schritte: a) Auflösen eines Fluroesceinderivates in Pyrimidin und Umsetzen mit einem Sulfonylchlorid, b) Evaporieren von Lösungsmittel c) Entfernung von residualem Sulfonylchlorid d) Isolierung und Aufreinigung des Xanthenderivats.A process for the preparation of a xanthene derivative according to any one of claims 1 to 8, comprising the steps of: a) dissolving a fluoroescein derivative in pyrimidine and reacting with a sulfonyl chloride, b) evaporating solvent c) removing residual sulfonyl chloride d) isolating and purifying the xanthene derivative. Verfahren zur Herstellung eines Xanthenderivats nach Anspruch 9, wobei das Verfahren weiter zwischen Schritt c) und d) den Schritt c') Umsetzung unter milden Bedingungen mit einem Äquivalent eines Nukleophils umfasst.Process for the preparation of a xanthene derivative according to claim 9, wherein the method further between step c) and d) the step c ') Reaction under mild conditions with one equivalent of a nucleophile includes. Verfahren zur Herstellung eines Xanthenderivats nach Anspruch 9, wobei das Verfahren weiter zwischen Schritt c) und d) den Schritt c') Umsetzung unter milden Bedingungen mit mindestens zwei Äquivalent eines Nukleophils umfasst.Process for the preparation of a xanthene derivative according to claim 9, wherein the method further between step c) and d) the step c ') Reaction under mild conditions with at least two equivalents of a nucleophile includes. Verfahren nach Anspruch 10 oder 11, wobei das Nukleophil ein Biomolekül ist.The method of claim 10 or 11, wherein the nucleophile is a biomolecule. Verwendung des Xanthenderivats nach einem der Ansprüche 1 bis 8 zum Nachweis eines Biomoleküls in einer Probe.Use of the xanthene derivative according to any of the claims 1 to 8 for the detection of a biomolecule in a sample. Verwendung nach Anspruch 13, wobei das Biomolekül ein Protein oder eine Nukleinsäure ist.Use according to claim 13, wherein the biomolecule is a protein or a nucleic acid. Xanthenkonjugat, erhalten durch Umsetzung eines Xanthenderivats nach einem der Ansprüche 1–4 mit einem Biomolekül in einem Verfahren nach Anspruch 12.Xanthene conjugate obtained by reaction of a Xanthene derivative according to one of claims 1-4 with a biomolecule in a method according to claim 12. Kit, umfassend das Xanthenderivat nach einem der Ansprüche 1–8 und gegebenenfalls einen oder mehrere Hilfsstoffe.A kit comprising the xanthene derivative according to any one of Claims 1-8 and optionally one or more Excipients. Kit nach Anspruch 16, wobei der eine oder die mehreren Hilfsstoff(e) aus Lösungsmittel, Puffer oder Salzen, Konservierungsstoffen und Stabilisatoren ausgewählt sind.The kit of claim 16, wherein the one or more Excipient (s) of solvent, buffer or salts, preservatives and stabilizers are selected.
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