DE102008001096A1

DE102008001096A1 - Signal sequences evaluating method for use during e.g. high performance liquid chromatography process, involves comparing characteristic of event with preset threshold, and combining signal sequences or their events by selection of events

Info

Publication number: DE102008001096A1
Application number: DE200810001096
Authority: DE
Inventors: Clemens Linowski
Original assignee: Agilent Technologies Inc
Current assignee: Agilent Technologies Inc
Priority date: 2008-04-09
Filing date: 2008-04-09
Publication date: 2008-09-11

Abstract

The method involves obtaining two signal sequences by different optical detections of a fluid separation process during which different fractions of fluid are separated. Each signal sequence has events which represent separate, different fractions of fluid. A characteristic for events i.e. peaks, of one of the signal sequences is determined. The determined characteristic is compared with a predetermined threshold value, and the two signal sequences or their events are combined by selection of the events based on the comparison result. Independent claims are also included for the following: (1) a software stored on a data medium for implementing a method for evaluating signal sequences (2) a device for evaluating two signal sequences.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Signalauswertung bei Fluid-Trennprozessen, wie insbesondere der Chromatografie oder der Elektrophorese.The The present invention relates to signal evaluation in fluid separation processes, such as in particular chromatography or electrophoresis.

In der Hochleistungsflüssigkeitschromatografie (HPLC) wird typischerweise eine Flüssigkeit (mobile Phase) bei einer sehr genau kontrollierten Flussrate (z. B. im Bereich von Mikro-Litern bis Milli-Litern pro Minute) und bei einem hohen Druck (typischerweise 20 bis 1000 bar und darüber hinausgehend, derzeit bis zu 2000 bar), bei dem die Kompressibilität der Flüssigkeit spürbar ist, durch eine stationäre Phase (z. B. eine chromatografische Säule) bewegt, um einzelne Komponenten einer in die mobile Phase eingebrachten Probenflüssigkeit voneinander zu trennen. Ein solches HPLC-System ist bekannt z. B. aus der EP 0309596 B1 derselben Anmelderin, Agilent Technologies, Inc., das eine dual-serielle Pumpvorrichtung aufweist.In high performance liquid chromatography (HPLC), typically, a liquid (mobile phase) is used at a very accurately controlled flow rate (e.g., in the range of micro liters to milli-liters per minute) and at high pressure (typically 20 to 1000 bar) moreover, currently up to 2000 bar), where the compressibility of the liquid is appreciable, is moved through a stationary phase (eg, a chromatographic column) to separate individual components of sample liquid introduced into the mobile phase. Such an HPLC system is known for. B. from the EP 0309596 B1 Applicant, Agilent Technologies, Inc., which has a dual-serial pumping device.

1 zeigt den prinzipiellen Aufbau eines HPLC-Systems 10, wie es im Stand der Technik bekannt ist und zum Beispiel zur Flüssigkeitschromatografie verwendet wird. Eine Pumpe 20 treibt eine mobile Phase durch ein Separationsgerät 30 (wie zum Beispiel eine chromatographische Säule), das eine stationäre Phase beinhaltet. Eine Probenaufgabeeinheit 40 ist zwischen der Pumpe 20 und dem Separationsgerät 30 angeordnet, um eine Probenflüssigkeit in die mobile Phase einzubringen. Die stationäre Phase des Separationsgerätes 30 ist dazu vorgesehen, Komponenten der Probenflüssigkeit zu separieren. Ein Detektor 50 detektiert separierte Komponenten der Probe, und ein Fraktionierungsgerät 60 kann dazu vorgesehen werden, separierte Komponenten der Probenflüssigkeit auszugeben, zum Beispiel in dafür vorgesehene Behälter oder einen Abfluss. 1 shows the basic structure of an HPLC system 10 as known in the art and used, for example, for liquid chromatography. A pump 20 drives a mobile phase through a separation device 30 (such as a chromatographic column) containing a stationary phase. A sample application unit 40 is between the pump 20 and the separation device 30 arranged to introduce a sample liquid in the mobile phase. The stationary phase of the separation device 30 is intended to separate components of the sample fluid. A detector 50 Detects separated components of the sample, and a fractionator 60 may be provided to dispense separated components of the sample liquid, for example, in designated containers or a drain.

Ein solches System zur Flüssigkeitschromatografie stellt insbesondere das IC-System der Agilent Serie 1200 der Anmelderin Agilent Technologies, Inc., dar, siehe www.agilent.de .Such a liquid chromatography system, in particular, is the Agilent 1200 Series IC system of the assignee Agilent Technologies, Inc., see www.agilent.de ,

Durch Detektionen eines erfolgten Fluid-Trennprozesses, bei dem unterschiedliche Fraktionen eines Fluids voneinander getrennt werden sollen, ergeben sich Signalfolgen (wie Chromatogramme), wobei jede Signalfolge Ereignisse (wie z. B. Peaks) aufweist, die solche getrennten, unterschiedliche Fraktionen eines Fluids repräsentieren können.By Detections of a successful fluid separation process in which different Fractions of a fluid to be separated Signal sequences (such as chromatograms), each sequence of events (such as peaks) that have such separate, distinct ones Can represent fractions of a fluid.

Aus der Verwendung mehrerer unterschiedlicher Detektionen gleichzeitig ergeben sich entsprechend mehrere unterschiedliche Signalfolgen, die aber auch gemeinsam verarbeitet werden können, um so z. B. eine Messdynamik zu erhöhen. Entsprechende Verfahren sind bekannt unter anderem aus US 5,214,593 A oder aus der Veröffentlichung „High-Resolution Chromatography of Complex Organic Mixtures", Robert L. Stevenson und Carl A. Burtis, Clinical Chemistry, Vol. 17, No. 8, 1971, S. 774 ff. From the use of several different detections at the same time result in accordance with several different signal sequences, but which can also be processed together to z. B. to increase a measurement dynamics. Corresponding methods are known inter alia US 5,214,593 A or from the publication "High-Resolution Chromatography of Complex Organic Mixtures", Robert L. Stevenson and Carl A. Burtis, Clinical Chemistry, Vol. 17, No. 8, 1971, p. 774 et seq.

OFFENBARUNGEPIPHANY

Es ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung die Auswertung mehrerer unterschiedlicher Signalfolgen weiter zu verbessern. Die Aufgabe wird gelöst durch die Merkmale der unabhängigen Ansprüche. Vorteilhafte Ausführungsformen sind in den abhängigen Ansprüchen angeführt.It Object of the present invention is the evaluation of several different Signal sequences continue to improve. The task is solved by the features of the independent claims. advantageous Embodiments are in the dependent claims cited.

Durch unterschiedliche Detektionen eines erfolgten Fluid-Trennprozesses, bei dem unterschiedliche Fraktionen eines Fluids voneinander getrennt werden sollen, wird entsprechend der Anzahl der unterschiedlichen Detektionen eine Vielzahl von (unterschiedlichen) Signalfolgen erhalten. Dabei weist jede Signalfolge Ereignisse auf, die solche getrennten, unterschiedlichen Fraktionen eines Fluids repräsentieren können. Ein Auswerten der Signalfolgen erfolgt nun durch Ermitteln einer Eigenschaft für Ereignisse in zumindest einer der beiden Signalfolgen und Vergleichen der ermittelten Eigenschaften mit einem vorgegebenen Kriterium. Die beiden Signalfolgen werden dann zusammengeführt durch Auswahl der Ereignisse aus den jeweiligen Signalfolgen basierend auf dem erfolgten Vergleich.By different detections of a successful fluid separation process, in which different fractions of a fluid separated should be according to the number of different Detections received a variety of (different) signal sequences. Each signal sequence has events that include such separate, represent different fractions of a fluid can. An evaluation of the signal sequences now takes place Determine a property for events in at least one of the two signal sequences and comparing the determined properties with a given criterion. The two signal sequences are then merged by selecting the events from the respective ones Signal sequences based on the comparison made.

Durch die Verwendung unterschiedlicher Detektionen und der Zusammenführung derer Signalfolgen lässt sich eine kombinierte und damit erhöhte Dynamik für die Messung erhalten. So können beispielsweise Messgrößen, die außerhalb der Empfindlichkeit eines Detektors liegen, durch die Messung mit dem anderen Detektor ersetzt werden. Die Erhöhung der Dynamik kann dabei beispielsweise im oberen Konzentrationsbereich, welcher z. B. durch Linearität des Systems oder durch einen Überlauf des Detektorsignals gegeben ist, und auch im unteren Konzentrationsbereich, der meist durch das Rauschen des Systems begrenzt ist, als auch in beiden Richtungen erfolgen.By the use of different detections and the merge whose signal sequences can be a combined and thus obtained increased dynamics for the measurement. So can for example, measured variables outside the sensitivity of a detector, by measuring with be replaced with the other detector. The increase in dynamics can, for example, in the upper concentration range, which z. B. by linearity of the system or by an overflow of the Detector signal is given, and also in the lower concentration range, which is mostly limited by the noise of the system, as well done in both directions.

Ein weiterer Vorteil unterschiedlicher Detektionen kann die bessere Zuordnung und eventuell Quantifizierung der Fraktionen des Fluids, z. B. bei unterschiedlicher Selektivität der Detektoren, sein.One Another advantage of different detections may be the better Assignment and possibly quantification of the fractions of the fluid, z. B. at different selectivity of the detectors, be.

Geeigneterweise erfolgen die Detektionen an unterschiedlichen Orten und/oder werden seriell oder parallel zueinander betrieben. Vorzugsweise werden optische Detektionen verwendet, wie z. B. eine Detektion der Absorption, des Brechungsindexes oder der Fluoreszenz des Fluids. Hierbei lassen sich unterschiedliche Detektionen durch unterschiedliche optische Pfadlängen durch das Fluid erreichen, die dann ein erfindungsgemäßes Auswerten der Signalfolgen erlauben. Für den Fall optischer Detektionen hat es sich gezeigt, dass vorzugsweise ähnliche optische Charakteristiken angewandt werden sollten, z. B. indem eine ähnliche optische Bandbreite und/oder eine gleiche oder zumindest dicht beabstandete zentrale Wellenlänge eines optischen Detektionssignales verwendet wird.Suitably, the detections are made at different locations and / or operated in series or in parallel. Preferably, optical detections are used, such as. Example, a detection of the absorption, the refractive index or the fluorescence of the fluid. In this case, different detections can be achieved by different optical path lengths through the fluid, which then permit an evaluation of the signal sequences according to the invention. In the case of optical detection It has been found that preferably similar optical characteristics should be used, e.g. By using a similar optical bandwidth and / or a same or at least closely spaced central wavelength of an optical detection signal.

Durch ein Skalieren der Ereignisse aufeinander entsprechend der unterschiedlichen Detektionen lässt sich die Genauigkeit der Zusammenführung erhöhen. So kann ein Skalieren z. B. auf die Signalstärke, Intensität und/oder einem zeitlichen Auftreten der Ereignisse erfolgen. Durch das Betrachten von Ereignissen im Gegensatz zu einem Datenpunkt-weisen Verfahren (wie z. B. in der angeführten US 5,214,593 A beschrieben ist) lässt sich die Sicherheit des Auswahlprozesses deutlich erhöhen, da beispielsweise ein gesamter Signalbereich, wie z. B. ein Peak, zu einem Ereignis zusammengefasst werden kann und so durch den erhöhten Informationsgehalt der Ereignisse (insbesondere gegenüber einzelnen Datenpunkten) eine erhöhte Sicherheit in der Zusammenführung der Signalfolgen erreicht werden kann.By scaling the events to each other according to the different detections, the accuracy of the merge can be increased. So scaling z. B. on the signal strength, intensity and / or a temporal occurrence of the events. By viewing events as opposed to a data point-wise method (such as in the cited US 5,214,593 A described), the security of the selection process can be significantly increased because, for example, an entire signal range such. B. a peak, can be summarized into an event and so by the increased information content of the events (in particular with respect to individual data points) increased security in the combination of the signal sequences can be achieved.

Als Fluid-Trennprozess eignen sich insbesondere chromatographische oder elektrophoretische Prozesse, wobei das Fluid insbesondere ein Gas oder eine Flüssigkeit ist.When Fluid separation process are particularly suitable chromatographic or electrophoretic Processes, wherein the fluid in particular a gas or a liquid is.

Die Signalfolgen aus den Detektionen stellen insbesondere ein zeitliches Auftreten von Intensitäten dar. Derartige zeitliche Intensitätssignale weisen typischerweise Peaks auf, also Intensitätsberge, denen dann ein entsprechender Zeitwert (wie z. B. eine in der Chromatografie übliche Retentionszeit) oder ein daraus abgeleiteter Wert (wie ein Retentionsvolumen) zugeordnet werden kann. Geeigneterweise stellen die Peaks dann die Ereignisse dar, wobei einzelne Peaks auch in Sub-Peaks aufgeteilt werden können, insbesondere wenn sich Peaks (gegenseitig) überlagern. Entsprechend können einem gemessenen Peak auch mehrere Ereignisse zugeordnet werden, also insbesondere wenn der Peak mehrere Sub-Peaks, also lokale Scheitelwerte, aufweist.The Signal sequences from the detections are particularly temporal Occurrence of intensities. Such temporal intensity signals typically have peaks, ie peaks of intensity, which then have a corresponding time value (such as, for example, one customary in chromatography Retention time) or a value derived therefrom (such as a retention volume) can be assigned. Suitably, the peaks then represent the Events, with individual peaks also divided into sub-peaks can be, especially when overlapping peaks (mutually). Accordingly, a measured peak can also have several Events are assigned, ie in particular if the peak has multiple sub-peaks, So local peaks, has.

Vorzugsweise wird für die Auswertung jedem Peak eine entsprechende Höhe und/oder Fläche zugeordnet und stellt die zu vergleichende Eigenschaft des Ereignisses, also des Peaks, dar. Dies entspricht auch dem in der Chromatografie oder Elektrophorese üblichen Vorgehen der Charakterisierung von Peaks.Preferably For the evaluation, each peak is given a corresponding height and / or surface assigned and represents the to be compared Property of the event, ie the peak. This also corresponds the usual in chromatography or electrophoresis Procedure of characterizing peaks.

In einer bevorzugten Ausführungsform werden für jede Signalfolge die einzelnen Peaks in einer jeweiligen Tabelle repräsentiert, wobei jeder Peak durch seinen Auftretungszeitpunkt (also insbesondere eine Retentionszeit und/oder ein Retentionsvolumen) und eine dem Peak zugeordnete Höhe und/oder Fläche charakterisiert wird. Bei zwei Detektionen werden die beiden daraus resultierenden Tabellen durch Auswahl der Peaks aus den beiden Tabellen zu einer Gesamttabelle zusammengeführt. Geeigneterweise erfolgt diese Zusammenführung indem aus einer der Tabellen solche Peaks genommen werde, deren Eigenschaft (also Höhe und/oder Fläche) kleiner als ein vorgegebener Schwellwert ist, während die Peaks, deren Eigenschaft größer oder gleich der Schwellwerte ist, durch entsprechende Peaks aus der anderen Tabelle ersetzt werden. Vorzugsweise werden dabei als entsprechende Peaks solche Peaks aufgefasst, die eine entsprechende Retentionszeit (oder ein entsprechendes Retentionsvolumen) aufweisen. Gegebenenfalls müssen die Peaks aufeinander skaliert werden. Dieses Auswahlverfahren aus den so genannten Peaktabellen erlaubt ein besonders einfaches, aber auch sicheres Zusammenführen der Detektionssignalfolgen, wobei die Dynamik der Messung gegenüber den Einzeldetektionen vergrößert wird.In A preferred embodiment will be for each Signal sequence represents the individual peaks in a respective table, wherein each peak by its occurrence time (ie in particular a retention time and / or a retention volume) and a Peak associated height and / or area characterized becomes. With two detections, the two will result Tables by selecting the peaks from the two tables into one Total table merged. Suitably done this merge by one of the tables such Peaks are taken whose property (ie height and / or Area) is less than a predetermined threshold while the peaks whose property is greater than or equal to the threshold is, by corresponding peaks from the other Table to be replaced. Preferably, as appropriate Peaks such peaks, having a corresponding retention time (or a corresponding retention volume). Possibly the peaks must be scaled to each other. This selection process from the so-called peak tables allows a particularly simple, but also safe merging of the detection signal sequences, the dynamics of the measurement compared to the single detections is enlarged.

In einer weiteren Ausführungsform wird jede Signalfolge jeweils mit einem vorgegebenen Kriterium verglichen, wobei entweder ein oder mehrere Kriterien verwendet werden können und diese Kriterien entweder für jede Signalfolge gleich oder unterschiedlich gewählt werden können.In In another embodiment, each signal sequence is respectively compared with a given criterion, either a or more criteria can be used and these Criteria either the same or different for each signal sequence can be chosen.

In Ausführungsformen der Erfindung wird diese als ein Verfahren angewandt. Entsprechend kann das erfindungsgemäße Verfahren durch eine Software gesteuert oder ausgeführt werden. Ferner kann die Erfindung auch durch eine entsprechende Vorrichtung ausgeführt werden, wobei eine entsprechende Datenverarbeitungsvorrichtung herangezogen werden kann.In Embodiments of the invention will this as a method applied. Accordingly, the inventive Method controlled or executed by a software become. Furthermore, the invention can also by a corresponding device be executed, wherein a corresponding data processing device can be used.

BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGENDESCRIPTION OF THE DRAWINGS

Die Erfindung wird im Folgenden weiter unter Heranziehung der Zeichnungen erläutert, wobei sich gleiche Referenzzeichen auf gleiche oder funktional gleiche oder ähnliche Merkmale beziehen.The The invention will be further described below with reference to the drawings explained, with the same reference characters to the same or functionally identical or similar features.

1 zeigt den prinzipiellen Aufbau eines HPLC-Systems 10 1 shows the basic structure of an HPLC system 10

2 und 3 illustrieren Ausführungsbeispiele gemäß der vorliegenden Erfindung für die gemeinsame Auswertung von Signalfolgen aus zwei Detektionsprozessen, jeweils mit anderen Skalierungsformen. 2 and 3 illustrate embodiments according to the present invention for the joint evaluation of signal sequences from two detection processes, each with different scaling forms.

In dem Beispiel nach 2 sollen die Signalfolgen sich aus einem gemäß 1 dargestellten HPLC-System 10 ergeben, wobei der Detektor 50 ein dualer Detektor sein soll, der mit unterschiedlichen Detektionsweisen die separierten Probenkomponenten detektiert. In dem Beispiel hier führt der duale Detektor 50 zwei optische Absorptionsdetektionen mit jeweils unterschiedlicher optischer Pfadlänge durch das Fluid durch. Geeigneterweise wird dabei die optische Pfadlänge um den Faktor 100 unterschiedlich gehalten, so dass beispielsweise die optische Pfadlänge in einem Detektor 0,1 cm und in dem anderen Detektor 10,0 cm ist. Entsprechend können auch andere optische Pfadlängen und/oder Pfadlängenverhältnisse gewählt werden, je nachdem welche Messdynamik erreicht werden soll.In the example below 2 should the signal sequences from a according 1 illustrated HPLC system 10 result, the detector 50 a dual detector is to be detected, which detects the separated sample components with different detection modes. In the example here, the dual detector performs 50 two optical absorption detections, each with a different optical path length the fluid through. Suitably, the optical path length is kept different by a factor of 100, so that, for example, the optical path length is 0.1 cm in one detector and 10.0 cm in the other detector. Accordingly, other optical path lengths and / or path length ratios can also be selected, depending on which measurement dynamic is to be achieved.

In dem Beispiel nach 2 liefert einer der Detektoren des dualen Detektors 50 ein Chromatogramm 210, während der anderer Detektor ein Chromatogramm 220 liefert. Aufgrund der hohen Dynamik, die hier betrachtet werden soll, wurde jedes der Chromatogramme in drei verschiedenen Signalbereichen dargestellt. Es ist klar, dass jede andere Darstellung ebenfalls gewählt werden kann, insbesondere die Darstellung in nur einem Signalbereich.In the example below 2 provides one of the detectors of the dual detector 50 a chromatogram 210 while the other detector is a chromatogram 220 supplies. Due to the high dynamics to be considered here, each of the chromatograms was displayed in three different signal ranges. It is clear that any other representation can also be chosen, in particular the representation in only one signal range.

Aus beiden Chromatogrammen 210 und 220 werden in bekannter Art und Weise Peaks ermittelt und diesen Peaks jeweils ein Wert für die Peakfläche (Area) und die Peakhöhe (Height) zugeordnet. Dies ist im Bereich der Chromatographie hinreichend bekannt und muss hier nicht näher detailliert werden. Aus dem Chromatogramm 210 ergibt sich somit die Tabelle 230 und aus dem Chromatogramm 220 die Tabelle 240, wobei dort der Peak mit der Retentionszeit 1,15 min durch sein geringes Signal/Rausch-Verhältnis nicht in die Tabelle 240 mit aufgenommen wird.From both chromatograms 210 and 220 Peaks are determined in a known manner and these peaks are each assigned a value for the area of the area and the height of the height. This is well known in the field of chromatography and need not be detailed here. From the chromatogram 210 This results in the table 230 and from the chromatogram 220 the table 240 , where the peak with the retention time of 1.15 min is not included in the table due to its low signal-to-noise ratio 240 is included.

Wie auch schon aus dem Chromatogramm 210 graphisch ersichtlich ist, ist die Höhe des Peaks mit der Retentionszeit (Ret-Time) 0,70 min höher als ein gegebener Schwellwert k. Dieser Schwellwert k kann z. B. durch den Detektor vorgegeben sein und repräsentiert dann das obere Detetektionslimit, welches meist durch die Linearität des Detektors bestimmt wird. Für das gemeinsame Auswerten der beiden Chromatogramme 210 und 220 werden gemäß eines bevorzugten Ausführungsbeispiels nun sämtliche Peaks der Tabelle 230 gewählt, die die Bedingung erfüllen, dass die Höhe (H) kleiner dem Schwellwert k ist. Dies sind in Tabelle 230 sämtliche Peaks außer dem Peak #2 mit der Retentionszeit Ret-Time = 0.70 min.As already from the chromatogram 210 graphically, the height of the peak with retention time (Ret-Time) is 0.70 min higher than a given threshold k. This threshold k can z. B. be predetermined by the detector and then represents the upper Detetektionslimit, which is usually determined by the linearity of the detector. For the joint evaluation of the two chromatograms 210 and 220 According to a preferred embodiment, now all the peaks of the table 230 which satisfy the condition that the height (H) is smaller than the threshold k. These are in table 230 all peaks except peak # 2 with retention time Ret-Time = 0.70 min.

Für diesen Peak #2 gibt es in der Tabelle 240 eine Entsprechung, wie durch den Pfeil 250 angedeutet. Durch einen entsprechenden Auswahlprozess, wird erkannt, dass die Peaks mit den Retentionszeiten 0,70 und 0,75 aus den Tabellen 230 und 240 einander entsprechen und so (im Rahmen der Sicherheit des Auswahlprozesses) von der gleichen Fraktion des Fluids abgeleitet sind. Dies ergibt sich bevorzugt aus gleichen oder zumindest sehr ähnlichen Retentionszeiten. Beispiele für den Auswahlprozess bzw. eine Umrechnung der Retentionszeiten von Tabelle 240 auf die von Tabelle 230 und umgekehrt werden später im Detail beschrieben.For this peak # 2, see the table 240 a correspondence, as by the arrow 250 indicated. Through an appropriate selection process, it is recognized that the peaks with the retention times 0.70 and 0.75 from the tables 230 and 240 correspond to each other and thus (within the security of the selection process) are derived from the same fraction of the fluid. This results preferably from the same or at least very similar retention times. Examples of the selection process or a conversion of the retention times of table 240 on the table 230 and vice versa will be described later in detail.

Dass sich Peakformen und Retentionszeiten in unterschiedlich gewonnenen Chromatogrammen nur im Ausnahmefall hundertprozentig decken, ist hinreichend bekannt und insbesondere auf die speziellen Detektionsweisen und -prozesse zurückzuführen. Im einfachsten Falle werden einfach solche Peaks als einander entsprechend gewertet, die gleiche oder dicht beabstandete Retentionszeiten aufweisen. Alternativ oder zusätzlich kann auch noch die Peakform als Kriterium für das einander Entsprechen herangezogen werden. Weitere Kriterien sind im Stand der Technik hinreichend bekannt und können hier entsprechend angewandt werden.That Peak shapes and retention times are obtained in different ways Cover chromatograms only in exceptional cases one hundred percent, is sufficient known and in particular to the special detection methods and processes. In the simplest case simply such peaks are considered as corresponding to each other, have the same or closely spaced retention times. Alternatively or additionally, the peak shape may also be used used as a criterion for matching each other become. Further criteria are sufficient in the prior art known and can be applied accordingly.

Die in 2 angeführten Peaktabellen 230 und 240 werden entsprechend dem erfolgten Vergleichen mit dem Schwellwert k miteinander kombiniert (siehe Pfeile 260A und 260B) und daraus resultiert eine gemeinsame Peaktabelle 260. Der Wert mit der Retentionszeit Ret-Time = 0,7 min aus der Tabelle 230 wurde dabei durch den entsprechenden Peak aus dem Chromatogramm 220 ersetzt, wobei der Peak #2 mit der Retentionszeit Ret-Time = 0,75 aus der Tabelle 240 entsprechend auf die Tabelle 230 skaliert wurde (siehe Pfeil 270), so dass die Peaks einander entsprechen.In the 2 listed peak tables 230 and 240 are combined according to the comparison made with the threshold k (see arrows 260A and 260B ) and this results in a common peak table 260 , The value with retention time Ret-Time = 0.7 min from the table 230 was replaced by the corresponding peak from the chromatogram 220 replaced, with the peak # 2 with the retention time Ret-Time = 0.75 from the table 240 according to the table 230 scaled (see arrow 270 ), so that the peaks correspond to each other.

Die Skalierung der Höhe (Height) und der Fläche (Area) erfolgt dabei in diesem Fall z. B. über die bekannten Pfadlängen der beiden Detektoren, sofern die optischen Eigenschaften, wie gewählte Wellenlänge und Bandbreite, hinreichend ähnlich oder identisch sind. Das direkt gemessene Signal mit der Einheit „AU" (Absorbance-Unit), welches in 3 zu sehen ist, wird dabei durch die bekannte Pfadlänge dividiert. Dies kann für das Signal selbst aber auch für die Höhe und für die Fläche geschehen. Dieses „normierte" Signal in „AU/cm" ist dann bereits richtig skaliert und kann sofort benutzt werden. Dabei kann die Skalierung entweder schon bei der Eingangsgröße durchgeführt werden, wie im Ausführungsbeispiel in 2 geschehen, oder die Skalierung erfolgt erst beim Erzeugen der gemeinsamen Peaktabelle 260 in 2, bzw. 360 in 3. Bei anderen Detektionsverfahren oder Kombination verschiedener Techniken kann die Skalierung der Höhe und Fläche eventuell aufwendiger sein. Es können auch Skalierungswerte über Standards, eventuell sogar für jeden Peak und Detektor, ermittelt werden. Verfahren dieser Art sind im Bereich der Flüssigkeitschromatographie hinreichend bekannt und können hier entsprechend angewandt werden.The scaling of the height (Height) and the area (Area) takes place in this case z. B. over the known path lengths of the two detectors, if the optical properties, such as selected wavelength and bandwidth, are sufficiently similar or identical. The directly measured signal with the unit "AU" (Absorbance-Unit), which is in 3 can be seen is divided by the known path length. This can be done for the signal itself but also for the height and for the surface. This "normalized" signal in "AU / cm" is then already correctly scaled and can be used immediately. The scaling can be performed either already at the input, as in the embodiment in 2 done, or the scaling occurs only when creating the common peak table 260 in 2 , respectively. 360 in 3 , In other detection methods or combinations of different techniques, scaling the height and area may be more expensive. Scaling values can also be determined via standards, possibly even for each peak and detector. Methods of this type are well known in the field of liquid chromatography and can be applied here accordingly.

Die Tabelle 260 stellt so das Ergebnis für den erfolgten Trennungsprozess dar. Falls gewünscht, können die Peaks gemäß Tabelle 260 wiederum in ein entsprechendes (hier nicht gezeigtes) gemeinsames Chromatogramm überführt werden, wobei darauf zu achten ist, dass für den Benutzer nicht der fälschliche Eindruck erzeugt wird, dass ein solches generiertes Chromatogramm auch tatsächlich gemessen wurde.The table 260 This is the result for the separation process that has taken place. If desired, the peaks can be determined according to Table 260 in turn be converted into a corresponding (not shown here) common chromatogram, where dar It should be noted that the user is not given the false impression that such a generated chromatogram has actually been measured.

Der Auswahlprozess sich entsprechender Peaks aus beiden Tabellen und die Umrechnung der Retentionszeiten soll im Folgenden beispielhaft dargestellt werden. Zunächst wird eine Retentionszeitverschiebung des Systems ermittelt, wie weiter untenstehend beschrieben. Mit der Retentionszeitverschiebung kann man die zu erwartende Retentionszeit des zweiten Detektors durch Addition der Retentionszeitverschiebung ermitteln. Im Beispiel der 2 und 3 ist die Retentionszeitverschiebung = 0,05 min. Somit ergibt sich aus Tabelle 230 für Peak #1 (mit Ret-Time = 0.40 min) eine zu erwartende Ret-Time von 0,45 min für einen Peak in Tabelle 240. Peak #1 in Tabelle 240 hat ebenfalls eine Ret-Time von 0,45 min. Entsprechend rechnet sich der Peak #4 mit Ret-Time = 1,30 min aus Tabelle 230 in eine Ret-Time = 1,35 min in Tabelle 240 um und entspricht Peak #3 (Ret-Time = 1,35 min) Tabelle 240, etc.The selection process corresponding peaks from both tables and the conversion of the retention times will be exemplified below. First, a retention time shift of the system is determined, as described below. With the retention time shift, one can determine the expected retention time of the second detector by adding the retention time shift. In the example of 2 and 3 is the retention time shift = 0.05 min. This results from the table 230 for Peak # 1 (with Ret-Time = 0.40 min) an expected Ret-Time of 0.45 min for a peak in the table 240 , Peak # 1 in table 240 also has a Ret-time of 0.45 min. Accordingly, peak # 4 pays off with Ret-Time = 1.30 min from the table 230 in a Ret-Time = 1.35 min in table 240 around and corresponds to peak # 3 (Ret-Time = 1.35 min) table 240 , Etc.

Der Auswahlprozess kann nun so erfolgen, dass die per Retentionszeitverschiebung umgerechneten Retentionszeiten aus der einen Tabelle mit denen der anderen Tabelle verglichen und dabei solche Peaks als einander entsprechend angesehen werden, die kleinste Abweichungen in den (aufeinander angepassten) Retentionszeiten haben. So wird beispielsweise als entsprechender Peak derjenige Peak in der Tabelle des zweiten Detektors gewählt, der einer per Retentionszeitverschiebung umgerechneten Retentionszeit aus der Tabelle des ersten Detektors am Nächsten liegt.Of the Selection process can now be done so that the retention time shift converted retention times from the one table with those of compared to other tables and thereby such peaks as mutually corresponding be considered the smallest deviations in the (matched) Retention times have. For example, as appropriate Peak the peak selected in the table of the second detector, the retention time converted by retention time shift is closest from the table of the first detector.

Alternativ oder zusätzlich kann zur Verfeinerung oder zur Verifikation des Verfahrens als Kriterium neben der Retentionszeit und auch die Peakform (z. B. Höhe oder Fläche) heranziehen. Zudem können auch die Daten von benachbarten Peaks, usw. mitberücksichtigt werden. Flächen und Höhen von korrespondierenden Peaks stehen typischerweise in bestimmten Verhältnissen zueinander, wobei Unschärfen und Unzulänglichkeiten des Systems (vor allem Linearität und Nachweisempfindlichkeit) mit einzukalkulieren sind. Weitere Kriterien sind im Stand der Technik hinreichend bekannt und können hier entsprechend angewandt werden.alternative or additionally, for refinement or verification of the method as a criterion in addition to the retention time and also the Use peak shape (eg height or area). In addition, the data of adjacent peaks, etc. can also be taken into account become. Surfaces and heights of corresponding Peaks are typically in certain proportions to each other, blurring and inadequacies of the system (especially linearity and detection sensitivity) to be included. Further criteria are in the state of the art well known and can be applied accordingly become.

Unterschiedliche Retentionszeiten in unterschiedlich gewonnenen Chromatogrammen sind im Wesentlichen durch die physikalischen Anordnungen der beiden Detektoren bedingt: entweder werden sie parallel (z. B. mittels eines Fluid-Teilers-Splitter) oder seriell (d. h. im Flusspfad hintereinander) zueinander gewonnen. Im ersteren Fall ist über den Fluid-Teiler, nachfolgenden zwischengeschalteten Volumina sowie der Geometrie der Elemente im Flusspfad eine Abschätzung der unterschiedlichen Retentionszeiten beider Detektoren sowie der Retentionszeitverschiebung möglich. Bei der (meist verwendeten) Hintereinanderschaltung von Detektoren kann eine Abschätzung der Retentionszeitverschiebung erfolgen durch das mittlere Volumen zwischen den Detektoren dividiert durch den Fluss (ΔRetentionszeit = ΔVolumen/Fluss). Bei konstantem Fluss, der zum überwiegenden Teil in der HPLC benutzt wird, ist bei beiden Anordnungen die Retentionszeitverschiebung konstant. Bei variablem Fluss kann diese in Abhängigkeit des Flusses über der Zeit kalkuliert werden.different Retention times in different chromatograms obtained are essentially by the physical arrangements of the two Detectors conditionally: either they are parallel (eg a fluid splitter splitter) or serial (i.e., one after the other in the flow path) won each other. In the former case is via the fluid divider, subsequent interposed volumes as well as the geometry of the elements in the Flow path an estimate of the different retention times of both Detectors and the retention time shift possible. In the (mostly used) series connection of detectors An estimate of the retention time shift can be made divided by the mean volume between the detectors the flow (ΔRetentionszeit = ΔVolumen / flow). At constant flow, which for the most part in the HPLC is used, the retention time shift is constant in both arrangements. With variable flow, this can overflow depending on the flow the time to be calculated.

Neben einer Abschätzung über die physikalische Anordnung kann die Retentionszeitverschiebung auch nachgemessen werden, indem ein bekannter Peak, welcher von beiden Detektoren gemessen wird, in der Peaktabelle identifiziert wird: dessen Differenz in der Retentionszeit ergibt die Retentionszeitverschiebung. Eine andere Möglichkeit ist eine Analyse der Peaktabellen: Peaks einer bestimmten Mindesthöhe in der Tabelle des einen Detektors (hier Tabelle 230) müssen auch in der Tabelle des zweiten Detektorkanals (hier Tabelle 240) auftauchen: hieraus kann eine mittlere Retentionszeitverschiebung abgeleitet werden.In addition to an estimate of the physical arrangement, the retention time shift can also be remeasured by identifying a known peak measured by both detectors in the peak table: its difference in retention time gives the retention time shift. Another possibility is an analysis of the peak tables: peaks of a certain minimum height in the table of the one detector (here table 230 ) must also be in the table of the second detector channel (here table 240 ): from this a mean retention time shift can be deduced.

Errechnete oder empirisch ermittelte Werte können immer auf Plausibilität über die gewählte Anordnung geprüft werden: im Allgemeinen wird die Retentionszeitverschiebung sehr klein sein. In vielen Fällen wird es sogar genügen von einer Retentionszeitverschiebung von Null auszugehen. Letztlich kann die absolute Genauigkeit der Retentionszeitverschiebung in solchen Anwendungen als unerheblich betrachtet werden, die nicht der qualitativen oder quantitativen Auswertung, sondern zum Auffinden der korrespondierenden Peaks beider Tabellen dienen.Calculated or empirically determined values can always be based on plausibility the chosen arrangement will be tested: in general the retention time shift will be very small. In many cases it will even be enough of a retention time shift starting from zero. Ultimately, the absolute accuracy of the Retention time shift is considered insignificant in such applications which are not qualitative or quantitative, but to find the corresponding peaks of both tables serve.

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Zitierte PatentliteraturCited patent literature

- EP 030959661 B1 [0002]
- US 5214593 A [0006, 0012]

Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature

- www.agilent.de [0004]
"High-Resolution Chromatography of Complex Organic Mixtures", Robert L. Stevenson and Carl A. Burtis, Clinical Chemistry, Vol. 17, No. 8, 1971, p. 774 et seq. [0006]

Claims

A method for evaluating two signal sequences, due to different detections of a successful fluid separation process, in which different fractions of a fluid separated should be, were received, with each signal sequence events which has such separate, different fractions of a Represent fluids, the method has on: Determining a property for events of at least one the two signal sequences, Compare the determined properties with a given criterion and together the two signal sequences or their events by selecting the Events based on the comparison made.

The method according to the preceding claim, wherein the detections take place at different locations.

The method according to one of the preceding claims, wherein the detections are serial or parallel to each other.

The method according to one of the preceding claims, wherein the detections are optical detections.

The method according to the preceding claim, wherein the optical detections by detecting at least one made of absorption, refractive index and fluorescence of the fluid.

The method according to the preceding claim, wherein the detections have a different optical path length through the fluid.

The method according to any one of the preceding claims 5-6, where the detections have similar optical characteristics preferably at least one of a similar one optical bandwidth and a central wavelength of an optical Detection signal.

The method according to one of the preceding claims, further comprising: Scale the events to each other according to the different detections.

The method according to the preceding claim, scaling the events scaling in at least one from signal strength, intensity and timing having.

The method according to one of the preceding claims, wherein the fluid separation process is a chromatographic or electrophoretic process having.

The method according to one of the preceding claims, wherein the fluid comprises a gas and / or a liquid.

The method according to one of the preceding claims, wherein the signal sequences each a temporal occurrence of represent the detected intensities.

The method according to one of the preceding claims, wherein the signal sequences respectively peaks and their respective associated Represent retention times and / or retention volumes.

The method according to the preceding claim, where the peaks are considered events.

The method of the preceding claim, wherein as a property for a given event, a peak assigned height and / or area is used.

The method according to any one of the preceding claims 13-15, where each signal sequence in each case by a table is represented, which for each peak a retention time and / or a retention volume and a property associated with the peak Height and / or surface has, and the merge The two tables are made by selecting the peaks whose property is less than a threshold, from one of the tables and replace the peaks whose property is greater than or equal to the threshold is, in this table by such peaks from the another table that has a corresponding retention time and / or have a corresponding retention volume.

The method according to the preceding claim, wherein the peak height and / or the peak area the is to be compared property.

The method according to one of the preceding claims, wherein determining a property for events for both signal sequences take place.

The method according to one of the preceding claims, wherein the merging of the two signal sequences takes place by selecting the events that meet the criterion from one of the bursts and replace the events that the Criterion not meet, in this signal sequence by appropriate Events from the other signal sequence.

The method according to one of the preceding claims, where the criterion is a threshold.

The method according to the preceding claim, wherein the combination of the two Signal sequences are performed by selecting the events that are smaller than the threshold value from one of the signal sequences and replacing the events which are greater than the threshold value in this signal sequence by corresponding events from the other signal sequence.

The method according to one of the preceding claims, wherein in each signal sequence, the determined properties with a other predetermined criterion.

The method according to one of the preceding claims, wherein the merger of the two signal sequences a combination of the events of both signal sequences he follows.

A software, preferably stored on one Disk to control or execute a Method according to one of the preceding claims, when this runs on a data processing system like a computer.

A device for evaluating two signal sequences, due to different detections of a successful fluid separation process, in which different fractions of a fluid separated should be, were received, with each signal sequence events which has such separate, different fractions of a Can represent fluids the device indicates a unit to Determine a property for Events of at least one of the two signal sequences, to compare the determined properties with a given criterion and together of the two signal sequences by selecting the events based on the comparison.