DE102004053164A1 - Coated microcarrier, useful for culturing animal, human or microbial cells, comprises particulate inorganic matrix coated with an epoxide-amine polymer - Google Patents

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Abstract

Coated microcarrier (A) comprises a particulate, inorganic, (non-)porous matrix material (I) consolidated into pieces and, deposited on the pieces, a coating of an epoxide-amine polymer (II) that is compatible with cell culture and stable towards hydrolysis. An independent claim is also included for preparing (A).

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft beschichtete Mikroträger, die insbesondere zur Kultivierung von tierischen, humanen oder mikrobiellen Zellen, vorwiegend für den Einsatz in mit Nährmedium gefüllten durchmischten Gefäßen, wie bspw. Festbettreaktorsystemen oder Wirbelbettreaktoren, Verwendung finden sowie ein Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung.The The present invention relates to coated microcarriers which in particular for the cultivation of animal, human or microbial Cells, predominantly for the use in with nutrient medium filled mixed vessels, like For example, fixed bed reactor systems or fluidized bed reactors, find use and a process for their preparation and their use.

Biotechnologische Produktionsverfahren, die auf der Kultivierung von tierischen, humanen oder mikrobiellen Zellen beruhen, werden zur Herstellung von Impfstoffen, Antikörpern, Pharmaka und anderen Wirkstoffen eingesetzt. Für die Herstellung dieser Produkte sind große Zellmengen erforderlich, die in geeigneten Reaktorsystemen herangezogen werden.biotechnology Production methods based on the cultivation of animal, human or microbial cells are used to produce vaccines, antibodies Pharmaceuticals and other agents used. For the production of these products are big Cell quantities required, which are used in suitable reactor systems become.

Die meisten der für die Produktion eingesetzten Zelllinien benötigen für ihr Wachstum und ihre Vermehrung eine geeignete Oberfläche, auf der sie adhärieren können. Die Verfügbarkeit geeigneter Carriermaterialien für die betreffenden biotechnologischen Verfahren ist daher von entscheidender Bedeutung für die Effizienz des jeweiligen Verfahrens, insbesondere für die Erzielung hoher Raum-Zeit-Ausbeuten.The most of the for The production cell lines used for their growth and their multiplication a suitable surface, on which they adhere can. The availability suitable carrier materials for the biotechnological processes concerned are therefore more crucial Meaning of the efficiency of the respective process, in particular for the achievement high space-time yields.

Ein geeignetes Carriermaterial für die Zellkultivierung muß zahlreiche Anforderungen erfüllen. Zunächst müssen solche Materialien biokompatibel sein, d. h. sie dürfen keine toxischen Effekte auf die zu kultivierenden Zellen ausüben und keine toxischen Stoffe in das Zellkulturmedium abgeben.One suitable carrier material for Cell cultivation must be numerous Meet requirements. First, such Be biocompatible materials, d. H. they must not have any toxic effects on the cells to be cultivated and no toxic substances into the cell culture medium.

Wünschenswert sind preiswerte, einfach herzustellende Träger, die eine hinreichende Anbindung der Zellen gewährleisten und gegebenenfalls auch eine leichte Wiederablösung der Zellen vom Träger erlauben.Desirable are inexpensive, easy to manufacture carrier, which is a sufficient Ensure connection of the cells and optionally also allow easy re-dissolution of the cells from the carrier.

Desweiteren müssen die Träger eine ausreichende mechanische Stabilität besitzen, um die adhärierenden Zellen gegen mechanische Belastungen, beispielsweise Scherbelastungen im Reaktorbett, zu schützen.Furthermore have to the carriers have sufficient mechanical stability to the adherent Cells against mechanical stress, such as shear loads in the reactor bed, protect.

Ferner müssen die Trägermaterialien über eine ausreichende chemische Stabilität verfügen, die es erlaubt, dass solche Materialien mit üblichen Sterilisationsverfahren, bspw. Dampfsterilisation, gegebenenfalls auch wiederholt sterilisiert werden können, ohne daß eine Beeinträchtigung der Carriereigenschaften eintritt.Further have to the support materials over a sufficient chemical stability feature, which allows such materials to be processed by conventional sterilization techniques, For example, steam sterilization, optionally also repeatedly sterilized can be without one impairment the Carriereigenschaften occurs.

Darüber hinaus müssen die Träger über den gesamten Kultivierungszeitraum hydrolysestabil sein.Furthermore have to the carriers over the whole Cultivation period to be stable to hydrolysis.

Größe und Gestalt der Trägermaterialien sollten so einstellbar sein, dass im Reaktor eine optimale Durchströmung des Festbetts mit dem jeweiligen Nährmedium gegeben ist.Size and shape the support materials should be adjustable so that in the reactor optimum flow of the Fixed bed with the respective nutrient medium given is.

Es ist bekannt, dass für eine Besiedlung mit Mikroorganismen oder Zellen runde oder annähernd runde Körper, die keine spitzen Kanten oder Ecken aufweisen und über eine poröse Oberfläche verfügen, vorteilhaft sind.It is known for a colonization with microorganisms or cells round or nearly round Body, which have no sharp edges or corners and over one porous surface feature, are advantageous.

Auf Grund des günstigen Oberflächen-Volumen-Verhältnisses ist die Verwendung von Mikroträger nach heutigem Erkenntnisstand besonders wünschenswert.On Reason of the cheap Surface to volume ratio is the use of microcarriers According to current knowledge, particularly desirable.

Derzeit werden je nach Anforderungen hinsichtlich zu immobilisierendem Zellmaterial und Reaktortyp unterschiedliche Arten von Mikroträgern eingesetzt.Currently Depending on the requirements regarding cell material to be immobilized and reactor type used different types of microcarriers.

Die Entwicklung von Mikroträgern begann bereits 1967, als durch van Wezel gezeigt wurde, dass Diethylaminoethyl (DEAE)-Dextran-Kugeln für die Züchtung adhärierender Zellen in Suspensionskultur geeignet sind (A. L. VAN WEZEL, Nature 216 (1967), 65). In der Folgezeit wurden sowohl kompakte poröse als auch nicht poröse Träger mit und ohne Beschichtung für die Kultivierung tierischer Zellen beschrieben, deren Form teilweise dem Reaktor angepasst ist.The Development of microcarriers started as early as 1967, when it was shown by van Wezel that diethylaminoethyl (DEAE) -Dextran balls for the breeding of adhering Cells in suspension culture are suitable (A.L. VAN WEZEL, Nature 216 (1967), 65). In the following years were both compact porous as well non-porous carrier with and without coating for described the cultivation of animal cells, their form partially adapted to the reactor.

Es sind auch Schichtaufbauten oder „Mattengeflechte" von Fasern (natürliche Fasern, Glas) mit organischem oder anorganischem Binder bekannt, die ebenfalls porös sein können. Dabei liegen die Porengrößen für die Zellimmobilisierung im Bereich von 250 μm oder darüber.It are also layered structures or "meshes" of fibers (natural fibers, Glass) with organic or inorganic binder known as well be porous can. Here are the pore sizes for cell immobilization in the range of 250 μm or above.

Bekannt sind poröse/nichtporöse Mikroträger auf organischer oder anorganischer Basis. So wurden als Matrixmaterialien natürliche Polymere (z. B. Dextran, Cellulose, Chitosan, Gelatine und deren Derivate), synthetische Polymere wie Polystyrol, High-Density (HD)-Polyethylen, Polyurethane, Polytetrafluorethylen, Polyamide (bspw. Nylon), Silicone, und davon abgeleitet Copolymere sowie anorganische Stoffe (bspw. Glas, Silikate, Aragonit, Oxide des Aluminium, Zirkonium oder Titan) vorgeschlagen.Known are porous / nonporous microcarriers on organic or inorganic base. So were as matrix materials natural polymers (eg dextran, cellulose, chitosan, gelatin and their derivatives), synthetic polymers such as polystyrene, high-density (HD) polyethylene, polyurethanes, Polytetrafluoroethylene, polyamides (e.g., nylon), silicones, and the like derived copolymers and inorganic substances (eg glass, silicates, Aragonite, oxides of aluminum, zirconium or titanium).

Kommerzielle Produkte sind gegenwärtig verfügbar insbesondere auf der Basis von Polystyrol (Hillex), HD-Polyethylen (Cytoline), Dextran (Cytodex 1), Cellulose (Cytopore) und Gelatine (Cytodex 3).commercial Products are currently available in particular based on polystyrene (Hillex), HD polyethylene (Cytoline), Dextran (Cytodex 1), Cellulose (Cytopore) and Gelatin (Cytodex 3).

Teilweise sind diese Materialien mit Beschichtungen zur Verbesserung der Zelladhäsion oder zum Aufbau chemischer Bindungen und der nachfolgenden Ankopplung biologisch aktiver Substanzen versehen. Als Beschichtungen sind u. a. Kollagen, rekombinantes Fibronektin oder DEAE-Dextran bekannt.In part, these are materials with coatings to improve cell adhesion or for establishing chemical bonds and the subsequent coupling of biologically active substances. Collagen, recombinant fibronectin or DEAE-dextran are known as coatings.

Problematisch ist dabei, dass diese Beschichtungsmaterialien in ihrer Herstellung kostenaufwendig sind und die Autoklavierbarkeit der auf diese Weise beschichteten Träger oft nicht gegeben ist.Problematic is there that these coating materials in their preparation costly and autoclavable in this way coated carrier often is not given.

Darüber hinaus besteht ein Problem bei der Beschichtung von Trägern mit Proteinen oder nicht vernetzten Dextranderivaten darin, dass die Beschichtung im Zellkulturmedium gelöst bzw. abgebaut werden kann und in der Regel eine kovalente Fixierung dieser Beschichtungsmaterialien auf dem Träger erforderlich ist.Furthermore there is a problem with the coating of carriers with proteins or non-crosslinked Dextran derivatives in that the coating in the cell culture medium solved and can be degraded and usually a covalent fixation of these coating materials is required on the carrier.

Der Einsatz von makroporösen Mikroträgern aus Glas ist seit einiger Zeit bekannt.Of the Use of macroporous Microcarriers Glass has been known for some time.

Auch die Herstellung solcher makroporöser Mikroträger aus Glas ist bspw. aus der Schrift DE 3305854 A1 bekannt.The production of such macroporous microcarriers made of glass is, for example, from the Scriptures DE 3305854 A1 known.

Die Herstellung solcher makroporöser Glasträger ist allerdings mit einem relativ hohen Aufwand verbunden.The Production of such macroporous glass slides However, this is associated with a relatively high cost.

Kompakte nicht beschichtete Glaskugeln sind auf Grund der mangelnden Zelladhäsionseigenschaften nicht als Träger geeignet. Es werden daher von den Fachkreisen derzeit vielfältige Anstrengungen unternommen, diese einfach zugänglichen Trägermaterialien durch geeignete Beschichtungen so zu modifizieren, dass sie als Träger für Zellkultivierungen eingesetzt werden können.compact uncoated glass beads are due to the lack of cell adhesion properties not as a carrier suitable. There are therefore currently a lot of efforts by the professional circles made this easily accessible support materials by suitable coatings to modify them as carrier for cell cultivations can be used.

Die Schrift WO 9310162 A1 offenbart bspw. durch Silanisierung mit amino- oder epoxyfunktionellen Silanen aktivierte Glasoberflächen.The Document WO 9310162 A1 discloses, for example, by silanization with amino or epoxy-functional silane activated glass surfaces.

Die Schrift EP 0303262 A1 offenbart beschichteten Glasoberflächen mit unvernetztem Dialkylaminoalkyldextran.The font EP 0303262 A1 discloses coated glass surfaces with uncrosslinked dialkylaminoalkyldextran.

Aus der Schrift US 6,277,628 ist bekannt, dass Glas mit Aminosilan oder Polylysin zur Erzeugung einer positiv geladenen Oberfläche beschichtet wird oder dass reaktive Gruppen eingebracht werden, um eine chemische Kopplung von Polynucleotidsequenzen zu ermöglichen.From the Scriptures US 6,277,628 It is known that glass is coated with aminosilane or polylysine to produce a positively charged surface or that reactive groups are introduced to allow chemical coupling of polynucleotide sequences.

Die Schrift DE 2839580 A1 offenbart Beschichtungen aus Polyisocyanaten und Silankopplern.The font DE 2839580 A1 discloses coatings of polyisocyanates and silane couplers.

Aus der Schrift WO 8702703 A1 ist bekannt, dass Schichten verschiedener Polymere mit Amino- oder Hydroxylgruppen auf gesinterten SiO2-Kugeln erzeugt werden.From document WO 8702703 A1 it is known that layers of different polymers with amino or hydroxyl groups are produced on sintered SiO 2 spheres.

Poröse Träger aus Oxiden des Silicium, Aluminium oder Zirkonium und deren Mischoxide, in situ nacheinander mit einem Polyamin und einem bifunktionellen Reagens (bspw. Glutaraldehyd oder Toluendiisocyanat) beschichtet, sind aus US 4141857 bekannt.Porous supports of oxides of silicon, aluminum or zirconium and their mixed oxides coated in situ sequentially with a polyamine and a bifunctional reagent (eg, glutaraldehyde or toluene diisocyanate) are off US 4141857 known.

Weitere Beschichtungen auf Glas durch das Aufbringen und das Vernetzen von Polyelektrolyten (wie bspw. Gelatine) sind aus US 4,287,305 bekannt.Other coatings on glass by the deposition and crosslinking of polyelectrolytes (such as gelatin) are out US 4,287,305 known.

Die Schrift EP 0079595 A1 offenbart Beschichtungen auf Glas durch das Aufbringen von Chitosan mit einem bifunktionellen Reagens (bspw. Glutaraldehyd).The font EP 0079595 A1 discloses coatings on glass by applying chitosan with a bifunctional reagent (eg, glutaraldehyde).

Trotz vielfältiger Bemühungen haben diese bekannten Methoden der Trägerbeschichtung nicht zur Bereitstellung einfach zugänglicher Trägermaterialien auf Basis anorganischer Matrixmaterialien geführt, mit denen in der Zellkultivierung hohe Produktausbeuten erzielt werden können.In spite of diverse efforts these known methods of carrier coating are not available easily accessible support materials based on inorganic matrix materials, with those in cell cultivation high product yields can be achieved.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es somit, einen mit einem einfachen und preiswerten Herstellungsverfahren fertigbaren Mikroträger in geeigneter Form und Abmessungen für die Kultivierung tierischer und humaner Zellen vorwiegend in mit Nährmedium gefüllten durchmischten Gefäßen, wie bspw. Festbett- oder Wirbelbettreaktoren, zur Verfügung zu stellen.task Thus, the present invention is one with a simple one and inexpensive manufacturing process microcarriers in suitable Shape and dimensions for the cultivation of animal and human cells predominantly in nutrient medium filled mixed vessels, such as. Fixed bed or fluidized bed reactors to provide.

Die anzugebenden Mikroträger sollen durch Autoklavieren sterilisierbar sein und in der Zellkultivierung hohe Raum-Zeit-Ausbeuten ermöglichen.The to be specified microcarrier should be sterilized by autoclaving and in cell culture allow high space-time yields.

Diese Aufgabe wird durch einen Mikroträger gemäß Anspruch 1 und einem Verfahren gemäß Anspruch 9 gelöst. Vorteilhafte Ausgestaltungen sind den Ansprüchern 2 bis 8 sowie 10 bis 20 entnehmbar.These The object is achieved by a microcarrier according to claim 1 and a method according to claim 9 solved. Advantageous embodiments are the claims 2 to 8 and 10 to 20 removable.

Das Wesen der Erfindung besteht darin, dass die erfindungsgemäßen Mikroträger aus einem mikropartikulären, vorzugsweise runden oder abgerundeten, porösen oder nicht porösen anorganischen Matrixmaterial bestehen, das zu einem Stück verfestigt und das mit einer dünnen Beschichtung aus einem vernetztem Epoxid-Amin-Polymer versehen ist, die hydrolysestabil ist.The Essence of the invention is that the microcarrier of the invention a microparticulate, preferably round or rounded, porous or non-porous inorganic matrix material exist, that to a piece solidified and that with a thin Coating of a crosslinked epoxy-amine polymer is provided, the hydrolysis stable.

Die Größe der Partikel liegt in einem Bereich von 100 bis 1000 μm, vorzugsweise in einem Bereich von 180 bis 590 μm.The Size of the particles is in a range of 100 to 1000 μm, preferably in a range of 180 to 590 μm.

Geeignete Matrixmaterialien für die erfindungsgemäßen Mikroträger sind beispielsweise Glas, Keramiken, Silicagel, Gips, Metalloxide, Metallsilicate oder Tricalciumphosphate.suitable Matrix materials for the microcarriers according to the invention are For example, glass, ceramics, silica gel, gypsum, metal oxides, metal silicates or tricalcium phosphates.

Besonders vorteilhaft als Trägermaterial ist ein Glas aus dem System SiO2-CaO-Na2O-MgO-K2O-Al2O3-Fe2O3.Particularly advantageous as support material is a glass from the system SiO 2 -CaO-Na 2 O-MgO-K 2 O-Al 2 O 3 -Fe 2 O 3 .

Es ist erfindungsgemäß, dass das als Beschichtung des anorganischen Matrixmaterials verwendete vernetzte Epoxid-Amin-Polymer aus einer oder mehreren Epoxidkomponenten und einem oder mehreren Aminkomponenten hergestellt wird.It is according to the invention that used as the coating of the inorganic matrix material crosslinked epoxy-amine polymer of one or more epoxy components and one or more amine components.

Es ist weiterhin erfindungsgemäß, dass als Epoxidkomponenten Verbindungen mit 2, 3 oder mehr Epoxidfunktionen sowie Mischungen solcher Verbindungen untereinander als auch Mischungen der genannten Verbindungen mit Verbindungen, die über eine Epoxidgruppe im Molekül verfügen, eingesetzt werden.It is further according to the invention, that as epoxy components compounds with 2, 3 or more epoxide functions and mixtures of such compounds with one another and mixtures of mentioned compounds with compounds which have an epoxide group in the molecule used become.

Die zur Herstellung des verwendeten Epoxid-Amin-Polymers eingesetzten Aminkomponenten können Verbindungen mit 2, 3 oder mehr Aminogruppen sein oder Mischungen aus solchen Verbindungen sowie Mischungen der genannten Verbindungen mit Verbindungen, die nur eine Aminogruppe enthalten.The used for the preparation of the epoxy-amine polymer used Amine components can Compounds having 2, 3 or more amino groups or mixtures from such compounds and mixtures of said compounds with Compounds containing only one amino group.

Sowohl die Epoxid- als auch die Aminokomponenten können darüber hinaus über weitere funktionelle Gruppen, beispielsweise Hydroxyl- oder Carboxylgruppen verfügen. In einer bevorzugten Ausführungsvariante der Erfindung kommt als Epoxidkomponente eine Diglycidyl-Verbindung, beispielsweise ein Diglycidylether des Bisphenol A und als Aminkomponente ein Bis(aminoalkyl)amin zur Anwendung.Either the epoxide as well as the amino components can moreover be further functional groups, for example, hydroxyl or Have carboxyl groups. In a preferred embodiment the invention comes as epoxide component a diglycidyl compound, for example, a diglycidyl ether of bisphenol A and as an amine component a bis (aminoalkyl) amine for use.

Bestandteil der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Aufbringung des Epoxid-Amin-Polymers auf das anorganische Matrixmaterial.component The invention further provides a method of applying the epoxy-amine polymer on the inorganic matrix material.

Das Epoxid-Amin-Polymer wird aufgebracht, indem das anorganische Matrixmaterial mit einem Gemisch aus Epoxid- und Aminkomponente und einem geeigneten Lösungsmittel, beispielsweise Aceton, benetzt wird und das gebildete Produkt – zur raschen Aushärtung der Beschichtung ohne Verklebung der einzelnen Partikel – unter schnellem Rühren in eine heiße Flüssigkeit, in der das Epoxid-Amin-Polymer nicht löslich ist, bspw. Heptan, eingebracht wird.The Epoxy-amine polymer is applied by the inorganic matrix material with a mixture of epoxy and amine component and a suitable Solvent, For example, acetone, wetted and the product formed - for rapid curing the coating without bonding the individual particles - under fast stirring in a hot Liquid, in which the epoxy-amine polymer is not soluble, for example. Heptane, introduced becomes.

Die Temperatur der heissen Flüssigkeit sollte dabei in einem Bereich liegen, der die Bildung des Epoxid-Amin-Polymers aus den verwendeten Epoxid- und Aminkomponenten bewirkt.The Temperature of the hot liquid should be within a range that limits the formation of the epoxy-amine polymer caused by the epoxy and amine components used.

Nach einer vorgegebenen Reaktionszeit von 1 bis 5 h wird der einstückige, beschichtete Träger von der Flüssigkeit abgetrennt und mit destilliertem Wasser gewaschen. Anschließend wird dieser mehrmals mit destilliertem Wasser ausgekocht.To a given reaction time of 1 to 5 h is the one-piece, coated Carrier of the liquid separated and washed with distilled water. Subsequently, will it was boiled several times with distilled water.

Die so erhaltenen beschichteten Mikroträger können durch Autoklavieren (20 min, 121 °C) sterilisiert werden.The The coated microcarriers thus obtained can be isolated by autoclaving (20 min, 121 ° C) be sterilized.

Das anorganische Matrixmaterial kann vor dem Aufbringen der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung durch bekannte Methoden, bspw. Auskochen mit Säure und/oder Beschichtung mit einem amino- oder epoxyfunktionellen Silan, aktiviert werden.The inorganic matrix material may be prior to applying the epoxy-amine polymer coating by known methods, for example. Auskochen with acid and / or coating with an amino- or epoxy-functional silane.

Die erfindungsgemäße Verwendung der Mikroträger erfolgt als Trägermaterial für die Kultivierung von tierischen, humanen oder mikrobiellen Zellen in einem dafür geeigneten Kultivierungsbehältnis, beispielsweise einem Festbett- oder Wirbelbettreaktor.The use according to the invention the microcarrier takes place as a carrier material for the Cultivation of animal, human or microbial cells in one for that suitable cultivation container, for example a fixed bed or fluidized bed reactor.

Dabei wird der Mikroträger in einem mit Nährmedium gefülltem Gefäß gelagert und das Nährmedium kann bei Bedarf in dem Gefäß durchmischt werden, so dass der Mikroträger im Medium schwebt.there becomes the microcarrier in one with nutrient medium filled Stored vessel and the nutrient medium can be mixed in the vessel if necessary, so that the microcarrier floating in the medium.

Dieses Schweben hat den Vorteil, dass sich auf der gesamten Oberfläche des Mikroträgers Zellen ansiedeln können, um einen geschlossenen Zellrasen zu bilden.This Floating has the advantage of being on the entire surface of the microcarrier Cells can settle, to form a closed cell lawn.

Die Erfindung wird nachstehend anhand der Ausführungsbeispiele und der Abbildung näher erläutert.The Invention will be described below with reference to the embodiments and the figure explained in more detail.

Dabei zeigt die 1: den zeitlichen Verlauf der Glukosekonzentration in 1 ml Nährmedium nach Zugabe von 5 × 105 MDBK-Zellen (Mardin-Darby Bovine Kidney-Zellen).It shows the 1 : the time course of the glucose concentration in 1 ml of nutrient medium after addition of 5 × 10 5 MDBK cells (Mardin-Darby Bovine Kidney cells).

Ausführungsbeispiel 1Embodiment 1

ZE-01ZE-01

100 g Glasperlen (180–300 μm Durchmesser) werden mit der Menge einer Epoxid-Härter-Lösungsmittel-Mischung (10,0 g Epilox A17-01, 1,5 g Bis-(3-aminopropyl)-amin und 16,2 g Aceton) versetzt, die erforderlich ist, um die gesamte Oberfläche der Perlen gerade benetzen zu können. Das benetzte Glasgranulat wird dann unter schnellem Rühren in 250 ml auf 90 °C erhitztes Heptan eingebracht. Es wird noch 2 h bei 90 °C gerührt. Die erhaltenen beschichteten Mikroträger werden abfiltriert, getrocknet und viermal mit je 400 ml destilliertem Wasser 20 min lang ausgekocht. Nach der Trocknung wird ein gut rieselfähiges Granulat erhalten.100 g glass beads (180-300 μm diameter) are mixed with the amount of an epoxy-hardener-solvent mixture (10.0 g Epilox A17-01, 1.5 g bis (3-aminopropyl) amine and 16.2 g Acetone), which is required to wet the entire surface of the beads just. The wetted glass granules are then introduced with rapid stirring into 250 ml of heptane heated to 90 ° C. The mixture is stirred for 2 h at 90 ° C. The resulting coated microcarriers are filtered off, dried and boiled four times with 400 ml of distilled water for 20 min. After drying, a good free-flowing granules were obtained.

Ausführungsbeispiel 2Embodiment 2

(ZE-02)(ZE-02)

100 g Glasperlen (250–420 μm Durchmesser) werden wie in Ausführungsbeispiel 1 beschrieben mit einer Epoxid-Amin-Polymerschicht versehen, ausgehärtet und nachbehandelt. Die für eine Benetzung der Glasperlen erforderliche Menge an Epoxid-Härter-Lösungsmittel-Mischung ist hier jedoch geringer als im Ausführungsbeispiel 1. Das hergestellte Granulat erweist sich als gut rieselfähig.100 g glass beads (250-420 μm diameter) be as in embodiment 1 described provided with an epoxy-amine polymer layer, cured and treated. The for wetting of the glass beads required amount of epoxy-hardener-solvent mixture is here but less than in the embodiment 1. The granules produced proves to be very free-flowing.

Ausführungsbeispiel 3Embodiment 3

ZE-03ZE-03

100 g Glasperlen (420–590 μm Durchmesser) werden wie in Beispiel 1 beschrieben mit einer Epoxid-Amin-Polymerschicht versehen, ausgehärtet und nachbehandelt. Es wird ein gut rieselfähiges Produkt erhalten.100 g glass beads (420-590 μm diameter) are prepared as described in Example 1 with an epoxy-amine polymer layer provided, cured and treated. It will receive a good flowable product.

Ausführungsbeispiel 4Embodiment 4

149,5 g einer Mischung aus 44,78 g Epilox A17-01, 6,75 g Bis-(3-aminopropyl)-amin, 12,52 g Polyethylenglycol 400 und 89,97 g Aceton werden zu 100 g Silicagel (60–200 mesh) gegeben und mit diesem vermengt. Das Produkt gibt man unter schnellem Rühren in 250 ml auf 90 °C erhitztes Heptan und läßt zwei Stunden bei dieser Temperatur weiterrühren. Das beschichtete Silicagel filtriert man ab, trocknet es und kocht dann viermal mit je 400 ml destilliertem Wasser 20 Minuten lang aus.149.5 g of a mixture of 44.78 g of Epilox A17-01, 6.75 g of bis (3-aminopropyl) amine, 12.52 g of polyethylene glycol 400 and 89.97 g of acetone become 100 g Silica gel (60-200 mesh) and mixed with this. The product is under fast stirring in 250 ml at 90 ° C heated heptane and leaves two Stir for hours at this temperature. The coated silica gel it is filtered off, dried and then boiled four times with 400 each ml of distilled water for 20 minutes.

Ausführungsbeispiel 5Embodiment 5

Die gemäß den Ausführungsbeispielen 1 bis 4 hergestellten Mikroträger werden in einem Autoklaven bei 121 °C und 2 bar Überdruck 30 min lang in Phosphatpuffer sterilisiert. Anschließend werden sie in sterile Zellkulturschalen überführt. Eine Marvin Darvin Bovine Kindey Zellline (MDBK) wird in Zellsuspension mit Hilfe von Trypsin (Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Deutschland) überführt. Nach den Mikroträgern wird 1 ml Nährmedium (Dulbecco Modified Eagle Medium, Invitrogen, Karlsruhe, Germany) mit 10% fetalem Kälberserum in jede Kulturschale gegeben. Zum Start der Kultivierung werden 5 × 105 Zellen pro Kulturschale ausgesät.The microcarriers prepared according to the embodiments 1 to 4 are sterilized in an autoclave at 121 ° C and 2 bar pressure for 30 min in phosphate buffer. They are then transferred to sterile cell culture dishes. A Marvin Darvin Bovine Kindey cell line (MDBK) is transferred to cell suspension using trypsin (Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Germany). After the microcarriers, 1 ml of nutrient medium (Dulbecco Modified Eagle Medium, Invitrogen, Karlsruhe, Germany) containing 10% fetal calf serum is added to each culture dish. To start the cultivation 5 × 10 5 cells per culture dish are seeded.

Als Vergleichsgruppe gegenüber den erfinderischen Mikroträgern wird handelsübliches Cytodex 1 (Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Schweden) verwendet.When Comparison group the inventive microcarriers becomes commercial Cytodex 1 (Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden).

Die MDBK-Zellen, die auf den erfindungsgemäßen Mikroträger kultiviert werden, zeigen im Vergleich zu Zellen, die auf handelsüblichen Cytodex 1 -Trägern kultiviert werden, hinsichtlich ihres Glukoseverbrauchs zu Beginn und am Ende der Kultivierungen gleichwertige Verbrauchswerte, d.h. die gleiche Stoffwechselaktivität (siehe 1).The MDBK cells cultured on the microcarrier according to the invention show equivalent consumption values, ie the same metabolic activity, in terms of their glucose consumption at the beginning and at the end of the culturing, compared to cells cultivated on commercially available Cytodex 1 carriers (see 1 ).

Nach erfolgter Kultivierung ist der erfindungsgemäße Träger mit einem gleichmäßigen Zellrasen bedeckt.To Successful cultivation is the carrier according to the invention with a uniform cell lawn covered.

Alle in der Beschreibung, den nachfolgenden Ansprüchen und der Zeichnung dargestellten Merkmale können sowohl einzeln als auch in beliebiger Kombination miteinander erfindungswesentlich sein.All in the description, the following claims and the drawing Features can both individually and in any combination with each other invention essential be.

Claims (20)

Beschichteter Mikroträger bestehend aus einem partikulären anorganischen porösen oder nicht-porösen Matrixmaterial, das zu einem Stück verfestigt ist, und einer Zellkultur-kompatiblen, hydrolysestabilen Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung, die diesem Stück aufgelagert ist.Coated microcarrier consisting of a particulate inorganic porous or non-porous Matrix material that solidifies to a piece and a cell culture-compatible, hydrolysis-stable epoxy-amine polymer coating, the this piece is superimposed. Beschichteter Mikroträger nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Partikel des Matrixmaterials sphärische oder zumindest abgerundete Gestalt aufweisen.Coated microcarrier according to claim 1, characterized in that the particles of the matrix material are spherical or have at least rounded shape. Beschichteter Mikroträger nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Partikel einen Durchmesser von 100 bis 1000 μm besitzen.Coated microcarrier according to claim 2, characterized characterized in that the particles have a diameter of 100 to 1000 μm have. Beschichteter Mikroträger nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Partikel einen Durchmesser von 180 bis 590 μm besitzen.Coated microcarrier according to claim 3, characterized characterized in that the particles have a diameter of 180 to 590 microns own. Beschichteter Mikroträger nach den Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Matrixmaterial aus einer oder mehreren Komponenten besteht, die der Substanzklasse der Gläser, Keramiken, Calciumphosphate, Calciumsulfate, Metalloxide oder Metallsilikate zuzuordnen ist.Coated microcarrier according to claims 1 to 4, characterized in that the matrix material of one or consists of several components belonging to the class of substances of glasses, ceramics, Calcium phosphates, calcium sulfates, metal oxides or metal silicates is to be assigned. Beschichteter Mikroträger nach Anspruch 5 dadurch gekennzeichnet, dass das Matrixmaterial vorwiegend aus einem Glas besteht.Coated microcarrier according to claim 5 characterized characterized in that the matrix material consists predominantly of a glass consists. Beschichteter Mikroträger nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass das Glas aus dem System SiO2-CaO-Na2O-MgO-K2O-Al2O3-Fe2O3 besteht.Coated microcarrier according to claim 6, characterized in that the glass consists of the system SiO 2 -CaO-Na 2 O-MgO-K 2 O-Al 2 O 3 -Fe 2 O 3 . Beschichteter Mikroträger nach den Ansprüchen 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung aus einer oder mehreren Epoxidkomponenten und einer oder mehreren Aminkomponenten gebildet wird.Coated microcarrier according to claims 1 to 7, characterized in that the epoxy-amine polymer coating from one or more epoxide components and one or more amine components is formed. Verfahren zur Herstellung des beschichteten Mikroträgers nach einem der voranstehenden Ansprüche umfassend folgende Schritte: – Benetzung des anorganischen Matrixmaterials mit einer Mischung aus Epoxid- und Aminkomponenten und einem konventionellen organischen Lösungsmittel – und anschließende Beschichtung durch Einbringen des benetzten Matrixmaterials in ein auf 80 bis 100 °C erhitztes Fällungsmittel zur Bildung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung.Process for the preparation of the coated microcarrier after one of the preceding claims comprising the following steps: - Wetting of the inorganic Matrix material with a mixture of epoxy and amine components and a conventional organic solvent - and subsequent coating by placing the wetted matrix material in an 80 to 100 ° C heated precipitant to form the epoxy-amine polymer coating. Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung verwendeten Epoxidkomponenten über 2, 3 oder mehr Epoxidgruppen pro Molekül verfügen und/oder daß diese Epoxidkomponenten im Gemisch mit Verbindungen, die nur über eine Epoxidgruppe verfügen, eingesetzt werden.A process for preparing coated microcarriers according to claim 9, characterized in that for the production of the epoxy-amine polymer coating used epoxy over Have 2, 3 or more epoxide groups per molecule and / or that these Epoxy components in admixture with compounds which have only one Have epoxy group, be used. Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung verwendeten Epoxidkomponenten Diglycidylether sind.A process for preparing coated microcarriers according to claim 9, characterized in that for the production of the epoxy-amine polymer coating used epoxide components are diglycidyl ethers. Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung verwendeten Aminkomponenten über 2, 3 oder mehr Aminogruppen pro Molekül verfügen und/oder dass diese Aminkomponenten im Gemisch mit Verbindungen, die nur über eine Aminogruppe verfügen, eingesetzt werden.A process for preparing coated microcarriers according to claim 9, characterized in that for the production of the epoxy-amine polymer coating used amine components over Have 2, 3 or more amino groups per molecule and / or that these amine components in admixture with compounds which have only one amino group used become. Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung verwendeten Aminkomponenten Substanzen aus der Klasse der Bis(aminoalkyl)amine sind.A process for preparing coated microcarriers according to claim 9, characterized in that for the production of the epoxy-amine polymer coating used amine components substances from the class of bis (aminoalkyl) amine are. Verfahren zur Herstellung beschichteter Mikroträger gemäß Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die zur Herstellung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung eingesetzten Epoxid- und Amin-Komponenten neben den jeweils vorhandenen Epoxid- bzw. Aminogruppen weitere funktionelle Gruppen im Molekül aufweisen.A process for preparing coated microcarriers according to claim 9, characterized in that for the production of the epoxy-amine polymer coating used epoxide and amine components in addition to the existing epoxide or amino groups have further functional groups in the molecule. Verfahren zur Herstellung der beschichteten Mikroträger nach den Ansprüchen 9 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass das anorganische Matrixmaterial vor der Beschichtung einer Oberflächenvorbehandlung unterzogen wird.Process for the preparation of coated microcarriers according to the claims 9 to 14, characterized in that the inorganic matrix material subjected to a surface pretreatment before coating becomes. Verfahren zur Herstellung der beschichteten Mikroträger nach den Ansprüchen 9 bis 15, dadurch gekennzeichnet, dass der Mischung aus Epoxid- und Aminkomponenten ein flüssiges Oligo- oder Polyethylenglycol zugesetzt wird.Process for the preparation of coated microcarriers according to the claims 9 to 15, characterized in that the mixture of epoxy and amine components a liquid Oligo- or polyethylene glycol is added. Verfahren zur Herstellung der beschichteten Mikroträger nach den Ansprüchen 9 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass als erhitztes Fällungsmittel zur Bildung der Epoxid-Amin-Polymer-Beschichtung ein organisches Lösungsmittel, in dem das Epoxid-Amin-Polymer nicht löslich ist, eingesetzt wird.Process for the preparation of coated microcarriers according to the claims 9 to 16, characterized in that as a heated precipitant an organic to form the epoxy-amine polymer coating Solvent, in which the epoxy-amine polymer is not soluble is used. Verwendung des beschichteten Mikroträgers nach einem der voranstehenden Ansprüche, als Trägermaterial für die Kultivierung von tierischen, humanen oder mikrobiellen Zellen.Use of the coated microcarrier after one of the preceding claims, as a carrier material for the Cultivation of animal, human or microbial cells. Verwendung des beschichteten Mikroträgers gemäß Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass er in einem mit Nährmedium gefülltem Gefäß gelagert wird.Use of the coated microcarrier according to claim 18, characterized in that it is in a nutrient medium filled Stored vessel becomes. Verwendung der beschichteten Mikroträger gemäß Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass das Nährmedium in dem Gefäß durchmischt wird, so dass der Mikroträger im Medium schwebt.Use of the coated microcarriers according to claim 19, characterized in that the nutrient medium mixed in the vessel so that the microcarrier floating in the medium.
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2467645A (en) * 2007-07-06 2010-08-11 Univ London Weighted cell beads for fluidised bed culture for bioartificial liver
DE202019001093U1 (en) 2019-03-06 2019-04-11 Zellwerk Gmbh Cell culture carrier for bioreactors
EP3705562A1 (en) 2019-03-06 2020-09-09 Zellwerk GmbH Cell culture carrier for bioreactors
WO2020177789A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 Zellwerk Gmbh Cell culture support for bioreactors
CN114058569A (en) * 2021-11-19 2022-02-18 博格隆(浙江)生物技术有限公司 Animal cell culture microcarrier and preparation method thereof
CN116373397A (en) * 2023-04-06 2023-07-04 信阳华谷新材料科技有限公司 Preparation method of corrosion-resistant composite film for power lithium battery

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD229140A1 (en) * 1984-08-30 1985-10-30 Univ Schiller Jena PROCESS FOR MODIFYING AND NETWORKING THEMOPLASTIC EPOXYED AMINE ADDITION POLYMERS

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD229140A1 (en) * 1984-08-30 1985-10-30 Univ Schiller Jena PROCESS FOR MODIFYING AND NETWORKING THEMOPLASTIC EPOXYED AMINE ADDITION POLYMERS

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Z. Chem., 22. Jg. 1982, Heft 5, S. 166-176 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2467645A (en) * 2007-07-06 2010-08-11 Univ London Weighted cell beads for fluidised bed culture for bioartificial liver
GB2467645B (en) * 2007-07-06 2011-12-21 Univ London A method of proliferating human hepatocyte cells
US9402944B2 (en) 2007-07-06 2016-08-02 University College London Multi-functional chamber for housing a biological component
DE202019001093U1 (en) 2019-03-06 2019-04-11 Zellwerk Gmbh Cell culture carrier for bioreactors
EP3705562A1 (en) 2019-03-06 2020-09-09 Zellwerk GmbH Cell culture carrier for bioreactors
WO2020177789A1 (en) 2019-03-06 2020-09-10 Zellwerk Gmbh Cell culture support for bioreactors
CN114058569A (en) * 2021-11-19 2022-02-18 博格隆(浙江)生物技术有限公司 Animal cell culture microcarrier and preparation method thereof
CN116373397A (en) * 2023-04-06 2023-07-04 信阳华谷新材料科技有限公司 Preparation method of corrosion-resistant composite film for power lithium battery
CN116373397B (en) * 2023-04-06 2023-10-03 信阳华谷新材料科技有限公司 Preparation method of corrosion-resistant composite film for power lithium battery

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