DE1001803C2

DE1001803C2 - Process for the production of a medicament with anti-tuberculosis activity

Info

Publication number: DE1001803C2
Application number: DE1954M0022648
Authority: DE
Inventors: Pietro Mascherpa
Original assignee: Pietro Mascherpa
Priority date: 1953-04-07
Filing date: 1954-04-05
Publication date: 1957-07-11
Also published as: DE1001803B; CH330661A; GB761163A

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLANDFEDERAL REPUBLIC OF GERMANY

DEUTSCHESGERMAN

PATENTAMTPATENT OFFICE

PATENTSCHRIFT 1 001PATENT 1 001 AN ME LDETAG:TO ME LETAG:

BEKANNTMACHUNG DER ANMELDUNG UND AUSGABE DER AUSLEGESCHRIFT:NOTICE THE REGISTRATION AND ISSUE OF EDITORIAL:

AUSGABE DER PATENTSCHRIFT:ISSUE OF PATENT LETTERING:

kl. 30 h 2/04kl. 30 h 2/04

INTERNAT. KL. A 61 k INTERNAT. KL. A 61 k

5. APRIL 1954 APRIL 5, 1954

31. JANUAR 1957 11. JULI1957JANUARY 31, 1957 JULY 11, 1957

stimmt Oberein mit auslegeschriftagrees with the exposition

1 001 803 (M 22648 IV a / 30 h) 1 001 803 (M 22648 IV a / 30 h)

Die Erfindung· betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels mit antituberkulöser Aktivität aus Rinderlunge, insbesondere aus den Lungen von Kälbern. · ·The invention relates to a method of production of a drug with antitubercular activity from bovine lung, especially from the lungs of Calves. · ·

Das Verfahren gemäß der Erfindung wird dadurch gekennzeichnet, daß man eine Rinderlunge zermahlt, mit einem inerten körnigen Material vermischt, die Mischung einer fraktionierten Pressung .bis zu einem Druck von etwa 500 at unterwirft, den zwischen 100 und 500 at anfallenden. Preßsaft sammelt, diesen in an sich bekannter Weise von Proteinen, Aminosäuren, kurzkettigen Peptiden sowie Pyrogenen befreit und auf .dem Wasserbad zur Trockne eindampft.The method according to the invention is thereby characterized in that one grinds a beef lung, mixed with an inert granular material, the The mixture is subjected to fractional pressing up to a pressure of about 500 at, which is between 100 and 500 at accruing. Collects pressed juice, this in a manner known per se of proteins, amino acids, Short-chain peptides and pyrogens and evaporated to dryness on the water bath.

Die so gewonnene Substanz ist wärmebeständig und wasserlöslich. Sie besitzt eine hohe bakterien statische und bakterizide Aktivität gegenüber Mycobacterium tuberculosis. Sie hat trotz eine® hohen therapeutischen Koeffizienten (Verhältnis zwischen therapeutischer Wirksamkeit und Toxizität) und einer deutlichen Heilwirkung auf Lungentuberkulose und wahrscheinlich auch andere Formen der Tuberkulose eine geringe Toxjzität und wird vom Menschen gut vertragen.The substance obtained in this way is heat-resistant and water-soluble. She has high levels of bacteria static and bactericidal activity against Mycobacterium tuberculosis. Despite a® high therapeutic coefficient (ratio between therapeutic effectiveness and toxicity) and one significant curative effects on pulmonary tuberculosis and probably other forms of tuberculosis has a low toxicity and is well tolerated by humans.

Aus der Arbeit von'B j örnesj ö (Acta Tubercul. scand. 27, 1952, S. 134 bis 139) ist es bekannt, daß man aus Rinderlungen einen Faktor mit wachstumhemmender Wirkung gegen Tbc-Bakterien gewinnen kann. .Der genannten Literaturstelle zufolge werden wäßrige Extrakte aus Rindarmilz, -niere,-leber,-lunge und -muskelfleisch hergestellt, die 5 Minuten bei 100° von Protein befreit und so weit konzentriert werden, daß 1 cm³ des Extraktes 4 g des frischen Organs entspricht. Die Extrakte sämtlicher Organe, insbesondere jener des. Muskelfleisches, sollen eine tuberkulostatische Wirkung in vitro besitzen. Die wirksame Substanz ist nur teilweise dialysierbar. Dieser Faktor soll eng mit einer tuberkulastatischen Substanz ver-, wandt sein, die im Urin gefunden wurde.It is known from the work of B jörnesj ö (Acta Tubercul. Scand. 27, 1952, pp. 134 to 139) that a factor with a growth-inhibiting effect against Tbc bacteria can be obtained from bovine lungs. According to the cited reference, aqueous extracts of beef spleen, kidney, liver, lung and muscle meat are prepared, which are freed from protein for 5 minutes at 100 ° and concentrated to such an extent that 1 cm ^{3 of} the extract 4 g of the fresh organ is equivalent to. The extracts of all organs, especially those of muscle meat, are said to have a tuberculostatic effect in vitro. The active substance is only partially dialyzable. This factor is believed to be closely related to a tuberculous substance found in urine.

Der von Bj örnesj ö gefundene Faktor ist jedoch nicht mit der gemäß vorliegender Erfindung gewonnenen Substanz identisch. Dies ergibt sich insofern, als die nach vorliegendem Verfahren · gewonnene Substanz praktisch ausschließlich in der Rinderlunge, nicht aber in der Rinderleber oder -niere vorkommt, während der von Bj örnesj ö untersuchte Faktor in 4-5 den genannten' Organen in gleichem Maße enthalten ist. Die in Rede stehende Substanz ist auch nicht im Blut enthalten-, während dar von Bj örnesj ö untersuchte Faktor auch im Blut vorkommt. Schließlich ist die anmeldungsgemäß gewonnene Substanz durch Collodium (Ultrafilter) filtrierbar·, während der Faktor von Bj örnesj ö durch Cellulosehydratfolien nur teilweise dialysierbar ist.However, the factor found by Björnesj ö is not the same as that obtained according to the present invention Substance identical. This arises insofar as that obtained according to the present method Substance practically exclusively in the beef lung, but not in the beef liver or kidney, while the factor examined by Björnesj ö in 4-5 the above-mentioned organs in equal measure is. The substance in question is also not contained in the blood, while the factor examined by Björnesjö also occurs in the blood. Finally is the substance obtained according to the application can be filtered through collodion (ultrafilter) while the factor Bj örnesj ö is only partially dialyzable through cellulose hydrate films.

Erfindungsgemäß gewinnt man-die neue Substanz Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels mit antituberkulöser AktivitätAccording to the invention, the new substance is obtained Process for the preparation of a medicament having anti-tuberculous activity

Patentiert für:Patented for:

Pietro Mascherpa, Pavia (Italien)Pietro Mascherpa, Pavia (Italy)

Beanspruchte Priorität:
Italien vom 7. April 1953Claimed priority:
Italy 7 April 1953

Pietro Mascherpa, Pavia (Italien),
ist als Erfinder genannt wordenPietro Mascherpa, Pavia (Italy),
has been named as the inventor

auf folgendem Wege: Als Ausgangsguit verwendet man vorzugsweise die Lunge von Kälbern, und zwar solchen, deren Gewicht etwa 100 bis 120 kg beträgt, was normalerweise einem Alter von 2 bis 3 Monaten entspricht. In der Leber, der Niere, der Prostata und dem Thymus ist die gesuchte Substanz in viel geringeren Mengen als in der Lunge enthalten. Die Lungen von PfeTden, Kaninchen, Schweinen und Hunden sind sowohl bei erwachsenen als auch bei jungen Tieren praktisch nicht verwendbar. Das gleiche trifft' auch für die Lunge von sehr. j ungen . Kälbern oder von erwachsenen Rindern zu.in the following way: Used as an exit guit preferably the lungs of calves, namely those whose weight is about 100 to 120 kg, which is usually 2 to 3 months of age. In the liver, kidney, and prostate the thymus contains the substance sought in much smaller quantities than the lungs. The lungs of pipes, rabbits, pigs, and dogs are found in both adult and young animals practically unusable. The same is true for the lungs of a lot. boys . Calves or from adult cattle too.

Die Lunge des frisch geschlachteten Tieres wird nun bei einem Druck von über 100 ät fraktioniert ausgepreßt. Man sammelt den Preßsaft, der zwischen 1OQ und 500 at anfällt, weil dieser am reichsten an der gesuchten aktiven Substanz ist. Der bei einem Druck bis 100 at anfallende Preßsaft wird verworfen. Es empfiehlt sich, die Lunge vor dem Auspressen nicht allzu fein" zu zerreiben und mit Sand zu vermischen. Der gewonnene Preß saft wird zentrifugiert, dekantiert und durch ein Ultrafilter filtriert; durch diese Ultrafiltration werden die Proteine (Antikörper, Globuline usw.) abgetrennt.The lungs of the freshly slaughtered animal are now fractionated at a pressure of over 100 ät squeezed. One collects the pressed juice, which accrues between 10Q and 500 at, because this is the richest the active substance sought is. The press juice obtained at a pressure of up to 100 atm is discarded. It is advisable not to "grind the lungs too finely" before squeezing them and mix them with sand. The pressed juice obtained is centrifuged, decanted and filtered through an ultrafilter; through this ultrafiltration the proteins (antibodies, globulins, etc.) are separated.

Die Abtrennung der Proteine kann auch erreicht werden, indem man den Preßsaft auf 50° erhitzt und die Proteine anschließend bei 80° koaguliert. Auch in' diesem Falle ist eine Filtration . durch eine besondere Membran (gealterte Collodiumacetatlösung, Cellophan usw.) notwendig, um die wirksame Substanz hinreichend zu. reinigen. Eine schnelle Koagulation bei 80° allein ergibt einen beträchtlichen Aktivitätsverlust. Die proteinfreie Flüssigkeit wird derThe separation of the proteins can also be achieved by heating the pressed juice to 50 ° and the proteins then coagulated at 80 °. In this case too, there is a filtration. by a special Membrane (aged collodion acetate solution, cellophane, etc.) necessary for the active substance sufficient to. to clean. Rapid coagulation at 80 ° alone results in a considerable loss of activity. The protein-free liquid becomes the

709 583/296709 583/296

3 43 4

selektiven Adsorption unterworfen (Permutit), um baren oder viel geringere Läsionen. Analoge Versuche Aminosäuren und kurzkettige Peptide zu entfernen. mit entsprechenden Ergebnissen wurden bei K'anin-Diese Behandlung kann auch mit Kationen- oder An- chen durchgeführt, die experimentiell mit Tuberkulose ionenaustauschharzen erfolgen. Die gewonnene Flüs- infiziert wurden. Bei Kaninchen ergibt der Blutspiegel sigkeit wird schließlich in an sich bekannter Weise 5 an aktiver Substanz eine charakteristische Kurve. Die von pyrogenen Verunreinigungen befreit und auf dem günstigen Werte bleiben während etwa 4 Stunden erWasser bad eingedampft. Der amorphe Rückstand löst halten.Subject to selective adsorption (permutite) to bare or much smaller lesions. Analog experiments Remove amino acids and short chain peptides. with corresponding results were at K'anin-These Treatment can also be carried out with cations or aneches, experimentally with tuberculosis ion exchange resins. The recovered fluids were infected. In rabbits, the blood level gives Finally, in a manner known per se, 5 of active substance becomes a characteristic curve. the Freed from pyrogenic impurities and remain at the favorable values for about 4 hours evaporated bath. The amorphous residue keeps dissolving.

sieh in vollständig destilliertem Wasser. Die Lösun- Eine subkutane Gabe von 0,10 g je Tag erweistsee in completely distilled water. The solution proves a subcutaneous dose of 0.10 g per day

gen kann man in Ampullen abfüllen, und im Autoklav sich als völlig verträglich. Die tägliche therapeutischegen can be filled into ampoules, and in the autoclave it is completely tolerable. The daily therapeutic

sterilisieren. io Dosis beträgt etwa 0,06 bis 1 g subkutan.sterilize. io dose is approximately 0.06 to 1 g subcutaneously.

Da die Substanz in wäßriger Lösung etwa binnen Die Heilwirkung wurde sowohl an den Formen derSince the substance in aqueous solution roughly inside the healing effect was both on the forms of the

10 Tagen ihre Aktivität weitgehend verliert, empfiehlt Lobites als auch an fibro-uloerativen Formen akuten10 days largely loses its activity, recommends Lobites as well as acute fibro-ulcerative forms

es sich, das pyrogenfrei gemachte Ultrafilträt ,zu lyo- wie chronischen, fiebrigen und progressiven Charak-the pyrogen-free ultrafiltrate, lyophilous as well as chronic, febrile and progressive characters

philisieren. .. ters mit typischem Röntgenbild beobachtet. Die Wir-philize. .. observed with a typical x-ray. The We-

Die gewonnene aktive Substanz besitzt eine Poly- 15 kung der subkutan in Form eimer Lösung appliziertenThe active substance obtained has a polishing effect that is applied subcutaneously in the form of a bucket of solution

peptidstruktur, hat ein Molgewicht von 1500 bis 2000 Substanz, die frisch aus der lyophilisierten Substanz ,peptide structure, has a molecular weight of 1500 to 2000 substance fresh from the lyophilized substance,

und die Summenformel C₆₀H₉₈O₃₂N₇S₄. Die Aktivi- hergestellt und 3mal täglich zu je 0,05 g appliziertand the empirical formula C ₆₀ H ₉₈ O ₃₂ N ₇ S ₄ . The Aktivi- prepared and applied 3 times a day at 0.05 g each

tat bleibt nach einer Behandlung mit Trypsin bei wird, zeigt sich an dem schnellen Verschwinden in-fact remains after treatment with trypsin, is shown by the rapid disappearance of

p_H 7,6 erhalten. Die chemischen sowie pharmakologi- filtrativer und exsudativer Erscheinungen (Infiltratio-p _H 7.6 obtained. The chemical as well as pharmacological, filtrative and exudative symptoms (infiltration-

schen Eigenschaften schließen eine Identität mit 20 nen und Exsudationen), an einer deutlichen Verän-properties close an identity with 20 nes and exudations), due to a clear change

Spermin aus, dem einige Autoren kürzlich eine tuber- derung des Röntgenbildes, an dem negativen BefundSpermin, whom some authors recently reported a change in the X-ray image, because of the negative finding

kulostatische Wirkung zuerkannten. des Auswurfs, an dem Abfall des Fiebers und an be-recognized culostatic effect. the sputum, the fall in fever and

Die gemäß der Erfindung hergestellte Substanz ist deutenden Veränderungen 'der allergischen· Reaktivität, ebensowenig mit dem Polypeptid identisch, welches Die Toxizität des aus der Lunge extrahierten aus dem Thymus von Kälbern extrahiert werden 25 Prinzips ist im normalen Tier sehr gering. Die durchkann, schnittliche letale Dosis bei der erwachsenen MausThe substance produced according to the invention is significant changes in the allergic reactivity, nor is it identical to the polypeptide which the toxicity of the extracted from the lungs can be extracted from the thymus of calves 25 principle is very low in normal animals. Who can through average lethal dose in the adult mouse

Die Substanz gemäß der Erfindung ist — unter beträgt 1500 mg/kg subkutan und 1000 mg/kg intraanderem — in Aceton löslich und hat ein viel niedri- venös injiziert. Die tägliche Dosis von 400 mg/kg geres Molekulargewicht und eine erheblich höhere subkutan wird selbst bei einer 15tägigen Behandlung Aktivität gegen Mycobacterium tuberculosis. 30 gut vertragen. Für die tuberkulöse Maus scheint dieThe substance according to the invention is - below is 1500 mg / kg subcutaneously and 1000 mg / kg intra-other - Soluble in acetone and has a much lower venous injection. The daily dose of 400 mg / kg lower molecular weight and a considerably higher subcutaneous one becomes even with a 15 day treatment Activity against Mycobacterium tuberculosis. 30 well tolerated. For the tubercular mouse it seems

Die erfindungsgemäß gewonnene Substanz besitzt Toxizität etwas höher zu liegen. Das Kaninchen ver-The substance obtained according to the invention has a slightly higher toxicity. The rabbit

überraschende biologische Eigenschaften, insbeson- trägt die Substanz in folgenden Mengen: 3 mg/kgsurprising biological properties, especially the substance in the following amounts: 3 mg / kg

dere eine bäkteriostatisehe und bakterizide Wirkung subkutan je Dosis werden über 1 Monat lang vertra-other bacteriostatic and bactericidal effects subcutaneously per dose are tolerated for over 1 month.

auf verschiedene Stämme von Mycobacterium tuber- gen und die akute Behandlung mit 30 mg/kg intra-to different strains of Mycobacterium tuber- gen and acute treatment with 30 mg / kg intra-

culosis. Die In-vitro-Wirkung auf einige Stämme 35 venös ebenfalle.culosis. The in vitro effect on some strains also venous.

von Mycobacterium tuberculosis (Myc. bovis, ranae, Beim Hund¹ verursacht die subkutane oder intra-Minetti, Ascoli H37, ATCC607 usw.), die auf venöse Injektion von 1mg/kg weder einen Herzfesten, und flüssigen Medien gezüchtet sind, hat sich und Kreislaufschaden noch irgendeine andere Störung als stärker oder als mindestens gleichwertig derjeni- der hauptsächlichen Organe. Die Toxizität. der aktiven gen von Isonicotinsäurehydrazid, etwa 5mal stärker, 40 Substanz ist etwa lOmal niedriger als diejenige als die von Streptomycin und etwa. lOOmal stärker als von Streptomycin und etwa 5ma.l niedriger als diedie von Paraaminosalicylsäure erwiesen, jenige: von Isonicotinsäurehydrazid.of Mycobacterium tuberculosis (Myc. bovis, ranae, In the dog ¹ caused the subcutaneous or intra-Minetti, Ascoli H37, ATCC607 etc.), which on venous injection of 1mg / kg neither a solid heart, and liquid media has grown, and Circulatory damage or any other disorder as stronger or at least equivalent to that of the main organs. The toxicity. the active gene of isonicotinic hydrazide, about 5 times more potent, 40 substance is about 10 times lower than that of streptomycin and about. 100 times stronger than that of streptomycin and about 5 times l lower than that of para-aminosalicylic acid, the one of isonicotinic acid hydrazide.

Es wurde weiter festgestellt, daß die erfindungs- Nachfolgend werden Beispiele für die GewinnungIt was further found that the following are examples of the extraction

gemäß aus der Lunge extrahierte Substanz auch der Substanz angegeben:according to substance extracted from the lungs also indicated the substance:

gegen streptomycinresistente Stämme aktiv ist, ebenso 45 . .is active against streptomycin-resistant strains, as is 45. .

wirkt sie auch auf Stämme, die gegen Isonicotin- Beispielit also acts on strains against isonicotin, for example

säurehydrazid resistent sind. Andererseits hat sich Als Ausgangsprodukt dienen die Lungen von.Käl-acid hydrazide resistant. On the other hand, the lungs of calves serve as the starting product.

keiner der bisher. untersuchten Stämme als resistent bern von etwa 120 kg Gewicht. Nachdem das Aus-none of those so far. examined strains as resistant amber of about 120 kg weight. After the exit

gegen die erfindungsgemäß gewonnene Substanz er- gangsgut in einer Fleischhackmaschine grob zerklei-against the substance obtained according to the invention, the goods are roughly ground in a meat chopping machine.

wiesen. . .. . 50 nert-ist, wird es im Gewichtsverhältnis 1:1 mit kal-grasslands. . ... 50 nert-is, it is in a weight ratio of 1: 1 with cal-

Die bäkteriostatisehe Wirkung scheint in beträcht- ziniertem Sand vermischt,. um die organischen Sub-The bacteriostatic effect seems to be mixed up in considerable sand. around the organic sub-

lichem Auemaß selektiv für Mycobacterium tuber- stanzen zu zerstören und zur Beseitigung der Salzeto a large extent selectively to destroy Mycobacterium tuber- ances and to remove the salts

culosis zu sein; auf andere Keime, wie z.B. Staphylo- und anderen Verunreinigungen gewaschen. Es liegtto be culosis; washed for other germs such as staph and other contaminants. It lies

coocus pyogenus aureus und, Escherie'hia coli und den nun in Form eines Granulats vor, das durch ein Siebcoocus pyogenus aureus and, Escherie'hia coli and now in the form of granules that pass through a sieve

Bazillus von Karbunkel, hat sie fast gar keine Wir- 55 von 20 Maschen je cm hindurchgeht. Man verwendetBacillus of carbuncle, it has almost no wires passing through it. 55 by 20 meshes per cm. One uses

kung. Der Mechanismus scheint antimetabolisch zu zur Auspressung eine Mikropresse, z.B. eine solchekung. The mechanism appears to be antimetabolic for squeezing out a micro press, e.g. one

sein, denn die Substanz übt unter bestimmten Bedin- nach der italienischen Patentschrift 482 465, erhöhtbecause the substance exercises under certain conditions - according to the Italian patent specification 482 465, increased

gungen eine Wirkung aus, welche die Atmung des den Druck allmählich und sammelt den bei 100 bisexerted an effect that the breathing of the pressure gradually accumulates and the at 100 to

M. tuberculosis (manometrisch nach Warburg ge- 500 at anfallenden Preßsaft. Aus 100 g Lunge erhältM. tuberculosis (Manometrically according to Warburg gives 500 at of press juice. Obtained from 100 g of lung

messen) hindert. 60 man 25g Preßsaft von folgenden Eigenseihaften:measure). 60 man 25g pressed juice of the following properties:

Die antituberkulöse Aktivität der aus der Lunge Aussehen ' trübeThe antitubercular activity of the lung appearance 'cloudy

gewonnenen Substanz wurde an Albinomäusen durch Farbe ■ · · ·; · · R^lieherauThe substance obtained was identified on albino mice by color ■ · · ·; · · R ^ lieherau

intranasale Einführung von 0,6 mg einer Kultur von Dichte "bei 15°' 1 07intranasal introduction of 0.6 mg of a culture of density 'at 15 °' 1 07

M. tuberculosis, bovinus B 17 und AscoHstamm ge- Rückstand bei lOÖ°," »/V '.'.'.'.'.'.'. 3,8 M. tuberculosis, bovinus B 17 and AscoHstamm ge residue at lOÖ °, "» / V '.'. '.'. '.'. '. 3.8

^ρΓ™· ' ,. ™ . , , j _rr „ . . _Λ ^6s Aschegehalt bei 400°, »/ο 1,01 ^ρΓ ™ · ',. ™. _,, j rr “. . _Λ ^6s ash content at 400 °, »/ ο 1.01

Während die Tuberkulose der Kontrolltiere m der Gesamtstickstofr, <Vo 0,381While the tuberculosis of the control animals was the total nitrogen, <Vo 0.381

Lunge lokalisiert ist und eine starke Entwicklung erkennen läßt,- zeigen die mit der gemäß der· Erfindung . Der Preßsaft wird mit 3500 U/min zentrifugiert, gewonnenen Substanz behandelten Tiere bei makro- dekantiert und der Ultrafiltration durch lOVoiges skopischer wie histologischer Prüfung keine erkenn- 7° Collodiumacetat unterworfen. Aus 100 g Lunge erhältLung is localized and shows a strong development, - show those with the according to the invention. The pressed juice is centrifuged at 3500 rev / min, the substance obtained decanted animals treated with macro- and subjected to ultrafiltration through lOVoiges scopic as histological examination no recognizable 7 ° Collodiumacetat. Obtained from 100 g of lung

ίοίο

man 22 g einer Flüssigkeit von folgenden Eigenschaften :22 g of a liquid with the following properties:

Farbe StrohgelbColor straw yellow

Aussehen klarAppearance clear

Dichte bei, 15° 1,04Density at .15 ° 1.04

durchschnittlicheaverage

Rückstandsmenge bei 100°, Vo . 0,580Residue amount at 100 °, Vo. 0.580

organische Substanzen, % 0,460organic substances,% 0.460

Aschegehalt bei 400°, % .0,120Ash content at 400 °,% .0.120

Gesamtstickstoff, Vo 0,079Total nitrogen, Vo 0.079

Aminstickstoff, °/o 0,048Amine nitrogen,% 0.048

Polypeptidstickstoff, Vo ... 0,027Polypeptide nitrogen, Vo ... 0.027

Ph ·■■■■ 7,6Ph · ■■■■ 7.6

Biuret-Reaktion positivBiuret reaction positive

Die durch Ultrafiltration gewonnene Flüssigkeit leitet man durch' ein Permutitfilter (50) (2SiO₂-Al₂ O₃ · Na₂ O + 6 H₂ O), welches nach F ο 1 i η (vgl. Fritz Turba, »Chromatographische Methoden in der Proteinchemie«, Berlin 1954) präpariert ist. Aus der ao gesammelten Flüssigkeit werden die Pyrogene entfernt, indem man den p_H-Wert mittels n/10-NaOH auf 7,8 bringt und gegebenenfalls filtriert. Die etwa 22 g ausmachende Flüssigkeit hat folgende Eigenschaften: .The liquid obtained by ultrafiltration is passed through a permutite filter (50) (2SiO ₂ -Al ₂ O ₃ · Na ₂ O + 6 H ₂ O), which according to F o 1 i η (cf. Fritz Turba, “Chromatographic Methods in der Proteinchemie «, Berlin 1954). The pyrogens are removed from the ao collected liquid by bringing the _pH-value by means of N / 10-NaOH to 7.8 and optionally filtered. The liquid, which makes up about 22 g, has the following properties:.

Farbe farblosColorless

Aussehen klarLook clear

Dichte bei 15° 1,03Density at 15 ° 1.03

Rückstand bei 100°, °/o 0,310Residue at 100 °, ° / o 0.310

organische Substanzen, Vo 0,295organic substances, Vo 0.295

Gesämtstickstoff, Vo 0,037Total nitrogen, Vo 0.037

Polypeptidstickstoff, % ....... 0,027Polypeptide nitrogen,% ....... 0.027

Ph ■···■· 7,0Ph ■ ··· ■ · 7.0

Biuret-Reaktion positivBiuret reaction positive

3535

Aus der pyrogenfreien Flüssigkeit erhält man das Produkt durch Eindampfen auf dem Wasserbad in Form eines weißen Rückstandes, der amorph, wasserlöslich und wärmebeständig ist. Ausbeute: 0,700 g. aus 1000 g Lunge.The product is obtained from the pyrogen-free liquid by evaporation in a water bath Form of a white residue that is amorphous, water-soluble and heat-resistant. Yield: 0.700 g. from 1000 g of lungs.

Example 2

Nach dem Verfahren gemäß Beispiel Γ stellt man Lungenpreßsaft her. Er wird mit 3500 U/min geschleudert, dekantiert, 20 Minuten auf 50° erhitzt und dann auf dem Wasserbad hei 80° koaguliert, wobei man schwach rührt. Dann, läßt man die Masse abkühlen und filtriert sie durch Papier und zum Schluß unter einem Druck von 15 at in. Stickstoff, bei + 2° durch ein Ultrafilter aus Gellulosehydratfolie. Aus 100 g Lunge erhält man 19,8 g einer Flüssigkeit von folgenden Eigenschaften:Following the procedure of Example Γ one sets Pulmonary juice. It is spun at 3500 rpm, decanted and heated to 50 ° for 20 minutes and then coagulated on a water bath at 80 °, stirring gently. Then, let the mass cool down and filter it through paper and finally under a pressure of 15 at in. nitrogen, at + 2 ° through an ultrafilter made of hydrate cellulose film. From 100 g of lung, 19.8 g of a liquid is obtained from following properties:

Amberlite IR-4B OH (=N, optimales p_H 0 bis 7,2), und anschließend über einen solchen vom Typ des Amberlite IR-120 in Wasserstofform (-SO₃H, universelles p_H; s. auch Turba, a. a. O. Seite 126). Die anfallende Flüssigkeit wird von Pyrogenen befreit, indem man sie mit n/10-NaOH auf ein p_H von 7,8 bringt. Nach 24stündigem Stehenlassen bei 20°^ wird sie mit n/10-HCl neutralisiert und gegebenenfalls filtriert. Diese Flüssigkeit (20 g) hat folgende Eigenschaften:Amberlite IR-4B OH (= N, optimal p _H 0 to 7.2), and then via one of the Amberlite IR-120 type in hydrogen form (-SO ₃ H, universal p _H ; see also Turba, op. Cit . Page 126). The waste liquid is freed of pyrogens, by placing them with N / 10 NaOH to a p _H of 7.8. After standing at 20 ° for 24 hours, it is neutralized with n / 10-HCl and, if necessary, filtered. This liquid (20 g) has the following properties:

Farbe farblosColorless

Aussehen klarLook clear

Dichte bei 5° 1,02Density at 5 ° 1.02

Rückstand bei 100°, Vo 0,409Residue at 100 °, Vo 0.409

organische Substanzen, Vo 0,278organic substances, Vo 0.278

Aschegehalt bei 400°, Vo 0,131Ash content at 400 °, Vo 0.131

Gesamtstickstoff, % 0,032Total nitrogen,% 0.032

Polypeptidstickstoff, Vo .· 0,023Polypeptide Nitrogen, Vo. X 0.023

Biuret-Reaktion . . positiv ,Biuret reaction. . positive,

Aus der pyrogenfreien Flüssigkeit erhält man nach dem Eindampfen auf dem Wasserbad oder durch Lyophilisierung ein weißes, amorphes, wasserlösliches und wärmebeständiges Produkt. Die Lyophilisierung erfolgt bei einer Temperatur von —65° im Kühler unter Voreinfrieren bei—^45° und anschließendem Erwärmen auf Raumtemperatur innerhalb 3V2 Stunden.The pyrogen-free liquid is obtained after evaporation on a water bath or by lyophilization a white, amorphous, water-soluble and heat-resistant product. Lyophilization takes place at a temperature of -65 ° in the cooler with pre-freezing at-^ 45 ° and subsequent heating to room temperature within 3/2 hours.

Farbe color StrohgelbStraw yellow Aussehen Look klarclear Dichte bei 15° ■ ; Density at 15 ° ■; 1,081.08 durchschnittlicheaverage Rückstandsmenge bei 100°, Vo .Residue amount at 100 °, Vo. 0,8850.885 organische Substanzen, Voorganic substances, Vo 0,7630.763 Aschegehalt bei 400° % Ash content at 400% 0,1220.122 Gesamtstickstoff, Vo Total nitrogen, Vo 0,0930.093 Aminstickstoff, °/o Amine nitrogen, ° / o 0,0510.051 Polypeptidstickstoff, Vo .Polypeptide Nitrogen, Vo. 0,00310.0031 Pti ; . . . .Pti; . . . . 7,77.7 Biuret-Reaktion . . . Biuret reaction. . . positivpositive

5555

6o6o

Claims

PATENT CLAIMS:

1. A process for the preparation of a medicament with antitubercular activity, thereby characterized in that a beef lung is ground up, mixed with an inert granular material, subjects the mixture to fractional compression up to a pressure of about 500 at, collects the pressed juice from 100 to 500 atm in a known manner Proteins, amino acids, short-chain peptides and pyrogens are freed and put on the water bath evaporated to dryness.

2. The method according to claim 1, characterized in that the liquid obtained is lyophilized.

3. The method according to claim 1, characterized in that that the proteins are removed from the press juice by ultrafiltration.

4. The method according to claim 1, characterized in that the proteins from the pressed juice removed by coagulation in the heat and subsequent ultrafiltration.

5. The method according to claim 1, characterized in that the amino acids and the short-chain Removed peptides by selective adsorption on ion exchange resins. -

6. The method according to claim 1, characterized in that the pyrogens by weak The liquid was alkalized and then neutralized.

The liquid obtained is passed through an ion exchanger, e.g. B. publications considered by the type designation:.
German Patent Nos. 736 936, 679 538; Chemisches Zentralblatt, 1953, p. 3899.