DE102007025425A1 - Method for eliminating disturbing fluorescence during fluorescence analysis of objects, involves illuminating object and detecting fluorescence image by illuminated object - Google Patents

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Abstract

The method involves illuminating an object and detecting a fluorescence image by the illuminated object. A local limited area of the object is shadowed by the illumination. The complete fluorescence image of the illuminated object with the area shadowed by the illumination is accepted. The shadowed area corresponding a noise fluorescence signal is obtained from fluorescence image. The noise fluorescence signal for each pixel of the fluorescence image of the object is subtracted from the complete fluorescence signal. An independent claim is also included for a device for eliminating disturbing fluorescence during the fluorescence analysis of objects, e.g. ocular fundus.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren und eine Vorrichtung zur Eliminierung von störender Fluoreszenz, die im optischen Strahlengang vor dem in seiner Fluoreszenz auszuwertenden Objekt liegt, bei der Auswertung, insbesondere Messung, der Fluoreszenz dieses Objekts. Für medizinische Anwendungen ist die Erfindung beispielsweise zur Fluoreszenzmessung oder -beobachtung des Augenhintergrundes interessant, welche insbesondere durch Störfluoreszenz der Augenlinse beeinträchtigt sein kann. Eine solche Störfluoreszenz entsteht insbesondere durch am Augehintergrund reflektiertes oder in der Augenlinse gestreutes Licht. Die Erfindung ist jedoch nicht auf ophthalmologische Anwendungen beschränkt. Ein weiteres Anwendungsgebiet ist z. B. die Fluoreszenzmikroskopie, bei der die Eigenfluoreszenz der Mikroskopoptik die Beobachtung schwacher Fluoreszenzen des Objektes stören kann.The The invention relates to a method and apparatus for elimination of disturbing fluorescence in the optical path in front of the object to be evaluated in its fluorescence, in which Evaluation, in particular measurement, of the fluorescence of this object. For medical applications, the invention is for example for fluorescence measurement or observation of the ocular fundus interesting, which in particular by Störfluoreszenz the eye lens may be impaired. Such interfering fluorescence originates in particular by reflected or on the awning background light scattered in the eye lens. However, the invention is not limited to ophthalmic applications. Another one Application is z. As fluorescence microscopy, in which the Autofluorescence of the microscope optics the observation of weak fluorescence of the object can interfere.

Das Prinzip der Aperturblendenteilung zur Beobachtung des Augenhintergrundes unter Ausschaltung der störenden Reflexe der vorderen Augenmedien ist seit der Einführung des Augenspiegels nach Helmholtz (1851) bekannt. Dieses Prinzip schließt auch Fluoreszenzen der Augenlinse von der Beobachtung aus, sofern diese direkt durch die Beleuchtung, beispielsweise eines Ophthalmoskops oder einer Funduskamera, entstehen. Da die Fluoreszenz der Linse jedoch viel stärker als die Eigenfluoreszenz des Augenhintergrundes sein kann, ist es möglich, dass die Fluoreszenz des Augenhintergrundes durch die Fluoreszenz der Linse, welche durch am Augehintergrund reflektiertes oder in der Linse gestreutes Licht angeregt wird, überstrahlt wird. Abhilfe kann hier die Verwendung einer Anregungswellenlänge schaffen, die keine Linsenfluoreszenz anregt (z. B. R. F. Spaide: Fundus autofluorescence and age-related macular degeneration, Ophthalmology 110(2), 2003, p. 392–9 ). Diese regt jedoch auch am Augenhintergrund nur bestimmte Fluorophore an und schränkt somit die mögliche diagnostische Aussagekraft der Fluoreszenzbeobachtung ein.The principle of the Aperturblendteilung for observation of the ocular fundus with elimination of disturbing reflexes of the anterior ocular media has been known since the introduction of the ophthalmoscope according to Helmholtz (1851). This principle also excludes fluorescence of the eye lens from the observation, provided that they arise directly through the illumination, for example an ophthalmoscope or a fundus camera. However, since the fluorescence of the lens may be much stronger than the ocular fundus autofluorescence, it is possible that the fluorescence of the ocular fundus will be outshined by the fluorescence of the lens, which is excited by reflected light or scattered in the lens. A remedy here can be the use of an excitation wavelength that does not excite lens fluorescence (eg. RF Spaide: Fundus autofluorescence and age-related macular degeneration, Ophthalmology 110 (2), 2003, p. 392-9 ). However, this stimulates only certain fluorophores on the fundus of the eye and thus limits the potential diagnostic value of fluorescence observation.

Eine andere Möglichkeit der Unterdrückung des Fluoreszenzlichtes besteht in der Anwendung der im Scanning Laser Ophthalmoskop (SLO) realisierten konfokalen Abbildung ( R. H. Webb and G. W. Hughes: Scanning loser ophthalmoscope, IEEE Trans Biomed Eng 28(7), 1981, p. 488–92 ). Hier unterdrückt eine vor dem Photoempfänger in einer zum zu untersuchenden Objekt (Augenhintergrund) konjugierten Ebene angebrachte Blende (einhole) Licht aus anderen Tiefen des Objektes, also auch der Augenlinse. Allerdings unterdrückt auch dieses Verfahren die Linsenfluoreszenz nicht vollständig ( D. Schweitzer, M. Hammer and F. Schweitzer: Limits of the confocal laser-scanning technique in measurements of time-resolved autofluorescence of the ocular fundus, Biomed Tech (Berl) 50(9), 2005, p. 263–7 ).Another possibility of suppressing the fluorescent light is the use of the confocal imaging realized in the scanning laser ophthalmoscope (SLO) ( RH Webb and GW Hughes: Scanning Loose Ophthalmoscope, IEEE Trans Biomed Eng 28 (7), 1981, p. 488-92 ). Here, a diaphragm mounted in front of the photoreceiver in a plane conjugate to the object to be examined (eye fundus) suppresses light from other depths of the object, thus also the eye lens. However, this method does not completely suppress the lens fluorescence ( D. Schweitzer, M. Hammer and F. Schweitzer: Limits of the confocal laser-scanning technique in measurements of time-resolved autofluorescence of the ocular fundus, Biomed Tech (Berl) 50 (9), 2005, p. 263-7 ).

Deshalb haben Schweitzer et al ein Verfahren und eine Vorrichtung vorgeschlagen, die es ermöglicht, die Fluoreszenz in verschiedenen Tiefenebenen zu messen und miteinander zu verrechnen ( DE 10 2004 042 197 A1 und DE 10 2004 042 198 A1 ).Therefore Schweitzer et al have proposed a method and a device which makes it possible to measure and compute the fluorescence in different depth levels ( DE 10 2004 042 197 A1 and DE 10 2004 042 198 A1 ).

Die beschriebenen technischen Lösungen sind jedoch sehr speziell und beschränkt auf die Anwendung in einem konfokalen Scanning Laser Ophthalmoskop (SLO). Das Verfahren nach DE 10 2004 042 197 A1 erfordert die Aufnahme von mindestens zwei Fluoreszenzbildern aus unterschiedlichen Objekttiefen, wozu mindestens eine Linse zusätzlich in den Strahlengang zu bringen oder in ihrer Position zu verändern ist. Mehrere Fluoreszenzaufnahmen bergen die Gefahr von Bewegungsartefakten sowie von unterschiedlichen Aufnahmebedingungen für die Fluoreszenzbilderfassung, welche die Auswertung verfälschen können.However, the technical solutions described are very specific and limited to use in a Confocal Scanning Laser Ophthalmoscope (SLO). The procedure according to DE 10 2004 042 197 A1 requires the inclusion of at least two fluorescence images from different object depths, for which purpose at least one lens is additionally to be brought into the beam path or to be changed in position. Several fluorescence images entail the risk of movement artifacts as well as of different recording conditions for fluorescence image acquisition, which can falsify the evaluation.

Die Vorrichtung nach DE 10 2004 042 198 A1 erfordert dagegen ein System von zueinander ausgerichteten Apertur- und Feldblenden, was ausschließlich in einer konfokalen Optik realisiert werden kann, wodurch eine universelle Anwendbarkeit ebenfalls nicht gegeben ist.The device after DE 10 2004 042 198 A1 on the other hand requires a system of aligned aperture and field apertures, which can be realized only in a confocal optics, whereby a universal applicability is also not given.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, bei beliebiger bildgebender Fluoreszenzauswertung von Objekten störende Fluoreszenz vollständig zu eliminieren, ohne die Fluoreszenzauswertung des zu untersuchenden Objekts zu beeinträchtigen.Of the Invention is based on the object, in any imaging Fluorescence analysis of objects interfering with fluorescence completely eliminate, without the fluorescence evaluation of the object to be examined.

Die Fluoreszenzauswertung (Messung oder Beobachtung) mit besagter Störfluoreszenzeliminierung soll mit beliebigen optischen Systemen, beispielsweise Funduskamera, Scanning Laser Ophthalmoskop, Mikroskop etc., anwendbar sowie mit lediglich einer einzigen Fluoreszenzaufnahme des zu untersuchenden Objekts möglich sein, um insbesondere eventuelle Bewegungsartefakte sowie unterschiedliche Aufnahmebedingungen für die Fluoreszenzbilderfassung auszuschließen.The Fluorescence evaluation (measurement or observation) with said interference fluorescence elimination should with any optical systems, such as fundus camera, Scanning laser ophthalmoscope, microscope, etc., applicable as well with only a single fluorescence image of the examined Object may be possible in particular any movement artifacts as well as different recording conditions for fluorescence imaging excluded.

Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe in einem beliebigen bildgebenden optischen System zur Fluoreszenzauswertung gelöst, indem bei der Beleuchtung des Objekts zu dessen Fluoreszenzanregung ein lokal begrenzter Bereich des Objekts mittels einer optischen Blende von dieser Beleuchtung abgeschattet wird und das gesamte Fluoreszenzbild des beleuchteten Objekts mit dem von der Beleuchtung abgeschatteten Bereich aufgenommen wird. Aus diesem Fluoreszenzbild wird ein dem abgeschatteten Bereich entsprechendes Störfluoreszenzsignal gewonnen, welches im Strahlengang vor dem Objekt entstehendes (störendes) Licht repräsentiert. Dieses Licht (das im Falle einer Fluoreszenzauswertung des Augenhintergrundes beispielsweise in der Augenlinse entsteht) wird in Intensität, in spektraler Zusammensetzung, im Zeitverhalten etc. separat erfasst und dient dazu, die Werte der Fluoreszenz außerhalb der lokalen Objektabschattung durch die Blende (die als Überlagerung der Fluoreszenz des Objektes mit der besagten Störung in Erscheinung treten) zu korrigieren. Hierzu wird das dem Bereich der lokalen Blendenabschattung des Objekts entsprechende Störfluoreszenzsignal, insbesondere als statistische Größe, beispielsweise als Mittelwert oder als Median, erfasst und für jeden Pixel des Fluoreszenzbildes des Objekts von dessen gesamtem Fluoreszenzsignal subtrahiert. Diese pixelweise Subtraktion zur Störfrequenzeliminierung kann rechentechnisch und damit relativ aufwandgering durchgeführt werden.According to the invention this object is achieved in any imaging optical system for fluorescence evaluation by the illumination of the object to its fluorescence excitation a localized area of the object is shaded by an optical aperture of this illumination and the entire fluorescence image of the illuminated object with that of the lighting shadowed area is recorded. From this fluorescence image, a Störfluoreszenzsignal corresponding to the shaded area is obtained, which in the beam path before the Object (disturbing) light represents. This light (which arises in the case of a fluorescence evaluation of the fundus, for example, in the eye lens) is detected separately in terms of intensity, spectral composition, time response, etc., and serves to determine the values of the fluorescence outside the local shadow of the object through the diaphragm (which is the superposition of the Fluorescence of the object with the said disorder appear). For this purpose, the Störfluoreszenzsignal corresponding to the region of the local aperture shading of the object, in particular as a statistical value, for example as an average or as a median, detected and subtracted for each pixel of the fluorescence image of the object of the total fluorescence signal. This pixel-wise subtraction for Störfrequenzeliminierung can be performed computationally and thus relatively aufwandgering.

Durch die Erfindung gelingt mit nur einer einzigen erforderlichen Fluoreszenzaufnahme vom Objekt eine vollständige und zuverlässige Eliminierung der besagten Störfluoreszenz. Für medizinische Anwendungen (z. B. zur Fluoreszenzmessung oder -beobachtung des Augenhintergrundes, welche insbesondere durch Störfluoreszenz der Augenlinse beeinträchtigt sein kann) ist dieser Vorteil von besonderem Interesse, da für die Fluoreszenzauswertung nicht mehrere Aufnahmen vom Objekt erstellt werden müssen, zumal in der Praxis Bewegungsartefakte sowie unterschiedliche Aufnahmebedingungen kaum auszuschließen sind.By The invention succeeds with only a single required fluorescence recording from the object a complete and reliable Elimination of said interfering fluorescence. For medical applications (eg for fluorescence measurement or observation of the fundus, which in particular by Stör fluorescence the eye lens may be affected) is this advantage Of particular interest, since not for the fluorescence evaluation several shots of the object must be created, especially in practice movement artifacts as well as different recording conditions can hardly be ruled out.

Vorteilhaft ist auch, dass die vorgeschlagene Störfluoreszenzeliminierung für beliebige bildgebende Verfahren und Systeme zur Fluoreszenzauswertung, gleich ob Funduskamera, Scanning Laser Ophthalmoskop, Mikroskop etc., und auch ohne jegliche Beschränkung des Wellenlängenbereiches bei der Fluoreszenzauswertung des Objekts anwendbar ist.Advantageous is also that the proposed Störfluoreszenzeliminierung for any imaging methods and systems for fluorescence evaluation, whether fundus camera, scanning laser ophthalmoscope, microscope etc., and also without any limitation of the wavelength range is applicable in the fluorescence evaluation of the object.

Die Erfindung soll nachstehend anhand eines in der Zeichnung dargestellten ophthalmologischen Ausführungsbeispiels näher erläutert werden.The Invention will be described below with reference to an illustrated in the drawing ophthalmic embodiment closer be explained.

Eine Lichtquelle 1 beleuchtet einen in seiner durch Beleuchtung zur Fluoreszenz angeregten Augenhintergrund 2 als auszuwertendes Objekt über ein für ophthalmologische Geräte an sich bekanntes optisches System, enthaltend einen Lochspiegel 3, zwei im Beleuchtungs- und im Beobachtungsstrahlengang angeordnete und aus Übersichtsgründen nicht in der Zeichnung dargestellte Aperturblenden, deren Bilder 4 in der Ebene einer Augenlinse 5 räumlich getrennt voneinander entstehen, sowie eine Objektivlinse 6.A light source 1 illuminates an eye fundus excited by fluorescence for illumination 2 as an object to be evaluated via an optical system known per se for ophthalmological devices, comprising a perforated mirror 3 , Two arranged in the illumination and in the observation beam path and not shown for reasons of clarity in the drawing aperture, whose images 4 in the plane of an eye lens 5 spatially separated from each other, as well as an objective lens 6 ,

Für die Fluoreszenzbeobachtung werden ein optischer Anregungsfilter 7 in den Beleuchtungsstrahlengang sowie ein die Anregungswellenlänge ausschließender Sperrfilter 8 in den Beobachtungsstrahlengang gebracht. Die Aperturblenden mit ihren Aperturblendenbildern 4 verhindern durch ihre Aufteilung, dass Reflexions- oder Fluoreszenzlicht aus der Augenlinse 5 zur Beobachtung gelangt. Jedoch kann am Augenhintergrund 2 reflektiertes Licht die Linsenfluoreszenz auch in dem Bereich der Augenlinse 5 anregen, durch den das zur Beobachtung gelangende Licht tritt. Diese überlagert somit in bekannter Weise die zu beobachtende Fluoreszenz des Augenhintergrundes 2.For fluorescence observation, an optical excitation filter 7 in the illumination beam path and a the excitation wavelength ausschließender blocking filter 8th brought into the observation beam path. The aperture stops with their aperture images 4 prevent by their division that reflection or fluorescent light from the eye lens 5 comes to observation. However, at the ocular fundus 2 reflected light, the lens fluorescence also in the area of the eye lens 5 stimulate, through which enters the light coming to the observation. This thus superimposed in a known manner the observed fluorescence of the fundus 2 ,

Erfindungsgemäß wird nun eine Blende 9 in den Beleuchtungsstrahlengang eingeführt. Diese Blende 9 befindet sich in einer zum Augenhintergrund 2 konjugierten Ebene, so dass sie ein scharf begrenztes Blendenbild 10 auf diesen wirft. Durch dieses Blendenbild 10 wird der Augenhintergrund 2 lokal begrenzt von der Beleuchtung der Lichtquelle 1 abgeschattet.According to the invention is now a diaphragm 9 introduced into the illumination beam path. This aperture 9 is located in a to the fundus 2 conjugate plane, giving it a sharply defined aperture image 10 throws at this. Through this aperture image 10 becomes the fundus 2 locally limited by the illumination of the light source 1 shadowed.

Wird nun in einer zum Objekt (Augenhintergrund 2) konjugierten Bildebene 11 beobachtet, so kann auf einem Abbild 12 des auf den Augenhintergrund 2 abgebildeten Blendenbildes 10 die Linsenfluoreszenz, d. h. die vor dem Augenhintergrund 2 entstehende Störfluoreszenz, gemessen werden. Zur Messung bzw. Beobachtung der integralen Fluoreszenz eignet sich beispielsweise ein in der Bildebene 11 vorgesehener an sich bekannter CCD-Bilddetektor 13.Now in one to the object (Augenhintergrund 2 ) conjugate image plane 11 observed, so on a picture 12 of the on the eye background 2 pictured aperture image 10 the lens fluorescence, ie the front of the eye 2 resulting Störfluoreszenz be measured. For measuring or observation of the integral fluorescence, for example, one in the image plane is suitable 11 provided per se known CCD image detector 13 ,

Um die Fluoreszenz spektral oder zeitlich aufzulösen, können auch entsprechende abbildende Spektrographen bzw. Fluorescence Lifetime Imaging(FLIM)-Ausrüstung zur Anwendung kommen (ebenfalls nicht dargestellt).Around the fluorescence spectrally or temporally dissolve, can Also corresponding imaging spectrographs or Fluorescence Lifetime Imaging (FLIM) equipment (also not shown).

Eine grobe spektrale Auflösung kann erzielt werden, indem statt eines CCD-Sensors eine Farb-CCD-Kamera verwendet wird.A coarse spectral resolution can be achieved by taking place a CCD sensor uses a color CCD camera.

Um dieses Abbild 12 herum, kann die Fluoreszenz des Augenhintergrundes 2 gemessen werden, die durch Beleuchtung des Augenhintergrundes 2 (außerhalb des die Beleuchtung abschattenden Blendenbildes 10 herum) entsteht und welcher die Störfluoreszenz, hervorgerufen durch die Augenlinse 5, überlagert ist.To this image 12 around, can the fluorescence of the fundus 2 be measured by lighting the fundus 2 (outside of the illumination shading aperture image 10 around) arises and which the Störfluoreszenz, caused by the eye lens 5 , is superimposed.

Zur Elimination dieser der Fluoreszenz des Augenhintergrundes 2 überlagerten Linsenfluoreszenz wird im Abbild 12 der Bildebene 11 ein Störfluoreszenzsignal als statische Größe, beispielsweise als Mittelwert oder als Median, ermittelt, welches vom gesamten Fluoreszenzbild in der Bildebene 11 pixelweise subtrahiert wird. Zur bildlichen Aufnahme der Fluoreszenz des Augenhintergrundes 2 in der Bildebene 11 sowie der im Bild 12 des Schattens (Blendenbild 10) detektierbaren Störfluoreszenz dient ein Bildsensor 13, beispielsweise eine CCD-Kamera. Die Fluoreszenzaufnahme sowie die Kompensation der Störfluoreszenz kann je nach Aufnahmentechnik integral oder in jedem spektralen oder zeitlichen Kanal geschehen. Dabei sollten nur Messwerte aus dem zentralen Kernschatten des Abbildes 12 verwendet werden um das von außeraxialen Strahlen auf den Rand des Abbildes 12 des Blendenbilds 10 abgebildetes Fluoreszenzlicht des Augenhintergrundes 2 von der Messung der Störfluoreszenz der Augenlinse 5 auszuschließen.To eliminate this the fluorescence of the fundus 2 superimposed lens fluorescence is in the image 12 the picture plane 11 a Stör fluorescence signal as a static quantity, for example as an average or as a median, determined which of the entire fluorescence image in the image plane 11 is subtracted pixel by pixel. For visual recording of the fluorescence of the fundus 2 in the picture plane 11 as well as the picture 12 of the shadow (Blen den 10 ) detectable Störfluoreszenz serves an image sensor 13 , For example, a CCD camera. Depending on the recording technique, the fluorescence recording and the compensation of the spurious fluorescence can take place integrally or in any spectral or temporal channel. Only measurements from the central shadow of the image should be used 12 to be used by off-axis rays on the edge of the image 12 of the aperture image 10 Shown fluorescence light of the fundus 2 from the measurement of the interfering fluorescence of the eye lens 5 excluded.

Die pixelweise Subtraktion des Störfluoreszenzsignals vom Fluoreszenzsignal des Augenhintergrundes 2 erfolgt durch nicht abgebildete Auswerte- und Rechentechnik, welche an den oder die Bildaufnahmeelemente in der Bildebene 11 angeschlossen werden.The pixel-by-pixel subtraction of the interfering fluorescence signal from the fluorescent signal of the fundus 2 is done by not shown evaluation and computing, which to the or the image pickup elements in the image plane 11 be connected.

Um die Lage des durch die Blende 9 von der Beleuchtung und Fluoreszenzanregung abgeschatteten lokal begrenzten Bereichs zu verändern (oder gänzlich auszublenden), ist es möglich, die Blende 9 bewegbar anzuordnen (nicht in der Zeichnung dargestellt), um die Blende 9 beispielsweise in den Beleuchtungsstrahlengang ein- und ausschwenken zu können.To the location of the through the aperture 9 From the illumination and fluorescence excitation shaded locally limited area to change (or hide completely), it is possible the aperture 9 movable to arrange (not shown in the drawing) to the aperture 9 For example, to be able to swing in and out of the illumination beam path.

11
Lichtquellelight source
22
AugenhintergrundFundus
33
Lochblendepinhole
44
AperturblendenbilderAperturblendenbilder
55
Augenlinseeye lens
66
Objektivlinseobjective lens
77
Anregungsfilterexcitation filter
88th
Sperrfiltercut filter
99
Blendecover
1010
Blendenbild der Blende 9 Aperture picture of the aperture 9
1111
Bildebene (zum Augenhintergrund 2 konjugiert)Image plane (to the ocular fundus 2 conjugated)
1212
Abbild des Blendenbildes 10 Image of the aperture image 10
1313
Bildsensor (z. B. CCD-Matrix)image sensor (eg CCD matrix)

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNGQUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Zitierte PatentliteraturCited patent literature

  • - DE 102004042197 A1 [0004, 0005] - DE 102004042197 A1 [0004, 0005]
  • - DE 102004042198 A1 [0004, 0006] - DE 102004042198 A1 [0004, 0006]

Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature

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  • - R. H. Webb and G. W. Hughes: Scanning loser ophthalmoscope, IEEE Trans Biomed Eng 28(7), 1981, p. 488–92 [0003] - RH Webb and GW Hughes: Scanning Loose Ophthalmoscope, IEEE Trans Biomed Eng 28 (7), 1981, p. 488-92 [0003]
  • - D. Schweitzer, M. Hammer and F. Schweitzer: Limits of the confocal laser-scanning technique in measurements of time-resolved autofluorescence of the ocular fundus, Biomed Tech (Berl) 50(9), 2005, p. 263–7 [0003] D. Schweitzer, M. Hammer and F. Schweitzer: Limits of the confocal laser-scanning technique in measurements of time-resolved autofluorescence of the ocular fundus, Biomed Tech (Berl) 50 (9), 2005, p. 263-7 [0003]

Claims (12)

Verfahren zur Eliminierung störender Fluoreszenz bei der Fluoreszenzauswertung von Objekten, beispielsweise des Augenhintergrundes, bei dem das Objekt beleuchtet und von dem beleuchteten Objekt ein Fluoreszenzbild erfasst wird, dadurch gekennzeichnet, dass ein lokal begrenzter Bereich des Objekts von dieser Beleuchtung abgeschattet wird, dass das gesamte Fluoreszenzbild des beleuchteten Objekts mit dem von der Beleuchtung abgeschatteten Bereich aufgenommen wird, dass aus diesem Fluoreszenzbild ein dem abgeschatteten Bereich entsprechendes Störfluoreszenzsignal gewonnen wird und dass das Störfluoreszenzsignal für jeden Pixel des Fluoreszenzbildes des Objekts von dessen gesamtem Fluoreszenzsignal subtrahiert wird.A method for eliminating spurious fluorescence in the fluorescence evaluation of objects, such as the ocular fundus, in which the object is illuminated and a fluorescence image is detected by the illuminated object, characterized in that a locally limited area of the object is shaded by this illumination that the entire fluorescence image of the illuminated object is recorded with the area shaded by the illumination, that from this fluorescence image a Störfluoreszenzsignal corresponding to the shaded area is obtained and that the Stör fluorescence signal for each pixel of the fluorescence image of the object is subtracted from the total fluorescence signal. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Störfluoreszenzsignal für den von der Beleuchtung abgeschatteten Bereich des Objekts als statistische Größe, beispielsweise als Mittelwert oder als Median, für die Subtraktion vom gesamten Fluoreszenzsignal des Objekts erfasst wird.Process according to claim 1, characterized characterized in that the Stör fluorescence signal for the from the lighting shaded area of the object as a statistical Size, for example as an average or as Median, for the subtraction of the total fluorescence signal of the object is detected. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Fluoreszenz bei der Erzeugung des Fluoreszenzbildes vom Objekt sowie bei der Erfassung des Störfluoreszenzsignals mittels bildgebender Spektroskopie spektral aufgelöst wird.Process according to claim 1, characterized characterized in that the fluorescence in the generation of the fluorescence image from the object as well as during the detection of the Störfluoreszenzsignals spectrally resolved by means of imaging spectroscopy. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Fluoreszenz bei der Erzeugung des Fluoreszenzbildes vom Objekt sowie bei der Erfassung des Störfluoreszenzsignals mittels einer Farbkamera in diskreten spektralen Kanälen aufgenommen wird.Process according to claim 1, characterized characterized in that the fluorescence in the generation of the fluorescence image from the object as well as during the detection of the Störfluoreszenzsignals by means of a color camera in discrete spectral channels is recorded. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Fluoreszenz durch Beobachtung deren zeitlichen Abklingverhaltens, insbesondere durch Fluoreszenz Lifetime Imaging, ausgewertet wird.Process according to claim 1, characterized characterized in that the fluorescence by observing their temporal Decay behavior, especially through fluorescence lifetime imaging, is evaluated. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zwecks Vermeidung von Bewegungsartefakten sowie unterschiedlichen Aufnahmebedingungen für die Fluoreszenz bilderfassung des Objekts lediglich eine einzige Fluoreszenzaufnahme unter Abschattung des lokal begrenzten Bereichs des zu untersuchenden Objekts, vorgenommen wird.Process according to claim 1, characterized characterized in that in order to avoid movement artifacts as well different recording conditions for the fluorescence imaging the object only a single fluorescence recording under shading of the localized area of the object to be examined becomes. Vorrichtung zur Eliminierung störender Fluoreszenz bei der Fluoreszenzauswertung von Objekten, beispielsweise des Augenhintergrundes, bei der in einem optischen System eine Lichtquelle zur Beleuchtung des Objekts vorgesehen ist, deren Licht über optische Elemente, wie Linsen und Spiegel, auf das Objekt abgebildet wird, sowie mit Mitteln zur Aufnahme eines durch die Beleuchtung entstehenden Fluoreszenzbildes vom Objekt, dadurch gekennzeichnet, dass im Beleuchtungsstrahlengang zur Beleuchtung des Objekts (2) eine Blende (9) in einer zum Objekt (2) konjugierten Ebene angeordnet ist, durch welche das Objekt (2) lokal begrenzt von der Beleuchtung (1) abgeschattet ist, und dass Mittel vorgesehen sind zur Messung (13) der im von der Beleuchtung (1) abgeschatteten Bereich des Objekts (2) auftretenden Störfluoreszenz sowie zu dessen pixelweisen Subtraktion von dem durch die Beleuchtung des Objekts (2) entstehenden gesamten Fluoreszenzbild.Device for eliminating spurious fluorescence in the fluorescence evaluation of objects, such as the ocular fundus, in which an optical system, a light source is provided for illuminating the object whose light is imaged on the object via optical elements, such as lenses and mirrors, as well as means for receiving a fluorescence image formed by the illumination from the object, characterized in that in the illumination beam path for illuminating the object ( 2 ) an aperture ( 9 ) in one to the object ( 2 ) is arranged conjugate plane through which the object ( 2 ) localized by the lighting ( 1 ) and that means are provided for measuring ( 13 ) in the of the lighting ( 1 ) shadowed area of the object ( 2 ) occurring Störfluoreszenz and for its pixel-wise subtraction of which by the illumination of the object ( 2 ) resulting entire fluorescence image. Vorrichtung gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Mittel zur Subtraktion der Störfluoreszenz vom gesamten Fluoreszenzbild rechentechnisch realisiert sind.Device according to claim 7, characterized characterized in that the means for subtracting the Störfluoreszenz the entire fluorescence image are computationally realized. Vorrichtung gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass als optisches System eine Funduskamera vorgesehen ist.Device according to claim 7, characterized in that a fundus camera is provided as the optical system is. Vorrichtung gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass als optisches System ein Scanning Laser Ophthalmoskop vorgesehen ist.Device according to claim 7, characterized in that the optical system is a scanning laser Ophthalmoscope is provided. Vorrichtung gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass als optisches System ein Mikroskop vorgesehen ist.Device according to claim 7, characterized in that as a visual system a microscope is provided. Vorrichtung gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Blende (9) zur lokal begrenzten Abschattung des Objekts (2) schwenkbar angeordnet ist.Device according to claim 7, characterized in that the diaphragm ( 9 ) for locally limited shading of the object ( 2 ) is pivotally mounted.
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